COLORACION DE GRAM

CAROLINDA AGUDELOJULIETH BELTRANLAURA MIRANDAALEJANDRA RUIZPAOLA SALCEDO

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIAFACULTAD DE ODONTOLOGIAMICROBIOLOGIAVILLAVICENCIO, META2014

COLORACION DE GRAM

CAROLINDA AGUDELOJULIETH BELTRANLAURA MIRANDAALEJANDRA RUIZPAOLA SALCEDO

DOC. CRISTINA GIL RODRIGUEZ

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIAFACULTAD DE ODONTOLOGIAMICROBIOLOGIAVILLAVICENCIO, META2014INTRODUCCION

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tincin simple. Sin embargo, a menudo se utilizan mtodos que no tien de igual modo todas las clulas, es el proceso denominado tincin diferencial. Uno muy usado en microbiologa es la tincin Gram. Basndose en su reaccin a la tincin Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: Gram positivas y gramnegativos. Esta tincin tiene gran importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.Mientras que las bacterias gramnegativos son constantes en su reaccin, los microorganismos Gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gramlbiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tien por la safranina apareciendo como gramnegativas.

COLORACION DE GRAM

Latincin de Gramocoloracin de Grames un tipo detincin diferencialempleado enBacteriologapara la visualizacin debacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre albacterilogodansChristian Gram, que desarroll la tcnica en1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram positivaa las bacterias que se visualizan de color morado, yBacteria Gram negativaa las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.

La tincin de gram utiliza en orden estricto de primero a cuatro los siguientes reactivos:1. CRISTAL VIOLETA o violeta de genciana: COLORANTE BASICO2. LUGOL DE GRAM: MORDIENTE3. ALCOHOL-ACETONA: DECOLORANTE4. FUSCINA (SAFRANINA): COLORANTE DE CONTRASTE

Los pasos que se han de seguir para realizar la tincin son los siguientes:

1. Lamina portaobjeto2. Colocar una gota de la muestra en la lamina3. Flamear-fijar ( 3 veces)4. Agregar cristal voleta por 15. Lavar H2O6. Agregar lugol por 17. Lavar H2O8. Agregar alcohol acetona 159. Lavar H2O10. Agregar fuscina gram 3011. Lavar con Agua12. Llevar al microscopio

Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersin.

Fundamentos y factores que afectan la tincin

Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las Gram positivas. La razn es la menor cantidad demucopptidode las paredes de las bacterias Gram negativas.

La diferenciacin se hace aadiendo pequeas cantidades de etanola las clulas teidas con cristal violeta. El citoplasma de las clulas que han perdido el cristal violeta se tie con otro colorante (safranina). La diferencia de color se relaciona con el tipo de pared bacteriano: clulas de color violeta (bacterias de pared Gram positivas) y clulas de color rosa (bacterias de pared Gram negativa).

En realidad ladiferencia de colorno es especfica de la pared bacteriana: todas las clulas sin pared (como las animales) pierden fcilmente el cristal violeta (se vern de color rosa). Todas las clulas con pared gruesa (como las de hongos) se vern de color violeta. La correlacin entre el color y el tipo de pared solo tiene sentido con clulas bacterianas (salvo excepciones).

Elcristal violetaes bsico (se une a componentes celulares de carga negativa). Atraviesa la envuelta celular y se acumula en el citoplasma. Para facilitar la diferenciacin se mezcla lugol con cristal violeta: el complejo cristal-violeta-lugol precipita. As el lugol dificulta la salida del cristal violeta de ambos tipos de clulas, pero es ms fcil de extraerlo de las Gram negativas que de las Gram positivas.

Cuando se aade etanol a una mezcla de clulas Gram positivas y Gram negativas teidas con cristal violeta, las clulas Gram positivas quedan teidas de violeta: no puede atravesar la gruesa capa de murena (pueden hacerlo si se prolonga excesivamente el contacto con el alcohol). La pared de las bacterias Gram negativas debe su rigidez a una capa de murena mas delgada, a travs de la cual el alcohol extrae el cristal violeta de estas clulas. Su citoplasma queda incoloro y puede teirse de color rosa con el colorante de contraste: la safranina.

Los factores que afectan el resultado de la tincin sonla edad de las clulas,las condiciones de cultivoyla actividad de sus autolisinaspueden afectar el resultado de la tincin. Las clulas envejecidas, o crecidas en condiciones que impiden la sntesis de mucopptido pueden verse de color rojo. La intensidad de la decoloracin con alcohol suele ser el problema ms comn.

UtilidadesEn el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones: Identificacin preliminar de labacteriacausal de lainfeccin. Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Losmorfotipos bacterianosidentificados en la tincin de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin.A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Loscocosson de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).Losbacilosposeen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.Tambin pueden distinguirse losespirales, que se clasifican enespirilossi son de forma rgida oespiroquetassi son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designavibrios.

Tincin GRAM: Bacterias Gram-PositivasCocos Gram-positivos

Racimos: forma tpica deStaphylococcus sp, comoS. aureus

Cadenas: forma tpica deStreptococcus sp, comoS. pneumoniae,Streptococcusgrupo B

Tetradas: forma tpica deMicrococcus sp

Bacilos Gram-positivosGruesos: forma tpica deClostridium sp, comoC. perfringens,C. septicum

Finos: forma tpica deListeria sp

Ramificados: forma tpica deActinomycetesyNocardia, comoA. israelii

Tincin GRAM: Bacterias Gram-NegativasCocos Gram-negativos

Diplococos: forma usual deNeiseria sp, comoN. meningitidisTambinMoraxella spyAcinetobacter spaparecen con morfologa de diplococos.Acinetobacterpuede ser pleomrfico, y a veces aparece como coco Gram-positivo.

Cocobacilos: forma usual deAcinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.

Bacilos Gram-negativosBacilos finos: forma usual de enterobacteriaceae, comoE. Coli

Cocobacilos: forma usual deHaemophilus sp, comoH. influenzae

Curvados: forma usual deVibrio sp, comoV. cholerae, yCampylobacter sp, comoC. jejuni

Forma de aguja fina: forma usual deFusobacterium sp

DIFERENCIA ENTRE GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS

El universo que descubriLeeuwenhoekestuvo conformado por bacterias y protozoarios de diversas caractersticas. Es por ello que hoy en da sabemos que hay millones de microorganismos que seencuentran en todos loslugares de nuestro planeta, en al agua dulce y salada,por tanto viven en el aire, agua y tierra, se les halla tambien en los alimentos,en el exterior y el interior de los seres vivos. Tambin causan enfermedades y otros que son beneficiosos para nosotros.

Por eso es de vital importancia conocer sobre estos microorganismos. Especialmente hablaremos sobre bacterias, tipos, caractersticas y diferencias entre gramnegativos y positivas.

Las bacterias pertenecen alfilumde lasShizomycophyta,se les llama tambin microbios o grmenes.Son de pequeo tamao.Casi siempre son unicelulares.

Estan recubiertas por una pared celular de naturaleza quitinosaen su superficie externa. Poseen prolongaciones filamentosas que les permiten desplazarseotras tienen flagelos.

La pared celular que rodea a las bacterias es compleja y existen dos formas bsicas: pared celular grampositiva con una gruesa capa de pptidoglucano y una pared gramnegativa con una delgada capa de pptidoglucano, as como una membrana externa.

Algunas bacterias carecen de pared celular y compensan su ausencia sobreviviendo tan solo al interior de clulas del organismo anfitrin o en un ambiente hipertnico.

Para clasificar a las bacterias debemos tener en cuenta su tamao, forma, disposicin espacial, propiedades.

Se encuentran en todos loslugares de nuestro planeta, en al agua dulce y salada,por tanto viven en el aire, agua y tierra, y se les halla tambien en los alimentos y en el exterior y el interior de los seres vivos.

Encontramos tambin bacterias que pueden provocar enfermedades potencialmente mortales. La enfermedad puede deberse a los efectos txicos de los productos bacterianos o a la invasin de regiones corporales que acostumbran a ser estriles.

BACTERIAS

Caractersticas:-Las bacterias son de vidas libres, cosmopolitas y patgenas para el hombre y animales.-Miden entre 1 y 10 um.-Estos causan enfermedades infecciosas en los seres vivos.- Son beneficiosos como los que reciclan el carbono, azufre, nitrgeno y fsforo; algunos viven el intestino del hombre (ejemplo: Escherichia coli), los cuales sintetizan vitaminas como BIOTINA; en rumiantes elaboran celulosa, una enzima que digiere la celulosa.

Funciones:-Nutricin: auttrofa: por fotosntesis y quimiosntesis y hetertrofa (bacterias).-Reproduccin: asexual y sexual,la reproduccion de las bacterias se realiza a gran velocidad; algunas se dividen un vez cada 20 minutos.

Estructura:

constituida por:

Pared celular.Membrana Celular.Estructura Citoplasmticas.Genforo.Cpsula.Fimbrias o Pilis.Ausencia de Envoltura Nuclear

Estructura de las Gram Positivas y Gram Negativas

La tincin Gram es una prueba potente y rpida que nos permite diferenciar dos clases de bacterias estas son: Bacterias grampositivas y las gramnegativas.

Las grampositivas se tien de morado ya que el colorante se queda atrapado en la capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la clula

Las gramnegativas tienen una capa de petidoglucano mucho ms delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las clulas se tien con safranina y las observamos rojas.

Tincin GRAM

DIFERENCIAS MOLECULARES ENTRE UNA BACTERIA GRAN POSITIVA Y OTRA GRAN NEGATIVA.

BACTERIAS GRAM POSITIVASBACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicacin y supervivencia de la bacteria.Poseen una pared celular ms compleja:-pared celular interna-pared de peptidoglucano- bicapa lipdica externa

No tiene membrana externaMembrana externa: forma un saco rgido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromolculas, ofrece proteccin en condiciones adversas

No tiene espacio periplasmticoEspacio periplasmtico: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmtica y la interna de la membrana externa.

La red de murena est muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capasLa red de murena presenta una sola capa

La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formacin de enlaces peptdicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucanoLa penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacridos situada en la parte externa de la pared celular.

No contiene LPSContiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa clulas B, liberacin de IL, FNT, IL 6 por macrfagos.

En la tincin de Gram, retienen la tincin azulQuedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante

Pierden el complejo yodocolorante

Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Pueden ser anaerobios o aerobios

Poseen otros componentes: cidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos complejos.Poseen protenas con concentraciones elevadas.

BIBLIOGRAFIA

1. http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram2. http://facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gram.pdf3. http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/tinciones/gram#__doku_fundamentos_y_factores_que_afectan_el_resultado_de_la_tincion4. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm5. http://www.slideshare.net/Prymer/gram-positivos-y-negativos6. http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/01%20estructura%20MC%20%2008-09.pdf