nÜkleİk asİtler
DESCRIPTION
NÜKLEİK ASİTLER. Prof.Dr.H.Asuman TOKULLUGİL. 1.RNA: Ribonükleik asitler 2.DNA: Deoksiribonükleik asitler Genetik bilginin depolanmasında → DNA Genetik bilginin transferinde → RNA rol oynar. Azotlu bir baz + şeker nükleotid - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
2
1.RNA: Ribonükleik asitler 2.DNA: Deoksiribonükleik asitler
Genetik bilginin depolanmasında → DNA
Genetik bilginin transferinde → RNA
rol oynar.
3
Azotlu bir baz
+ şeker nükleotid + (monomer) fosforik asit nükleotidler=N.A oluşturur (polinükleotid)monomer polimer
mononükleotid= N.A yapıtaşı,yapı birimi
4
Nükleotid Yapı Taşları
1.Azotlu baz: Pürin veya pirimidin
2.Şeker : D-riboz veya 2 deoksi D- riboz
3.Fosforik asittir
8
TAUTOMERİZASYON Molekülün farklı bölgeleri arasında proton alış-verişi
oksopurin, keto → enol dengeli oksopirimidinlerde C=0
C -OH
13
NÜKLEOTİDLERİN FONKSİYONLARI
1.ATP: Evrensel kimyasal enerji taşıyıcısı
ATP ADP + Pi → 7.3 kcal/mol enerji
ATP AMP + PPi
PPi → 2Pi pirofosfataz
14
2.Biosentez reaksiyonlarında
TAŞIYICI ve AKTİVATÖR
a)S-adenozil methionin: Transmetilasyon reak.da
17
d)UTP: Uridin trifosfat
1- Glikojen sentezi UDP-glukoz 2- Galaktoz metab UDP-galaktoz 3- Amino-şeker metab UDP-glukuronik asit 4- Uronik asit yolu 5- Bilirubin metab
18
e)CTP:Sitidin trifosfat CDP-Kolin → fosfolipid sentezi
CDP-digliserit → trigiserid sentezi
CDP-Kolin (=sitidin difosfat kolin)
19
3-Nükleozid trifosfatlar (nükleotid), biyosentez reaksiyonunda gerekli fosfat ve pirofosfatı sağlarlar:
Ör:ATP
a)Fosforilasyon Reaksiyonu
Heksokinaz X +NTP X-P + NDPGlukokinazFruktokinaz Glukoz + ATP G.6.P +ADPProteinkinaz
kinaz
Mg++
glukokinaz
20
B) Pirofosforilasyon Reaksiyonu Ör: Nükleotid sentezinde kullanılan ribozun
sentezi
Riboz-1-P + ATP PRPP + AMP ( PRPP = 1 Fosforibozil-5-pirofosfat )
21
4-Elektron transfer reaksiyonuna katılan koenzimler
NAD (nikotinamid adenin dinükleotid) NADP (nikotinamid adenin dinükleotid fosfat) FMN (Flavin adenin mononükleotid) FAD (Flavin adenin dinükleotid)
FAD 1-D-riboz yerine D-ribitol (şeker alkolü) FMN 2-Flavin azotlu baz ama N.A yapısında bulunmaz
22
ATP CTP RNA polinükleotidlerinin prekürsörü GTP URASİL RİBOZ UTP
dATP dCTP DNA polinükleotidlerinin prekürsörü dGTP TİMİN DEOKSİRİBOZ dTTP
23
5)İkincil haberci =Secondary messenger= Hücre içi habercisi Ör: c.AMP (çembersel AMP)
ATP 3’5’ cAMP +PPiAdenilat
siklaz
25
DNA’nın YAPISI ve ÖZELLİKLERİ 1) 3’ 5’ fosfodiester bağı
Adenin
Urasil (DNA’da timin)
Guanin
Sitozin
26
2) Polinükleotid zincirinin 3’ ucunda : serbest OH
5’ ucunda : 5’ trifosfatlar bulunur (öncül molekül)
5’ → 3’
27
3)RNA ile DNA’nın farkları
Baz :RNA ‘da Urasil DNA’ da Timin
Şeker : RNA’ da riboz 2’de OH grubu DNA’da deoksiriboz 2’de H grubu
29
I-Prokaryotik Hücrelerin Özellikleri
E.koli gibi bakteriler Riketsiya Küçük ilkel Spiroket canlılar
1) Hücreler küçük 2) Sitoplazma: -depo granülleri -nükleer zon (çekirdeğimsi bölge) -sitoplazma zarı (tek zar) 3)Ribozomlar: Protein sentez yeri Ultrasantrifüjde 70 s çökme hızı 30 s , 50 s’lik iki alt birim 4)DNA : - Tek bir dev makromolekül - DNA-protein ilişkisi yok - Küçük sitoplazmik - DNA plazmid,epizom denir
30
II-Eukaryotik Hücrelerin Özellikleri: Yüksek bitki, hayvan, insan hücreleri1)Hücreler 1000-10000 kat büyük2)Sitoplazma: Zarla çevrili, sınırlı, şekilli organeller -mitokondri, kloroplast -Golgi cisimcikleri -Düz ve kaba EPR -lizozom -çekirdek 3)Ribozomlar: daha büyük 80 s de çöker : 40 s ve 60 s lik 2 alt birim
4)DNA:Kromozomlar halinde dağılmış durumda Drosofilia 8 kromozom İnsan 46 kromozom Tavuk 78 kromozom
31
Kromozom = 1 veya daha fazla sayıda DNA molekülü içerir
Kromatin= DNA + bazik protein(histonlar) = (nükleoprotein)
NÜKLEOLUS= Çekirdekçik:Ribozom sentez bölgesi
-% 0.1, 0.2 DNA mitokondri veya kloroplastlar içinde yer alır
32
DNA’nın Kimyasal Analiz Sonuçları 1)Adenin = Timin A=T A/T= 1 Guanin= Sitozin G=C G/C=1
2)Pürin nükleotid sayısı=Pirimidin nükleotid sayısı (A+G=T+C)
3) 4 ve 6. C da (NH2) grubu içeren bazların toplamı = 4 ve 6. C da (=O) grubu içeren bazların toplamı (A+C=G+T) (NH2) (=O)
4)Dissimetri oranı = A+T/G+C Belirli bir tür için sabit ve karakteristik, türler arası değişim
gösterir.
34
Watson-Crick DNA Modeli 1)Bazlar sarmal eksenine dik düzlem yapar
2)İki baz düzlemi arası arası =0.34 nm
3)Sarmalın bir tam dönüşü= 10 nükleotid=3.4 nm
4) Her 2 zincir birbirine komplementer A=T G=C
36
5) Fosfodiester iskeleti
2 nükleotid birbirine fosfat grubu aracılığı ile 3’, 5’ grubları vasıtasıyla bağlanır.
5’ 3’ ne doğru uzar.
38
6)DNA Sarmalının Stabilitesi
1-Hidrojen bağları
2- Bazlar arası hidrofobik etkileşimler
7) pH= 7’ de fosfat grubları (-) yüklü. Bu nedenle asidik özellik Bu nedenle N.A denir
Hidrofilik
Hidrofobik
39
Denaturasyon, Renaturasyon: İzole edilmiş DNA çözeltisi Oda sıcaklığında pH 7 de viskoz çözelti
Aşırı pH viskozite ↓ Isı 80-90 olunca DNA da fiziksel değişim
H bağları Hidrofob etkileşimler bozulur ↓ karşıt zincirler kısmen veya tamamen açılır DNA denaturasyonu= DNA erimesi Tersinir olaydır
40
Hibrit DNA’ların Oluşumu
DNA’lar izole edilir
Ayrı ayrı denatüre edilirinsan sıçan
Karıştırılır
65°C birkaç saatbekletilir
İnsan sıçan Hibrid DNA
41
İki tür birbirine ne kadar yakınsa -Hibridleşme -DNA da sarmal yapı oluşturma oran olur
Ör: İnsan –sıçan hibritleşmesi İnsan – maya hibritleşmesi
42
Hibritleşme deneyleri genetik biyokimyada;
1)Akrabalık derecesinin tayini,
2)DNA-RNA hibridleşmesi → DNA-RNA
ilişkisi
3)Genlerin izolasyonu için kullanılır
43
Prokaryotik Hücrelerin DNA’ları Prokaryotik hücre → E.coli (bakteri) 200 misli DNA DNA virusu → Lamda faj.(bakteri virusu)
E.coli’de DNA -Tek ve çok büyük molekül -Çift sarmal yapısında , halkasal -4 milyon baz çiftinden m.g. -DNA’ nın uzunluğu, hücrenin uzunluğundan 700 kat -Süpercoiling ( DNA fonks. için gerekli) -Nükleer zon (=Çekirdeğimsi bölge) -Topoizomeraz(DNA giraz): Supercoiling yapan ya da açan enzimler -Halkasal DNA :plazmid- sitoplazmada
44
Nükleer DNA: Bir kaç bin gen
Küçük halkasal DNA: Bir kaç gen
GEN: Tek bir protein veya enzim kodlamak için gerekli DNA parçası (nükleotid dizisi)
45
Eukaryotik Hücre DNA’ları
-E.coli’ ye göre : Drosofilia ‘da 25 misli İnsanda 600 misli DNA -E.coli DNA sı=1.4 mm
-İnsan hücre DNA sı = 2m
46
KROMOZOM:
-nükleoprotein kümeleri
-genetik materyal kromozomlara bölünmüş
-kromozom organizmanın türüne özgü sayıda
-kromozomların DNA içeriği ve hacmi farklıdır
47
Her KROMOZOMDA
1) 1 DNA sarmalı
2) Proteinler (histonlar)
3) E.coli DNA’ sının 4-100 katı kadar
nükleotid içerir
(E.coli DNA’sı= 4 milyon baz çifti)
-Eukoryotik hücre DNA’ları doğrusal yapıda
48
GENOM: Bir hücredeki genlerin hepsi İnsan KC hücresi Hücre çapı = 25 μmetre Çekirdek çapı= 5 μmetre 46 kromozom DNA’ların toplam uzunluğu = 2 metre (=2.106 μ m)
49
KROMATİN -Kromozom materyali -Dağınık, koyu boyanan, ağımsı %60 protein %35 DNA dan oluşur %5 RNA
51
KROMATİNDE:
DNA + Histonlar = NÜKLEOZOM Histonlar: -Bazik proteinlerdir. -Lizin,arjinin -MA:11000-21000 -Prokaryot hüc.de bulunmazlar.
52
NÜKLEOZOM:
-10-11 nm çapında -Her nükleozomda 2’şer tane H2A, H2B, H3 ,H4
proteinleri bulunur (toplam 8 histon prot.) -DNA sarmalı nükleozomun çevresine 2 kez sarılır -Bir nükleozomda 200 baz çifti bulunur -20-120 nükleotidlik AYIRICI DNA SARMALI -H1 prot. = Ayırıcı bölgede
53
DNA REPLİKASYONU
Watson-Crick Hipotezi
ll ll ll - Yeni sentezlenen DNA zincirleri
- Ebeveyn DNA’lar kalıp rolü oynar
Ebeveyn Yavru sarmallar
54
Messelson ve Stahl Deneyi(1957)
1) E.Coli NH4Cl, (15N)’li besi yerinde üretiliyor
Cecium Cl içinde ultrasantrifüj
i)Normal E.coli -14N içeren
ii)15N ‘li besi yerinde üretilen E.coli
Hafif DNA(14N)
Ağır DNA(15N)
55
2)15N içeren E.coli ler 14N LÜ ortama alınıyor 1 nesil sonra
14N 15N
Hibrit DNAOrta noktaya çöker
56
3) 2 nesil sonra
14N 14N14N 15N
Hafif DNA(14N)
Hibrit DNA(14N 15N)
DNA replikasyonunda ; yavru DNA’ nın bir zinciri ebeveynden diğer zinciri yeni sentezleniyor
59
Halkasal DNA’nın replikasyonu:
- Replikasyon yönünde DNA’nın açılması
- Çift yönlü
- Origin:Başlangıç noktası 100-200 nükleotidlik bir bölge, özel
bir protein tarafından tanınır
60
E.Coli’de DNA replikasyon çatalı oluştuktan sonra ;
→ 37 C de 45000 nükleotid/dakikada ilerler (replike olur) → 1 DNA sarmalı = 10 nükleotidde tam dönüş Bu nedenle ters yönde dönmesi gerekir 4500 devir / dk ters yönde döner ve DNA sarmalı açılır (Bu hız = 70 mil/saat)
61
Eukaryotik DNA’ların Replikasyonu
-Birçok origin mevcut
-Çift yönlü
-Hızı prokaryotların 10 da biri kadar
Tek origin olsa → 2 ayda replikasyon
(Binlerce origin → binlerce replikasyon çatalı
Bu nedenle → replikasyon hızlı olur )
65
DNA POLİMERAZ I ENZİMİ
Substratları : dATP, dTTP, dCTP, dGTP, bir DNA çifti sarmalı
Kofaktörleri : Mg++ ve Zn++ iyonları
DNA çift sarmalı = başlangıç ve kalıp Mevcut DNA zinciri kalıp kabul edilir
Buna KOMPLEMENTER= KARŞIT zincir sentezlenir
Sentez (zincirin uzaması) 5’ → 3’ yönünde olur
68
REPLİKASYON OLAYI 1)Başlama noktasının tanınması(origin)
2)Ebeveyn sarmalın dönerek açılması
3)Yavru komplementer zincirlerin oluşumu
4)Zincirin uzaması
5)Zincirin sarmal şeklini alması
6)Replikasyonun sonlanması
20 veya enzim = DNA replikaz sisitemi (REPLİZOM)
69
E.coli bakterisinde : DNA polimeraz I : Hücre içinde en fazla DNA poimeraz II : İşlevi ? DNA polimeraz III: DNA sarmalının uzamasından esas sorumlu enzim DNA polimeraz III holoenzim (subuniteleri) -550.000 M.a ‘da -Zn++ iyonları mevcut, aktivite için Mg++ gerekli
70
DNA polimeraz I ve III
a)Endonükleaz aktivitesi: 5’ → 3’ ucuna doğru yeni nükleotidler takarak ilerler
b)Her iki enzimde - DNA kalıp zincirine ve buna sarmal olarak sarılmış PRIMER zincire gerek duyar
alt birimi = Ebeveyn DNA ‘daki primer zinciri tanıyarak ona bağlanır
c) Ekzonükleaz aktivitesi Hem 3’ → 5’, hemde 5’ → 3’ yönünde zincirden nükleotid koparma aktivitesidir
71
OKAZAKİ PARÇALARI:
-Normalde DNA replikasyonu 5’ → 3’ yönünde
Replikasyonda karşıt zincir oluşturulur A zinciri : 5’ → 3’ yönünde normal replikasyon B zinciri : 3’ → 5’ yönünde replike olmaz.Bu nedenle
5’ → 3’ yönünde okazaki parçaları ile replike olur
73
Replikasyondaki enzimler ve işlevleri 1)PRİMAZ Enzimi -Okazaki parçalarınn oluşumu için gerekli -Açılan replikasyon çatalının ucuna birkaç tane ribonükleotid takarak → primer sarmal m.g (öncül)
2)DNA polimeraz III : Primer sarmala → deoksiribonükleotidleri takar, zincir uzar
3)DNA polimeraz I : a) Ekzonükleotidaz aktivitesi ile
ribonükleotidleri çıkarır sonra b) Aynı yere : kalıba uyan deoksiribonükleotidleri takar
-Okazaki parçaları meydana gelmiş olur
74
4)DNA ligaz Okazaki parçalarını birleştirir
5)Helikaz enzimi -DNA sarmalını ters yönde döndürerek, zinciri DÜZLEŞTİREN ve AÇAN enzim -Çatalın hemen önünde bulunur
6)DNA bağlayıcı protein(DBP) -Düzleşip açılan DNA’nın tekrar kapanmasını önler
7)Topoizomerazlar -Sarmal 4500 devir/dak hızla düzelir -Dengeleyici oynak nokta olmasa → bu hızda replikasyon
çatalının önündeki kromozom ters yönde dönebilirdi
75
Topoizomerazlar
a)Dengeleyici oynak nokta: Helikazın önüne oturur. Helikazla aynı hızda, helikazla kendi arasındaki DNA segmentini 180ºlik dönmelere tabi tutar. DNA düzleşmesine yardımcı olur b)Superkoling olayı: Topoizomeraz sarmalın düzleştirilmesine yardımcı olur Helikaz sarmalı açar(Prokaryotlarda :Topoizomeraz=DNA giraz)
Topoizomeraz
Helikaz
77
HİSTONLARIN REPLİKASYONU Kesikli DNA zincirinin bulunduğu yavru
sarmalda yeni histonlar yeni nükleozomları oluştururlar.
Replikasyon çatalında DNA sentez yönü bir zincirde :5’→3’ ,
diğer zincirde ise 3’→5’ dir.
3’→5’ yönünde sentez kesikli zincir şeklindedir.
5’→3’ yönünde lider zincir sentezlenir.
78
Eski ve yeni histonlar nasıl dağılım gösterir ?
In vitro DNA sentezi yapılıyor
Bir protein sentez inhibitörü olan sikloheksimid ortama ekleniyor
(Böylece yeni histon sentezi engelleniyor)
Bu şartlar altında DNA sentezi 15 dk devam ediyor
Yeni sentezlenen DNA’ nın yarısı DNAaz I’le tamamen yıkılıyor
Diğer yarısı ise 200 baz çifti içeren parçalara ayrılıyor.
79
Bu deney ve density-labeling çalışmaları şunu düşündürmüştür;
Ebeveynden gelen histonlar yeni DNA sarmallarından sadece birisinde bulunur
Diğer yavru sarmalda ise önce histon yoktur ve çıplaktır
E/M da da replikasyon çatalında bir tarafta histonlar bulunurken diğer tarafta bulunmadığı görülüyor
Özellikle replikasyon esnasında ebeveynden gelen histonlar konservatif olarak ayrılı (veya tek bir yavru DNA sarmalında toplanır)
80
Özetle;
Replikasyon esnasında ebeveynden gelen histonlar
konservatif olarak ayrılır
(veya tek bir yavru DNA sarmalında toplanır)
81
Bu bulgular;
Histonların replikasyon esnasında DNA’ dan ayrışmadığını gösterir
Gerçekte, eski histonlar lider zincirin olduğu yavru sarmalda durur
Buna karşın yeni sentezlenen histonlar kesikli DNA zincirinin olduğu yavru DNA sarmalında toplanır
82
Bu farkın bir olası nedeni şu olabilir :
Histonlar, tek sarmallı DNA’ya kıyasla, çift sarmallı DNA’ya çok daha kuvvetle bağlanırlar
Eski histonlar olasılıkla kesikli sarmalı bırakırlar
Çünkü bunda okazaki parçalarının birleşmesinden önce tek sarmallı bölgeler vardır.
Bu nedenle öbür zincire geçerler.
83
TRANSKRİPSİYON
DNA’ daki baz dizilişi= genetik bilgi içerir Bazların özel dizilişi= genetik şifre DNA nın ufak bir kısmının açılması (=gen= Bir protein kodlayacak baz dizesi)
Transkripsiyon
RNA sentezi Translasyon
Protein sentezi
84
TRANSKRİPSİYON →
-DNA’ daki baz dizilişine göre genetik şifrenin RNA’ya aktarılması -Komplementer olay
85
RNA’lar
1)Habercil (messenger RNA= mRNA) DNA Ribozomlara gider Transkripsiyon
2)Taşıyıcı RNA(transfer RNA= tRNA) Her aa’e özgü bir tRNA vardır
3)Ribozomal RNA (rRNA) Hepsi nükleusta DNA’dan transkripsiyonla sentezlenirler
86
mRNA
Uzunluğu değişik, tek zincir halinde molekül
MONOGENİK (MONOSİSTRONİK): Tek genin bilgisini POLİGENİK (POLİSİSTRONİK): Çok genin bilgisini taşıyorsa denir
-Prokaryotlardaki mRNA’lar poligenik-Eukaryotlardaki mRNA’lar monogenik
mRNA mol. uzunluğu kodladığı polipeptid zincirinin uzunluğuile sınırlı. 3 baz → 1 aa kodlar Bu nedenle 100 aalik bir polipeptid zinciri için en az 300 bazlık RNA gereklidir
87
Prokaryot mRNA ları gen.la kodladıkları polipeptid zinciri için gerekenden daha uzun
→5’ ucunda :LİDER bölge (25-150 baz) polipeptid kodlamaz
Poligenik mRNA’larda, INTERGENİK BÖLGE polipeptid kodlamaz
Protein kodlamaz Protein kodlar
-Bir metabolik yol enzimleri için poligenik mRNA kullanılır
Lider bölge
Gen Iİntergenik
bölgeGen II
5’ 3’
88
mRNA Sentezi:
DNA’ya bağımlı RNA polimeraz enzimi
-DNA ‘nın bir zincirini kalıp gibi kullanır
-Buna komplementer RNA zinciri oluşturur
-Aktif merkezinde Zn++
-Mg++ ‘a gerek duyar
-Substratları: ATP, GTP, UTP, CTP
-5’ → 3’ yönünde zincir uzaması
-3’ ucuna ribonükleotid birimlerini takar
89
RNA polimeraz reaksiyonu:
n(NMP)n + NTP (NMP) n+1 + PPi Ribonükleosid uzamış RNA ( ve
5’ trifosfat fosfat grubları)
( fosfat grupları)
90
DNA kalıp görevi görür
DNA’da : A T G C (deoksiribonükleotid)
RNA’da : U A C G (ribonükleotidler)
- Primer zincire gerek yok, ama ÖZGÜL BİR BAŞLAMA noktası gerekli
-RNA polimeraz bu noktaya oturduktan sonra→ TRANSKRİPSİYON başlar
91
TRANSKRİPSİYON’un Safhaları
RNA polimerazın→
1- Başlama noktasına oturması
2- Birkaç fosfodiester bağı yapması
3- Sigma birimi (enzimin bir alt birimi, holoenzimden ayrılması
4- Zincirin uzaması
5- Genin transkripsiyonunun bitme sinyali= DNA kalıbı
üzerindeki DURMA DİZİSİ
6- RNA ve RNA polimerazın DNA’dan ayrılması.
(Rho) P proteini
92
RNA polimeraz :
Prokaryotlarda: -M:A 500.000 -Kompleks, holoenzim -5 polipeptid subuniti var (2, , ’, ) -mRNA, tRNA; rRNA sentezler
Eukaryotik hücrelerde: RNA polimeraz I : Nukleolusta lokalize rRNA sentezlerRNA polimeraz II : Kromatin içinde lokalize mRNA sentezler RNA polimeraz III :Kromatin içinde lokalize tRNA ve 5s’lik rRNA sentezler
94
Transkripsiyonun İnhibisyonu
Aktinomisin D: Prokaryot ve eukaryotlarda ; DNA
sarmalında G-C arasına oturur, transkripsiyonu kitler ve zincir uzayamaz
Akridin D: Aktinomisin D gibi aktivite Rifampicin D: Prokaryotlarda RNA polimerazın bir alt
birimine bağlanarak enzimi bloke eder
95
Posttranskripsiyonel İşlem
Enzimatik olarak RNA’ya bazı grubların takılması ve çıkarılması →
RNA’nın AKTİFLEŞMESİ
DNA RNA zinciri AKTİF RNA transkrip. Posttranskripsiyonel
işlem
96
Heterojen nükleer RNA =hnRNA
Eukaryotik hücrelerde önce nükleer RNA’lar sentezlenir
Heterojen nükleer RNA
mRNA + sRNA(small RNA)
97
Eukaryotik mRNA’ların,Prokaryotik mRNA’lardan Farkları:
1) Eukaryotik mRNA’lar :MONOGENİK 2) Eukaryotik mRNA 3’ ucunda POLİ-A KUYRUĞU (100-200 tane –A-A-A-) (Poliadenilat polimeraz, substrat ATP) 3) Eukaryotik mRNA 5’ ucunda → 7-METİL GUANOSİN şapkası Şapka → Translasyonu başlatmak üzere ribozoma
bağlanmada yardımcı Şapka ve kuyruk → mRNA’ yı enzimatik yıkımdan korur
99
Reverse Transkriptaz (Ters transkripsiyon yapıcı) ve Kanser Oluşumu
Viral RNA Komplementer Reverse DNA (cDNA) transkriptaz
Kuşlarda Rous sarkomu etkeni :RNA virusu
Bunda ; RNA’ ya bağımlı DNA polimeraz (reverse transkriptaz)
101
Hormon Üretimi
Reverse transkriptaz sentetik gen sentezi
E.coli’ye verilir Plazmid oluşturma (cDNA)
Hızla çoğalır Translasyon
Sonuçta istenen protein,Ör:İNSULİN
102
TRANSLASYON Replikasyon DNA
Transkripsiyon Reverse Transkripsiyon (R.Transkriptaz)
RNA Translasyon
PROTEİN
103
PROTEİN SENTEZİ (Translasyon) a) Protein sentezi çok karmaşık bir olaydır Eukaryotik hücrelerde : 70 tane ribozomal protein 20 tane protein: aa aktivasyonu için 12 tane protein: translasyonda enzim 100 tane protein: posttranslasyonel işlemlerde 100 tane rRNA, mRNA, tRNA -Yaklaşık 300 tane makromolekül → 1 polipeptid zincirinin sentezi için gerekir
b) Protein sentezi çok hızlı gerçekleşir. 100 aa’lik polipeptid 5 sn’de
c) Hücre içi protein sentezi çok sıkı kontroldedir.Gerektiği kadar protein sentezlenir
104
Translasyonu Evreleri
1- AA’lerin aktivasyonu
2- Polipeptid zincirinin başlaması
3- Uzama
4- Sonlanma ve ribozomdan ayrılma
5- Kıvrılma ve işlenme
105
I.evre :AA’lerin aktivasyonu
aa + tRNA + ATP aminoasil-tRNA +AMP + PPi a.asil-tRNA sentetaz
Tersinmez reak. Gº’ = -7.0 kcal/mol
Mg 2+
106
Ör: isolösil-tRNA sentetaz =E
a) isolösin + ATP + E E-İsölösil-AMP + PPi
a) E-[isolosil- AMP] +tRNA ile → İsolosil-tRNA ile + E + AMP
Gº’ = -7 kcal/mol
112
2) Başlangıç amino asiti
Prokaryotlarda: Peptid zincirinin aminoterminalinde : N-FORMİL METHİONİN bulunur H COO-
ı l
H-C-N-C-H ll l O CH2 l N-formil CH2
l grubu S l CH3
113
Bu aa 2 reaksiyonla oluşur
ATP AMP + PP
a) Methionin + tRNA fmet methionil- tRNAfmet
Mg ++
Methionil –tRNA sentetaz
b)Formil grubunun methionil’in amino grubuna transferi
N10- Formil tetrahidrofolat + Met-tRNAfmet tetrahidrofolat +fmet-tRNAfmet
N10- FH4 transformilaz
-Transformilaz serbest methionine formil bağlayamaz.Özgül substratı Met-tRNAfmet
tRNAmet :Peptid zinciri içindeki methionine özgü
tRNAfmet :Başlangıçtaki formillenmiş methionine özgü.Bu tRNA sadece formil
grubu alabilir
114
EUKARYOTLARDA:
-Ekstramitokondrial ribozomlarda, methioninle sentez başlar. t-RNAmet
-Mitokondri ve kloroplastlardaki ribozomlarda, N-formil Met-tRNAfmet ile başlar
*Mitokondrilerin bakteriden oluşumu; simbiotik yaşam teorisini destekler
115
B)Polipeptid sentezinin Başlaması
Prokaryotlarda gerekli yapılar;
1) 30 S subuniti (16 s rRNA içerir)
2) Sentezlenilecek polipeptidi kodlayacak mRNA
3) Başlangıç aa-tRNA=N-formil methionil-tRNA fmet
4) Başlama faktörleri BF-1 (IF-1)
BF-2 (IF-2)
BF-3 (IF-3)
5) GTP
117
1.safha
30 s ribozom üniti + BF-3 → Bağlanır (30 s ve 50 s‘ın birleşmeleri engellenir) mRNA + 30 s subünitine → Bağlanır
Başlangıç sinyali Başlangıç kodunu 30 s deki 16 s rRNA N-fmet-tRNAfmet deki UAC ile karşıttırİle koplementer bazoluşturur
6-8 taneA ve G A U G
5’ 3’
118
İşte başlangıç sinyali sayesinde;
a) mRNA 30 s’te doğru yere oturur
b) Başlangıçtaki AUG kodonu= N fmet tRNAfmet
Zincir içindeki AUG kodonu= met-tRNAmet bağlar
121
1- mRNA ‘da AUG kodonu
fmet-tRNAfmet’de UAC’nin
anti kodonu
2- Ribozomal P noktası
başlangıç aasil-tRNA doğru yere oturmasını
sağlar
122
Ribozomlarda aminoasil-tRNA’ları bağlamak için 2 bölge vardır
A Bölgesi : Aminoasil kısmı
P Bölgesi : Peptidil kısmı
- Bu bölgeler 50 s ve 30 s subunitelerinin spesifik kısımlarından m.g
-P bölgesine sadece başlangıç fmet-tRNAfmet
bağlanırken A bölgesine ise diğer yeni gelen aminoasil-tRNA’ lar bağlanır
125
III. Evre:Uzama
Gerekli yapılar 1-Başlangıç kompleksi : 70 s ribozom mRNA fmet-tRNAfmet
2- Bağlanılacak bir sonraki aminoasil-tRNA (mRNA’ da AUG’den sonraki kodona uyan
antikodonlu aasil-tRNA)
127
Uzamanın Safhaları 1. safha
Bir sonraki aasil-tRNA + Tu- GTP → aasil-tRNA –Tu-GTP
aasil-tRNA-Tu-GTP Tu-GDP+Pi
+ Yeni aasil-tRNA 70 s70s başlangıç kompleksi (kompleks)
130
2. Safha: P ve A bölgelerinde oturan aa’ler arasında peptid bağı m.g 50 s subunitindeki; peptidil transferaz enzimi
131
3. safha: TRANSLOKASYON
Ribozomun mRNA üzerinde 3’ ucuna doğrubir kodon kaymasıdır
Böylece → A bölgesindeki dipeptidil-tRNA P bölgesine P bölgesindeki- boş tRNA → sitoplazmaya
134
IV-Sonlanma ve Ribozomdan Salınma
mRNA’daki şifreye göre son aa takıldıktan sonra SONLANMA KODONLARI; UAA, UAG, UGA ‘dır. Bunlar hiçbir aa kodlamaz
Bu kodonlara gelinince 3 tane SONLANMA veya SALINIM FAKTÖRÜ işe karışır
R1, R2, S → Sonlanma proteinleridir
135
SONLANMA veya SALINIM FAKTÖR’lerinin işlevleri :
1- Polipeptid zincirini son tRNA’dan ayırma ve polipeptid zincirini sitoplazmaya salma
2- P kısmında boş kalan tRNA’ yı → sitoplazmaya 3- 70 s ribozomu 30s + 50 s’li subunitelere ayırma (Böylece yeni bir polipeptid zinciri sentezlenebilir)
137
V.Kıvrılma ve İşlenme
Posttranslasyonel Modifikasyonlar -Polipeptid zincirinin biolojik aktif hale
gelmesi için geçirdiği değişimler;
Sekonder, tersiyer, kuarterner yapıların oluşumu
Bazı grupların takılması
Bazı grupların çıkarılması
138
PROTEİN SENTEZİNİN DÜZENLENMESİ
1- Transkripsiyonel Kontrol → Bakterilerde 2-Translasyonel Kontrol → Eukaryotlarda (karmaşık, ?)
139
TRANSKRİPSİYONEL KONTROL
Bir hücredeki enzimler;
A) YAPISAL enzimler:
Her hücrenin tipine göre sabit miktarda
B) UYARILABİLİR enzimler:
Yapımı şartlara göre veya
(uyarılabilen- baskılanabilen enzimler)
140
A) BASKILANABİLEN enzim
E.coli → tek N kaynağı NH4+ tuzları
→ tüm aa’leri sentezler
*Ortama histidin ilavesiyle, histidin sentezleyen enzimler baskılanır
(son ürün inhibisyonu)
141
B)UYARILABİLEN enzim
Normalde mikterı az, ama bazı şartlarda yapım miktarı artan enzimler
Ör: -Galaktozidaz Laktoz → D-Glukoz + D-Galaktoz
E.coli’de
- -Galaktozidaz normalde 5-6 tane.
- Ortamda glukoz varsa bu enzim hiç kullanılmaz
- Tek C kaynağı laktozlu besi yerinde
-1-2 dk’da 1000 tane - Galaktozidaz sentezi
142
OPERON: Birbiriyle fonksiyonel olarak ilişkili ve şartlara göre açılıp, kapatılabilen genler grubudur
143
LAC OPERONU
Yapısal genler : z → -Galaktozidaz y → permeaz a → A proteini
Düzenleyici gen : i → represör protein
Kontrol genleri : p → promoter 0 → operator
İndükleyici : allolaktose (Laktozun izomeri)