4. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 4. MATERIALES 4.1. INSTRUMENTOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO 4.1.1. Instrumentos: 1 Cocina eléctrica. 1 Gradilla 1 Pizeta. 4 Tubos de ensayo. 2 Vasos de precipitado de 100 ml. 4 Pipetas de 5 y 1 ml (2 de cada uno).

5. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 4.1.2. Reactivos: 10 gts. (1 ml) de H2SO4 (diluido al10%). 20 gts. de LUGOL (solución). 10 gts. (1 ml) de NaOH (diluido al 5 %). 8 ml. de SOL. ALMIDÓN (diluido al 2 %). 4.2. INSUMOS Y MATERIALES ADQUIRIDOS POR LOS ESTUDIANTES 4.2.1. Insumos: 15 cubitos de hielo. 1 cojín de agua destilada. 10 ml de saliva. Gasa médica. 4.2.2. Materiales: 1 lápiz marcador. 1 cinta masketein. Toallas de papel. Cámara fotográfica. H2SO4

6. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 5. PROCEDIMIENTO 5.1.Preparar la solución de almidón: 5.2. Obtención de muestra de saliva 1° PASO En una vaso de precipitado de 10 ml añadiir 25 gr de maizena. 2° PASO Añadir 40 ml de agua . 3° PASO Homogenizar la muestra. 4° PASO una vezz homeginazada esta lista para utilizar. PASO 1: Colocar la pieza de gasa sobre el vaso de precipitado. PASO 2: Adicionar la muestra de saliva. La cual pasara a tráves de la gasa y será recepcionada en el vaso de precipitdo. PASO 3: Complete los 10 ml de saliva. Siemprre teniendo en cuenta que no se forne espuma.

7. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 5.3.Preparar un baño María a una temperatura de 40 °C. 5.4. Rotule los cuatro tubos y proceda según el siguiente esquema: TUBO SOLUCIÓN 1 2 3 4 Sol. Almidón 2 ml. 2 ml. 2 ml. 2 ml. Lugol 3 gts. 7 gts. 3 gts. 3 gts. Sol. H2SO4 1 ml. ---- ---- ---- Sol. NaOH ---- 3 gts. ---- ---- Saliva 1ml 1ml 1ml 1ml 1 PASO Coger un vaso de precipitado de 50 ml. 2 PASO Adicionar agua de grifo. 3 PASO Poner a hervir. 4 PASO Entibiar a temperatura de 40° C. ROTULE 4 TUBOS DE ENSAYO PROCEDA SEGÚN EL ESQUEMA

8. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 5.4.1. Tubo 1 5.4.2. Tubo 2 OBSERVACIONES: Se tornó color azul con mayor intensidad, esto se debe a que el lugol en presencia del almidón cambia de color. Por lo tanto la amilasa fue desnaturalizada. OBSERVACIONES: A este tubo se adiciono: 4 gts. de lugol y 2 ml. de sol. NaOH (más de lo indicado). Si se decoloro a causa de que la sol. NaOH no estaba concentrada. Por lo tanto si hubo reacción enzimática. PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón. PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol. PASO 3 Adicionar 1 ml de H2SO4. PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 5 Llevar a baño María a 40 ° C. OBSERVAR Y ANOTAR PASO 1 Añadir 3 ml de sol. de almidón. PASO 2 Adicionar 8 gts. de lugol. PASO 3 Adicionar 1 ml de NaOH. PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 5 Llevar a baño María a 40 ° C. OBSERVAR Y ANOTAR

9. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 5.4.3. Tubo 3 5.4.4. Tubo 4 PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón. PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol. PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 4 Llevar a baño María a 40 °C. OBSERVAR Y ANOTAR OBSERVACIONES: Se decoloro rápido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática óptima y rápida. PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón. PASO 2 Adicionar 3 gts. de lugol. PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 4 Colocar en una vaso con precipitado de hielo picado. OBSERVAR Y

ANOTAR OBSERVACIONES: Si decoloro pero la intensidad fue ínfima, pero al añadir la saliva. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática, pero lentamente por la baja temperatura.

10. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 6. RESULTADOS 7. CUESTIONARIO GENEROSO ¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón? RPTA: La enzima amilasa degrada el almidón ¿Cómo está formado el almidón químicamente? RPTA: El producto formado por la polimerización de miles de monómeros de glucosa es el almidón. ¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico? RPTA: Una enzima encargada de degradar el almidón. ¿Cuál es el papel que desempeña el almidón en los animales? RPTA: Los polisacáridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidón amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos, y glucógeno del tejido animal. Los polisacáridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la boca mediante una reacción catalizada por la enzima amilasa salival. La velocidad de la hidrólisis catalizada por esta enzima, disminuye en el estómago por los iones H+1 . La glucosa es el principal producto de la hidrólisis del almidón y glucógeno. Alrededor de un tercio de la glucosa de la dieta a va los músculos esquelético y cardiaco para la producción y almacenamiento de energía; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio restante va al hígado para almacenarse en forma de glucógeno. La glucosa de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosíntesis de otros carbohidratos. ¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón? RPTA: Porque si la amilasa no actuara sobre el almidón, el almidón no podría ser degradado en moléculas simples, la glucosa, y no podría ser absorbida por las células. TUBO INTENSIDAD DEL COLOR AZUL ACTIVIDAD ENZIMÁTICA HIDRÓLISIS 1 Mayor No Inicial. 2 Ínfima Si Lenta 3 Pequeña Si Rápida 4 Ínfima Si Lenta

11. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL 8. RECOMENDACIÓN Sustituir el HCl por el H2SO4. Ser muy cuidadosos al momento de utilizar el H2SO4. Por no haber obtenido Al realizar el experimento con el TUBO 4, colocarlo en un vaso de precipitado con hielo picado, retirar del vaso a la hora de observar y dar las conclusiones. Sería conveniente realizar otra prueba con el procedimiento del TUBO 2, para saber con certeza la coloración que toma la muestra, la actividad y velocidad enzimática. Se debería realizar una prueba tomando en cuenta la velocidad de la reacción de las enzimas con el sustrato. 9. CONCLUSIÓN La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la actividad enzimática. A continuación detallamos su acción en diferentes medios y factores que intervienen en la amilasa salival: TUBO N° 1 El color de la muestra se torna de color azul intenso, se debe a que el almidón en presencia del lugol se torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es: ¿Por qué la amilasa salival no degrado al almidón? RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el H2SO4, por lo tanto no se produjo la degradación del almidón. Concluimos que el pH óptimo para que la amilasa realice su actividad enzimática, está dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y pancreática. La explicación es concreta: La amilasa fue desnaturalizada por el medio ácido donde se encontraba. TUBO N° 2 El color de la muestra se decoloro en segundo como en el Tubo 3. La pregunta es: ¿Porque no permaneció el color azul en la muestra, si el medio es básico (por la adición de la solución de NaOH)? RPTA: Porque, la solución del NaOH no se encontraba concentrada como del H2SO4, ya que el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la amilasa sobrevivió al medio y degrado al

almidón. Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un 100% en la actividad enzimática. La explicación es concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa presente en las muestras.

12. UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL TUBO N° 3 En pocos segundos la muestra se decoloro. La pregunta es: ¿Por qué se decoloro rápido la muestra? RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las condiciones adecuadas para degradar el almidón. Concluimos que la amilasa en un medio con temperatura cálida (37°C) y con pH casi neutro (5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su actividad enzimática. La explicación es concreta: Las enzimas dependen de dos factores importantes para su actividad enzimática, siendo estas la temperatura y el pH del medio en que reaccionan. TUBO N° 4 Cambio de color la muestra por la existencia del almidón y al adicionar la saliva el color azul de la muestra se tornó claro. Las preguntas son: ¿Por qué hubo tal cambio de coloración? RPTA: Porque la amilasa que se está presente en la saliva, degrado al almidón existente en la muestra. Sin embargo la actividad enzimática que realizo la amilasa fue lenta. ¿Por qué la actividad enzimática de la amilasa fue lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja temperatura del medio donde se desarrolló la actividad enzimática. Concluimos que la temperatura baja disminuye o influye en la actividad de la amilasa. La explicación es concreta: La amilasa requiere de una temperatura cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad enzimática.