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VALIDACION DE METODOS ANALITICOS


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MEDICIONES ANALITICAS VALIDAS

• Las mediciones analíticas deben ser realizadas para satisfacer requerimientos preestablecidos.

• Las mediciones analíticas deben ser realizadas utilizando métodos y equipos que hayan sido verificados de tal manera que aseguren que son adecuados a su propósito.

• El personal que realiza las mediciones analíticas debe

ser calificado y competente para asumir esta tarea.


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MEDICIONES ANALITICAS VALIDAS

• En forma regular, debe existir una evaluación independiente del desempeño técnico del laboratorio

• Las medidas analíticas realizadas en un laboratorio deben ser consistentes con las que se realizan en otros laboratorios.

• Las instituciones que realizan medidas analíticas deben tener procedimientos de control y aseguramiento de calidad bien definidos.


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ASPECTOS DE LA VALIDACION DE METODOS

•Especificaciones analíticas.

•Evaluación de su exactitud.

•Evaluación de su precisión (Repetibilidad y Reproducibilidad).

•Evaluación de incertidumbre.

•Sensibilidad.

•Especificidad

•Robustez.


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ASPECTOS DE LA VALIDACION DE METODOS

•Rango de concentraciones de trabajo y rango de linealidad.

•Límite de detección.

•Límite de cuantificación.

•Ensayos de recuperación.

•Grado de validación necesario según objetivos.


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EVALUACION DE PRECISION Y EXACTITUD

DE UN METODO ANALITICO

ESPECIFICACIONES ANALÍTICAS:

Los límites aceptables de exactitud y precisión están determinadas por los requerimientos de los resultados a obtener a través de dicho método.

•LÍMITES LEGALES•SISTEMAS DE ACREDITACIÓN•USUARIO DE LAS MEDICIONES•EXPERIENCIA PREVIA


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SELECCIÓN DEL MRC

• Nivel

• Matriz

• Cantidad

• Estabilidad

• Incertidumbre aceptable del MRC


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EXACTITUD DEL METODO

Esta propiedad se obtiene por comparación del valor promedio obtenido y el valor certificado , del MRC

Existen tres factores que contribuyen a la diferencia anterior:

• El error (incertidumbre) del valor certificado.

• El error de los resultados del proceso de medición que está

siendo evaluado, expresado como su desviación estándar d.

• El error sistemático global que el laboratorio puede estar cometiendo.


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CRITERIO DE ACEPTACION DE EXACTITUD

El criterio de aceptación de exactitud está dado por la siguiente expresión:

LAB = x - < ( t0.05 sw / n ) + U =

crítico

Se acepta cuando LAB < crítico

Para realizar esta prueba estadística, es necesario tener alguna información previa:

•El valor de U, del MRC•Un valor estimado de la precisión del método.•¿Cual es la magnitud del sesgo que se quiere detectar?•¿Cual es el número “n” de mediciones replicadas que

es necesario realizar?


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Para ilustrar el uso del criterio anterior, veamos un ejemplo tomado de un estudio de intercomparación (As) previo :

Un laboratorio participante realizó tres mediciones replicadas de un MRC obteniendo un valor promedio de 40,2 g/L con una desviación estándar de 0.49 g/L.

El MRC tenía un valor certificado de 41,7 g/L y U= 0.5 g/L

Entonces lab = | 40,2 - 41,7 | = 1,51,5

crítico =(t0.05; df=2 SD / n) + U = (4,303 0,49 / 3) + 0,5 = 1,72

En consecuencia “pasa” la prueba de sesgo


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CRITERIO DE ACEPTACION

DE EXACTITUD

Supongamos ahora que el mismo laboratorio realiza 9 determinaciones replicadas obteniendo el mismo valor promedio, con una desviación estándar menor e igual a

0, 31 g/L.

El valor de lab es el mismo: 1,5

Ahora, crítico es = (2,306 0,31/ 9) + 0,5 = 0,74

En consecuencia NO “pasa” la prueba de sesgo.

¿ QUE ES LO QUE OCURRE?


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Lo que nos faltó es una pregunta previa muy importante:

¿ Cual es la magnitud de sesgo que necesitamos detectar, de acuerdo a lo que es requerido?


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Supongamos que por requerimiento regulatorio, o para “aprobar” un requerimiento de desempeño por parte de un organismo regulador es aceptable un sesgo máximo del 5% relativo, en el rango de concentraciones 40 - 50 g/L.

El laboratorio sabe que su precisión al usar este método es del orden del 2% relativo o Coeficiente de Variación.

Usamos la Tabla 1 (ver Informe). Con y = 0,05, para

d = d / = 5% / 2% = 2,5 N = 3


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Si, en cambio, este laboratorio tuviera (típicamente) un Coeficiente de Variación del 5% relativo, tendríamos que para poder detectar un sesgo del 5%:

d = 5% / 5% = 1

y entonces de la Tabla 1 encontramos para y = 0,05 que

N = 13


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FUENTES DE SESGO

Control de las variables de medición Interferencias Calibraciones erróneas Contaminación Pérdidas Deterioro de las muestras Ineficiencias en las extracciones o

disolución de las muestras Blancos incorrectamente evaluados o no

tomados en cuenta.


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PRECISION DEL METODO

• Número de determinaciones replicadas

• Mediciones independientes


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EVALUACION DE LA PRECISION

• El control de la precisión del método implica la comparación entre la precisión (desviación estándar intralaboratorio) bajo condiciones de repetibilidad y el valor requerido de desviación estándar.

• Realizar las “n” mediciones independientes (previamente determinadas) sobre las muestras del MRC.

• Calcular, de la manera habitual el valor promedio y la desviación estándar (sw ), bajo condiciones de repetibilidad.


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CALCULO DE LA PRECISION DONDE r ES LA PRECISION REQUERIDA

A PARTIR DE UNA TABLA DE 2 OBTENER EL VALOR CRÍTICO 2TABLA

PARA 95% DE SIGNIFICACIÓN, PARA n-1 GRADOS DE LIBERTAD Y DIVIDIR PORN - 1.

LA DECISIÓN ES:

a) SI 2 < 2TABLA NO HAY EVIDENCIA QUE EL PROCESO DE

MEDICIÓN NO SEA TAN PRECISO COMO ES REQUERIDO.

b) SI 2 > 2TABLA HAY EVIDENCIA DE QUE EL PROCESO DE MEDICIÓN

NO ES TAN PRECISO COMO ES REQUERIDO.

2

2

r

ws


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OBTENCION DE d

•Utilizar la desviación estándar de reproducibilidad obtenida en un ensayo interlaboratorios.

•Si este valor no está disponible, se puede utilizar la reproducibilidad intra-laboratorio, obtenida de un gráfico de control para el método en estudio

•También podría usarse el valor de precisión suministrado por el certificado del MRC.


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EJEMPLO.

Objetivo: Evaluar si cierto método analítico (método A)

es suficientemente preciso, utilizando un MRC de

hierro en minerales.

Información del certificado del MRC:

= 60.73% Fe

D = 0.20% Fe

R (requerido) = 0.09% Fe


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EJ EMPLO

Se realizaron 10 determinaciones Independientes de Fe en el MRC, usando elmétodo A, con los siguientes resultados individuales:

Xi (%Fe) = 60.7, 60.8, 60.8, 60.9, 60.9, 60.9, 61.0, 61.0, 61.1, 61.2

x prom = 60.930% fe Sw = 0.149% fe

= (0.149/0.090)2 = 2.76

2tabla para 9 grados de libertad y 95% de confianza = 1.88

2 > 2tabla

Conclusión: la precisión intralaboratorio del método A no es tan buena como serequiere.

El método debe ser investigado químicamente.

2

2

r

ws


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EJEMPLO

• Después de reexaminar el procedimiento se mejoraron las condiciones del ataque ácido inicial y se repitió la evaluación anterior. Ahora la precision del metodo “A revisado” es tambien la requerida

• SE OBTUVO UN VALOR PROMEDIO DE 61.087% Fe, CON UNA DESVIACIÓN ESTÁNDAR DE 0.092% Fe.

-x - = 61.087 – 60.730 = 0.357% Fe2 D = 0.40% Fe

- x - < 2 D

POR LO TANTO, EL MÉTODO ES TAN EXACTO COMO ES REQUERIDO.


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EVALUACION DE UN PROCESO DE MEDICION A TRAVES DE UN PROGRAMA INTERLABORATORIO

• Establecer un número k de laboratorios participantes y el número n de mediciones replicadas que se efectuarán sobre un MRC adecuado al propósito del ensayo.

• Establecer los procedimientos técnicos y administrativos, por medio de los cuales la institución organizadora, coordinará el programa.

• Evaluación de la precisión: la precisión del método se expresa en términos de sw, que es la estimación de precisión intralaboratorio, y slm, que es la estimación de precisión interlaboratorios.

• La precisión intralaboratorio se determina de la misma manera que la descrita anteriormente.

• La precisión interlaboratorios puede ser determinada a través de un prueba estadística:


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CONTROL ESTADISTICO

El siguiente concepto debe ser tomado como un axioma:

“El primer objetivo de un proceso de medición en el laboratorio debe ser alcanzar su control estadístico”


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Ran

go (

n=

2)

(mm

ol/

L)


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CONTROL ESTADISTICO

Donde Rprom es el promedio de un conjunto de, por lo menos, 15 medidas por duplicado.

LSP es el límite superior de precaución, igual a 2.512 Rprom

LSC es el límite superior de control igual a 3.267 Rprom

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