HEMATOLOGA

El Laboratorio de Anlisis Veterinarios realiza la hematologa por medio de un autoanalizador ADVIA 120 (Siemens). Este instrumento est provisto de un programa informtico, para distintas especies de mamferos. Con este programa se pueden determinar todos los parmetros hematolgicos de todos los mamferos, ya que automticamente se vara el umbral de sensibilidad, adaptndose a los diferentes tamaos celulares de cada especie.

El instrumento, por medio de un lser, cuenta al menos 10.000 clulas (hemates, leucocitos o plaquetas), y por medio de distintos reactivos y segn el tamao celular realiza la frmula leucocitaria.

La forma de trabajar del instrumento, y la interpretacin de los resultados se explica a continuacin, de forma detallada. Al tratarse de un citmetro de flujo y contar un nmero elevado de clulas, los resultados son ms precisos que si se realizara este tipo de anlisis en otros analizadores hematolgicos o de forma manual, debido a su tecnologa. Para mayor informacin sobre la interpretacin de este tipo de grficas, reproducimos el siguiente artculo:

INTERPRETACIN DE PARMETROS GRFICOS EN HEMATOLOGIA.

Reproduccin del artculo: Interpretacin de Parmetros Grficos en Hematologa. Snchez Visconti, G. Pequeos Animales (58), 47-56. 2005.

INTRODUCCIN

El diagnstico clnico se basa en una recopilacin de datos que nos informan acerca del estado de salud de un animal. Uno de esos datos son los que nos proporcionan los anlisis clnicos, y dentro de ellos estn los informes hematolgicos.

Hoy en da los laboratorios de anlisis clnicos disponemos de autoanalizadores hematolgicos que nos generan multitud de datos numricos y grficos de la serie roja, blanca, plaquetas, clulas anormales y precursoras. Aunque estamos acostumbrados a fijarnos a primera vista en unos pocos valores hematolgicos, como son el nmero de hemates, leucocitos y plaquetas, cantidad de hemoglobina, hematocrito y porcentaje de poblaciones leucocitarias, el resto de parmetros que nos proporcionan estos instrumentos nos ayudan a obtener una mayor informacin, y por tanto mayor potencia diagnstica.

En este artculo explicaremos como interpretar las grficas de los informes hematolgicos y su variacin en diversas patologas, consiguiendo con ello poder llegar a un diagnstico bastante acertado de la enfermedad. Puesto que un grfico no es ms que la representacin de dos variables y todo grfico se compone por tanto de datos numricos, tambin explicaremos que significan esos datos, y sus intervalos numricos de referencia. Existen muchos tipos de autoanalizadores hematolgicos, pero todos ellos determinan los mismos parmetros y todos desarrollan grficas. Los instrumentos que analizan 5 poblaciones de leucocitos lgicamente nos darn mayor informacin que los de 3 poblaciones, por lo que su utilidad para el diagnstico tambin ser mayor. Nuestro laboratorio trabaja con un citmetro de flujo, provisto de un lser, el Technicon H1

(Bayer), por lo que las grficas que mostraremos corresponden a este instrumento, aunque en algunos casos la forma de las grficas no coincida con las de otros autoanalizadores de otras marcas comerciales, el fundamento numrico es el mismo.

Como vemos en la figura 1, se representa un informe hematolgico de un perro y en la tabla I se resumen las abreviaturas que suelen aparecer en los informes A partir del informe, comentaremos todos los parmetros de la serie roja, blanca, plaquetas y variaciones de todos ellos en patologas concretas.

Figura 1

TABLA I

LEU = Leucocitos/L

HEM =Hemates/L

HB = Hemoglobina total g/dL

HCT = Hematocrito %

VCM = Volumen corpuscular medio fL

HCM = Hemoglobina corpuscular media pg

CHCM = Concentracin de hemoglobina corpuscular media g/dL

RDW = Ancho de distribucin de hemates %

HDW = Ancho de distribucin de hemoglobina g/dL

PLQ = Plaquetas/L

VPM = Volumen plaquetar medio fL

PDW = Ancho de distribucin de plaquetas %

PTC = plaquetocrito %

NEUT = Neutrfilos/L %

LINF = Linfocitos/L %

MONO = Monocitos/L %

EOS = Eosinfilos/L %

BASO = Basfilos/L %

LUC = Clulas grandes no teidas/L %

Abreviaturas (y sus unidades) que suelen aparecer en los informes hematolgicos.

SERIE ROJA

En el canal de clulas rojas y plaquetas, el instrumento esferocita los hemates, los hace pasar por un capilar de uno en uno y los cuenta, dando el nmero de hemates por volumen de plasma (HEM x106/L), y por medio del lser determina el volumen y el ndice de refraccin de los mismos. Al estar las clulas esferocitadas, puede determinar el volumen sin error (VOLUM. HEM), midiendo su dimetro. El volumen medio de hemates para un perro es de 45 a 95 fL, y para un gato de 29 a 70 fL. De la suma de la determinacin del volumen obtenido clula por clula y del nmero de hemates, se calcula:

HC: hematocrito o la relacin del volumen de hemates con el de la sangre total.

HC = VCM x HEM/1000

VCM: volumen corpuscular medio de cada hemate. Se calcula por estadstica.

En la figura 2 se representa la grfica de volumen de hemates dentro de dos lneas, que comprenden los valores normales antes indicados. Como podemos observar, en esta grfica se ordenan los hemates por tamao de menor a mayor, por lo tanto podemos deducir que la grfica es simplemente una curva de Gauss. En algunas ocasiones esta grfica se desplaza hacia la izquierda, lo que significa que existe una poblacin importante de clulas que son pequeas. En el informe entonces aparecen 1,2 o 3 cruces en microcitsis (MICRO). Por el contrario, si la grfica se desplaza hacia la derecha, la poblacin dominante ser macroctica (MACRO), apareciendo cruces en esa casilla del informe.

Figura 2

Los lmites de la curva de esta grfica deben estar comprendidos entre los valores de volumen antes indicados, por lo que otro parmetro a tener en cuenta es el ancho de distribucin de hemates, o el ancho de la curva (RDW), el cual representa de forma numrica, el coeficiente de variacin del mnimo y mximo de la curva, o histograma de la figura 2.. Su utilidad es informar numricamente de la existencia de anisocitsis, es decir de la variacin del volumen eritrocitario. sto ocurre cuando existen varias poblaciones de distinto tamao. Si tenemos un RDW elevado y en el histograma hay una poblacin desplazada hacia la izquierda, y/o hacia la derecha, en el informe aparecern cruces en anisocitsis (ANISO).

Al medir el ndice de refraccin de los hemates, el instrumento calcula la concentracin de hemoglobina por hemate (CONC HB), siendo de 25 a 39 g/dL en perros y de 26 a 40 g/dL en gatos. De la suma de esta concentracin, medida clula a clula, se determina por clculo:

CHCM: concentracin corpuscular media de hemoglobina o la cantidad de hemoglobina contenida en 100 mL de hemates. CHCM = HB/HCTx100.

Exactamente igual que para el volumen de los hemates, obtenemos una grfica de concentracin de hemoglobina (figura 3), donde se distribuyen de menor a mayor las distintas cantidades de hemoglobina contenida en los hemates, siendo el ancho de esta curva (HDW) el parmetro que nos informa sobre posibles fenmenos de anisocroma (ANISOCR). La desviacin del histograma de hemoglobina hacia la izquierda, por tanto implica hipocroma (HIPO) y hacia la derecha hipercroma (HIPER). El HDW, por consiguiente, ser la desviacin estndar de la curva de hemoglobina, y un valor de este parmetro elevado significa anisocroma, apareciendo en el informe cruces en la casilla de ANISOCR.

Figura 3

Adicionalmente, el instrumento determina la hemoglobina (HB) de forma habitual (convirtindola en cianometahemoglobina, y midindola espectrofotomtricamente), y a partir de ah por clculo se obtiene la HCM: hemoglobina corpuscular media o valor medio de hemoglobina en cada hemate.

HCM = 10 x HB/HEM.

Una vez definidos estos parmetros, veremos la utilidad de todos estos ndices, que es simplemente poder clasificar los distintos tipos de anemias. Normalmente se define una anemia como un descenso en los valores de hemoglobina y/o del hematocrito, por debajo de lo normal.

En las ANEMIAS FERROPNICAS suele existir parte de la poblacin de hemates que son microcticos, pero a veces el nmero de ellos es tan pequeo, que no suele afectar al VCM total. Adems, aunque las anemias ferropnicas no son regenerativas (para considerar una anemia como regenerativa, el ndice de reticulocitos debe de ser de 2.5 mayor), la consecuente respuesta de la mdula sea produce clulas macrocticas hipocrmicas, con lo cual el VCM suele llegar a ser normal. En este caso, para llegar a un diagnstico acertado el valor del VCM no nos sirve, por lo que debemos fijarnos en la desviacin de los histogramas de volumen de hemates y concentracin de hemoglobina (figura 4A), donde observamos que claramente hay una poblacin destacada hacia la izquierda en cada uno de ellos, es decir existe una poblacin de clulas microcticas, y cierta cantidad de hemoglobina baja (hipocroma). As mismo aparecern alarmas en MICRO e HIPO, as como RDW y HDW alterados. Si posteriormente medimos los niveles de hierro srico y son bajos, corroboraremos el diagnstico.

Figura 4

Las ANEMIAS REGENERATIVAS se producen nicamente por dos causas: por hemlisis y hemorragias. En este tipo de anemias, la alta produccin de clulas por parte de la mdula sea (para reemplazar los hemates perdidos) aporta a la sangre gran cantidad de clulas jvenes y precursoras, entre ellas los reticulocitos. Las clulas precursoras son macrocticas e hipocrmicas. Este tipo de clulas tambin aparecen en transfusiones y muestras sanguneas de varios das. En la figura 4B podemos observar como en el histograma del volumen de hemates existe una poblacin macroctica (la curva se desplaza hacia la derecha), y sin embargo en el grfico de concentracin de hemoglobina, aparece una poblacin en la zona de la izquierda, indicando hipocroma. Esto se traducir en forma de alarmas morfolgicas de MACRO e HIPO. As mismo, los valores de RDW y HDW aparecern aumentados. La consecuencia es que este tipo de informe nos refleja un aumento de la eritropoyesis, hecho que aparece en anemias inmunomediadas, hemorragias y en infecciones producidas por hemobartonella (en gatos) y a veces en babesiosis y ehrlichiosis.

Existe una tercera posibilidad de anemia, y es la que cursa con clulas macrocticas y normocrmicas. Esta situacin puede ocurrir en gatos, a veces en infeccin por el virus de la leucemia felina, y en perros en algunos casos raros de mal absorcin de vitamina B12 o en tratamientos con antagonistas de los folatos (difenilhidantona y metotrexato, por ejemplo). En un proceso de CID (coagulacin intravascular diseminada) se producen esquistocitos, o fragmentos de hemates que pueden tambin pueden aparecer en el histograma como clulas microcticas.

Las plaquetas se cuentan en el mismo canal que los hemates, aunque sus resultados se diferencian de stos, debido a que tienen un ndice de refraccin distinto entre s. Mientras que los hemates este ndice est por encima de 1.38, el de las plaquetas no supera esta cifra. Por tanto, de la misma forma que con los hemates, tambin se obtiene un histograma de su volumen (figura 5) o VOLUM. PLQ, as como el volumen plaquetar medio o VPM, siendo de 6 a 11 fL en perros, y de 4 a 6 fL en gatos.

Figura 5

Estos dos parmetros nos van a ser de gran utilidad para evaluar una trombocitopenia. Un VPM aumentado nos estar indicando una activacin de la trombopoyesis, dado que las plaquetas grandes suelen ser ms jvenes que las pequeas, y la causa puede ser debida a una trombocitopenia, aunque no se pueda diferenciar el origen de la misma. VPM aumentados tambin se pueden hallar en alteraciones de la mdula sea, coagulacin intravascular diseminada y trombocitopenia inmunomediada. Adems, para las plaquetas tambin se obtienen otros ndices, como son el plaquetocrito o PTC, que indica la relacin del volumen de plaquetas con el de la sangre total, y el ancho de distribucin de plaquetas (PDW) que representa el ancho de la curva de VOLUM. PLQ. Nos podemos encontrar un PDW aumentado en trombocitopenias inmunomediadas y en ehrlichiosis. En este caso el nmero de plaquetas es pequeo y la curva de VOLUM. PLQ es casi una lnea (figura 6).

Tambin podemos saber si existe agregacin plaquetaria, por una imagen caracterstica que se visualiza en la grfica de perox (figura 7). En esta grfica se observa una nube de puntos de forma lineal, orientndose a 45 0 en dicha grfica. Esa nube de puntos son plaquetas agregadas, y el nmero total de plaquetas puede estar disminudo. En otras ocasiones podemos observar un pico a la izquierda del histograma de plaquetas, que corresponde a fragmentos de hemates.

Figura 6

La trombocitopenia nos indica el desarrollo de un proceso patolgico, aunque hay que tener en cuenta que algunas circunstancias nos pueden llegar a disminuir el nmero de plaquetas. El almacenamiento de la sangre por espacio de 2 das, no afecta al recuento de plaquetas, segn Willard en 1989, siendo este hecho adems comprobado en nuestro laboratorio. Sin embargo, el uso de heparina sdica-litio como anticoagulante, disminuye el nmero de plaquetas. En los gatos la agregacin de plaquetas es un hecho frecuente, por lo que a veces se puede obtener una falsa trombocitopenia. Esta situacin suele aparecer en muestras muy pequeas, donde la proporcin de anticoagulante en el tubo de muestra, respecto a la sangre, es alta.

Figura 7

LEUCOCITOS

Dos son los canales por los que el instrumento determina el nmero de leucocitos y sus diferentes tipos de poblaciones, as como clulas precursoras y patolgicas de la serie blanca. Uno de ellos es el canal de peroxidasa. En este canal se clasifican los distintos tipos de leucocitos. Una vez lisados los hemates, se cuenta el nmero de leucocitos (entre 5.000 y 15.000), y por mtodos citoqumicos se determina la actividad peroxidsica de cada poblacin de leucocitos, clasificndose cada uno de ellos en base a su tamao y actividad peroxidsica. En la figura 8 se muestran las distintas reas donde se orientan cada una de las poblaciones de leucocitos en un perro.

Figura 8

As, los linfocitos se agrupan hacia la izquierda y abajo del histograma, ya que son clulas pequeas y poco teidas, y los neutrfilos arriba y a la derecha, al ser mayores y poseer mayor tincin. En gatos, los eosinfilos son las clulas ms grandes, aunque no se tien con la peroxidasa, por lo que se localizan en la parte superior de la grfica, encima de los neutrfilos. Como hemos visto anteriormente, tambin se cuentan en el canal de perox las plaquetas agregadas. Existe un parmetro que es el ndice de actividad peroxidsica media de la poblacin de neutrfilos, o MPXI. Si es alto, indica la presencia de cayados, dando alarmas en forma de cruces en la casilla D. IZQ. Si por el contrario es bajo, indica una patologa de la serie mieloide. El MPXI en un perro se halla comprendido entre 0 y 8, y en un gato entre 0 y 10.

Hay tambin un rea donde se agrupan las LUC o clulas grandes no teidas, que corresponden a linfocitos grandes hiperactivos, linfoblastos, mieloblastos y en general clulas patolgicas. El porcentaje de LUC normal se halla entre el 0 y 3 % en perros, y entre el 0 y 1 % en gatos. Estas clulas no se tien con peroxidasa, y su aumento nos puede ayudar a diagnosticar una posible leucemia. La figura 9 muestra una grfica de un perro (resultado real) con leucemia linfoblstica aguda (foto 1). Se puede observar como la mayora de las clulas estn encuadradas en la zona de LUC, ya que los linfoblastos son clulas grandes que no se tien con la peroxidasa. Tambin se observa una poblacin anormal en el histograma de baso-lobularidad, en la zona correspondiente a los basfilos, debida a un aumento de linfoblastos. Un aumento de LUC se traduce en alarmas como IG + (granulocitos inmaduros), ATIP + (linfocitos atpicos).

Figura 9

Foto 1

En el otro canal, el de baso-lobularidad, se determinan leucocitos mononucleares (linfocitos y monocitos) y polimorfonucleares (neutrfilos, eosinfilos y basfilos). Los polimorfonucleares tambin presentan grnulos en su citoplasma, por lo que tambin se denominan granulocitos. Los ncleos de los leucocitos son separados de su citoplasma (excepto en los basfilos), y se tien y ordenan segn su tamao, los lbulos nucleares que presenta y su ndice de refraccin, clasificndose de esta forma en polimorfo nucleares (PMN), mononucleares (MN) y basfilos (figura 8). As se obtiene una grfica en forma de gusano", donde en la cabeza se agrupan los MN y en el cuerpo los PMN. Los PM son ms densos que los MN, debido a la lobularidad y a que tienen una cromatina muy compacta, por eso se distribuyen hacia la derecha de la grfica (el cuerpo). Cuando hay desviacin a la izquierda, los ncleos de los cayados estn menos segmentados y tienen la cromatina ms dispersa, y por lo tanto menos densa que los

neutrfilos, por lo que estas clulas se localizan en el cuello del gusano. Si existe una severa granulacin txica de los neutrfilos, el ncleo tambin es menos denso, y estas clulas tambin se acumulan en la zona del cuello del gusano. El ndice de lobularidad (IL) refleja el grado de segmentacin de los leucocitos. Si el ndice es alto, la poblacin es predominantemente poli lobulada, indicando un aumento de la serie granuloctica, como en el caso de inflamaciones o infecciones. Si por el contrario este ndice es bajo, la poblacin que abunda es la mononucleada, indicando que existe desviacin a la izquierda, en forma de alarma (D. IZQ +), o alteraciones de la serie linfoide o mieloblstica, apareciendo en este caso una alarma en BLASTS (blastos). En casos extremos donde el nmero de eosinfilos es muy alto, pueden aparecer stos como una panza en el cuerpo del gusano. Por ltimo, algunos artefactos pueden aparecer en la zona de los PMN, como es el caso de la lipemia. Los quilomicrones se localizan en esta zona en forma de S, por debajo del cuerpo del gusano.

CONCLUSIONES

La automatizacin en los laboratorios es actualmente algo habitual, no slo por el alto nmero de muestras que se procesan a diario, sino por la precisin en los anlisis. Los humanos tendemos a creer en lo que vemos, y es difcil concebir que un instrumento sea capaz de distinguir entre distintos tipos de clulas. Sin embargo, afortunadamente hoy en da existen autoanalizadores que realizan con xito este tipo de anlisis. Con instrumentos como el descrito en este artculo, no slo podemos determinar el nmero de clulas blancas, rojas y plaquetas, sino que adems podemos detectar clulas precursoras y patolgicas, y diagnosticar con antelacin a la realizacin de pruebas ms especficas y sofisticadas, distintas patologas de la sangre.

El gran avance de los analizadores hematolgicos son las grficas que procesan. En el caso de los hemates, por medio de curvas que representan su tamao y cantidad de hemoglobina, podemos ser capaces de clasificar, a simple vista, el tipo de anemia e incluso detectar clulas rojas precursoras. Tambin podemos saber si existen fragmentos de hemates. Con las plaquetas podemos saber si su nmero es real, por estar o no agregadas. Pero el mayor avance en hematologa veterinaria, con este tipo de instrumentos, es la determinacin de los distintos tipos de clulas blancas. Se pueden determinar las cinco poblaciones de leucocitos en perros y gatos, pudiendo saber por su nmero si existe un proceso inflamatorio, desviacin a la izquierda, tendencia a un proceso alrgico o una infeccin parasitaria. Pero lo ms importante es que podemos detectar clulas tumorales, en forma de clulas precursoras, y por medio de las grficas y los ndices numricos, saber si el animal es normal o presenta alguna alteracin como las leucemias, parvovirosis o eosinofilia, entre otras.

Por tanto, la ventaja que presenta, los informes de este tipo es la rapidez y la precisin con la que nos enfrentamos a una patologa de tipo hematolgico, o de otro tipo, pero que se refleja en cambios en los parmetros normales sanguneos. Aprendiendo a observar todos los datos que el informe nos proporciona, sacaremos el mayor partido a los resultados hematolgicos.

TABLA II

PERROS --------------------------------------------------------- GATOS

LEU 4.6 17.4---------------------------------------------------------LEU 5.5 19.5

HEM 5.7 8.9---------------------------------------------------------HEM 5.5 10

HB 13 2-------------------------------------------------------------- HB 8 14

HTC 40 63----------------------------------------------------------HTC 24 45

VCM 64 78--------------------------------------------------------- VCM 39 55

HCM 21 26--------------------------------------------------------- HCM 12 18

CHCM 30 36-------------------------------------------------------CHCM 30 36

RDW 11 15-------------------------------------------------------- RDW 14 19

HDW 1.4 2.6------------------------------------------------------ HDW 1.7 2.7

PLQ 82 3------------------------------------------------------------ VPM 4 6

PDW 33 65--------------------------------------------------------- PDW 25 65

PTC 0.09 0.25----------------------------------------------------- PTC 0 0.3

CONC. HB 25 39-------------------------------------------------- CONC. HB 25 - 40

VOLUM. H 25 39--------------------------------------------------- VOLUM. H 29 - 70

NEUT(%) 45 - 76----------------------------------------------------- NEUT(%) 35 75

LINF(%) 16 45------------------------------------------------------ LINF(%) 20 55

MONO(%) 1 8------------------------------------------------------- MONO(%) 1 4

EOS(%) 1 10-------------------------------------------------------- EOS(%) 1 10

BASO(%) 0 2-------------------------------------------------------- BASO(%) 0 - 2

LUC/%) 0 3----------------------------------------------------------- LUC(%) 0 1

IL 2.1 2.9-------------------------------------------------------------- IL 1.6 2.4

MPXI 0 8--------------------------------------------------------------- MPXI 0 10

Valores normales, para perros y gatos, de los distintos parmetros que suelen aparecer en los informes hematolgicos.

BIBLIOGRAFIA

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De todas formas, en la clnica se pueden determinar parmetros hematolgicos tambin de forma manual. El nmero de los distintos tipos de clulas se puede obtener mediante cmaras de recuento, y las plaquetas con tinciones especficas. Respecto a la frmula leucocitria, tras una tincin se pueden clasificar al microscopio las distintas poblaciones de forma manual, segn su morfologa, como se muestra en un artculo que adjuntamos.

FRMULA LEUCOCITARIA: INTERPRETACIN

Reproduccin del artculo: Interpretacin de la frmula leucocitaria. Snchez Visconti, G. ARGOS, Abril de 2002., 42-44.

Los leucocitos son las clulas que, por sus caractersticas, nos proporcionan ms informacin sobre el estado general de salud de un paciente. Responsables de la defensa del organismo, ya que eliminan cualquier agente infeccioso (bacterias, virus o parsitos), actan en procesos inflamatorios, son los mediadores del funcionamiento de las vacunas y, como cualquier otro tipo de clulas, pueden sufrir alteraciones, dando lugar a diversas neoplasias.

Los leucocitos se dividen, segn la presencia o ausencia de grnulos en su citoplasma, en granulocitos y agranulocitos.

Granulocitos:

- Neutrfilos.

- Eosinfilos.

- Basfilos.

- Agranulocitos:

- Monocitos.

- Linfocitos.

El recuento en la sangre del nmero de cada una de estas clulas, expresado en porcentaje, es lo que se denomina FRMULA LEUCOCITARIA o leucograma.

REALIZACIN DE LA FRMULA LEUCOCITARIA:

La forma ms sencilla y exacta de realizar una frmula leucocitaria es con un frotis sanguneo. Para ello se debe obtener una fina capa de sangre entera recin extrada, o conservada en anticoagulantes (EDTA disdico-tripotsico, heparina sdica-litio o citrato sdico), extendiendo la sangre en un porta objetos y ayudndonos con el borde de otro. Una vez seca la extensin, sta se tie con un colorante de tipo Romanowsky; tras un lavado y secado, se aade una gota de aceite de inmersin y se observa al microscopio en el objetivo 100X. La mejor zona de observacin es desde la mitad del frotis hacia el extremo ms fino, empezando de arriba abajo, y de izquierda a derecha, para evitar contar simultneamente la misma clula. Contando de 100 a 200 clulas, podremos calcular el porcentaje final de los distintos tipos celulares sin demasiado error.

Actualmente existen autoanalizadores hematolgicos que de modo automtico realizan la frmula leucocitaria. Estos instrumentos hoy en da estn muy introducidos en muchas clnicas veterinarias, y todos ellos nos informan correctamente del nmero de leucocitos totales. Sin embargo, respecto a la frmula, los nicos analizadores hematolgicos que pueden competir con el ojo humano son los citmetros de flujo. Debido a su tecnologa y al nmero elevado de leucocitos que son capaces de contar (cerca de 10.000), estos analizadores nos proporcionan una frmula leucocitaria de 5 POBLACIONES con una precisin cercana a la nuestra y realizan distintos tipos de grficas que son extremadamente tiles, ya que existen ciertos patrones compatibles con algunas patologas, y adems nos ayudan a detectar cualquier error en la frmula. Con cualquier otro tipo de instrumentos, nicamente tendremos una aproximacin de la frmula leucocitaria, por lo que sta debera ser realizada manualmente, y fundamentalmente cuando nos hallemos ante una frmula alterada.

Nuestros intervalos de referencia para los distintos tipos de leucocitos son:

PERROS/GATOS

Neutrfilos: 45 76 %./ 35 75 %.

Linfocitos: 16 45 %. / 20 55 %.

Monocitos: 1 - 8 %./ 1 - 4 %.

Eosinfilos: 1 10 %. / 1 10 %.

Basfilos: 0 2 %./ 0 2 %.

FUNCIN DE LOS DISTINTOS LEUCOCITOS:

Debemos considerar cmo acta cada tipo de leucocito para poder entender en qu tipo de alteraciones puede variar su nmero, lo cual se reflejar en la frmula leucocitaria. De forma general, podemos dividirlos en fagocitos e inmunocitos.

Los fagocitos son los neutrfilos, eosinfilos, y monocitos. Son clulas que aparecen como primera lnea de defensa contra agentes infecciosos. Su nmero, por tanto, se incrementar en todos los procesos que impliquen una agresin, tanto bacteriana como parasitaria. Hay que tener en cuenta, sin embargo, que los eosinfilos no tienen un papel predominantemente fagocitario, como veremos ms adelante. Aunque todos los fagocitos no actan de la misma forma, es importante sealar que son atrados, frente a cualquier agresin, hacia un lugar especfico del organismo por medio de antgenos (propios o extraos), o por sustancias quimiotcticas liberadas. Este fenmeno de atraccin celular se denomina quimiotaxis. Esto significa que en procesos inflamatorios, donde se libera una gran cantidad de este tipo de mediadores, tambin nos encontraremos con un alto porcentaje de fagocitos.

Segn lo expuesto, su nmero aumentar en procesos:

1. Infecciosos. 2. Inflamatorios. 3. Inmunomediados.

Los inmunocitos son los linfocitos. stos se dividen en linfocitos T y B. Los linfocitos T son los responsables de la inmunidad celular. Su papel es el de reconocer a un antgeno extrao y desencadenar toda la respuesta inmunitaria. Aparte de controlar y regular el sistema inmunitario, tambin pueden actuar directamente sobre virus o clulas tumorales. Los linfocitos B por su parte, tras su transformacin en clulas plasmticas, producen inmunoglobulinas o anticuerpos, siendo los responsables de la inmunidad humoral. El papel de los anticuerpos es mediar en la identificacin exacta del antgeno extrao, y promover en definitiva la actuacin especfica de las clulas fagocticas y en general la respuesta inmunitaria. Ciertos clones de linfocitos B permanecen como circulantes actuando como memoria del sistema inmunitario y facilitando una respuesta ms rpida ante una posterior exposicin a los mismos antgenos. Las clulas de memoria son las responsables de la inmunidad que se adquiere al paso de muchas infecciones o inducida por la vacunacin.

El nmero de linfocitos se elevar en procesos:

Inmunomediados.

En cierto tipo de tumores.

Independientemente de las agresiones que sufra el organismo, otro tipo de causas puede incrementar el nmero total de leucocitos, o en particular de alguno de sus tipos. El ejemplo ms claro lo tenemos en la accin de los glucocorticoides sobre los leucocitos, los cuales inducen a un aumento del nmero total de los mismos, y en particular de neutrfilos, adems de producir linfopenia.

El ejercicio y el estrs son otras causas que producen leucocitosis, siendo predominantemente neutroflica y monoctica en el perro, y linfoctica en el gato. Por el contrario, la leucopenia suele aparecer en ciertas enfermedades vricas (como la parvovirosis) y tras la anestesia.

ALTERACIONES DE LA FRMULA LEUCOCITARIA:

Cada tipo de leucocito tiene una funcin especfica en el organismo. A continuacin explicaremos cules son, y en qu procesos estn involucrados. Su morfologa se describe refirindonos a clulas teidas.

NEUTRFILOS.

Como hemos mencionado anteriormente, los neutrfilos son la primera barrera de defensa del organismo y normalmente su nmero es superior al resto de los leucocitos. Son clulas de forma redonda, con el ncleo lobulado de color azul oscuro y grnulos en el interior del citoplasma. Si en el ncleo observamos ms de 5 lbulos, significa que nos hallamos ante un neutrfilo envejecido. Suelen aparecer en inflamaciones crnicas o por efecto de los glucocorticoides.

Neutrfilo

El aumento de precursores de los neutrfilos, como los cayados es lo que se denomina desviacin a la izquierda. Los precursores se incrementan cuando existe gran demanda de neutrfilos hacia un tejido, debido a un proceso inflamatorio. Si el nmero total de

leucocitos es elevado y hay desviacin a la izquierda, podemos tener la sospecha de la existencia de una infeccin.

Cayado

Cuando los neutrfilos presentan en su citoplasma un aspecto reticular azulado o inclusiones granulares de color azul (llamadas corpsculos de Dehle) se define como granulacin txica. Esta granulacin se observa en infecciones bacterianas graves e intoxicaciones. Sin embargo, en gatos se suelen observar normalmente corpsculos de Dehle

As como la neutrofilia aparece en procesos inflamatorios, sobre todo agudos, sean o no de origen bacteriano, y por efecto de los glucocorticoides (por liberacin de noradrenalina), la neutropenia es debida a ciertos medicamentos (como las cefalosporinas o algunos anestsicos), a leucemias o por ciertos virus como el parvovirus y los virus de la leucemia (FeLV) y de la inmunodecifiencia (FIV) felinas.

MONOCITOS.

Los monocitos tienen forma irregular, con el citoplasma basfilo (azulado), a menudo con vacuolas, y ncleo grande. Es la clula ms grande de todos los leucocitos, y si no se posee demasiada experiencia se puede llegar a confundir con los cayados. Los monocitos cuando se encuentran dentro de los tejidos, se denominan macrfagos.

Monocito

Su aumento suele ir paralelo al de los neutrfilos. Es por tanto un indicador de inflamacin, sobre todo crnica. En peritonitis infecciosa felina (PIF), suele hallarse en gran nmero, tanto en sangre como en lquido asctico. Tambin su nmero se eleva en anemias hemolticas autoinmunes, debido a que reconocen los antgenos de membrana propios como si fueran extraos.

EOSINFILOS.

Son clulas con ncleo bilobulado, redondas y con grnulos de color rojo-anaranjado, cuyo contenido son sustancias antihistamnicas que inhiben la liberacin de histamina y serotonina por parte de los mastocitos. Su funcin principal es como mediadora en los procesos alrgicos, aunque tambin aparece en procesos parasitarios. As mismo actan como moderadores de la inflamacin aguda.

Eosinfilo

La eosinofilia, por tanto, se observa en procesos alrgicos, en filariosis y en el caso de parsitos intestinales cuando stos estn presentes fuera del tracto intestinal. En gatos tambin se elevan por procesos asmticos y evidentemente aumentan en granulomas eosinoflicos. Los glucocorticoides producen eosinopenia.

BASFILOS.

Es raro encontrar en la sangre basfilos. Son clulas redondas, algo mayores que los neutrfilos, con el ncleo irregular (suele ser trilobulado) y el citoplasma con grnulos de intenso color azul. Las Ig E, involucradas en cierto tipo de reacciones de hipersensibilidad, los estimulan, produciendo la liberacin de la histamina y heparina que contienen sus grnulos, desencadenando todas las reacciones inflamatorias. La basofilia suele acompaar a la eosinofilia, debido a su papel en los procesos alrgicos. A veces pueden observarse en nmero elevado en mastocitomas.

LINFOCITOS.

Este tipo de clulas, pequeas, de forma redonda y con un ncleo de color azul oscuro intenso que ocupa todo el citoplasma, tiene muchos subtipos y distintas funciones:

linfocitos B circulantes (clulas de memoria), clulas plasmticas (producen anticuerpos), linfocitos T citotxicos (antivirales), supresores (inhiben la respuesta inmune) y coadyuvantes o helper (inducen la multiplicacin y diferenciacin de los linfocitos B y otros linfocitos T).

Linfocito

La linfocitosis es tpica de leucemias linfoblsticas, en las cuales suelen observarse clulas precursoras. Otras causas distintas, como la vacunacin, o en el caso del gato por estrs, tambin la pueden producir. La linfopenia suele ser debida a glucocorticoides y a alteraciones como el quilotrax y los linfomas.

En el cuadro 1 se resume en qu procesos puede aparecer aumento o disminucin de cada tipo de leucocito.

CUADRO 1

NEUTROFILIA Glucocorticoides

Inflamacin (por infeccin o no)

NEUTRFILOS

NEUTROPENIA Parvovirosis

Cefalosporinas

FeLV-FIV

Leucemias (mieloides)

Anestesia LINFOCITOSIS Estrs (en gatos)

Leucemia linfoctica

Vacunas

LINFOCITOS

LINFOPENIA Glucocorticoides

Quilotrax

Linfosarcomas

MONOCITOS MONOCITOSIS Inflamacin crnica

Anemia autoinmune

PIF EOSINOFILIA Alergias

Parsitos (filariosis)

Procesos asmticos (en gato)

Granuloma eosinoflico

EOSINFILO

EOSINOPENIA Glucocorticoides

BASFILOS BASOFILIA Hipersensibilidad (alergias)

Mastocitomas

CONCLUSIONES

La frmula leucocitaria, como hemos visto, nos puede dar gran informacin sobre el estado general de salud de un animal, pero hay que considerar tambin el nmero total de leucocitos, para su correcta evaluacin. Como cualquier resultado analtico, la frmula leucocitaria por s misma no es capaz de confirmarnos una patologa especfica. Si los resultados obtenidos nos inducen a pensar que existe algn proceso patolgico, esta sospecha se debera complementar con otro tipo de anlisis. En el caso de inflamaciones, si son debidas a parsitos habr que detectarlos por medio de pruebas inmunolgicas u observacin directa. Si el proceso es bacteriano, debera buscarse el origen y realizar cultivos microbiolgicos. Actualmente existen mtodos analticos que nos evidencian la presencia de ciertos virus. Las neoplasias nicamente se pueden confirmar por estudios anatomopatolgicos, como citologas o biopsias. Todos estos mtodos confirmativos, inducidos por los resultados de la frmula leucocitaria, siempre apoyan al diagnstico clnico.

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- Harvey J.W. Interpretation of leukograms. En proceedings de Orlando, 1999.

RETICULOCITOS.

Los reticulocitos son clulas precursoras de los hemates y una elevada concentracin de

ellos en sangre significa que nos hallamos ante una ANEMIA REGENERATIVA. La mejor forma de saber si una anemia es o no regenerativa, es determinar el NDICE DE RETICULOCITOS (IR).

IR = (% Hematocrito/45) x % Reticulocitos

Si el ndice de reticulocitos (IR) es mayor de 2.5, la anemia es regenerativa.

COAGULACIN.

Las pruebas de coagulacin se determinan en un coagulmetro Coatron M1 (Kemia) monocanal termostatizado, en plasma obtenido de sangre recogida en citrato sdico. La concentracin de citrato debe ser del 3,2 % y la proporcin sangre:citrato debe ser de 9:1.

Las pruebas que se realizan rutinariamente son:

PT o protrombina, agrupa a varios factores de coagulacin, constituyendo la va intrnseca y comn.

PTT o cefalina, el conjunto de estos factores de coagulacin es la va extrnseca y comn.

Fibringeno

Aunque se puede determinar cualquier factor, el ms importante es el factor Von Willebrand ya que de todas las alteraciones hereditarias de la hemostasia, es la ms frecuente en perros.

Los factores de coagulacin se sintetizan en el hgado, y varios de llos de las vas extrnseca e intrnseca (II, VII,IX y X) son dependientes de la vitamina K para poder desempear su papel. Por eso muchas cusas de alteraciones en la coagulacin son debidas a problemas hepticos severos o a dficit de vitamina K.

La interpretacin de posibles causas ms comunes de hemorragia es la siguiente:

PT aumentado, PTT aumentado, Fibringeno normal: Deficit de vitamina K (intoxicacin por cumarinas, enteropatas graves) o hepatopatas.

PT normal, PTT aumentado, Fibringeno normal: Dficit de algn factor de la va intrnseca, tratamiento con heparina o enfermedad de Von Willebrand.

PT aumentado, PTT aumentado, Fibringeno bajo: Hepatopata severa o CID (coagulacin intravascular diseminada).

Hay que tener en cuenta que el citrato sdico de los tubos est en forma lquida y en cantidad considerable, por lo que si la cantidad de sangre extrada no llega a la marca de llenado que indican todos los tubos, sta estar ms diluda y por tanto los tiempos de coagulacin pueden ser ms alargados.

PDF o Productos de Degradacin del Fibringeno

Los trombos que aparecen en ciertas enfermedades estn formados por fibrina con enlaces cruzados, cuya digestin producida por la plasmina, da lugar a los PDF molecularmente distintos a los del fibringeno. La aparicin de PDF detectables en una muestra de sangre con citrato sdico, es indicativo de un proceso de caogulacin intravascular diseminada (CID).

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