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4. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 4. MATERIALES 4.1. INSTRUMENTOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO 4.1.1. Instrumentos: 1 Cocina elctrica. 1 Gradilla 1 Pizeta. 4 Tubos de ensayo. 2 Vasos de precipitado de 100 ml. 4 Pipetas de 5 y 1 ml (2 de cada uno).

5. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 4.1.2. Reactivos: 10 gts. (1 ml) de H2SO4 (diluido al10%). 20 gts. de LUGOL (solucin). 10 gts. (1 ml) de NaOH (diluido al 5 %). 8 ml. de SOL. ALMIDN (diluido al 2 %). 4.2. INSUMOS Y MATERIALES ADQUIRIDOS POR LOS ESTUDIANTES 4.2.1. Insumos: 15 cubitos de hielo. 1 cojn de agua destilada. 10 ml de saliva. Gasa mdica. 4.2.2. Materiales: 1 lpiz marcador. 1 cinta masketein. Toallas de papel. Cmara fotogrfica. H2SO4

6. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 5. PROCEDIMIENTO 5.1.Preparar la solucin de almidn: 5.2. Obtencin de muestra de saliva 1 PASO En una vaso de precipitado de 10 ml aadiir 25 gr de maizena. 2 PASO Aadir 40 ml de agua . 3 PASO Homogenizar la muestra. 4 PASO una vezz homeginazada esta lista para utilizar. PASO 1: Colocar la pieza de gasa sobre el vaso de precipitado. PASO 2: Adicionar la muestra de saliva. La cual pasara a trves de la gasa y ser recepcionada en el vaso de precipitdo. PASO 3: Complete los 10 ml de saliva. Siemprre teniendo en cuenta que no se forne espuma.

7. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 5.3.Preparar un bao Mara a una temperatura de 40 C. 5.4. Rotule los cuatro tubos y proceda segn el siguiente esquema: TUBO SOLUCIN 1 2 3 4 Sol. Almidn 2 ml. 2 ml. 2 ml. 2 ml. Lugol 3 gts. 7 gts. 3 gts. 3 gts. Sol. H2SO4 1 ml. ---- ---- ---- Sol. NaOH ---- 3 gts. ---- ---- Saliva 1ml 1ml 1ml 1ml 1 PASO Coger un vaso de precipitado de 50 ml. 2 PASO Adicionar agua de grifo. 3 PASO Poner a hervir. 4 PASO Entibiar a temperatura de 40 C. ROTULE 4 TUBOS DE ENSAYO PROCEDA SEGN EL ESQUEMA

8. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 5.4.1. Tubo 1 5.4.2. Tubo 2 OBSERVACIONES: Se torn color azul con mayor intensidad, esto se debe a que el lugol en presencia del almidn cambia de color. Por lo tanto la amilasa fue desnaturalizada. OBSERVACIONES: A este tubo se adiciono: 4 gts. de lugol y 2 ml. de sol. NaOH (ms de lo indicado). Si se decoloro a causa de que la sol. NaOH no estaba concentrada. Por lo tanto si hubo reaccin enzimtica. PASO 1 Aadir 2 ml de sol. de almidn. PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol. PASO 3 Adicionar 1 ml de H2SO4. PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 5 Llevar a bao Mara a 40 C. OBSERVAR Y ANOTAR PASO 1 Aadir 3 ml de sol. de almidn. PASO 2 Adicionar 8 gts. de lugol. PASO 3 Adicionar 1 ml de NaOH. PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 5 Llevar a bao Mara a 40 C. OBSERVAR Y ANOTAR

9. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 5.4.3. Tubo 3 5.4.4. Tubo 4 PASO 1 Aadir 2 ml de sol. de almidn. PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol. PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 4 Llevar a bao Mara a 40 C. OBSERVAR Y ANOTAR OBSERVACIONES: Se decoloro rpido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto se realiz la actividad enzimtica ptima y rpida. PASO 1 Aadir 2 ml de sol. de almidn. PASO 2 Adicionar 3 gts. de lugol. PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva. PASO 4 Colocar en una vaso con precipitado de hielo picado. OBSERVAR Y ANOTAR OBSERVACIONES: Si decoloro pero la intensidad fue nfima, pero al aadir la saliva. Por lo tanto se realiz la actividad enzimtica, pero lentamente por la baja temperatura.

10. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 6. RESULTADOS 7. CUESTIONARIO GENEROSO Cmo acta la amilasa sobre el almidn? RPTA: La enzima amilasa degrada el almidn Cmo est formado el almidn qumicamente? RPTA: El producto formado por la polimerizacin de miles de monmeros de glucosa es el almidn. Qu es la amilasa desde el punto de vista qumico? RPTA: Una enzima encargada de degradar el almidn. Cul es el papel que desempea el almidn en los animales? RPTA: Los polisacridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidn amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos, y glucgeno del tejido animal. Los polisacridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la boca mediante una reaccin catalizada por la enzima amilasa salival. La velocidad de la hidrlisis catalizada por esta enzima, disminuye en el estmago por los iones H+1 . La glucosa es el principal producto de la hidrlisis del almidn y glucgeno. Alrededor de un tercio de la glucosa de la dieta a va los msculos esqueltico y cardiaco para la produccin y almacenamiento de energa; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio restante va al hgado para almacenarse en forma de glucgeno. La glucosa de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosntesis de otros carbohidratos. Por qu es necesario para los animales que la amilasa acte sobre el almidn? RPTA: Porque si la amilasa no actuara sobre el almidn, el almidn no podra ser degradado en molculas simples, la glucosa, y no podra ser absorbida por las clulas. TUBO INTENSIDAD DEL COLOR AZUL ACTIVIDAD ENZIMTICA HIDRLISIS 1 Mayor No Inicial. 2 nfima Si Lenta 3 Pequea Si Rpida 4 nfima Si Lenta

11. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL 8. RECOMENDACIN Sustituir el HCl por el H2SO4. Ser muy cuidadosos al momento de utilizar el H2SO4. Por no haber obtenido Al realizar el experimento con el TUBO 4, colocarlo en un vaso de precipitado con hielo picado, retirar del vaso a la hora de observar y dar las conclusiones. Sera conveniente realizar otra prueba con el procedimiento del TUBO 2, para saber con certeza la coloracin que toma la muestra, la actividad y velocidad enzimtica. Se debera realizar una prueba tomando en cuenta la velocidad de la reaccin de las enzimas con el sustrato. 9. CONCLUSIN La amilasa degrada el almidn, segn los factores y medios en donde se da la actividad enzimtica. A continuacin detallamos su accin en diferentes medios y factores que intervienen en la amilasa salival: TUBO N 1 El color de la muestra se torna de color azul intenso, se debe a que el almidn en presencia del lugol se torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es: Por qu la amilasa salival no degrado al almidn? RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el H2SO4, por lo tanto no se produjo la degradacin del almidn. Concluimos que el pH ptimo para que la amilasa realice su actividad enzimtica, est dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y pancretica. La explicacin es concreta: La amilasa fue desnaturalizada por el medio cido donde se encontraba. TUBO N 2 El color de la muestra se decoloro en segundo como en el Tubo 3. La pregunta es: Porque no permaneci el color azul en la muestra, si el medio es bsico (por la adicin de la solucin de NaOH)? RPTA: Porque, la solucin del NaOH no se encontraba concentrada como del H2SO4, ya que el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la amilasa sobrevivi al medio y degrado al almidn. Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un 100% en la actividad enzimtica. La explicacin es concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa presente en las muestras.

12. UNJFSC INGENIERA AMBIENTAL BIOQUMICA HIDRLISIS DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL TUBO N 3 En pocos segundos la muestra se decoloro. La pregunta es: Por qu se decoloro rpido la muestra? RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las condiciones adecuadas para degradar el almidn. Concluimos que la amilasa en un medio con temperatura clida (37C) y con pH casi

neutro (5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su actividad enzimtica. La explicacin es concreta: Las enzimas dependen de dos factores importantes para su actividad enzimtica, siendo estas la temperatura y el pH del medio en que reaccionan. TUBO N 4 Cambio de color la muestra por la existencia del almidn y al adicionar la saliva el color azul de la muestra se torn claro. Las preguntas son: Por qu hubo tal cambio de coloracin? RPTA: Porque la amilasa que se est presente en la saliva, degrado al almidn existente en la muestra. Sin embargo la actividad enzimtica que realizo la amilasa fue lenta. Por qu la actividad enzimtica de la amilasa fue lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja temperatura del medio donde se desarroll la actividad enzimtica. Concluimos que la temperatura baja disminuye o influye en la actividad de la amilasa. La explicacin es concreta: La amilasa requiere de una temperatura clida (37 C) para realizar una ptima actividad enzimtica.