inmunodiagnóstico de las micosis sistémicas

Profa. Yotsabeth Saúl G.

Caracas - 2016

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELAFACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA DE BIOANÁLISISCÁTEDRA DE MICOLOGÍA

INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS

Barreras Biológicas Barreras Físico-Químicas


MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDERO

Inmunidad Natural

- Microbiota autóctona- Células del sistema Fagocítico mononuclear- Inflamación y Fagocitosis

INMUNIDAD HUMORAL

LINFOCITOS B

Anticuerpos(Inmunoglobulin

as)

INMUNIDAD CELULAR

LINFOCITOS T (CD4+)

Citoquinas:(IL-1…..10),

TNF, IFN

Células presentadoras de Ag: macrófagos, Cel

dendríticas, LB


MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDERO

Inmunidad Adquirida

RESPUESTA INMUNITARIA EN LA INFECCIÓN FÚNGICA

RESISTENCIA SUSCEPTIBILIDAD

Th1 (inicio de la infección

fúngica)

Th2(fase progresiva de la

enfermedad)

N2 inhiben el crecimiento fúngico

Macrófagos, PMN, neutrof.

IFNɣ, IL2

favorece el crecimiento fúngico

IL 4,5,6..10

Th1

inhibe



ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS

1. Orientación Clínico - Epidemiológica.

2. Recolección de la muestra: exudados de lesiones cutáneas, escamas, esputo, lavado bronquial, LCR, biopsias mucocutáneas, de nódulos linfáticos, médula ósea, entre otros.

3. Examen microscópico directo de la muestra:• Al fresco: aclaramiento con KOH al 10%.• Coloraciones: Giemsa, PAS o Grocott, entre otros.

4. Aislamiento y cultivo del agente etiológico: • Medios: Sabouraud, Lactrimel, BHI, Mycosel, entre otros.• Incubación: 35-37º C y 25ºC / 4-6 semanas.

5. SOPORTE INMUNODIAGNÓSTICO:• Evaluación respuesta inmunitaria celular y humoral.

EVALUACIÓN INMUNIDAD CELULAR:

• Pruebas de Hipersensibilidad Tardía: Intradermorreacción

(IDR).• Histoplasmina• Paracoccidioidina• Coccidioidina• Candidina• Esporotriquina


0,1 ml solución antigénica


• Pruebas de Hipersensibilidad Tardía: Intradermorreacción

(IDR).


Lectura 48 horas

Positividad: pápula palpable, diámetro > 5 mm



• Utilidad práctica de la IDR:

• Estudios epidemiológicos.

• Orientación diagnóstica.

• Seguimiento de la evolución de la micosis.

• Determinación de estados de anergia enfermedad

diseminada.

• Evaluación de terapia.


EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:

• Técnicas de inmunoprecipitación:

• Inmunodifusión doble en gel de agarosa

(IDD)

• Inmunoelectroforésis (IEF)

• Inmunoelectrosinéresis



• Fijación de complemento.

• Inmunoanálisis enzimático (ELISA).

• Immunoblot.

• Aglutinación látex: Criptoccosis.


• Inmunodifusión Doble:

• H. capsulatum, P. brasiliensis, Coccidioides spp.y

Aspergillus spp.• Muestras: suero y LCR.• Prueba cualitativa y semicuantitativa


Oudin J. Ann Inst Pasteur 1948; 75: 30-52.Ouchterlony O. Handbook of immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Ann Arbor Publishers, Inc. Ann Arbor, 1968


• Inmunodifusión Doble:


Oudin J. Ann Inst Pasteur 1948; 75: 30-52.Ouchterlony O. Handbook of immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Ann Arbor Publishers, Inc. Ann Arbor, 1968

210.36.18.48/gxujingpin/dwwswx/im/7.htm

web.indstate.edu/thcme/PSP/labtests/precip.htm

http://210.36.18.48/gxujingpin/dwwswx/im/7.htm







http://web.indstate.edu/thcme/PSP/labtests/precip.htm






INMUNODIFUSIÓN DOBLE:

Incubar en cámara húmeda durante 48 horas


Antígeno 10lSueros controles 20lSuero sin diluir 20lDiluciones….1/2

…..

C: Suero controlS: Suero Problema sin diluir : Antígeno½…….: Suero diluído

1/16 1/16

1/8 1/21/21/41/4

1/8


• INMUNODIFUSIÓN DOBLE: Resultados de la

prueba

Suero Problem

a

Suero Control

Línea de IdentidadPositiva Identidad

Parcial

No IdentidadNegativa


Vargas de Camino, et al. Derm Venez 1995; 33: 65-82.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.


INMUNODIFUSIÓN DOBLE: Resultados

de la prueba


SITUACIONES A CONSIDERAR PARA INTERPRETAR CORRECTAMENTE PRUEBAS SEROLÓGICAS TOMANDO EN

CUENTA LA IDR:

• Casos con fuerte IDR sin detección de anticuerpos.

• Casos con escasa o nula respuesta celular y título alto de

anticuerpos.

• Paciente con infección diseminada, mal estado general e IDR

negativas:• Sin otra condición que afecte el sistema inmunitario

pueden detectarse títulos altos de anticuerpos.

• Enfermedad inmunosupresora de base: serología negativa.

• Falsos negativos serológicos: fenómeno de prozona.


Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.


• Positiva 2-3 semanas después de la infección.• Positiva en el 50-60% población venezolana.

• Poco valor como prueba diagnóstica: • Infección subclínica, enfermedad activa o residual.

• En niños con lesiones pulmonares, IDR positiva: debe descartarse

histoplasmosis activa.• Negativa:

• Ausencia de infección. • Enfermedad diseminada.

HISTOPLASMIN

A:

HISTOPLAMOSIS

Principe A. et al. Micopat et Mycol Appl 1961; 15: 11-54; Laboratorio de Micología, CIB-UNEFM, Coro, Falcón-Venezuela (datos no publicados);De Souza A. Bol Inf Las Micosis en Venezuela. 1987; Año III 7: 11-12.


• Positiva 3-4 semanas después de infección.

• Títulos 1:8 y 1:16 pueden tener valor presuntivo.

• Títulos mayores o iguales a 1:32 indican

histoplasmosis activa.

• Negativiza con resolución del proceso infeccioso.

SEROLOGÍA: correlacionar con datos clínicos y radiológicos

del paciente

HISTOPLAMOSIS

Torres-Rodríguez JM, et al Micología Médica. 1º Edición. Masson S.A. Barcelona, España,1993; Guimaraes AJ, et al. Braz J Microbiol 2006; 37: 1-3;Vera R. et al. Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27 (2): 112-119.


• Banda M:

• Más frecuente que banda H.

• Histoplasmosis aguda, crónica, casos activos o

curados.

• Relacionada con histoplasmina.

• Perdura largo tiempo.

SEROLOGÍAHISTOPLAMOSIS

Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.

BANDA H

BANDA M


• Banda H:

• No es influenciada por la histoplasmina.

• Histoplasmosis diseminada.

• Tiende a desaparecer con el tratamiento.

SEROLOGÍA

HISTOPLAMOSIS

BANDA H

BANDA MAlbornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas,

Venezuela, 1996.


• Fase aguda: IDR y serología positiva.

• Lesiones pulmonares parahiliares: IDR positiva y serología

positiva (banda M).

• Lesiones pulmonares crónicas: IDR variable, título alto de

anticuerpos.

• Enfermedad diseminada: IDR negativa, serología positiva

(bandas M y H).

HISTOPLAMOSIS

Negroni R. Clin Trop Med and Comm Dis 1989: 4-10Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.


• Meningitis: anticuerpos en LCR.

• Lesión residual: lesiones pulmonares, IDR positiva, serología

negativa.• Histoplasmoma: Nódulos pulmonares, IDR positiva, poco

frecuente detectar anticuerpos.

HISTOPLAMOSIS

Negroni R. Clin Trop Med and Comm Dis 1989: 4-10.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.


PARACOCCIDIOIDIN

A:

PARACOCCIDIOIDOMICO

SIS

• Positiva en el 50-60% individuos población venezolana .• Sierra de San Luis, estado Falcón: 77% .

• Poco valor como prueba de orientación diagnóstica.

• Utilidad práctica:

• Evaluar integridad de la hipersensibilidad retardada.

• Evaluación de la respuesta a la terapia.

García A. Bol Inf Las Micosis en Venezuela. 1988-89; Años IV y V, 7: 12-13; Laboratorio de Micología, CIB-UNEFM, Coro, Falcón-Venezuela (datos no publicados); Mendes-Giannini MJ, et al. Am J Trop Med Hyg. 1990, 43: 200-06; Pucia R J, et al. Med Vet Mycol. 1991; 29: 57-60.


• 90% sensibilidad, 98% especificidad.

• Positividad indica infección activa.

• 1-3 bandas de precipitación.

• Poco frecuente resultados falsos negativos.

• Negativiza con la resolución del proceso

infeccioso.

SEROLOGÍA:

PARACOCCIDIOIDOMICO

SIS

Mendes-Giannini MJ, et al. Am J Trop Med Hyg. 1990; 43: 200-06; Pucia R J, et al. Med Vet Mycol. 1991; 29: 57-60.Ortega G, et al. Cint Venez 1992; 43: 355-359; Do Valle ACF, et al. . Med Mycol 2001; 39: 373-377.


• Pacientes adultos con infección crónica y buen estado general

presentan IDR + y niveles detectables de anticuerpos

específicos.

• Enfermedad diseminada: IDR negativa, serología positiva.

PARACOCCIDIOIDOMICO

SIS


• Estudios epidemiológicos: 10-90% positiva en áreas

endémicas.

• 47 % Península de Paraguaná, edo. Falcón.

• 87,5 % Goajira Venezolana.

• Valor diagnóstico limitado.

COCCIDIOIDINA:

COCCIDIOIDOMICOSI

S

Mesa L, et al. Bol Inf Las Micosis en Venezuela 1986; II: 6, 30.Quintero MA, et al. Bol Inf Las Micosis en Venezuela 1987; Año III: 9-11.


• Títulos bajos (1:2, 1:4): enfermedad inicial o reacciones cruzadas

e inespecíficas.

• Títulos altos: pacientes con lesiones pulmonares crónicas e

infección diseminada.

• Se puede observar una sola banda o bandas múltiples.

• Meningitis: anticuerpos LCR.• Lesiones cutáneas primarias pueden cursar con serología

negativa.

• Negativiza con la resolución del proceso infeccioso.

SEROLOGÍA: COCCIDIOIDOMICOSI

S

Franco de Arias CM, et al. Der Venz 1986; 23,24: 41-50.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.


• Serología: inmunodifusión doble

• Diagnóstico: correlación entre serología y cuadro clínico

pulmonar.

• Aspergiloma: 3 o más bandas de precipitación.

• Aspergilosis broncopulmonar alérgica: usualmente 2

bandas de precipitación.

• Aspergilosis invasiva: no es útil IDD.

ASPERGILLOSIS

Torres.Rodríguez JM et al Micología Médica. 1º Edición. Masson, S.A. Barcelona, España, 1993;.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.Costa Sidrim JJ et al. Micología médica a la luz de autores contemporáneos. 1º Edición. Guanabara Koogan S.A. Río de Janeiro, Brasil, 2004. Warnock DW. Jpn J Med Mycol 2007; 48: 1-12; Vera R. et al. Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27 (2): 112-119.


• Aglutinación látex: antígenos polisacarídicos en LCR y suero.

• Importante en diagnóstico, pronóstico y evaluación de la

terapia.

• Títulos elevados en enfermedad activa.

• Disminución progresiva durante la terapia.

• Persistencia de títulos 1:8 al final de la terapia asociado

a recaídas.

CRIPTOCOCCOSIS

Gadea I, et al. Enferm Infecc Microbiol Clin 2004; 22 (1): 32-9; Pontón J. Rev Iberoam Micol 2002; 19: 25-9;Bennett JE, et al. Trans Assoc Amer Phys 1964; 77-45; Pappalardo M, et al. Rev Inst Med Trop S Paulo 2003; 45 (6): 299-305.


• Serología: inmunofluorescencia indirecta, fijación de complemento e inmunoanálisis enzimático. • Títulos de anticuerpos en aumento y disminución del

antígeno durante terapia es buen pronóstico.

CRIPTOCOCCOSIS

Brummer E. Mycopathologia 1998; 143: (3): 121-5.Pappalardo M. et al. Rev Inst Med Trop S Paulo 2003; 45 (6): 299-305.


Reviákina y col. / Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27:112-119

“… Se revisaron 7653 historias micológicas en un período de 5 años (2002-2006), encontrándose 409/7653 (5,3%) casos con diagnóstico positivo para alguna de las micosis sistémicas…”


Conclusiones:• La prueba de IDD y la aglutinación con látex, sirven como

soporte para el diagnóstico y monitoreo de la evolución y posterior seguimiento del tratamiento de los pacientes.

• La aplicación exitosa de las pruebas serológicas depende de los reactivos empleados, que deben ser de alta pureza y contar con un estricto control de calidad, lo que conducirá a la obtención de reacciones antígeno-anticuerpo más sensibles y específicas.

• En los últimos años se observa un incremento en el diagnóstico de las micosis sistémicas, debido al aumento de la población inmunosuprimida y, en especial, de los pacientes con SIDA.


Conclusiones:• Es recomendable establecer un programa de vigilancia

epidemiológica de las micosis profundas en Venezuela.

• Estas enfermedades deberían ser consideradas como de denuncia obligatoria, particularmente la histoplasmosis, paracoccidioidomicosis y la criptococosis. De no ser así este problema nunca podrá ser estudiado en su dimensión real y permanecerá subregistrado.

inmunodiagnóstico de las micosis sistémicas

Health & Medicine