Pandemia A(H1N1) y Laboratorio de ReferenciaInstituto de Salud Pública de Chile

Al servicio de la salud desde 1892

Dr. Julio García Moreno

22 de noviembre de 2010

ESTRUCTURA VIRUS A(H1N1) 2009

RED LABORATORIOS DE VIGILANCIA VIRUS RESPIRATORIOS

HOSPITALES CAPACITADOS EN IFIREGION METROPOLITANA

Hospital Calvo MackennaHospital Exequiel G. CortésHospital Félix BulnesHospital Padre HurtadoHospital Sótero del RíoHospital San Juan de Dios Hospital San B. Arriarán Hospital TóraxHospital El PinoHospital PeñaflorHospital San José (Melipilla)Hospital San Luis (Buin)Hospital Talagante

ACCIONES PREVIAS A ALERTA OMS

- Participación del ISP en el “plan

pandemia” del Minsal- Capacitación de un profesional en el

CDC en técnica rtPCR y uso de kit diagnóstico del CDC (fundamentalmente dirigido contra genes virales de expresión interna: M, NP).

- Implementación de la tipificación genética de virus influenza

- Laboratorios de la red de vigilancia de Virus Respiratorio envían un porcentaje de casos positivos para aislamiento y PCR convencional

- Solicitud de insumos y reactivos al CDC y otros.

ACCIONES POSTERIORES A ALERTA OMS (24 de abril)

• Hospitales de Red ISP para vigilancia Virus respiratorio

envían al ISP el 100% de los casos de influenza detectados

. Recepción de muestras las 24 horas• Apoyo respuesta telefónica ISP (Encuesta)• Revisión guías y formularios• Envío MTV a laboratorios• Asignación de turnos para fin de semana.• El 6 de mayo se recibe kit del CDC para virus pandémico (primers y sondas). • El 7 de mayo se estandariza técnica • El 17 de mayo se confirma por rtPCR el primer caso en Chile de influenza

pandémica• Suspensión actividades no prioritarias• Reasignación de recursos humanos profesionales y de apoyo al Laboratorio

Virus respiratorio ISP (capacitación)• Habilitación exclusiva del laboratorio Bioseguridad 3• Informe de resultados inmediato: correo electrónico al nivel local, Minsal y vía

telefónica a Directores de Servicios de Salud

ACCIONES FASE 4 y 5

• Se enfatiza la definición de caso para envío de muestras al ISP• De intensifica la vigilancia de casos de IRA• Se mantiene la solicitud de envío al ISP de 100% de muestras

detectados en nivel local

• El Minsal dota a Atención Primaria de kits de diagnóstico rápido (Directigen)• Se prioriza al estudio de casos hospitalizados, pero se mantiene el análisis de casos

ambulatorios• Se prioriza el estudio de casos de zonas nuevas o zonas con casos graves• Turnos de 24 horas todos los días de la semana.

• Uso de bases de datos compartida con Minsal para acelerar notificación

• Apoyo de recursos humanos a recepción de muestras ISP• Incorporación de equipos para PCR y otros a Virología para aumentar capacidad

de procesamiento de muestras.• Certificación de laboratorios privados (Las Condes, Universidad Católica, Santa

María, Alemana, U. de Chile).

Acciones Fase 6 (período pandémico)

• Se incluye la investigación de brotes acotados

• Investigación genética del virus pandémico: caracterización

• Aislamiento viral y envío de un porcentaje al CDC

• Procesamiento de aproximadamente 200 muestras diarias en ISP

• Implementación de PCR en tiempo real en 7 laboratorios públicos por ISP/CDC junio/octubre 2009:

Hospital San Camilo, San Felipe, Hospital Regional de Valdivia, Hospital San Juan de Dios (Santiago), Consultorio Atención Norte Antofagasta, CAE Hospital de Concepción, Complejo Miraflores de Temuco y Hospital Regional de Puerto Montt

. Primer aislamiento y genotipificación de virus pandémico humano en aves (pavos) en conjunto con el Servicio Agrícola Ganadero (SAG)

Total casos estudiados por PCR años 2009- 2010.

Instituto de Salud Pública de Chile

Durante el 2009 en el ISP se estudiaron un total de 9.106 muestras por rtPCR para Influenza A (H1N1)2009 con 4.080 positivos.Durante el 2010 se han estudiado 5.069 casos por rtPCR con 618 positivos A (H1N1)2009, 2001 A(H3N2), 292 Inf.B.

El análisis de laboratorio se realizó utilizando los sets de partidores y sondas distribuidos por el CDC de Atlanta a los Centros Nacionales de Influenza de la Red Global de la Organización Mundial de la Salud, de la cual el ISP forma parte desde 1968.

Laboratorio Genética Molecular

Técnica de Extracción de DNA y tipificación.

El Instituto ha impulsado la implementación análisis genético para el diagnóstico y la tipificación de agentes infecciosos, incluyendo el Virus influenzae ( ISP es miembro de la Red Pulse Net International)

A/swine/OH/511445/2007(H1N1)6 A/Ohio/02/2007(H1N1)

A/swine/Minnesota/00194/2003(H1N2) A/Wisconsin/87/2005(H1N1)

A/Swine/Indiana/9K035/99 (H1N2) A/swine/Kansas/00246/2004(H1N2)

A/Shandong/1/2009 H1N1 A/Regensburg/Germany/02/2009 H1N1 A/Chile/9113/2009 H1N1

A/California/06/2009(H1N1) A/Texas/04/2009(H1N1) A/Netherlands/602/2009 H1N1 A/Denmark/513/2009 H1N1 A/Italy/06/2009 H1N1

A/El Salvador/213/2009 H1N1 A/England/195/2009 H1N1 A/Canada-NS/RV1536/2009 H1N1

A/Hamburg/4/2009H1N1 A/Auckland/4/2009 H1N1

A/Colombia/450/2009 H1N1 A/Stockholm/28/2009 H1N1

A/Mexico/4604/2009H1N1 A/Lisboa/26/2009H1N1 A/Brisbane/17/2009 H1N1 A/California/14/2009 H1N1 A/Chile/11193/2009 H1N1 A/Chile/8949/2009 H1N1 A/Chile/8947/2009H1N1 A/New York/21/2009 H1N1 A/Toronto/3146/2009 H1N1 A/Chile/9706/2009 H1N1 A/Chile/10084/2009 H1N1 A/Chile/9621/2009 H1N1

A/Ohio/3559/1988(H1N1) A/swine/Kansas/3024/1987(H1N1))

A/swine/Iowa/24297/1991(H1N1) A/swine/California/T9001707/1991(H1N1))

A/duck/NC/91347/01(H1N2) A/SW/CO/17871/01(H1N2)

A/Iowa/CEID23/2005(H1N1) A/SW/MO/1877/01(H1N2)

A/Washington/10/2008(H1N1) A/Florida/3/2006(H1N1)

A/New Caledonia/20/1999(H1N1) A/Chile/717/2009 (H1N1)

A/Brisbane/59/2007(H1N1) A/Chile/1620/2009 (H1N1) A/Chile/1621/2009 (H1N1)

A/swine/Saskatchewan/18789/02(H1N1) A/mallard/MD/161/2002(H1N1) A/duck/NY/13152-13/1994(H1N1) A/swine/Spain/53207/2004(H1N1)

A/swine/Zhejiang/1/2007(H1N1) A/swine/Belgium/1/83(H1N1)

A/swine/England/WVL7/1992(H1N1) A/swine/Denmark/WVL9/1993(H1N1)

0.05

Porcino clásicoAmérica del Norte

Brote 2009

Estacional

Aviar América del Norte

Porcino Europa

Análisis filogenético del virus Influenza A(H1N1)2009. Secuencia del gen de la

hemaglutinina. ISP Chile

A/Thailand/271/2005(H1N1)) A/swine/Chonburi/05CB1/2005(H1N1) A/swine/Ratchaburi/NIAH550/2003(H1N1)) A/swine/Ratchaburi/NIAH1481/2000(H1N1))

A/swine/Denmark/WVL9/1993(H1N1)) A/swine/Zhejiang/1/2007(H1N1))

A/Swine/Spain/50047/2003(H1N1)) A/swine/England/WVL7/1992(H1N1)

A/swine/England/WVL14/1996(H1N1 A/swine/Italy/53949/2004(H1N1)

A/swine/Spain/53207/2004(H1N1)) A/swine/Italy/65296/2004(H1N1

A/California/07/2009(H1N1)) A/California/04/2009(H1N1)) A/Chile/9113/2009 N1 lsw A/Texas/06/2009(H1N1)) A/California/06/2009(H1N1)) A/Texas/04/2009(H1N1)) A/California/05/2009(H1N1)) A/Chile/11194/2009 A/Chile/11193/2009 A/Chile/10084/2009 A/Ohio/07/2009(H1N1)) A/New York/18/2009(H1N1)) A/New York/19/2009(H1N1)) A/Chile/8886/2009 A/Chile/9623/2009 A/Chile/9706/2009 A/duck/Mongolia/47/2001(H7N1)) A/duck/Mongolia/116/2002(H1N1)) A/duck/Italy/69238/2007(H1N1))

A/duck/Shantou/700/2002(H5N1)) A/chicken/Indonesia/CDC25/2005(H5N1)

A/swan/Germany/R65/2006(H5N1)) A/chicken/Korea/IS/2006(H5N1))

A/duck/NY/13152-13/1994(H1N1) A/mallard/MD/161/2002(H1N1))

A/swine/Saskatchewan/18789/02(H1N1)) A/northern pintail/California/HKWF151/20 A/ring-necked duck/California/HKWF662/20 A/American wigeon/California/HKWF42/2007

A/gadwall/California/HKWF100/2007(H6N1)) A/northern shoveler/California/HKWF383/2

A/Ohio/3559/1988(H1N1)) A/swine/OH/511445/2007(H1N1)) s

A/Wisconsin/10/98 (H1N1)) A/Wisconsin/301/1976(H1N1))

A/swine/Korea/CAS08/2005(H1N1)) A/Iowa/CEID23/2005(H1N1))

A/swine/Iowa/00239/2004(H1N1)) A/Puerto Rico/8/34(H1N1))

A/Florida/3/2006(H1N1)) A/Santiago/1412/2009

A/New Caledonia/20/99(H1N1)) A/Washington/10/2008(H1N1))

A/Santiago/1670/2009 A/Brisbane/59/2007(H1N1)) A/Santiago/1411/2009

0.02

Brote A(H1N1)2009

Porcino euroasíático

Estacional

Aviar América del Norte

Aviar euroasiático

Porcino Americano

Análisis Filogénetico secuencia del gen de la Neuraminidasa. ISP

Resultados análisis genético virus Influenza A(H1N1)2009.

Instituto de Salud Pública de Chile

A. Análisis secuenciamiento de hemaglutinina (Para determinar variabilidad y mutaciones en los sitios de unión al receptor celular)

En el año 2009 se analizaron 191 cepas (se obtuvo similitud entre un 97.5 - 99.6 % con la cepa de referencia A/California/4/2009).

En el año 2010 se han analizado 52 cepas (se obtuvo similitud entre un 97.5 - 99.6 % con la cepa de referencia A/California/4/2009).

No se han observado diferencias entre las cepas 2009 y 2010

Resultados análisis genético virus InfluenzaA (H1N1)2009.

Instituto de Salud Pública de Chile

B. Análisis secuenciamiento Neuraminidasa 48 cepas con análisis de la Neuraminidasa:

100% sensibles a oseltamivir (no se detectó mutación H275Y)

C. Análisis de genoma completo :12 cepas con análisis de genoma completo (HA, Neuraminidasa, M)Incluía aislamientos en pacientes fallecidos, graves y leves.Dependiendo del fragmento, presentaron una similitud de aminoácidos entre 98.8 a 100% a la cepa A California/4/2009. No se encontró evidencia de mutaciones en los factores de virulencia descritos en la literatura (aa básicos en el sitio de clivaje de la HA, Glu en posición 627 de PB2 en lugar de lisina, proteína N51, etc.)

Próximos pasos

• El Instituto continuará actuando como laboratorio de

referencia para aquellas regiones del país que no puedan derivar sus muestras a los laboratorios regionales. Así también recibirá todas las muestras que no puedan ser subtipificadas por los laboratorios regionales.

• El Instituto continuará con sus labores de aislamiento, tipificación, secuenciamiento genético y estudio de resistencia a antivirales

• El Instituto realizará un estudio de anticuerpos contra virus A(H1N1)2009 en muestras serológicas recolectadas en San Felipe mediante la técnica de inhibición de hemaglutinación y se implementará además, la técnica de microneutralización dada su mayor sensibilidad para los mismo fines