05 validacion de metodos analiticos

7/29/2019 05 Validacion de Metodos Analiticos

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Universidad Nacional de

Ingeniera

Escuela Profesional deQumica

FACULTAD DE CIENCIAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DEINGENIERA
http://images.google.com.pe/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Escudo1UNI.jpg&imgrefurl=http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Escudo1UNI.jpg&usg=__k1EOmqqShHAvFP512sAfMQUyMLg=&h=732&w=553&sz=87&hl=es&start=1&tbnid=wHhD7gnU-0FwAM:&tbnh=141&tbnw=107&prev=/images?q=escudo+de+la+universidad+nacional+de+ingenieria&gbv=2&hl=es


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1. INTRODUCCIN


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Ingeniera

Establece mediante estudios sistemticosde laboratorio, demostracin que lascaractersticas de dicho procedimientocumplen las especificaciones relativas aluso previsto de los resultados.

1. INTRODUCCIN


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La NTP-ISO/IEC 17025:20065.4.5 Validacin de los mtodos

5.4.5.1 La validacin es la confirmacin, a travs delexamen y el aporte de evidencias objetivas, de quese cumplen los requisitos particulares para un usoespecfico previsto.

5.4.5.2 El laboratorio debe registrar los resultadosobtenidos, el procedimiento utilizado para lavalidacin y una declaracin sobre la aptitud delmtodo para el uso previsto.

1. INTRODUCCIN


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Mtodos No normalizados Mtodos Desarrollados por el propio laboratorio

Mtodos Normalizados usados fuera de su alcance

Mtodos Normalizados modificados

CUNDO VALIDAR?

1. INTRODUCCIN


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SECUENCIA DE ACTIVIDADES EN LA VALIDACINDE MTODOS DE ENSAYO

1. INTRODUCCIN

Transformar la necesidad del clienteen requisitos analticos especficos

Seleccin dela metodologa

Seleccin de los

parmetros devalidacin

Caracterizar la

metodologa

Evaluacin delos parmetros

de validacin

Revalidacin


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Ingeniera

Evaluar las caractersticas de desempeo del

mtodo.Demostrar que el mtodo desarrollado por un

laboratorio es til para la aplicacin propuesta.

Demostrar que las modificaciones realizadas

a un mtodo no afectan su desempeo, de tal

manera que se obtenga resultados confiables.

Demostrar que un mtodo es equivalente a otro.

2. OBJETIVOS DE LA VALIDACIN


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Ingeniera

3. TIPOS DE VALIDACIN

Proceso de validacin para metodologasnuevas.

3.1. PROSPECTIVA

3.2. RETROSPECTIVA

Proceso de validacin para mtodos utilizadosa diario no validados anteriormente y de los

cuales se dispone de suficiente

documentacin para probar los atributos del

mtodo.


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Ingeniera

3. TIPOS DE VALIDACIN

Repeticin total o parcial de una validacin,por la introduccin de algn cambio que se

espera afecte a un mtodo ya validado.

3.3. REVALIDACIN


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4. REQUISITOS PARA LA VALIDACIN

Calificacin del

personal en el uso

de los mtodos avalidar.

Verificacin,

calibracin y control de

los instrumentos demedicin y material de

vidrio utilizado.


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Utilizacin de

reactivos

apropiados ydisoluciones de

trabajo valoradas.

Procedimiento

normalizado de

operacin delmtodo de ensayo.

ESTNDARES


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Observacin de las medidas

de seguridad y BPL.


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5. PROTOCOLO DE LA VALIDACIN

Describe las etapas de validacin de un

mtodo y establece la elaboracin de un plan

de validacin.
http://localhost/var/www/apps/conversion/tmp/scratch_10/VALIDACION%20Esquema%20Protocolo.pdfhttp://localhost/var/www/apps/conversion/tmp/scratch_10/VALIDACION%20Esquema%20Protocolo.pdfhttp://images.google.com.pe/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Escudo1UNI.jpg&imgrefurl=http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Escudo1UNI.jpg&usg=__k1EOmqqShHAvFP512sAfMQUyMLg=&h=732&w=553&sz=87&hl=es&start=1&tbnid=wHhD7gnU-0FwAM:&tbnh=141&tbnw=107&prev=/images?q=escudo+de+la+universidad+nacional+de+ingenieria&gbv=2&hl=es


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6. DOCUMENTACIN DE LA VALIDACIN

La documentacin de un mtodo tiene efecto

directo sobre la consistencia de su aplicacin,

en consecuencia, tiene tambin influencia ensu reproducibilidad y en la estimacin de la

incertidumbre asociada.

Se debe generar un informe de la validacin

del mtodo con informacin clara y sinambigedades, estar suficientemente

soportada para ser utilizada por los analistas y

producir resultados consistentes.


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7. PARMETROS DE DESEMPEO


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Es la proximidad de concordancia entre elvalor promedio obtenido de una serie de

resultados de prueba y un valor de

referencia aceptado.

La medida de la veracidad se expresa por

lo general en trminos de sesgo.

7.1. VERACIDAD


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Se define dos componentes del sesgo:

Sesgo del mtodo: Errores sistemticosinherentes al mtodo

Sesgo de laboratorio: Erroressistemticos caractersticos del laboratorioy de la interpretacin del mtodo.

7.1. VERACIDAD


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7.1. VERACIDAD

Sesgo del mtodo Sesgo del laboratorio

+ B

em += +

Variabilidad aleatoria

medida

Valor de referencia


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Se estima el sesgo combinado (sesgodel mtodo y sesgo de laboratorio) y debeser comparado con cualquier sesgo

proveniente del mtodo de referencia.

Debe ser medido contra los materiales omtodos de referencia apropiados

tomando en cuenta la precisin del

mtodo, la incertidumbre en la medicin y

la exactitud requerida.

7.1. VERACIDAD


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Determinacin de la veracidad.

Analizando muestras fortificadas(Ensayos de Adicin y Recuperacin).

Comparando los resultados obtenidos enun Ensayo de Aptitud.

7.1. VERACIDAD


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Utilizando Material de referenciaCertificado (MRC).

7.1. 1. DETERMINACION DE LA VERACIDAD

MRC

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Repeticin n

Se determina por: Prueba t-Student de una muestra

Prueba de Wilconson de una muestra


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Criterio de decisin


P valor ( =0.05) Conclusin

P valor > El mtodo es veraz al 95% deconfianza

P valor El mtodo no es veraz al 95%de confianza


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Ejemplo: Determinar la veracidad en los siguientes

resultados de ensayo de un MRC que contiene4.629 mg/mL


1 4.6202 4.6213 4.6244 4.626

5 4.6346 4.6287 4.6228 4.6279 4.631

10 4.62711 4.623

12 4.60813 4.621

14 4.60815 4.62716 4.61717 4.639

18 4.63519 4.63420 4.64021 4.62222 4.63123 4.63124 4.623

25 4.62126 4.625


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Comparando con un Mtodo de Referencia.


Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin n

Se determina por: Prueba t-Student de dos muestras

Prueba de Mann Whitney

Procedimiento Analtico Mtodo de Referencia

MuestraRepeticin 1

Repeticin 2

Repeticin n


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Ejemplo: La veracidad de un mtodo para lavigilancia de la concentracin de SO2 en el aire, fue

determinada por comparacin de los resultados

obtenidos del mtodo a validar con los resultados

de un mtodo de referencia.


Comparando con un Mtodo de Referencia.

Mtodo de referencia21.62 22.20 24.27 23.54 24.25 23.09 21.02

Mtodo nuevo21.54 20.51 22.31 21.30 24.62 25.72 21.54


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7.2. PRECISIN

Grado de concordancia entre los resultadosobtenidos al aplicar el procedimiento

experimental repetidas veces bajo las

condiciones establecidas

Repetibilidad Precisin intermedia Reproducibilidad

Nivel de

variabilidad


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7.2. PRECISIN

La precisin depende slo de la distribucinde los errores aleatorios y no se relaciona

con el valor verdadero.

La medida de la precisin generalmente se

expresa en trminos de imprecisin y seevala en base a la desviacin estndar de

los resultados de la prueba.


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7.2. PRECISIN

ReproducibilidadPrecisin en condiciones dereproducibilidad, es decir, condiciones

segn las cuales los resultados de prueba

se obtienen con el mismo mtodo, sobre

objetos de prueba idnticos, en diferenteslaboratorios, por diferentes operadores,

usando diferentes equipos.


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7.2.1. DETERMINACIN DE LA PRECISIN

Repeticiones independientes enMuestra.

Repeticin 1

Repeticin 2

Repeticin 3

Repeticin n

Se determina por: Comparacin con RSD de Horwitz

Muestra


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RSD experimental:

RSD Horwitz:

100exp

x

sRSD

erimental

))log(5.01(2 inConcentracHorwitz

RSD

Criterio de decisin Conclusin

RSDexperimental < RSDHorwitz Metodologa Precisa

RSDexperimental RSDHorwitz Metodologa No Precisa


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CRSD

log5.012%

Ecuacin de HorwitzValores aceptables de precisin en funcin de la concentracin

para reproducibilidad (aceptados por AOAC)


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Ejemplo: Para determinar la precisin en un

mtodo se evalu la dispersin de los resultadosen una muestra.

Repeticin mg/kg1 0.202 0.22

3 0.194 0.215 0.196 0.207 0.188 0.179 0.18

10 0.16



13 0.1914 0.2115 0.1916 0.2017 0.2318 0.1719 0.20

20 0.21


23 0.2124 0.1825 0.1626 0.2127 0.1928 0.1729 0.17

30 0.19


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Resultados

Concentracinpromedio (mg/kg)

Desviacinestndar (S)

%RSDExperimental

%RSDHorwitz

0.20 0.0183 9.15 20.39


Conclusin: La metodologa es Precisa


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7.3. SELECTIVIDAD / ESPECIFICIDAD

SelectividadCaracterizacin cuantitativa de la presenciade interferencias en la determinacin de un

analito mediante un procedimiento

determinado (IUPAC Compendium of

Chemical Terminology, 1987).


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Selectividad cualitativa: Indicacin de lapresencia de sustancias interferentes.

Selectividad cuantitativa: Caracterizacincuantitativa de interferentes.


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EspecificidadCapacidad de un mtodo para determinar elcontenido de un analito inequvocamente

en presencia de otros componentes

(impurezas, matriz, etc).


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Si las Interferencias estn presentes y nopueden ser separadas del analito o no sonconocidas pueden tenervarios efectos enel anlisis:o Distorsionar la seal.

o Contribuir a la seal del analito

produciendo un aparente incremento en

su concentracin.

o Suprimir la seal del analito.



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7.3.1. DETERMINACIN DE LA SELECTIVIDAD

La prueba consiste en verificar que lasinterferencias no afectensignificativamente la seal.

Se realiza muy frecuentemente en tcnicasinstrumentales como: espectrofotometra de

UV o cromatografa liquida, gaseosa.


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Ejemplo:Para tcnicas cromatogrficas, se debe de

comparar visualmente los cromatogramas

en los diferentes parmetros importantes

como: resolucin, tiempo de retencin, etc.

Se analizan:Blancos reactivos Blanco de matriz

Analito puro Patrn del Analito

Matriz adicionada con concentracin

conocida de analito puro


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Ejemplo:Se debe comparar los resultados obtenidos

en los distintos registros, y debe observarse:

La seal correspondiente a la matriz sea

despreciable frente a la del analito.

La seal del analito en la matriz fortificadadebe seguir el mismo patrn que la seal

del analito puro.

En el mejor de los casos, que no se

detecte seal en el blanco de matriz.


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7.4. LMITE DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN

Lmite de Deteccin (LoD)La menor concentracin del analito en una

muestra que puede detectarse pero no

necesariamente cuantificarse bajo las

condiciones establecidas.

El lmite de deteccin, expresado comoconcentracin cL, se deriva de la medicin

mas pequea xL que puede ser detectada

con certeza razonable para un

procedimiento analtico dado.


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XL

= Xbl

+ k Sbl

Es la medida de

las medicionesdel blanco (10),

valor positivo ocero.

Es un factor

numrico elegidode acuerdo al

nivel de

confianza

deseado.

Es la desviacin

estndar de lasmediciones del

blanco.


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Lmite de Cuantificacin (LoQ)Menor concentracin de analito que puede

determinarse con precisin y exactitud

razonables en las condiciones establecidas.

Se obtiene multiplicando por el factor elvalor obtenido en el calculo del lmite de

deteccin correspondiente.


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7.4.1. DETERMINACIN DEL LMITE DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN

EjemploLos datos obtenidos en la calibracin para

determinar plomo a partir de su espectro de

emisin de llama se analizaron por mnimos

cuadrados y la ecuacin obtenida fue:

S = 1.12 cPb+ 0.312Siendo cPbla concentracin de plomo en ppm y Sla seal de la intensidad relativa de la lnea de

emisin de plomo.


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7.4.1. DETERMINACIN DEL LMITE DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN

EjemploSe obtuvieron los siguientes resultados en los

replicados:

Determine el lmite de Deteccin y el lmite de

Cuantificacin.


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Es el intervalo entre las mas baja y alta

concentracin del analito de la muestra,

para la cual se ha demostrado que el

mtodo de ensayo tiene un nivel

apropiado de precisin y exactitud.

(Text on validation of analyticalprocedures. ICH Harmonized Tripartite

Guideline)

7.5. RANGO DE TRABAJO


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7.5. RANGO DE TRABAJO

El rango se expresa en las mismas

unidades que los resultados obtenidos

por ese mtodo.

Los rangos son establecidos por las

normativas.

Dentro de rango de trabajo puedeexistir un rango de respuesta lineal.


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7.5.1. OBTENCIN DEL RANGO DE TRABAJO

Dicho intervalo esta definido por:

La menor concentracin del intervalo,

que estara dada por los valores del

lmite de deteccin o lmite de

cuantificacin.

La mayor concentracin estaraestablecida por efectos que dependern

de la tcnica analtica y del sistema de

respuesta del instrumento.


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7.6. LINEALIDAD

Es la relacin entre la concentracin del

analito y la respuesta del mtodo.

Esta relacin denominada generalmente

como Curva de Calibracin no siempre es

lineal, en estos casos se debe determinar la

ecuacin adecuada.La linealidad define la capacidad del

mtodo para obtener resultados de la

prueba proporcionales a la concentracin

del analito.


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7.6. LINEALIDAD

Verificacin Mediante inspeccin visual, adems de

su confirmacin mediante revisiones de

linealidad empleando al menos 10

diferentes concentraciones.

Mediante evaluacin del intervalo detrabajo realizando clculos segn la

teora regresin lineal por mnimos

cuadrados.


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7.6.1. OBTENCIN DE LA LINEALIDAD

Obtencin La menor concentracin del intervalo,

que estara dado por el valor del lmite

de cuantificacin.

La mayor concentracin estara

establecida por efectos que dependernde la tcnica analtica y del sistema de

respuesta del instrumento.


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7.6.1. OBTENCIN DE LA LINEALIDAD

EjemploAnalice el intervalode calibracin

lineal del siguiente

experimento de

fluorescencia.

Concentracin(ug/mL)

Intensidad defluorescencia

0 0.1

2 8.0

4 15.76 24.2

8 31.5

10 33.0


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7.7. SENSIBILIDAD

Cambio de la respuesta del sistema demedicin en funcin del cambio de laconcentracin del analito. O es lacapacidad para discriminar entrepequeas diferencias de concentracin

del analito.Nota: Aunque esta definicin se aplicaclaramente a un instrumento de medicin,

tambin puede aplicarse al mtodo analtico

como un todo.


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7.7.1. DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD

ObtencinSe evala mediante la sensibilidad de

calibracin, que es la pendiente

concentracin/ unidades de intensidad de

los datos de la curva de calibracin a la

concentracin de inters, es decir, elgradiente de la respuesta de la curva, si la

respuesta es lineal con respecto a la

concentracin.
http://images.google.com.pe/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Escudo1UNI.jpg&imgrefurl=http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Escudo1UNI.jpg&usg=__k1EOmqqShHAvFP512sAfMQUyMLg=&h=732&w=553&sz=87&hl=es&start=1&tbnid=wHhD7gnU-0FwAM:&tbnh=141&tbnw=107&prev=/images?q=escudo+de+la+universidad+nacional+de+ingenieria&gbv=2&hl=eshttp://images.google.com.pe/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b6/Escudo1UNI.jpg&imgrefurl=http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Escudo1UNI.jpg&usg=__k1EOmqqShHAvFP512sAfMQUyMLg=&h=732&w=553&sz=87&hl=es&start=1&tbnid=wHhD7gnU-0FwAM:&tbnh=141&tbnw=107&prev=/images?q=escudo+de+la+universidad+nacional+de+ingenieria&gbv=2&hl=es


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7.7.1. DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD


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7.8. ROBUSTEZ

La robustez es una medida de la resistencia

de un mtodo al cambio de respuestas

cuando se introducen pequeas variaciones

en el procedimiento. (EURACHEM Guide

The fitness for purpose of analytical

methods)


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7.9. INCERTIDUMBRE

La incertidumbre es un parmetro asociado

con el resultado de una medida que

caracteriza la dispersin de los valores, que

podran ser razonablemente atribuidos al

mensurando el cual comprende varios

componentes.

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