skrining fitokimia [autosaved]

7/22/2019 SKRINING FITOKIMIA [Autosaved]

1/38


2/38

DEFINISI :

Skrining fitokimia adalah metode analisis untuk menentukan jenis

metabolit sekunder yang terdapat dalam tumbuh-tumbuhan karena sifatnya

yang dapat bereaksi secara khas dengan pereaksi tertentu. Skrining

fitokimia dilakukan melalui serangkaian pengujian dengan menggunakan

pereaksi tertentu.


3/38

Salah satu pendekatan untuk penelitian tumbuhan obat adalah penapis

senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman.

Cara ini digunakan untuk mendeteksi senyawa tumbuhan berdasarkan

golongannya.

Sebagai informasi awal dalam mengetahui senyawa kimia apa yang

mempunyai aktivitas biologi dari suatu tanaman.


4/38

Informasi yang diperoleh dari pendekatan ini juga dapat digunakan untuk

keperluan sumber bahan yang mempunyai nilai ekonomi lain seperti

sumber tanni, minyak untuk industri, sumber gum, dll.

Metode yang telah dikembangkan dapat mendeteksi adanya golongan

senyawa alkaloid, flavonoid, senyawa fenolat, tannin,saponin, kumarin,

quinon, steroid/terpenoid.


5/38

Metode yang digunakan dalam skrining fitokimia harus memilikipersyaratan :

metodenya sederhana dan cepat

peralatan yang digunakan sesedikit mungkin

selektif dalam mengidentifikasi senyawa-senyawa tertentu

dapat memberikan informasi tambahan mengenai keberadaan senyawatertentu dalam kelompok senyawa yang diteliti.


6/38

Golongan senyawa kimia dapat ditentukandengan cara:

uji warna

penentuan kelarutan

bilangan Rf

ciri spektrum UV

namun secara umum penentuan golongan senyawa kimia dilakukan dengan

cara uji warna dengan menggunakan pereaksi yang spesifik karena

dirasakan lebih sederhana.


7/38

Senyawa kimia berdasarkan asal biosintesis, sifat kelarutan, gugus fungsidigolongkan menjadi :

Senyawa fenol, bersifat hidrofil, biosintesisnya berasal dari asam shikimat

terpenoid, berasal dari lipid, biosintesisnya berasal dari isopentenil

Pirofosfat

asam organik, lipid dan sejenisnya, biosintesisnya berasal dari asetat

senyawa nitrogen, bersifat basa dan bereaksi positif terhadap ninhidrin ataudragendorf

gula dan turunannya

makromolekul, umumnya memiliki bobot molekul yang tinggi


8/38

Sedangkan berdasarkan biogenesisnyasenyawa bahan alam

dikelompokkan menjadi :

Asetogenin : flavonoid, lipid, lignan, dan kuinon

karbohidrat : monosakarida, oligosakarida, dan polisakarida

isoprenoid : tepenoid, steroid, karotenoid

senyawa mengandung nitrogen : alkaloid, asam amino, protein, dan nukleat


9/38

Dari semua kelompok senyawa, skr in ing fi tokimia umumnya hanya

dilakukanterhadap kelompok senyawa fenol , terpenoid, dan senyawa

nitrogen.

1. senyawa fenol

Senyawa fenol ditandai dengan struktur cincin aromatik yang mengandung

satu atau dua penyulih hidroksil. cendrung mudah larut dalam air, contoh

senyawa : polifenol, flavonoid, tanin dan quinon


10/38

2. senyawa terpenoid

terpenoid tersusun dari molekul unit isoprena (C5), digolongkan berdasarkan

jumlah isoprena dari senyawa tersebut, seperti: monoterpen, dua isopren (C10), tiga

isopren (C15), empat (C20), C25, C30, C35, C40 :

monoterpen (C10) dan seskuiterpen (C15) : mudah menguap, komponen minyak

atsiri

diterpen (C20) : lebih sukar menguap

triterpen (C30) : sterol dan saponin (senyawa yang tidak menguap)

pigmen karetonoid : tetraterpenoid (C40)


11/38

3. Senyawa nitrogen

senyawa nitrogen yang ada pada tumbuhan seperti : asam amino, amina,

alkaloid, glikosida, sianogen, porfirin, purin, piridin, sitokinin dan klorofil

(pigmen porifirin), tetapai kelah terbesar dari senyawa nitrogen adalah

alkaloid.


12/38

Masalah pada skrining fitokimia biasanya adalah kesalahan menafsirkan hasil

analisis pengujian/skrining, seperti :

reaksi positif palsuadalah hasil pengujian menyatakan ada (positif), tapi

sebenarnya tidak ada (negatif), hal ini bisa disebabkan kesalahan alat, atau

pengaruh senyawa yang memiliki kesamaan sifat maupun struktur atom yang

identik.

reaksi negatif palsuadalahhasil pengujian menyatakan tidak ada (negatif),

tapi sebenarnya ada (positif), hal ini bisa disebabkan kurang sensitifnya alat,

atau karena kadar didalam bahan uji terlalu sedikit, atau bahan ujinya (ekstrak

simplisia) tidak memenuhi syarat, oleh karena itu senyawa yang tadinya ada

hilang/rusak karna reaksi enzimatik maupun hidrolisis.


13/38

Senyawa fenol dan asam fenolat

Pemisahan dan identifikasi senyawa fenol sederhana ialah dengankromatografi lapis tipis (KLT)

Hidrolisa ---suasana asam (HCl 2 M)------ 30 menit ---- dinginkan &disaring sebelum di ekstraksi.

Hidrolisa --suasana basa (NaOH 2M) ----- 4 jam----- lingkungannitrogen --------- sebelum diekstraksi harus diasamkan dulu.

Kemudian fenol diekstraksi dengan eter---ekstrak eter ---dicuci,dikeringkan, diuapkan sampai kering.

Sisa dilarutkan dalam eter ------dikromatografi dua arah pada silica gel ----pengembang asam asetatkloroform dan etil asetatbenzena.


14/38

FENIL PROPANOID

Asam hidroksisinamat & hidroksi kumarin

Diekstraksi dengan eter atau etil asetat---ekstrak dicuci, dikeringkan, diuapkansampai kering.

Sisa di deteksi dengan kromatografi kertas atau KLT dua arah denganmenggunakan selulosa kristal renik.

Furanokumarin

Larut dalam lemak ----- diisolasi ketika mengekstraksi simplisia dengan eter ataueter minyak bumi .

Pemisahan dengan KLT pada silika gel----- pengembang kloroform , kloroformberetanol 1,5% , eterbenzena (1:1)----- 12 jam.

Deteksi dengan sinar uv ------ warna biru, ungu, coklat , hijau atau kuning.


15/38

Fenilpropena

Di deteksi dalam ekstrak eter bersama dengan minyak atsiri.Dipisahkan dengan pelat silika gel -----pengembang benzena, campuran

benzena dan kloroform (10%).

Pereaksi penyemprot dengan VanillinH2SO4 1 M ----- bercak berwarna.

Lignan

Dipisahkan secara kromatografi kertas ----pengembang butanol-asam

asetat-air dan asam asetat 15%.


16/38

PIGMEN FLAVONOID

Semua flavonoid merupakan turunan senyawa flavon, ada sekitar sepuluh kelas

flavonoid.

Golongan flavonoid Ciri khas

Antosianin larut dalam air

Proantosianidin menghasilkan antosianidin

Flavonol

Flavon

Glikoflavon mengandung gula terikat melalui ikatan C-C

Biflavonil

Khalkon dan Auron dengan amonia berwarna merah

Flavanon berwarna merah kuat dengan Mg / HCl

Isoflavon bergerak pada kertas dengan pengembang air


17/38

Untuk menelaah pola flavonoid secara berkala dapat digunakankromatografi kertas dua arah dari ekstrak etanol pekat -----pengembang

BAA (n butanolasam asetatair , 4:1:5) dan asam asetat 5%.

Pembanding baku ----rutin----- bermanfaat , karena letak rutin ditengah-

tengah kromatogram.

Ekstraksi dilakukan dengan sedikit etanol 70% ---- 8-24 jam, ekstrak dapatditotolkan langsung pada pelat atau kertas kromatografi.


18/38

ANTOSIANIN

Di ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang mengandung asam asetat

atau asam hidroklorida (misalnya metanol yang mengandung HCl pekat 1%).

Antosianidin

Daun , bunga segar, dipanaskan dalam HCl 2M di dalam tabung reaksi-----40

menit-----100 0C---

ekstrak dinginkan----enap tuangkan----cuci dua kalidengan etil asetat (menghilangkan flavon)-----lap etil asetat dihilangkan-----lapair panaskan 80 0C----- 3 menit (menghilangkan sisa etil asetat)----pigmen diekstraksi amil alkohol----ekstrak di pipet ------kaca arloji ----pekatkan sampaikering (penangas air).

Sisa ----larutkan dalam 2-4 tetes metanol (mengandung HCl)----kromatografikertas satu arah-----pengembang forestal dan asam format.


19/38

Antosianin

Daun bunga segar -----di ekstraksi----dengan cara menghancurkannya-----

dalam tabung-----memakai metanol (mengandung HCl pekat 1%)-----10

15 menit -----hasil ekstrak pekat-----langsung di kromatografi kertas satu

arah----pengembang BAA, BuHCl, dan HCl 1%.

Flavonol dan Flavon

Jaringan tumbuhan di hidrolisa dengan HCl 2M -----30-40 menit----100

0C----dinginkan ----ekstraksi dua kali dengan etil asetat-----pekatkan

sampai kering.

Sisa -----larutkan dalam etanol-----kromatografi.

Lima senyawa yang umum: apigenin, luteolin, kemferol, kuersetin,

mirisetin------dipisahkan dengan Kkt-----pengembang forestal .

Forestal : HCl pekatasam asetat-air (3:30:10)


20/38

Glikosilflavon

Tidak mudah larut dalam etil asetat-----tetap ada dalam lapisan air setelah

hidrolisa---maka harus mendesak garamkan ke lapisan etil asetat-----dengan + amonium sulfat ----atau mengekstraksi lagi lap air dengan amil

alkohol.

Biflavonil

Dipisahkan pada Kkt dengan pengembang Bu-amonia 2M (1:1)-----ataupada KLT silika gel ----- pengembang toluena-etil format---asam format

(5:4:1)

O-glikosida

Dipisahkan dengan Kkt-----pengembang BAA, air, dan asam asetat 15%


21/38

Flavonoid minor, xanton dan stilbena

Khalkon

Pigmen fenol kuning-----warna coklat kuat dengan sinar UV (Kkt)-----dipisahkan dengan Kkt-----pengembang BAA, air, dan Phenol----ataudengan KLT (silika gel)----pengembang benzena-etilasetat-asam format(9:7:4)

AuronDipisahkan dengan Kkt-----bercak kuning-----sinar UV kuning murup kuat

Flavanon

Tak berwarna----tak dapat di deteksi dengan kromatografi----kecuali

dengan penyemprot kromogen.Uji warna---dalam larutan alkohol---reduksi dengan Mg dan HCl pekat----flavon-----merah cherry kuat


22/38

Dihidrokhalkon

Dipisahkan dengan Kkt-----pengembang biasa-----deteksi dengan

penyemprot p-nitroanilin (terdiazotasi dengan AlCl3) dalam alkohol

Isoflavon

Disarankan memakai KLT (silika gel) -------pengembang metanol 11%

dalam kloroform-----deteksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu

Xanton

Dipisahkan dengan KLT (silika gel)----pengembang kloroform-asam asetat

(4:1), kloroform-benzena (7:3)-----deteksi dengan sinar UV.

Stilbena

Dipisahkan dengan Kkt atau KLT


23/38

Tanin

Tanin terkondensasi

Proantosianidin ----deteksi langsung-----mencelupkan dalam HCl 2Mmendidih----- 2 jam-----merah-----dapat diekstraksi dengan amil atau butilalkohol.

Bila lebih terperinci----- jaringan segar ----ekstraksi dengan metanol 50-80% --

---mengekstraksi tanin sebagian..

Bila memakai simplisia ----hasil tanin kurang ---- karena perlekatan tanin padatempatnya (dalam sel).

Campuran tanin dalam ekstrak ---dipantau dengan Kkt dua arah---- ---

pengembang butanol-asam asetat-air (14:1:5)----diikuti asam asetat 6%.

Deteksi dengan sinar UV-----bercak lembayung.


24/38

Tanin terhidrolisa

Deteksi pendahuluan------setelah hidrolisis asam------identifikasi asam

galat-------atau asam elegat-----dalam ekstrak eter / etil asetat pekat.

Komponen ester----dipisahkan dengan Kkt dua arah----pengembang sama

dg tanin terkondensasi.

Tanin terhidrolisis ------dapat dipisahkan dari tanin terkondensasi ----kelincahan bergerak berbeda.

Tanin total

Jaringan kering ----diserbuk dg hati-hati-----ekstraksi tiga kali----berturut-2

dg metanol-air (1:1)-----memakai pelarut 0,1 ml/mg


25/38

Pigmen kuinon

Penyebaran dalam tumbuhan -----sporadis-----pemisahan pendahuluan.

Senyawa kuinon (glikosida)-----sedikit larut dalam air-----lebih mudah

larut dalam lemak-----terekstraksi bersama2 karotenoid dan klorofil.

Dipisahkan dg KLT (silika gel)----terpisah dg baik----dari ekstrak eter

minyak bumi.

Benzokuinon dan naftokuinon-----larut dalam lemak----dipisahkan dg

pengembang ---benzena murni, kloroform murni, eter minyak bumi murni.

Antrakuinon ----banyak gugus hidroksil----sangat polar----perlu

pengembang campuran yg lebih rumit.

Benzokuinon

Dipisahkan dg KLT (silika gel)----pengembang pelarut non polar.Spektrum -----menunjukkan satu pita kuat-----260-290 nm.


26/38

Naftokuinon

Dipisahkan dg KLT (silika gel)----pengembang eter minyak bumi-etilasetat

(7:3).Untuk memisahkan 11 naftokuinon----dg KLT (silika gel) -----pengembang

heksana-aseton-asam asetat(15:5:0,3), benzena-nitrometana-asam asetat

(75:25:2), dan kloroform-etil asetat-heksana-asam asetat (10:5:5:0,3).

AntrakuinonDipisahkan dg KLT (silika gel dicampur kiesel guhr G (1:6) )----

pengembang eter minyak bumi-etil format-asam format (90:4:1) , eter

minyak bumi-etil format-HCl pekat (85:15:0,5).

Deteksi dg cahaya biasa dan sinar UV-----disemprot dg larutan KOH 10%

dalam metanol---- dari kuning---merah, ungu, hijau, lembayung.


27/38

Kuinon isoprenoid

Dipisahkan dg ekstraksi etanol-eter (1:1)----uapkan ----ekstraksi dg eter

minyak bumi-----uapkan ----ekstraksi dg heptana-----kromatografi pada

kolom natrium aluminium silikat atau kolom alumina-----elusi dg heptana

(mengandung eter 5%).

Dideteksi dg KLT (silika gel) satu atau dua arah


28/38

TERPENOID

Minyak AtsiriUntuk mono dan sesquiterpen dilakukan pemisahan dengan kromatografi gascair (KGC), karena dapat menganalisa kualitatif dan kuantitatif sekaligus.

Identifikasi terpena atsiri harus digunakan KGC dan digabung dengan cara lainyaitu KLT

Fraksinasi pendahuluan --pada ekstrak kasar eter atau eter minyak bumi ---kromatografi kolom asam silikat---mencegah pencemaran pd kolomKGC.

Fase diam --fase non polar--apiezon L dan silikon SE 30.Fase polar --poliester dietilena glikol adipat dan Carbowax 400.


29/38

Untuk KLT : digunakan silika gel--pengembang benzena , kloroform,

benzena-kloroform (1:1) , benzena-etil asetat (19:1).

Terpena alkohol ---pelat yg dibacem parafin---pengembang metanol

70%.

Deteksi --penyemprot lrt KMnO4 0,2% dalam air, antimon klorida

dalam kloroform,H2SO4 pekat atau vanilin-H2SO4.


30/38

Tropolon

Dipisahkan dg Kkt atau KLT pada pelat selulosa.

Iridoid

Perlu cara khusus--Kkt utk deteksi .

Uji warna Trim-Hill --warna 2 --asperulin ---- biru

aukubin ------ harpagid merah jadam

monoterpen---- idem

Sesquiterpen lakton

Daun kering --dilumatka dg 100 ml CHCl3--bubur ---disaring--ekstrak ----uapkan (tekanan rendah)----kering .

Sisa --lrtkan dlm etanol 95%--+ lrt timbal asetat 4%--saring---

filtrat pekatkan.

Campuran air-minyak diekstraksi dg CHCl3----keringkan----uapkan.

Sisa--analisa langsung dg KLT dan RMI.


31/38

Diterpenoid dan Giberelin

Diterpen

Dipisahkan dg KGC dan KLT---identifikasi lanjut dg spektrum infra

merah dan spektrum massa.

KGC --memeriksa 11 diterpen hidrokarbon --ekstraksi jaringankeringdg soxhlet--pelrt eter 1218 jam----pekatkan -sisa lrtkan dlm

benzena --kromatografi pd kolom alumina--elusi terakhir ----hslnya

diterpena (fraksi awal)--kromatografi dg 2 kolom berbeda--kolom 1

(kolom embacel dg 3% minyak silikon E301), kolom 2 (kolom gas chrom

P (100-200 mesh)KLT --cara sama dg terpenoid lain.


32/38

Giberelin

Terdapat 62 giberelin yg sudah diketahui.

Dipisahkan dg KLT ---pengembang (30 jenis)--pelat silika gel ygdiaktifkan maupun tak aktif--utk pelat yg diaktifkan, pengembang :

benzena-butanol-asam asetat(70:25:5) dan benzena-asam asetat-air

(50:19:31)

Gabungan KGC-SM -----identifikasi giberelin.

Triterpenoid dan Steroid

Triterpenoid ---dpt diubah ---4 gol senyawa : triterpena yg

sebenarnya, steroid, saponin dan glikosida jantung.

Dipisahkan dg KLT dan KGC.---identifikasi dg titik leleh, putaran

optik, KGC-SM, spektrum IR, dan RMI.

KLT---pelat silika gel AgNO3--memisahkan triterpenoid tak jenuh--

dg dasar jml ikatan rangkap terisolasi


33/38

Pereaksi pendeteksi adalah ---pereaksi Carr-Price --yaitu: lrt antimon

klorida 20% dalam kloroform.

Dapat pula dipakai : pereaksi Liebermann-Burchard -- pelat disemprot

dg campuran H2SO4 pekat 1 ml, anhidrida asetat 20 ml dan CHCl3 50 ml-

--panaskan 85-95 0C 15 menit.

Triterpena

Jaringan kering-- hilangkan lemak dg eter-- ekstraksi dg metanol

panas--ekstrak ----pekatkan--periksa langsung.

KLT (silika gel) ---pengembang heksana- etil asetat (1:1) dan CHCl3-

metanol (10:1)---pendeteksi antimon klorida dalam CHCl3.


34/38

Fitosterol

Dipisahkan dg KLT dan KGC ---pada campuran rumit--

mis:sitosterol, kolesterol, stigmasterol----tak mudah dipisahkan .

Bisa dipisahkan---sebagai asetat --kromatografi pd pelat anasil B--

pengembangan sinambung 2 jam ,heksana-eter (97:3).

Deteksi estrogen--perlu cara isolasi yg rumit-kolom kromatografi pd

alumina

Saponin dan Sapogenin

Saponin

Pembentukan busa mantap---bukti adanya saponin

Uji sederhana--mengocok ekstrak alkohol-air ---dalam tabung reaksi---

apakah terbentuk busa yang stabil.

Dapat diperiksa dg---hemolisa pd sel darah merah.


35/38

Sapogenin

Jaringan kering--hidrolisa dg HCl 1 M ---- 2 6 jam --netralkan --

keringkan--ekstraksi dg eter minyak bumi--uapkan, sampai kering-

---sisa lrtkan dlm CHCl3----tentukan spektrum IR.

Lrt CHCl3 dipekatkan--KLT (silika gel)--pengembang aseton-

heksana(4:1) atau CHCl3-CCl4-aseton (2:2:1) --deteksi --bercakmerah jambu sampai lembayung (disemprot dg antimon klorida dlm HCl

pekat ---dipanaskan 110 0C 10 menit.

Saponin jauh lbh polar daripada sapogenin, karena ikatan glikosidanya---

lbh mudah dipisahkan dg Kkt atau KLT pada selulosa.


36/38

Glikosida Jantung

Dipisahkan dg KLT satu arah (silika gel) --pengembang etil asetat-

piridina-air (5:1:4).--utk strophantus.

Atau dg KLT dua arah --pengembang etil asetat-metanol-air(16:1:1) dan

CHCl3-piridina (6:1)-utk 28 kardenolida dlm digitalis purpurea.

Karotenoid

Pigmen yg tak mantap---

disimpan ditempat gelap---

suhu rendah.Ekstraksi --metanol atau aseton --saring--karotenoid di ekstraksi

dg eter.

Sisa --lrtkan dlm sedikit etanol--+ lrt KOH 60% dlm air, 1 ml utk

setiap lrt etanol--encerkan dg air--pigmen di ekstraksi lagi dg eter--

cuci, keringkan----pekatkan.

Kemudian dianalisa langsung dg KLT atau KKt


37/38

Senyawa Belerang

Glukosinolat

Ekstraksi dg alkohol mendidih---dimurnikan dg kolom penukar ion--

dipisahkan dan di isolasi dg KKt----pengembang nButanol-etanol-air

(4:1:4) atau nButanol-piridina-air (6:4:3)--dideteksi dg AgNO3

amonia.

KLT (silika gel)----pengembang kloroform-metanol (17:3) dan etil asetat-

etanol-air (9:1:12)

Isotianat

Diperoleh dari penyulingan uap jaringan (tlh dihancurkan), ----- atau

menghidrolisa glukosinolat yg sdh di isolasi.


38/38

ALKALOID

Senyawa yg bersifat basa , mengandung satu atau lebih atom nitrogen,

biasanya dlm gabungan------sistem siklik.

Deteksi pendahuluan:

Diekstraksi dg pelrt alkohol yg bersifat asam lemah (HCl 1 M atau asamasetat 10%) ---endapkan dg amonia pekat-----pemurnian selanjutnya dg-

----- ekstraksi pelrt (ekstraksi cair

cair).

Ekstraksi jaringan kering dg asam asetat 10% dlm etanol------ 4 jam--pekatkan ekstrak (1/4 volume)------ ditetesi NH4OH 1%.

Lakukan KKt--dapar sitrat dlm n butanol -- atau lrt asam sitrat dlm air.

Juga dg KLT (silika gel G) dalam metanol-NH4OH pekat (200:3).Deteksi pada kertas dan pelat----fluorescensi sinar UV ---kmd dg 3penyemprot : Dragendorff , iodoplatinat, Marquis.

skrining fitokimia [autosaved]

Documents