virus west nile: diagnóstico y caracterización viral

Ana Vázquez González

Laboratorio de Arbovirus y Enfermedades Víricas Importadas

Centro Nacional Microbiología. [email protected]

Virus West Nile: Diagnóstico y

Caracterización viral

XI Jornada de Enfermedades Emergentes

WNV: Genoma

Envuelto

RNA ss

Polaridad positiva

11.000 kb

Inmunogénica Replicación viral

Familia: Flaviviridae / Género: Flavivirus


Cook et al. 2012. Journal of General Virology

Clasificación

Virus transmitidos por mosquito (MBV)

Grard et al. 2010. Journal of General Virology

JEVgroup

NTAVgroup

AROAVgroup

Síndromes

Neurológicos

Síndromes

Viscerotropos/

Hemorrágicos


Serocomplejo Encefalitis Japonesa

MVEV

JEV

USUVSLEV


Ciclo biológico

RURALURBANO


Infección células piel (fibroblastos queratinocitos) y células dendríticas

Diseminación nódulos linfáticos y torrente sanguíneo

Hammel et al. 2015. Journal of Virology

BROTES DE WNV

1950 Israel

1974 Sudáfrica

América Emergente desde 1999

28.805 casos

11.616 encefalitis/meningitis

1.114 muertes

Europa Emergente desde 1996

Brotes en humanos, equinos o aves

Emergencia WNV


Linajes Virus West Nile


Actividad de WNV en Europa

Año 2010 aumento severidad y nº casos:Primeros casos humanos en España

Aparición linaje 2 en humanos

Cluster Centro-Europeo

Cluster Rusia-Rumania


Actividad de WNV en Europa: 2010-actualidad


USUV Budapest05 Blackbird EF206350

USUV Vienna01 Blackbird AY453411

USUV Italy2009 bird JF266698

USU Germany BH65 11 Blackbird HE599647

USUV SAAR1776 Blackbird AY453412

MBV JEG USUTUAF013412

USUV Spain 09 Cxperexiguus HQ833022

Hc3007 10Transecto2Cxperexiguus USUVUSUV

MBV JEG MVEVAF013389

MBV JEG JEVrATAB196925

MBV JEG ALFUYAF013360

MBV JEG YAOUNDEAF013413

WNV LINAJE 7 7WNV HU2925 06 Spain Cxpipiens GU047875

Koutnago Virus

6WNV KJMP502 66 Malasya1966

5WNV 804994brain India1980 DQ256376

WNV LINAJE 1 HU6396 08 Spain Cxperexiguus

MBV JEG WNLEIVVlg00 27924AY278442

MBV JEG CACIPACORE AF013367

KVG

AVG

DENGV

MBV AVG NARANJAL AF013390

MBV AVG BUSSUQUARA AF013366

MBV DVG KEDOUGOUAF013382

MBV JEG SLENC007580

MBV SVG SPONDWENIAF013406

NTV

THo-Mex07 EU879061 Cxquinquefasciatus

Taiforest EU159427 Uranotaenia mashonaen

Nounane EU159426 Uranotaenia 2004Africa

VIRUS DEL MOSQUITO DE LA MARISMA HU566 03CMUTISOcaspius

LammiV FJ606789 Finland2004 Ae.cinereus

Chaoyang FJ883471 China08

UNKV

TBV

UNKV

CFAVRioPiedras02 GQ165810 PRico AeAegypt

CFA Aeaegypti M91671 1975

KRV KR75 AemacintoshiKEN AY149904 1999

AEFV Narita AB488408 AeAlbopictus

MOcFV HU1994 05OcCaspiusCMutis

Calbertado Canada03 EU569288 Cxtarsalis

MCxFV HU3738 06AyamonteCxtheileri

QuangBinhVN180 Viet02 FJ644291 Cxtritae

Nakiwogo Uga08 GQ165809 Mansoniaafricana

CxFV

TAMANABAT NC 003996

1) USUV

2) WNV

• Linaje 1

(Cx perexiguus)

• Nuevo linaje

(Cx pipiens)

Estudios WNV en mosquitos

Vázquez A., et al. 2010 Emerging Infectious Diseases

Vázquez A., et al. 2011 Am. J. Trop. Med. Hyg.,

USUV

WNVUSUV


EQUINOS:

2010: Cádiz, Sevilla y Málaga

2011: Cádiz

2012: Cádiz

2013: Sevilla y Huelva

2014: Sevilla, Huelva, Cádiz y Ciudad Real

2015: Sevilla, Huelva, Cádiz y Badajoz

2016: Sevilla, Huelva, Cádiz y Córdoba

2017: Sevilla, Cádiz, Huelva y Málaga

2018: Huelva, Sevilla, Badajoz y Barcelona

2019: Andalucía

2020: 139 focos: Sevilla, Huelva, Cádiz, Jaén, Badajoz, Cáceres, Castellón,

Lleida y Tarragona

*

*

*

*

WNV en aves y equinos

AVESAndalucía:

• Estudios seroprevalencia: en aves migratorias, residentes, gorriones, entre 0,4%-17,9%. En fochas: 20%-43%. En aves de caza

(perdices y faisanes): AcNT frente WNV, Bagaza y Usutu

• Aves positivas: linaje 1

Castilla La Mancha (Ciudad Real): 2008: águilas imperiales, seroprevalencia del 23,8%

2014: virus linaje 1 en un buitre con infección neurológica

Castilla León (Ávila): 2015: en aves, linaje 1. 15 muestras positivas por ELISA, 11 confirmadas por NT.

Cataluña: 2018 y 2020 linaje 2


Seroprevalencias:Andalucía: En 2010, 11% general, en Cádiz del 18,2%

Centro: Entre 2011 y 2013, 1,35% en Madrid y Segovia

WNV en humanos

0,6% (2006)

0,2% (2005)

*

**2010

Seroprevalencias confirmados por neutralización

1% (2015)

***2016

* 2004

*

Seroprevalencias del 1%

5 casos entre 2010 y 2016

77 casos en 2020 por linaje 1

Casos Humanos:

2004: 1er caso confirmado, Extremadura

2006: 1er caso importado de Nicaragua2010: 2 casos confirmados, Cádiz2016: 3 casos, Sevilla2018: 1er caso importado Rumania, linaje 2 con complicaciones neurológicas y gastrointestinales2020: 77 casos en Andalucía (71) y Extremadura (6)

*

*

*


1.- Suroeste España, zona endémica para WNV (Co-circulación varios flavivirus)

Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio Ambiente, 2007 revisión anual

Plan Vigilancia España

Declaración de la enfermedad obligatoria, según la Orden de 11 de diciembre de 2008, un caso ya se considera alerta en Salud Pública y brote


Protocolo de Vigilancia WNV


Diagnóstico virológico


Muestras:• Suero/sangre • Líquido Cefalorraquídeo (LCR)• Orina• Biopsias/necrosias

2) Técnicas de detección de la respuesta inmune específica del huésped: detección de los anticuerpos generados frente a la infección

1) Técnicas de detección directa: detección de la partícula o antígenos virales

DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL CON OTRAS ENCEFALITIS* Toscana, Linfocoriomeninguitis (LCM), UsutuDIAGNÓSTICO DIFERENCIAL CON OTROS FLAVIVIRUS * (Usutu, TBEV, DENV…)

Fase Aguda Fase Convaleciente

Cinética de marcadores

Métodos de detección de virus

1) Técnicas de detección directa de virus: Pico viremia: 4-7 días post-infección, baja viremia

Alta sensibilidad

Reactividades cruzadas 2) Técnicas de detección de la respuesta inmune: detección de los anticuerpos

a) Screening

ELISA IgM/IgG

Inmunofluorescencia

b) Confirmación

Neutralización

Alta Especificidad

Confirmatorias

a) Screening

Detección de antígeno

RT-PCR (real time, cuantitativas, múltiples o simples)

Aislamiento viral

b) Genotipado: Secuenciación


Métodos comerciales detección VWN

WNV en España en 2020

Casos Humanos:

77 casos (40 confirmados y 37 probables): * 71 casos son de Andalucía (57 de Sevilla y 14 de Cádiz)* 6 casos de Extremadura (Badajoz)8 fallecidos5 casos PCR + (orina)

93,4%: clínica neurológica94,7% precisaron hospitalización

66,7% en la misma zona de los casos del 2016

Casos Equinos:

139 focos: Sevilla, Huelva, Cádiz, Jaén, Badajoz, Cáceres, Castellón, Lleida y Tarragona.8 detectados por vigilancia activa 131 por vigilancia pasiva al presentar síntomas compatibles con la enfermedad.

Aves:

8 aves PCR+7: linaje 1 del virus en Andalucía1: linaje 2 en Lleida, el mismo que fue detectado en septiembre de 2017 en la misma zona.



MUESTRAS HUMANAS:

• ORINAS: 5 orinas positivas previamente por PCR en el Hospital.

1- Screening molecular: qRT-PCR (Vázquez et al., 2016)

2- Caracterización molecular:

a) RT-Nested-PCR genérica (Vázquez et al., 2012). Linaje 1 del virus

b) NGS. Caracterización viral genoma completo

c) Aislamiento en cultivo celular

• SUEROS: muestras de sueros agudos y convalecientes con presencia de anticuerpos IgM e IgG pendientes de analizarpor neutralización viral, para la confirmación del diagnóstico serológico

a) Confirmación de IgM en sueros agudos

b) Confirmación de la presencia de anticuerpos específicos a WNV por la técnica de neutralización viral en

sueros convalecientes.

WNV 2020 humanos: Andalucía

Brote Humanos en Andalucía

Diagnóstico primario: Hospital Virgen de las Nieves (Granada)

Confirmación y caracterización viral: CNM, Centro Nacional de Referencia


MOSQUITOS:

• Screening molecular: qRT-PCR (Vázquez et al., 2016)

• Caracterización molecular:

a) RT-Nested-PCR genérica (Vázquez et al., 2012). Linaje 1 del virus

b) NGS. Caracterización viral

c) Aislamiento en cultivo celular

>300 pooles mosquitos (Culex modestus, Culex perexiguus y Culex pipiens) capturados entre Junio-Septiembre

* 32 pooles positivos (linaje 1) de 5 localidades (4 Sevilla y 1 Cádiz) en Culex perexiguus (31) y en un Culex pipiens (1)

WNV 2020 mosquitos: Andalucía

Los virus detectados en el brote eran diferentes a las secuencias disponibles en

GenBank de los detectados en aves, mosquitos y caballos de los años 2007, 2008

y 2010 respectivamente

Ana Vázquez González

Laboratorio de Serología y Arbovirus

Centro Nacional Microbiología. [email protected]

Virus West Nile: Diagnóstico y

Caracterización viral

AGRADECIMIENTOS

Laboratorio de

Serología y Arbovirus

Unidades de Genómica

y de Bioinformática

virus west nile: diagnóstico y caracterización viral

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