“Año de la consolidación del Mar de Grau.”.

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL PERÚ

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AMBIENTAL

TEMA: PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

ASIGNATURA: Microbiología

INTEGRANTES

AZAÑA FELIX RONALD

ESPEJO HUERTA SERGIO

RIMAC BAUTISTA ANGELY

DOCENTE: JUAN AYALA PANIURA

FECHA DE ENTREGA: 09 /06/2016

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2016

Contenido

1 INTRODUCCION..........................................................................................................................4

2 -OBJETIVOS.................................................................................................................................5

2.1 Objetivo General:...............................................................................................................5

2.2 Objetivos Específicos:.........................................................................................................5

3 MARCO TEORICO........................................................................................................................6

3.1 MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA:........................................................................6

3.2 Condiciones generales para el cultivo de microorganismos...............................................6

3.2.1 disponibilidad de nutrientes adecuados.....................................................................6

3.2.2 Consistencia adecuada del medio..............................................................................7

3.2.3 Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases........................................................7

3.2.4 Condiciones adecuadas de humedad.........................................................................7

3.2.5 Luz ambiental.............................................................................................................7

3.2.6 pH...............................................................................................................................7

3.2.7 Temperatura...............................................................................................................7

3.2.8 Esterilidad del medio (Auto clavado)..........................................................................8

3.3 Tipos básicos de medios de cultivo....................................................................................8

3.4 Clasificación de los medios de cultivo................................................................................9

3.5 Utilización de los medios de cultivo.................................................................................10

3.5.1 Diagnóstico clínico en medicina humana y veterinaria.............................................10

3.5.2 Industria farmacéutica y biotecnológica...................................................................10

3.5.3 Otras industrias y sectores productivos (agricultura, química).................................10

3.5.4 Control del medio ambiente.....................................................................................10

3.5.5 Investigaciones.........................................................................................................10

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3.6 EOSINA AZUL DE METILENO – EMB AGAR........................................................................11

3.6.1 USO:..........................................................................................................................11

3.6.2 FUNDAMENTO:.........................................................................................................11

3.6.3 FORMULA.................................................................................................................11

3.6.4 INSTRUCCIONES........................................................................................................11

3.6.5 CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO...........................................................................11

3.6.6 ALMACENAMIENTO..................................................................................................12

3.6.7 PROCEDIMIENTO......................................................................................................12

3.6.8 Interpretación de los resultados...............................................................................12

3.6.9 Control de calidad.....................................................................................................13

3.6.10 Limitaciones..............................................................................................................13

3.6.11 Precauciones............................................................................................................14

4 -PROCESO EXPERIMENTAL.......................................................................................................15

4.1 ESTERILIZACION DE MATERIALES.....................................................................................15

4.1.1 MATERIALES, EQUIPOS y REACTIVOS:......................................................................15

4.1.2 PROCEDIMIENTO:.....................................................................................................15

4.1.3 RESULTADO..............................................................................................................15

4.2 PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO: EMB AGAR........................................................16

4.2.1 MATERIALES Y EQUIPOS:..........................................................................................16

4.2.2 REACTIVOS:...............................................................................................................16

4.2.3 PROCEDIMIENTO......................................................................................................16

4.2.4 RESULTADO..............................................................................................................16

4.3 SIEMBRA DE CULTIVO.......................................................................................................17

4.3.1 MATERIALES Y EQUIPOS...........................................................................................17

4.3.2 PROCEDIMIENTO......................................................................................................17

5 -ANEXOS...................................................................................................................................18

6 -ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS.................................................................................20

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7 -CONCLUSIONES.......................................................................................................................21

8 -BIBLIOGRAFIA..........................................................................................................................22

1 INTRODUCCION

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el

laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es

el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han

preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes aproximadamente.

En este presente informe del laboratorio de ingeniería ambiental en el curso de

microbiología; se lleva a cabo de un proceso de medio de cultivo, por el cual lo

primero es esterilizar los materiales en el autoclave, pasando después por la

preparación del medio que en este caso, se trabajó con el EMB agar donde se le

hace un previo definición sobre cómo está estructurado, y para qué tipo de

bacterias beneficia, dado por nuestra investigación más beneficia a la familia

Enterobacteriaceae (E.coli, salmonella, etc); y después se recolecta la muestra

como aporte a nuestra prueba de cultivo de microorganismo, como resultado

pasando por un periodo determinado, se halló la presencia de E.coli y salmonella

dividida en dos dentro de la placa Petri.

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2 OBJETIVOS

2.1 Objetivo General:

Comprender la secuencia experimental de un medio de cultivo Agar (EMB).

Conocer el proceso para obtener un cultivo de microorganismos.

2.2 Objetivos Específicos:

Poner en práctica lo teórico sobre lo que es cultivo de microorganismos.

Preparación del agar EMB.

Describir el procedimiento experimental del medio de cultivo.

Reconocer que microorganismo se encuentra en el medio de cultivo como

resultado de nuestra práctica.

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3 -MARCO TEORICO

3.1 MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA:

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales:

para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos.

El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).

3.2 Condiciones generales para el cultivo de microorganismos3.2.1 Disponibilidad de nutrientes adecuados.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,

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Magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

3.2.2 Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

3.2.3 Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

3.2.4 Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

3.2.5 Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

3.2.6 pH

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

3.2.7 Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.

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3.2.8 Esterilidad del medio (Auto clavado)

Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de esterilización de material. Aunque cabe notar que, debido a que el proceso involucra vapor de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plásticos (a excepción del polipropileno).

3.2.8.1 Tipos de desinfección:

Según el nivel de actividad antimicrobiana, la desinfección se puede definir en:

Desinfección de alto nivel: que destruye todos los microorganismos (bacterias vegetarianas, bacilo tuberculoso, hongos y virus), con la excepción de las esporas. Algunos desinfectantes de alto nivel pueden aniquilar un gran número de esporas resistentes en extremas condiciones de prueba, pero el proceso requiere hasta 24 horas de exposición al desinfectante.

Desinfección de nivel intermedio: esta desinfección inactiva el Mycobacterium tuberculosis, que es significativamente más resistente a los germicidas acuoso que las demás bacterias vegetativas, la mayoría de los virus y la mayoría de los hongos, pero no destruye las esporas.

Desinfección de bajo nivel: esta no destruye esporas, bacilos tuberculosos ni virus. Se utilizan en la práctica clínica por su rápida actividad sobre formas bacterianas vegetativas, hongos y virus lipofilicos de tamaño medianos.

3.2.8.2 PROCEDIMIENTO:

Primero separamos los materiales que íbamos a auto clavar que fueron matraz y vasos de precipitados.

Luego pasamos el algodón con alcohol por los materiales para mantenerlos estéril.

Después de tener limpios los materiales pasamos a cubrirlos con el papel kraft para ponerlos en la autoclave.

3.3 Tipos básicos de medios de cultivo

3.3.1 medios para aislamiento primarios

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

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selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina)

enriquecidos: suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias, ayudando a su identificación (Lowenstein).

3.3.2 medios para identificación

diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo) específicas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-Fermentación).

3.4 Clasificación de los medios de cultivo

Según su origen:

3.4.1 NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.

3.4.2 SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

3.4.3 SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

Según su consistencia

3.4.4 LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

3.4.5 SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".

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3.4.6 SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.

3.5 Utilización de los medios de cultivo 3.5.1 Diagnóstico clínico en medicina humana y veterinaria

Detección de microorganismos patógenos a partir de muestras de fluidos, tejidos y excretas y sus toxinas causantes de enfermedades.

3.5.2 Industria farmacéutica y biotecnológica

Cultivo masivo de microorganismos productores de metabolitos (proteínas, factores de crecimiento, aminoácidos, péptidos, antibióticos, etc.).

Control de la calidad (control de proceso, materias primas, productos terminados, aguas, residuales y ambiente).

3.5.3 Otras industrias y sectores productivos (agricultura, química)

Cultivo masivo de microorganismos (obtención de polímeros, azúcares y otros)

Control de la calidad (control de proceso, materias primas, productos terminados y ambiente)

3.5.4 Control del medio ambiente

Control de las aguas y fuentes de abasto Control ambiental (aire, suelos) Control de residuales

3.5.5 Investigaciones

Estudios morfológicos, funcionales, sistemáticos y de otro tipo, dirigidos al conocimiento de la flora microbiana.

Investigaciones relacionadas con el desarrollo de sustancias o productos en las industrias y sectores anteriormente señalados.

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3.6 EOSINA AZUL DE METILENO – EMB AGAR 3.6.1 USO:

Es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacterias. Los colorantes inhiben las Gram positivas.

3.6.2 FUNDAMENTO:El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante.

3.6.3 FORMULA

3.6.4 INSTRUCCIONESMedio de cultivo listo para usar en frascos

Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos.

Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos del baño maría y dejar enfriar.

Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de Petri estériles.

Placas listas para usar.

3.6.5 CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTOMedio de cultivo color purpura vinoso.- Nota: en el caso del medio de cultivo listo para usar en frascos, durante

la esterilización se reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el

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medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.

3.6.6 ALMACENAMIENTO- Medio de cultivo listo para usar en frascos a 10-35 ºC - Medio de cultivo listo para usar en placas a 2-8 ºC

3.6.7 PROCEDIMIENTO Siembra

En superficie, por estriado directo a partir de la muestra. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubación En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas.

3.6.8 Interpretación de los resultadosMicroorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras.

3.6.9 Control de calidad

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3.6.10 Limitaciones- En el caso de los microorganismos fermentadores, no se puede

diferenciar el carbohidrato metabolizado.

- Para la identificación de género o especie microbiana se deben realizar

pruebas bioquímicas adicionales.

- Algunas cepas de Salmonella y Shigella no crecerán en EMB Agar.

- Durante la esterilización el azul de metileno puede precipitar. Es

importante re suspender el precipitado mientras se distribuye en placas

de Petri estériles el medio preparado.

- Conservar el medio preparado en placas a 2-8 ºC y protegido de la luz

ya que los indicadores presentes son fotosensibles y pueden inhibir el

desarrollo de algunas especies de Proteus si no se conservan

apropiadamente.

3.6.11 Precauciones

- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.

- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado.

- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro,

así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.

- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.

- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y

manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad

establecidas por el laboratorio.

- Las características del producto pueden alterarse si no se conserva

apropiadamente.

- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo

según reglamentaciones vigentes.

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4 -PROCESO EXPERIMENTAL

4.1 ESTERILIZACION DE MATERIALES

4.1.1 MATERIALES, EQUIPOS y REACTIVOS:

2 placas Petri

Matraz 25 y 50 ml Vaso de precipitado 10 y 25 ml Alcohol Algodón Papel Kraft Autoclave

4.1.2 PROCEDIMIENTO:

Primero separamos los materiales que íbamos a autoclavar que fueron

matraz, vasos de precipitados y placa Petri.

Luego pasamos el algodón con alcohol por los materiales para mantenerlos

desinfectados.

Después de tener limpios los materiales pasamos a cubrirlos con el papel

kraft para ponerlos en la autoclave a una temperatura de 100°.

4.1.3 RESULTADO

Los materiales fueron esterilizados con éxito mediante en la autoclave.

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4.2 PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO: EMB AGAR

4.2.1 MATERIALES Y EQUIPOS:

Balanza analítica Auto clavado Espátula Matraz Agitador magnético

4.2.2 REACTIVOS:

Agar EMB

4.2.3 PROCEDIMIENTO

Añadir 3.75 g a 1 litro de agua destilada.

Llevar la ebullición hasta disolución completa.

Esterilizar en autoclave a 121 °C ,15 minutos enfriar a 60 °C, agitar el medio

para oxidar el azul de metileno (que recupere su color azul) y para

suspender el precipitado que forma parte esencial del medio.

Luego para meter nuevamente a la camarita de auto clavado.

4.2.4 RESULTADO

Se logró sin ningún inconveniente el preparado medio EMB agar, cumpliendo bien

los pasos requeridos con el fin de no afectar al momento de la siembra de cultivo.

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4.3 SIEMBRA DE CULTIVO

4.3.1 MATERIALES Y EQUIPOS

Asa de sembrado

Mechero

Encendedor

Máquina de autoclave

Plumón marcador

2 placas Petri

Matraz

4.3.2 PROCEDIMIENTO

Primero se cogió una placa Petri y se le vertió agar (medio de cultivo) ya

preparado.

Luego se mantuvo estéril al ambiente volviéndose gelatinoso al enfriarse.

Posteriormente con el hisopo sacamos las heces de cuy

Flameando primero al abrir la muestra después se abrió la placa Petri y

roseamos en la muestra en la superficie.

Flameamos para cerrar la muestra de las heces de cuy.

El mismo procedimiento lo hicimos con el asa del sembrado y ponemos al

otro lado del cultivo.

Se volvió a flamear la muestra y después cerramos la placa Petri a las

11:30am.

Se guardó luego la placa Petri con el medio de cultivo para enviarlo a la

incubación (24 horas /37°C).

4.3.3 RESULTADOS

Encontramos las bacterias E. Coli, Salmonela y algunos hongos.

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5 -ANEXOS

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Imagen 3: Sacando las muestras de heces de cuy para colocarlo dentro del medio de cultivo

Imagen 2: Abriendo el medio de cultivo para posteriormente flamearlo.

Imagen 4: Esterilizando la muestra de heces de cuy

Imagen 1: Auto clavando los materiales para realizar el medio de cultivo.

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Imagen 8: Luego de haber sido sacado de la maquina incubadora se logró apreciar el medio de cultivo de la E.coli

y Salmonellas.

Imagen 5: Colocando la muestra de heces de cuy en el medio de cultivo separándolas

previamente.

Imagen 6: Esterilizando los hisopos para luego ser utilizados en la extracción de heces de cuy

Imagen 7: Flameando la muestra para posteriormente llevar el medio de cultivo a la

incubación.

6 -ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS

Como el EMB agar contiene colorantes de azul de metileno y eosina y, que inhiben las bacterias Gram positivas en cierto grado. Los colorantes también actúan como indicadores en respuesta a la fermentación de la lactosa o la sacarosa por parte de los microorganismos.

Por lo tanto las colonias de E.coli pueden exhibir un brillo verde metálico característico debido a la rápida fermentación de la lactosa.

Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que las colonias de salmonella y Shigella son incoloras o de color ámbar transparentes.

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales, permitiendo el desarrollo de todas las especie de la familia Enterobacteriaceae. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, aquellos que son capaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; estos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.

 Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes

 mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

El agar con eosina y azul de metileno es una combinación del medio de Levine y el de Holt-Harris y Teague, contiene una mezcla de peptonas según levine y presenta dos carbohidratos lactosa y sacarosa. Este medio de cultivo permite una clara diferencia entre las colonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermenta; el contenido de eosina y azul de metileno inhiben en cierto grado organismos Gram positivos. La presencia de sacarosa permite para algunos miembros del grupo coliforme fermentarla con más facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positiva son azules a moradas con brillo metálico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras y las que son negativas en lactosa o sacarosa, se observan incoloras o rosa pálido transparentes.

Las entero bacterias fermentadoras de lactosa (Enterobacter, Klebsiella) se ven rosa/rojo/violeta. E. Coli se ve de color verde metálico, debido a la precipitación de los colorantes a pH muy ácido. Las no fermentadoras de lactosa (Salmonella, Providencia, Shigella, Proteus) se ven transparente.

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7 -CONCLUSIONES

El medio EMB agar más es factible en la familia Enterobacteriaceae

en ellos se le incluye a las Gram negativas, gracias a la preparación

del medio de cultivo y a la muestra que fue de heces de cuy, es que

tuvimos como resultado las presencia de E.coli y salmonella.

Reconocimos la presencia E.coli, por su característica de ser verde

metálico y la salmonella por su color negro.

Antes de realizar con todo el proceso del medio de cultivo, se

esteriliza los materiales con el fin de que no encuentre sin ningún

contaminante y en condiciones para su uso.

Al esparcir más la muestra, más nos conviene ya que así se puede

hallar más microorganismos en su siembra.

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8 -BIBLIOGRAFIA

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

http://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa)

http://www.britanialab.com/productos/229_hoja_tecnica_es.pdf

https://www.bd.com/resource.aspx%3FIDX%3D8765

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm

http://www.probiotek.com/wp-content/uploads/2014/01/1011-E_AGAR-CON-EOSINA-Y-AZUL-DE-METILENO-EMB.pdf

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