A VARIABILIDADE GENTICABiologia Molecular da Clula

Trabalho elaborado por:Carolina CorreiaCtia BaroFrancisco SantosVnia CaldeiraNA MEDICINA FORENSE

Variabilidade GenticaMeiose> Crossing-over (profase I)> Colocao de cada cromossomas de cada par de homlogos, de um lado ou outro do plano equatorial do fuso acromtico feita ao acaso (metafase I) Resulta de: mutaes e recombinao gnica durante a meiose e a fecundao: Fecundao

Medicina Legal e ForenseEspecialidade mdica e jurdica

Usa conhecimentos tcnico-cientficos de Medicina para o esclarecimento de factos de interesse da Justia

Rene o estudo da Medicina, do Direito, da Biologia, da Qumica, da Balstica, da Fsica, da Sociologia...

Divide-se em vrias reas:> Antropologia forense > Traumatologia forense> Sexologia forense> Tanatologia

Variabilidade e Polimorfismos na Medicina Legal e ForenseO objectivo da anlise de DNA diferenciar um indivduo de outro pelo maior n de caractersticas possvel.

Na espcie humana 10% do genoma codifica protenas atravs do RNA, o restante so sequncias repetitivas.

a variabilidade deste restante, ou seja, das regies polimrficas, de funo estrutural que se utiliza nos exames forenses de DNA.

Variabilidade e Polimorfismos na Medicina Legal e ForenseAlelo - cada uma das variantes possveis de um locus polimrfico.Locus posio de um gene ou de um marcador gentico num cromossoma.Tipos de polimorfismos:> SNPs> VNTRs> Polimorfismos de repetio de transposesPolimorfismos: verificados em mais de 1% da polulao, sendo transmissveis descendncia. Geralmente sem ou com consequncias fentipicas no negativas.Mutaes: geralmente associadas a patologias, da no se alastrararem muito (menos de 1% da populao). Variaes genticas

Caso de Estudo a Medicina Forense e a Violao Sexual

Nos casos de violao e noutros cenrios criminais, as recolhas de amostras biolgicas (sangue, cabelo, smen, etc) permitem o isolamento do DNA de um eventual suspeito. Aps a recolha e amplificao da amostra de DNA pela tcnica de PCR bem como a sequenciao destes possvel ainda a descoberta de polimorfismos particulares e consequente identificao do criminoso.

A Investigao de uma ViolaoA vtima de violao foi uma rapariga de 14 anos, portadora de Sndroma de Down, no Rio de Janeiro em 1998.O crime foi notificado apenas alguns meses mais tarde, quando a gravidez resultante da violao se tornou evidente. Assim, a anlise forense do smen do violador estava fora de questo.A vtima obteve autorizao judicial para uma interrupo da gravidez.O feto abortado foi ento analisado para identificar o pai biolgico, tal como a me e 4 suspeitos deste caso de violao.

Tcnicas Utilizadas: Extraco do DNAMaterial biolgico:Recolha de sangue da vtima e suspeitosTecido da pele do fetoIncubao (15-18 horas, 56C)Uso de fenol e clorofrmio para extraco de DNASuspenso das preparaes de DNA em soluo (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA)Verificao da integridade do DNA: amostras colocadas num gel de agarose 0,8% com brometo de etdio electroforese, 100V, 15 minutos medio da densidade do DNA

Tcnicas Utilizadas: PCRAnlise de 6 loci STRsDNA template + dNTPs de STR + primers sintticos (CTT ou FFv) + U Taq polimerasePCR:Desnaturao inicial, 2 min, 96C10 ciclos de: 1 min a 94C, 1 min a 60C, 1,5 min a 70C20 ciclos de 1 min a 90C, 1 min a 60C e 1,5 min a 70COs produtos da amplificao por PCR foram analisados num gel de agarose, 2%.

Tcnicas UtilizadasAnlise dos Alelos STRs:Desnaturao a 95C, 2 minO material amplificado foi introduzido num gel de poliacrilamida (4%) com corante de prata e submetido a electroforese

Anlise de 3 loci VNTRsDigesto do DNA com enzimas de restrio:Amostras de DNA genmico foram digeridas com HaeIII, a 37COs fragmentos resultantes foram precipitados pela adio de acetato de amnio e etanolIncubao a -20C, 2 horasCentrifugao, velocidade mxima, 10 minSuspenso em soluo tampo

Tcnicas UtilizadasElectroforese:Os fragmentos foram separados num gel de agarose, 0.8%, 24 horas, 20VTransferncia e sequenciao por hibridao:Tratamento e transferncia de gel para membrana de nylonHibridao desta com sequncias de DNA quimioluminescentes (sondas)Anlise Estatstica Recorrncia a uma base de dados da populao do Rio de JaneiroSouthern blot

ResultadosOs resultados da electroforese mostram que trs dos suspeitos podem ser excludos e apenas o suspeito n3 um potencial pai biolgico do feto, depois da sequenciao dos vrios loci (VNTR e STR).Os alelos sequenciados nos 6 loci STR em cada suspeito encontram-se esquematizados na tabela seguinte.

ResultadosLoci de STRs que se revelaram motivo de excluso dos suspeitos:Suspeito n1 TPOX, F13A01 e vWASuspeito n2 CSF1PO, TPOX, THO1, FESFPS, vWASuspeito n4 TPOX, F13A01, FESFPS, vWALoci de VNTRs que se revelarem mais um motivo de incluso do suspeito n3, em comparao com a vtima e o feto:D7S467, D8S358 e D10S28ConclusoO ndice de Paternidade Combinado de 412.860, pelo que a probabilidade de ser o pai biolgico do feto abortado de 99,9997%.Assim, conclui-se que o violador o Suspeito n3.

Referncias Bibliogrficashttp://www2.ufp.pt/~jcabeda/pdf/sebenta-sequenciacao.pdf

GOES, Andra Carla de Souza, SILVA, Dayse Aparecida da, DOMINGUES, Cristiane Santana et al. Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. Sao Paulo Med. J., May 2002, vol.120, no.3, p.77-79. ISSN 1516-3180

COOPER, Geoffrey M.; HAUSMAN, Robert E., The Cell A Molecular Approach, ASM Press e Sinauer Associates, 4 edio, 2007

**********Esta anlise dos VNTR chama-se RFLP (mx nos n pusemos) podem ver nakele word k vos mandei ja ha algm tempo*http://pt.wikipedia.org/wiki/Southern_blot --------------> ver isto****