informe 4 derivados de alcaloides tropánicos

FARMACOGNOSIA DROGAS CON ALCALOIDES

Extracción e Identificación de los alcaloides derivados de triptófano presentes en la corteza de “quina” Cinchona oficcinalis y las cortezas

de la “uña de gato” Uncinaria Tormentosa

Guerrero Álvarez Miller., Laura Matos Almendra., Lava Galves Jorge., Mendoza Vílchez Mayra., Vega Segura Heden.*(alumnos del tercer año)

Email responsable: [email protected]

Universidad Nacional Mayor de San Marcos .Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y Toxicología. Escuela Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica. Lima-

Perú

Laboratorio de Farmacognosia y Medicina tradicional, Facultad de Farmacia y Bioquímica

Resumen: Este estudio tuvo como objetivo: Extraer e identificar los alcaloides presentes en la “una de gato” Uncaria tomentosa L. y “quina” Cinchona Oficcianilis e identificarlos mediante las reacciones generales, particulares y el análisis cromatográfico. El cual se realizó en el laboratorio de la cátedra de farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM), para la extracción de alcaloides de las muestras vegetales de “uña de gato” fue de tipo mixta y para las muestras de corteza de quina se realizó una extracción de tipo ácida , para la constatación de los alcaloides extraídos se realizó pruebas de coloración y precipitación con reactivos generales para alcaloides (Dragendorft, Mayer, Bertrand, Sonneenschein y Bouchard) y específicos (Reacción de taleoquinina,eritroquinina fluorescencia y àcido láctico ) para la quina y de Van Urk para la reacción particular de uña de gato. Para la identificación de alcaloides se realizó el análisis cromatográfico en capa fina (silica-gel), donde que para el extracto de uña de gato como para el extracto de cinchona oficcinalis se usó como sistema solvente (benceno, acetato de etilo:dietilamina (7.2.1))Las muestras estudiadas contenían alcalides que dieron positivas con los reactivos generales a excepción de la cinchona que no se evidencio la formación de crtitales con el reactivo de Poppf

Palabras claves: Extracción, alcaloides, Cinchona Oficcianilis, Triptofano, Uncaria tomentosa L

Abstract: This study aimed to: Extract and identify alkaloids present in a "cat" Uncaria tomentosa L. and "machine" Cinchona Oficcianilis and identify with the general reactions, individuals and chromatographic analysis. Which was conducted in the laboratory of Professor of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National University of San Marcos (San Marcos), for the extraction of alkaloids of plant samples "cat's claw" was mixed type and samples of cinchona bark extraction of acid type was made for the realization of the extracted alkaloids tests coloration and precipitation was performed with general reagents for alkaloids (Dragendorft, Mayer, Bertrand, Sonneenschein and Bouchard) and specific (Reaction of taleoquinina, eritroquinina fluorescence and lactic acid) for the machine and Van Urk for the particular reaction of cat's claw. Diethylamine (7.2: to identify alkaloids chromatographic thin layer analysis (silica-gel), where that the extract of cat's claw to extract cinchona oficcinali was used as solvent system (benzene, ethyl acetate was performed 1)) The

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samples studied contained alcalides that tested positive with the general reagents except that cinchona crtitales formation was evidenced with reagent Poppf

Keywords: Extraction, alkaloids Cinchona Oficcianilis, tryptophan, Uncaria tomentosa L.

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I.INTRODUCCIÓN

Uncaria tomentosa – uña de gota es una planta originaria de la amazonia peruana. Su corteza es la que contiene los alcaloides y comúnmente es conocida como garabato, garabato amarillo, samento, rangaya, unganangui, bejuco de agua, tua juncara, perteneciente a la familia Rubiaceae.

Es un gran arbusto trepador que sube arboles aledaños a su nacimiento formando enredaderas que alcanzan hasta veinte metros de altura. En las ramas jóvenes son cuadrangulares y los tallos poseen unas espinas ganchudas y leñosas. Estas espinas son las que dan origen a su nombre común de uña de gato.

Las hojas son pecioladas. Opuestas de forma oblonga u oblonga aovada y de color verde amarillento. Opaco en

la haz y verde pálido en el envés, con finos vellos característicos del término “tomentosa”. Las inflorescencias poseen hasta cinco cabezuelas esféricas, pedunculada, solitarias o a veces racemosas. El fruto es bivalvo oblongo aovado y las semillas son fusiformes, longitudinales y muy pequeñas. (7)

La quina (Cinchona oficcinalis) es una especie perteneciente al género Rubiaceae, son arboles originarios de la Cordillera Amazónica, las cortezas de quina contienen como principios activos, quinina, quinidina, cinconina y cinconidina; esta planta se utilizan en el tratamiento de la malaria, la quinidina se utiliza como antifibrilante. La cinconina posee propiedades como un antiagregante plaquetario.

Objetivo:

Extraer los alcaloides presentes en la Uncaria tomentosa L. e identificarlos mediante las reacciones generales, particulares y el análisis cromatográfico.

Extraer los alcaloides presentes en la Cinchona oficcinalis e identificarlos mediante las reacciones generales, particulares y el análisis cromatográfico.

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Fig 1. Corteza de la uncaria tormentosa L Fuente: http://vendoya.es/auctions/info/771/Secar-Garra-Per%C3%BA-las-hierbas-secas-naturales-salud-Uncaria-Tomentosa-corteza-gato-450g/


II. Materiales y MétodosMateriales de laboratorio:

Tubos de ensayo Gradilla Pipeta Pasteur Bureta de 25mL Beaker Matraz de 250mL

Reactivos:

Reactivo de Dragendorff Reactivo de Mayer Reactivo de Bouchardat Reactivo de Bertrand Reactivo de Popoff Cloroformo Metanol Ácido acético glacial Acetato de etilo Hidróxido de amonio

Material Biológico

Uncaria tomentosa L. Liliaceae Cinchona oficcinalis.

2.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:

El polvo de Uncaria tomentosa L. – uña de gato y el polvo de Cinchona oficcinalis. –quina fueron proporcionado por la Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional – Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Estos polvos fueron secados para realizar la extracción.

2.2 MÉTODO DE EXTRACIÓN:

2.2.1. EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES DE Uncaria tomentosa L.

De acuerdo al método de la Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional, se utilizó 2 gramos de polvo de Uncaria tomentosa L., mezclándolo con oxido de calcio, disuelto en NH4OH en cantidad suficiente para formar la papilla en un matraz, sometido a una campaña extractora hasta evaporar la solución de NH4OH, posteriormente se añadió 7.5ml de cloroformo (2veces) y se filtró. Obteniendo un extracto de fase clorofórmica. Dividiéndolo en tres partes: la primera para realizar la cromatografía, segunda se llevó a sequedad para realizar la reacción particular y la tercera también se llevó a sequedad realizando las reacciones generales.

2.2.2 EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES DE Cinchona oficcinalis.

De acuerdo al método de la Cátedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional, Se pesó 2.5 gramos de droga seca y pulverizada, se agregó 50 ml de etanol (960) y se llevó a 60°C en B.M por 15 minutos.

Se agito por 10 minutos en B.M, se le agrego (al volumen filtrado) 15 ml de H2SO4 al 10 %, se agito constantemente y se filtró.

Al filtrado se le alcalinizo con Nao al 10%, hasta un pH=10, Se extrajo los alcaloides en forma básica con dos

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porciones de cloroformo (7.5ml) sucesivas.

2.3 ANÁLISIS CUALITATIVO:

2.3.1 REACCIONES GENERALES

2.3.2 REACCIONES PARTICULARES

REACCIONES

PROCEDIMIENTO

REACCIÓN POSITIVA

Reacción Taleoquinina

Extracto desecado+ IV gotas de H2SO4 cc

+ gotas de agua de bromo saturado hasta coloración amarilla+ Amoniaco en exceso.

Coloración verde

Extracto

Reacción

Eritroquinina

desecado+ IV gotas de H2SO4 cc

+ gotas de agua de bromo saturado hasta coloración amarilla+ Ferrocianuro de Potasio+ Amoniaco en exceso.

Coloración roja

Fluorescencia

Solubilizar en agua mg de muestra + H2SO4 cc.

Florescencia azul

Ácido Láctico

Extracto desecado + III gotas de ácido láctico.

Coloración amarrilla que vira a rojo.

CROMATOGRÁFIA DE Uncaria tomentos L.

De acuerdo al método de la Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional, se utilizó 5ml de la extracción de Uncaria tomentosa L. y se sembró en una placa de silicagel, 20 veces de la muestra y 10 del estándar, colocándolo en una cámara cromatografía con una fase móvil de benceno: acetato de etilo: dietilamina proporción de 7:2:1,dejando correr.

CROMATOGRÁFIA DE Cinchona oficcinalis.

De acuerdo al método de la Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional, se utilizó 5ml de la extracción de Cinchona oficcinalis y se sembró en una placa de silicagel, 20 veces de la muestra y 10 del

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Tabla 1. Procedimiento de las reacciones generales de identificación para Uncaria tomentosa L. y Cinchona oficcinalis

Tabla 3. Procedimiento de la reaccion particular de identificación para Uncaria tomentosa L.

Tabla 2. Procedimiento de la reaccion particular de identificación para Cinchona oficcinalis

REACCIONES

PROCEDIMIENTO

REACCIÓN POSITIVA

Dragendorff

Gotas de la muestra +

Gotas de reactivo.

Precipitado naranja

Mayer Precipitado blanco

Bouchardat o Wagner

Precipitado pardo oscuro

Bertrand Precipitado blanco

Sonnenschein

Precipitado amarillo- verdoso

Popoff Precipitado blanco

REACCIONES PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA

Van Urk Extracto desecado + III gotas de reactivo de Van Urk

Coloración azul


estándar, colocándolo en una cámara cromatografía con una fase móvil de benceno: acetato de etilo: dietilamina proporción de 7:2:1, dejando correr.

III. RESULTADOS

3.1. ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA EXTRACCIÓN DE Uncaria tomentosa L.

3.1.1. REACCIONES GENERALES

3.1.2 ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA EXTRACCIÓN DE Cinchona oficcinalis

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Fig. N° 01. Reacciones generales para identificación de alcaloides. Se observa los siguientes colores de precipitado 1: naranja (Dragendorf), 2: blanco (mayer), 3: pardo oscuro (Wagner), 4: blanco (Bertrand), 5: verdoso (sonnenschein) y 5: cantidad de cristales en la reacción de popoff. Autor: Propia

Leyenda + (reacción poco positiva), ++ (reacción positiva), +++ (reacción muy positiva)

1 2 3 4 5 6

TABLA N° 4 .Reacciones particulares de reconocimiento de alcaloides Uncaria tomentosa L.

Fig. 2 .Reacciones generales para el reconocimiento de la presencia de alcaloides en el extracto alcalino de Cinchona oficcinalis . A) Dragendorff , B) Mayer C) Bouchardat, D) Bertrand , E) Sonnenschein , F) Popoff G)Taninos.

REACCIÓN DE IDENTIFICACION

OBSERVACIÓN

RESULTADO

Reac. de Dragendorff

Precipitado naranja

+++

Reac. de Mayer

Precipitado blanco

+++

Reac. de Bouchardat o Wagner


+++

Reac. de Bertand

Precipitado blanco

+++

Reac. de Sonnenschein


+++

Reac. de Popoff

Cristales característico

+++


OBSERVACIÓN

RESULTADO

Reac. de Dragendorff

Precipitado naranja

++

Reac. de Mayer Precipitado blanco

++

Reac. de Bouchardat o Wagner


++

Reac. de Bertand

Precipitado blanco

++

Reac. de Sonnenschein


++

Reac. de Popoff Cristales característico

--

Tabla 5. Reacciones de identificación para Cinchona oficcinalis


3.2. REACCIONES PARTICULARES

REACCIONES REACCIÓN POSITIVA

Resultados

Reacción Taleoquinina

Coloración verde ++

Reacción

Eritroquinina

Coloración roja --

Fluorescencia Florescencia azul ++

Ácido Láctico Coloración --

amarrilla que vira a rojo.

Fig. 4 .Reacción de Taleoquinina el color verde indica la reacción positiva. alcaloides Cinchona

Fig. 5 .Fluorescencia en Rayos UV. (Coloración azulada), alcaloides Cinchona

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TABLA N° 6 .Reacciones particulares de reconocimiento de alcaloides Uncaria tomentosa L.

Fig.N°03 Reacción de Van Urk. Se observa el color AZUL momentáneamente. Autor: Propia

TABLA N° 7 .Reacciones particulares de reconocimiento de alcaloides Cinchona



OBSERVACIÓN

RESULTADO

Van Urk Coloración azul

++


3.3. ANALISIS CROMATOGRÁFICO

3.3.1. CROMATOGRÁFIA DE Uncaria tomentosa L.

CROMATOGRÁFIA DE Cinchona oficcinalis

IV. Discusión

En esta práctica se llevó a cabo una extracción “mixta”; para luego reextraer los alcaloides concentrados en proporciones de 5mL de mezcla cloroformo/éter etílico por dos veces; donde se observaron alcaoides de núcleo oxindolico ; asimismo se comparó con un extracto acuoso . Mostro mayor presencia de alcaloides el extracto acuoso. La mayor presencia en el extracto acuoso puede deberse a que este en mayor concentración que el de extracto clorofórmico pues no se sabe la procedencia del extracto acuoso ya que fue preparado por la profesora de la práctica. Según Montenegro de Matta y col. (1976), obtuvieron 5 alcaloides (pteropodina, especiofilina, isopteropodina, uncarina F e isomitrafilina) por extracción metanólica de plantas de Uncaria guianensis. De igual forma Chávez-Reyes y Plaza (2001) utilizaron un extracto metanólico para la identificación de alcaloides oxindólicos, logrando identificar los siguientes compuestos; mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina, isopteropodina, especiofilina, uncarina F, rincofilina e isorincofilina. La cromatografía desarrollada con el extracto clorofórmico muestra la presencia de tres alcaloides con Rf de 0,434 ; 0, 325 y 0,2 . Según estudios realizados de Wagner y Bladt (1996) utilizaron un extracto de amonio de la corteza de Uncaria tomentosa en un sistema de acetato de etilo: isopropanol: NH₃ conc. (100:2:1). En el calculo de Rf tuvieron el rango 0,7 - 0,8 y 0,25 - 0,3. Los oxindoles pentacíclicos,

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Fig. N 06. Imagen de la cromatografía de las flores de Sparteum Junceum. Observación del recorrido de la muestra y del estándar. Autor: Mesa 3

Fig.7 .Cromatograma A) Muestra del extracto de Cinchona oficcinalis. B) Muestra estándar solución de Cinconina 0.1 %

BA


como isomitrafilina, isopteropodina y uncarina A + F, así como los oxindoles tetracíclicos como isorincofilina se encontraron en el rango de Rf 0,7 - 0,8. El oxindol pentacíclico mitrafilina y el oxindol tetracíclico rincofilina se observan en el rango de Rf: 0,25 - 0,3.

Existen otros estudios de extracción de alcaloides en Uncinaria tomentosa por medio alcalino y se realizó el tamizaje fitoquimico. Es un estudio más especializado debido a que realizaron Hplc para su identificación. El siguiente cuadro muestra los alcaloides encontrados:

La quinina con ácido sulfúrico forma dos tipos de sales; la sulfato de quinina que es una sal neutra, poco soluble en agua y el sulfato ácido de quinina que es una sal en solución acuosa con pH ácido, muy soluble en agua, es por la formación de estas sales y su reacción con agua de bromo y amoniaco que se fundamenta las coloraciones características de las reacciones de

Taleoquinina o daleoquinina1 y Eritroquinina, esta última con la adición de ferrocianuro para generar la coloración roja 2,3. Para obtener resultados positivos es importante realizar la reacción con sumo cuidado.

Las técnicas de reconocimiento de alcaloides se basan en su capacidad, en estado de sal (extractos ácidos), de combinarse con el yodo y metales pesados como bismuto, mercurio, tungsteno formando precipitados. Éste es el fundamento de algunas de las reacciones generales, como por ejemplo, la reacción de Dragendorff que utiliza yoduro de potasio y bismuto. También se puede citar la reacción de Bertrand que utiliza al tungsteno como metal pesado4 y la de Mayer, la cual se emplea para la caracterización no específica de alcaloides. La mayoría de los alcaloides reaccionan dando un precipitado blanco amorfo y cristalino. El precipitado es una sal compleja, y podrá disolverse posteriormente en un solvente menos polar para su identificación. Por tanto, este reactivo se basa en la acidez de los alcaloides en forma de sales debido a que en medios básicos, el reactivo de Mayer no precipita5.

La Fluorescencia azul de la quinina, se intensifica cuando se le añade el ácido sulfúrico. Esto se debe a que la emisión fluorescente observada en una determinada especie está condicionada por la propia estructura molecular de la sustancia y por otros factores dependientes del medio en el que se trabaje. El espectro de

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Fig.8 Alcaloides presentes en Uncinaria tomentosa. Autor: Gilberto Domínguez Torrejón; 2010


fluorescencia de muchos compuestos aromáticos conteniendo grupos funcionales ácidos o básicos es sensible al pH. Los cambios en la emisión de los compuestos de este tipo provienen del número de especies resonantes diferentes que están asociadas con las formas ácidas o básicas de la molécula. Estas formas resonantes proporcionan mayor estabilidad al primer estado excitado produciéndose la fluorescencia a una mayor longitud de onda, 450nm en el caso de la quinina 6.

v. CONCLUSION

Se reconoció la presencia de alcaloides de núcleo oxindolico en la Uncaria tomentosa L. y se identificó mediante reacciones generales.

Se extrajo los alcaloides presentes en Cinchona oficcinalis

En la cromatografía se observó 3 tipos de alcaloides tanto en la extracción clorofórmica como en la acuosa de la chinchona officinalis.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Arenas de Castaño I. Contribución al estudio analítico de los alcaloides. [Trabajo de tesis]. Colombia: Revista colombiana de ciencias químico farmacéuticas; 1968.

2. Castillo E, Martinez I. Manual de Fitoterapia. Editorial

Elsevier Doyma S.L. Barcelona, 2007. p. 40-45.

3. De La Puerta, G. Química orgánica y general aplicada a la farmacia. Volumen 2. Ciudad de México.

4. González, C. NOCIONES DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL1ª edición. Ed. Universidad de Salamanca. 1999.

5. Bruneton J. Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas medicinales. Editorial Acribia, S.A., 2001, p: 775-823.

6. Dewick, P.M. “Medicinal Natural Products – A biosynthetic Approach” 2nd ed. Ed. Jhon Wiley & Sons Ltd. England, 2006.

7. Morris HJ, Marcos J, Castán L, Bermúdez RC. Plantas y hongos comestibles en la modulación del sistema inmune. Rev Cubana Invest Bioméd. 30 (4): 2011.Ciudad de la Habana.

8. Quintela J. Lock O. Uncaria tomentosa (Willd.) CD. Revista de Fitoterapia. 2003; 3(1):5-16.

9. Montenegro De Matta S; Delle Monache F; Ferrari F; Marini Bettolo G. B. 1976. “Alkaloids and Procyanidins of Uncaria sp. from Perú”. Estratto dalla Rivista. Anno XXXI. Edizione científica “Iifarmaco”. Liglio. N° 7. Fármaco 31: 527-535.

10.Chávez-Reyes R.; Plaza A. 2001. Estudio químico comparativo de “Uña de Gato”

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(Uncaria tomentosa Willd. DC y Uncaria guianensis (Aubl.) (Gmel.). Primera reunión internacional del género Uncaria “Uña de gato”. Pág. 122-132. Iquitos-Perú.

11.Wagner H; Bladt S. 1996. Plant Drugs Analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas. Second edition-Springer. Germany.

12.Valente L; Alves F; Bezerra G; Almeida M; Rosari S; Mazzei J; Avila l; Siani A. 2006. Desenvolvimento e aplicação de metodologia por cromatografía em capa delgada para determinação do perfil de alcalóides oxindólicos pentacíclicos nas espécies sulamericanas do gênero Uncaria. Revista Brasileira de Farmacognosia. 16(2): 216-223,

13.Verpoorte R. 1986. Methods for the structure elucidation of alkaloids. J. of Nat. Prod. 49, 1-25.

14.Tapia y Figueroa M; Dominguez G. 2001. Inducción de callogénesis y rizogénesis “in vitro” en dos especies del género Uncaria. Primera reunión internacional del género de Uncaria “uña de gato”. Pp 73-79. Perú.

15.Thorpe T. 1981. Growth and behavior of cell cultures: Embryigenesis and organogenesis. En: plant tissue culture: Methods and applications in agriculture.

Academic press. Londres. 82-86 pp.

16.Thorpe T; Meier D. 1973. The effect of Giberillic acid and abscisic on shoot formation in tobacco callus. Physiologia Plantarum 29: 121-124.

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informe 4 derivados de alcaloides tropánicos

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