hplc validacion

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    Objetivos

    Introducir los conceptos de : Desarrollo del protocolo

    Calificacin de instrumento

    Procedimiento analtico

    Extensin de la validacin

    Transferencia de mtodos Validacin de ensayos qumicos, fsicos,

    biolgicos y microbiolgicos

    Validacin

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    La validacin de un mtodo analtico es

    el proceso por el cual se establece,mediante estudios de laboratorio, que lascaractersticas de desempeo del mtodo

    cumplen con los requisitos para lasaplicaciones analticas previstas.

    USP 31NF 26, Captulo General Validacin de mtodos farmacopicos

    Qu es validacin?

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    La validacin de mtodos, es el

    proceso por el cual se demuestraque los procedimientos analticosson aptos para el uso indicado.

    FDA draft guidance AnalyticalProcedures and Methods Validation

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    Cul es el objetivode la validacin?

    El objetivo de la validacin deun procedimiento analtico esdemostrar que es apto para elpropsito indicado.

    ICH Guideline Q2A

    Text on Validation of AnalyticalProcedures

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    ICH Q2(R1) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Documento principal (parmetros de validacin necesarios,

    caractersticas que deben ser consideradas): etapa 5, Oct

    94 UE: Adoptado por CPMP, publicado comoCPMP/ICH/381/95.

    FDA: Registro Federal, volumen 60, N. 40, 1 de marzo,1995, pginas 11260-11262

    Addendum (datos experimentales requeridos,interpretacin estadstica): etapa 5, Nov 1995 UE: Adoptado por CPMP, publicado como

    CPMP/ICH/281/95 FDA: Registro Federal, volumen 62, N. 96, 19 de mayo,

    1997, pginas 27463-27467

    http://www.ich.org/cache/compo/276-254-1.html

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    Caractersticas Analticastpicas en la validacin

    Linealidad Especificidad

    Limite de Deteccin Lmite de cuantificacin

    Precisin Exactitud

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    Componentes de calidad de datos

    analticosVerificacin del CC (calibracin,

    materiales de referencia)`Calificacin de los

    instrumentos analticos

    Validacin de losmtodos analticos

    Pruebas de aptituddel sistema

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    Componentes del Proceso de

    validacin

    Fase IQ/OQ(IQ) (OQ/PV)

    Etapa de calificacin

    Ciclo de vida del

    equipo

    Necesidad devalidacin

    Papel y

    responsabilidadUsuario del mtodo

    Soporte tcnico

    Instrumento Mtodo

    Fase

    DQFase PQ

    Calificacin

    del

    desempeo

    Calificacin del

    diseo y desarrollo

    del mtodo

    (DQ)

    Calificacin de

    La instalacin

    (IQ)

    Calificacin de

    la operacin

    (OQ) (PQ)

    PrepararDefinir Disear Instalar Funcionar Operar

    Analista, equipo instrumental y mtodo

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    Por qu es necesaria

    la validacin analtica?

    Cul es el propsitode la validacin

    analtica?

    Mtodos confiables

    Validacin

    Mtodos reproducibles

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    Cundo Validar ?

    El mtodo analtico debe estarnormalizado

    antes de iniciar el proceso

    de validacin

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    Etapas para desarrollar

    un mtodo analtico

    Prctico : tiempo, recursosIdneo: preciso, exacto

    1

    Encontrar lascondiciones ptimas

    DEFINIR LAS CONDICIONESEl equipo

    Los reactivosEl muestreo

    2

    2 VALIDAR4

    3

    3EStANDARIZAR

    EL METODO

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    La validacin de procedimientos analticos

    requiere: Instrumentos calificados y calibrados

    Mtodos documentados

    Patrones de referencia confiables

    Analistas calificados

    Integridad de la muestra

    Validacin de mtodos

    analticos

    Documentados

    http://d/AVANCES%20EN%20BPM%20INFORMES%20OMS.ppt#31.%20Diapositiva%2031
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    Plan maestro de validacin debe

    incluir:

    Validacin de Mtodos Analt icos

    Calibracin

    Monitoreo Microbiolgico yFsico-Qumico

    Mantenimiento

    Cali f icacin de Personal

    Cali f icacin de Proveedores

    Buenas Prct icas de Laborator io

    I nspecciones I nt ernas

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    Protocolo de validacin para mtodo

    analtico debe especificar: El propsito y el alcance Responsabilidades y competencias del

    equipo de trabajo Mtodo de ensayo normalizado y

    documentado (los pasos del mtodo no

    pueden ser modificados durante lavalidacin)

    Validacin de mtodos

    analticos

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    Protocolos de validacin Lista de materiales y equipos Las caractersticas de desempeo que se

    evaluarn (especificidad, linealidad, etc)

    y el Procedimiento para evaluarlas.experimentos para cada parmetro) Anlisis estadstico o frmulas

    Criterio de aceptacin para cada parmetro dedesempeo (los criterios de aceptacin nopueden ser cambiados para ajustarse a losdatos)

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    Calificacin del instrumento

    Marca, modelo y manual del fabricante

    Modificaciones

    Calificacin de la instalacin y de laoperacin

    Programas de calibracin

    Cronogramas de mantenimiento

    Validacin de mtodosanalticos

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    Clase A: Para establecer identidad

    Clase B: Para detectar y cuantificarimpurezas

    Clase C: Para determinar

    cuantitativamente la concentracin Clase D: Para evaluar las

    caractersticas, disolucin,

    uniformidad de contenido

    Diferentes clases de ensayos

    analticos

    Clasificacin OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validacin demtodos analticos)

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    * Se puede

    permitir

    un grado

    de desviacin

    Caracterstica AIdentificacin

    Blmite

    cuantitativa

    Blmite

    cualitativa

    CCuantitativas

    producto

    terminado

    Dcaractersticas

    Exactitud X X X*

    Precisin X X X

    Robustez X X X X X

    Linealidad e intervalo X X X

    Especificidad selectividad X X X X X

    Lmite de deteccin XLmite de cuantificacin X

    Parmetros requeridos para la

    Validacin OMS

    Categoras A,B,C,D

    segn OMS, La USP las clasifica como categora I, II, III, IV

    X

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    Parmetros requeridos para la Validacin

    USP 31

    Caractersticas de

    Desempeo analtico

    Categora I

    de

    valoracin

    Prod.Termi.Graneles,

    conservante

    Categora II de valoracin Categora III de

    valoracin

    (caractersticas

    de desempeo,disolucin)

    Categora IV

    de valoracin

    (pruebas de

    identificacin)Prueba delmite

    Cuantitativa

    (impurezas en

    frmacos)

    Prueba de lmiteCualitativa

    (metales pesados,

    etc.)

    Exactitud SI SI * * NO

    Precisin SI SI NO SI NO

    Especificidad SI SI SI * SI

    Lmite de deteccin NO NO SI * NO

    Lmite de

    cuantificacin

    NO SINO * NO

    Linealidad SI SI NO * NO

    Intervalo SI SI* * NO

    * Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza de la prueba especfica

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    Mtodos nuevos requieren validacincompleta

    Mtodos de Farmacopea requierenvalidacin parcial (o verificacin)

    Cambios significativos implican

    revalidacin parcial cambios de equipo

    cambios de frmula

    cambios de proveedores dereactivos crticos

    Extensin de la validacin

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    Transferencia de mtodos

    analticos Protocolo y procedimiento del mtodo de

    transferencia precisin

    exactitud

    Robustez Mtodo cientfico escrito y aprobado

    Verificacin de la competencia

    Aceptacin formal por el nuevolaboratorio

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    Caractersticas generales de

    desempeo

    Linealidad Intervalo

    Lmites de deteccin

    Lmites de cuantificacin

    Exactitud

    Precisin

    Especificidad (USP 31 ) Selectividad (ICH)

    Reproducibilidad

    Tolerancia, fortalezao resistencia. USP 31

    Robustez

    Aptitud del sistema

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    Especificidad y Selectividad Se utiliza en :

    Identificacin: garantizar la identidad del analito

    Pruebas de pureza: declaracin exacta del contenido deimpurezas de un analito (sustancias relacionadas, metalespesados, disolventes residuales, etc.)

    Valoracin: un resultado exacto que permite la

    declaracin exacta del contenido o potencia del analito enla muestra En anlisis cualitativos: Debe tener la capacidad de

    distinguir compuestos de estructura estrechamenterelacionada (productos de degradacin)

    USP 31

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    caso 1 Productos relacionados

    Muestra delfrmaco XX

    Enantimeroestndar

    Especificidad (USP 29) Selectividad

    (ICH)

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    Muestra del

    frmaco XX bajocondicionesforzadas

    Especificidad (USP 31 ) Selectividad (ICH)

    caso 1 Productos de degradacin

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    En un procedimiento analtico para

    impurezas, la especificidad se puedeestablecer:

    Si se dispone de impurezas la especificidad puedeestablecerse por adicin. Se agregan cantidades conocidas (del frmaco o

    producto farmacutico) con niveles adecuados deimpurezas y/o excipientes Comparacin con muestras sin agregado de cantidades

    conocidas El resultado de la valoracin no se ve afectado por la

    presencia de estos materiales: un resultado exacto que

    permite la declaracin exacta del contenido o la potenciadel analito en una muestra

    (Mtodo compendial 1225 USP 31)

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    Pruebas de valoracin y de

    impurezas Si no se dispone de impurezas o de los

    productos de degradacin puede demostrarsela especificidad: Comparando los resultados de las pruebas de

    muestras que contengan impurezas o

    productos de degradacin con los de unsegundo procedimiento bien caracterizado.

    (Mtodo compendial 1225 USP 31)

    Especificidad

    Degradaciones forzadas relevantes

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    Condiciones Forzadas Relevantes

    caso 2Producto farmacuticocalor

    luzhumedad (85%)Hidrlisis cida y alcalina

    OxidacinEn algunos casos, pueden ser vlidas otrascondiciones

    El tiempo de exposicin, la temperatura yla concentracin pueden ajustarse paraobtener una degradacin adecuada de lamuestra. Mtodo compendial

    1225 USP 31

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    caso 2 Cromatograma

    del diluyente

    No se observan picos en los tiempos deretencin del componente principal y lasimpurezas.

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    caso 2 Cromatograma de la solucinestndarLas impurezas conocidas deben estar separadas

    entre s

    y del pico principal (Resolucin

    1,5)

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    caso 2Cromatograma

    de la muestra NO sometida a

    condiciones forzadas de degradacin

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    caso 2Cromatograma

    de la muestra sometida a

    condiciones forzadas: los productos de degradacinestn separados del pico principal, R 1,5

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    Lmite de Cuantificacin

    Lmite de Deteccin

    Relacin de Seal a Ruido

    LdeD, LdeC y RSR

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    LMITE DE DETECCIN USP31 : la menor cantidad de analito que

    puede detectarse en una muestra, aunque no

    necesariamente cuantificarse, bajo las condicionesdel experimento indicadas. As, las pruebas de lmiteconfirman simplemente que la cantidad de analito seencuentra por encima o por debajo de un ciertonivel.

    El LD es una caracterstica de las pruebas lmite

    La ICH cuando hay ruido de fondo recomienda que el clculodel LD puede realizarse con un valor con el cual la relacinentre seal y ruido (S/R) es 2:1

    3:1.

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    Determinacin del LD:

    No instrumental Mtodos no instrumentales:

    anlisis de muestras conconcentraciones conocidas deanalitos para establecer laconcentracin mnima a la cual elanalito puede detectarse demanera confiable.

    Ejemplos: TLC, valoracionesvolumtricas, comparaciones decolores

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    Determinacin del LD:instrumental

    Mtodos instrumentales:igual que para los mtodos no instrumentales

    anlisis de muestras con concentraciones conocidas de

    analitos para establecer la concentracin mnima a la cual elanalito puede detectarse en forma confiable.

    Cuando hay ruido de fondo la ICH sugiere una relacin seal ruido aceptable

    de 2:1

    3:1

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    Estimacin del LD (ICH)

    LD = 3,3 /mdonde: = desviacin estndar (ruido) de larespuesta

    m = pendiente de la curva de calibracinpara linealidad

    El LD puede basarse en cualquiera de lossiguientes:

    - del blanco- del punto de linealidad de nivel ms bajo

    -

    el grfico de calibracin (regresin)

    Otro enfoque sugiere la determinacin de la pendiente de la curva decalibracin y la desviacin estndar de las respuestas.

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    Ejemplos de pruebas de

    lmites (validacin del LD) Pruebas de comparacin del color

    (metales pesados ) Mtodos TLC (impurezas comunes

    ) Mtodos de precipitacin (prueba de

    plomo en la monografa sobre xidode zinc)

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    ruido

    Pico A

    LdD

    Pico B

    LdC

    Lnea

    basal

    Relacin entre seal y ruido

    Cromatograma

    que muestra el ruido de lnea base

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    Desviacin estndar del blanco

    Ejemplo: Integracin de un pico cromatogrfico

    Inyeccinestndar

    Inyeccinblanco

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    LMITE DE CUANTIFICACIN

    La menor cantidad de analito en unamuestra que puede determinarse conprecisin y exactitud aceptables bajo lascondiciones del experimento

    establecidas. USP31 En esencia, idntico a ICH Q2A

    Lmite de cuantificacin (LC) = lmite de

    cuantificacin (LOQ)

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    Determinacin/Validacin

    del LC No instrumental:

    a partir del anlisis de muestras con unnivel adecuado mnimo de analitocuantificado con exactitud y precisinaceptables.

    Instrumental:igual que para los mtodos no

    instrumentales, ms el hecho de que elclculo del LC puede realizarse con unvalor con el cual la relacin entre seal yruido es 10:1. USP 31 (1225)

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    Ejemplos de valoraciones

    cuantitativas (validacin del LC) Mtodos de valoracin volumtrica

    (agua )

    Mtodos HPLC/GC (pureza

    cromatogrfica) Mtodos gravimtricos (prdida por

    secado )

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    INTERVALO

    El intervalo de un mtodo analtico es laamplitud entre los niveles superior e inferiordel analito (incluidos estos niveles) que sedemostr que se determin con un nivel

    adecuado de precisin, exactitud ylinealidad, utilizando el mtodo segn sedescribe en el protocolo.

    USP 31

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    LINEALIDAD

    La linealidad de un mtodo analtico es sucapacidad para obtener resultados deprueba que sean proporcionales ya seadirectamente, o por medio de una

    transformacin matemtica bien definida, ala concentracin de analito en muestras enun intervalo dado.

    USP 31

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    Evaluacin de linealidad Debe utilizarse un mnimo de 5

    puntos de datos para unaevaluacin adecuada

    Inspeccin visual del grfico ymtodo estadstico (lnea deregresin, mnimos cuadrados)

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    Consideraciones de linealidad e

    intervalo para el protocolo devalidacin

    Los criterios de aceptacin deben equilibrar el

    rigor cientfico con las limitaciones prcticas Linealidad:

    Valor r2 mnimo: 0,99 hasta 0,9999

    Interseccin-y: estadsticamente nosignificativa, dentro del n % de la respuesta dela solucin estndar

    Apto para la valoracin mediante un estndarde un solo punto

    Intervalo: necesario para resultados exactos yprecisos

  • 7/31/2019 hplc Validacion

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    51 de 83

    Linealidad e intervalo

    0.01

    0.0100.015

    0.020

    0.025

    0.030

    0.035

    0.040

    0.015 0.02 0.03 0.035 0.04

    Linealidad

    de un analito en un material

    Material de referencia mg/ml

    An

    alitocalculadoenmg/ml

    0.025

    0,01552 0.0150

    3 0.0200 0,0207

    4 0.0250 0.0256

    5 0.0300 0.0298

    6 0.0400 0.0401

    Tabla de valores(x,y)

    x y

    Material dereferencia

    mg/ml

    Material dereferencia

    mg/ml

    1 0.0100 0.0101

    #

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    52 de 83

    Estadstica de linealidadUna vez realizada la curva hacer el tratamiento estadstico

    aplicando el principio de la linealidad:

    y = ay = a +bx+bx

    a= ya= y --bxbx

    Ecuacin de la lnea recta:

    (xi(xi--x)(yix)(yi--y)y)(xi(xi--x)x)

    b =

    Taller 1

  • 7/31/2019 hplc Validacion

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    53 de 83

    Intercepto (a) -0.00056

    Lmite de Linealidad e Intervalo 0.005 0.040

    mg/ml Pendiente (b) 0,988857

    Coeficiente de correlacin ( r ) Pearson 0.99952 Coeficiente de determinacin (r2) =99,90%

    Desviacin estndar relativa (CV%) delprocedimiento 1,37%

    Estadstica de linealidad

    El test del coeficiente de los factores de respuestamenor del 5% indica linealidad . AEFI 2001

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    54 de 83

    El grfico muestra que el modelo ajustado corresponde a unmodelo lineal que describe la relacin entre lo esperado y loobtenido y que responde a una lnea recta y que permite hacerpredicciones sobre otros valores corregidos

    y = 0,00056+ 0,988857*xComo el P-value

    en la tabla ANOVA es menor que 0.01, existe una

    relacin estadsticamente significativa entre la concentracin del

    material de referencia y el resultado obtenido sobre las soluciones,a un nivel de confianza del 99%

    .

    The

    R-Squared

    estadstico indica que el modelo ajustado explica

    el 99,90% de la variabilidad en los resultados obtenidos. El

    coeficiente de correlacin igual a 0,99952, indica una relacin muyfuerte entre las variables. El error estndar estimado, de losresiduales, muestra una desviacin estndar de 0,00038099. Estevalor puede ser usado para construir lmites de prediccin paranuevas observaciones.

    Comentarios con relacin a los

    datos ANOVA

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    0 0,05 0,1 0,15 0,2

    Concentracin

    Respuesta

    Interseccin-

    y/x = pendiente

    y = residual

    x

    y

    Anlisis de regresin Interseccin-y, pendiente y residuales

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    55/82

    56 de 83

    Exactitud Precisin

    Repetibilidad

    Reproducibilidad

    Caractersticas de los

    procedimientos analticos

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    56/82

    57 de 83

    Relacin entre

    exactitud y precisin

    inexacto e

    impreciso

    Exacto peroimpreciso

    Exacto y preciso

    inexacto

    precisopero

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    57/82

    58 de 83

    Exactitud Calculado como el porcentaje de

    analito recuperado o por la diferencia entre el valor

    obtenido y el valor realevaluado estadsticamente

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    58/82

    59 de 83

    Exactitud

    5 maneras de determinar la exactitud

    Prueba de un Estndar de Referencia

    Mezcla con excipientes (placebo con unacantidad agregada conocida)

    Agregado de estndar (muestra concantidad agregada conocida)

    Se deduce a partir de los datos de

    especificidad y linealidad. Comparacin con un mtodo reconocido

    como exacto (mtodo de referencia)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    59/82

    60 de 83

    PRECISIN

    El grado de coincidencia entre los

    resultados de las muestrasindividuales de una muestra

    homognea

    La precisin debe evaluarse a travsdel intervalo de cuantificacinespecificado en el mtodo

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    60/82

    61 de 83

    Precisin comparadacon exactitud

    La exactitud se expresa como %de recuperacin

    La precisin se expresa comoDesviacin Estndar Relativa (RSD)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    61/82

    62 de 83

    Precisin Determinacin:

    Valoracin de las muestras individuales de

    una preparacin homognea Calcular la desviacin estndar o la

    desviacin estndar relativa

    La precisin del mtodo debe incluir todas lasfuentes de variacin desde la preparacin de la

    muestra hasta el redondeo del resultado final dela prueba

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    62/82

    63 de 83

    Niveles de precisin ICH-USP

    Repetibilidad: coincidencia dentro de unperiodo cortopara el mismo analista con la

    misma instrumentacin Precisin intermedia: coincidencia en los

    resultados del mismo laboratorio, pero en das

    distintos con analistas y equipo diferentes(segn corresponda) Reproducibilidad: coincidencia en los

    resultados entre laboratorios (como en unestudio colaborativo).

  • 7/31/2019 hplc Validacion

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    64 de 83

    Precisin Repetibilidad (5 inyecciones repetidas)

    Lmite de valoracin (%) % RSD mxima99,0

    101,0

    0,37 1

    98,5

    101,5 0,55 1

    98,0 102,0 0,731

    95,0

    105,0

    1,9 2

    90,0

    110,0

    3,9 2

    Impurezas 5 a 252

    -

    dependiendo del nivel

    1 Pharmaeuropa, 11(4), 571-5772

    Pharm. Technol., 6(9), 120-137

    DER = Desviacin estndar Relativa (RSD)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    64/82

    65 de 83

    Precisin Precisin intermedia: La FDA recomienda un mnimo de 2 das distintos con

    analistas diferentes.

    FDA (CDER), Gua del revisor: Validacin demtodos cromatogrficos, nov. 1994

    Criterios de aceptacin:

    Realizar la prueba-F, los resultados intralaboratorios no deben serestadsticamentedistintos.

    Tpicamente, alrededor de 2 veces la s o el CV% de

    la repetibilidadSin embargo, una diferencia estadstica puede noser significativa (consideracin prctica).Necesidad de evaluar la aptitud para la indicacin

    de los mtodos

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    65/82

    66 de 83

    Variabilidad causada por :

    Variaciones de da a da De analista a analista

    De laboratorio a laboratorio De instrumento a instrumento De columna cromatogrfica a columna

    cromatogrfica De estuche de reactivos a estuche de reactivos Inestabilidad de los reactivos analticos

    TOLERANCIA, FORTALEZA

    La tolerancia es el grado de REPRODUCIBILIDAD

    del mtodo analtico, en diversas condiciones:

    ICH PRECISIN INTERMEDIA

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    66/82

    67 de 83

    ROBUSTEZ La USP 31 la define como una medida de la

    capacidad del mtodo analtico, y demuestraque no resulta afectado por pequeas perodeliberadas variaciones en los parmetros

    del mtodo y proporciona una indicacin desu confiabilidad durante su uso normal.

    TRANSFRENCIA DE MTODOS

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    67/82

    APTITUD DEL SISTEMA Si las mediciones son susceptibles a variaciones

    en condiciones analticas, stas deben controlarseadecuadamente o incluirse en el mtodo unadeclaracin preventiva.

    68 de 83

    Las pruebas de aptitud del sistema se basan en

    el concepto que el equipo, el sistema electrnico,las operaciones analticas y las muestras aanalizar constituyen un sistema integral que

    puede evaluarse como tal.

    USP 31 (621)

    Las inyecciones repetidas de una preparacinestndar empleada en la valoracin u otra solucinestndar se comparan para determinar si cumplen

    con los requisitos de precisin.

    APTITUD DEL SISTEMA

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    68/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    69 de 83

    R = ( N ) ( - 1 / ) ( k / k + 1 )

    E f i c i e n c i a

    S e l e c t i v i d a d

    C a p a c i d a d

    Resolucin R cuando se tiene mas de un analito

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    69/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    A menos que se especifique algo diferente en lamonografa individual, se emplean los datos de cinco

    inyecciones repetidas del analito para calcular ladesviacin estndar relativa s, si el requisito es 2% omenos.

    Se emplean los datos de seis inyecciones repetidas si elrequisito de s es ms de 2%.

    Las inyecciones repetidas de una preparacin estndarempleada en la valoracin u otra solucin estndar se

    comparan para determinar si cumplen con los requisitosde precisin.

    70 de 83

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    70/82

    APTITUD DEL SISTEMA El factor de asimetra T, es una medida de la asimetra

    del pico, es la unidad para los picos perfectamentesimtricos y su valor aumenta a medida que la asimetra

    es ms pronunciada. En algunos casos, puedenobservarse valores menores a la unidad A medida que laasimetra del pico aumenta, la integracin y por lo tanto

    la precisin se tornan menos confiables.

    71 de 83

    USP 31 (621)

    Estas pruebas se realizanmediante la recoleccin dedatos de inyecciones

    repetidas del estndar u otrassoluciones, segn seespecifique en al monografaindividual

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    71/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    Aunque una monografa especifique los parmetros definitivosque se deben utilizar, esto no impide utilizar otras condicionesoperativas adecuadas y puede ser necesario realizar ajustes enlas condiciones operativas, para cumplir con los requisitos deaptitud del sistema.

    A menos que se especifique algo diferente en la monografa,

    los parmetros de aptitud del sistema se determinan a partirdel pico del analito.

    72 de 83

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    72/82

    APTITUD DEL SISTEMA Se permite ajustes slo cuando se encuentran disponibles

    estndares adecuados, (incluyendo los de referencia), detodos los componentes usados en la prueba de aptitud del

    sistema y slo cuando estos estndares sean los usados parademostrar que los ajustes han mejorado la calidad de lacromatografa en cuanto a los requisitos de cumplimiento deaptitud del sistema .

    Mltiples ajustes pueden tener un efecto acumulativo en eldesempeo del sistema y deben considerarse antes de

    implementarlos.

    73 de 83

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    73/82

    APTITUD DEL SISTEMASe puede considerar cada una de las siguientes variacionesmximas, a menos que la monografa indique algo diferente.

    pH de la fase mvil 0,2 unidades

    Concentracin de la solucin amortiguadoras : se permite 10%siempre y cuando conserve la variacin de pH

    Relacin de los componentes de la fase mvil: c10% absoluto y30% relativo

    Longitud de onda del UV-visible: Error permitido mximo deldetector 3 nm

    Longitud de la columna puede ajustarse hasta el 70%

    Dimetro interno CG, HPLC 25%

    Longitud de la columna de HPLC 50%

    74 de 83

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    74/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    HPLC tamao de partcula puede reducirse hasta 50%

    CG Tamao de la partcula conserva el cociente de intervalo

    entre la ms grande y la ms pequea Velocidad de flujo puede ajustarse hasta 50%

    Volumen de inyeccin reducirse hasta los LD , LC y precisin

    aceptados Temperatura de la columna puede ajustarse hasta 10%

    Temperatura de horno puede ajustarse hasta 10%

    Programa de Temperatura horno CG hasta 20%

    A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA los parmetrosde aptitud del sistema se determinan a partir del pico delanalito.

    75 de 83

    USP 31 (621)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    75/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    Los tiempos de retencin relativos son slo informativos,facilitan la identificacin de los picos.

    Para determinar la eficacia del sistema operativo final, se lodebe someter a una prueba de aptitud.

    Las inyecciones repetidas de la preparacin estndar

    requeridas para demostrar que la precisin del sistema esadecuada , pueden realizarse antes de inyectar las muestraso intercalarse entre las inyecciones de las muestras.

    Se debe demostrar la aptitud del sistema durante toda la

    corrida mediante inyecciones de una preparacin controladecuada a intervalos apropiados, incluso al final delanlisis.

    76 de 83

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    76/82

    APTITUD DEL SISTEMA

    La preparacin control puede ser una preparacin estndar ouna solucin que contenga una cantidad conocida, y

    cualquier otro material adicional til para el control delsistema analtico. Como por ejemplo impurezas oexcipientes.

    Siempre que haya un cambio significativo en el equipo o enun reactivo crtico, la prueba de aptitud debe realizarse antesde inyectar las muestras,

    Ningn anlisis de muestras es aceptable a menos que

    cumpla los requisitos de aptitud del sistema. Los anlisis demuestras obtenidos cuando el sistema no cumple con lacondicin de aptitud es inaceptable.

    77 de 83

  • 7/31/2019 hplc Validacion

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    Verificacin de procedimientos

    farmacopicos

    Los usuarios de los procedimientos analticos

    farmacopicos no necesitan validar estosprocedimientos cuando los usan por primeravez, aun cuando debe establecer evidencias

    documentadas de aptitud en las condicionesreales, FDA estableci

    este requisito en el

    punto 21 CFR 211.194 a 2 .

    Se verificar

    la

    aptitud de todos los mtodos de pruebausados bajo las condiciones reales de uso .

    No incluye los microbiolgicos

    78 de 83

    Verificacin de procedimientos

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    78/82

    Verificacin de procedimientos

    farmacopicosEL PROCESO DE VERIFICACION, da confianza en

    que los procedimientos se llevan a cabo con laaptitud requerida

    Si la verificacin no es exitosa y la consulta yasistencia del personal USP, no logra solucionar elproblema, se puede concluir que el procedimientoposiblemente, no es apto para usar en el artculo quese est evaluando en el laboratorio y entonces sehace necesario validar el mtodo analtico.

    79 de 83

    USP 31 (1226)

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    79/82

    Verificacin de procedimientos

    farmacopicos

    Evaluar la complejidad del procedimiento y delmaterial sometido a anlisis. Se usan algunas de lascaractersticas del desempeo analtico, las que se

    consideren adecuadas, la extensin depende de laformacin y competencia del analista, el tipo deprocedimiento, el equipo e instrumentos asociados,

    los pasos especficos del procedimiento y el artculo,por ejemplo exactitud por las diferentes matrices. LDy LC

    USP 31 (1226)

    80 de 83

    REQUISITOS DE LA VERIFICACION

    Reporte de Validacin

  • 7/31/2019 hplc Validacion

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    81 de 83

    Reporte de Validacin

    Objetivo y alcance del mtodo,aplicabilidad

    Tipo de analito y la matriz sobrela que se hizo la validacin,

    Detalles del analito, reactivos,

    estndares de referencia y controly estabilidad de las muestraspreparadas.

    Procedimiento para la verificacin de lacalidad de los estndares y reactivosqumicos usados

    Condiciones de seguridad

    Reporte de Validacin

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    81/82

    82 de 83

    Listado de equipos, funcionamiento,condiciones de desempeo. IQ,OQ,PQ

    Detalle de las condiciones y cmofue realizado el proceso, incluyendo lapreparacin de la muestra

    Tratatamiento estadstico y clculosrealizados

    Procedimientos de control rutinario

    Parmetros crticos establecidos atravs del test de robustez

    Parmetros del mtodo

    1111

    Reporte de Validacin

    Reporte de Validacin

  • 7/31/2019 hplc Validacion

    82/82

    Resultados de la incertidumbre de

    la medicin Criterios para revalidacin

    Persona que desarroll

    y valid

    el

    mtodo inicialmente

    Resumen y conclusiones

    test de aceptacin de las variables

    Registros como cromatogramas,espectros y curvas de calibracin

    1717

    1212

    1313

    1414

    1515

    1616

    Reporte de Validacin