uji toksisitas akut ekstrak etanolik rimpang temu …repository.setiabudi.ac.id/1382/2/skripsi...
TRANSCRIPT
i
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOLIK RIMPANG TEMU
PUTIH (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe) TERHADAP
MENCIT PUTIH BETINA
Oleh:
Harun Indah Mufidah
18123686A
Kepada
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SETIA BUDI
SURAKARTA
2016
i
UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOLIK RIMPANG TEMU
PUTIH (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe) TERHADAP
MENCIT PUTIH BETINA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Setia Budi
Oleh:
Harun Indah Mufidah
18123686 A
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SETIA BUDI
SURAKARTA
2016
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN
Katakanlah :“Seandainya lautan menjadi tinta untuk menulis kalimat-kalimat Tuhanku, sungguh habislah lautan itu sebelum habis
ditulis kalimat-kalimat Tuhanku, meskipun Kami datangkan tambahan sebanyak itu pula” (Al Kahf:109)
“Jika seorang manusia meninggal dunia, maka terputuslah segala amalannya, kecuali tiga perkara, yaitu : (1) Shadaqah
jariyah,dan (2) ilmu yang bermanfaat, dan (3) anak yang shalih yang mendoakannya.” (H.R. Muslim).
“Keridhan Allah tergantung kepada keridhaan kedua orang tua dan murka Allah pun terletak pada murka kedua orang tua”
(H.R. Al Hakim)
Kupersembahkan karya ini untuk:
Rabb-ku Allah SWT sebagai ungkapan rasa syukurku
Bapak dan Ibuku tercinta yang selalu mengarahkan dalam ketidakberdayaanku menjalani
hidup ini dan mengerti arti hidup yang sesungguhnya
Kakak, adik, dan keponakanku yang aku sayangi
Para pendidik dan pengajar dalam hidupku
Sahabat-sahabat tercinta, dan penghuni kost An-nur
Terimakasih sudah mendoakan, dan menyemangatiku
Agama, almamater, bangsa dan negeriku tercinta
iv
v
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang
telah melimpahkan rahmat dan karuniaNya, sehingga pada akhirnya penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini untuk memenuhi persyaratan guna mencapai gelar
Sarjana Farmasi (S. Farm) dalam ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas
Setia Budi.
Skripsi ini berjudul UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK
ETANOLIK RIMPANG TEMU PUTIH (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe)
TERHADAP MENCIT PUTIH BETINA dengan harapan dapat bermanfaat
bagi pembaca dan dapat memberikan sumbangan pengetahuan di bidang Farmasi
terutama dalam pengobatan tradisional.
Di dalam menyusun skripsi ini tidak lepas dari bantuan bimbingan dan
dukungan dari berbagai pihak, maka pada kesempatan ini penulis mengucapkan
terimakasih kepada yang terhormat :
1. Dr. Ir. Djoni Tarigan, MBA.,. selaku Rektor Universitas Setia Budi Surakarta.
2. Prof. Dr. RA. Oetari, SU. MM., Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Setia Budi Surakarta, yang telah memberikan kesempatan dan
fasilitas dalam pelaksanaan penilitian dan penyusunan skripsi ini.
3. Inaratul Rizkhy Hanifah, M.Sc., Apt., selaku pembimbing utama yang telah
memberikan nasehat dan petunjuk dalam penyusunan skripsi ini.
4. Opstaria Saptarini, M.Si, Apt., selaku pembimbing pendamping yang telah
membantu dalam penyusunan skripsi ini.
5. Tim penguji yang telah menyediakan waktu untuk menguji dan memberikan
masukan untuk penyusunan skripsi ini.
vi
6. Segenap Dosen, Karyawan dan Staf Laboratorium Fakultas Farmasi
Universitas Setia Budi yang telah banyak membantu bagi kelancaran
pelaksanaan skripsi ini.
7. Orang tua dan saudara-saudaraku yang selalu ku cintai terima kasih atas doa
dan kasih sayangnya, serta dorongannya baik dalam hal moril dan materiil.
8. Sahabat-sahabatku (Depridar, Efti, Bertha, Ajeng, Santi, dkk) terima kasih
atas doa, dorongan semangat,dan bantuan yang berupa pikiran, informasi
maupun bahan-bahan yang penulis perlukan dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih jauh dari
sempurna, meskipun penulis sudah berusaha semaksimal mungkin di dalam
menyajikannya. Oleh karena itu, segala kritik dan saran yang bersifat membangun
dari para pembaca akan penulis terima dengan tangan terbuka dan senang hati.
Akhirnya penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat khususnya
bagi Fakultas Farmasi dan bagi pembaca pada umumnya.
Surakarta, Juni 2016
Penulis
vii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................. ii
HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... iii
HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................... iv
KATA PENGANTAR ..................................................................................... v
DAFTAR ISI ....................................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................... xi
DAFTAR PERSAMAAN ................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xiii
INTISARI ......................................................................................................... xv
ABSTRACT ..................................................................................................... xvi
BAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1
A. Latar Belakang Masalah .............................................................. 1
B. Perumusan Masalah .................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian ........................................................................ 5
D. Kegunaan Penelitian.................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 6
A. Tanaman Temu Putih .................................................................. 6
1. Tanaman temu putih ............................................................ 6
2. Sistematika tanaman temu putih .......................................... 6
3. Nama daerah ........................................................................ 7
4. Morfologi tanaman ............................................................... 7
5. Kandungan kimia ................................................................. 8
6. Kegunaan Temu Putih ......................................................... 9
B. Simplisia ..................................................................................... 10
1. Pengertian simplisia ............................................................. 10
1.1. Simplisia nabati ........................................................... 10
1.2. Simplisia hewani ......................................................... 11
viii
1.3. Simplisia pelikan atau mineral .................................... 11
2. Pengumpulan ....................................................................... 11
3. Perajangan ........................................................................... 11
4. Pengeringan .......................................................................... 12
5. Penyimpanan ....................................................................... 13
C. Penyarian ..................................................................................... 13
1. Pengertian penyarian ............................................................ 13
2. Ekstraksi .............................................................................. 14
2.1. Perkolasi ...................................................................... 15
2.2. Refluks ........................................................................ 15
2.3. Soxhlet ........................................................................ 15
2.4. Digesti ......................................................................... 15
2.5. Infus ............................................................................ 15
2.6. Dekok .......................................................................... 15
2.7. Maserasi ...................................................................... 15
3. Pelarut ................................................................................. 16
D. Uji toksisitas ............................................................................... 17
1. Pengertian toksisitas ............................................................. 17
1.1. Uji toksisitas akut ........................................................ 18
1.2. Uji toksisitas subkronis ............................................... 18
1.3. Uji toksisitas kronis ..................................................... 19
2. Toksisitas akut ...................................................................... 19
E. Organ Sasaran .............................................................................. 24
1. Hati ....................................................................................... 24
2. Jantung .................................................................................. 25
3. Ginjal .................................................................................... 25
4. Lambung ............................................................................... 26
5. Usus ...................................................................................... 27
F. Hewan uji..................................................................................... 28
1. Mencit .................................................................................... 28
2. Sistematika Hewan Uji .......................................................... 29
3. Karateristik hewan uji............................................................ 29
4. Kondisi ruang dan pemeliharaan hewan uji .......................... 30
5. Cara dan lama pemberian zat uji ........................................... 30
6. Mengorbankan hewan uji ...................................................... 30
G. Landasan Teori ............................................................................ 31
H. Hipotesis ..................................................................................... 34
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................... 35
A. Populasi dan Sampel ................................................................... 35
B. Variabel Penelitian ..................................................................... 35
1. Identifikasi variabel utama ..................................................... 35
2. Klasifikasi variabel utama ...................................................... 36
3. Definisi operasional variabel utama ....................................... 36
C. Bahan dan Alat ............................................................................ 37
1. Alat ........................................................................................ 37
ix
2. Bahan ..................................................................................... 38
D. Jalannya Penelitian ...................................................................... 38
1. Determinasi tanaman .............................................................. 38
2. Pengambilan bahan ................................................................. 38
3. Penetapan kadar air serbuk ..................................................... 39
4. Pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih ................... 39
5. Uji bebas etanol ...................................................................... 40
6. Identifikasi senyawa ekstrak etanolik rimpang temu putih .... 40
6.1. Identifikasi flavonoid .................................................... 41
6.2. Identifikasi tanin ............................................................ 41
6.3. Identifikasi saponin ....................................................... 41
6.4. Identifikasi alkaloid ....................................................... 41
6.5. Identifikasi minyak atsiri ............................................... 41
7. Prosedur kerja ......................................................................... 42
7.1. Persiapan hewan uji ....................................................... 42
7.2. Penetapa dosis ............................................................... 42
7.3. Perlakuan hewan uji ...................................................... 42
8. Pengamatan dan pemeriksaan ................................................ 43
8.1. Perubahan perilaku (behavioral profile) ....................... 43
8.2. Perubahan pada neurological profile. ........................... 44
8.3. Perubahan pada autonomic ............................................ 44
E. Analisis Data ............................................................................... 46
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Rimpang temu putih ....................................................................... 47
1. Hasil identifikasi tanaman rimpang temu putih ...................... 47
2. Pengambilan bahan dan pembuatan serbuk ............................ 47
3. Hasil penetapan kadar air serbuk ............................................ 48
4. Hasil pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih ........... 49
5. Hasil uji bebas etanol .............................................................. 50
6. Hasil identifikasi kandungan kimia ......................................... 50
B. Hasil uji toksisitas akut .................................................................. 52
1. Hasil uji efek toksistas akut ekstrak rimpang temu putih ..... 53
2. Hasil perhitungan berat badan mencit putih betina ................ 54
3. Hasil perhitungan LD50 .......................................................... 55
4. Hasil penimbangan berat organ .............................................. 56
5. Hasil pemeriksaan organ secara makroskopis ........................ 58
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan.................................................................................... 59
B. Saran ............................................................................................. 59
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 60
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1. Skema pembuatan ekstrak etanol temu putih .......................................... 40
2. Skema pengujian ekstrak etanol rimpang temu putih. ............................ 45
xi
DAFTAR TABEL
1. Hubungan tanda-tanda keracunan dengan organ beserta sistem urat
saraf (Harmita &Radji 2004). ..................................................................... 21
2. Klasifikasi zat kimia berdasarkan toksisitas relatif (Lu 1995). .................... 22
3. Kriteria hewan uji ......................................................................................... 29
4. Hasil penetapan kadar air dalam serbuk rimpang temu putih ...................... 48
5. Hasil pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih ................................ 50
6. Hasil uji bebas etanol ekstrak rimpang temu putih ...................................... 50
7. Hasil identifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanolik rimpang temu
putih secara kualitatif .................................................................................. 51
8. Gejala toksik yang teramti ........................................................................... 53
9. Hasil rata-rata berat badan .......................................................................... 55
10. Hasil jumlah kematian................................................................................ 56
11. Hasil rata-rata indeks massa organ hewan uji ............................................ 56
xii
DAFTAR PERSAMAAN
Halaman
1. Metode Weil,CS . ............................................................................................ 22
2. Metode Farmakope III..................................................................................... 22
3. Metode grafik probit ....................................................................................... 23
4. Penentuan nilai LD50 ....................................................................................... 43
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1. Hasil determinasi tanaman rimpang temu putih........................................... 63
2. Surat keterangan hewan uji .......................................................................... 64
3. Gambar rimpang temu putih ........................................................................ 65
4. Alat sterling bidwel dan mesin penggiling .................................................. 66
5. Ekstrak rimpang temu putih dan uji bebas etanol ........................................ 67
6. Uji identifikasi ekstrak rimpang temu putih ............................................... 67
7. Perlakuan hewan uji ..................................................................................... 70
8. Gambar organ hewan uji .............................................................................. 71
9. Hasil persentase rendemen berat kering terhadap berat basah rimpang
temu putih .................................................................................................... 74
10. Hasil rendemen ekstrak etanolik rimpang temu putih .............................. 74
11. Hasil penetapan kadar air serbuk rimpang temu putih ............................... 75
12. Perhitungan volume pemberian.................................................................. 75
13. Hasil penimbangan berat badan mencit putih betina ................................. 77
14. Hasil penimbangan berat organ mencit putih betina .................................. 78
15. Hasil perhitungan indeks organ mencit putih betina .................................. 79
16. Contoh perhitungan indeks massa organ mencit ........................................ 80
17. Pengamatan gejala toksisitas ...................................................................... 81
18. Hasil uji statistik berat badan hari ke-1 ...................................................... 85
19. Hasil uji statistik berat badan hari ke-7 ...................................................... 87
20. Hasil uji statistik berat badan hari ke-14 .................................................... 88
xiv
21. Hasil uji statistik indeks berat organ ginjal ................................................ 90
22. Hasil uji statistik indeks berat organ hati ................................................... 92
23. Hasil uji statistik indeks berat organ jantung ............................................. 93
24. Hasil uji statistik indeks berat organ limfa ................................................. 95
25. Hasil uji statistik indeks berat organ paru .................................................. 97
26. Hasil uji statistik indeks berat organ usus .................................................. 98
27. Hasil uji statistik indeks berat organ lambung ........................................... 100
xv
INTISARI
MUFIDAH, H.I., 2016. UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOLIK
RIMPANG TEMU PUTIH (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe) TERHADAP
MENCIT PUTIH BETINA, SKRIPSI, FAKULTAS FARMASI,
UNIVERSITAS SETIA BUDI, SURAKARTA.
Tanaman rimpang temu putih (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe)
mengandung beberapa senyawa yang berkhasiat, salah satunya sebgai obat
kanker, namun belum ada penelitian untuk meneliti standart keamanan ekstrak
rimpang temu putih. Penelitian ini bertujuan untuk melihat efek toksisitas akut
terhadap mencit betina.
Uji toksisitas akut dilakukan dengan metode fixed dose dengan
menggunakan hewan uji mencit betina sebanyak 30 ekor yang dibagi menjadi 6
kelompok, yaitu kontrol negatif (CMC 0,5%), dosis I (5 mg/kgBB), dosis II (50
mg/kgBB), dosis III (300 mg/kgBB), dosis IV (2000 mg/kgBB), dosis V (5000
mg/kgBB) selama 14 hari. Uji toksisitas akut ekstrak etanolik rimpang temu
putih dilakukan pada mencit dengan mengamati pengaruh ekstrak terhadap
perilaku hewan setelah pemberian dosis tunggal sediaan uji, perkembangan berat
badan, serta berat organ pada hari ke-14.
Hasil pengamatan menunjukkan setelah pemberian ekstrak pada mencit
betina sampai dosis 5000 mg/kgBB hewan uji tidak ada kematian dan efek
toksik yang bermakna, sehingga ekstrak rimpang temu putih dapat dinyatakan
aman. Dengan demikian LD50 ekstrak rimpang temu putih pada mencit lebih
besar dari 5000 mg/kgBB.
Kata kunci : toksisitas akut, Curcuma zedoaria, metode fixed dose, LD50
xvi
ABSTRACT
MUFIDAH, H.I., 2016. ACUTE TOXICITY TEST OF WHITE RHIZOME
(Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe) ETHANOLIC EXTRACT ON FEMALE
WHITE MICE, THESIS, FACULTY OF PHARMACY, SETIA BUDI
UNIVERSITY, SURAKARTA.
White rhizome (Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe) plant contains several
efficacious substances, one of which as the cancer drug, but there has been no
research to examine the security standard of rhizome extract . This study was
aimed to know the effects of acute toxicity on female mice.
Acute toxicity tests conducted with fixed dose method using 30 female
mice divided into six groups, the negative control (CMC 0.5%), the first dose (5
mg/kgBW), the second dose (50 mg/kgBW), the third dose (300 mg/kgBW), the
fourth doses (2000 mg/kgBW), and the fifth doses (5000 mg/kgBW) for 14 days.
Acute toxicity test of ethanolik rhizome extract performed on mice by observing
the influence of extract on animal behavior after single-dose administration,
weight loss, and weight of organs on the 14th day.
The result showed after the administration of extracts on female mice to
doses of 5000 mg/kgBW no mortality and significant toxic effects so rhizome
extract could be declared safe. Thus Rhizome extract LD50 in mice is greater than
5000 mg/kgBW.
Keywords: acute toxicity, Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe , fixed dose method,
LD50
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Indonesia merupakan salah satu negara yang mempunyai keanekaragaman
hayati cukup luas, dari 40.000 jenis flora yang tumbuh di dunia, 30.000
diantaranya tumbuh di Indonesia, akan tetapi baru sekitar 26% yang telah
dibudidayakan dan 74% masih tumbuh liar di hutan. Dari 26 % yang telah
dibudidayakan, sebanyak 940 jenis tanaman telah digunakan sebagai obat
tradisional (Verawati 2003). Obat tradisional adalah obat yang didapat dari bahan
alami (mineral, tumbuhan, atau hewan), yang diolah secara sederhana berdasarkan
pengalaman dan digunakan dalam pengobatan tradisional (Syamsuni 2006)
Pengobatan secara tradisional sebagian besar menggunakan ramuan yang
berasal dari tumbuh-tumbuhan baik berupa kulit, batang, kayu, daun, bunga, atau
bijinya. Agar pengobatan secara tradisional dapat dipertanggung jawabkan maka
diperlukan penelitian secara ilmiah, seperti penelitian di bidang farmakologi,
toksikologi, identifikasi, dan isolasi zat kimia aktif yang terdapat pada tumbuhan
(Dede dkk 2007).
Hakikatnya obat tradisional diteliti dan dikembangkan adalah untuk
dimanfaatkan sebagai obat untuk manusia, sehingga penggunaan obat tradisional
perlu diperhatikan dosis atau takaran saat pemberian, karena apabila dikonsumsi
secara berlebihan akan menimbulkan toksik atau racun.Keracunan bahan kimia
toksik dapat akut dan kronis.Pada keracunan akut, dapat timbul secara mendadak
2
2
dan berlangsung sangat cepat.Sehingga dapat dilihat atau dirasakan dalam waktu
jangka pendek. Sedangkan pada keracunan kronis, zat toksik akan masuk ke
dalam tubuh sedikit demi sedikit dalam jangka waktu yang lama. Waktu tersebut
tidak dapat ditentukan karena tergantung dari zat toksik yang masuk ke dalam
tubuh (Sumardjo 2009).
Salah satu tanaman yang banyak digunakan sebagai obat tradisional adalah
rimpang temu putih. Rimpang temu putih merupakan salah satu tanaman temu-
temuan yang mempunyai tinggi mencapai 100 cm, dan memiliki rasa tajam dan
pahit (Supriadi dkk 2001). Sedangkan menurut Muhlisah (1999) temu putih
merupakan tanaman semak yang berumur tahunan, tidak merumpun, tetapi hanya
beberapa pokok batang yang tumbuh jarang.
Rimpang temu putih berkhasiat untuk mengobati pembengkakan ginjal,
dapat merangsang pengeluaran gas dari perut, mengurangi rasa sakit saat haid, dan
dapat digunakan sebagi obat asma. Untuk pengobatan luar rimpang temu putih
dapat bermanfaat untuk mengobati mematangkan bisul, mengobati memar, dan
sebagai bahan baku untuk kosmetika (Mursito 2001).
Peningkatan penggunaan temu putih pada masyarakat terjadi akibat
adanya informasi pemasaran ekstrak atau bubuk rimpang temu putih untuk
pengobatan maupun pencegahan berbagai macam penyakit terutama untuk kasus
tumor dan kanker. Selain harganya relatif murah, masyarakat menganggap temu
putih tidak akan menimbulkan efek samping negatif, sehingga lebih aman
dibandingkan menggunakan obat-obatan dari senyawa kimia murni (Handajani
2003).
3
3
Berdasarkan penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa
(curzerenone dan alismol) yang terdapat pada rimpang temu putih mampu
menginduksi apoptosis pada sel MCF-7, Ca Ski, dan HCT-116 dengan aktivasi
caspase-3 (Rahman dkk 2013). Subfraksi rimpang temu putih pada konsentrasi
0.5, 1, 2, 4, 8 ppm dapat menghambat pertumbuhan sel lestari tumor HeLa, dan K-
562, dan aktivitas antiproliferasi terbesar pada kedua jenis sel tumor terjadi pada
pemberian subfraksi pada konsentrasi 8 ppm, yaitu sel HeLa mempunyai aktivitas
penghambatan 62,45% sedangkan sel K-562 60,93% (Pinilih 2006). Salah satu
kandungan dalam rimpang temu putih adalah minyak atsiri yang memiliki
densitas sebesar 0,88 g/ml, kadar minyak sebesar 0,067 % b/b, dan bersifat toksik
terhadap larva udang Artemia salina Leach dengan niali LC50 sebesar 19,96 ppm
(Rita dkk 2011). Selain itu, minyak atsiri rimpang temu putih efektif sebagai
larvasida dalam membunuh larva nyamuk Aedes Aegypti instar IV awal. Besar
konsentrasi minyak atsiri rimpang temu putih yang efektif membunuh 50%
populasi larva uji (LC50) adalah 54,5 ppm (Sembiring & Suarnella 2012).
Penelitian diatas membuktikan bahwa rimpang temu putih memiliki
kandungan yang berkhasiat dan dapat digunakan sebagai salah satu obat alternatif.
Sebelum rimpang temu putih diedarkan secara luas sebaiknya diperlukan bukti
secara ilmiah mengenai khasiat dan keamanannya agar dapat dikonsumsi dan
tidak menimbulkan efek berbahaya bagi masyarakat, serta kedepannya dapat
dikembangkan menjadi sebuh produk yang praktis dapat dikonsumsi oleh
masyarakat.
4
4
Berdasarkan hal diatas, maka diperlukan penelitian uji toksisitas ekstrak
etanolik rimpang temu putih.Uji toksisitas terdiri atas 2 jenis yaitu uji toksisitas
non spesifik (akut, subakut/subkronis, kronis), dan uji toksisitas spesifik
(teratogenik, mutagenik, dan karsinogenik) (Loomis 1978).Pada penelitian ini uji
toksisitas yang dilakukan adalah salah satu dari uji toksisitas non spesifik yaitu
toksisitas akut. Uji toksisitas akut adalah uji toksisitas suatu senyawa yang
diberikan dalam dosis tunggal pada hewan percobaan, yang diamati selama 24
jam dan dilanjutkan selama 7-14 hari. Tujuan utama dari uji toksisitas akut adalah
untuk menentukan LD50.LD50 merupakan suatu dosis yang dapat menimbulkan
kematian pada 50% hewan uji (Lu 1995).
Prinsip dari uji toksisitas akut yaitu pemberian secara oral suatu zat dalam
beberapa tingkatan dosis kepada beberapa kelompok hewan uji.Hewan uji yang
digunakan adalah mencit betina, dipilih mencit betina karena sedikit lebih sensitif
dibandingkan mencit jantan.Penilaian uji toksisitas akut yang ditentukan adalah
dari kematian hewan uji sebagai parameter akhir, serta hewan yang mati dan
hidup selama percobaan diotopsi untuk dievaluasi gejala toksisitas dan
selanjutnya dilakukan pengamatan secara makropatologi pada setiap organ
(BPOM 2014).
B. Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang penelitian diatas, didapatkan permasalahan
sebagai berikut: pertama, apakah ekstrak etanolik rimpang temu putih mempunyai
efek toksik terhadap mencit putih betina?
5
5
Kedua,berapakah harga lethal dose (LD50) pada mencit putih betina setelah
pemberian ekstrak etanolik rimpang temu putih?
Ketiga, bagaimana pengaruh ekstrak etanolik rimpang temu putih terhadap
berat badan dan indeks organ mencit putih betina?
C. Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan, pertama, untuk mengetahui ada tidaknya efek
toksik akut pada ekstrak etanolik rimpang temu putih terhadap mencit putih
betina.
Kedua, untuk mengetahui hargalethal dose (LD50) pada mencit putih
betina setelah pemberian ekstrak etanolik rimpang temu putih.
Ketiga, untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanolik rimpang temu putih
terhadap berat badan dan indeks organ pada mencit putih betina
D. Kegunaan Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi serta
pengetahuan bagi masyarakat bahwa rimpang temu putih dapat digunakan
sebagai obat tradisional secara aman. Dapat digunakan sebagai acuan untuk
penelitian selanjutnya.Dapat meningkatkan perkembangan ilmu pengetahuan di
bidang farmasi, khususnya obat tradisional.
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Tanaman Rimpang Temu Putih
1. Tanaman rimpang temu putih
Kunyit (Curcuma domstica Roxb.) merupakan salah satu kerabat dekat dari
temu putih (Handajani 2003).Temu putih merupakan tanaman semak yang
berumur tahunan, tidak tumbuh merumpun, tetapi hanya memiliki beberapa pokok
batang yang tumbuh jarang.Rimpang temu putih merupakan salah satu tanaman
temu-temuan yang mempunyai tinggi mencapai 100 cm, dan memiliki rasa tajam
dan pahit (Supriadi dkk 2001).Temu putih hampir sama dengan temulawak
bedanya adalah pada rimpang temu putih berwarna putih, dan helaian daun
berwarna merah gelap (Muhlisah 1999).
2. Sistematika tanaman temu putih
Kedudukan dalam sistematika tumbuhan (taksonomi), tanaman temu putih
mempunyai klasifikasi sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledoneae
Bangsa : Zinguberales
Suku : Zingiberaceae
Marga : Curcuma
Jenis : Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe (Depkes 1993).
7
7
3. Nama daerah
Tanaman temu putih memiliki nama lain yaitu kunyit putih, koneng bodas
(Jawa). Sinonim dari tanaman temu putih adalah C. zerumbet Roxb., Costus
nigricans Blanco., Co. luteus Blanco., Amomum zedoaria Berg., Roscoea lutea
Hassk., R. nigro-cillita Hassk (Dalimartha 2003). Selain itu terdapat nama lain
dari temu putih yaitu kunirputih (Sunda), temu putri (Jakarta), konyek pote, konce
pet atau konce pete (Madura), temu rapet (Pantai Sumatra Timur) (Muhlisah
1999).
4. Morfologi tanaman
Temu putih dapat ditemukan tumbuh liar pada tempat terbuka yang
tanahnya lembab dengan ketinggian 0-1.000 m dpl.Tanaman banyak di temukan
di daerah Jawa barat, Jawa Tengah, Sumatera, Ambon, hingga Irian. Selain itu
juga dibudidayakan di India, Cina, Madagaskar, Filiphina, dan Malaysia
(Dalimartha 2003).
Tinggi tanaman ini dapat mencapai 2 meter.Batang dari temu putih
merupakan batang semu yang dibentuk dari pelepah daun yang tumbuh dari
rimpang, bentuknya silindris, lunak, dan berwarna hijau pucat. Daun tunggal,
bertangkai panjang, lonjong, ujung meruncing, pangkal daun tumpul, panjang 1,6-
1 m, lebar 10-20 cm, pertulangan menyirip, tipis, berbulu halus, berwarna hijau
bergaris ungu. Bunga majemuk berbentuk tabung, berada diketiak daun, panjang
7-15 cm, benang sari melekat pada makhkota, berwarna putih, bunga mekar
secara bergiliran (Dalimartha 2003, Depkes 1993). Buahnya berbentuk kotak,
bulat memiliki diameter 2-4 mm, dan berwarna hijau.Biji pada temu putih
8
8
berbentuk bulat, dan berwarna hitam.Temu putih memiliki akar serabut, dan
berwarna putih (Depkes 1993).
Rimpang induk pada temu putih berbentuk jorong membulat dan
mengeluarkan rimpang cabang yang cukup banyak dan tumbuh ke arah samping,
ukurannya kecil, bentuknya memanjang, dan mudah dipatahkan.Warna rimpang
adalah putih dengan hati yang berwarna kuning muda.Bentuk buah bundar,
berserat, segitiga, kulit lunak dan tipis (Dalimartha 2003).
5. Kandungan kimia
Rimpang temu putih mengandung 1-2,5 % minyak menguap dengan
komposisi utama sesquiterpen. Minyak menguap tersebut seperti curzerenone,
cuzerene, pyrocuruzerenone, curcumin, curcumemone, epicurcumol,curcumol,
isocurcumol, procurcumenol, dehydrocurdione, furanodienone, isofuranodiene,
zederone, dan curdione.Selain itu juga mengandung flavonoid, sulfur, resin,
tepung, dan sedikit lemak, serta curcumol dan curdine yang berkhasiat antikanker
(Dalimartha 2003).Menurut Depkes (1993) rimpang dan daun temu putih
mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol.
Berdasarkan penelitian Rita, dkk. (2010) tentang isolasi, identifikasi, dan
uji aktivitas antibakteri senyawa golongan triterpenoid pada rimpang temu putih
didapatkan hasil bahwa komponen senyawa didalam ekstrak kental klorofrom
rimpang temu putih adalah senyawa golongan triterpenoid asam karboksilat
dengan karakteristik gugus fungsi: -OH terikat, -CH, C=O asam karboksilat, -
C=C, -CH2, -CH3, dan C-O alkohol. Sedangkan hasil analisis dengan GC-MS
menunjukkan isolat aktif ekstrak n-heksana temu putih mengandung asam
9
9
benzoat, tetradekana, heksadekana, 3-metilheptadekana, oktadekana, 2-
metileikosan, normal-dokosan, dan heneikosan (Rita dkk 2012). Selain itu, pada
minyak atsiri terdiri dari 19 senyawa dengan 8 senyawa mayor antara lain kamfer,
beta pinen, 1,3,3-trimetil-sineol, kamfor, 1-etenil-1-metil-2,4-bis (1-metiletenil)
sikloheksana, kurzeren, germakron, dan velleral (Rita dkk 2011). Pada penelitian
Parampoin & Gritsanapan (2009) menunjukkan bahwa dengan metode HPLC
menggunakan ekstrak rimpang temu putih dengan pelarut etanol 70%
mengandung kurkumin, demethoxycurcumin, dan bisdemethoxycurcumin, akan
tetapi dilihat dengan metode TLC dan HPLC menunjukkan komponen utama dari
rimpang temu putih adalah demethoxycurcumin, dan unsur utama kedua adalah
kurkumin.
6. Kegunaan Temu Putih
Rimpang temu putih bermanfaat sebagai antikanker, antiradang,
melancarkan aliran darah, peluruh haid, peluruh kentut (Dalimartha 2003).Selain
itu temu putih juga bermanfaat untuk merangsang gerakan usus (karminatif),
menghangatkan badan, merangsang nafsu makan, dapat sebagai stimultan,
memperbaiki saluran pencernaan, tumor, wasir, perut kembung, dll (Rukmana
2004).Untuk pengobatan luar rimpang temu putih dapat bermanfaat untuk
mengobati mematangkan bisul, mengobati memar, dan sebagai bahan baku untuk
kosmetika (Mursito 2001).
Peningkatan penggunaan temu putih pada masyarakat terjadi akibat
adanya informasi pemasaran ekstrak atau bubuk rimpang temu putih untuk
pengobatan maupun pencegahan berbagai macam penyakit terutama untuk kasus
10
10
tumor dan kanker (Handajani 2003).Melalui uji klinis terbukti bahwa rimpang
temu putih mampu mengurangi asma dan sebagai obat anti kanker (Mursito
2007).Menurut Rahman dkk (2013) senyawa (curzerenone dan alismol)
menginduksi apoptosis pada sel MCF-7, Ca Ski, dan HCT-116 dengan aktivasi
caspase-3. Selain itu, beberapa penelitian lain menunjukkan bahwa kurkumin
merupakan bahan aktif dalam rimpang temu putih yang bersifat sitotoksik
terhadap sel kanker, dan pada ekstrak etanol temu putih dapat menghambat
pertumbuhan tumor paru pada mencit (Murwanti dkk 2004), dan juga mampu
menghambat sel kanker ovarium manusia (Syu dkk 1998).
B. Simplisia
1. Pengertian simplisia
Simplisia adalah bahan alami yang dapat digunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga kecuali dinyatakan lain (Depkes
1995).Istilah simplisia dipakai untuk menyebutkan bahan-bahan obat alam yang
masih berada dalam wujud aslinya atau belum mengalami perubahan (Gunawan &
Mulyani 2004).Berdasarkan hal tersebut simplisia dibagi menjadi tiga golongan
yaitu berupa simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan atau
mineral.
1.1 Simplisia nabati. Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa
tanaman utuh, pada bagian tanaman atau eksudat tanaman. Eksudat tanaman
adalah isi sel yang spontan keluar dari tanaman atau isi sel dengan cara tertentu
11
11
dikeluarkan dari selnya atau zat nabati lainnya dengan cara tertentu dipisahkan
dari tanamannya dan belum berupa zat kimia murni (Depkes 1995).
1.2 Simplisia hewani. Simplisia hewani adalah simplisia yang berupa
hewan utuh bagian hewan atau zat-zat berguna yang dihasilkan oleh hewan dan
belum berupa zat kimia murni (Depkes1995). Misalnya adalah minyak ikan
(Oleum iecoris asseli), dan madu (Mel depuratum) (Gunawan & Mulyani 2004).
1.3 Simplisia pelikan atau mineral. Simplisia pelikan atau mineral
adalah simplisia yang berupa bahan-bahan pelikan (mineral) yang belum diolah
atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum berupa zat kimia murni
(Depkes 1995). Misalnya adalah serbuk seng dan serbuk tembaga (Gunawan &
Mulyani 2004).
2. Pengumpulan
Simplisia yang digunakan dalam penelitian ini adalah simplisia nabati
yang menggunakan rimpang.Pemanenan rimpang dilakukan pada awal musim
kemarau (Gunawan & Mulyani 2004). Karena pada suasana basah akan
menurunkan mutu dan warnanya akan hilang serta saat pengeringan warnanya
akan berubah (Depkes 1985b).
3. Perajangan
Beberapa jenis bahan simplisia perlu mengalami proses perajangan,
perajangan bahan simplisia dilakukan untuk mempermudah proses pengeringan,
pengepakan, dan penggilingan. Perajangan dapat dilakukan dengan pisau, atau
alat mesin perajang khusus sehingga diperoleh irisan tipis atau potongan dengan
ukuran yang dikehendaki (Depkes 1986). Tujuan dari perajangan adalah untuk
12
12
memperluas permukaan bahan baku karena semakin luas permukaan maka bahan
baku akan cepat kering (Gunawan & Mulyani 2004).
4. Pengeringan
Pengeringan simplisia bertujuan untuk mendapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama, dan untuk
mengurangi kadar air dan menghentikan reaksi enzimatik untuk mencegah
penurunan mutu atau perusakan simplisia. Pengeringan simplisia dapat dilakukan
dengan menggunakan sinar matahari atau menggunakan suatu alat pengering. Hal-
hal yang perlu diperhatikan dalam proses pengeringan adalah suhu pengeringan,
kelembapan udara, aliran udara, waktu pengeringan, dan luas permukaan bahan
(Depkes 1985b).
Proses pengeringan pada simplisia bertujuan untuk menurunkan kadar air
sehingga bahan tersebut tidak mudah ditumbuhi kapang dan bakteri,
menghilangkan aktivitas enzim yang dapat menguraikan lebih lanjut kandungan
aktif yang terdapat pada bahan, memudahkan dalam hal pengelolaan proses
selanjutnya (ringkas, mudah disimpan, tahan lama, dan sebagainya).Terdapat
beberapa faktor yang dapat mempengaruhi dalam pengeringan yaitu waktu
pengeringan, suhu pengeringan, kelembapan udara, ketebalan bahan yang
dikeringkan, sirkulasi udara, dan luas permukaan bahan (Gunawan & Mulyani
2004).
Cara pengeringan ditempat teduh adalah dengan cara bahan disebarkan
rata diatas nampan lemari atau kotak kemudian dimasukkan kedalam oven dengan
suhu yang telah ditentukan atau dengan cara meletakkan dibawah atap rumah agar
13
13
terlindung dari cahaya matahari secara langsung. Untuk bahan berupa rimpang
sebelum dijemur dibawah matahari harus dirajang terlebih dahulu untuk
memperluas luas permukaan (Gunawan & Mulyani 2004).
5. Penyimpanan
Proses penyimpanan simplisia perlu diperhatikan beberapa hal, seperti cara
pengepakan, pembungkusan, dan pewadahan, persyaratan tempat gudang
simplisia, cara sortasi, cara pemeriksaan mutu, serta cara pengawetannya.
Penyebab utama kerusakan dari simplisia adalah air dan kelembaban.Kadar air
simplisia yang disimpan perlu diperhatikan dan dijaga. Karena apabila kadar air
pada simplisia tinggi akan mengakibatkan tumbuhnya kapang atau
mikroorganisme lain yang dapat menyebabkan perubahan kimia pada senyawa
aktif dan menurunnya mutu simplisia tersebut (Depkes 1985b). Apabila tidak
dinyatakan lain, simplisia disimpan di tempat terlindung dari sinar matahari dan
pada suhu kamar. Untuk simplisia yang mudah menyerap air harus disimpan
dalam wadah tertutup rapat yang berisi kapur tohor (Depkes 1995).
C. Penyarian
1. Pengertian penyarian
Penyarian merupakan peristiwa pemindahan massa. Zat aktif yang berada
dalam sel ditarik oleh cairan penyari sehingga zat aktif akan berada dalam cairan
penyari tersebut. Dalam proses penyarian dipengaruhi oleh derajat kehalusan
serbuk, perbedaan konsentrasi yang terdapat mulai dari pusat butir serbuk
simplisia sampai ke permukaannya (Gunawan & Mulyani 2004).
14
14
Pemilihan cairan penyari harus mempertimbangkan beberapa faktor
diantaranya adalah murah dan mudah diperoleh, stabil secara fisika dan kimia,
bereaksi netral, tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar, selektif yaitu
hanya menarik zat yang berkhasiat yang dikehendaki, tidak mempengaruhi zat
berkhasiat, dan diperbolehkan dalam peraturan (Gunawan & Mulyani 2004).
2. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat
aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani dengan menggunakan pelarut
yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan serbuk
yang tersisa diperlukan sedemikian sampai memenuhi baku yang ditetapkan
(Depkes 1985a). Ekstrasi adalahpenarikan zatpokok yang diinginkan dari bahan
mentah obat dengan menggunakan pelarut yang dipilih dimana zat yang
diinginkan larut. Bahan mentah obat berasal dari tumbuh-tumbuhan atau hewan
tidakperlu diproses lebihlanjut kecuali dikumpulkan dan dikeringkan. Zat aktif
dari tanaman obat yang secara umum mempunyai sifat kimia yang sama,
mempunyai sifat kelarutan yang sama dan dapat diekstraksi secara simultan
dengan pelarut tunggal atau campuran.Proses ekstraksi mengumpulkan zat
aktifdari bahan mentah obatdan mengeluarkannya dari bahan sampingan yang
tidak diperlukan. Metode ekstraksi dilakukan berdasarkan persamaan faktor sifat
dari suatu bahan mentah atau simplisia yang disesuaikan dengan macam metode
ekstraksi yang digunakan untuk memperoleh ekstrak yang sempurna atau
mendekati sempurna (Ansel 1989).
15
15
2.1. Perkolasi. Perkolasi merupakan cara penyarian yang dilakukan
dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi
terus menerus dilakukan sampai diperoleh ekstrak. Umunya menggunakan
temperatur ruangan dan pelarut yang digunakan selalu baru (Depkes 1986).
2.2. Refluks. Refluks merupakan ekstraksi dengan pelarut pada
temperatur titik didihnya selama waktu tertentu, dan jumlah pelarut terbatas yang
relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan
proses pada residu pertama sampai 3-5 kali.
2.3. Soxhlet. Soxklet merupakan ekstraksi menggunakan pelarut yang
selalu baru dengan menggunakan alat khusus, sehingga terjadi ekstraksi kontinu
dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
2.4. Digesti. Digesti merupakan maserasi kinetik (dengan pengadukan
kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu
secara umum dilakukan pada temperatur 40-50°C.
2.5. Infus. Infus merupakan sediaan cair yang dibuat dengan menyari
simplisia dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit. Infudasi adalah proses
penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang
larut dalam air dari bahan-bahan nabati (Depkes 1986).
2.6. Dekok. Dekok merupakan infus pada waktu yang lebih lama ≥ 30°C
dengan temperatur sampai titik didih air (Depkes 1986).
2.7. Maserasi. Maserasi merupakan salah satu metode ekstraksi cair
padat dengan cara yang sederhana. Metode maserasi digunakan untuk penyarian
simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari.
16
16
Keuntungan dari metode ini adalah carapengerjaan dan peralatan yang digunakan
sederhana dan peralatannya sederhana, sedangkan kerugiaannya adalah
pengerjaan yang lama dan penyarian yang kurang sempurna (Depkes 1986).
Pada penelitian ini metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi.
Maserasi dilakukan dengan cara 10 bagian simplisia dengan derajat halus yang
cocok dimasukkan kedalam sebuah bejana ditambahkan 75 bagian penyari
kemudian ditutup (Anief 2000). Rendeman sebaiknya dikocok berulang-ulang
minimal 3 kali sehari hal ini bertujuan untuk mempercepat konsentrasi bahan
ekstraksi menjadi seimbang.Waktu lamanya maserasi ± 4-10 hari agar bahan
kandungan simplisia dari sel yang rusak yang terbentuk saat penghalusan dapat
larut dan bahan kandungan dalam sel masih tetap utuh.Setelah maserasi selesai
dilanjutkan dengan memeras rendaman menggunakan kain peras.Cairan maserasi
dan cairan yang diperoleh dari pemerasan disatukan dengan mencuci sisa perasaan
dengan bahan ekstraksi diberikan pada kandungan atau jumlah yang telah
diperoleh. Proses pencucian tersebut dilakukan untuk memperoleh sisa bahan
ekstraktif dan untuk menyeimbangkan kembali kehilangan saat penguapan yang
terjadi pada penyarian dan pengepresan, dan hasil ekstraksi disimpan dalam
kondisi dingin kemudian cairannya dituang dan disaring (Voigt 1994).
3. Pelarut
Penggunaan pelarut untuk ekstraksi harus disesuaikan dengan kelarutan
dari kandungan bahan simplisia.Pelarut harus masuk ke dalam simplisia, dan
membran simplisia yang kondisinya harus diubah terlebih dahulu menjadi kering
dan mengkerut, sehingga bahan pelarut dapat masuk ke dalam simplisia.Stabilitas
17
17
zat aktif tumbuhan merupakan sifat yang penting untuk memperoleh sediaan obat
yang tepat, sehingga banyak zat aktif tumbuhan yang larut dalam air atau alkohol
karena kepolarannya (Voigt 1994).
Pelarut organik jarang digunakan dalam penyarian, kecuali dalam proses
penyarian tertentu. Dalam proses penyarian menurut Farmakope Indonesia
menetapkan cairan penyari adalah air, etanol, air, etanol-air, atau eter (Gunawan
& Mulyani 2004).
Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 70%, karena
pelarut etanol 70% bersifat universal, sehingga dapat menarik hampir semua
golongan senyawa pada rimpang temu putih. bab dapat melarutkan alkaloid basa,
minyak menguap, glikosida saponin, glikosida flavonoid, kurkumin, mukarin,
antrakuinon, steroid, damar, dan klorofil, sedangkan lemak, saponin, dan tanin
hanya sedikit yang larut (Depkes 1986).
D. Uji toksisitas
1. Pengertian toksisitas
Uji toksisitas merupakan suatu uji yang dilakukan untuk mendeteksi efek
toksik suatu zat pada sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis-respon
yang khas dari sediaan uji (BPOM 2014). Sebelum uji toksisitas dilakukan,
sebaiknya telah ada data tentang identifikasi, sifat obat, dan rencana
penggunaannya karena data ini dapat digunakan untuk mengarahkan percobaan
toksisitas yang akan dilakukan untuk meneliti berbagai efek yang berhubungan
dengan cara dan masa pemberian suatu sediaan obat (Harmita & Radji 2004).
18
18
Uji toksisitas terdiri atas dua jenis, yaitu uji toksisitas spesifik, dan uji
toksisitas non spesifik.Uji toksisitas spesifik dirancang untuk mengevaluasi
dengan rinci tipe toksisitas secara khusus melalui uji teratogenik, uji mutagenik,
dan uji karsinogenik. Sedangkan uji toksisitas non spesifik dirancang untuk
mengevaluasi keseluruhan efek umum suatu obat pada hewan uji melalui uji
toksisitas akut, sub akut/ sub kronis, dan kronis.(Loomis 1978).
1.1 Uji toksisitas akut. Ketoksikan akut merupakan derajat efek toksik
suatu senyawa yang terjadi dalam waktu singkat (7-14 hari) setelah pemberian
dalam dosis tunggal. Tujuan dari uji ketoksikan akut adalah untuk mendeteksi
toksisitas intrinsik suatu zat, menentukan organ sasaran, kepekaan spesies,
memperoleh informasi bahaya setelah pemaparan suatu zat secara akut,
memperoleh informasi awal yang dapat digunakan untuk menetapkan dosis,
merancang uji toksisitas selanjutnya, dan memperoleh nilai LD50 (LD50
merupakan besar dosis yang dapat menyebabkan kematian (letal dose) pada 50%
hewan uji (BPOM 2014). Evaluasi yang dilakukan tidak hanya mengenai LD50,
tetapi juga terhadap kelainan tingkah laku, stimulasi atau depresi sistem saraf
pusat (SSP), aktivitas motorik, dan pernafasan pada tikus untuk mendapatkan
gambaran tentang sebab kematian (Ganiswara 1995).
1.2 Uji toksisitas subkronis. Ketoksikan subkronis merupakan uji
ketoksikan suatu senyawa yang diberikan dengan dosis berulang pada hewan uji
tertentu, selama kurang lebih tiga bulan. Tujuan dari toksisitas subkronis adalah
mengevaluasi dan menggolongkan segala efek senyawa apabila senyawa
diberikan berulang terhadap hewan uji, uji toksisitas sub kronis dapat memberikan
19
19
informasi tambahan yang dapat digunakan dalam merancang uji toksisitas
kronis(Loomis 1978).
1.3 Uji toksisitas kronis. Ketoksikan kronis disebut juga dengan
ketoksikan jangka panjang karena penelitiannya dilakukan secara berulang-ulang
selama masa hidup hewan uji, misalnya adalah 18 bukan untuk mencit, 24 bulan
untuk tikus, dan 7-10 tahun untuk anjing dan monyet. Hewan uji yang digunakan
adalah hewan uji yang memiliki satu spesies atau lebih, kecuali dinyatakan lain,
akan tetapi dalam penelitian mencit tidak digunakan karena ukurannya yang
sangat kecil.Tujuan dari uji toksisitas kronis adalah untuk menilai keamanan atau
resiko ketoksikan pada tingkat dosis lazim, dan untuk mengetahui potensial
karsinogenik suatu senyawa (Loomis 1978).
2. Toksisitas akut
Toksisitas akut merupakan keadaan dimana terdapat efek toksik/racun
yang muncul dalam waktu singkat setelah pemberian zat dalam dosis tunggal atau
berulang.Tujuan utama dari uji toksisitas akut adalah untuk menentukan
LD50.Selain itu uji toksisitas akut dapat menunjukkan organ sasaran yang
mungkin dirusak dan efek toksik spesifiknya, serta memberikan petunjuk tentang
dosis yang sebaiknya digunakan dalam pengujian yang lebih lama.Prinsip dari uji
ketoksikan akut yaitu pemberian secara oral suatu zat dalam beberapa tingkatan
dosis kepada beberapa kelompok hewan uji, penilaian ditentukan dari kematian
hewan uji sebagai parameter akhir, serta hewan yang mati dan hidup selama
percobaan diotopsi untuk dievaluasi gejala toksisitas dan selanjutnya dilakukan
20
20
pengamatan secara makropatologi pada setiap organ (BPOM 2014, Harmita &
Radji 2004 ).
Salah satu faktor yang dapat berpengaruh dalam pengujian toksisitas akut
yaitu faktor lingkungan.Faktor lingkungan tersebut diantaranya adalah tempat
pemeliharaan hewan uji yang dapat mempengaruhi LD50 suatu bahan kimia, suhu
lingkungan yang dapat mempengaruhi efek toksik, dan tingginya kelambapan
relatif yang dapat meningkatkan toksisitas akut, sehingga LD50 lebih rendah (Lu
1995).Hal-hal tersebut berpengaruh pada faktor-faktor terhadap LD50, sehingga
kondisi saat percobaan dilaksanakan harus dicatat dan dilaporkan (Harmita &
Radji 2004).
Data kualitatif dari uji toksisitas akut adalah gejala klinis dan efek toksik
dari senyawa uji.Dalam pengamatan dan pemeriksaan uji ketoksikan akut yang
perlu diperhatikan adalah tanda-tanda ketoksikan harus dicatat, jumlah hewan
yang mati dan waktu kematian harus diamati untuk memperkirakan LD50, jangka
waktu pengamatan harus cukup panjang karena untuk mengetahui efek yang
muncul lambat.Jangka waktu pengamatan yang biasa dilakukan adalah 7-14 hari
(Lu 1995).Otopsi menyeluruh harus dilaksanakan pada setiap hewan yang mati
dan beberapa hewan yang tetap hidup.Otopsi digunakan sebagai informasi tentang
organ sasaran terutama ketika hewan uji tidak mengalami kematian setelah
pemberian dosis. Gejala klinis yang timbul selama masa uji pada hewan uji secara
luas dapat berupa gangguan pada syaraf otonom, syaraf otot, perilaku, perasa,
urat, darah pada jantung, mata, saluran pencernaan, dan kulit yang secara rinci
dijelaskan dalam tabel 2. (Harmita & Radji 2004).
21
21
Tabel 1. Hubungan tanda-tanda keracunan dengan organ beserta sistem urat saraf
(Harmita &Radji 2004).
Sistem Tanda-tanda ketoksikan
Syaraf Otonom Exopthalmos (mata memerah), hidung berlendir, liur keluar,
mencret, sering kencing, piloereksi dan relaxed nictating
membrane.
Perilaku Kurang tenang, gelisah, posisi duduk kepala mendongak,
memandang kosong ke depan, kepala menunduk, depresi
berat, kaki menggaruk-garuk, terengah-engah, mudah
terganggu, sikap bermusuhan agresif maupun defensif,
ketakutan, bingung, aktivitas aneh.
Perasa / Sensory Sensitif terhadap rasa sakit, righting, kornea labirin (rongga
telingga), refleks setempat dan kiki belakang, sensitif terhadap
suara dan sentuhan, nigtamus, ponation.
Syaraf otot Aktivitas meningkat atau menurun, fasciculation, gemetar,
kejang-kejang, tidak bias digerakkan, prostation, ekor
membengkok ke bawah kemuka, kaki belakang lemah, refleks
jelek ophisthonus, kedutan, kematian.
Urat darah jantung Detak jantung naik atau turun, sianosis,
penyumbatan/gangguan urat darah jantung, pelebaran urat
jantung, pelebaran urat darah jantung, perdarahan.
Respiratory / Pernafasan Hypopnea, dyspenia, megap-megap, apnea.
Ocular / Mata Midriasis, misis, lakrimasi,, ptosis, nistagmus, siklopedia,
pulpillary light refleks.
Gastrointestinal /
Gastrourinary
Air liur keluar terus, mencret, kotoran dan air seni berdarah,
sembelit, rhinorrhea, kencing dan buang air besar tidak
terkontrol.
Cutaneous (kulit) Alopesia, piloereksi, gemetar seperti anjing badannya basah,
eritema, edema, nekrosis, (bercak-bercak), bengkak.
Data kuantitatif yang diperoleh dari uji ketoksikan akut adalah LD50.LD50
berguna untuk mengevaluasi dampak keracunan yang tidak disengaja, sebagai
perencanaan penelitian selanjutnya seperti pengujian toksisitas kronik, dan
toksisitas sub kronik, serta memberikan informasi tentang mekanisme toksisitas
22
22
(Lu 1995). Serta untuk menetapkan dosis yang akan membunuh 50% binatang dan
menentukan “slope” (kemiringan) dari kurva dosis vs respon (Harmita & Radji
2004). Berikut klasifikasi zat kimia berdasarkan toksisitas relatif (Lu 1995).
Tabel 2.Klasifikasi zat kimia berdasarkan toksisitas relatif (Lu 1995).
Kategori LD50
Super toksik 5 mg/kg atau kurang
Sangat toksik 5-50 mg/kg
Toksik 50-500 mg/kg
Cukup toksik 0,5-5 g/kg
Sedikit toksik 5-15 g/kg
Praktis tidak toksik >15 g/kg
Besaran LD50 dapat ditentukan selama uji toksisitas berlangsung
tergantung dari lama pemberian senyawa uji kepada hewan uji, waktu pemberian
senyawa uji, serta frekuensi respon pada masing-masing hewan uji.Nilai dari
LD50dapat ditentukan dengan menggunakan beberapa rumus, diantaranya sebagai
berikut:
Metode Weil, CS (Harmita & Radji 2004)
…………… (Persamaan 1)
Keterangan :
m : harga LD50
D : dosis terkecil yang digunakan
d : log r (kelipatan dosis)
f : faktor
Metode Farmakope III (Depkes 1979)
∑ ……………..……..(Persamaan 2)
23
23
Keterangan :
m : log LD50
: logaritma dosis terendah yang dapat menyebabkan jumlah kematian
100% tiap kelompok
b : beda logaritma dosis yang berurutan
pi : jumlah hean yang mati menerima dosis, i dibagi dengan jumlah hewan
seluruhnya yang menerima dosis i.
Metode grafik probit (Harmita &Radji 2004)
………………………..(Persamaan 3)
Keterangan :
y : probit = 5 (50% kematian = LD50)
bx : log dosis
Menentukan dosis dalam uji toksisitas akut menurut BPOM (2014)
terdapat dua metode, yaitu metode konvensional, dan metode fixed dose. Metode
konvensional merupakan metode yang menggunakan minimal 3 dosis yang
berbeda.Dosis terendah adalah dosis yang tertinggi tidak menimbulkan kematian,
dan dosis tertinggi adalah dosis terendah yang dapat menimbulkan kematian
100%. Bila dosis telah mencapai 5000 mg/kgBB hewan uji(pada tikus) tidak
menimbulkan kematian, maka uji tidak perlu dilanjutkan dengan menggunkan
dosis bahan uji yang lebih tinggi. Sedangkan metode fixed dose adalah metode
yang menggunakan dosis bertingkat antara lain 5, 50, 300, 2000 mg/kgBB hewan
uji (dosis dapat ditambah hingga 5000 mg/kgBB hewan uji) (BPOM 2014).
24
24
Penelitian ini dosis ditentukan menggunakan metode fixed dose.
Perhitungan dari metode ini berupa nilai perkiraan (cut off) karena tidak
memungkinkan perhitungan dari LD50yang tepat. Dalam penentuan LD50perlu
dipilih setidaknya dua kelompok dosis yang mampu menyebabkan kematian lebih
tinggi dari 0% dan lebih rendah dari 100%.Pada metode ini penggunaan jumlah
hewan uji dan dosis telah ditetapkan.Metode ini tidak hanya memperhatikan
jumlah kematian hewan uji tetapi juga memperhatikan gejala-gejala klinis
keracunan yang terjadi pada hewan uji.
E. Organ Sasaran
Pada pemeriksaan pascamati, dilakukan pada semua hewan yang mati, dan
beberapa hewan yang hidup, terutama hewan yang tampak sakit pada akhir
percobaan, hal ini dilihat secara makroskopis dengan menimbang berat
organ.Penimbangan berat organ dilakukan untuk mengetahui bila kematian tidak
segera terjadi setelah pemberian zat kimia, serta berat organ juga merupakan salah
satu indikator yang berguna untuk toksisitas.Organ yang biasa ditimbang adalah
hati, ginjal, jantung, lambung, usus (Lu 1995).
1. Hati
Hati merupakan kelenjar terbesar dalam tubuh, yang memiliki berat rata-
rata sekitar 1500 gram atau 2,5 % berat badan pada orang dewasa normal. Secara
anatomi, hati terletak di tulang rusuk ke tiga anterior di dalam rongga
abdominal.Bagian anterior pada permukaan hati dibatasi oleh lengkungan
diafragma, sedangkan posteriornya dibatasi oleh perut dan duodenum (Green
1996).
25
25
Hati berfungsi penting untuk mmpertahankan hidup dan berperan hampir
di setiap fungsi metabolik tubuh.Fungsi utama hati adalah pembentukan dan
ekskresi empedu yang meliputi metabolism garam empedu, dan metabolisme
pigmen empedu.Selain itu hatu juga berperan penting dalam metabolisme
karbohidrat, protein, lemak, penyimpanan vitamin dan mineral, metabolisme
steroid, dan detoksifikasi (Price & Wilson 2006).Pemeriksaan hati dapat
dilakukan secara makroskopik, yaitu dengan melihat warna dan penampilan,
seperti perlemakan hati atau sirosis, dan berat organ merupakan salah satu kriteria
paling peka untuk toksisitas (Lu 1995).
2. Jantung
Jantung berfungsi sebagai pompa yang mengalirkan darah ke
jaringan.Jantung memiliki empat ruangan utama yaitu atrium kiri, dan atrium
kanan, serta ventrikel kiri, dan kanan.Atrium kanan berfungsi sebagai tempat
penyimpanan darah dan sebagai penyalur darah dari vena-vena sirkulasi sistemik
ke dalam ventrikel kanan, dan kemudian ke paru-paru.Atrium kiri berfungsi untuk
menerima darah yang mengandung oksigen dari paru-paru melalui ke empat vena
pulmonalis.Ventrikel kanan menghasilkan kontraksi bertekanan rendah yang
cukup untuk mengalirkan darah ke dalam arteria pulmonalis.Ventrikel kiri
menghasilkan tekanan yang cukup tinggi untuk mengatasi tahanan sirkulasi
sistemik, dan mempertahankan aliran darah ke jaringan-jaringan perifer (Price &
Wilson 2006).
3. Ginjal
26
26
Ginjal merupakan organ vital yang berperan penting dalam
mempertahankan kestabilan lingkungan dalam tubuh. Ginjal mengatur
keseimbangan cairan tubuh, elektrolit, dan asam basa dengan cara filtrasi darah,
reabsorpsi selektif air, elektrolit, dan non elektrolit, serta mengekskresi kelebihan
sebagai urin. Ginjal juga mengeluarkan sampah metabolisme (seperti urea,
kreatinin, dan asam urat) dan zat kimia asing, mengskresi renin (untuk mengatur
tekanan darah), mengsekresi bentuk aktif vitamin D (untuk mengatur kalsium),
serta mengsekresi eritroprotein (untuk sintesis eritrosit) (Price & Wilson 2006).
Pemeriksaan ginjal dapat dilakukan secara makroskopik dapat dilakukan dengan
cara menimbang berat ginjal dan ditentukan pada akhir penelitian toksisitas akut
dan subkronis. Peebedaan berat ginjal hewan uji dengan berat ginjal hewan
pembanding akan menunjukkan lesi ginjal (Lu 1995).
4. Lambung
Secara anatomis lambung terletak pada oblik kiri ke kanan menyilang di
abdomen atas tepat di bawah diafragma.Lambung terbagi atas fundus, korpus, dan
antrum pilorikum atau pilorus.Lambung terdiri dari empat lapisan yaitu tunika
serosa atau lapisan luar, muskularis, submukosa, mukosa (Price & Wilson 2006).
Tunika serosa atau lapisan luar merupakan bagian peritoneum viseralis.Dua
lapisan peritoneum viseralis menyatu pada kurvatura minorlambung dan
duodenum dan terus memanjang ke hati membentuk omentum minus (Price &
Wilson 2006).
Muskularis yang tersusun dari tiga lapis yaitu lapisan longitudinal di bagian
luar, lapisan sirkulasi di bagian tengah, dan lapisan oblik di bagian di bagian
27
27
dalam. Berbagai macam kombinasi susunan serabut otot akan berkontraksi untuk
memcah makanan menjadi partikel-partikel yang kecil, mengaduk, dan
mencampur makanan dengan cairan lambung, kemudian mendoring kea rah
duodenum (Price & Wilson 2006).
Submukosa tersusun atas jaringan areolar longgar yang menghubungkan
lapisan mukosa dan lapisan muskularis.Jaringan ini memungkinkan mukosa
bergerak dengan gerakan peristaltic.Mukosa merupakan bagian dalam lambung
yang tersusun dari lipatan-lipatan longitudinal yang disebut rugae, sehingga
memungkinkan terjadi distensi lambung saat diisi makanan (Price & Wilson
2006)
5. Usus
Usus halus merupakan suatu tabung yang kompleks, berlipat-lipat, dan
membentang dari piloris hingga katup ileosekal.Usus halus dibagi menjadi
duodenum, jejunum, dan ileum.Panjang duodenum sekitar 25 cm mulai dari
pilorus sampai jejunum.Pemisahan duodenum dengan jejunum ditandai dengan
adanya ligamentum yang berperan sebagai ligamentum suspensorium
(penggantung).Jejunum terletak di regio midabdominalis sinistra, sedangkan
ileum terletak di region abdominalis dekstra sebelah bawah (Price & Wilson
2006).
Dinding usus halus terdiri dari 4 lapisan dasar.Peritoneum mempunyai
lapisan viseral, parietal, dan ruang yang terletak diantara lapisan-lapisan tersebut
yang dinamakan sebagai rongga peritoneum.Mesentrium merupakan bagian yang
menyongkong pembuluh darah dam limfe untuk menyuplai ke usus. Omentum
28
28
majus merupakan lapisan ganda peritoneum yang menggantung dari kurvatura
major lambung dan berjalan turun di depan visera abdomen. Omentum minus
merupakan lipatan peritoneum yang terbentang dari kurvatura minor lambung dan
bagian atas duodenum menuju hati membentuk ligamentum suspensorium
hepatogastrika dan ligamentum hepatoduodenale.Omentum biasanya mengandung
banyak lemak dan kelenjar limfe yang membantu melindungi rongga peritoneum
terhadap infeksi (Price & Wilson 2006).
F. Hewan uji
1. Mencit
Mencit (Mus musculus L.) termasuk mamalia pengerat (rodensia) yang
cepat berkembangbiak, mudah dipelahara dalam jumlah banyak, variasi
genetiknya cukup besar, serta sifat anataomi dan fisiologinya terkarateristik
dengan baik.Mencit memiliki ciri-ciri berupa bentuk tubuh kecil, berwarna putih,
memiliki siklus estrus teratur yaitu 4-5 hari (Akbar 2010).
2. Sistematika Hewan Uji
Sistematika mencit (Mus musculus L.) menurut Akbar (2010) adalah
sebagai berikut:
Phylum : Chordota
Sub phylum : Vertebrata
Class : Mammalia
Ordo : Rodentia
Family : Muridae
29
29
Genus : Mus
Species : Mus musculus
3. Karateristik hewan uji
Hewan uji yang biasa digunakan dalam penelitian adalah tikus dan
mencit.Karena kedua hewan tersebut mudah didapat, ukurannya yang kecil,
harganya murah, mudah ditangani, dan data toksikologinya relatif banyak (Lu
1995). Prinsip dari hewan uji yang akan digunakan adalah harus dipertimbangkan
sensitivitas, cara metabolisme sediaan uji yang serupa dengan manusia. Berikut
adalah kriteria hewan uji yang digunakan dalam uji toksisitas menurut BPOM
2014 :
Tabel 3. Kriteria hewan uji (BPOM 2014)
No Jenis hewan Bobot minimal Rentang umur
1 Mencit 20 g 6-8 minggu
2 Tikus 120 g 6-8 minggu
3 Marmut 250 g 4-5 minggu
4 Kelinci 1800 g 8-9 bulan
Pada penelitian ini hewan uji yang digunakan adalah mencit betina karena
sedikit lebih sensitif dibandingkan mencit betina.Sehingga sangat cocok untuk
menggunakan mencit betina dalam uji toksisitas, tetapi apabila bahan uji (menurut
literatur) secara toksikologi menunjukkan bahwa mencit jantan lebih sensitif,
maka jenis kelamin jantan digunakan untuk uji (BPOM 2014).
4. Kondisi ruang dan pemeliharaan hewan uji
30
30
Ruangan yang digunakan sebaiknya memiliki suhu sekitar 22°C, dengan
kelembapan relatif 30-70%, penerangan 12 jam terang 12 jam gelap, ruangan
harus bersih, untuk mencit memiliki luas kandang 77,4 cm², tinggi 12,7 cm²
(BPOM 2014).
5. Cara dan lama pemberian zat uji
Secara umum pemberian obat pada hewan uji dapat digunakan jalur oral
karena jalur ini merupakan jalur yang sering dipakai manusia dalam
mengkonsumsi obat. Selain itu pemberian senyawa melalui oral secara cepat akan
diabsorbsi dari saluran cerna dan akan didistribusikan keseluruh organ dalam
tubuh sehingga apabila senyawa uji diberikan secara berulang-ulang maka pada
organ tertentu akan mengakibatkan toksik (Loomis1978). Dalam pemberian
peroral pada hewan uji diberikan dengan menggunakan sonde (Harmita & Radji
2004).
6. Mengorbankan hewan uji
Pembunuhan dilakukan sedemikian rupa sehingga hewan mengalami
seminimal mungkin.Dapat dilakukan dengan pemberian anestesi dengan dosis
berlebih.Secara intravena untuk mencit, marmot, dan tikus dengan menggunakan
klorofrom, CO2, N2, dan inhalasi.Dapat juga secara fisik atau disembelih (Lu
1995).
G. Landasan Teori
Tanaman rimpang temu putih dapat dimanfaatkan sebagai salah satu
tanaman obat tradisional, yang mengandung senyawa minyak atsiri, flavonoid,
31
31
saponin.Kandungan kimia yang terdapat dalam rimpang dan daun temu putih
mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol (Depkes 1993).Flavonoid
bertindak sebagai penampung radikal hidroksi dan superoksida serta melindungi
membran lipid terhadap reaksi yang merusak (Robinson 1995).Saponin adalah
senyawa aktif permukaan yang kuat dan dapat menimbulkan busa jika dikocok
dalam air, sehingga pada konsentrasi yang rendah saponin dapat menyebabkan
hemolisis sel darah merah dan sangat beracun untuk ikan (Robibson
1995).Minyak atsiri memiliki bau yang khas yang berbeda-beda dari setiap
tanaman.Minyak atsiri mudah menguap dalam suhu kamar, tidak stabil terhadap
pengaruh lingkungan baik pengaruh udara maupun sinar matahari (Gunawan&
Mulyani 2004).
Berdasarkan penelitian Rita dkk (2012) isolasi ekstrak etanolik temu putih
menggunakan metode GC-MS didapatkan 8 komponen senyawa utama yaitu asam
benzoat, tetradekana, heksadekana, 3-metilheptadekana, oktadekana, 2-
metileikosan, normal-dokosan, dan heneikosan. Dalam minyak atsiri terdiri dari
19 senyawa dengan 8 senyawa mayor antara lain kamfen (4,77%), beta pinen
(4,16%), 1,3,3-trimetil sineol (7,27%), kamfor (8,27%), 1-etenil-1-metil-2,4 bis
(1-metiletenil) sikloheksana (4,35%), kurkuzen (7,72%), germakron (21,85%),
dan velleral (24,29%) (Rita dkk 2011).
Paramapojn&Gritsanapan (2009) mengidentitikasi senyawa ekstrak temu
putih menggunakan metode HPLC, dan menunjukkan terdapat senyawa
kurkumin, demethoxycurcumin, bisdemethoxycurcumin, akan tetapi pada metode
TLC dan HPLC menunjukkan bahwa komponen utama pada temu putih adalah
32
32
demethoxycurcumin, dan komponen utama kedua adalah kurkumin. Akar, dan
rimpang pada temu putih mengandung senyawa terpenoid aktif, yaitu
sesquiterpenes curcumenol, dan dihydrocurdione yang dianalisis menggunakan
metode TLC dan HRCG. Diantara senyawa tersebut curcumenol memiliki
konsentrasi nilai hambat 64%, sedangkan dihydrocurdione memiliki konsentrasi
hambat 46% hal tersebut menunjukkan bahwa senyawa tersebut mampu bertindak
sebagai analgesik (Pamplona dkk 2006).
Menurut Alexander dkk (2001) pengaruh ekstrak rimpang temu putih
terhadap kadar asam urat pada kelinci dapat menghasilkan dosis 0,9-3,6 g/1,5
kgBB untuk menurunkan kadar asam urat yang sangat nyata dibandingkan dengan
kontrol negatif, dan dengan dosis 3,6 g/1,5 kgBB memiliki efek yang jauh lebih
besar daripada kontrol positif. Sedangkan pada penelitian Aditianingrum (2015)
uji toksisitas ekstrak etanol rimpang temu putih terhadap larva udang dan embrio
ikan zebra dapat menghasilkan dosis 588.29 ppm, dan 215.21 ppm membuktikan
terjadinya toksisitas baik dengan metode BSLT maupun dengan metode ZFET.
Penelitian lain menunjukkan bahwa kurkumin merupakan bahan aktif
dalam rimpang temu putih yang bersifat sitotoksik terhadap sel kanker, dan pada
ekstrak etanol temu putih dapat menghambat pertumbuhan tumor paru pada
mencit (Murwanti dkk 2004), dan juga mampu menghabat sel kanker ovarium
manusia (Syu dkk 1998). Menurut Huang dkk (1995) temu putih dapat
menghambat pembentukan sel tumor (berefek sitostatis pada sel kanker), akan
tetapi dari penelitian ini dapat diketahui pula bahwa ekstrak metanol temu putih
33
33
mempunyai efek sitotastik pada sel-sel normal yang aktif mengadakan proliferasi
yang dalam penelitian ini adalah spermatogenik testis.
Metode yang digunakan untuk ekstraksi pada rimpang temu putih adalah
maserasi menggunakan pelarut etanol 70%.Etanol 70% berfungsi sebagai pelarut
yang digunakan untuk melarutkan alkaloid basa, minyak menguap, glikosida,
kurkumin, antrakinon, flavonoid, steroid, damar, dan klorofil (Depkes 1986).
Keterpaparan toksikan merupakan suatu efek yang tidak diinginkan yang
menyebabkan informasi tentang mekanisme biologi dan dalam kondisi zat kimia
tersebut berbahaya (Loomis 1978).Uji toksisitas akut merupakan derajat efek
toksik suatu senyawa yang terjadi dalam waktu singkat (7-14 hari) setelah
pemberian dalam dosis tunggal.Salah satu tujuan dari uji toksisitas akut yaitu
untuk memperoleh nilai LD50 (LD50 merupakan besar dosis yang dapat
menyebabkan kematian (letal dose) pada 50% hewan uji.LD50merupakan dosis
tunggal suatu zat yang secara statistik diharapkan akan membunuh 50% hewan
uji. Kegunaan nilai LD50salah satunya adalah dapat mengklasifikasikan zat kimia
yang sesuai dengan toksisitas relatifnya. Berdasarkan klasifikasinya suatu zat
dikatakan praktis tidak toksik apabila memiliki nilai LD50>15 g/kgBB, dan zat
dikatakan super toksik apabila nilai LD505 mg/kgBB hewan uji atau kurang. Nilai
dari LD50dapat dihitung dengan metode Thompson & Weil, Litchfield &
Wilcoxon, Miller & Trainer, regresi linier/probit atau dengan menggunakan
metode statistik lainnya (BPOM 2014).
Penentuan dosis toksik menurut BPOM (2014) terdapat dua metode, yaitu
metode konvensional, dan metode fixed dose. Metode konvensional merupakan
34
34
metode yang menggunakan minimal tiga dosis berbeda. Dosis terendah adalah
dosis tertinggi yang sama sekali tidak menimbulkan kematian, sedangkan dosis
tertinggi adalah dosis terendah yang mampu menimbulkan kematian 100%, serta
batas uji dosis yang digunakan adalah 5000 mg/kgBB hewan uji. Metode fixed
dose merupakan metode yang menggunakan dosis bertingkat, antara lain : 5, 50,
300, 2000 mg/kgBB hewan uji (dosis dapat ditambah hingga 5000 mg/kgBB
hewan uji).
Tujuan dari uji toksisitas akut adalah untuk mengetahui besaran nilai LD50,
dapat mengetahui organ sasaran yang mungkin dirusak dan melihat efek toksik
secara spesifik, serta dapat memberikan petunjuk tentang dosis yang sebaiknya
digunakan dalam pengujian yang lebih lama (Harmita& Radji 2004).
H. Hipotesis
Berdasarkan uraian diatas, maka dapat disusun suatu hipotesis dalam
penelitian ini, yaitu pertama, pemberian ekstrak etanolik temu putih dengan dosis
lebih dari 5000 mg/kgBB hewan ujimenunjukkan efek toksik terhadap mencit
putih betina.
Kedua, nilai LD50 dari ekstrak etanolik temu putih lebih dari 5000
mg/kgBB hewan ujitermasuk dalam klasifikasi cukup toksik.
Ketiga, ekstrak etanolik rimpang temu putih berpengaruh terhadap berat
badan dan indeks organ pada mencit putih betina.
35
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Populasi dan Sampel
Populasi adalah semua objek yang menjadi sasaran penelitian.Populasi
yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang temu putih yang diperoleh
dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat
tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu, Jawa Tengah.
Sampel adalah sebagian kecil dari populasi yang dilakukan dalam
melakukan penelitian. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah
rimpang temu putih yang diambil secara acak, dipilih yang bersih, dan segar
diperoleh dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat
tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu, Jawa Tengah pada bulan Januari 2016.
B. Variabel Penelitian
1. Identifikasi variabel utama
Variabel utama dalam penelitian ini adalah ekstrak etanolik dari rimpang
temu putih dalam berbagai variasi dosis.Variabel utama kedua dalam penelitian
ini adalah besaran kisaran dosis lethal tengah (LD50), dan gejala toksik pada
mencit.Variabel ketiga dalam penelitian ini adalah hewan uji dan kondisi
percobaan.
36
36
2. Klasifikasi variabel utama
Variabel utama dapat diklasifikasikan ke dalam berbagai variabel yaitu
variabel bebas, variabel tergantung, dan variabel terkendali.Variabel bebas dalam
adalah variabel yang sengaja direncanakan untuk diteliti pengaruhnya terhadap
variabel tergantung.Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak etanolik
rimpang temu putih yang diberikan pada mencit dalam berbagai variasi dosis
toksik.
Variabel tergantung adalah variabel akibat dari variabel utama.Variabel
tergantung dalam penelitian ini adalah efek toksisitas akut ekstrak etanolik
rimpang temu putih terhadap mencit dengan melihat gejala atau efek toksik, serta
nilai LD50.
Variabel terkendali adalah variabel yang mempengaruhi variabel
tergantung, agar hasil yang didapat tidak tersebar dan dapat diulang dalam
penelitian lain secara tepat. Variabel terkendali dalam penelitian ini adalah berat
badan, usia, lingkungan tempat hidup, dan perlakuan oleh peneliti.
3. Definisi operasional variabel utama
Pertama, rimpang temu putihmerupakan tanaman segar yang diperoleh
dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat
tradisional(B2P2TOOT) Tawangmangu, Jawa Tengah.
Kedua, serbuk rimpang temu putih merupakan rimpang temu putih yang
diambil, dan dicuci dengan air mengalir dilanjutkan pengeringan dengan cara
dioven pada suhu 40-50°C setelah kering dibuat serbuk dengan cara diblender
kemudian diayak menggunakan ayakan no. 40.
37
37
Ketiga, ekstrak etanolik rimpang temu putih merupakan hasil maserasi
ekstrak etanolik rimpang temu putih menggunakan pelarut etanol 70%, dan
diuapkan hingga didapat ekstrak kental.
Keempat, dosis ekstrak etanolik rimpang temu putih di dapat dari metode
fixed dose , yaitu 5, 50, 300, 2000, 5000 mg/kgBB hewan ujiyang diberikan pada
hewan uji
Kelima, hewan uji yang digunakan dalam penelitian adalah mencit putih
betina yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Universitas Setia Budi
Surakarta.
Keenam, efek toksik yang diamati pada mencitputih betina yaitu gejala
toksik meliputi tremor, kejang, grooming, dll, yaitu pada 30 menit setelah
pemberian ekstrak etanolik rimpang temu putih, dan dilanjutkan pengamatan
selama 24 jam.
Ketujuh, pengamatan terhadap hewan uji dilanjutkan sampai 14 hari untuk
menentukan nilai LD50. LD50ditentukan dengan cara menghitung jumlah hewan
uji yang mengalami kematian, apabila hewan uji selama 14 hari tidak mengalami
kematian, maka hewan uji dikorbankan dengan cara dibedah, kemudian ditimbang
organ hati, usus, jantung, ginjal, lambung, limfa, dan paru-paru.
C. Bahan dan Alat
1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat yang digunakan
untuk membuat simplisia yaitu oven, blender, dan ayakan no. 40.Alat yang
38
38
digunakan untuk membuat ekstraksi maserasi yaitu gelas piala, batang pengaduk,
penangas air, kain flannel, kertas saring, corong gelas, beaker glass, corong
Buncher, vakum rotary evaporator.
Alat yang digunakan untuk pelakuan pada hewan uji antara lain adalah
kandang mencit, neraca elektrik digunakan untuk perlakuan pada hewan uji, spuit
injeksi 1,0 ml, jarum oral (kanul), dan seperangkat alat bedah (scalpel, pinset,
gunting, jarum, dan meja lilin).
2. Bahan
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang temu
putih yang diambil di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat
dan Obat tradisional(B2P2TOOT) Tawangmangu, Jawa Tengah yang masih segar.
Hewan uji yang digunakan adalah mencit putih betina umur 6-8 minggu.Pelarut
yang digunakan untuk maserasi adalah etanol 70%. Kontrol negatif yang
digunakan adalah Na CMC 0,5%.
D. Jalannya Penelitian
1. Determinasi tanaman
Tahap pertama dalam penelitian adalah menetapkan kebenaran rimpang
temu putihyang berkaitan dengan ciri-ciri makroskopis dan mikroskopis yang
dilakukan determinasi di Universitas Setia Budi Surakarta, Jawa Tengah.
2. Pengambilan bahan
Rimpang temu putih diperoleh dari Balai Besar Penelitian dan
Pengembangan Tanaman Obat dan Obat tradisional(B2P2TOOT) Tawangmangu,
Jawa Tengah dalam keadaan segar. Pengambilan rimpang temu putih
39
39
dilakukansaat rimpang masih segar. Rimpang yang telah dipanen kemudian
dilakukan pencucian menggunakan air bersih dan ditiriskan.Rimpang dirajang
halus, dikeringkan dengan oven pada suhu 40-50°C.Pembuatan serbuk
menggunakan ayakan no 40.Hasil penyerbukan yang berupa serbuk kering
disimpan dalam wadah kering dan tertutup rapat yang selanjutnya digunakan
untuk penelitian.
3. Penetapan kadar air serbuk
Penetapan kadar air pada serbuk menggunakan alat Steriling-Bidwell.
Caa kerja dari alat tersebut adalah serbuk ditimbang sebanyak 20 gram kemudian
dimasukkan kedalam labu alas bulat pada alat Sterling-Bidwell, kemudian
ditambahkan xylen sebanyak 100 ml dan dipanaskan sampai tidak ada tetesan air
lagi. Selanjutnya dilihat volume tetesan dan dihitung kadarnya dalam satuan
persen (Sudarmadji et al. 2003). Penetapan kadar air digunakan untuk menjaga
mutu dan khasiat serbuk tetap terjaga, serta untuk mengetahui kelayakan sampel
dalam pengujian. Kadar air yang ditentukan kurang dari 10%.
4. Pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih
Ekstraksi pada penelitian ini adalah menggunakan metode maserasi, yaitu
dengan cara serbuk rimpang temu putih sebanyak 500 gram dimasukkan ke dalam
bejana kemudian ditambahkan pelarut etanol 70% sebanyak 3750 ml. Maserasi
dilakukan selama ± 5 hari dengan penggojokkan 3-5 kali sehari. Campuran
tersebut lalu disaring dengan menggunakan kain flanel sehingga didapatkan
filtrat.Filtrat yang diperoleh kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator
sehingga diperoleh ekstrak kental.
40
40
Gambar 1.Skema pembuatan ekstrak etanol temu putih.
5. Uji bebas etanol
Ekstrak yang telah pekat diuji sudah bebas etanol atau belum dengan cara
uji esterifikasi yaitu ekstrak ditambah asam asetat dan asam sulfat pekat kemudian
dipanaskan, uji positif bebas etanol jika tidak terbentuk bau ester yang khas dari
etanol (Praeparandi 1978).
6. Identifikasi senyawa ekstrak etanolik rimpang temu putih
Uji ini dilakukan untuk mengidentifikasi kandungan dalam ekstrak
rimpang temu putih.Identifikasi kandungan senyawa kimia bertujuan untuk
menetapkan keberadaan senyawa kimiadalam ekstrak rimpang temu
Dicuci dan dikeringkan di bawah sinar matahari
Diblender dan diayak dengan ayakan no.40
Maserasi dengan pelarut etanol 70%, selama 5-7
hari.
Ampas
Dipekatkan dengan oven pada suhu 40°C
Ekstrak kental
Simplisia Rimpang temu putih
Ekstrak cair
Serbuk
Dipekatkan dengan oven pada suhu 40°C
41
41
putih.Identifikasi kandungan senyawa kimia dalam ekstrak etanolik meliputi
senyawa flavonoid, saponin, dan tanin.
6.1. Identifikasi flavonoid. Serbuk dan ekstrak rimpang temu putih
ditambah serbuk Mg dan ditambahkan 2 ml larutan etanol. Dicampur dan dikocok
kuat-kuat kemudian dibiarkan memisah. Reaksi positif ditandai adanya warna
merah atau jingga pada lapisan amil alkohol (Robinson 1995).
6.2. Identifikasi tanin. Serbuk dan ekstrak rimpang temu putih
ditambahkan 3 tetes larutan FeCl3 1%. Reaksi positif akan terbentuk warna hijau
violet (Depkes 1995).
6.3. Identifikasi saponin. Masukkan serbuk dan ekstrak rimpang temu
putih dalam tabung reaksi, tambahkan air panas, dinginkan dan kemudian kocok
kuat-kuat selama 10 detik terbentuk buih yang mantab selama tidak kurang dari
10 detik, setinggi 1 cm sampai 10 cm. Buih yang timbul tidak akan hilang jika
ditambah asam klorida (Depkes 1978).
6.4. Identifikasi alkaloid.Dua ml serbuk dan ekstrak rimpang temu putih
masing-masing ditambahkan dengan 1ml HCl 2%, kemudian larutan dibagi tiga
sama banyak dalam tabung reaksi lain. Tabung reaksi I sebagai pembanding,
tabung reaksi II ditambah 2 tetes reagen dragendroff, hasil positif ditunjukkan
dengan adanya kekeruhan atau endapan coklat. Tabung reaksi III adalah serbuk
dan ekstrak masing-masing ditambahkan 1 ml HCl 2% dan reagen mayer, hasil
positif ditunjukkan dengan adanya endapan putih kekuningan (Robinson 1995).
42
42
6.5. Identifikasi minyak atsiri. Larutan ekstrak ± 2 ml dimasukkan ke
dalam tabung reaksi, ditambahkan dua tetes asam sulfat pekat. Positif jika
menunjukkan warna ungu (Gunawan & Mulyani 2004).
7. Prosedur kerja
7.1. Persiapan hewan uji. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian
ini adalah mencit putih betina dengan berat badan ± 20 gram, berumur 6-8 minggu
sebanyak 30 ekor. Masing-masing mencit ditimbang dan diberi tanda pengenal,
kemudian dibagi menjadi 6 kelompok yang masing-masing kelompok terdiri dari
5 ekor mencit. Hewan uji mencit didapat dari Laboratorium Farmakologi
Universitas Setia Budi. Hewan yang diperoleh dalam keadaan sehat dan sudah
diadaptasikan dalam lingkungan Universitas Setia Budi selama ± 1 minggu.
Sebelum diberi perlakuan hewan uji dipuasakan terlebih dahulu selama 14-18 jam
dan hanya diberikan minum. Setelah semua dipersiapkan, mencit dapat segera
dilakukan penelitian dengan pemberian sediaan zat uji.
7.2. Penetapan dosis. Penetapan dosis dalam penelitian ini , mengacu
pada metode fixed dose dengan menggunakan dosis bertingkat, yaitu :5, 50, 300,
2000, dan 5000 mg/kgBBhewan uji, dan kelompok kontrol negatif diberikan Na
CMC 0,5%.(BPOM 2014).
7.3. Perlakuan hewan uji. Mencit putih betina yang telah dipuasakan,
dikelompokkan secara acak menjadi 6 kelompok. Masing-masing kelompok
terdapat 5 ekor hewan uji pembagian sebagai berikut :
Kontrol negatif : diberi Na CMC 0,5%
43
43
Kelompok I : diberi dosis tunggal ekstrak etanol rimpang temu
putih sebanyak 5 mg/kgBB hewan uji.
Kelompok II : diberi dosis tunggal ekstrak etanol rimpang temu
putih sebanyak 50 mg/kgBB hewan uji.
Kelompok III : diberi dosis tunggal ekstrak etanol rimpang temu
putih sebanyak 300 mg/kgBB hewan uji.
Kelompok IV : diberi dosis tunggal ekstrak etanol rimpang temu
putihsebanyak 2000 mg/kgBB hewan uji.
Kelompok V : diberi dosis tunggal ekstrak etanol rimpang temu
putihsebanyak 5000 mg/kgBB hewan uji.
Hewan uji yang telah ditimbang dan dikelompokkan kemudian diberikan
sediaan uji sesuai dengan dosis yang telah ditentukan, diamati selama 24 jam
gejala klinis yang timbul jika tidak ada kematian dilanjutkan sampai 7-14 hari
untuk memperoleh data berat badan mencit.
Penentuan nilai LD50:
Nilai LD50 dihitung menggunakan rumus Probit, yaitu :
Y= a+ b.x ………………. (Persamaan 4)
Dimana : y = probit = 5 (50% kematian = LD50)
bx = log dosis
8. Pengamatan dan pemeriksaan
Pengamatan hewan uji dilakukan pada 30 menit pertama setelah
pemberian sediaan uji, dan dilanjutkan selama 24 jam pertama, apabila hewan uji
tidak ada yang mati pengamatan dilanjutkan sehari sekali setelah itu selama 14
44
44
hari. Hal-hal yang perlu diamati adalah gejala klinis diamati dari perilaku hewan
uji yang abnormal dari biasanya, seperti:
8.1. Perubahan perilaku (behavioral profile). Uji grooming yaitu melihat
kebiasaan mencit menjilat tubuhnya bila frekuensi meningkat menunjukkan
adanya stimulasi SSP atau saraf simpatik dan bila terjadi penurunan adanya
depresi, gerakan spontan terjadi bila mencit bergerak dengan cepat dan berlari
adanya stimulasi SSP, dan bila mencit sampai tertidur , reaksi sentuh apabila
mencit disentuh dengan pensil bila mencit tidak merespon menunjukkan adanya
anastesi, serta reaksi sakit yaitu saat ekor mencit dijepit sampai mencicit bila tidak
ada respon maka menunjukkan adanya analgesik sedasi.
8.2 Perubahan pada neurological profile. Perubahan central excitasi
terdiri dari penilaian respon ketegangan terlihat pada ekor yang tegang terlihat
kaku, dan tegak lurus dengan lantai karena stimulasi SSP khususnya gemetar
(tremor), kejang (convulsion). Perubahan pada motor incoordinator yang dapat
terlihat dari kaki hewan uji yang terbuka menunjukkan adanya depresi SSP atau
fungsi neuromuscular, sempoyongan (ataksia) yang terlihat dari cara berjalan
mencit, dan reaksi refleks yaitu kemampuan mencit untuk membalikkan diri
apabila mencit diletakkan terletang dilantai. Perubaha refleks hewan uji dapat
berupa pina refleks yaitu gerakan menghindari rangsangan pada telinga, refleks
kornea yaitu gerakan menghindari rangsangan mekanis pada kornea mata, dan
refleks epsilateral jika bantalan jari kaki yang dipijat dengan pinset maka terlihat
usaha melipat jari kaki.
45
45
8.3 Perubahan pada autonomic. Perubahan gejala umum seperti,
menggeliat tanda bahwa terjadinya iritasi peritoneal dimana mencit akan
merapatkan perutnya pada lantai, piroleksi dengan tanda berdirinya bulu mencit,
perubahan warna kulit menjadi pucat.
Gambar 2.Skema pengujian ekstrak etanol rimpang temu putih.
Hewan uji mencit putih betina
Penimbangan hewan uji
Aklimatisasi
Pemberian bahan uji (oral)
Kontrol
negatif
Kelompok
I
Kelompo
k II
Kelompok
III
Kelompok
IV
Na
CMC
0,5%
Dosis I
5
mg/kgBB
Dosis II
50
mg/kgBB
Dosis III
300
mg/kgBB
Dosis IV
2000
mg/kgBB
Pengamatan gejala toksik dan jumlah hewan mati selama 14 hari
Mencit mati Perhitungan nilai
LD50
Bedah
Timbang berat organ mencit putih
betina
Analisis data dengan ANOVA
Organ di
rendam dengan
formalin 10%
Kelompok
V
Dosis V
5000
mg/kgBB
46
46
E. Analisis Data
Data yang diperoleh diolah secara statistik dengan menggunakan
SPSS.Analisis pertama dilakukan dengan uji distribusi normal (Uji Shapirro-
Wilk), kemudian diuji homogenitasnya dengan uji Levene, jika data terdistribusi
normal makadilanjutkan dengan analisa varian satu arah ANOVA untuk melihat
hubungan antara kelompok perlakuan, dan apabila ditemukan perbedaan yang
bermakna maka dilanjutkan dengan uji Post-hoc.Jika data tidak terdistribusi
normal maka dilanjutkan uji Kruskal-Wallis untuk melihat perbedaan antar
kelompok perlakuan, dan apabila tidak ditemukan perbedaan maka dilanjutkan
dengan uji Mann-Whitney.
47
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Rimpang Temu Putih
1. Hasil determinasitanamanrimpangtemuputih
Determinasi tanaman rimpang temu putih telah dilakukan di Laboratorium
Morfologi Sistematika Tumbuhan, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi
Surakarta.Determinasi bertujuan untuk mencocokkan ciri morfologis dan
mengetahui kebenaran tumbuhan yang diteliti.Berdasarkan hasil determinasi,
dapat dipastikan bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah
tanaman rimpang temu putih.Hasil determinasi selengkapnya dapat dilihat pada
lampiran 1.
2. Pengambilan bahan dan pembuatan serbuk rimpang temu putih
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang temu putih
yang diambil dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan
Obat Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu, Jawa Tengah pada bulan Februari
2016. Rimpang temu putih yang diambil dalam keadaan masih segar dengan
kondisi fisik baik seperti tidak terserang hama penyakit, dan jumlah bahan yang
diperoleh sebanyak 6500 gram rimpang temu putih segar.
Proses selanjutnya adalah rimpang temu putih dicuci dengan air bersih
yang mengalir hingga bersih dan terbebas dari kotoran, ditiriskan, dan ditimbang.
Rimpang bersih diiris tipis-tipis kemudian dikeringkan dalam oven suhu 40˚C
selama 7 hari hingga rimpang mudah dipatahkan dan didapatkan rimpang yang
48
48
benar-benar kering dengan tujuan untuk mengurangi kadar air sehingga mencegah
terjadinya pembusukkan oleh jamur dan bakteri. Berat rimpang setelah
dikeringkan dalam oven adalah 1250 gram. Rimpang yang telah dikeringkan
kemudian dihitung bobot kering terhadap berat basah sehingga diperoleh
rendemen rimpang temu putih adalah 19,23%. Hasil Perhitungan rendemen dapat
dilihat pada lampiran 9.
Rimpang yang sudah kering kemudian dibuat serbuk dengan cara
dihaluskan dengan mesin penggiling kemudian diblender dan diayak
menggunakan ayakan no. 40. Pembuatan serbuk bertujuan untuk mendapatkan
luas permukaan partikel serbuk lebih besar yang kontak dengan pelarut sehingga
proses penyarian akan lebih efektif.
3. Hasil penetapan kadar air serbuk
Penetapan kadar air terhadap rimpang temu putih pada penelitian ini
menggunakan alat Sterling Bidwell dengan pelarut xylen. Xylen digunakan
sebagai pelarut karena memiliki titik didih lebih tinggi daripada air dan tidak
bercampur dengan air sehingga memudahkan dalam penetapan kadar air.
Tabel 4. Hasil penetapan kadar air dalam serbuk rimpang temu putih
No. Berat awal (g) Volume akhir (ml) Kadar air (%)
1 20 1,9 9.5
2 20 1,6 8
3 20 1,4 7
Rata-rata 8,17 ± 1,25
Rata-rata penetapan kadar air dalam serbuk rimpang temu putih adalah
8,17%. Kadar air serbuk rimpang temu putih sudah memenuhi syarat kurang dari
10%. Kadar air simplisia disyaratkan kurang dari 10% untuk mencegah terjadinya
49
49
pembusukkan oleh jamur, bakteri, bekerjanya enzim, dan terjadinya perubahan
kimia yang dapat menurunkan kualitas simplisia (Depkes 1985a). Perhitungan
kadar air dapat dilihat pada Lampiran 11.
4. Hasil pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih
Metode penyarian dalam metode ini adalah dengan cara maserasi
menggunakan pelarut etanol 70%. Metode maserasi merupakan metode yang
paling sederhana. Maserasi merupakan proses pembuatan ekstraksi dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokkan atau pengadukkan pada
suhu ruang dengan cara merendam simplisia dalam pelarut selama ±5 hari.
Setelah 5 hari dilakukan penyaringan untuk mendapatkan filtratnya.
Pelarut yang digunakan pada proses maserasi ini adalah etanol 70%.
Etanol 70% bersifat lebih polar karena terdiri dari campuran etanol dan
air.Senyawa yang terkandung dalam simplisia dapat tertarik dalam etanol dan
dapat pula yang tertarik dalam air.Pelarut etanol dapat melarutkan alkaloid basa,
minyak menguap, glikosida saponin, glikosida flavonoid, kurkumin, mukarin,
antrakuinon, steroid, damar, dan klorofil, sedangkan lemak, saponin, dan tanin
hanya sedikit yang larut (Depkes 1986).
Setelah proses maserasi dilanjutkan proses pengentalan menggunakan
vakum rotary evaporator. Prinsip kerja alat ini adalah berdasarkan pada
penurunan tekanan sehingga pelarut dapat menguap pada suhu dibawah titik
didih.Tujuan dari alat tersebut adalah untuk menghilangkan pelarut yang terdapat
pada filtrat sehingga diperoleh ekstrak kental dari rimpang temu putih. Setelah
didapat ekstrak kental, maka dapat dihitung rendemennya cara perhitungan
50
50
rendemen ekstrak dapat dilihat pada Lampiran 10. Hasil perhitungan dapat dilihat
pada tabel 5.
Tabel 5. Hasil pembuatan ekstrak etanolik rimpang temu putih
Simplisia (g) Berat wadah
kosong (g)
Berat wadah +
ekstrak (g)
Ekstrak (g) Rendemen
(%)
500 184,8 228,1 43,3 8,66
Ekstrak rimpang temu putih yang diperoleh dari hasil ekstraksi dengan
pelarut 70% adalah 43,3 gram dan rendemen ekstrak yang didapat adalah 7,14%.
5. Hasil uji bebas etanol
Ekstrak rimpang temu putih dilakukan uji bebas etanol. Hasil uji bebas
etanol dalam ekstrak rimpang temu putih dapat dilihat pada tabel 6.
Tabel 6. Hasil uji bebas etanol ekstrak rimpang temu putih
Tes bebas alkohol Pustaka
(Praeparandi 1979)
hasil
Ekstrak + H2SO4conc+CH3COOH,
dipanaskan
tidak terbentuk bau
ester yang khas dari etanol
tidak adanya bau ester
yang khas
dari etanol
Hasil tes bebas etanol pada tabel 6 menunjukkan bahwa ekstrakrimpang
temu putih sudah terbebas dari pelarutnya yaitu etanol 70% yang ditunjukkan
dengan tidak adanya bau ester yang khas dari etanol. Uji bebas etanol ekstrak
rimpang temu putih bertujuan untuk membuktikan bahwa ekstrak yang diperoleh
tidak mengandung etanol, sehingga tidak mempengaruhi uji toksisitas pada hewan
uji
6. Hasil identifikasi kandungan kimia
51
51
Hasil analisis kandungan senyawa kimia ekstrak etanolik rimpang temu
putih secara kualitatif dilakukan di Laboratorim Universitas Setia Budi.
Identifikasi ini bertujuan untuk mengetahui kandungan kimia pada serbuk, dan
ekstrak rimpang temu putih.Hasil uji identifikasi pada penelitian ini berdasarkan
pengamatan dan pustaka.
Tabel 7. Hasil idetifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanolik rimpang temu putih
secara kualitatif.
Senyawa Hasil
Pustaka Pereaksi Serbuk Ekstrak Ket
Saponin 10 ml filtrat digojok kuat-
kuat selama 10 detik. + + +
Terbentuk buih yang
mantap setinggi 1-10 cm
di tambah HCl 2 N buih
tidak hilang (Depkes
1978)
Flavonoid
0,1 g Serbuk, 10 ml ekstrak
+ serbuk Mg + 2 ml larutan
etanol, digojok kuat-kuat
biarkan memisah
+ + +
Merah/kuning/jingga
pada lapisan amil
alkohol (Robison 1995)
Alkaloid
10 ml ekstrak, 0,1 g +
sedikit lar.HCl 2N, dibagi
menjadi 3,yaitu 1
digunakan sebagai
pembanding, 2 +
lar.gragendrof, kekeruhan
atau endapan coklat, 3 + 1
ml HCl + reagen mayer,
endapan putih
+ + +
Ditambah reagen
dragendrof terdapat
kekeruhan atau endapan
coklat (Robinson 1995)
Tanin
0,1 g serbuk, 10 ml ekstrak
+ 3 tetes FeCl 1%, warna
hijau violet
- - - Hijau violet/ biru tua
(Depkes 1995)
Minyak
atsiri
2 ml ekstrak, 0,1 g serbuk +
2 tetes asam sulfat pekat + + +
Warna ungu (Gunawan
& Mulyani 2004)
52
52
Berdasarkan hasil identifikasi kualitatif kandungan kimia serbuk dan
ekstrak etanolik rimpang temu putih dapat dilihat bahwa flavonoid, saponin,
alkaloid, dan minyak atsiri dinyatakan positif karena dapat kesesuaian hasil
pengamatan dengan pustaka, sedangkan tanin dinyatakan negatif karena pada
hasil diperoleh tidak ada tanda yang menunjukkan adanya kandungan senyawa
tersebut. Hal ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanolik rimpang temu putih
mengandung flavonoid, saponin, alkaloid, dan minyak atsiri.
B. Hasil Uji Toksisitas Akut
Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit betina
sebanyak 30 ekor, dengan berat badan ± 20 gram dengan usia 6-8 minggu.
Pemilihan jenis kelamin betina, karena memiliki tingkat sensitivitas yang lebih
baik dibandingkan dengan jenis kelamin jantan, sehingga jenis kelamin betina
lebih menguntungkan bila digunakan sebagai uji toksisitas (BPOM 2014).
Mencit yang digunakan diadaptasikan terlebih dahulu selama 7 hari
dengan tujuan agar mencit tersebut dapat beradaptasi dengan lingkungan
sekitarnya. Mencit yang sudah diadaptasikan dibagi menjadi enam kelompok,
masing-masing kelompok terdiri dari lima ekor mencit. Sebelum diberi perlakuan
mencit ditimbang berat badan masing-masing hewan uji untuk menentukan
volume pemberian sedian uji menggunakan sonde, dan mencit dipuasakan terlebih
dahulu selama 14- 18 jam sehingga perut mencit dalam keadaan kosong dan tidak
mempengaruhi pada proses pengamatan.
Pengamatan intensif dilakukan selama 24 jam pada waktu ke 0, ½ , 1, 2, 6,
12, 24 jam untuk melihat gejala toksik yang terjadi. Gejala toksik yang umumnya
53
53
terjadi yaitu tremor, grooming, aktivitas spontan, piroleksi, selain itu perubahan
berat badan, jumlah hewan uji yang mati pada masing-masing kelompok,
pengamatan organ, meliputi hati, paru-paru, limfa, jantung, usus, lambung, dan
ginjal secara makroskopis. Dalam penelitian ini semua hewan uji dalam waktu 24
jam tidak mengalami kematian, sehingga pengamatan dilanjutkan sampai 14 hari,
hal tersebut dilakukan untuk mengetahui adanya efek toksik yang tertunda pada
hewan uji.
1. Hasil uji efek toksisitas akut ekstrak rimpang temu putih
Pengamatan yang dilakuakan pada penelitian ini salah satunya adalah
perubahan perilaku pada mencit setelah pemberian ekstrak rimpang temu putih
sampai mengalami kematian. Pengamatan ini hanya dilakukan selama 24 jam.
Tabel 8. Gejala toksik yang teramati
Dosis Tanda ketoksikan
Kontrol negatif Mencit , dan 5 Grooming
Mencit 2,3, dan 4 Grooming, aktivitas spontan, dan tremor
Dosis I Mencit 1,3, dan 4
Setengah jam setelah pemberian sediaan uji
mencit mengalamigrooming
Mencit 2, dan 5 Grooming, aktivitas spontan
Dosis II
Mencit 1,2, dan 3 Tremor, piroleksi
Mencit 4 Grooming, aktivitas spontan, tremor, dan
piroleksi
Mencit 5 Grooming, aktivitas spontan, dan piroleksi
Dosis III
Mencit 1 Grooming, piroleksi
Mencit 2, dan 3 Grooming, tremor, piroleksi,
Mencit 4 Grooming, aktivitas spontan, piroleksi
Mencit 5 Grooming, aktivitas spontan, tremor,
piroleksi
Dosis IV Mencit 1,3, dan 4 Grooming, aktivitas spontan, tremor, piroleksi
Mencit 2, dan 5 Grooming, tremor, piroleksi
Dosis V Mencit 1,4, dan 5 Grooming, tremor, piroleksi
54
54
Mencit 2, dan 3 Grooming, tremor, piroleksi
Bahan asing yang berasal dari luar tubuh khususnya zat kimia dapat
menimbulkan efek toksik ketika masuk kedalam tubuh. Mekanismenya melalui 2
cara, yaitu secara langsung (toksik intra sel), dan secara tidak langsung (toksik
ekstra sel). Toksik intra sel adalah toksisitas yang mulai dengan interaksi langsung
antara zat kimia atau metabolit dengan reseptornya melaui membran sel, DNA,
protein, dan energi. Toksisitas ekstra sel terjadi secara tidak langsung dengan
mempengaruhi lingkungan sel sasaran tetapi dapat berpengaruh pada sel sasaran
melalui sistem syaraf, dan sistem imun.
Berdasarkan hasil gejala toksik yang diperoleh pada tabel diatas, terlihat
adanya perubahan perilaku pada mencit. Gejala toksik yang timbul setelah
pemberian ekstrak rimpang temu putih, berhubungan dengan sistem saraf pusat.
Sistem saraf pusat mengalami depresi sehingga menimbulkan gerakan-gerakan
yang tidak terkontrol seperti tremor/ gemetaran, dan grooming.
Timbulnya gejala toksik pada mencit selain karena pengaruh tingginya
dosis, dapat juga dipengaruhi oleh faktor-faktor lingkungan disekitarnya. Faktor-
faktor tersebut dapat berupa makanan, minuman, kondisi kandang, faktor stres
mencit, serta faktor internal lain misalnya daya tahan dan kerentanan mencit.
2. Hasil perhitungan berat badan mencit putih betina
Selama pengamatan, hewan uji ditimbang setiap seminggu sekali untuk
mengetahui perubahan berat badan yang terjadi. Perubahan berat badan
merupakan salah satu kriteria pengamatan pada uji toksisitas akut untuk melihat
ada atau tidaknya pengaruh ekstrak terhadap berat badan hewan uji, selain itu
55
55
penimbangan berat badan pada hari pertama bertujuan untuk menentukan volume
pemberian tiap hewan uji.
Berdasarkan hasil rata-rata berat badan menunjukkan bahwa berat badan
hewan uji di setiap minggunya mengalami kenaikan, hal ini berarti ekstrak temu
putih tidak mempengaruhi berat badan hewan uji, dan kenaikan berat badan pada
hewan uji, berarti ekstrak temu putih tidak memiliki efek toksisitas. Hasil
penimbangan dapat dilihat pada lampiran 13 menunjukkan bahwa pada data berat
badan mencit pada hari-1 tidak terdistribusi normal, sedangkan pada hari ke-7,
dan hari -14 data berat badan mencit terdistribusi normal. Data berat badan mencit
yang terdistribusi normal dilanjutkan dengan uji One Way Anova yang
menunjukkan hasil pada hari ke-7 dan hari ke-14 tidak terdapat perbedaan
bermakna terhadap berat badan hewan uji disetiap kelompok. Data yang tidak
terdistribusi normal dilanjutkan uji Kruskal-Wallis, menujukkan bahwa pada hari
ke-1 memiliki nilai signifikasi >0,05 yang berarti tidak ada perbedaan yang
signifikan antar kelompok perlakuan. Hasil rata-rata berat badan pada tabel 8
menunjukkan adanya peningkatan. Hal ini berarti ekstrak rimpang temu putih
tidak mempengaruhi berat badan mencit putih betina.
Tabel9. Hasil rata-rata berat badan dapat dilihat pada tabel berikut :
Kelompok
Rata-rata berat badan ± SD (n=5)
Hari-1 Hari-7 Hari-14
Kontrol negatif 24,074 ± 5,074 25,204 ± 4,331 25, 880 ± 3,860
Dosis I (5 mg/kgBB) 20,59 ± 0.443 22,93 ± 1,297 25,736 ± 1,798
Dosis II
(50mg/kgBB) 21,63 ± 1,699 22,358 ± 0,953 24,018 ± 2,419
Dosis III
(300mg/kgBB) 21,036 ± 0,537 22,66 ± 1,177 24,412 ± 1,53
56
56
Dosis IV
(2000mg/kgBB) 21,744 ± 1,211 24,234 ± 1,372 26,802 ± 2,155
Dosis V
(5000mg/kgBB) 20,708 ± 1,040 20,76 ± 0,952 21,818 ± 1,845
3. Hasil perhitungan LD50
Berdasarkan hasil pengamatan jumlah hewan uji yang mati selama 14 hari
menunjukkan bahwa dengan pemberian sediaan uji tunggal secara peroral pada
mencit putih betina sampai dengan dosis maksimal yang dapat diberikan secara
teknis pada hewan uji yaitu 5000mg/kgBB hewan ujiternyata tidak menimbulkan
kematian pada hewan uji, sehingga ketoksikan akut pada sediaan uji ini tidak
dapat ditentukan. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat dikatakan
bahwa ekstrak rimpang temu putih memiliki nilai LD50 lebih dari 5000 mg/kgBB,
yang sesuai dengan teori termasuk klasifikasi praktis tidak toksik (Lu 1995).
Jumlah hewan uji yang mati pada pemberiaan sediaan uji ekstrak etanolik rimpang
temu putih dapat dilihat pada tabel 10.di bawah ini.
Tabel 10. Hasil jumlah hewan uji yang mati
Kelompok Dosis sediaan
uji (mg/kgBB)
Jumlah hewan
uji
Jumlah hewan
uji yang mati LD50
Kontrol negatif 0,5% 5 0
Lebih dari
dosis tertinggi
5000 mg/kgBB
Dosis I 5 mg/kgBB 5 0
Dosis II 50 mg/kgBB 5 0
Dosis III 300 mg/kgBB 5 0
Dosis IV 2000mg/kgBB 5 0
Dosis V 5000mg/kgBB 5 0
4. Hasil penimbangan berat organ
Berdasarkan pengamatan setelah hari ke-14 hewan uji yang masih hidup
dikorbankan dengan cara dibius menggunakan kloroform, kemudian dibedah
untuk diambil paru-paru, hati, jantung, ginjal, usus, limfa, dan lambung, kemudian
57
57
ditimbang dan dihitung indeks massa organ. Hasil penimbangan berat organ
hewan uji dapat dilihat pada lampiran 14.dari data yang didapat dapat diperoleh
hasil indeks masing-masing organ, dan tabel dibawah ini adalah rata-rata indeks
berat organ. Parameter indeks organ ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh
senyawa uji terhadap perkembangan organ.
Tabel11. Hasil rata-rata indeks massa organ hewan uji
Kelompok Rata-rata indeks berat organ (gram)±SD (n=5)
Paru-paru Jantung Hati Ginjal Usus Limfa Lambung
Kelompok
negatif
0,0086 ±
0,0026
0,0056*±
0,0015
0,0443 ±
0,0086
0,0325 ±
0,0465
0,1123
±0,0078
0,0100 ±
0,0027
0,0206*±
0,0035
Dosis I 0,0080 ±
0,0018 0,0034*±0,0003
0,0490 ±
0,0071
0,0145 ±
0,0019
0,1296 ±
0,0142
0,0055 ±
0,00156
0,0485*±
0,2015
Dosis II 0,0077 ±
0,0012
0,0050 *±
0,0013
0,0404 ±
0,008
0,0149 ±
0,0022
0,1055 ±
0,0197
0,0080 ±
0,0032
0,0240*±
0,0088
Dosis III 0,077 ±
0,0022
0,0030*±
0,0003
0,0445 ±
0,009
0,0121 ±
0,0017
0,1126 ±
0,0223
0,0104 ±
0,0034
0,0371*±
0,0088
Dosis IV 0,0059 ±
0,0016
0,0024*±
0,0006
0,0463
± 0,0081
0,0123
± 0,0026
0,1091 ±
0,0085
0,0072 ±
0,0028
0,0271*±
0,0078
Dosis V 0,0086 ±
0,002 0,0044*± 0,001
0,0582 ±
0,0082
0,0176 ±
0,0035
0,1331 ±
0,0223
0,0105 ±
0,0014
0,0321*±
0,0075
Keterangan : P<0,05 = ada perbedaan (*), P<0,05 = tidak ada perbedaan
Berdasarkan rata-rata indeks berat organ, dapat dilihat bahwa organ
lambung memiliki perbedaan berat antar kelompok perlakuan. Hal ini dikarenakan
senyawa kimia yang masuk ke dalam tubuh sebagian besar masuk melalui rute
oral sehingga organ lambung dapat terpapar senyawa toksik pada awal pemejanan.
Saluran cerna merupakan tempat utama absorpsi racun atau senyawa yang
diberikan secara oral. Senyawa tersebut tidak akan sebagai racun apabila belum
diabsorbsi oleh saluran cerna, kecuali apabila senyawa tersebut bersifat iritatif
terhadap saluran cerna (Donatus, 2005). Salah satu gangguan pada saluran cerna
58
58
adalah gastritis, yaitu suatu oeradangan mukosa lambung yang dapat bersifat akut,
kronik, difus, dan lokal (Price, dan Wilson 2002).
Data perhitungan indeks masing-masing organ yang telah diperoleh
kemudiaan dianalisis menggunakan SPSS. Pada organ hati, paru, jantung, usus,
dan limfa menunjukkan bahwa data indeks berat organ tersebut normal, sehingga
dilanjutkan uji One Way Anova. Hasil uji Anova menunjukkan data indeks organ
hati, paru, usus, dan limfa memiliki nilai signifikasi >0,05 yang berarti tidak
menunjukkan adanya perbedaan pada data indeks berat organ tersebut, sedangkan
pada data indeks organ jantung menunjukkan nilai signifikasi <0,05 yang berarti
adanya perbedaan, dan dapat dilanjutkan uji Post hoc. Hasil uji tersebut
menunjukkan bahwa data indeks berat organ jantung tidak memiliki perbedaan
yang bermakna.
Data organ ginjal, dan lambung menunjukkan bahwa data indeks berat
organ tersebut tidak terdistribusi normal, sehingga dilanjutkan uji Kruskall-Wallis.
Dari hasil uji tersebut menunjukkan bahwa data indeks organ ginjal memiliki nilai
signifikasi >0,05yang berarti data indeks organ tersebut tidak memiliki perbedaan
antar kelompok, sedangkan pada data indeks organ lambung memiliki nilai
signifikasi <0,05 yang berarti ada perbedaan dan dilanjutkan uji Man-Whitney.
Hasiluji tersebut menunjukkan perbedaan bermakna antara kelompok kontrol
negatif dengan kelompok dosis I, II, dan III.
5. Hasil pemeriksaan organ secara makroskopis
Organ mencit yang sudah ditimbang dilakukan pengamatan secara
makroskopis yang meliputi bentuk dan warna organ.Dari hasil pengamatan secara
59
59
makroskopis terlihat tidak ada perbedaan antara kelompok kontrol negatif dengan
kelompok dosis. Semua organ tidak mengalami kerusakan pada semua mecit. Dari
hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa sedian uji ekstrak
etanolik rimpang temu putih tidak memberikan pengaruh terhadap semua organ
hewan uji bila dilihat secara makroskopis, seperti terlihat pada lampiran 7.
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan dari hasil penelitian dan pembahasan dapat ditarik
kesimpulan sebagai berikut :
1. Ekstrak etanolik rimpang temu putih pada dosis 5000 mg/kgBB hewan
ujitidak menunjukkan efek toksisitas akut terhadap mencit putih betina.
2. Nilai LD50 yang didapat dari hasil uji toksisitas akut ekstrak rimpang
temu putih yaitu lebih besar dari 5000 mg/kgBBhewan uji, sehingga
dapat dikategorikan cukup toksik.
60
60
3. Ekstrak temu putih mempegaruhi kenaikan berat badan hewan uji, dan
perhitungan indeks organ lambung menunjukkan adanya perbedaan
antar kelompok.
B. Saran
Berdasarkan analisa data dan kesimpulan, penulis memberikan saran, yaitu
perlu dilakukan penelitian lanjutan mengenai uji toksisitas dengan metode yang
berbeda agar di dapatkan informasi lebih mendalam sehingga dapat dijadikan
acuan untuk penelitian selanjutnya.
iii
iii
DAFTAR PUSTAKA
[BPOM]. 2014. Peraturan Kepala Bandan Pengawas Obat Dan Makanan Nomor
7 Tentang Pedoman Uji Toksisitas Non Klinik Secara In Vivo. Jakarta:
Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik Indonesia. Hlm 16-26.
[Depkes]. 1978. Farmakope Indonesia. Edisi III Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Hlm XXX, 65, 96, 672.
[Depkes]. 1979. Farmakope Indonesia. Jilid IV. Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Hlm 519.
[Depkes]. 1985a. Tanaman Obat Indonesia. Jilid ke-1. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.Hlm 15.
[Depkes].1985b. Cara Membuat Simplisia. Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Hlm 7.
[Depkes]. 1986. Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Hlm 3-5, 17.
[Depkes].1993. Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Jilid II. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hlm 167.
[Depkes].1995. Materia Medika Indonesia.Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hlm 324-325, 327.
Aditianingrum, Kurnia Alysia. 2015. Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Rimpang
Temu Putih Terhadap Larva Udang Dan Embrio Ikan Zebra Yang
Menggunakan Metode Uji BSLT, ZFET, Serta Analisis Dengan Instrumen
KCKT dan GC-MS[Skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika Dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Akbar, Budhi. 2010.Tumbuhan Dengan Kandungan Senyawa Aktif yang
Berpotensi Sebagai Bahan Antifertilitas.Jakarta: Adabia Press. Hlm 6.
Alexander, Dewi., Alam, Gemini., Kondar, Willem. 2001. Pengaruh Ekstrak
Rimpang Temu putih (Curcuma zedoaria) Terhadap Kadar Asam Urat
Pada Kelinci.Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol: 15, No : 2, hlmn :
89-94.
Anief, Moh. 2000. Ilmu Meracik Obat.Yogyakarta : Gadjah Mada University
Press. Hal 169.
Ansel C.H. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi ke-4. Farida,
Ibrahim, penerjemah; Jakarta: UI-press. Hlm 605-608.
Dalimartha, Setiawan. 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 3. Jakarta:
Puspa Swara. Hlm 170-173.
Dede, Sukandar., Hermanto, S., Lestari, Emi. 2007. Uji Toksisitas Ekstrak Daun
Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dengan Metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT). Jakarta: Universitas UIN Syarif
Hidayatullah, Program Studi Kimia Fakultas Sains dan Teknologi. Hlmn
63-70.
Donatus, I.A. 2005. Toksikologi Dasar. Edisi II. Yogyakarta : Universitas Gajah
Mada, Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi. Hlm
117-149, 187-197.
Ganiswara. 1995. Farmakologi dan Terapi edisi 4. Jakarta: Universitas Indonesia
Press. Hlm 755-766.
iv
iv
Green, L. Earl. 1996. Biology Of The Laboratory Mouse Second Revised Edition.
New York: Dover Publication Inc. hlm 755.
Gunawan, Didik &Mulyani, Sri. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Jilid 1.
Jakarta: Penebar Swadaya. Hlm 67-69.
Handajani, Noor Soesanti. 2003. Aktivitas Sitostatika Temu Putih (Curcuma
zedoaria (Berg) Roscoe) pada Sel-sel Spermatogenik Mencit (Mus
musculus L.).BioSmart, Volume 5, No: 2, hlmn : 120-123.
Harmita & Maksum Radji. 2004. Analisis Hayati. Jakarta: Departemen Farmasi
FMIPA, Universitas Indonesia.Hlm 47-55.
Hedrawati, Anindita Rosenda Eka. 2009. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol
Daun Kemangi (Ocimum Sactum Linn.) Terhadap Larva Artemia Salina
Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)[Tesis].
Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Huang, M.T., M. Ms, Y.R. Lou, Y.P. Lu, R. Chang, H. Newemark, and A.H.
Coney. 1995. Inhibitory Effect Of Curcumin On Tumorgenesis in Mice.
Proceeding ISCP: 47-63.
Loomis, S.L. 1978. Toksikologi Dasar. Edisi III. Donatus, I.A, penerjemah.Insitut
Keguruan dan Ilmu Pengetahuan. Semarang: Semarang Press. Hlm 228-
233.
Lu, C. Frank. 1995. Toksikologi Dasar. Edisi II. Jakarta: UI Press.Hlm 86-93.
Muhlisah, Fauziah. 1999. Temu-Temuan Dan Empon-Empon (Budi Daya dan
Manfaatnya). Yogyakarta: Penerbit Kanisus. Hlm 77-79.
Mursito, Bambang. 2001. Ramuan Tradisional Untuk Gangguan Ginjal. Jakarta:
Penebar Swadaya. Hlm 138.
Mursito, Bambang. 2007. Ramuan Tradisional Untuk Gangguan Ginjal. Cetakan
5. Jakarta: Penebar Swadaya. Hlm 77.
Murwanti, Retno., Meiyanto, Edy., Nurrochmad, Arief. and Kristina, Susi Ari.
2004. Efek Ekstrak Etanol Rimpang Temu Putih (Curcuma zedoaria
Rosc.) Terhadap Pertumbuhan Tumor Paru Fase Post Inisiasi Pada Mencit
Betina Diinduksi Benzo(a)piren. Majalah Farmasi Indonesia, 15(1), 7-12.
Pamplona, Chistiane Regina., Souza, Marcia Maria de., Machando, Marina da
Silvia., Filho, Valdir Cechinel., Navarro, Dionezine., Yunes, Rosendo
Augusto., Monache, Franco Delle., and Niero, Rivaldo. 2006. Seasonal
Variation and Analgesic Properties of Different Part From Curcuma
zedoaria Roscoe (Zingiberaceae) Grow in Brazil. Z.Naturforsh, 61C,hlmn:
6-10.
Paramapojn, Sompol & Gritsanapan, Wandee. 2009. Free Radical Scavenging
Activity Determination and Quantitative Analysis Of Curcumin in
Curcuma zedoaria Rhizome Extracts by HPLC Method. Current
Science,Vol. 97, No. 77: hlmn : 1069-1073.
Pinilih, Woro Dyah. 2006. Aktivitas Antipoliferasi Subfraksi C1 Rimpang Temu
Putih Pada Sel Lestari Tumor Secara In Vitro [Skripsi]. Bogor: Fakultas
Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Prasetyo, Samuel Meinardus Dwi. 2014. Formulasi Sediaan Krim Ekstrak Etanol
Rimpang Temu Putih Dengan Pengujian Aktivitas Sebagai Antiinflamasi
[Skripsi]. Yogyakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma.
v
v
Price, Sylvia Anderson & Wilson, Lorraine McCarty. 2006. Patofisiologi: Konsep
Klinis Proses-proses Penyakit. Edisi 5 & 6. Terjemahan dari
Pathopysiology: Clinical Concepts of Disease Processes. Alih bahasa:
Brahm U. Pendit, Huriawati Hartanto, Pita Wulansari, Dewi Asih
Maharani. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hlm 467, 769-795.
Putra S., Data. 2010. Efek Pemberian Ekstrak Etanol Rimpang Temu Putih
Terhadap Gambaran Klinis Kelinci (Oryctolagus Cuniculus) Pada Proses
Pembentukan Tumor Mammary Yang Diinduksi Dengan Metil N-
Nitrosourea[Skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut
Pertanian Bogor.
Rahman, Syarifah Nur Syed Abdul., Wahid, Norhanom Abdul., Nurestri, Sri.
2013. In Vitro Morphologial Assessment of Apoptosis Induced by
Antipoliferative Constituents from the Rhizomes of Curcuma zedoaria.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: hlmn: 1-14.
Rita, Wiwik Susanah. 2010. Isolasi, Identifikasi, dan Uji Aktivitas Antibakteri
Senyawa Golongan Triterpenoid Pada Rimpang Temu Putih (Curcuma
zedoaria (Berg.) Roscoe).Bukit Jimbaran: Universitas Udayana, Jurusan
Kimia FMIPA. Hlmn: 20-26.
Rita, Wiwik Susanah., Swantara, I Made Dira., Sughita, I Made., Puspawati, Ni
Made., Setiani, Lestari Mamik. 2011. Uji Toksisitas dan Analisis
Kandungan Senyawa Minyak Atsiri Rimpang Temu Putih (Curcuma
zedoaria (Berg.)Rosc.).Universitas Udayana, Jurusan Kimia FMIPA,
jurusan Ilmu dan Teknologi Pangan Fakultas Teknologi Pertanian. Hlm
97-102.
Rita, Wiwik Susanah., Bawa, I G.A. Gede., Wirastiningsih, Ni Luh Putu Lilis.
2012. Skrining Awal Antitumor Melalui Pendekatan Uji Toksisitas
Kandungan Senyawa Dalam Ekstrak n-heksana Rimpang Temu Putiih
(Curcuma zedoaria (Berg.) Roscoe).Bukit Jimbaran: Universitas
Udayana, Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam. Hlmn: 55-61.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke-4
Terjemahan Kokasih Padmawinata.ITB Press. Bandung. Hlm 71-72, 156-
157, 191-193.
Rukmana, Rahmat. 2004. Temu-temuan Apotik Hidup di Pekarangan.
Yogyakarta: Kanisius. Hlm 60.
Sembiring, Wulan Sari RG dan Suarnella, Dodo Tandi. 2012. Effectiveness Of
White Tumeric Curcuma zedoaria Rhizome Essential Oil As Larvacide On
Aedes Aegypti. Jurnal Epidemiologi dan Penyakit Bersumber Binatang
(Epidemiology and Zoonosis Journal), Vo. 4, No. 2, hlmn.80-86.
Smith BJ, Mangkoewidjojo S. 1998. Pemeliharaan dan Pengunaan Hewan
Percobaan di Daerah Tropis.Jakarta: Universitas Indonesia Press. Hlm 37-
57.
Sudarmadji S, Haryono B, Suhardi. 2003. Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian. Yogyakarta: Liberty Yogyakarta. Hlm64-66.
vi
vi
Sumardjo, Damin. 2009. Pengantar Kimia: Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Kedokteran dan Program Strata I Fakultas Bioeksakta. Jakarta: Penerbit
Buku Kedokteran EGC. Hlm 565.
Supriadi dkk. 2001. Tumbuhan Obat Indonesia Penggunaan dan Khasiatnya.
Edisi I. Pustaka Populer. Hlm 135.
Syamsuni.2006. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi. Jakarta: Penerbit
Buku Kedokteran, hlmn: 47-48.
Syu, Wan-Jr., Shen, Chien-Chan., Don, Ming Jaw., Ou, Jun Chih., Lee, Gene
Hsiang., and Sun, Chang Ming. 1998. Cytotoxicity Of Curcuminoids and
Some Novel Compounds From Curcuma zedoaria. Journal of Natural
Product, 61(12), hlm 1531-1534.
Verawati, Anis. 2003. Pengenalan & Pengembangan Temu Putih. Malang:
Universitas Brawijaya. Hlm 17-27.
Voigt, Rudolf. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Diterjemahkan Oleh
Soenandadi Noerono Soewandhi. Edisi Ke-5. Yogyakarta: Universitas
Gadjah Mada Press. Hlm 561-563, 565-567.
vii
vii
Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman rimpang temu putih
viii
viii
Lampiran 2. Surat keterangan hewan uji
ix
ix
Lampiran 3. Gambar rimpang temu putih
Tanaman rimpang temu putih
Rimpang temu putih
Rimpang temu putih kering Serbuk rimpang temu putih
x
x
Lampiran 4. Alat maserasi dan Sterling bidwel rimpang temu putih
Botol maserasi
Alat rotary evaporator
Mesin penggiling
Proses Sterlling Bidwell
xi
xi
Lampiran 5. Ekstrak rimpang temu putih dan uji bebas etanol
Ekstrak rimpang temu putih
Hasil uji identifikasi bebas etanol
xii
xii
Lampiran 6. Perlakuan hewan uji
Pemberian peroral
Proses pembedahan
Mencit yang sudah dibedah
Mencit putih betina
xiii
xiii
Lampiran 7. Gambar organ hewan uji
Gambar 14. kontrol negatif no. 2
Gambar no. 15 kelompok dosis I mencit no.2
Keterangan : A = Hati B = Usus, C = Ginjal, D = Jantung,
E = Lambung, F = Limfa, G = paru
A
B
C
D
E
F G
A
B
C
D
E
F
G
xiv
xiv
Gambar 16. Kelompok dosis II mencit no.2
Gambar 17. Kelompok dosis III mencit no.2
Keterangan : A = Hati B = Usus, C = Ginjal, D = Jantung,
E = Lambung, F = Limfa, G = paru
A
B
C
D
E
F
G
A
B
C
D
E
F
G
xv
xv
Gambar 18. Kelompok dosis IV mencit no.2
Gambar 19. Kelompok dosis V mencit no.2
Keterangan : A = Hati B = Usus, C = Ginjal, D = Jantung,
E = Lambung, F = Limfa, G = paru
A
B
C
D
E
F
G
A
B D
C
E
F
G
xvi
xvi
Lampiran 8. Uji identifikasi ekstrak rimpang temu putih
Serbuk
Ekstrak
Gambar 20. Uji identifikasi saponin
Serbuk
Ekstrak
Gambar 21. Uji identifikasi flavonoid
xvii
xvii
Serbuk
Ekstrak
Gambar 22. Uji identifikasi tanin
Serbuk
Ekstrak
Gambar 23. Uji identifikasi alkaloid
xviii
xviii
Lampiran 9. Hasil persentase rendemen berat kering terhadap berat basah rimpang
temu putih
Data hasi penelitian diperoleh data sebagai berikut :
Berat basah (g) Berat kering (g) Persentase (%)
6500 1250 19,23
Perhitungan % rendemen beratt kering terhadap berat basah :
% Rendemen =
x 100%
=
x 100%
= 19,23%
Jadi, persentase rendemen berat kering terhadap berat basah rimpang temu putih adalah 19,23%
Lampiran 10. Hasil rendemen ekstrak etanolik rimpang temu putih
Dari hasil penelitian diperoleh data sebagai berikut :
Berat simplisia
(g)
Berat wadah
kosong (g)
Berat wadah +
ekstrak (g)
Ekstrak (g) Rendemen (%)
500 184.8 228.1 43.3 8.66
% Rendemen =
x 100%
=
x 100%
= 8.66 %
Jadi, persentase rendemen ekstrak etanolik rimpang temu putih adalah 8.66 %
xix
xix
Lampiran 11. Hasil penetapan kadar air serbuk rimpang temu putih
Dari hasil peneitian dapat diperoleh :
No. Berat awal (gr) Volume akhir (ml) Kadar air (%)
1 20 1.9 9.5
2 20 1.6 8
3 20 1.4 7
Rata-rata 8.17
Kadar air no.1 =
= 9.5 %
Kadar air no.2 =
= 8 %
Kadar air no.3 =
= 7 %
Rata-rata kadar air serbuk rimpang temu putih adalah =
Jadi, hasil rata-rata penetapan kadar air serbuk rimpang temu putih adalah 8.17%
Lampiran 12. Perhitungan volume pemberian
Kelompok I (CMC Na 0,5%)
Larutan stock :
=
Mencit 1 : 32,91 g
Mencit 2 : 20,04 g
Mencit 3 : 21,91 g
Mencit 4 : 23,25g
Mencit 5 : 22,26 g
Kelompok II (5 mg/kgBB)
Larutan stock :
=
=
Dosis : 5 mg/kgBB = 0.1 mg/20gBB
Contoh perhitungan kelompok II mencit 1
Dosis untuk mencit 20.41g =
x 0.1 mg = 0.102 mg
Volume pemberian =
x 20 ml = 0.204 ml
Kelompok III (50 mg/kgBB)
Larutan stock :
=
Dosis : 50 mg/kgBB = 1 mg/20gBB
Contoh perhitungan kelompok III mencit 2
Diberikan 1 ml
xx
xx
Dosis untuk mencit 20.43 g =
x 1 mg = 1.021 mg
Volume pemberian =
x 20 ml = 0.204 ml
Kelompok IV (300 mg/kgBB)
Larutan stock :
=
Dosis : 300 mg/kgBB = 6 mg/20gBB
Contoh perhitungan kelompok IV mencit 3
Dosis untuk mencit 21.14 g =
x 6 mg = 6.342 mg
Volume pemberian =
x 20 ml = 0.126 ml
Kelompok V (2000 mg/kgBB)
Larutan stock :
=
Dosis : 2000 mg/kgBB = 40 mg/20gBB
Contoh perhitungan kelompok V mencit no.4
Dosis untuk mencit 20.93 g =
x 40 mg = 41.86 mg
Volume pemberian =
x 20 ml = 0.83 ml
Kelompok VI (5000 mg/kgBB)
Larutan stock :
=
Dosis : 5000 mg/kgBB = 100 mg/20gBB
Contoh perhitungan kelompok VI mencit 5
Dosis untuk mencit 20.05 g =
x 100 mg = 100.25 mg
Volume pemberian =
x 10 ml = 0.2 ml
xxi
xxi
Lampiran 13. Hasil penimbangan berat badan mencit putih betina
Berat badan mencit
Kelompok No. Hewan
uji Hari ke-1 Hari ke-7 Hari ke-14
Kontrol
negatif
1 32,91 32,74 32,52
2 20,04 21,72 22,68
3 21,91 23,20 24,02
4 23,25 24,28 25,63
5 22,26 24,08 24,55
I
1 20,41 21,55 22,82
2 20,03 21,67 25,15
3 20,61 23,18 26,90
4 20,65 23,72 26,87
5 21,25 24,53 26,94
II
1 20,51 21,06 21,65
2 20,43 21,72 21,40
3 21,12 22,84 26,04
4 21,53 22,73 24,39
5 24,56 23,44 26,61
III
1 20,91 22,74 25,56
2 21,67 24,47 25,75
3 21,14 22,52 24,68
4 21,25 22,38 24,13
5 20,21 21,19 21,94
IV
1 22,57 24,32 26,62
2 21,73 24,12 27,30
3 20,24 22,62 24,03
4 20,93 23,72 26,08
5 23,25 26,39 29,98
V
1 22,41 22,22 24,36
2 20,06 20,19 21,59
3 21,01 21,24 22,93
4 20,01 20,06 20,10
5 20,05 20,09 20,11
xxii
xxii
Lampiran 14. Hasil penimbangan berat organ mencit putih betina
Kelompok
No.
hewan
uji
Berat organ mencit
Paru-paru Jantung Hati Ginjal Usus Limfa Lambung
Kontrol
negatif
1 0,32 0,19 1,54 0,28 3,87 0,32 0,64
2 0,29 0,14 0,7 0,28 2,31 0,23 0,52
3 0,16 0,08 1 0,32 2,78 0,14 0,58
4 0,18 0,15 1,17 0,34 2,7 0,34 0,55
5 0,15 0,07 1,34 0,32 2,9 0,28 0,37
I
1 0,14 0,08 1,35 0,32 3,4 0,15 1,3
2 0,25 0,08 1,1 0,39 3,42 0,13 1,27
3 0,2 0,09 1,2 0,38 3,14 0,17 0,92
4 0,17 0,09 1,13 0,32 3,2 0,08 2,04
5 0,26 0,11 1,39 0,46 3,35 0,18 0,66
II
1 0,18 0,09 1,12 0,36 2,78 0,15 0,66
2 0,18 0,11 0,93 0,34 2,56 0,28 0,64
3 0,18 0,13 1,01 0,38 2,79 0,2 0,86
4 0,14 0,12 0,89 0,3 2,1 0,12 0,56
5 0,16 0,05 0,8 0,3 2,24 0,14 0,3
III
1 0,14 0,07 0,93 0,33 2,06 0,12 0,7
2 0,21 0,08 0,95 0,25 2,68 0.,23 0,93
3 0,22 0,07 0,98 0,27 2,71 0,29 0,82
4 0,26 0,07 1,29 0,31 3,1 0,26 1,22
5 0,12 0,08 1,24 0,31 3,03 0,3 0,7
IV
1 0,19 0,07 1,05 0,39 2,91 0,32 0,92
2 0,13 0,07 1,29 0,29 3,01 0,21 0,6
3 0,12 0,08 1 0,33 2,63 0,15 0,47
4 0,12 0,04 1,06 0,3 3,14 0,13 0,55
5 0,25 0,06 0,81 0,25 2,89 0,16 1,07
V
1 0,13 0,09 1,12 0,32 2,35 0,24 0,53
2 0,2 0,08 1,16 0,34 2,75 0,25 0,82
3 0,24 0,13 1,43 0,39 3,29 0,25 0,92
4 0,17 0,11 1,32 0,44 2,97 0,17 0,55
5 0,14 0,07 1,28 0,41 3,03 0,24 0,67
xxiii
xxiii
ampiran 15. Hasil perhitungan indeks berat organ mencit putih betina
Kelompok
No.
hewan
uji
Indeks berat organ mencit (%)
Paru-
paru Jantung Hati Ginjal Usus Limfa Lambung
Kontrol
negatif
1 0.0098 0.0098 0.0473 0.0086 0.1190 0.0098 0.0196
2 0.0127 0.0061 0.0317 0.0123 0.1018 0.0101 0.0229
3 0.0066 0.0033 0.0424 0.1157 0.1157 0.0058 0.0241
4 0.0073 0.0058 0.0456 0.0132 0.1069 0.0132 0.0214
5 0.0067 0.0028 0.0545 0.0130 0.1181 0.0114 0.0150
Rata-rata 0.0086 0.0056 0.0443 0.0325 0.1123 0.0100 0.0206
I
1 0.0061 0.0035 0.0591 0.0140 0.1511 0.0065 0.0578
2 0.0099 0.0031 0.0457 0.0155 0.1359 0.0051 0.0504
3 0.0081 0.0033 0.0468 0.0141 0.1167 0.0063 0. 3420
4 0.0063 0.0033 0.0420 0.0119 0.1198 0.0029 0.0759
5 0.0096 0.0040 0.0515 0.0170 0.1243 0.0066 0.0244
Rata-rata 0.0080 0.0034 0.0490 0.0145 0.1296 0.0055 0.0485
II
1 0.0083 0.0046 0.0517 0.0166 0.1284 0.0069 0.0304
2 0.0084 0.0051 0.0434 0.0158 0.1196 0.0130 0.0299
3 0.0069 0.0049 0.0387 0.0145 0.1071 0.0099 0.0299
4 0.0057 0.0049 0.0364 0.0143 0.0881 0.0049 0.0299
5 0.0060 0.0056 0.0315 0.0135 0.0841 0.0052 0.0139
Rata-rata 0.0070 0.0050 0.0404 0.0149 0.1055 0.0080 0.0240
III
1 0.0054 0.0027 0.0363 0.0129 0.0805 0.0046 0.0297
2 0.0081 0.0031 0.0368 0.0097 0.1040 0.0089 0.0361
3 0.0089 0.0028 0.0397 0.0109 0.1098 0.0117 0.0332
4 0.0107 0.0029 0.0534 0.0128 0.1305 0.0107 0.0505
5 0.0054 0.0036 0.0565 0.0141 0.1381 0.0159 0.0360
Rata-rata 0.0077 0.0030 0.0445 0.0121 0.1126 0.0104 0.0371
IV
1 0.0071 0.0026 0.0394 0.0146 0.1093 00120 0.0345
2 0.0047 0.0025 0.0472 0.0106 0.1101 0.0076 0.0248
3 0.0049 0.0033 0.0774 0.0137 0.1094 0.0062 0.0195
4 0.0046 0.0015 0.0406 0.0145 0.1203 0.0049 0.0210
5 0.0083 0.0020 0.0270 0.0083 0.0963 0.0053 0.0356
Rata-rata 0.0059 0.0024 0.0463 0.0123 0.1091 0.0072 0.0271
V
1 0.0053 0.0036 0.0459 0.0131 0.0964 0.0098 0.0217
2 0.0120 0.0037 0.0537 0.0157 0.1273 0.0115 0.0379
3 0.0104 0.0056 0.0623 0.0170 0.1434 0.0109 0.0401
4 0.0084 0.0054 0.0656 0.0218 0.1477 0.0084 0.0273
5 0.0069 0.0034 0.0636 0.020 0.1506 0.0119 0.0331
Rata-rata 0.0086 0.0044 0.0582 0.0176 0.1331 0.0105 0.0321
xxiv
xxiv
Lampiran 16. Contoh perhitungan indeks massa organ mencit
Mencit no.2 kelompok II (ekstrak rimpng temu putih 5 mg/kgBB)
Paru-paru =
= 0.0099 %
Jantung =
= 0.0031 %
Hati =
= 0.0457 %
Ginjal =
= 0.0155 %
Usus =
= 0.1359 %
Limfa =
= 0.0051 %
Lambung =
= 0.0504 %
Rumus indeks massa organ = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛 𝑔𝑟𝑎𝑚
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑏𝑎𝑑𝑎𝑛 𝑔𝑟𝑎𝑚 𝑥
xxv
xxv
Lampiran 17. Pengamatan gejala toksisitas
Grooming
Kelompok
No.
Hewan
uji
Jam pengamatan
Jam
ke-0
Jam ke-
0.5
Jam
ke-1
Jam
ke-2
Jam
ke-6
Jam
ke-12
Jam
ke-24
Kontrol
negatif
1 - √ √ √ - - -
2 - √ - - - - -
3 - √ √ √ - - -
4 - - - - - - -
5 - √ - - - - -
Dosis I
1 - √ √ √ - - -
2 - √ √ √ - -
3 - - √ √ - - -
4 - √ √ √ - - -
5 - √ √ √ - - -
Dosis II
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - √ √ √ - - -
5 - √ √ √ √ - -
Dosis III
1 - √ √ √ - - -
2 - - √ √ √ - -
3 - - √ √ √ - -
4 - - √ √ - - -
5 - √ √ √ √ - -
Dosis IV
1 - √ √ √ - - -
2 - √ √ √ - - -
3 - √ √ √ - - -
4 - √ √ √ - - -
5 - √ √ √ - - -
Dosis V
1 - √ √ √ - - -
2 - √ √ √ - - -
3 - √ √ √ - - -
4 - √ √ √ - - -
5 - √ √ √ - - -
Keterangan : √ = mengalami kejadiaan toksisitas
- = tidsk mengalami kejadian toksisitas
xxvi
xxvi
Aktivitas spontan
Kelompok
No.
Hewan
uji
Jam pengamatan
Jam
ke-0
Jam
ke -
0.5
Jam
ke-1
Jam
ke-2
Jam
ke-6
Jam
ke-12
Jam ke-24
Kontrol
negatif
1 - - - - - - -
2 - - √ √ - - -
3 - √ - - - - -
4 - √ - - - - -
5 - - - - - - -
Dosis I
1 - - - - - - -
2 - - √ - - - -
3 - - - - - - -
4 - - - - - - -
5 - √ - - - -
Dosis II
1 - - - - - - -
2 - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - - √ - - - -
5 - - √ - - - -
Dosis III
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - √ - - - - -
5 - √ - - - - -
Dosis IV
1 - √ - - - - -
2 - - - - - -
3 - √ - - - - -
4 - √ - - - - -
5 - - - - - - -
Dosis V
1 - - - - - - -
2 - √ - - - - -
3 - √ - - - - -
4 - - - - - - -
5 - - - - - - -
Keterangan : √ = mengalami kejadiaan toksisitas
- = tidsk mengalami kejadian toksisitas
xxvii
xxvii
Tremor
Kelompok
No.
Hewan
uji
Jam pengamatan
Jam
ke-0
Jam ke
-0.5
Jam
ke-1
Jam
ke-2
Jam
ke-6
Jam
ke-12
Jam
ke-24
Kontrol
negatif
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - √ - - - -
4 - - √ - - - -
5 - √ - - - - -
Dosis I
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - - - - - - -
5 - - - - - --
Dosis II
1 - - √ - - - -
2 - √ - - -
3 - - - - - - -
4 - √ - - - -
5 - - - - - - -
Dosis III
1 - - - - - - -
2 - - √ - - - -
3 - - √ - - - -
4 - - - - - - -
5 - - √ - - - -
Dosis IV
1 √ - - - -
2 - √ - - - -
3 - - √ - - - -
4 - - √ - - - -
5 - √ - - - - -
Dosis V
1 - - √ - - - -
2 - √ - - - - -
3 - √ - - - -
4 - √ - - - - -
5 - √ - - - - -
Keterangan : √ = mengalami kejadiaan toksisitas
- = tidsk mengalami kejadian toksisitas
xxviii
xxviii
Piroleksi
Kelompok
No.
Hewan
uji
Jam pengamatan
Jam
ke-0
Jam ke
-0.5
Jam
ke-1
Jam
ke-2
Jam
ke-6
Jam
ke-12
Jam
ke-24
Kontrol
negatif
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - - - - - - -
5 - - - - - - -
Dosis I
1 - - - - - - -
2 - - - - - - -
3 - - - - - - -
4 - - - - - - -
5 - - - - - - -
Dosis II
1 - - - - - √ √
2 - - - - - √ √
3 - - - - - √ √
4 - - - - - √ √
5 - - - - - √ √
Dosis III
1 - - - - - √ √
2 - - - - - √ √
3 - - - - - √ √
4 - - - - - √ √
5 - - - - - √ √
Dosis IV
1 - - - - √ √ √
2 - - - - √ √ √
3 - - - - √ √ √
4 - - - - √ √ √
5 - - - - √ √ √
Dosis V
1 - - - - √ √ √
2 - - - - √ √ √
3 - - - - √ √ √
4 - - - - √ √ √
5 - - - - √ √ √
Keterangan : √ = mengalami kejadiaan toksisitas
- = tidsk mengalami kejadian toksisitas
xxix
xxix
Lampiran 18. Uji statistik berat badan hari ke-1.
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap data kenaikan berat badan
mencit putih betina pada hari ke-1
Tests of Normality
Dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Hari 1 kontrol negatif .364 5 .029 .765 5 .041
dosis I .246 5 .200* .961 5 .813
dosis II .323 5 .095 .775 5 .050
dosis III .207 5 .200* .958 5 .791
dosis IV .152 5 .200* .977 5 .921
dosis V .333 5 .072 .771 5 .046
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga data kenaikan berat badan mencit putih betina
pada hari pertama tidak terdistribusi normal. Dilanjutkan dengan uji Kruskall-
Wallis karena tidak memenuhi syarat untuk dilakukan uji ANAVA
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap data kenaikan berat badan mencit
putih betina pada hari ke-1
Test of Homogeneity of Variances
Hari 1
Levene Statistic df1 df2 Sig.
3.537 5 24 .015
Nilai signifikai < 0,05
xxx
xxx
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga varian data berat badan pada hari pertama tidak
homogen.
3. Uji Kruskal-Wallis
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Dosis N Mean Rank
Hari 1 kontrol negatif 5 21.50
dosis I 5 10.30
dosis II 5 16.80
dosis III 5 15.10
dosis IV 5 19.30
dosis V 5 10.00
Total 30
Test Statisticsa,b
hari1
Chi-Square 7.073
df 5
Asymp. Sig. .215
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: dosis
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima, berarti terdapat tidak perbedaan yang bermakna pada
tiap kelompok.
xxxi
xxxi
Lampiran 19. Uji statistik berat badan hari ke-7
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap data kenaikan berat badan
mencit putih betina pada hari ke-7
Tests of Normality
Dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Hari 7 kontrol negatif .346 4 . .818 4 .139
dosis I .242 5 .200* .867 5 .256
dosis II .221 5 .200* .956 5 .782
dosis III .266 5 .200* .872 5 .275
dosis IV .257 5 .200* .884 5 .328
dosis V .269 5 .200* .819 5 .115
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat badan mencit putih betina pada hari
ketujuh terdistribusi normal.
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap data kenaikan berat badan mencit
putih betina pada hari ke-7
Test of Homogeneity of Variances
Hari 7
Levene Statistic df1 df2 Sig.
3.285 5 23 .022
Nilai signifikan < 0,05
Kesimpulan : Ho ditolak, berarti data kenaikan berat badan pada hari ke-7 pada
tiap kelompok tidak homogen.
3. Uji ANAVA satu arah terhadap berat badan mencit putih hari ke-7
xxxii
xxxii
ANOVA
Hari 7
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 30.322 5 6.064 1.138 .369
Within Groups 122.546 23 5.328
Total 152.868 28
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan disetiap data
berat badan mencit putih betina pada hari ke-7
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap berat bdan mencit putih betina pada hari
ke-7
Hari 7
Student-Newman-Keulsa,,b
Dosis N
Subset for alpha = 0.05
1
dosis V 5 22.0200
dosis II 5 22.5760
dosis I 5 22.8400
dosis III 5 23.1100
dosis IV 5 23.1940
kontrol negatif 4 25.4850
Sig. .224
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.800.
b. The group sizes are unequal. The harmonic mean of the group
sizes is used. Type I error levels are not guaranteed.
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan yang bermakna
disetiap data berat badan mencit putih betina pada hari ke-7
xxxiii
xxxiii
Lampiran 20. Uji statistik berat badan hari ke-14.
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap data kenaikan berat badan
mencit putih betina pada hari ke-14
Tests of Normality
Dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Hari 14 kontrol negatif .303 4 . .861 4 .264
dosis I .227 5 .200* .911 5 .473
dosis II .234 5 .200* .892 5 .367
dosis III .188 5 .200* .975 5 .905
dosis IV .179 6 .200* .983 6 .966
dosis V .223 5 .200* .906 5 .442
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat badan mencit putih betina pada hari
keempat belas terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap data kenaikan berat badan mencit
putih betina pada hari ke-14
Homogeneity of Variances
Hari 14
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.680 5 24 .178
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima, berarti terdapat data kenaikan berat badan pada hari
ke-14 pada tiap kelompok homogen.
xxxiv
xxxiv
3. Uji ANAVA satu arah terhadap berat badan mencit putih hari ke-14
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan disetiap data
berat badan mencit putih betina pada hari ke-14.
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap berat bdan mencit putih betina pada hari ke-
14
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan yang bermakna
disetiap data berat badan mencit putih betina pada hari ke-14.
ANOVA
Hari 14
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 66.050 5 13.210 2.114 .099
Within Groups 149.999 24 6.250
Total 216.049 29
hari14
Student-Newman-Keulsa,,b
dosis N
Subset for alpha = 0.05
1
dosis V 5 21.8180
dosis II 5 24.0840
dosis I 5 25.2580
dosis III 5 25.3460
dosis IV 6 25.9917
kontrol negatif 4 26.2125
Sig. .100
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.932.
b. The group sizes are unequal. The harmonic mean of the group
sizes is used. Type I error levels are not guaranteed.
xxxv
xxxv
Lampiran 21. Uji statistik indeks berat organ ginjal
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap berat organ ginjal pada mencit
putih betina
Tests of Normality
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
ginjal kontrol
negatif
.461 5 .001 .589 5 .000
dosis I .196 5 .200* .977 5 .916
dosis II .188 5 .200* .930 5 .596
dosis III .263 5 .200* .940 5 .666
dosis IV .287 5 .200* .898 5 .400
dosis V .182 5 .200* .965 5 .843
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga data berat organ ginjal pada mencit putih betina
tidak terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap berat organ ginjal pada mencit putih
betina
Test of Homogeneity of Variances
ginjal
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
6.240 5 24 .001
Nilai signifikasi < 0,05
xxxvi
xxxvi
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga varian data indeks berat organ ginjal tidak
homogen.
.
3. Uji Kruskal-Wallis
Kruskal-Wallis Test
Ranks
dosis N Mean Rank
ginjal kontrol
negatif
5 13.40
dosis I 5 18.20
dosis II 5 16.60
dosis III 5 9.60
dosis IV 5 11.40
dosis V 5 23.80
Total 30
Test Statisticsa,b
ginjal
Chi-Square 8.608
df 5
Asymp. Sig. .126
a. Kruskal Wallis Test
xxxvii
xxxvii
Test Statisticsa,b
ginjal
Chi-Square 8.608
df 5
Asymp. Sig. .126
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable:
dosis
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima, berarti terdapat tidak ada perbedaan yang bermakna
pada tiap kelompok.
Lampiran 22. Uji statistik indeks berat organ hati
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ hati pada
mencit putih betina
Tests of Normality
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
hati kontrol
negatif
.210 5 .200* .963 5 .829
dosis I .232 5 .200* .942 5 .680
dosis II .185 5 .200* .973 5 .895
xxxviii
xxxviii
dosis III .292 5 .189 .815 5 .107
dosis IV .281 5 .200* .881 5 .315
dosis V .290 5 .198 .880 5 .311
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ hati pada mencit putih betina
terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap berat organ hati pada mencit putih
betina
Test of Homogeneity of Variances
hati
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
1.099 5 24 .387
Nilai signifikasi > 0,05
Kesimpulan : Ho diterima, berarti data indeks organ hati pada tiap kelompok
homogen.
3. Uji ANAVA satu arah terhadap indeks organ hati pada mencit putih
ANOVA
hati
xxxix
xxxix
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .001 5 .000 1.641 .188
Within Groups .003 24 .000
Total .004 29
Nilai signifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan disetiap data
indeks organ hati pada mencit putih betina.
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap indeks berat organ hati pada mencit putih
betina
hati
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for
alpha = 0.05
1
dosis II 5 .040340
kontrol
negatif
5 .044300
dosis III 5 .044540
dosis IV 5 .046320
dosis I 5 .049020
dosis V 5 .058220
Sig. .126
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
xl
xl
hati
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for
alpha = 0.05
1
dosis II 5 .040340
kontrol
negatif
5 .044300
dosis III 5 .044540
dosis IV 5 .046320
dosis I 5 .049020
dosis V 5 .058220
Sig. .126
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size =
5.000.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat tidak ada perbedaan bermakna
disetiap data indeks berat organ hati pada mencit putih betina.
Lampiran 23. Uji statistik indeks berat organ jantung
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ jantung pada
mencit putih betina
Tests of Normality
xli
xli
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
jantung kontrol
negatif
.223 5 .200* .914 5 .494
dosis I .258 5 .200* .885 5 .334
dosis II .227 5 .200* .927 5 .579
dosis III .232 5 .200* .885 5 .334
dosis IV .172 5 .200* .984 5 .955
dosis V .326 5 .089 .790 5 .067
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ jantung pada mencit putih
betina terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap indeks berat organ jantung pada
mencit putih betina
Test of Homogeneity of Variances
jantung
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
4.686 5 24 .004
Nilai signifikasi <0,05
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga varian data indeks berat organ jantung pada
tidak homogen.
xlii
xlii
3. Uji ANAVA satu arah terhadap indeks organ jantung pada mencit putih
ANOVA
jantung
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .000 5 .000 4.607 .004
Within Groups .000 24 .000
Total .000 29
Nilai signifikasi < 0,04
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga terdapat ada perbedaan disetiap data indeks
berat organ jantung pada mencit putih betina.
Lampiran 24. Uji statistik indeks berat organ limfa
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ limfa pada
mencit putih betina
Tests of Normality
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
limfa kontrol
negatif
.262 5 .200* .942 5 .680
dosis I .300 5 .160 .801 5 .082
dosis II .223 5 .200* .899 5 .403
dosis III .173 5 .200* .987 5 .967
dosis IV .245 5 .200* .840 5 .166
dosis V .211 5 .200* .934 5 .622
xliii
xliii
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ jantung pada mencit putih
betina terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap indeks berat organ limfa pada mencit
putih betina
Test of Homogeneity of Variances
limfa
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.069 5 24 .402
Nilai signifikasinya >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga varian data indeks berat organ jantung
homogen.
3. Uji ANAVA satu arah terhadap indeks organ limfa pada mencit putih
ANOVA
limfa
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .000 5 .000 2.562 .054
Within Groups .000 24 .000
Total .000 29
Nilai signifikasi >0,05
xliv
xliv
Kesimpulan : Ho diterima sehingga tidak terdapat ada perbedaan disetiap data
indeks berat organlimfa pada mencit putih betina.
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap indeks berat organ limfa pada mencit putih
betina
limfa
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for
alpha = 0.05
1
dosis I 5 .005480
dosis IV 5 .007200
dosis II 5 .007980
kontrol
negatif
5 .010060
dosis III 5 .010360
dosis V 5 .010500
Sig. .096
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
xlv
xlv
limfa
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for
alpha = 0.05
1
dosis I 5 .005480
dosis IV 5 .007200
dosis II 5 .007980
kontrol
negatif
5 .010060
dosis III 5 .010360
dosis V 5 .010500
Sig. .096
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size =
5.000.
Nilai signifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga tidak ada perbedaan yang bermakna disetiap
data indeks berat organ limfa pada mencit putih betina.
Lampiran 25. Uji statistic indeks berat organ paru
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ paru pada
mencit putih betina
Tests of Normality
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
xlvi
xlvi
paru kontrol
negatif
.293 5 .187 .837 5 .157
dosis I .230 5 .200* .870 5 .268
dosis II .238 5 .200* .872 5 .274
dosis III .241 5 .200* .901 5 .413
dosis IV .328 5 .084 .815 5 .107
dosis V .150 5 .200* .981 5 .938
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ jantung pada mencit putih
betina terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap indeks berat organ paru pada mencit
putih betina
Test of Homogeneity of Variances
paru
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.025 5 24 .425
Nilai signifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga varian data indeks berat organ paru homogen.
3. Uji ANAVA satu arah terhadap indeks organ paru pada mencit putih
ANOVA
paru
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .000 5 .000 1.183 .347
Within Groups .000 24 .000
xlvii
xlvii
ANOVA
paru
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .000 5 .000 1.183 .347
Within Groups .000 24 .000
Total .000 29
Nilai signifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga tidak terdapat ada perbedaan disetiap data
indeks berat organ paru pada mencit putih betina
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap indeks berat organ limfa pada mencit putih
betina
paru
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for alpha
= 0.05
1
dosis IV 5 .005920
dosis II 5 .007060
dosis III 5 .007700
dosis I 5 .008000
dosis V 5 .008600
kontrol negatif 5 .008620
xlviii
xlviii
Sig. .363
Means for groups in homogeneous subsets are
displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.
Nilai signifikasi >0,363
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat ada perbedaan yang bermakna
disetiap data indeks berat organ paru pada mencit putih betina.
Lampiran 26. Uji statistik indeks berat organ usus
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ usus pada
mencit putih betina
Tests of Normality
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
usus kontrol negatif .273 5 .200* .871 5 .269
dosis I .246 5 .200* .903 5 .426
dosis II .216 5 .200* .923 5 .551
dosis III .184 5 .200* .958 5 .797
dosis IV .310 5 .130 .898 5 .396
dosis V .278 5 .200* .836 5 .154
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
xlix
xlix
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ usus pada mencit putih betina
terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap indeks berat organ usus pada mencit
putih betina
Test of Homogeneity of Variances
usus
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.965 5 24 .121
Nilai signifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga varian data indeks berat organ usus homogen.
3. Uji ANAVA satu arah terhadap indeks organ usus pada mencit putih
betina
ANOVA
usus
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .003 5 .001 2.278 .079
Within Groups .007 24 .000
Total .010 29
Nilai siginifikasi >0,05
Kesimpulan : Ho diterima sehingga tidak terdapat ada perbedaan disetiap data
indeks berat organ paru pada mencit putih betina
4. Uji Post hoc (SNK) terhadap indeks berat organ usus pada mencit putih
betina
l
l
usus
Student-Newman-Keulsa
dosis N
Subset for
alpha = 0.05
1
dosis II 5 .105460
dosis IV 5 .109080
kontrol
negatif
5 .112300
dosis III 5 .112580
dosis I 5 .129560
dosis V 5 .133080
Sig. .142
Means for groups in homogeneous
subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size =
5.000.
Nilai signifikasi >0,142
Kesimpulan : Ho diterima sehingga terdapat ada perbedaan yang bermakna
disetiap data indeks berat organ paru pada mencit putih betina.
Lampiran 27. Uji statistik indeks berat organ lambung
1. Uji normalitas (Saphiro-wilk) terhadap indeks berat organ lambung pada
mencit putih betina
Tests of Normality
li
li
dosis
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
lambung kontrol
negatif
.189 5 .200* .927 5 .576
dosis I .403 5 .008 .688 5 .007
dosis II .466 5 .001 .578 5 .000
dosis III .350 5 .044 .838 5 .159
dosis IV .238 5 .200* .857 5 .219
dosis V .181 5 .200* .952 5 .748
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Kesimpulan : Ho diterima sehingga data berat organ lambung pada mencit putih
betina terdistribusi normal
2. Uji homogenitas (Levene) terhadap indeks berat organ lambung pada
mencit putih betina
Test of Homogeneity of Variances
lambung
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
5.954 5 24 .001
Nilai signifikasi < 0,05
Kesimpulan : Ho ditolak sehingga varian data indeks berat organ lambung tidak
homogen.
lii
lii
3. Uji Kruskal-Wallis
Kruskal-Wallis Test
Ranks
dosis N Mean Rank
lambung kontrol
negatif
5 5.80
dosis I 5 24.60
dosis II 5 12.60
dosis III 5 20.80
dosis IV 5 12.00
dosis V 5 17.20
Total 30
Test Statisticsa,b
lambung
Chi-Square 14.758
df 5
Asymp. Sig. .011
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable:
dosis
Nilai signifikasi <0,05
liii
liii
Kesimpulan : Ho ditolak , berarti tidak terdapat perbedaan yang bermakna pada
tiap kelompok.
4. Uji Mann-Whitney
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung kontrol
negatif
5 3.00 15.00
dosis I 5 8.00 40.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Asymp. Sig. (2-tailed) .009
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
liv
liv
lambung kontrol negatif 5 4.00 20.00
dosis II 5 7.00 35.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 5.000
Wilcoxon W 20.000
Z -1.586
Asymp. Sig. (2-tailed) .113
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .151a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung kontrol negatif 5 3.00 15.00
dosis III 5 8.00 40.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 15.000
Z -2.611
Asymp. Sig. (2-tailed) .009
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a
lv
lv
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung kontrol negatif 5 4.40 22.00
dosis IV 5 6.60 33.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 7.000
Wilcoxon W 22.000
Z -1.149
Asymp. Sig. (2-tailed) .251
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .310a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung kontrol negatif 5 3.40 17.00
dosis V 5 7.60 38.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 2.000
lvi
lvi
Wilcoxon W 17.000
Z -2.193
Asymp. Sig. (2-tailed) .028
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .032a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis I 5 7.20 36.00
dosis II 5 3.80 19.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 19.000
Z -1.798
Asymp. Sig. (2-tailed) .072
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .095a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis I 5 6.80 34.00
dosis III 5 4.20 21.00
Total 10
lvii
lvii
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 6.000
Wilcoxon W 21.000
Z -1.358
Asymp. Sig. (2-tailed) .175
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .222a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis I 5 7.40 37.00
dosis IV 5 3.60 18.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 3.000
Wilcoxon W 18.000
Z -1.984
Asymp. Sig. (2-tailed) .047
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .056a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
lviii
lviii
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis I 5 7.20 36.00
dosis V 5 3.80 19.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 19.000
Z -1.776
Asymp. Sig. (2-tailed) .076
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .095a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis II 5 3.80 19.00
dosis III 5 7.20 36.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 19.000
Z -1.798
Asymp. Sig. (2-tailed) .072
lix
lix
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .095a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis II 5 5.40 27.00
dosis IV 5 5.60 28.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 12.000
Wilcoxon W 27.000
Z -.106
Asymp. Sig. (2-tailed) .916
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis II 5 4.60 23.00
dosis V 5 6.40 32.00
Total 10
Test Statisticsb
lx
lx
lambung
Mann-Whitney U 8.000
Wilcoxon W 23.000
Z -.952
Asymp. Sig. (2-tailed) .341
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .421a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis III 5 7.20 36.00
dosis IV 5 3.80 19.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 19.000
Z -1.776
Asymp. Sig. (2-tailed) .076
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .095a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lxi
lxi
lambung dosis III 5 6.20 31.00
dosis V 5 4.80 24.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 9.000
Wilcoxon W 24.000
Z -.731
Asymp. Sig. (2-tailed) .465
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .548a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis III 5 6.20 31.00
dosis V 5 4.80 24.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 9.000
Wilcoxon W 24.000
Z -.731
Asymp. Sig. (2-tailed) .465
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .548a
a. Not corrected for ties.
lxii
lxii
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 9.000
Wilcoxon W 24.000
Z -.731
Asymp. Sig. (2-tailed) .465
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .548a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis
Ranks
dosis N Mean Rank Sum of Ranks
lambung dosis IV 5 4.40 22.00
dosis V 5 6.60 33.00
Total 10
Test Statisticsb
lambung
Mann-Whitney U 7.000
Wilcoxon W 22.000
Z -1.149
Asymp. Sig. (2-tailed) .251
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .310a
a. Not corrected for ties.
b. Grouping Variable: dosis