tesis limon

8/19/2019 Tesis Limon

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UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA DE INGENIRÍA QUÍMICA

DESARROLLO DE UN REPELENTE NATURAL DE INSECTOS BASADO EN EL

ACEITE ESENCIAL DEL LIMÓN

Dra. Germania Marquina. Chávez, Silvia Y.

Tutor Académico Rivas, María F.

Barbula Agosto del 2003


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INTRODUCCIÓN

La investigación que se presenta a continuación está enfocada a desarrollar un repelente

natural de mosquitos e insectos, empleando el aceite esencial de limón, el cual puede

representar una alternativa frente a los repelentes sintéticos existentes en el mercado, que

no dañe al medio ambiente ni cause problemas de salud.

Para alcanzar los objetivos planteados se establecieron tres fases metodológicas que son:

Evaluación de la extracción del aceite esencial, formulación del repelente y estudio de

mercado de los repelentes en Venezuela.

La evaluación de la extracción del aceite esencial de limón con CO2 supercrítico, se

realiza a través de la aplicación de un diseño experimental factorial. El cual es comparado

con el de arrastre con vapor de agua seleccionando el método de mayor rendimiento,

también son identificados los principales componentes del aceite.

El repelente se formuló para dos concentraciones de aceite esencial de limón siendoelaborado en la Facultad de Farmacia de la Universidad Central de Venezuela. Para

asegurar la calidad del repelente se le practicaron pruebas dermatológicas y

microbiológicas. Las dos concentraciones fueron probadas con voluntarios en la población

de Ortiz; Estado Guárico; escogiendo la de mayor acción repelente. Finalmente se realizó

un estudio para investigar el mercado de los repelentes existentes en el país.

En el capitulo 1 se presenta el planteamiento del problema, en el 2 los fundamentos teóricos

de la investigación. El marco metodológico empleado para alcanzar los objetivos se

encuentra en el capitulo 3, finalmente en los capítulos 4 y 5 se presentan los resultados y

las conclusiones y recomendaciones.


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CAPITULO I

Planteamiento del problema

A continuación se presenta en forma detallada la formulación del problema así como los

motivos que justifican y limitan la investigación, tomando en cuenta los antecedentes que

guardan relación con dicha investigación.

Formulación del Problema

Los aceites esenciales son sustancias volátiles obtenidas por un proceso físico a partir de

material vegetal oloroso de un solo género y especie botánica, el cual posee todas las

características olorosas y del que generalmente lleva su nombre.

Estos aceites esenciales son usados como saborizantes y aromatizante en la industria

alimenticia y cosmética, así como también en la elaboración de fragancias para la

industria del perfume y también se han usado como repelentes de insectos. La primera

estrategia empleada para combatir los mosquitos e insectos, fue estrujar las hojas de

plantas aromáticas y frotar en la piel el aceite de semillas para reducir las picaduras yevitar la transmisión de enfermedades.

Esta estrategia fue abandonada con la aparición de los repelentes sintéticos, y el desarrollo

de insecticidas, pero en los últimos años se ha demostrado que los mismos producen

efectos adversos sobre la salud y el medio ambiente, lo que ha conducido a fuertes críticas

ecológicas, iniciándose el retorno a los métodos naturales anteriormente abandonados. En

este contexto, surge la necesidad de aprovechar el efecto repelente de ciertos aceites

esenciales, estudiados e industrializados en otros países. En la Unidad de Fluidos

Supercríticos de la Facultad de Ingeniería se han realizado investigaciones en las cuales

solo se ha evaluado la extracción de aceites esenciales de algunas plantas, pero no se ha

desarrollado ninguna aplicación de los mismos. Se ha pensado en este sentido desarrollar


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un repelente natural de insectos basado en el aceite esencial del limón, que pudiera sustituir

a los repelentes sintéticos y que sea menos contaminante para el medio ambiente.

1.1.1. Situación ActualHoy día el mercado de los repelentes en Venezuela lo ocupan en su mayoría los repelentes

sintéticos, los cuales constituyen una forma eficaz de evitar las picaduras de insectos

transmisores de enfermedades; estudios posteriores han demostrado que éstos pueden

causar serios problemas al medio ambiente y a la salud, especialmente si se usan

inadecuadamente a concentraciones altas, razón por la cual han surgido los repelentes

naturales basados en los aceites esenciales de plantas los cuales han sido poco utilizados en

Venezuela, mientras que en otros países es un mercado en constante crecimiento.

1.1.2 Situación Deseada

Disponer de una evaluación para el desarrollo de un repelente de insectos basado en el

aceite esencial del limón, que represente una alternativa frente a los repelentes sintéticos

existentes en el mercado y que no dañe al medio ambiente, ni cause efectos adversos a la

salud.

Justificación

En Venezuela la producción industrial de aceites esenciales es prácticamente nula. En el

año 2000 se gastaron 175 millones de dólares en la importación de los mismos según lo

reportado por la Instituto Nacional de Estadística (INE), lo cual permite inferir

perfectamente la necesidad de información e investigación con el fin de incursionar en ese

mercado.

Por tanto es de suma importancia la posibilidad de aprovechar los aceites esenciales confines comerciales, por lo que sería algo novedoso usar el aceite esencial extraído del limón

como repelente natural de insectos. También este trabajo justifica su realización porque

estimula en el estudiante el espíritu investigativo, creando la expectativa de explorar

situaciones en otras áreas, como parte de su formación integral.


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Este tipo de investigación además de otorgarle prestigio a la Universidad de Carabobo

podría incentivar el interés de otros estudiantes a desarrollar nuevas tecnologías utilizando

los aceites esenciales.

1.3 Antecedentes

A continuación se presentan algunos antecedentes relacionados con la investigación

planteada.

BETANCOURT, Lucio (1984): “Extracción, evaluación y aprovechamiento del aceite

esencial del mastranto”. Trabajo especial de Grado, Ingeniería Química, Universidad de

Carabobo, Valencia.

El objetivo principal de este trabajo fue establecer técnicas y métodos para la extracción

del aceite esencial del mastranto, por sus características aromáticas y su posible acción

como repelente natural de insectos.

Dicha investigación permitió concluir que: el aceite esencial de mastranto en solución a 70

ppm es tóxico para insectos y bachacos, y a 100 ppm para abejas, según se comprobó al

rociar los insectos con el aceite obtenido, verificando su efecto repelente.

La extracción del aceite esencial del mastranto y la preparación del repelente en diferentes

concentraciones, así como la verificación del efecto repelente, constituyen las semejanzas

principales con la investigación aquí planteada, pero difieren en el aceite esencial que es

limón, y el uso que se le quiere dar, aquí estará destinado para ser usado en humanos con la

finalidad de repeler los insectos que causan picaduras en la piel y no en bachacos y abejas

como ya se realizó.

ROJAS, Eliana(1997): “Extracción del aceite esencial de la hojas de Citrus Medica conuso para la protección personal contra mosquitos transmisores”. Trujillo, Venezuela.

Disponible en: http://www.Ambiente ecologico.com

Este trabajo tuvo como objetivo principal la extracción del aceite esencial de la hoja del

limón para ser usado como repelente personal y como fumigante doméstico. La técnica de

http://www.ambiente/http://www.ambiente/


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extracción que se empleó fue el arrastre con vapor de agua, utilizando hojas recolectadas en

diferentes horas del día. Obteniéndose diferencias significativas entre los volúmenes de

aceite esencial de hojas cosechadas en horas matutinas y en horas vespertinas de una misma

cosecha.El trabajo mostrado difiere del presente en que esté ha considerado sólo la extracción del

aceite esencial, mientras que en el trabajo propuesto además de realizar estos estudios se

quiere desarrollar a escala de laboratorio un producto en el que se emplee dicho aceite.

Otra de las diferencias significativas es que no identifican los componentes presentes en el

aceite esencial extraído de las hojas, lo que sí está planteado mediante un análisis

cromatográfico del aceite extraído de la corteza del fruto del limón.

La semejanza más resaltante de esta investigación con la propuesta la constituye la

escogencia del aceite esencial del limón por su alta actividad repelente, así como también la

forma de obtener el aceite esencial a través de un método de extracción. En cuanto a las

diferencias se puede decir que se evalúa la extracción del aceite esencial de las hojas del

limón para usarlo como repelente de insectos, mientras que en el trabajo propuesto se

pretende evaluar la extracción del aceite esencial de la corteza del fruto por considerar que

contiene mayor cantidad de aceite. También se plantea usar varios métodos de extracción y

compararlos para seleccionar el de mayor rendimiento y usar el aceite extraído como

ingrediente principal del repelente a desarrollar. Al mismo se le realizarán las pruebas

dermatológicas que confirmaran el grado de irritabilidad dérmica, para posteriormente

comprobar el efecto repelente en humanos.

GONZÀLES, Mario (1997): “Uso de la crema repelente de pimenta dioica por

combatientes de una unidad militar”. (En línea).Instituto Superior de medicina Militar Dr.

Luis Soto. .La Habana. Disponible en: http://bvs.Sld.cu/ revistas / mil / vol 26_2_97 / mil02297.htm

En esta investigación fue estudiada una crema con aceite esencial de pimienta dioica para

conocer su eficacia como repelente de insectos; fue realizada en una unidad militar con 38

http://bvs/http://bvs/


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combatientes divididos en dos grupos. A un grupo se le aplicó la crema sin el aceite

estudiado y al otro la crema con pimienta dioica; fueron expuestos a los mosquitos durante

cinco horas en una zona costera y se tomó como criterio de “repelente” la ausencia de

molestia y un mínimo de cinco picaduras en las áreas tratadas, obteniéndose como resultadoque la crema de pimienta dioica mantuvo una repelencia en el 100% de los casos siendo

estadísticamente superior a la crema sin pimienta dioica.

El uso de un aceite esencial extraído de una planta como ingrediente de un repelente de

insectos, constituye la semejanza principal que guarda este trabajo con el planteado y

difieren en que en el primero no se realiza la evaluación de la extracción, ni se considera la

formulación del producto, es decir el porcentaje de aceite esencial que posee el producto,

solamente se evalúa el efecto repelente.

McGaw, V. Paltoo, C. Hahg Yen (1998): “Impacto de la extracción con fluidos

supercríticos en la industria de fragancias y bouquet en el caribe” (Impact of supercritical

fluid extraction on the lavour and fragrance industry of the Caribean). (En línea).

Departamento de Ingeniería Química de la Universidad de Las Indias Occidentales. St

Augustine, Trinidad. Disponible en:

http://www.uwichill.edu.bb/bnccde/sk&n/conference/papers/Dr Mc Gaw. htm. Presentado

en el VI Congreso de Fluidos Supercríticos en el Reino Unido, 1999.

El objetivo principal que se deseaba alcanzar era estudiar la factibilidad de establecer en el

área del Caribe una planta de extracción de aceites esenciales empleando fluidos

supercríticos, determinando si su instalación era viable comercialmente y

económicamente; aquí se logró estimar un beneficio económico entre 500% y 8000% al

comparar el costo de la materia prima empleada ( jengibre, cáscara de naranja y cáscara detoronja) con el costo de aceite esencial obtenido resultando que es viable la instalación de

una planta que emplee esta tecnología en el Caribe por su ingreso y potencial de

desarrollo.

http://www.uwichill.edu.bb/bnccde/sk&n/conference/papers/Drhttp://www.uwichill.edu.bb/bnccde/sk&n/conference/papers/Dr


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La principal semejanza con el presente trabajo radica en que el método de extracción

empleado es con fluido supercrítico y difiere del presente en el hecho de que no se plantea

realizar un estudio de factibilidad.

GROSSE, Roraima (2000): “Estudio del aceite esencial de la flor de la Murraya

Paniculada.” Trabajo Especial de Grado, Facultad de Ciencia y Tecnológia, Departamento

de Química, Universidad de Carabobo.

El objetivo principal de esta investigación fue seleccionar el método adecuado para la

extracción del aceite esencial de la flor de Murraya Paniculada; la extracción se realizó

con solventes y con CO2 supercrítico. Entre las conclusiones mas resaltantes se obtuvo que

los mejores resultados de la extracción del compuesto fueron obtenidos usando éter de

petróleo como solvente. En cuanto a la extracción con CO2 supercrítico se concluyó que

el rendimiento no fue el mejor, pero en cuanto a la calidad del extracto sí lo fue.

La selección en este trabajo de un método de extracción adecuado basado en el

rendimiento es la semejanza que guarda con la investigación propuesta y difieren en que

éste no es el objetivo principal, ya que se plantea desarrollar un repelente de insectos

usando el producto extraído como meta principal.

FIGUEROA, Yalitza (2001) “Aplicación del diseño estadístico de experimentos a la

extracción con CO2 supercrítico del aceite esencial de la hoja de malagueta (Pimenta Dioica

(L) MERR)”. Trabajo de ascenso, Facultad de Ciencia y Tecnológia, Departamento de

Quimica, Universidad de Carabobo.

Esta investigación tuvo como objetivo principal aplicar el diseño de experimentos para

optimizar las condiciones de extracción del aceite esencial de la hoja de malagueta, usando

CO2 supercrítico. Entre las conclusiones más relevantes del proceso de extracción, seobtuvo que las variables más influyentes en el proceso fueron la presión y el tiempo de

extracción. La mayor proporción de eugenol se obtuvo a una presión de 250 bar y a un

tiempo de 420 minutos obteniéndose un rendimiento de 0,1967 %.


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La semejanza que tiene este trabajo con la investigación propuesta es el diseño estadístico

de la extracción del aceite esencial del limón, para evaluar el proceso. En cuanto a la

diferencia se puede decir que en el trabajo propuesto se quiere ir mas allá de la evaluación,

desarrollando una aplicación, es decir, buscar la utilidad de la extracción de los aceitesesenciales desarrollando un repelente de insectos, que proteja de las picaduras y

enfermedades transmitidas por los mismos.

1.4. Limitaciones

Entre las principales limitaciones existentes en este trabajo especial de grado se pueden

citar las siguientes:

La poca información estadística acerca del uso de los aceites esenciales.

El método de extracción por fluido supercrítico es muy poco utilizado en Venezuela solo se

conocen estudios realizados por universidades extranjeras.

Los repuestos del equipo de extracción solo están disponible en el exterior.

Otra limitante es el periodo de cosecha del limón (meses de junio y julio), tiempo durante el

cual debe realizarse la fase experimental, a fin de asegurar la frescura de la materia prima y

el bajo costo, ya que en otra época los costos aumentan considerablemente.

Objetivos

Objetivo General

Desarrollar un repelente natural de insectos basado en el aceite esencial del limón.

Objetivos Específicos

Seleccionar un diseño experimental que permita evaluar la influencia que ejercen las

variables involucradas.


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Realizar la extracción del aceite esencial del limón con CO2 supercrítico, con la finalidad

de establecer las mejores condiciones de operación en dicho proceso.

Comparar la extracción del aceite esencial del limón empleando EFSC con otro métodoconvencional de extracción, para escoger el de mayor rendimiento.

Analizar los extractos obtenidos con cada uno de los métodos de extracción para

determinar la composición del aceite esencial del limón.

Realizar un estudio del mercado venezolano de repelentes, para estimar la factibilidad de

producir el mismo.

Identificar las pruebas dermatológicas y microbiológicas requeridas para establecer el

funcionamiento del repelente.

Preparar el repelente a diferentes concentraciones de aceite esencial de limón, con la

finalidad de escoger la de mayor repelencia.


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CAPITULO II

Fundamentos teóricos

A continuación se presentan los fundamentos teóricos que sustentan el presente trabajo de

investigación.

2.1 Reseña histórica de la Malaria

La Historia de la Malaria se remonta a la época más antigua de la humanidad, nadie podría

decir cuando ocurrió el primer caso de esta enfermedad, pero hay indicios para creer que

la malaria ha existido desde la formación del mundo. El nombre le fue dado en Italia por

que se creía que la enfermedad era causada por el aire proveniente de los terrenos

pantanosos, cuyo nombre italiano era palude para posteriormente adoptar los nombres de

fiebre palúdica o paludismo.

El Paludismo para nuestro país ha jugado un papel muy importante para su desarrollo según

opinión del Dr. Arnoldo Gabaldón encargado de dirigir la gran lucha antimalárica de losaños (1940- 1950).En ese entonces Venezuela poseía 1.000.000 de casos de paludismo en

una población de 3.500.000 habitantes, tal motivo obligó al Congreso a sancionar la “ Ley

de defensa contra el paludismo” y a crear la dirección especial de Malariología y la escuela

para la formación de expertos malariólogos en el recién creado Ministerio de Sanidad y

Asistencia Social, nombrando al Dr. Gabaldón, Director Y Dr. Alberto J. Fernandez,

Adjunto.

Pero no es sino a partir de 1948 cuando se observa una amplia erradicación de la malaria o

por lo menos en gran parte del país, por lo que se decide prolongar sus actividades a otras

enfermedades debido a que para conservar el área saneada era necesario contar con un

personal especializado que pudiera apagar cualquier foco. En 1957 se logra disminuir el


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número de enfermos a la menos de 10.000 pero lamentablemente en los últimos años ha

habido un repunte de Malaria aumentando el número de enfermos a 50000 casos la

mayoría del Estado Bolívar.

2.2 Enfermedades ocasionadas por insectos o mosquitos transmisores de enfermedades.

2.2.1 Malaria o Paludismo ( Mondolfi A., 1989)

Es una enfermedad infecciosa transmitida por la picadura de un mosquito hembra infectado

llamado Anopheles que se encuentran en muchas zonas del país sobre todo en las áreas de

baja elevación. En Venezuela hay dos tipos principales de Malaria producido por dos

especies diferentes de parásito Plasmodium.

La primera es causada por el Plasmodium Vivax y es considerada benigna por que es

menos severa que la causada por el Plasmodiun Falciparun. Los síntomas más comunes de

ambas enfermedades son dolor de cabeza, escalofríos, malestar a nivel muscular y articular

acompañada de fiebres altas, y en la forma mas severa puede llegar a causar la muerte.

2.2.2 Dengue.

El mosquito Aedes. aegypties es el principal vector del complejo dengue. Se caracteriza por

fiebres repentinas acompañada de dolor de cabeza, dolor articular y muscular, pérdida del

apetito y alteraciones del aparato gastrointestinal; esta sintomatología se prolonga

usualmente por 5 días rara vez menos de siete. En los últimos años se ha convertido en una

epidemia presentándose en su forma clásica y hemorrágica convirtiéndose en un evento

cuya vigilancia, prevención y control presenta especial interés de salud pública.

2.3Control de insectos.

2.3.1 Métodos químicos.


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En este renglón incluimos todas aquellas sustancias elaboradas con la finalidad de

ahuyentar o eliminar los insectos:

2.3.1.1 Repelentes.

Sustancia que al ser aplicada sobre la piel crea una especie de barrera a su alrededor queimpide el acercamiento de algunos insectos voladores constituyendo así una herramienta

eficaz para evitar sus picaduras, molestias y por ende las enfermedades que transmiten. De

acuerdo a su ingrediente activo estos pueden ser repelentes naturales como por ejemplo

Citronella, Limón, Eucalipto,Neem, etc. ó repelente sintético como: el DEET, DMP,

Etilhexanediol, Indalone, etc.

En la tabla 2.1 se presenta las principales ventajas, desventajas y contraindicaciones

existentes entre el DEET y el d-limoneno. Se tomó el DEET por ser el ingrediente activo

utilizado en la mayoría de los repelentes existentes en el mercado y el d- limoneno por ser

el ingrediente mayoritario presente en el aceite esencial de limón.

2.3.1.2 Insecticidas.

Son de gran interés para muchos, porque son productos intoxicantes utilizados en el control

de las plagas e insectos. Muchas plantas tienen propiedades insecticidas o de repelente entre

estas podemos mencionar las siguientes:

2.3.1.2.1 El piretro ( Chrysanthemun Cinerariaefolium )

Es uno de los más viejos y seguros insecticidas disponibles se extrae de las flores de un

crisantemo y causa en el insecto una parálisis casi inmediata. Sin embargo, a menos que sea

formulado con un sinergisante, la mayoría de los insectos paralizados se recuperan.

Tabla 2.1

Ventajas y desventajas entre los Ingredientes activos DEET y

d- limoneno


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Ingrediente

Activo

Ventajas Desventajas Contraindicaciones

DEET

Activo frente mosquito e

insectos.

A mayor concentración

mayor duración del efecto

repelente pero no mayor

eficacia.

Puede ser usado sobre la

ropa o sobre la piel.

No puede ser usado en

personas con problemas

dermatológicos o de piel

sensible.

Para niños menores de 10

años la concentración debe

ser menor al 10%.

Si requiere un uso continuo

debe alternarse con otros

repelentes que no

contengan DEET.

Irritaciones Cutáneas

suaves.

Efectos Neurotoxicos

tales como síntomas

de insomio, cambios

de humor episodios

psicopáticos que

pueden llegar al coma

si no son tratados a

tiempo.

d-Limoneno

Activo frente a mosquitos

e insectos.

Puede ser usado por niños

o por personas de pielsensible.

Su acción repelente no es

duradera.

Se han descrito casos

de hipersensibilidad

atribuibles a la

aplicación tópica del

aceite.


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2.3.1.2.2 Rotenona o rotenoides ( Derris y Lonchocarpus)

Se extrae de las raíces de una leguminosa que crece principalmente en Perú, es de amplio

uso en la actualidad en el control de oruga comedoras de follaje.. En Sudamérica se

usaba para paralizar los peces, haciendo que subieran a la superficie y pudieran ser

capturados fácilmente.

2.3.1.2.3 Neem ( Azadiractina )

El extracto de aceite de neem se obtiene exprimiendo las semillas del árbol. El ingrediente

activo es la azadiractina la cual posee propiedades insecticidas, fungicidas y bactericidas

realmente sensacionales, e incluyendo cualidades como regulador del crecimiento de los

insectos.

2.3.1.2.4 Poleo (Mentha pulegium)Las hojas trituradas y secas son uno de los remedios más efectivos que existen contra las

garrapatas de los animales domésticos. Se aplica sobre la piel del animal y los lugares

donde descansa, también lavando el animal con una infusión bien concentrada de la planta

ha arrojado efectos sorprendentes.

2.4 Las Pruebas Dermatológicas.

Son llevadas a cabo para formular y probar nuevos medicamentos y otras preparaciones

farmacéuticas y para incrementar el conocimiento disponible acerca de la forma de actuar

de los animales (y por inferencia de los humanos) para productos o aplicaciones

odontológicas o veterinarias, en la investigación de enfermedades como por ejemplo, el

cáncer, problemas del corazón, el SIDA etc.


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Hoy en día existen alrededor de 30 pruebas incluidas dentro de esta clasificación: Irritación

dérmica, irritación ocular, sensibilidad dérmica, fototoxicidad y foto sensibilización,

mutagénesis, toxicidad aguda y crónica, carcinogenesis, toxicidad reproductiva y

teratogenesis.

2.4.1 Test de Irritación dérmica.

El experimentador afeita el pelo del animal, coloca la sustancia a probar, luego que es

cubierta con plástico; el animal está inmovilizado en su jaula para prevenir que forcejee

mientras el experimentador aplica los químicos que le quemen la piel. El resultado varía

según la especie animal.

2.4.2 Test de Toxicidad aguda.

Las pruebas de toxicidad agudas comúnmente llamadas pruebas de la dosis mortal

determina el riesgo de la exposición a corto plazo de un producto o a un ingrediente activo

con el uso frecuente, contacto accidental en los ojos, piel ó ingerido accidentalmente, dos

ejemplos de estas pruebas son la LD50 (que estima la dosis necesaria para matar a mitad

de un grupo de ratas u otros animales de la prueba) y las pruebas de la irritación del ojo y

de la piel de Draize.

2.4.3 Test de Irritación Ocular ( Test Draize).

Inventada por John Draize, se usa para evaluar la habilidad de la sustancia probada para

dañar los tejidos oculares. Se eligen conejos no por que su cornea sea la mas parecida a la

humana sino por que no tienen lágrimas para enjuagar los irritantes y por que sus ojos son

lo suficiente grandes como para que la inflamación sea bien visible. Las reacciones

incluyen hinchazón, inflamación del iris, ulceración, sangrado, deterioro masivo y ceguera.

Estos efectos son verificados durante 3 a 21 días luego se mata al animal. Este experimentoha sido condenado ya que es muy cruel y no produce resultados confiables.

2.4.4 Test de sensibilización dérmica.

Mide el grado de alergia que puede causar una sustancia con la aplicación


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repetida. Hay unos 15 diferentes test que requieren ser hechos varias veces, generalmente

en caballos. Se usan en cantidades exageradas y no tienen validación internacional. La

respuesta es siempre diferente en el humano.

2.4.5 Fototoxicidad y fotosensibilización

Mide la reacción de la piel a la sustancia con la exposición a la luz. Se usan en caballos,

cerdos, ratas y ratones sin pelos.

2.4.6 Carcinogenicidad.

Este test sirve para identificar sustancias que pueden causar cáncer en las personas. Son

realizadas en ratas y ratones elegidas por su corta vida, pequeño tamaño, bajo costo de

adquisición y fácil manejo. Sin embargo hay sustancias en las que los animales reaccionan

de forma diferente a los humanos, como por ejemplo, el arsénico y el benceno que causa

cáncer en los humanos, no lo hacen en ratas o ratones.

2.4.7 Test de teratogenicidad.

Se trata de probar una sustancia en animales hembras preñadas para ver si ocurren defectos

de nacimiento. Como por ejemplo el medicamento talidomida no causa defectos de

nacimiento en conejillos de indias, ratas o ratones. Sin embargo, tiene gravísimas

consecuencias si es administrado a una mujer embarazada. De hecho, 10.000 niños en

Inglaterra resultaron lisiados y/o con malformaciones cuando a sus madres se le prescribió

talidomida durante el embarazo. No ocurrió en EE.UU. porque la E.P.A no aprobó el

medicamento.

2.4.8 Pruebas Dermatológicas sin usar animales.Las pruebas dermatológicas con animales han sido altamente protestadas por las

organizaciones protectoras de animales, hasta el punto que en los países desarrollados

están prohibidas y existen planes para erradicarlas por completo y se han desarrollado

métodos para sustituirlas, algunos ejemplos de dichos métodos o alternativas son: humanos


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voluntarios, tejidos de cadáveres o recogido tras cirugía, técnicas de simulación, plantas y

microbios, programas de computación, modelos de animales artificiales, uso de sustancias

que han sido probadas través de muchos años, y la simple abstinencia. Entre los métodos

mas conocidos se tienen los siguientes:

2.4.8.1 Cultivo de células in Vitro.

Las sustancias se exponen a una compleja fusión de químicos para determinar, de acuerdo a

su reacción, el grado de peligrosidad para los seres humanos en esta línea figuran la

prueba EYTEX que utiliza un gel de la proteína de la haba de gato para simular la córnea

del ojo; la irritación del ojo es indicada por la coagulación de esta proteína.

2.4.8.2 Test de Corrositex.

Un compuesto de mezclas químicas es situado sobre una matriz barrera de colágeno que

sirve como especie de piel artificial una vez que esta penetra en la barrera el compuesto

químico provoca un cambio de color en un sistema de detección líquido compuesto con

tintes indicadores de pH. El tiempo que tarda el compuesto químico en penetrar en la

barrera y producir un cambio de color es comparado con una gráfica clasificadora para

determinar la corrosividad.

2.4.8.3 Modelos matemáticos y de computación.

Basados en la estructura y propiedades fisicoquímicas de una sustancia, permite predecir el

comportamiento de un químico dado. A través de un paquete electrónico predice la

toxicidad oral, efectos mutagénicos, carcinogénicos y teratogénico e incluso sirve para las

pruebas de irritación dérmica y ocular.

2.5 Los aceites esenciales.

Los aceites esenciales se consideran sustancias volátiles obtenidas por un proceso físico de

material vegetal oloroso y/o sápido de un sólo género y especie botánica del cual posee lascaracterísticas olorosa ò sápidas y del que generalmente lleva su nombre. Se pueden

localizar en diversos lugares dentro de las especies vegetales. En algunos casos se

distribuyen uniformemente por todas las células.


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A menudo los aceites esenciales contienen mas de 200 componentes los más abundantes

son los terpenos, los cuales son una familia muy diversa de compuestos cuyo esqueleto de

carbono está compuesto de unidades de isopentilo (isopreno). Estos se clasifican en

unidades de 10 átomos de carbono, es decir un terpeno contiene 10 átomos de carbono y sele denomina monoterpeno (2 unidades de isopreno), un diterpeno contiene 20 átomos de

carbono y con 15 átomos de carbono (tres unidades de isopreno), a estos se les llama

sesquiterpenos, y significa que tienen 1 ½ veces los 10 átomos de carbono. (Wade, 1991).

Los compuestos presentes en menor cantidad en los aceites esenciales generalmente son

importantes para el olor y el sabor, de hecho un sólo compuesto puede cambiar el aroma

(Figueroa, Yalitza, 2001).

Las industrias que más usan aceites esenciales son la cosmética (perfumes y aromatizantes),

alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacéutica.

2.5.1 Aceite esencial de limón.

El aceite esencial del limón está constituido por compuestos complejos, con propiedades

fisicoquímicas diferentes, las cuales están influenciadas por el proceso de extracción

utilizado. Están constituidos en un 92 - 94 % por terpenos y sesquiterpenos; el más

importante es el limoneno y el resto son sustancias oxigenadas, estas últimas en

proporción de 6 a 8 %, el mayor componente es el citral (Rothe Fabor J., 1985) constituido

por una mezcla de dos isómeros geométricos: el Neral (Citral a ò Cis- citral) y Geranial

(Citral b ò trans- Citral).

A mediados de 1980, los Estados Unidos liderizan la producción del aceite de limón con

aproximadamente 25% del rendimiento total del mundo (2300 toneladas métricas), seguido

de Italia y Argentina. A pesar de la amplia producción doméstica, el aceite esencial delimón y otros aceites esenciales, excepto el de naranja son importados de los Estados

Unidos, estas importaciones ascienden hasta aproximadamente 700 toneladas métricas.

(Chamble. T., y otros, 1991).


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El aceite esencial de limón ha sido ampliamente estudiado, Chamble T. Y otros (1991)

reportan en su trabajo “Análisis cuantitativo de los constituyentes volátiles del aceite

esencial de la piel del limón” 56 componentes del aceite esencial del limón Californiano y

Siciliano. En la tabla 2.2 se muestran los componentes determinados en mayor porcentaje,se puede observar que los componentes mayoritarios son los hidrocarburos monoterpénicos

entre los cuales el limoneno representa el 65% del total de los constituyentes volátiles.

2.5.2 Algunos factores que influyen en la extracción del aceite esencial de limón.

En el resultado de la extracción del aceite esencial de limón, influye el grado de madurez

del fruto, ya que un fruto fresco y con un buen grado de madurez (Piel color verde oscuro)

presenta una corteza de fácil rotura y más apta para la expulsión del aceite. Cuando el

proceso de madurez avanza, la corteza tiende a adquirir una dureza que impide la fácil

rotura de las glándulas. El tiempo transcurrido entre la cosecha y su posterior manipulación

y elaboración, influye sobre los rendimientos.

Los rendimientos los más elevados se obtendrán siempre de los frutos frescos, recién

recogidos y con el mínimo golpe ó magullamiento. Los insectos y otras plagas afectan

también al rendimiento.

2.5.3 Procedimientos de extracción del aceite esencial de limón

Existen diferentes métodos para extraer el aceite esencial de limón, entre los más

empleados se tienen: prensado en frío, extracción por arrastre de vapor de agua, extracción

con solvente y mas recientemente se ha desarrollado la extracción con fluidos supercríticos.

Tabla 2.2Componentes del aceite esencial de la piel del limón Californiano y Siciliano.

COMPUESTO LIMÓN LIMÓN


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SICILIANO (%) CALIFORNIANO (%)

HIDROCARBUROS

MONOTEPENOS 91.06 91.49Pineno 1.84 1.75

Sabineno 1.79 1.85

b- pineno 10.52 11.13

Limoneno 65.16 65.65

a-terpineno 8.86 8.32

ALCOHOLES 0.53 0.51Linalool 0.18 0.13

a- terpineol 0.19 0.16

Geraniol 0.02 0.03

ALDEHIDOS 3.78 2.32

Nonanal. 0.12 0.12

Neral. 1.26 0.74

Geranial. 2.05 1.18

HIDROCARBUROS

SESQUITERPENOS

1.16

1.24

Trans-bergamoteno/citrollyl

propianato.

0.36 0.38

b-bisaboleno. 0.52 0.55

ESTERES 0.96 1.18

Acetato de Nerilo. 0.52 0.60

Acetato deGeranylo. 0.38 0.52

0.03 0.03


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20

KETONES Y ÓXIDOS

Cis- limoneno 1,2 oxide 0.004 0.06

Camfor 0.01 0.008

ALCOHOLES

SESQUITERPENOS 0.09 0.29

Campherenol 0.03 0.03

a-bisabolol 0.04 0.04

NO IDENTIFICADOS 0.20 0.29

TOTAL VOLATILES 97.81 97.16

Fuente: Chamblee t; Journal of Agricultura and Food Chemistry,1991,39,(162-169)

El prensado en frío en sus inicios se realizaba con una pequeña prensa accionada a mano,

pero actualmente el método se ha industrializado con un sistema mecánico de prensado en

frío, donde el aceite es separado de los residuos por un sistema de centrifugación, por lo

que el método también es conocido como centrifugado. El aceite esencial obtenido por este

método posee características aromáticas superiores y además son más estables debido a los

antioxidantes naturales presentes.

El inconveniente lo presenta la fricción interna durante el centrifugado que puede

provocar un aumento de temperatura no controlable produciendo la degradación térmica y

un oscurecimiento del aceite (Cerpa Chávez, 2000).

La extracción por arrastre de vapor de agua consiste en colocar la muestra vejetal cortada

en trozos pequeñosen una cámara y hacerle pasar una corriente de vapor de agua, para

arrastrar los componentes volátiles con la corriente de vapor, los cuales son recuperados


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21

condensando el vapor. La calidad del aceite obtenido generalmente se altera por

degradación térmica, es decir se inducen cambios químicos indeseables como oxidación,

hidrólisis y oligomerización; pero aún con estos cambios es uno de los procesos de

extracción que arroja mayor rendimiento, Además de la degradación este método presentaaltos costos operativos por el consumo de energía para producir el vapor de agua.

La extracción por solventes se realiza poniendo en contacto la muestra con solventes

orgánicos tales como alcoholes, cloroformo, etc. Estos solventes solubilizan la esencia,

obteniendo todos los compuestos de la muestra vegetal; pero con el inconveniente de que se

requieren etapas adicionales de purificación para separar el aceite y recuperar el solvente, lo

cual se traduce en altos costos operativos. En cuanto a la extracción con fluidos

supercríticos, esta surgió ante la necesidad de preservar el medio ambiente, de la

contaminación causada por los solventes y agentes químicos. Este método consiste en usar

sustancias en condiciones supercriticas como solventes, es decir a unas condiciones

operativas de presión y temperatura por encima del punto critico, donde las sustancias se

comportan como fluidos y tienen gran poder disolvente semejante a los solventes

convencionales. Los extractos obtenidos presentan mayor frescura y aroma natural.

2.5.4 Variedades de limones en Venezuela

Las variedades de limones existentes en el mercado de Valencia son tres; el limón criollo,

llamado también lima mejicano ó limón gallego, es un fruto muy pequeño por lo que no es

rentable comercialmente y se vende cuando las otras variedades escasean. Es la especie

más susceptible al virus de la tristeza. El limón persa ó limón sin semilla (Lima Tahití,

(Citrus Latifolia)). Introducido a California desde Tahití entre 1850–1880, originalmente de

Persia (Irán), fue introducido a Venezuela por los años 1934 - 1935. Es el limón más

comercial ya que posee mayor cantidad de jugo y es menos ácido que el limón criollo. Se produce en los valles de Carabobo y en el estado Mérida y es exportado a Curazao.

Por último, se conoce un limón no comercial, el Chinotto, variedad Eureka o limón

Europeo, de corteza rugosa, con poco jugo, es una de las variedades cultivadas en


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23

El proceso de extracción con fluidos supercríticos es un proceso semi continuo, donde la

alimentación sólida es cargada en un envase extractor. (Ver figura 2.1).

Generalmente el proceso industrial comprende las siguientes etapas: Extracción,

Expansión, Separación y Compresión del solvente. Los cuatro equipos del proceso son: Unenvase extractor de alta presión, una válvula de reducción, un separador de baja presión y

una bomba para elevar la presión del solvente reciclado.

alentamiento

xtracción

om pres ión

FS

Separac ión

ondensa c ión

xtracto

Fig.2.1 Diagrama básico del proceso de EFS, I.S.A.S.F., Francia.

Al comenzar el proceso se alimenta generalmente un sólido molido al envase extractor. El

fluido supercrítico (CO2) es alimentado al envase extractor a través de una bomba de alta

presión. Una vez calentado en un intercambiador de calor hasta la temperatura de

extracción es comprimido hasta la presiòn de trabajo. Y es cuando se procede a extraer la

esencia de la planta (raíces, tallo, flores, etc.) alimentada.


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25

Muchas otras propuestas para desarrollar procesos que utilicen fluidos supercríticos están

siendo evaluadas por la industria. Estas incluyen la posibilidad de incrementar el poder

disolvente del CO2 supercrítico para las substancias polares mediante el agregado de

surfactantes (sustancias que modifican la tensión superficial de un liquido, como losdetergentes). De esta forma ya ha sido posible solubilizar proteínas de alto peso molecular

en dióxido de carbono sin que pierdan su actividad biológica.

También es empleado el dióxido de carbono supercrítico para la producción de polímeros

como opción que elimina el uso de disolventes muy agresivos.

2.6.2 Ventajas y limitaciones de la extracción con fluidos supercríticos.

La extracción con fluidos supercríticos posen diversas ventajas por lo cual están siendo

investigadas ampliamente por diferentes instituciones e investigadores en todo el mundo,

ya que representa una alternativa para sustituir los solventes contaminantes del medio

ambiente. Otra de las ventajas más importantes es que no hay que someter al extracto a

procesos costosos de purificación luego de la extracción, como sucede con los solventes

comunes. También se obtienen extractos con mayor frescura y aroma natural y actualmente

se han diseñado equipos automatizados que facilitan la extracción.

La extracción con fluidos supercríticos tiene sus limitaciones, Cerpa Chávez, (2001)

expone que al igual que los procesos de extracción convencional, es necesario disponer de

datos de equilibrio para conocer cómo se distribuye el componente de interés en las

distintas fases y determinar la composición del producto extraído para cualquier

composición de la mezcla inicial. Este es el mayor problema de la EFSC, ya que apenas se

disponen de datos experimentales para realizar los cálculos imprescindibles.

Otro de los inconvenientes son los altos costos de los equipos, ya que como se trabaja a

altas presiones se requieren equipos especiales.

2.7 Análisis y diseño de experimentos.


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27

2.7.1 Diseños experimentales factoriales.

Los diseños experimentales factoriales son aquellos en los cuales se investigan todas las

posibles combinaciones de los niveles de los factores o variables a estudiar, con el fin dedeterminar los efectos de dichos factores sobre la variable de respuesta seleccionada; así

como también los efectos principales de los factores, es decir el cambio en la respuesta

producido por un cambio en el nivel del factor. Por ejemplo el efecto principal de un factor

A puede interpretarse como la diferencia entre la respuesta promedio en el primero y

segundo nivel de ese factor; el cual se interpreta que al incrementar el nivel del factor de 1 a

2 se produce un cambio en la variable de respuesta promedio.

Cuando la diferencia en la respuesta entre los niveles de un factor no es la misma en todos

los niveles de los factores, se dice que existe una interacción entre los niveles del factor.

Existen métodos gráficos para interpretar las interacciones, generalmente determinados

automáticamente por los programas de computadoras, pero para verificarlas se emplea un

análisis de varianza para confirmar esta interpretación.(Montgomery, 1996).

2.7.2 Análisis de Varianza (ANOVA).

Para evaluar si el efecto de un factor es significativo en la variable de respuesta, se debe

probar estadísticamente que la respuesta promedio en sus diferentes niveles es diferente,

para decir que el factor afecta la variable de respuesta. Esto se logra mediante una prueba

de hipótesis de igualdad de medias entre los niveles del factor.

El procedimiento para probar hipótesis de igualdad de medias se le conoce como análisis

de Varianza o ANOVA por sus siglas en inglés (Analisis Of Variante). Este procedimiento plantea un modelo estadístico de la variable de respuesta, el cual expresa la forma en que se

comporta dicha variable debido a la variación natural o error.


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Para probar la hipótesis de igualdad de medias se determina como estadístico de prueba, el

factor de Fisher experimental para cada factor, determinado como el cociente entre el

cuadrado medio del factor y el cuadrado medio del error, el cual es comparado con el factor

de Fisher teórico Fo(α, v1, v2); donde α es el nivel de confianza Y ( v1, v2) son los gradosde libertad del numerador y el denominador respectivamente. Este se determina empleando

las tablas de puntos porcentuales de la distribución F. Si el factor de Fisher experimental

resulta mayor al teórico existe evidencia estadística de que el efecto del factor afecta la

variable de respuesta.

Cuando se utiliza el análisis de varianza para probar hipótesis de igualdad de medias, es

necesario cumplir con tres requisitos indispensables para validar los resultados que el

ANOVA arroja, estos requisitos son los siguientes: Normalidad de errores, Varianza

constante e Independencia de errores.

Los tres requisitos están enfocadas a evaluar, en primer lugar, que los residuos (errores

aleatorios) provengan de una distribución normal con media cero (µ = o) y desviación

estándar (σ = MSE); esto se debe a que el método utilizado para probar la hipótesis es la

prueba Fisher, la cual está condicionada a que dichos residuos sean normales. En segundo

lugar debe existir una variación constante en los datos es decir que el intervalo entre el

valor máximo y mínimo no sea muy grande, es decir la varianza debe ser constante. Y por

ultimo debe existir aleatoriedad en los errores con la finalidad de que los errores sean

estadísticamente independientes. Existen diferentes métodos gráficos para probar los

supuestos del análisis de varianza.

2.7.3 Diseños factoriales 2k .

Los diseños factoriales 2K son casos especiales en los cuales los factores K solo tienen

dos niveles que pueden ser cuantitativos (temperatura, presión, tiempo, etc.) o cualitativos


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(dos máquinas, dos operadores, nivel bajo, etc.) generalmente estos niveles son alto (+) y

bajo (-).

Los efectos principales de los factores A y B, las interacciones (AB) son sencillos deestimar y a través del análisis de varianza se estima la significancia de dichos factores.

Cuando se considera un diseño experimental con 4 factores cada uno con dos niveles, se

tiene un diseño factorial 24 con 16 corridas o combinaciones de tratamientos o

experimentos que permite estimar los efectos principales, además de las interacciones entre

los factores que afectan la variable de respuesta, para lo cual es necesario realizar un

análisis de varianza.

Este diseño posee 4 efectos principales, 6 interacciones entre dos factores, 4 interacciones

entre tres factores y una interacción entre cuatro factores. Cuando el número de factores

es moderadamente grande (K> 4 ò 5) se aplica el principio de dispersión de los efectos, es

decir, usualmente el sistema está dominado por los efectos principales y las interacciones

de orden inferior.(Montgomery, 1996).

El análisis de varianza en estos diseños supone que las observaciones están distribuidas de

manera normal e independiente, con la misma varianza para cada tratamiento ò nivel del

factor, esta suposición se verifica mediante el examen de los residuos. Un residuo es la

diferencia entre una observación y la correspondiente media observada para el tratamiento.

Entonces la suposición de normalidad puede verificarse mediante la construcción de una

grafica de probabilidad normal de los residuos y para verificar la suposición de varianzas

iguales para cada nivel de tratamiento, se hace una grafica de los residuos contra los niveles

del factor y se compara la dispersión de los residuos. (Montgomery, 1996).

.2.7.4 Métodos de superficie de respuesta

La metodología de superficie de respuesta (MSR) es un grupo de técnicas matemáticas y

estadísticas útiles para el modelo y análisis en aplicaciones donde la respuesta de interés


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30

está influenciada por varias variables y el objetivo es optimizar esta respuesta. En un

proceso cuya respuesta es una función de dos factores se tiene: dondeε representa el error

observado en la respuesta y. si la respuesta esperada se denota

por: ( ) ( ) η ε == 21; x x f y , entonces la superficie representada por η se denomina

superficie de respuesta. La respuesta se representa como una superficie sólida en un espacio

tridimensional.

Superficie de Respuesta Estimada

Temperatura

Presión % R

e n d i m i e n t o

40 42 44 46 48 50 8084 88

92 96100

0.170.210.250.290.330.370.41

Figura 2.2 Superficie de respuesta tridimensional.

El primer paso en el MSR consiste en determinar una aproximación adecuada a la relación

funcional entre y el conjunto de variables independientes. Por lo general se emplea un

polinomio de orden bajo sobre alguna región de las variables independientes. Si la

respuesta es descrita adecuadamente por una función lineal de las variables independientes,

la función de aproximación es un modelo de primer orden:

y

ε ++++= k k x B x B x B B y ......22110


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31

Donde, , representan los coeficientes de regresión y ,

representan las variables codificadas. Cuando existe curvatura en el sistema se

k B B B B ;;; 210 k x x x ,, 21

debe usar un polinomio de mayor grado como por ejemplo un modelo de segundo orden.

El MSR es una técnica secuencial, cuyo objetivo consiste en determinar las condiciones de

operación mas adecuadas para un sistema, o determinar la región del espacio de los factores

en la que se satisfacen las condiciones de operación.


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Con frecuencia, la estimación de las condiciones de operación óptimas del sistema esta

lejos del óptimo real, en tales circunstancias, el objetivo es moverse rápidamente hacia la

vecindad general del óptimo, lo usual es suponer que el modelo de primer orden es unaaproximación adecuada de la superficie verdadera. Por lo general esto se logra con el

empleo del método de máxima pendiente en ascenso (MMPA), es un procedimiento para

avanzar secuencialmente en la dirección del máximo incremento de la respuesta.

CAPITULO III

Marco metodológico

En este capítulo se presentan las fases de la metodología empleada para alcanzar los

objetivos planteados de esta investigación.

3.1 Materiales y Equipos.

3.1.1 Materia Prima.

La materia prima empleada fueron limones Persa o sin semillas (Citrus Latifolia o LimaTahití.) completamente verdes y sin magulladuras de varios proveedores del Mercado de

Mayoristas de Valencia.

3.1.2 Equipos

Los equipos utilizados principalmente en esta investigación fueron un cromatógrafo de

gases, un equipo de Extracción Supercrítico y otro de extracción con arrastre con vapor.

Cromatógrafo de Gases.

El cromatógrafo de gases empleado es marca Varian, Modelo 3300, equipado con

detectores de Ionización a la Llama (FID) y Conductividad Térmica (TCD). Utiliza una

columna capilar J y W de Silica fundida DB-5 ( 30 m, 0.1mm. i.d , 0.1 µm f.t). El gas


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portador o gas de arrastre empleado es hidrógeno de alta pureza y se empleó aire para

producir la combustión en el detector FID.

Este equipo está acoplado a un sistema computarizado para analizar, registrar e imprimir elCromatograma. Este sistema contiene el software PEAKSIMPLE II versión 3.5. El

programa es alimentado por los tiempos de retención de los compuestos puros o patrones,

esto le permite identificar los compuestos presentes en las muestras.

Equipo de Extracción Supercrítica.

Para realizar la extracción del aceite esencial del Limón con CO2 supercrítico se usó una

planta de extracción a escala de laboratorio (“Applied Separations Spe-ed SFE”), la cual

requiere para funcionar dióxido de Carbono líquido (CO2) El equipo está conformado por

tres módulos que son: el módulo de la bomba de alta presión, el módulo del horno y el

módulo de descarga y recolección, además cuenta con un sistema de enfriamiento y un

compresor (ver figura 3.2).

El compresor (C) suministra aire a una presión máxima de 125 psig, alimentando a un

cilindro pulmón (CPT) de aproximadamente 1200 m3 de capacidad, al llenarse este tanque

el compresor se apaga automáticamente, luego al disminuir la presión a 75 psi comienza a

funcionar hasta reponer nuevamente la presión. El módulo de la bomba (BM) de alta

presión es alimentado con aire comprimido proveniente del tanque pulmón (TP), para

comprimir el dióxidode Carbono liquido suministrado por empresa Oxicar en un cilindro

(CD) de 6 m3 de capacidad, el cual está conectado con la bomba de alta presión La

máxima presión de operación de esta bomba es de 690 bar y posee una válvula que regula

la presión del aire alimentado (VRP); además posee un indicador de presión digital (PIB),donde se indica la presión del Dióxido de Carbono y un indicador de presión del aire (PI4).

El sistema de refrigeración también está conectado con el módulo de la bomba de alta

presión, el hace recircular un líquido refrigerante a través de la bomba de alta presión para


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retirar el calor que se produce por la compresión del Dióxido de Carbono. El modulo del

Horno (MH) consiste de un horno eléctrico diseñado para calentar hasta 240 °C; en su

interior se encuentra el cilindro extractor (CE) de acero inoxidable con 1 litro de

capacidad, diseñado para soportar una presión de 10.000 psi. Este cilindro está conectado por su tapa inferior con las tuberías de la bomba de alta presión y por la tapa superior con el

sistema de recolección y descarga.


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FFiigguur r aa 33..11 EEqquuii p poo ddee EExxttr r aacccciióónn SSuu p peer r ccr r ííttiiccaa


38/166

V3

PI2

PI3

CD

V2

V1

C

S1

S2

PI1

T

P V5

PI4 PIB

VRP

BM

SE

TI1

S1

V6

V7

B2

B1

CE

HM

I2 TI3 T

S7 S6

Leye

C: Compresor

TP: Tanque pulm

CD: Cilindro de C

SE: Sistema de e

BM: Bomba mod

CE: Cilindro de e

MR: Modulo de d

S4

V3

PI2PI2

PI3PI3

CD

V2

V1

C

S1

S2

PI1PI1

TP

V5

PI4 PIB

VRP

BM

SE

TI1

S1 S2

V6

V7

B2

B1

CE

HM

I2 TI3 T

S7 S6

Leye

CD: Cilindro de C

CE: Cilindro de e

S4


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37

Una termocupla mide la temperatura del cilindro extractor (TI4), la válvula (V6) regula la

entrada de Dióxido de Carbono al cilindro extractor, y para descargarlo al ambiente se

usa la válvula (V7 ), también posee una válvula para regular la salida del producto

extraído (V8) y conectarlo con el módulo de recolección y descarga. El módulo derecolección y descarga está constituido por dos válvulas micrométricas independientes

(VM) las cuales regulan el flujo de CO2 que sale del cilindro de extracción (CE) hasta un

máximo de 5 l /min. Su temperatura es controlada hasta 100°C en el panel de control de

horno. Estas válvulas están conectadas con el envase de recolección.

Este equipo de Extracción Supercrítica es operado de dos formas una extracción estática en

la cual el Fluido Supercrítico se mantiene en contacto con la muestra por cierto

tiempo(Tiempo de extracción estático) y luego es con la muestra por cierto

tiempo(Tiempo de extracción estático) y luego es la Extracción Dinámica en la cual el

Fluido Supercrítico fluye continuamente dentro del cilindro pasando por la muestra por un

cierto continuamente dentro del cilindro pasando por la muestra por un cierto tiempo

(Tiempo de extracción dinámico). tiempo (Tiempo de extracción dinámico)


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Equipo de Extracción de Arrastre con Vapor.

Este equipo está formado por una plancha de calentamiento (PL), un reactor (R), que posee

un indicador de temperatura (TI1) y en su interior tiene una rejilla metálica para separar lamuestra del agua y permitir que el vapor pase a través de esta. En la tapa de la olla existe

una abertura donde se conecta a una trampa Clevenger (TPH), donde se recolecta el

líquido condensado por el condensador(C) conectado en la parte superior de dicha trampa.

También en la tapa de la olla se conecta un embudo de separación para reponer el agua en

la olla (ER) (ver figura 3.2).

Fases Metodológicas de la Investigación.

A continuación se presentan las fases metodológicas utilizadas para alcanzar el objetivo

general propuesto en esta investigación. Estas fases metodológicas son cuatro; en la

primera se evalúa la extracción del aceite esencial del limón con CO2 supercrítico; en la

segunda se identifican las pruebas dermatológicas y microbiológicas necesarias, en la

tercera se formula el repelente de insectos a varias concentraciones de aceite esencial de

limón y finalmente se investiga el mercado de los repelentes en Venezuela.

3.2.1. Evaluación de la extracción del aceite esencial del limón

Selección de la materia prima para realizar la extracción.

Para seleccionar la materia prima fue realizada una investigación preliminar sobre las

variedades de limón existente en el mercado de Mayoristas de Valencia, a través de la cual

se pudo conocer que existen tres variedades de limón que son: 1) limón criollo (también

llamado limón mexicano), 2) limón Persa ó limón sin semilla (Citrus Latifolia o Lima

Tahití.) y 3) el limón Chinotto (Eureka o limón Europeo).De estas tres variedades fuerontomados limones completamente verdes y sin magulladuras a los cuales se les extrajo el

aceite esencial de la piel del fruto con Hexano, con la finalidad de realizar un análisis

cromatografico para determinar cual variedad presenta mayor cantidad de limoneno.


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Por ser este el compuesto mayoritario presente en el aceite del limón; el criterio tomando

fue el porcentaje de área registrado en el cromatograma, el procedimiento seguido fue el

siguiente:

Sobre un papel de aluminio (no sobre papel normal porque absorbe el aceite) se ralla la piel del Limón hasta obtener aproximadamente 2 gramos.


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Figura 3.2 Equipo de Extracción de arrastre de

R

V1

ER

IT1

C

TPH

S1

PLI

VP

: Conde: Reacto: Planch: Piel de: Embud: Vapor : Tramp

C OLLPLPLIERVPTPH

Le

PL


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Luego se transfiere a un erlermeyer de 10 ml y se mezcla con

5 ml de Hexano.

Se agita constantemente durante un tiempo estipulado, luego se recoge el extracto en un

tubo de ensayo de 10 ml, y se deja al ambiente hasta que el nivel del líquido no varíe.Se repite el mismo procedimiento dos veces más, para realizar posteriormente realizarle la

cromatografía de gases.


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Para cada variedad fueron realizadas tres extracciones y con el análisis cromatográfico se

determinó el porcentaje de área correspondiente al limoneno, las cuales fueron

promediadas para obtener un porcentaje de área promedio.

El resultado de este análisis arrojó que el Limón Persa contiene mayor porcentaje deLimoneno seguido del Limón Criollo y el Limón Chinotto, por esta razón fue seleccionado

el Limón Persa como materia prima para realizar esta investigación.

Selección del diseño experimental.

La selección del diseño experimental para su ejecución requirió una serie de pasos que se

presentan a continuación la cual condujo a evaluar estadísticamente la influencia que

ejercen las variables involucradas en el proceso de extracción:

Identificación de las variables o factores.

Para evaluar la influencia que ejercen las variables en el proceso de extracción del aceité

con CO2 supercrítico las variables fueron identificadas utilizando como un diagrama

causa –efecto; para lo cual fue necesario familiarizarse con el proceso a través del estudio

del funcionamiento del equipo de Extracción Supercrítica, y de los antecedentes, es decir

otras investigaciones realizadas en este equipo. También fueron identificadas las variables

controladas (que pueden ser medidas o cuantificadas) y las no controladas (que no se

pueden medir).

Selección de las variables o factores.

Luego de esta identificación de las variables, fueron seleccionadas para el diseño

experimental las variables controlables.

Definición del modelo de análisis.

A través de una revisión bibliográfica fue seleccionado el modelo para analizar

estadísticamente el efecto de las variables seleccionadas sobre el proceso de extracción,como es el diseño experimental factorial

Selección de los niveles de los factores.

Los niveles del diseño factorial fueron seleccionados tomando como referencia el trabajo de

Grosse R. y Marquina-Chidsey G. de la extracción del aceite esencial de la naranja cajera


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(Citrus Aurantium Amara l.) con CO2 supercrítico, ya que se trató de un fruto cítrico. Estos

fueron introducidos en el programa estadístico Statgraphics Plus el cual arrojó la matriz

del diseño experimental en la cual se combinan todos los niveles.

Ejecución del diseño experimental factorial 24.La extracción del aceite esencial del limón fue realizada según el diseño factorial 24

establecido en la matriz del diseño experimental utilizando la planta a escala de laboratorio

de extracción Supercrítica, es decir se realizaron los 16 experimentos establecidos en dicha

matriz mas una réplica, para lo cual fue necesario seguir una serie de pasos para el

arranque, operación y parada del proceso en cada extracción, estos pasos son los siguientes

(Ver diagrama de flujo, figura 3.2):

Arranque:

Encender el Compresor (S1) y mantener V1 cerrada hasta que el indicador de presión del

Compresor (PI1) llegue hasta 125 psi, cuando esto ocurra se debe abrir V1 y cerrar V2 para

comenzar a llenar el Tanque Pulmón (TP).

Encender el sistema de enfriamiento (SE) con los interruptores S3 y S2.

Preparación de la muestra:

Quitar la piel de los limones seleccionados completamente verdes.

Picar la piel del limón en el molino eléctrico y pesar 80 g.

Pesar el envase recolector vacío y colocarlo en el módulo de recolección y descarga.

Cargar la muestra en el cilindro de extracción: introducir en el fondo de cilindro el filtro

(Guata), colocar 130 metras y sobre ellas colocar otro filtro (Guata) encima de este segundo

filtro colocar los 80 g. de muestra tapándola con un tercer filtro, luego cerrar el cilindro de

extracción.

Introducir el cilindro de extracción en el modulo del horno (ME) y conectar su tapa

superior e inferior (Conexiones B1 y B2) con las tuberías del horno:

Colocar una capa de teflón en la rosca del tornillo y en la férula.Conectar las tuercas apretando con la mano y no con herramienta.

Introducir la termocupla en el orificio superior del cilindro de extracción.

Verificar que la temperatura del sistema de enfriamiento sea 0°C (TI1).

Verificar que las válvulas V7, V8, VM, VRP y V3 estén cerradas.


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41

Fijar las condiciones de temperatura en los indicadores de temperatura TI2 y TI3 :

Apagado el horno, presionar SP y desplazar el cursor hasta los dígitos que se desea

cambiar.

Colocar los valores deseados y pulsar SP para fijarlos.Comenzar el calentamiento del horno accionando el interruptor S5 hasta que los valores

fijados de temperatura en el horno y el cilindro de extracción sean iguales.

Operación:

Abrir la válvula V5 y verificar la recirculación de refrigerante en la bomba de alta presión

(MB).

Abrir las válvulas V2, V3, V4 para permitir el flujo de dióxido de carbono y aire

comprimido en la bomba de alta presión.

Encender la bomba de alta presión con el interruptor S4 y anotar la lectura del indicador

PIB (ver precauciones).

Abrir la Válvula V6 para que fluya el CO2 en el Cilindro de extracción.

Chequear si hay fugas en las conexiones (B1 y B2) del cilindro rociando espuma de jabón.

En caso de haber, corregir la fuga de la siguiente forma:

Cerrar la válvula V6 y V4 para impedir la entrada de CO2 al Cilindro de extracción.

Despresurizar el Cilindro de extracción abriendo la válvula V7 lentamente.(No se debe

despresurizar la bomba porque se gasta todo el CO2 presurizado que todavía no ha pasado

al cilindro, tampoco se debe hacer entre cada extracción.

Abrir la puerta del horno y cuando el cilindro se enfríe desmontarlo para cargar otra

muestra.

En caso de no haber fuga abrir la válvula VRP lenta y cuidadosamente para presurizar el

CO2 hasta la presión de operación.

Alcanzada la presión de operación accionar el cronómetro para medir el tiempo de

extracción estático.Alcanzado este tiempo abrir la válvula V8 y fijar el flujo de operación en el indicador de

flujo (FI) con la válvula micrométrica (VM), simultáneamente accionar el cronómetro para

medir el tiempo de extracción dinámico.

Parada


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42

Cerrar las válvulas V8, VM (no completamente), V6, V4, V3.

Apagar el calentamiento del horno (S7) y la válvula micrométrica (S6).

Abrir lentamente V7 para despresurizar el cilindro de extracción. Abrir la puerta del Horno

para que se enfríe, cuando esto suceda, desmontarlo y cargar otra muestra (Ver precauciones).

Desmontar el envase de recolección y pesarlo con su contenido.

Si es la última extracción:

Abrir la válvula V6 para despresurizar la bomba de alta presión, cuando el indicador esté en

cero apagar la bomba (S4).

Apagar el calentamiento del horno (S6) y la válvula micrométrica (S7) y el horno (S5).

Desmontar el cilindro de extracción.

Cerrar todas las válvulas y apagar el Compresor.

Limpiar las tuberías del modulo de recolección y descarga, inyectando Eter de petróleo en

las conexión del cilindro, con las válvulas V8, VM abiertas.

Apagar los equipos y desenchufarlos.

4. Precauciones:

Las conexiones del cilindro de extracción deben se apretadas con los dedos y no con

herramienta por que se daña la rosca del tornillo.

Si la lectura de la Bomba de alta presión es menor de 58 Bar se debe reponer el cilindro de

CO2.

Mientras se descarga el CO2 al ambiente debe ser encendida la campana extractora y

también deben alejarse del equipo todas las personas, ya que este gas en exceso puede ser

tóxico.

No debe ajustarse la presión de operación antes de alcanzar la temperatura de operación.

El frasco recolector debe estar envuelto en una tela metálica, para protección en caso de que

exploteSi las perlitas del medidor de flujo no se mueven cerrar inmediatamente la válvula V8, y

revisar si la aguja de descarga está obstruida, ya que puede explotar el frasco recolector.

Los datos experimentales fueron recolectados empleando el formato de la Tabla 3.3.


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g) Análisis estadístico de los datos.

Luego de realizados los 16 experimentos y recolectados los datos, estos fueron

introducidos en el programa de computación estadístico Statgrapfis Plus el cual realiza el

análisis estadístico del diseño experimental aplicando el análisis de Varianza (ANOVA) alas cuatro variables seleccionadas; lo cual arrojo la influencia de estas variables y sus

interacciones sobre el rendimiento de la extracción del aceite esencial de limón.

3.1.2.2 Obtención de las condiciones óptimas de presión y temperatura.

Los niveles seleccionados para establecer las condiciones optimas de presión y temperatura

del proceso de extracción fueron seleccionadas empleando el método de superficie de

respuesta, paro lo cual se realizó un diseño experimental factorial 32, con tres niveles: bajo,

alto y un punto central los niveles fueron seleccionados por encima de los considerados en

el diseño 24 con la finalidad de explorar otros niveles que pudieran maximizar el

rendimiento de la extracción.


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Los niveles seleccionados, al ser introducidos en el programa estadístico Statgraphics Plus

genera la matriz del diseño el cual consta de 9 tratamientos y fue ejecutado de igual forma

que el diseño 24 .

Los datos recolectados del rendimiento de la extracción fueron introducidos en el programa estadístico, el cual dio las condiciones óptimas estadísticamente y la ecuación

empleada, para llegar a estas condiciones de temperatura y presión, las cuales fueron

verificadas experimentalmente.


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3.2.1.3 Comparación de la extracción del aceite esencial de limón con CO2 supercrítico con

otro método convencional.


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Entre de extracción convencionales considerados para realizar la extracción del aceite

esencial de limón estuvieron: la extracción por solvente, por arrastre con vapor de agua y la

extracción por prensado en frío.Los métodos Fue seleccionado el método de arrastre con

vapor de agua por ser el más económico, sencillo y además de contar con el equipo pararealizar la extracción.

La extracción de arrastre con vapor se realizó empleando el equipo mostrado en la figura

3.3. Para lo cual se siguieron los siguientes pasos:


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Tabla 3.1

Formato para recolectar los datos del diseño experimental factorial.


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Condiciones de operación del tratamiento Resultados experimentales Nª

(P 1)Bar±

(Q 0.1)l/min±

(T ± 1)°C (tD± 0.02)s (m1± 0.01)

g

(m2± 0.01)g

(m3

Fuente: Elaboración propia.

Donde:

m1: Masa de la muestra m2: Masa del envase recolector vació m3: Masa del envase re


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Luego de la extracción se desmonta el equipo y el extracto es decantado en un embudo de

separación, luego es desecado con Sulfato de Aluminio. El extracto final fue pesado paradeterminar los gramos de extracto obtenido. Por último para evitar la oxidación se le

agrego el antioxidante BHT y se determinó el rendimiento empleando la siguiente formula:

( )%100%1

2

m

m R = (3.1)

Donde:m1: Gramos de corteza de limón, g.

m2: Gramos de aceite esencial de limón, g.

Fueron realizadas un total de 6 extracciones de las cuales se calculó el rendimiento

promedio, que fue comparado con el método de Extracción Supercrítica seleccionando el

mayor Rendimiento. El formato empleado para recolectar los datos es mostrado en la

tabla 3.2.

3.2.1.4 Identificación de los componentes principales del aceite esencial de limón.

Para identificar los componentes principales del aceite esencial de limón se realizó un

análisis cromatográfico de las muestras obtenidas con extracción supercrítica y con arrastre

de vapor para realizar dicho análisis fue necesario establecer los tiempos de retención de los

compuestos puros para compararlos con los de la muestra. Para llevar a cabo esta

identificación se siguieron los siguientes pasos:

Preparación de la solución patrón

Esta solución se preparo agregando en un tubo de ensayo 5 ml de hexano, y 5 µl

(microlitro) de cada compuesto puro (solución patrón al 1%), el volumen inyectado fue de

1µl en modo Splitless, se realizo su respectiva cromatografía para identificar claramente

los tiempos de retención.


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Obtención de la rampa de temperatura

Para realizar el análisis Cromatográfico fue necesario establecer una rampa de temperatura

para separar los compuestos y así poderlos identificarlos, ya que algunos tienen tiempos de

retención muy similares.Identificación de los compuestos

Una vez obtenida la rampa fueron inyectada las muestras e identificados los componentes

presentes en el aceite esencial de limón a través de los tiempos de retención de los

compuestos puros. Para corroborar dicha identificación se hizo la espectrometría de masa

de uno de los extractos por fluido supercrítico como por arrastre con vapor de agua.

Formulación del repelente con aceite esencial de limón.

3.2.2.1 Construcción de curva de calibración.

Se prepararon varias soluciones a diferentes concentraciones de d-limoneno para obtener el

porcentaje de área a través de un análisis cromatográfico una vez obtenidos estos

porcentajes de áreas fueron procesados en el programa estadístico Statgraphics Plus para

obtener una ecuación que relacione la concentración con el porcentaje de área. Dicho

estudio fue realizado en un Varian 3800 perteneciente a la Facultad de Ciencia y

Tecnología equipado con un detector de ionización a la llama y una columna WCOT

capilar de silica fundida CP-Wax 52 CB ( 25 m, 0,25 ID,0,39 OD), el gas portador fue

hidrógeno.

3.2.2.2 Selección de la Concentración.

En la formulación de la crema repelente utilizaremos la base Unibase (O/W) la cual fueformulada en la Facultad de Farmacia de la Universidad Central de Venezuela. A está se le

incorporó el aceite esencial a diferentes concentraciones de d-limoneno, para

posteriormente realizarle el criterio de repelencia, una vez seleccionada la concentración se

le realizó las pruebas de estabilidad química y física.


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3.2.2.3 Criterio de Repelencia.

El estudio se realizoó con voluntarios de ambos sexos entre edades comprendidas entre 20

y 30 años de edad, la muestra estuvo constituida por 20 personas distribuidosaleatoriamente en grupos de 10: grupo I (control) al que se le aplicó la crema repelente OFF

y el grupo II (experimental) que recibió la crema con aceite de limón. Las evaluaciones se

efectuaron a las 1 y 3 horas de la aplicación y consistió en contar el número de picaduras y

anotar las molestias causadas por los insectos. El criterio para evaluar el grado de

repelencia fue el siguiente:

Repele si el sujeto siente pocas molestias por los insectos en las áreas tratadas y si en ellas

aparece menos de 5 picaduras, una vez restadas las existentes que pudieran haber en el

inicio del experimento.

No repele, si el sujeto ha notado molestias por los insectos y tiene de 5 o más picaduras en

las áreas tratadas aparecidas después de aplicar la crema.

3.2.2.4 Estabilidad del producto

3.2.2.4.1 Estabilidad Química.

Por lo general en el reconocimiento de una inestabilidad química hay que tomar en cuenta

los ensayos de estabilidad por envejecimiento acelerado los cuales son de indiscutible

utilidad. Estas consisten en pruebas de envejecimiento artificial donde la temperatura que

en general se utiliza para la exposición isotérmica es de 40°C que se acompaña de otras dos

dependientes del punto de fusión por ejemplo: (5, 25, 40, o 20, 30, 40) °C en este caso las

temperaturas de estudio fueron (5, 25 y 40)°C por tener mayor margen de variación una

vez formulada la crema se elaboro UV Visible cada 3 días por 2 semanas equivalente a seismeses de vida del producto para observar cuanto se había degradado el principio activo.

3.2.2.4.2 Estabilidad Física.


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La estabilidad física de los sistemas farmacéuticos puede acarrear importantes

consecuencias afectando dos efectos fundamentales:

La apariencia del producto esto incluye aspectos como el color, olor, texturas de la muestra.

Uniformidad de la dosis.3.2.5 Identificar las pruebas Dermatológicas y Microbiológica que aseguren la calidad del

producto.

Al hablar de la calidad de un producto nos referimos a la capacidad que este posee para

conservar sus especificaciones de diseño dentro de ciertos límites y por cierto tiempo, de

modo que se pueda asegurar su efectividad, calidad y pureza. Manteniendo inalterables o

dentro del limite permisible sus propiedades organolépticas, físico-química,

microbiológicas.

a) Pruebas Dermatológica.

Para llevar a cabo la identificación de las pruebas dermatológicas se realizo una búsqueda

exhaustiva en la bibliografía, la información recopilada se ha expuesto detalladamente en

él capitulo 2 (Marco Teórico). En la selección de dicha prueba se desecharon en primera

instancia las pruebas con animales por ser extremadamente crueles y se realizó con

humanos voluntarios con el fin de determinar si producían reacciones alérgicas. Es la

denominada “Prueba de Parche” la cual es valida para la apreciación de Irritación dérmica

de preparados dermatológicos el procedimiento a seguir es el siguiente:

Se coloco un parche con el preparado en el reverso del antebrazo. Si el material es untuoso

se coloca aproximadamente 0,4 gr. En caso de líquidos o sólidos se coloca

aproximadamente 0.5 ml o 0,5 gr respectivamente.

Luego se cubre con un adhesivo plástico para evitar la caída de los parches y retardar la

evaporación de los líquidos volátiles con el preparado.

Luego de 24 horas se aparta el parche y se aprecia la reacción local en la piel por la

intensidad de la irritación producida transcurrido un intervalo de 24 horas, se repite la prueba y se observa. Si hay reacción y su intensidad se procede así hasta diez veces

aplicando un día y dejando descansar otro. Dos semanas después de la décima aplicación se

hace otra mas analizando el resultado luego de 24, 48, 72, y 168 horas.


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La acción sensibilizante, si existe se manifiesta por eritema ligero (+), eritema (++), eritema

y edema (+++) edema y vesiculacion (++++). En estos casos de reacción positiva

corresponde investigar a que componente del preparado debe atribuirse. Para ello se

preparan fórmulas parcializadas de la crema, conteniendo cada uno todos los ingredientessalvo uno. Se escogen los voluntarios entre aquellos que mostraron signos de

sensibilización en la primera prueba. Aplicados los parches correspondientes se analizan los

lugares de aplicación a las 24, 48, 72 horas de haberlos quitados.

Pruebas microbiológicas.

Uno de los aspectos fundamentales en la elaboración de todo producto farmacéutico o

cosmetológico, es garantizar la calidad de los mismos lo cual implica asegurar que el

producto no esté contaminado con microorganismos que puedan afectar su seguridad,

eficacia, estabilidad y/o aceptabilidad.

La presencia de microorganismos en estos productos es inaceptable por dos razones

fundamentales:

Un producto contaminado puede constituir un riesgo de infección para el usuario.

La contaminación microbiana puede ocasionar el deterioro del producto.

Esto se llevó a cabo tomando en cuenta las normas Covenin 2130:1998 los cuales

establecen los métodos microbiológicos a utilizar para el conteo de Mohos, Levaduras y

Aerobios Mesófilos los cultivos utilizados fueron Agar Sabouraud dextrosa y Agar Cuenta

Estandar (ver apéndice 2).

3.2.3 Estudio del mercado Venezolano de repelente.

3.2.3.1 Aspectos generales del Estudio de mercado.Al realizar un estudio de mercado es costumbre realizarlo basándose en el déficit existente,

pero en algunos casos donde el objetivo principal es visualizar la posibilidad de introducir

un producto con características diferentes a los existentes, es motivo suficiente de no

poseer una información precisa acerca del consumo, importación, exportación o cualquier


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variable que nos permita estimar la situación en que se encuentra este tipo de repelente en

el país por lo tanto dicho estudio se realizó tomando en cuenta el mercado de los repelentes

sintéticos

3.2.3.2 Objetivos del Estudio de mercado.

A continuación se presentan los objetivos primordiales que obligaron a la realización de

este estudio de mercado.

a) Estimar la demanda existente en el mercado venezolano de los repelentes con la

finalidad de introducir en el mismo un repelente natural de insectos basado en el aceite

esencial de limón.

Cuantificar e Identificar los principales repelentes existentes en el mercado

así como la proporción del mercado que ellos manejan.

c) Identificar los diferentes segmentos del mercado que estarían más interesados en el uso

de este tipo de repelente.

3.2.3.3 Determinación de las Fuentes de Información.

Todo estudio de investigación de mercado ha de basarse de una u otra forma en

información. Al examinar el proceso de investigación conviene dividir la información en

dos tipos información secundaria y primaria.

a) Fuentes de información secundaria.

La información secundaria se obtuvo por medio del Instituto Nacional de Estadística

(I.N.E), empresas privadas, Internet, y material bibliográfico en general. Constituye la

fuente mas utilizada de información de mercadotecnia, los datos están disponibles y a

menudo son adecuadas para contestar algunos de los objetivos de la investigación. Encomparación con los datos primarios la información secundaria ofrece la ventaja de ser

rápida de obtener y menos costosa aunque a veces no guarda estrecha relación con el

problema.

b) Fuentes de Información Primaria.


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Constituye los datos que reúne o genera el investigador para contemplar los objetivos del

proyecto en que se esta trabajando. Se caracterizan por su aplicabilidad al problema en

cuestión pero tienen la desventaja de ser muy costosas si se le compara con los datos

secundarios un ejemplo de estas son:Encuesta.

Entrevista Personal

Sesión de Grupo.

Observación.

Existen otros métodos de recolección de datos o fuentes primarias, pero los anteriores

resultan ser los más efectivas y comunes.

3.2.3.4 Demanda nacional.

Para estimar la demanda nacional de los repelentes se procedió en primera instancia a

identificar a los principales repelentes existentes en el mercado; se Pudo apreciar la

empresa fabricante, la marca del producto, las presentaciones existentes, el

tesis limon

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