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Healthcare

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  • 1. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico CTEDRA DE TOXICOLOGA Y QUIMICA LEGAL TOXICOLOGA GRUPO: MARTES Practica N10 Determinacin cualitativa y en Cromatografa en Capa Fina de Alcaloides Prctica: 27-05-14; Hora: 10 a.m. - 12 m INTEGRANTES HUAYHUA ABREG, Jhonny 10040072 HERNNDEZ LOLI, Mara 09040096 HUERTA CRUZ, Evelin 09040064 TRUJILLO DOMINGUEZ, John 10040428 VALLE GARCA, Alex 09040079 VSQUEZ GONZALES, Alan 07040001 PROFESOR: Jess Lizano Gutirrez Ao Acadmico: 5to Ao SEMESTRE: 2014-I UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Per, DECANA DE AMRICA) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA EAP FARMACIA Y BIOQUMICA

2. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES I. MARCO TEORICO La atropina es un frmaco anticolinrgico extrado de la belladona y otras plantas de la familia Solanaceae. Es un antagonista competitivo del receptor muscarnico de acetilcolina, conteniendo en su estructura qumica grupos entricos y bsicos en la misma proporcin que la acetilcolina pero en lugar de tener un grupo acetilo, posee un grupo aromtico voluminoso. Suprime los efectos del sistema nervioso parasimptico, ya que los receptores muscarnicos se encuentran en los tejidos efectores parasimpticos. Por eso, su administracin afecta el corazn, los ojos, el tubo digestivo, y otras estructuras. La sobredosis de atropina consiste en un sndrome anticolinrgico con: midriasis, delirio, taquicardia, leo y retencin urinaria. Pueden aparecer en la intoxicacin grave: movimientos mioclnicos y coreoatetosis, parlisis muscular, hiperpirexia, coma, hipertermia y parada respiratoria. La brucina y la estricnina son alcaloides de la nuez vmica y son la causa de intoxicaciones. En altas dosis produce una gran estimulacin de todo el sistema nervioso central, agitacin, dificultad para respirar, orina oscura y convulsiones, pudiendo llevar a un fallo respiratorio y la muerte cerebral. La morfina, codena, papaverina son alcaloides obtenidos del opio. Los efectos farmacolgicos de los opioides estn mediados por su interaccin sobre distintos receptores especficos localizados en el sistema nervioso central y en la periferia. Las acciones farmacolgicas de los opioides varan segn la afinidad del compuesto por los diversos receptores. El manejo del dolor es la principal indicacin teraputica de los opioides, y se afirma que han sido la piedra angular del tratamiento del dolor durante miles de aos. Otras indicaciones clnicas de los opioides son: el tratamiento de la disnea, en especial la morfina por va intravenosa puede ser til en la disnea que acompaa la insuficiencia cardiaca y el edema agudo de pulmn; el manejo de la tos improductiva que fatiga intilmente al paciente en el que se indica la codena. As como los opioides tienen indicaciones clnicas principalmente como analgsicos, tambin son consumidos fuera del mbito mdico de manera ilcita por sujetos frmaco- dependientes. En los casos de dependencia psquica (adiccin), la finalidad de su consumo es obtener cambios agradables en el estado de nimo, descritos como un estado de tranquilidad, desaparicin de sensaciones de miedo, ansiedad y aprehensin, desinhibicin, elevacin del tono vital, placer profundo e intenso mpetu, seguidos de un periodo de relajacin, sedacin o somnolencia y un sndrome de abstinencia que obliga al nuevo consumo. Los cuadros de intoxicacin aguda por opioides se producen bien sea en el contexto teraputico 3. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES o en el de la adiccin; estos eventos deben ser considerados una emergencia mdica dado el riesgo letal que implican. En esta prctica realizaremos la determinacin cualitativa de los alcaloides antes mencionados, mediante reacciones que nos permitan identificarlos. II. PARTE EXPERIMETAL A. ATROPINA La atropina es una droga anticolinrgica natural compuesta por cido trpico y tropina, una base orgnica compleja con un enlace ster. 1. Reaccin de Vitali Fundamento Se fundamenta en la formacin de un compuesto coloreado de color azul violceo fugaz. Tcnica operatoria Resultado: (-) 4. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Reaccin 2. Reaccin de Wasicky Fundamento Se fundamenta en la formacin de un compuesto coloreado de color rojo violceo. Tcnica operatoria Resultado: (-) 5. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Reaccin qumica B. BRUCINA Es un alcaloide de la nuez vmica y de las habas de san Ignacio. La exposicin es peligrosa no slo por deglucin, sino tambin por inhalacin y contacto con la piel. B. Brucina 1. Reaccin HNO3 Cuando la brucina esta en contacto con el acido ntrico se desprende cido carbnico y vapores de nitrito de oxido de metilo, quedando de residuo acido oxlico y una sustancia cristalizada en laminillas, llamada cacothelina. Se fundamenta en la formacin de un compuesto coloreado de color rojo denominado cacothelina. Reaccin qumica C46 H36 N2 O8 + 5 NO 5, HO C40H22 (NO4)2 N2 O10 + Brucina Cacothelina NO2, C2 H3 O3 + 2 C2 O3, HO + 2 NO2 + 4 HO Nitrito de metilo cido oxlico P-dimetilaminobenzaldehido Resultado: (-) 6. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES C. ESTRICNINA 1. Reaccin de Marchand Otto: Sensibilidad :1:5 000 000 Reactivos cido sulfrico Cristales de bicromato de potasio Fundamento Se basa en una reaccin de xido reduccin en medio cido, donde bicromato de potasio que acta como agente oxidante se reduce, dando un compuesto de coloracin azul. Tcnica operatoria En un crisol o una placa de toques colocar gotas de la muestra problema. Evaporar y adicionar 0,5 ml de cido sulfrico concentrado. Adicionar un cristal de bicromato de potasio. Observar la reaccin positiva evidenciada pro una coloracin azul. Resultado Positivo Discusin La reaccin de Marchand Otto permite identificar la posible estricnina en una muestra, en este caso la reaccin fue positiva, lo que es un indicativo de la posible presencia de este alcaloide. Conclusin Posible presencia de estricnina en la muestra. 2. Reaccin de Mandeln Reactivos Vanadato de amonio al 1% en cido sulfrico concentrado Tcnica operatoria En un crisol o una placa de toques colocar gotas de la muestra problema. Evaporar y adicionar 3 gotas del reactivo 7. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Observar la reaccin positiva que se evidencia por la aparicin de una coloracin violeta, la cual al adicionar una gota de agua se torna roja violcea Resultado Positivo Discusin La reaccin de Mandeln permite identificar la posible presencia de estricnina en una muestra o la ausencia de ella. En este caso la reaccin fue positiva, lo que indica que la muestra presenta el alcaloide. Conclusin La muestra presenta estricnina. ALCALOIDES OPICEOS Este tipo de alcaloides son exclusivos del gnero Papaver, gnero que cuenta con mas de cien especies, pero solo una decena biosintetiza la tebana; y la morfina es solamente elaborada por P. somniferum y P. setigerum. De esta planta se obtiene el opio que es el ltex desecado obtenido de las cpsulas inmaduras de P. somniferum. Obtenido por la incisin de las cpsulas de las diferentes variedades, que luego de secado y oxidado, forma una pasta de color caf oscuro y de sabor acre y amargo. El opio contiene cerca de 25 alcaloides. Estos se pueden agruparse principalmente en dos grupos: Los derivados de 1 bencilisoquinolina; cuyo principal representante es la papaverina. Y los anlogos de morfina; dentro de los cuales se encuentran la codena, tebana y la oripavina. 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH 8. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES D. MORFINA Presenta accin analgsica sobre el sistema nervioso central que se manifiesta a dosis bajas produciendo depresin de la percepcin dolorosa; paralelamente, desarrolla una sedacin seguida de euforia que pasa progresivamente a sueo, el despertar es particularmente desagradable. As mismo acta como un depresor respiratorio. 1. Reaccin de Frehde: Materiales y reactivos Reactivo: molibdato de amonio 1% en H2SO4 Capsula de porcelana Fundamento Reduccin del molibdato de amonio con formacin de una coloracin lila violceo virando poco a poco a azul, verde y amarillo hasta llegar al rosado; por accin del OH fenlico en posicin 3 y del OH alcohlico en posicin 6. Tcnica operatoria Verter gotas de la muestra problema Evaporar Aadir II III gotas del reactivo + H2SO4(NH4)6Mo7O24 Mo 3+ 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH 9. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Resultado 2. Reaccin de Marquis Materiales y reactivos Reactivo: formol 1% en H2SO4 Capsula de porcelana Fundamento Reduccin del acido sulfrico (H2SO4) por accin del grupo fenolico formando un complejo coloreado violeta; revelado por la alcalinizacin del medio con formol. 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH + H H O H2SO4 H O O S OH O O Reaccin negativa 10. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Tcnica operatoria Verter gotas de la muestra problema Evaporar Aadir II III gotas del reactivo Resultado 3. Reaccin de Snchez Materiales y reactivos Reactivo: vainillina 0,3% en HCl Capsula de porcelana Fundamento La vainillina es protonada en una solucin cida dando como resultado un carbocatin electroflico dbil que reacciona con el anillo, el compuesto formado es deshidratado para dar como resultado un compuesto con color rosa ligero a un intenso rojo cereza OCH3 OH O + H + OCH3 OH OH + 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH OH OH3CO Reaccin negativa 11. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Tcnica operatoria Verter gotas de la muestra problema Evaporar Aadir II III gotas del reactivo Resultado E. CODEINA Usado en teraputica pues la metilacin del hidroxilo fenlico de la morfina produce modificaciones de la actividad farmacolgica, tales como: disminucin de la accin analgsica, del efecto depresor respiratorio y la toxicomana. Adems de ser un excelente antitusgeno. Produce accin sedativa a dosis fuertes y prolongadas 1. Reaccin de Frehde Materiales y reactivos Reactivo: molibdato de amonio 1% en H2SO4 Capsula de porcelana Reaccin positiva 12. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Fundamento Reduccin del molibdato de amonio con formacin de una coloracin verde que luego vira a azul; por accin del OH en posicin 3. Sin embargo debido al bajo poder reductor en esta posicin se considera negativa para este compuesto una reaccin que la caracteriza. Tcnica operatoria Verter gotas de la muestra problema Evaporar Aadir II III gotas del reactivo Resultado + H2SO4 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH (NH4)6Mo7O24 Mo 5+ Reaccin negativa 13. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES 2. Reaccin de Marquis Materiales y reactivos Reactivo: formol 1% en H2SO4 Capsula de porcelana Fundamento Reduccin del acido sulfrico (H2SO4) por accin del grupo fenlico formando un complejo coloreado violeta; revelado por la alcalinizacin del medio con formol. Tcnica operatoria Verter gotas de la muestra problema Evaporar Aadir II III gotas del reactivo Resultado + H H O H2SO4 H O O S OH O O 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH Reaccin negativa 14. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES 3. Reaccin de Snchez Materiales y reactivos Reactivo: vainillina 0,3% en HCl Capsula de porcelana Fundamento La vainillina es protonada en una solucin cida dando como resultado un carbocatin electroflico dbil que reacciona con el anillo, el compuesto formado es deshidratado para dar como resultado un compuesto con color rosa ligero a un intenso rojo cereza Tcnica operatoria 1. Verter gotas de la muestra problema 2. Evaporar 3. Aadir II III gotas del reactivo Resultado OCH3 OH O + H + OCH3 OH OH + 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH OH OH3CO Reaccin positiva 15. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Discusin En cuanto a los resultados obtenidos, se debe tomar en cuenta la pureza de la muestra, ya que la presencia de estas evitaran obtener reacciones ntidas o en caso contrario evidenciar la reaccin, sustancias tales como yeso, lactosa, acido brico, sacarina, cenizas blancas, bicarbonato de sodio, resinosa y arena fina. As mismo se debe tener en cuenta que estas reacciones no son especficas para uno u otro compuesto, y la evidencia de la coloracin de estas estar tambin ligada a la vigencia y pureza de los reactivos. Conclusin - Se concluye la no presencia de morfina. - Se presume la presencia de codena F. PAPAVERINA 1. Reaccin con H2SO4 (T.O.) Fundamento El cido sulfrico concentrado colorea de azul la papaverina (Reaccin de deshidratacin). La papaverina posee reaccin alcalina y forma sales cristalizables. La papaverina disuelta en alcohol se deposita bajo la forma de cristales confusos, acumulados, aciculares y blanquecinos; si se rocan los cristales con cido sulfrico concentrado, se vuelven azules. El calentamiento favorece la cristalizacin. H2SO4 + .SO4 Los alcaloides con los cidos forman sales semejantes a los amonios cuaternarios. 16. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Procedimiento En una cpsula de porcelana colocar gotas del residuo 4 (alcaloides) y evaporar. Agregar 4 a 5 gotas de cido sulfrico concentrado y calentar. (Se obtendr una coloracin azul). Enfriar y agregar gotas de agua (coloracin naranja). Agregar gotas de NH4OH (Coloracin azul). Agregar gotas de H2SO4 (coloracin naranja). Resultado Negativo. Discusin El resultado negativo se atribuye a que no hay en el residuo alcaloides que reaccionen con el cido por lo que no se evidencia el cambio de coloracin. Conclusin No hay papaverina en el residuo. G. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Fundamento El proceso de cromatografa de adsorcin se basa en la separacin de un soluto entre una fase slida adsorbente y una fase mvil. El fenmeno de adsorcin ocurre en la superficie del granulo de fase fija, y se fundamenta entre la atraccin entre el soluto y el adsorbente por formacin de uniones dipolo y formacin de puentes de hidrgeno. Los alcaloides a partir de soluciones orgnicas en soportes inertes pueden ser revelados gracias a coloraciones que dan con ciertos reactivos. Esto es debido a la propiedad de los alcaloides de dar reacciones coloreadas de precipitacin cuando reaccionan con ciertos metales. Es as que usando el reactivo de Dragendorff como revelador se obtendrn manchas que van del rojo anaranjado al violeta (segn la naturaleza del alcaloide) y con el reactivo yodoplatinato de potasio manchas que van del caf al gris azulado (sobretodo para los alcaloides derivados del opio). 17. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Procedimiento Sembrar en la placa la muestra a analizar. Sembrar los estndares. Llevar a la cuba cromatogrfica previamente saturada con el sistema de solventes. Esperar que corran la muestra y los estndares. Secar la placa Revelar Medir los Rf. Soporte: Silicagel G Sistema de solventes Metanol (100) : NH4OH (1.5) Metanol (5) : acetona (5) : Trietanolamina (0.03) Revelador Iodoplatinato de potasio Dragendorff Resultado Negativo La muestra no evidenci ninguna mancha y por ende ninguna correspondencia con la corrida de los estndares de alcaloides. Metanol (100): NH4OH (100.15) Metanol (5) : acetona (5) : Trietanolamina Cuba saturada Placa de silicagel G 18. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Revelador Yodoplatinato de Potasio: Revelador Dragendorff: M.P. 4ST. Estricnina Rfm.p.: 5.9/13.9= 0.42 Rfst: 5.8/13= 0.44 ST. Estricnina Rfst : 4/11=0.36 M.P. 4 Rfm.p.: 4.2/11.1= 0.37 19. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES Discusin La muestra corri en la placa debidamente ya que se poda observar la mancha perteneciente a las impurezas en la parte superior de la placa. Se evidenci la presencia del alcaloide Estricnina, lo cual corresponde en el Rf de la placa cromatogrfica, as como en las reacciones de identificacin cualitativa.. Conclusin Presencia del alcaloide Estricnina en la muestra problema #04 III. DISCUSIONES En el ensayo realizado para el reconocimiento de la atropina con el hidrxido de potasio en etanol se observ el resultado negativo (no se evidenci la reaccin coloreada azul fugaz), as como el segundo ensayo correspondiente a Wasicky se obtuvo negativo, estos ensayos complementarias llevan presuntivamente a la presencia de atropina en la muestra; pero es tambien apreciable para hiosciamina y escopolamina,(1) lo cual se pone a discusin debido al resultado negativo en el ensayo de Wasicky. El ensayo de reaccin con el acido ntrico para identificar brucina indico negativo para presencia de dicho alcaloide. En las marchas analticas cromticas de condensacin para estricnina se obtuvo positivo en el ensayo de Marchand-Otto y positivo para Mandeln, de los cuales presuntivamente indica la presencia del alcaloide a discusin, cabe recalcar que la prueba de Marchand-Otto es positivo tambin en presencia de Yohimbina, curare, gelsemina, cotarnina e hidrastina y que mediante el ensayo de Frohede ( resultado negativo) se descartan la gran mayora quedndose con dos alternativas de estudio: estricnina y gelsemina.(2) En los ensayos para morfina y codena se obtuvieron resultados negativos para las pruebas de Froehde y Marquis, sin embargo en la reaccin de Snchez se aprecia el resultado positivo, que tambin se obtiene este ltimo en presencia de nicotina que tambin es un posible componente del residuo 4 (R4) pero que no es producto a discusin en la presente prctica (3) , de acuerdo a esto descartamos la presencia de Morfina y Codena. La reaccin del acido sulfrico para reconocer el ncleo isoquinolico de la papaverina resulto negativo descartndose la presencia de este toxico. Los ensayos cromatogrficos muestran que no hay presencia de bradicina, morfina, atropina, papaverina y codena en la muestra; sin embargo, cabe sealar que no se evaluaron otros alcaloides, as como otros posibles productos 20. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA T O X I C O L O G A Y Q U M I C A L E G A L ALCALOIDES en el residuo 4 y que dada su presuntiva presencia interfieran en los resultados de algunos ensayos cromticos. IV. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Asociacin colombiana para el estudio del dolor .Intoxicacin por opioides .Colombia.2009.Disponible en: http://www.dolor.org.co/libros/opioides/11- INTOXICACION.pdf 2. Universidad Complutense de Madrid .Sociedad Farmacutica de Socorros Mutuos. El restaurador farmacutico. 2008. 3. Botet R. Universidad Complutense de Madrid .Resumen de qumica legal: apndice aadido al anlisis qumico del Doctor Hill. Editorial Jos Sol, 1857. 4. Laboratorio de Qumica. Universidad Nacional Federico Villarreal Alcaloides. 5. Martnez J. Evaluacin de la actividad antioxidante de extractos orgnicos de semillas de Heliocarpus terebinthinaceus. Pg. 21. junio, 2007. Disponible en: http://jupiter.utm.mx/~tesis_dig/10150.pdf 6. Garca L. Actividad biolgica e identificacin de compuestos del extracto de orujo de uva. Pg. 42. Diciembre, 2010. Disponible en: http://eprints.uanl.mx/2824/1/TESIS_QBP._LEDY_GARC%C3%8DA_CO MPLETA.pdf 7. Universidad Central de Venezuela. Toxicologa. Disponible en: ftp://medweb.med.ucv.ve/Bioanalisis/Toxicologia/contenidos/unidad- III/reacciones/particulares/morfina.html 8. Garca D. Los metabolitos secundarios de las especies vegetales. Pastos y Forrajes, Vol. 27, No. 1, 2004. Disponible en: http://payfo.ihatuey.cu/Revista/v27n1/pdf/pyf01104.pdf 9. Guatelli M. Manual prctico de quimia toxicolgica. Editorial universitaria Macchi. Buenos aires. 1958.