TALASEMIA: noutati in diagnostic TALASEMIA: noutati in diagnostic

si tratamentsi tratament Luni 20 Decembrie 2010

Conf. Dr. Daniel CORIUProf. Dr. Constantin ARION

Sef Lucrari Dr. Anca COLITA

INSTITUTUL CLINIC FUNDENI

Talasemia: DefinitieTalasemia: Definitie

Boala ereditara determinata de scaderea hemoglobinei, proteina din eritrocite care transporta oxigen

Talasemia: Transmitere genetica Tatal - purtator Tatal - purtator

Mama -purtatoareMama -purtatoare

Normal 25%Normal 25%

Purtator25%Purtator25%

Purtator25%Purtator25%

Talasemie Majora 25%

Talasemie Majora 25%

Talasemia: Forme cliniceTalasemia: Forme clinice

Heterozigota (o singura gena defecta): talasemia minora (asimptomatica / anemie usoara)

Homozigota (ambele gene defecte): talasemia majora (anemie severa, tulburari de crestere, hepato - splenomegalie, hemocromatoza)

Talasemia Majora: TratamentTalasemia Majora: Tratament

Transfuzii de sange

Terapia cu chelatori de fier

Transplantul medular

Talasemia in RomaniaTalasemia in Romania

Nu exista un program national de preventieNu exista un program national de preventie

Nu se cunoaste incidenta talasemiei minore (cateva studii Nu se cunoaste incidenta talasemiei minore (cateva studii unicentrice)unicentrice)

In fiecare an apar aproximativ doua cazuri noi de talasemie In fiecare an apar aproximativ doua cazuri noi de talasemie majoramajora

Pacienti cu talasemie majora Pacienti cu talasemie majora ~ 350- 400~ 350- 400

Centrul de Hematologie si Transplant Medular Centrul de Hematologie si Transplant Medular Adulti si Copii – Institutul Clinic FundeniAdulti si Copii – Institutul Clinic Fundeni

Diagnostic molecular prenatal in talasemie Diagnostic molecular prenatal in talasemie

Dezvoltarea programului de Transplant Medular Dezvoltarea programului de Transplant Medular pentru pacientii cu talasemie majorapentru pacientii cu talasemie majora

Centrul de Hematologie si Transplant Centrul de Hematologie si Transplant Medular – Institutul Clinic FundeniMedular – Institutul Clinic Fundeni

Laborator de Biologie Moleculara HematologicaLaborator de Biologie Moleculara Hematologica

METODE DE IDENTIFICARE A MUTATIILOR METODE DE IDENTIFICARE A MUTATIILOR ββ-TALASEMICE-TALASEMICE

ELECTROFOREZA IN GEL CU GRADIENT DE DENATURARE (DGGE)

Amplificare seriata a fragmentelor β-globinice: Fr.F, Fr.I, Fr.II, Fr.III, Fr.IV

Electroforeza fragmentelor F, I, II, III, IV in gel de poliacrilamida cu gradient de denaturare

AMPLIFICARE SPECIFICA A ALELELOR MUTANTE (ARMS-PCR)

Electroforeza in gel de agaroza

ANALIZA SITUSULUI DE RESTRICTIE IN FRAGMENTE DE AMPLIFICARE PCR (PCR-RFLP)

Electroforeza in gel de agaroza

Amplificarea fragmentelor genice β-globinice urmata de restrictie enzimatica

Spectrul mutatiilor β-talasemice in Romania (83/100):

1. IVS I-110 (G-A) – β+(30%)2. Cd 39 (C-T) – βo (15%)3. IVS II-745 (C-G) – β+(14%)4. IVS I-6 (T-C) – β+ (14%)5. IVS I-1 (G-A) – βo (9%)6. –87 (C-G) –β++ (5%)7. Cd 8 (-AA) - βo (4%)8. Cd 6 (-A) – βo (3%)9. Cd 5 (-CT) – βo (2%)10. +22 (G-A) – β+ (1%)11. Cd 51 (-C) – βo (1%)12. Poly A (AATAAA-AATGAA) – β+ (1%)

MUTATIILE β-TALASEMICE

1%1%2% 4%1%

14%

9%

5%3%

14%31%

15%

IVS I-110 (G-A) CD 39 (C-T)IVS II-745 (C-G) IVS I-1-87 (C-G) CD 6 (-A)IVS I-6 (T-C) Poli A (A-G)CD 51 (-C) +22 (G-A)CD 5 (-CT) CD 8 (-AA)

Pentru cuplurile la care diagnosticul de talasemie minora a fost pus la ambii parinti, dupa ce Pentru cuplurile la care diagnosticul de talasemie minora a fost pus la ambii parinti, dupa ce partenera a ramas insarcinata, se recomanda efectuarea testelor de genetica moleculara la fat partenera a ramas insarcinata, se recomanda efectuarea testelor de genetica moleculara la fat pentru a identifica prezenta mutatiilor talasemice.pentru a identifica prezenta mutatiilor talasemice.Probele de material fetal se obtin prin AMNIOCENTEZA sau prelevare de probe din VILOZITATILE Probele de material fetal se obtin prin AMNIOCENTEZA sau prelevare de probe din VILOZITATILE CORIALE. Ambele pot fi efectuate numai in centre specializate sub control ecografic.CORIALE. Ambele pot fi efectuate numai in centre specializate sub control ecografic.Amniocenteza se efectueaza dupa saptamana a 15-a de sarcina prin recoltarea de 10-15 ml de Amniocenteza se efectueaza dupa saptamana a 15-a de sarcina prin recoltarea de 10-15 ml de lichid amniotic. lichid amniotic. Biopsia din vilozitatile coriale se poate efectua in saptamana 10-12 de sarcina prin recoltare de Biopsia din vilozitatile coriale se poate efectua in saptamana 10-12 de sarcina prin recoltare de fragmente foarte mici de tesut cu origine fetala.fragmente foarte mici de tesut cu origine fetala.

SCHEMA DE REALIZARE A DIAGNOSTICULUI MOLECULAR PRENATAL

ADNul extras din lichid amniotic sau vilozitati coriale este analizat prin metodele moleculare pentru identificare şi caracterizare de mutaţii β-talasemice prezente în genotip. Prin aceste metode se stabileste diagnosticul de homozigot (bolnav) sau heterozigot (purtator) al β-talasemiei, se identifica mutatia exacta prezenta la fat si se anticipeaza fenotipul sau.

ANALIZA ADN

Centrul de Hematologie si Transplant Medular – Centrul de Hematologie si Transplant Medular – Institutul Clinic FundeniInstitutul Clinic Fundeni : Colaborari Internationale

Framework Package6 (FP6) : eInfrastructure for Framework Package6 (FP6) : eInfrastructure for Thalassaemia Research Network (ITHANET) Thalassaemia Research Network (ITHANET)

Joint Research Cooperation Programme, Romania Joint Research Cooperation Programme, Romania - Cyprus: Phenotype/Genotype Correlation - Cyprus: Phenotype/Genotype Correlation Studies on Haemoglobinopathies;Studies on Haemoglobinopathies;