UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

Trabajo de Tesis realizado como requisito para optar al título de

DOCTOR EN CIENCIAS VETERINARIAS

ASOCIACIÓN ENTRE LA CONCENTRACIÓN SÉRICA DEL PÉPTIDO NATRIURÉTICO NT-proBNP Y VARIABLES CONSTITUTIVAS EN CANINOS

SANOS DE LA CIUDAD DE GENERAL PICO PROVINCIA DE LA PAMPA

AUTOR: M.V. MEDER, Alberto Ramón

DIRECTOR: Dra. ARAUZ, María Sandra CODIRECTOR: Prof. M.V. DESMARÁS, Eduardo

LUGAR/RES DE TRABAJO: • Hospital Escuela de Animales Pequeños de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la

Universidad Nacional de La Pampa. • Servicio Central de Laboratorio del Hospital Escuela de la Facultad de Ciencias

Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata. MIEMBROS DEL JURADO APELLIDO Y NOMBRES: MATTIOLI, Guillermo Alberto. APELLIDO Y NOMBRES: MORTOLA, Eduardo Carlos. APELLIDO Y NOMBRES: MUCHA, Carlos José.

AÑO 2014

I

DEDICATORIA

Lo dedico a:

mi hija Margarita, por ser mi razón de todos los días,

a mi compañera de vida, María Silvia, por su amor y apoyo incondicional,

a mi mamá, Margarita, por su cariño y gran esfuerzo para que yo cumpla con mis sueños,

al Dr. Juan Enrique Romero, por su generosidad y lucha inquebrantable por la profesión

II

AGRADECIMIENTOS

• A mi Directora de Tesis, Dra. María Sandra Arauz, por acompañarme, dirigirme y

guiarme en esta tan importante empresa y por ser un faro de claridad ante mis momentos

de ansiedad.

• A mi Co-Director de Tesis, Profesor Eduardo Desmarás, por su apoyo, confianza y

generosidad.

• A mis auxiliares de investigación, Gabriela Poblete, Cecilia Lapuyade, Paula Olondriz,

Juan Manuel Montenegro y Paula Lezcano, por estar siempre que los necesite, por

compartir mi amor por la cardiología veterinaria y por su incondicionalidad con este

trabajo de tesis.

• A mis compañeros de cátedra, Juan Tomás Wheeler, Lilia Adagio, José Hierro y Daniela

Lattanzi por su confianza, aliento y disponibilidad para escucharme y brindarme sus

consejos.

• A la secretaria de Ciencia, Técnica, Investigación y Posgrado de la Facultad de Ciencias

Veterinarias de la Universidad Nacional de La Pampa, por apoyarme económicamente y

por dejar siempre la puerta abierta a mis consultas.

• A Dr. Hugo Álvarez por apoyarme cuando apenas me conocía y proponer al cuerpo de

gestión mi ingreso a la carrera de doctorado financiada a partir de una beca del Proyecto

de Mejoramiento de la Medicina Veterinaria – Programa de Acreditación de la Carrera de

Medicina Veterinarias de la UNLPam.

• Al Dr. Eduardo Mórtola por ayudarme, a partir de su experiencia en investigación, en la

interpretación y realización de los Kits ELISA empleados en este trabajo de Tesis

Doctoral.

III

• A los integrantes del Laboratorio Central del Hospital Escuela de la Facultad de Ciencias

Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata por ayudarme con el análisis

bioquímico de las muestras de los caninos utilizados en el trabajo.

• Al Ricardo Toso y Germán Molina por colaborar con este trabajo a partir de la

conservación de la muestras séricas y su vigilancia permanente en el Centro de

Investigación y Desarrollo de Fármacos (CIDEF).

• A Juan Enrique Romero por apoyarme y brindarme las instalaciones del Hospital Escuela

de Animales Pequeños de la FCV – UNLPam.

• A todos los propietarios de los caninos empleados en este trabajo por darme su

consentimiento para realizar los estudios en los mismos.

• A mi amigo, Ignacio Kotani, por apoyarme económicamente desde su función de gestión

en el Ministerio de Producción del Gobierno de La Pampa.

IV

CITAS BIBLIOGRÁFICAS

• Meder, A.R.; Adagio, L.M.; Desmarás, E.A.; Poblete, G.E.; Lapuyade, C.L.; Olondriz,

P.A.; Montenegro, J.M.; Lezcano, P.A.; Arauz, M.S., 2012. Asociación entre la presión

arterial sistólica y el estado de conducta del paciente durante el registro. XIII Jornadas de

Divulgación Técnico-Científicas 2012 de la Facultad de Ciencias Veterinarias – UNR.

Pág. 203-204. ISSN 1667-9326.

• Meder AR; Adágio LM; Desmarás EA; Arauz MS. Interés de los péptidos natriuréticos

en cardiología veterinaria. Revista ANALECTA VETERINARIA. Facultad de Ciencias

Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata. Vol 32, N° 1, Pág. 33-43, Año 2012.

ISSN 0365514-8 Versión Impresa, ISSN 1514-2590 Versión Electrónica y ISSN

1666259-4 Versión CD-ROM.

• Meder, A.R.; Lapuyade, C.L.; Olondriz, P.A.; Montenegro, J.M.; Lezcano, P.A.; Poblete,

G.E. (2012). Presión arterial sistólica en caninos sanos. INFOVET - Revista del Colegio

Médico Veterinario de La Pampa. Editorial REI. Pág. 23-24. Boletín N° 128.

• Meder, A.R.; Olondriz, P.A.; Montenegro, J.M.; Lezcano, P.A.; Poblete, G.E.; Lapuyade,

C.L.; Romero, J.E.; Adagio, L.M.; Wheeler, J.T.; Lattanzi, L.D.; Desmarás, E.; Arauz,

M.S. Intervalo P-R largo en la raza canina Boyero de Berna: Presentación preliminar.

Memorias del XII Congreso Nacional de AVEACA. Pág. 305. Año 2012.

• Meder, A.R.; Lezcano, P.A.; Poblete, G.E.; Lapuyade, C.L.; Olondriz, P.A.; Montenegro,

J.M.; Romero, J.E.; Adagio, L.M.; Wheeler, J.T.; Lattanzi, L.D.; Desmarás, E.A.; Arauz,

M.S. Valores de presión arterial sistólica, método Doppler Vascular Pulsado, en caninos

sanos conscientes. Revista Ciencia Veterinaria. ISSN 1515 - 1883. Volumen 14. Número

1. Pág. 62 - 67. Año 2012.

V

• Meder, A.R.; Lezcano, P.A.; Poblete, G.E.; Lapuyade, C.L.; Olondriz, P.A.; Montenegro,

J.M. Parámetros objetivos en la evaluación radiológica del aparato cardiovascular.

INFOVET La Pampa. Revista del Colegio Médico Veterinario de La Pampa. ISSN 2344-

9608. N° 131. Pp. 27-31. Año 2013.

• Meder, A.R.; Romero, J.E.; Wheeler, J.T.; Adagio, L.M.; Arauz, M.S. Patrones de

comparación estándar en la evaluación radiológica del sistema cardiovascular en caninos

sanos. Libro de Resúmenes de las XIV Jornadas de Divulgación Técnico – Científicas

2013 de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Rosario. ISSN

1667-9326. Pág. 243-244. Año 2013.

• Meder, A.R.; Lattanzi, L.D.; Rio, F.J.; Adagio, L.M. Relación largo 5° vértebra toráxica

y diámetro traqueal interno en caninos sanos mesocefálicos y dolicocefálicos. 9° Jornadas

veterinarias latinoamericanas del interior. Modalidad Póster. 7 y 8 de Junio de 2013.

Rosario. Provincia de Santa Fe.

• Meder, A.R.; Olondriz, P.A.; Lapuyade, C.L.; Poblete, G.E.; Montenegro, J.M.; Lezcano,

P.A.; Romero, J.E.; Adagio, L.M.; Wheeler, J.T.; Lattanzi, L.D.; Desmarás, E.A.; Arauz,

M.S. Distancia EPSS en caninos sanos conscientes. Modalidad póster. XIII Congreso

Nacional de AVEACA. Ciudad Autónoma de Bs. As. 19 y 20 de Septiembre de 2013.

• Meder, A.R.; Wheeler, J.T.; Romero, J.E.; Adagio, L.M.; Lattanzi, L.D.; Hierro, J.A.;

Maisterrena, V.D.; Sereno, D.P.; Mariani, L.E.; Rio, F.J.; Vaquero, P.G.; Mengelle, P.;

Miguel, M.C.; Desmarás, E.A.; Arauz, M.S. Asociación entre distancia septal al punto E

(EPSS) y diámetro diastólico final del ventrículo izquierdo (DVID) en caninos sanos. VIII

Jornadas de Ciencia y Técnica – I Jornada Interinstitucional. Facultad de Ciencias

Veterinarias – Facultad de Ingeniería. UNLPam. Diciembre de 2013. Res. CD 334/13.

VI

ÍNDICE DE CONTENIDOS

RESUMEN

1

ABSTRACT

3

INTRODUCCIÓN

5

MATERIALES Y MÉTODOS

32

RESULTADOS

40

DISCUSIÓN

67

CONCLUSIONES FINALES

71

BIBLIOGRAFÍA

72

VII

ABREVIATURAS Y SÍMBOLOS

NSA: Nodo sinusal

NAV: Nodo auriculoventricular

ATP: Adenosin trifosfato

VAV: Valvulas auriculoventriculares

VS: Valvular sigmoideas o semilunares

IC: Insuficiencia cardíaca

ICI: Insuficiencia cardíaca izquierda

ICD: Insuficiencia cardíaca derecha

Na+: Sodio

Ca++: Calcio

ECG: Electrocardiograma

VHS: Escala cardíaca vertebral

IVM: Insuficiencia valvular mitral

PN: Péptido natriuréticos

ANP: Péptido natriurético atrial

BNP: Péptido natriurético tipo B

CNP: Péptido natriurético tipo C

C-ANP: Fracción carboxiloterminal del péptido natriurético atrial

C-BNP: Fracción carboxiloterminal del péptido natriurético tipo B

NT-proBNP: Fracción aminoterminal del péptido natriurético tipo B

NT-proANP: Fracción aminoterminal del péptido natriurético atrial

AST: Aspartato aminotranfersa

VIII

LDH: Lactado deshidrogenasa

CPK: Creatinfosfoquinasa

CK-MB: Creatinfosfoquinasa MB

CVD: Enfermedad valvular crónica

pmol/lts: Picomoles por litro

pg/ml: Picogramos por mililitro

Ao: Diámetro aórtico

AI: Diámetro anteroposterior del atrio izquierdo

DVID: Diámetro del ventrículo izquierdo en final de diástole

DVIS: Diámetro del ventrículo izquierdo en final de sístole

ISACHC: International Small Animal Cardiac Health Council Heart Failure Classification

PDE5: Fosfodiesterasa 5

NPR-C: Receptores de péptidos natriuréticos tipo C

NPR-A: Receptores de péptidos natriuréticos tipo A

GMPc: Guanosil monofosfato cíclico.

CMD: Cardiomiopatía dilatada

LLD: Incidencia laterolateral izquierda-derecha

VD: Incidencia ventrodorsal

RX LLD: Imagen radiológica toráxica obtenida desde la incidencia laterolateral izquierda-

derecha.

RX VD: Imagen radiológica de tórax obtenida desde la incidencia ventrodorsal.

EL: Eje cardíaco largo registrado sobre RX LLD.

EC: Eje cardíaco corto registrada sobre RX LLD.

VCC1: Diámetro de la vena cava caudal registrada sobre RX LLD.

IX

VCC2: Diámetro de la vena cava caudal registrada sobre RX VD.

L5ta: Largo de la quinta vértebra toráxica registrada sobre RX LLD.

A5ta: Alto de la quinta vértebra toráxica registrada sobre RX LLD.

APCr: Diámetro de las arterias pulmonares craneales, a nivel de su intersección con el cuerpo

de la cuarta costilla, registrada sobre RX LLD.

VPCr: Diámetro de las venas pulmonares craneales, a nivel de su intersección con el cuerpo

de la cuarta costilla, registrada sobre RX LLD.

C4ta: Ancho del cuello de la cuarta costilla registrada sobre RX LLD.

APCa: Diámetro de las arterias pulmonares caudales, a nivel de su intersección con el cuerpo

de la novela costilla, registrado sobre RX VD.

VPCa: Diámetro de las venas pulmonares caudales, a nivel de su intersección con el cuerpo

de la novela costilla, registrado sobre RX VD.

C9na: Ancho del cuerpo de la novena costilla, a nivel de su intersección con el cuerpo de la

novela costilla, registrado sobre RX VD.

1

ASOCIACIÓN ENTRE LA CONCENTRACIÓN SÉRICA DEL PÉPTIDO

NATRIURÉTICO NT-proBNP Y VARIABLES CONSTITUTIVAS EN CANINOS

SANOS DE LA CIUDAD DE GENERAL PICO PROVINCIA DE LA PAMPA.

PALABRAS CLAVES: Caninos sanos, péptido natriurético, edad, sexo, peso corporal y

tamaño cardíaco.

RESUMEN

Los péptidos natriuréticos son una familia de hormonas que juegan un importante rol en la

homeostasis cardiovascular y renal. El objetivo de este trabajo fue analizar la asociación entre

la concentración sérica del péptido natriurético NT-proBNP y variables constitutivas en

caninos sanos. La hipótesis fue que su concentración no varía con el peso corporal ni el

tamaño cardíaco pero sí con la edad y el sexo. Se utilizaron 159 caninos -80 machos y 79

hembras, 80 menores de 7 años y 79 mayores de 7 años, 53 de talla pequeña (<12kg) – 53 de

talla mediana (12kg-25kg) – 53 de talla grande (>25kg)- con condición corporal 2.5-3.5. Se

consideró sanos a los que presentaron exploración clínica y estudios complementarios -

presión arterial, electrocardiografía, radiología toráxica, ecocardiografía, hematología y

bioquímica- dentro de parámetros normales de acuerdo a bibliografía. El análisis estadístico

se realizó mediante un software público R&R Commander (Rcmdr) versión i386-3.0.1. La

concentración media de NT-proBNP fue 260.28 pmol/lts +/-135.48 pmol/lts. Se observaron

diferencias significativas para sexo (machos: 281.31 pmol/lts +/144.84, hembras: 238.99

pmol/lts +/123.52, p=0.0392) y edad (<7 años: 235.19 pmol/lts +/-119.72, >7 años: 285.69

2

pmol/lts +/-146.97, p=0.0124), pero no para peso/talla (<12kg: 235.78 pmol/lts +/-129.18, 12-

25kg: 281.85 pmol/lts +/134.34, >25kg: 263.21 pmol/lts +/142.46, p=0.183). La

concentración no se asoció al VHS (r=0.078, p=0.329) ni a parámetros ecocardiográficos:

DVID (r=0.070, p=0.375), EPLVI (r=-0.034, p=0.666), EPSS (r=0.132, p=0.095), ESIVD

(r=0.0296, p=0.71), LVID (r=0.139, p=0.081), VVID (r=0.084, p=0.289), FA (r=-0.0259,

p=0.745), FE (r=-0.0211, p=0.791), FEPLVI (r=0.141, p=0.076) y FESIV (r=0.134,

p=0.091). En este estudio se demostró que la concentración sérica de NT-proBNP es afectada

por edad y sexo en caninos sanos pero no por peso/talla y que estas diferencias, deben

considerarse en condiciones de salud y enfermedad. Además que las concentraciones no se

correlacionan con variables radiológicas ni ecocardiográficas asociadas a la variabilidad del

tamaño en caninos.

3

ASSOCIATION BETWEEN NATRIURETIC PEPTIDE NT-proBNP SERUM

CONCENTRATION AND CONSTITUENT VARIABLES IN HEALTHY CANINE IN

THE CITY GENERAL PICO, PROVINCE OF LA PAMPA

PALABRAS CLAVE: Healthy dogs, natriuretic peptide, age, sex, body weight and heart

size.

ABSTRACT

Natriuretic peptides are a family of hormones that play an important role in cardiovascular

and renal homeostasis. The aim of this study was to analyze the association between

natriuretic peptide NT-proBNP serum concentration and constituent variables in healthy dogs.

We hypothesized that NT-proBNP serum concentration does not vary with the bodyweight or

the heart size but it does with the age and sex. 159 dogs were used, 80 males and 79 females,

80 under 7 years old and 79 older than 7, 53 of small size (<12kg) – 53 of medium size (12-

25kg) - 53 of big size (>25kg) with a body condition score 2.5-3.5. It was considered a

healthy canine those patients who had a clinical examination and complementary studies –

blood pressure, electrocardiography, chest radiography, echocardiography, hematologic and

biochemical- within normal parameters according to literature. Statistical analysis was

performed using the public domain software R&R Commander (Rcmdr) i386 version 3.0.1.

The mean serum concentration of NT-proBNP was 260.28 pmol/lts +/-135.48 pmol/lts.

Statistically significant differences were observed according to sex (males: 281.31 pmol/lts

+/-144.84 , females: 238.99 pmol/lts +/-123.52, p=0.0392) and age (<7 years old: 235.19

4

pmol/lts +/-119.72 , > 7 years old: 285.69 pmol/lts +/-146.97, p=0.0124), but not statistically

significant to weight/size (<12kg: 235.78 pmol/lts +/-129.18; 12-25kg: 281.85 pmol/lts +/-

134.34; >25kg: 263.21 pmol/lts +/-142.46, p=0.183). The concentration of NT-proBNP was

not associated with VHS (r=0.078, p=0.329) or with echocardiographic parameters as DVID

(r=0.070, p=0.375), EPLVI (r=-0.034, p=0.666), EPSS (r=0.132, p=0.095), ESIVD

(r=0.0296, p=0.71), LVID (r=0.139, p=0.081), VVID (r=0.084, p=0.289), FA (r=-0.0259,

p=0.745), EF (r=-0.0211, p=0.791), FEPLVI (r=0.141, p=0.076) and FESIV (r=0.134,

p=0.091). This study shows that the concentration of NT-proBNP is affected by age/sex in

healthy dogs but not by the weight/size and that these differences must be taken into account

in health and disease. Furthermore, the concentrations do not correlate with radiological or

echocardiographic variables determined by the variability in the size of healthy dogs.

5

INTRODUCCIÓN

Los animales de compañía, caninos y felinos domésticos, ocupan un lugar destacado

dentro del ámbito familiar. En la actualidad, la atención y el cuidado de las mascotas han

alcanzado niveles de exigencia que representan importantes desafíos para la medicina

veterinaria contemporánea. En la clínica diaria, por su parte, es habitual el hallazgo de

enfermedades que afectan al aparato cardiovascular. Las mismas, representan el 11.3% de

todas las patologías presentes en caninos domésticos (114), correspondiendo un 65-70% a las

patologías valvulares, un 15-20% a patologías miocárdicas y el resto a otras cardiopatías (45).

Un conocimiento preciso de la anatomía, histología, fisiología y fisiopatología del aparato

cardiovascular es necesario para arribar a un diagnóstico clínico presuntivo, así como una

adecuada selección e interpretación de los métodos complementarios es indispensable para

descartar probables diagnósticos diferenciales y determinar el diagnóstico definitivo de la

cardiopatía que afecta al paciente.

Anatomía

El corazón se encuentra ubicado dentro de la cavidad toráxica en el espacio

mediastínico medio, está cubierto parcialmente por los lóbulos pulmonares y sostenido por los

grandes vasos sanguíneos (109). Su peso relativo, en caninos, depende del tamaño y de la raza

del animal, correspondiendo aproximadamente al 0.65-0.76% (152), 0.45-1.1% (109), 0.5-

2.2% (62) del peso corporal. Se sitúa asimétricamente en el tórax, con la mayor parte sobre la

izquierda del plano medio, estando su base a craneodorsal y su vértice a caudoventral. Su eje

mayor se dirige en dirección craneodorsalderecha hacia caudoventralizquierda (51). Se

encuentra rodeado por el pericardio, saco fibroso formado por dos capas, una parietal y otra

6

visceral, entre las cuales se presenta una pequeña cantidad de líquido que colabora en los

movimientos cardíacos (109).

Está constituido por cuatro cámaras, atrios derecho e izquierdo y ventrículos derecho e

izquierdo, las cuales están separadas por medio de válvulas, el tabique interatrial y el septum

interventricular, respectivamente. Asimismo, los atrios se separan de los ventrículos por un

esqueleto fibroso, cuyo único punto de contacto directo, entre ambos, es el orificio de pasaje

del fascículo auriculoventricular del tejido especializado de conducción. Este esqueleto

fibroso se forma por la conjunción de los cuatro anillos valvulares que rodean los cuatro

orificios cardiacos (51). Cada uno de estos últimos, presentan válvulas cardiacas

unidireccionales, dos atrioventriculares –mitral y tricúspide- que separan atrios de ventrículos

y dos sigmoides o semilunares –aórtica y pulmonar- que separan las cámaras ventriculares de

las arterias aorta y pulmonar, respectivamente (109).

Los atrios presentan el músculo atrial, que se organiza en fascículos superficiales y

profundos, los primeros son comunes a las dos cavidades y el segundo se limita a cada una en

particular. El atrio derecho recibe sangre de las venas cavas caudal y craneal, venas coronarias

y de la vena ácigos derecha y la envía al ventrículo derecho a través de la válvula

atrioventricular derecha o tricúspide. El atrio izquierdo recibe sangre de las venas pulmonares

y la envía a través de la válvula atrioventricular izquierda o mitral a la cavidad del ventrículo

izquierdo (51).

Los ventrículos están rodeados por el músculo ventricular, que presenta también

fascículos superficiales y profundos. Los primeros rodean a las dos cámaras ventriculares

utilizando al tabique interventricular para completar una figura con forma de ocho y los

segundos son exclusivos de cada una de las cavidades (51). La cavidad del ventrículo derecho

es triangular al corte longitudinal, de forma semilunar al corte transversal y no se extiende, en

7

condiciones normales, hasta el ápice cardíaco. Presenta en su pared trabéculas cárnicas, tres

músculos papilares que se unen a los bordes de las válvas atrioventriculares a través de

cuerdas tendinosas y una trabécula septomarginal que cruza la cámara desde el septum

interventricular hasta la pared libre. El ventrículo izquierdo es cónico, se extiende hasta el

vértice del corazón, presenta también trabéculas cárnicas, dos músculos papilares,

subauricular y subatrial, los cuales se unen a las valvas atrioventriculares a partir de cuerdas

tendinosas (62).

El sistema especializado en la conducción del impulso cardíaco está constituido por el

nodo sinusal (NSA) o marcapasos cardíaco, los fascículos internodales, el nodo

auriculoventricular (NAV), el has de His con sus ramas derecha e izquierda y las fibras de

Purkinge (152).

El corazón recibe su irrigación a partir de las arterias coronarias derecha e izquierda,

que ocupan, luego de su nacimiento en la aorta, los surcos atrioventriculares primeramente y

los surcos interventriculares posteriormente, llegando a todas las partes del corazón desde la

cara epicárdica (152).

Histología

El corazón está conformado, básicamente, por tejido muscular contráctil y por un

tejido especializado en la conducción del impulso eléctrico. Las paredes cardiacas presentan

una capa interna o endocardio, una media o miocardio y una externa o epicardio. El

miocardio, tejido muscular estriado cardíaco, presenta fibras musculares constituidas por

células que se ramifican y forman en conjunto una red tridimensional. Las células están

unidas cola con cola por discos intercalares, que facilitan la difusión rápida de los iones,

formando en conjunto un sincitio funcional. Las fibras musculares cardíacas, en un corte

8

transversal, son de aspecto ovoideo irregular y en el corte longitudinal, donde su recorrido es

bastante paralelo, se observan ramificaciones que se comunican con las fibras vecinas. Los

ases musculares se encuentran separados entre sí por la presencia de una abundante cantidad

de mitocondrias y retículo sarcoplásmico. Los núcleos son grandes, ovales, claros y se

encuentran en la parte media de cada célula. Se distingue un nítido estriado longitudinal con

el microscopio óptico, asimismo, el patrón de estriado transversal se corresponde con el

presente en la musculatura esquelética, aunque no es tan notable. Un rasgo característico son

los discos intercalares, que se observan como gruesas líneas transversales que atraviesan todo

el ancho de la fibra, presentando el aspecto semejante a una escalera (78).

Las miofibrillas cardiacas presentan un estriado transversal, representado por bandas

oscuras o bandas A y bandas claras o bandas I. Cada banda A posee una zona transversal

menor o banda H y en el centro de la misma una línea angosta o línea M que une las bandas

A. Cada banda I es cortada, a su vez, por una línea Z, lugar este donde se encuentran los

túmulos T. Al segmento ubicado entre dos líneas Z se lo conoce como sarcómero y representa

la unidad estructural y funcional del miocardio. Asimismo, las miofibrillas, están formadas

por miofilamentos de dos tipos, gruesos o de miosina y finos o de actina. En la banda A los

filamentos de miosina y actina están entrelazados. Los filamentos de actina parten de cada

disco Z, desde donde se extienden para formar la banda I y se continúan dentro de la banda A

entre los filamentos de miosina. Éstos, faltan en la banda H, la cual está compuesta por la

porción media de la banda A donde solo hay filamentos de miosina.

Durante la contracción los filamentos de actina se deslizan hacia el centro de la banda

A, acortando el sarcómero, de este modo se hacen más angostas las bandas H e I,

permaneciendo constante la longitud de la banda A. El mecanismo de contracción es regulado

por la Tropomiosina y la Troponina. Ésta última, presenta tres polipéptidos, la Troponina C

9

que se liga al Calcio, la Troponina T que se une a la Tropomiosina y la Troponina I que se une

a la actina e inhibe la contracción. El proceso se lleva a cabo a través del suministro de ATP

por las mitocondrias y de Ca++ a partir del retículo sarcoplasmático y del líquido extracelular

(15).

En preparaciones analizadas bajo microscopia electrónica se observan, tanto en

miocitos atriales como ventriculares, la presencia de granulaciones citoplasmáticas que

contienen péptidos vasoactivos como en péptido natriurético atrial, el péptido natriurético tipo

B y el péptido natriurético tipo C (55).

Fisiología

El corazón, desde un punto de vista hemodinámico, esta constituido por dos bombas:

un corazón derecho que impulsa la sangre desde el ventrículo derecho hacia el territorio

pulmonar donde se realizará la hematosis sanguínea y un corazón izquierdo que bombea la

sangre oxigenada desde el ventrículo izquierdo hacia el territorio corporal sistémico. Ambos

procesos se realizan simultáneamente en cada ciclo cardíaco. Se entiende por este, al período

de tiempo desde el comienzo de un latido hasta el comienzo del latido siguiente (71).

El ciclo cardiaco consta de un período de relajación, denominado diástole, durante el

cual el corazón se llena de sangre, seguido de un período de contracción o sístole, donde la

sangre es expulsada a la circulación pulmonar y sistémica (173). Durante la sístole cardiaca se

acumula sangre en los atrios, provenientes del territorio venoso, debido a que las válvulas

auriculoventriculares (VAV) permanecen cerradas impidiendo el flujo retrógrado de la sangre

desde los ventrículos hacia los atrios. Cuando la sístole termina y la presión dentro de las

cámaras ventriculares cae a valores diastólicos, una presión auricular superior abre las VAV

permitiendo que la sangre fluya rápidamente hacia los ventrículos durante la fase de llenado

10

ventricular rápido, correspondiendo al primer tercio de la diástole. Luego, en el tercio medio,

fluye a los ventrículos una pequeña cantidad de sangre, la que continúa llegando a los atrios

procedente de las venas, pasando directamente a los mismos a través de las VAV abiertas. En

la etapa final de la diástole, el último tercio, las aurículas se contraen e inyectan entre un 7% a

un 10% del volumen diastólico final en reposo, pudiendo llegar a un 25% en el ejercicio

máximo o submáximo (44).

Finalizada la diástole, comienza la contracción ventricular la cual genera que la

presión dentro de estas cámaras aumente rápidamente provocando el cierre de las VAV. En un

principio, se produce la contracción del miocardio ventricular sin el vaciamiento o la

modificación del volumen ventricular, período denominado contracción isovolumétrica. Es al

final de la misma, donde la presión se eleva lo suficiente como para abrir las VS aórtica y

pulmonar (71, 173).

Cuando las VS se abren, porque la presión en los ventrículos supera a la presentada

por las arterias aórtica y pulmonar, comienza la fase de expulsión o de eyección. Ésta, durante

el 1º tercio es rápida, denominándose período de expulsión rápido, y durante los dos tercios

restantes es lenta, conociéndose como período de expulsión lenta. Todo este período se

conoce como Sístole Cardiaca (71, 173).

Al final de la sístole comienza la relajación muscular con lo cual disminuyen

rápidamente las presiones dentro de las cámaras ventriculares. Las elevadas presiones

registradas en las arterias aorta y pulmonar empujan y provocan el cierre de las VS e impiden

el flujo retrógrado de la sangre hacia los ventrículos durante la diástole. Luego, el miocardio

continúa relajándose sin generar variaciones en el volumen ventricular, lo que da lugar al

período conocido como relajación isovolumétrica. Las presiones intraventriculares vuelven

11

rápidamente a los valores diastólicos, lo cual genera por diferencia de presiones la apertura de

la VAV, dando lugar al comienzo de un nuevo ciclo cardíaco (71).

El tejido especializado en la conducción del impulso eléctrico es el responsable de la

coordinación de la serie de pasos descriptos en el ciclo cardíaco. Las células marcapasos del

NSA inician la onda de despolarización del corazón. Ésta, corre por las aurículas a través de

tractos anatómicos especializados y por células miocárdicas auriculares comunes hasta el

NAV. En el mismo, el impulso eléctrico, sufre un retraso fisiológico indispensable, desde el

punto de vista hemodinámico, para que se produzca la contracción de las aurículas antes que

la de los ventrículos. La onda de despolarización, al emerger del NAV, se continúa con el has

de His que atraviesa el anillo fibroso y pasa a los ventrículos donde se divide en las ramas

derecha e izquierda. Las mismas, se ramifican y dan origen a las fibras de Purkinge que llevan

el impulso a todo el miocardio ventricular. Este sistema complejo, es responsable del origen

del impulso cardiaco y su distribución a todo el corazón. Asimismo, permite la contracción

secuencial de las aurículas y los ventrículos y provoca rápidamente la contracción coordinada

de la masa miocárdica completa de ambos ventrículos (127).

Fisiopatología

La insuficiencia cardíaca (IC) se define como la incapacidad del corazón de mantener

un volumen minuto adecuado a las necesidades del organismo. Si esta incapacidad recae

sobre el corazón derecho se genera insuficiencia cardíaca derecha con la consecuente

congestión venosa a nivel sistémico, si la misma recae sobre el corazón izquierdo se genera

insuficiencia cardíaca izquierda con acumulación de edema a nivel pulmonar y si la

incapacidad, por último, afecta a todo el corazón, es decir, a ambos ventrículos, se presenta

insuficiencia cardíaca global (71).

12

Cuando la función y el volumen minuto cardíaco declinan, una compleja interacción

de respuestas compensatorias se ponen en marcha para restaurar el descenso de la presión

arterial sistémica. El sistema nervioso simpático es el primero en reaccionar, elevando la

frecuencia cardíaca, aumentando la contracción del corazón y generando vasoconstricción

periférica. No obstante, el mantenimiento de la presión arterial tiene prioridad sobre el

mantenimiento del volumen minuto cardíaco presentándose, en la disfunción ventricular

temprana, una disminución de la presión arterial sistólica, media y diastólica (112), a pesar de

la puesta en marcha de mecanismos compensadores rápidos (71).

La vasoconstricción periférica genera hipoperfusión renal perpetuando el ciclo de

expansión progresiva de la volemia. El volumen de filtración glomerular, a pesar de

mecanismos intrínsecos del riñón, también disminuye. Esta situación genera la reducción de

la oferta de Na+ a la arteriola eferente y estimula la liberación de renina a partir del aparato

yustaglomerular (55). La renina, una vez liberada al torrente sanguíneo, actúa sobre el

angiotensinógeno, globulina sérica, para producir angiotensina I. En la circulación pulmonar,

esta última, es transformada en angiotensina II a partir de la acción catalítica de la enzima

conversora de angiotensina. La angiotensina II aumenta la presión arterial sistémica a partir

de su poderoso efecto vasoconstrictor y mediante la liberación de aldosterona, la cual

promueve el aumento de la volemia a partir de la reabsorción de sodio, cloro y agua del riñón.

Las sobrecargas de volumen y de presión sobre las cámaras cardíacas, como

consecuencia de la IC crónica, estimulan la liberación de péptidos cardíacos con acción

natriurética, vasodilatadora y de mantenimiento del equilibrio hidrosalino. Estos, representan

el mecanismo de contrafuerza con el cual responde el miocardio ante los trastornos

hemodinámicos señalados anteriormente (136). El péptido natriurético atrial (ANP) es

liberado principalmente del tejido auricular en respuesta al estiramiento del miocardio y al

13

aumento de presión transmural (69) y el péptido natriurético tipo B (BNP) es liberado

primariamente del tejido ventricular cardíaco en respuesta a aumentos del estrés parietal

(184).

A medida que avanza la IC la expansión de la volemia, la retensión hidrosalina y los

desequilibrios en los gradientes de presión hidrostática van favoreciendo el movimiento de

líquido hacia el espacio intersticial, tejidos y cavidades corporales (71). Esta acumulación

genera edema, el cual se deposita en distintos territorios corporales que responden al patrón de

insuficiencia cardíaca dominante, así se presenta edema pulmonar en la ICI y ascitis en la

ICD. Esta situación es sostenida por los mecanismos compensatorios, los cuales se vuelven

contraproducentes y estimulan el progresivo avance de la IC. Si un nuevo equilibrio

hemodinámico no es alcanzado, el sistema renina-angiotensina-aldosterona continúa

exacerbando el proceso con la consecuente falla cardíaca congestiva fulminante y la muerte

del animal (165).

Diagnóstico

El diagnóstico de las enfermedades cardíacas así como la determinación objetiva del

verdadero estado de salud del paciente –sano versus enfermo- comienza con la realización de

un exhaustivo examen clínico. Una reseña precisa, anamnesis detallada y exploración física

sistemática son claves para elaborar criteriosamente un diagnóstico presuntivo. En este

sentido, el examen clínico del paciente es soberano no pudiendo ser reemplazado por ninguna

metodología diagnóstica complementaria (105). Sin embargo, el aporte de éstos últimos a la

clínica representa una contribución significativa a la hora de establecer un diagnóstico

definitivo de la patología cardiovascular o determinar el estatus de animal sano o libre de

14

enfermedad. Asimismo, permiten realizar un tratamiento más adecuado al tipo de patología,

evaluar su evolución y emitir un pronóstico con mayor exactitud (67).

Métodos diagnósticos complementarios

Electrocardiografía

El electrocardiograma (ECG) es el test diagnóstico más comúnmente utilizado en

cardiología veterinaria. Registra los potenciales eléctricos generados por el corazón desde la

superficie corporal a partir de la utilización de un electrocardiógrafo (185).

Su interpretación aporta datos sobre la frecuencia y ritmo cardíacos, estado del sistema

de conducción del impulso eléctrico y de la presencia, origen y frecuencia de las arritmias

(124). También puede sugerir la presencia de sobrecargas camerales específicas, enfermedad

miocárdica y pericárdica, isquemia, desequilibrios electrolíticos y toxicidades

medicamentosas.

Sin embargo, aporta información limitada sobre la función mecánica del corazón,

etiología de la enfermedad cardíaca, gravedad del proceso morboso y pronóstico del paciente.

Los valores normales para caninos y felinos domésticos se encuentran estandarizados (188).

Radiología

El examen radiológico del tórax permite evaluar la silueta, el tamaño y la posición del

corazón, el diámetro y la proyección de los grandes vasos sanguíneos asociados, descubrir

signos relacionados a la presencia de insuficiencia cardíaca congestiva, diferenciar la

enfermedad cardíaca de una patología extracardíaca -pulmonar, pleural o mediastínica- y

colaborar en la distinción entre patología cardíaca derecha, izquierda o global (43).

15

La evaluación del tamaño cardíaco radiológico -escala cardíaca vertebral (VHS)- y del

diámetro de los grandes vasos sanguíneos –arterias y venas apicales, arterias y venas caudales,

vena cava caudal- sobre la base de estructuras que no presentan modificaciones debidas a los

movimientos respiratorios –cuerpos vertebrales toráxicos y ancho de las costillas- constituye

un método objetivo para descartar signos de cardiomegalia radiológica y patrones vasculares

de hipertensión y/o congestión pulmonar (161, 185). El tamaño cardíaco vertebral, observado

en caninos con IVM, presenta una correlación positiva con los parámetros ecocardiográficos y

con la concentración sérica de fracción amino terminal del péptido natriurético tipo B (NT-

proBNP) en pacientes con insuficiencia cardíaca congestiva (141).

Sin embargo, y a pesar de que los valores normales para caninos y felinos se

encuentran estandarizados (185), una silueta cardíaca radiológicamente normal se puede

corresponder con un animal enfermo ya que muchas enfermedades cardiacas no

necesariamente producen signos radiográficos y a que varias anormalidades radiográficas son

sólo en realidad variaciones individuales, de conformación ó circunstanciales, como las

originadas a partir de las fases del ciclo cardíaco o de los movimientos respiratorios (68).

Ecocardiografía

La incorporación de la ultrasonografía cardíaca amplió el panorama diagnóstico de las

patologías del corazón, permitiendo la visualización no invasiva y no ionizante de su

estructura interna (20). Imágenes dinámicas del ciclo cardíaco son obtenidas en Modo B-

Dimensional y Modo M o en movimiento, convirtiéndose en una herramienta primordial en la

evaluación de pacientes con enfermedad cardíaca (80).

Un estudio ecocardiográfico sistemático permite observar la presencia de lesiones

valvulares, shunts sanguíneos, masas cardíacas y extracardíacas, efusiones pericárdicas y

16

pleurales, enfermedades miocárdicas y lesiones estenóticas. De mayor importancia, la

ecocardiografía, evalúa el tamaño de las cámaras cardíacas (diámetros internos sistólicos y

diastólicos, áreas y volúmenes), espesores parietales, movimientos murales, fracción de

acortamiento y de eyección del ventrículo izquierdo, fracción de engrosamiento de las paredes

ventriculares y relación Ao/AI (11, 36, 155, 161) brindando información sobre el estado

hemodinámico y la extensión de los procesos de enfermedad (20, 76, 189).

Asimismo, los exámenes ecocardiográficos permiten el seguimiento de los cambios

anatómicos producidos en el corazón, adquiridos o congénitos (189), y las estructuras

relacionadas a través del tiempo (20, 76).

Sin embargo, un estudio ecocardiográfico preciso requiere de pericia técnica,

resultando obvia la importancia de la experiencia del operador y el conocimiento de la

anatomía, fisiología y fisiopatología cardiovascular (20, 56, 141, 189). Por otra parte, la

ecocardiografía no aporta datos objetivos sobre el grado de estrés parietal que soportan las

cámaras cardiacas (80, 118) y no es el método complementario ideal para seguir un

tratamiento y emitir un pronóstico sobre la cardiopatía (194). Asimismo, aporta datos acerca

de la etiología de la enfermedad (149). En pacientes con insuficiencia cardíaca y severa

disfunción ventricular izquierda, sus parámetros son predictores significativos de mortalidad

(80).

La ecocardiografía doppler permite determinar la dirección y velocidad de la sangre

dentro del corazón y los grandes vasos y diferenciar entre flujos laminares y turbulentos (20).

Esta técnica diagnóstica, también colabora con la ecocardiografía convencional, en la

detección de shunts sanguíneos, regurgitaciones y estenosis valvulares, en la evaluación de la

función sistólica y diastólica del ventrículo izquierdo y en la estimación de la gravedad de la

cardiopatía (8). Asimismo, los estudios doppler permiten calcular el volumen y la fracción de

17

regurgitación y a partir de estos, estimar gradientes de presión y calcular índices que permitan

contar con mayor información sobre la función sistólica y diastólica ventricular (20). En

caninos con IVM se presenta una estrecha relación entre el grado o tamaño del jet de

regurgitación mitral y la gravedad de la alteración valvular (4) y una correlación

estadísticamente significativa con la concentración sérica del péptido natriurético NT-proBNP

(183).

Los exámenes doppler demandan tiempo, son técnicamente exigentes y requieren un

buen conocimiento de la anatomía cardiaca y de los principios hemodinámicas (189). Pero, al

igual que la ecocardiografía convencional, no aportan datos objetivos sobre el grado de estrés

parietal que soportan las cámaras cardiacas (80) y del estado hemodinámico del organismo

(118).

Los valores normales para caninos y felinos domésticos para los parámetros

ecocardiográficos se encuentran estandarizados (20).

Biomarcadores cardíacos

En las últimas décadas, se ha prestado especial atención a la utilización de

biomarcadores que reflejen el estado y funcionamiento del aparato cardiovascular (142). Los

mayores avances se han generado en el campo de la medicina humana, donde los marcadores

de necrosis miocárdica isquémica cobran real importancia dentro del diagnóstico, tratamiento

y pronóstico de los pacientes. Entre estos, se encuentran las enzimas AST, LDH, CPK y CK-

MB como las más antiguas y la Troponina C, T e I (142, 149), endotelinas (118, 142) y

proteína C reactiva (70, 93, 158) como los nuevos marcadores de necrosis miocárdica. Sin

embargo, en medicina veterinaria, las patologías isquémicas son sumamente raras, siendo su

incidencia menor al 0.15% de las patologías que afectan al corazón (46, 54).

18

En forma similar a la importancia estadística que cobran las patologías isquémicas

agudas en medicina humana, se presentan las afecciones cardiovasculares crónicas,

congénitas y adquiridas, en medicina veterinaria. Este estado de situación, trajo aparejada la

búsqueda de otro tipo de marcadores de enfermedad cardíaca capaces de posibilitar el

diagnóstico, registrar el progreso y evaluar la respuesta al tratamiento de cada paciente (142).

Se los denomino biomarcadores cardiacos hemodinámicas y son sintetizados, almacenados y

secretados por el miocardio cardíaco. Son considerados como tales el péptido natriurético

atrial (ANP) y el péptido natriurético tipo B (BNP). En la actualidad, estos proporcionan

nuevas y prometedoras perspectivas en cuanto a la utilidad diagnóstica, tratamiento y

pronóstico de las patologías cardíacas en caninos domésticos (118).

Péptidos Natriuréticos

Los péptidos natriuréticos (NP) son una familia de hormonas (191) que juegan un

importante rol en la regulación de la homeostasis cardiovascular y renal (101), a partir de su

actividad vasodilatadora, natriurética, antagonista del sistema renina angiotensina aldosterona

(17, 171, 187), lusinotrópica (17) e inhibitoria de la fibrosis cardíaca (181). El primero en ser

descubierto (40) y secuenciado (140) fue el péptido natriuréticos atrial (ANP). Los restantes

miembros, péptido Natriuréticos tipo B (BNP) y péptido Natriuréticos tipo C (CNP), fueron

caracterizados en 1989 (162) y en 1990 (176). El ANP se presenta en mayor concentración en

el tejido cardíaco atrial (40, 140) y es almacenado en forma de gránulos de rápida liberación

(26, 40). El BNP, originalmente descubierto en tejido cerebral porcino (175), es sintetizado y

liberado, tanto por miocitos atriales como ventriculares sin un proceso de almacenamiento

extenso (6, 121, 135). El CNP, el miembro más recientemente descubierto, es sintetizado en

las células endoteliales vasculares (33) y presenta una alta concentración en el sistema

19

nervioso central en comparación con los bajos niveles que se observan tanto en tejido

cardíaco como sanguíneo (176).

El análisis estructural muestra que todos los NP presentan un anillo central común,

constituido por 17 aminoácidos, y dos cadenas peptídicas, adheridas a este, en las cuales se

expresan las principales diferencias moleculares (140, 176). El ANP es sintetizado como un

polipétido precursor de 126 aminoácidos (proANP-126), el cual, luego de su liberación a

sangre, es escindido en dos fragmentos menores, la fracción carboxilo terminal

biológicamente activa de 28 aminoácidos (C-ANP 99-126) y la fracción aminoterminal

residual e inactiva de 98 aminoácidos residual (NT-proANP 1-98) (194). El BNP, de forma

similar al ANP, es sintetizado y liberado a la circulación como una prohormona glicosilada

(164) de 108 aminoácidos denominada proBNP (63, 103, 171). Esta prohormona, una vez en

el torrente sanguíneo, es proteolíticamente dividida en dos fragmentos por una proteasa sérica

(193) ubicada en la membrana de los miocitos cardíacos (83), la fracción carboxilo terminal

no glicosilada (164) de 32 aminoácidos, biológicamente activa, denominada C-BNP o BNP 1-

32 (66, 166) y un fragmento amino terminal no glicosilado residual (163) de 76 aminoácidos

inactivo, denominado NT-proBNP (66, 81, 117, 167). El BNP 1-32, luego de cumplir su

actividad biológica, es clivado por una dipeptidil aminopeptidasa IV (DPP4) a BNP 3-32 (23).

Ya que este último presenta acciones significativamente inferiores al C-BNP, esta molécula se

considera el primer paso en el proceso de degradación del BNP 1-32 (17).

Los péptidos natriuréticos ejercen su actividad biológica al unirse a receptores

celulares específicos presentes en el endotelio y en las células musculares lisas de los vasos

sanguíneos (159), riñones, pulmones y miocitos cardiacos (27). Tres tipos de receptores han

sido caracterizados (97, 154). Dos de estos, el receptor de péptidos natriuréticos tipo A (NPR-

A) y el receptor de péptidos natriuréticos tipo B (NPR-B), presentan actividad guanil ciclasa

20

(CG) y median su acción a partir de la producción del segundo mensajero guanosil

monofosfato cíclico (GMPc) (82). Por su parte, el tercero, denominado receptor de péptidos

natriuréticos tipo C (NPR-C), tiene como función remover de la sangre las formas

biológicamente activas de los péptidos natriuréticos (2, 117). Esta última función, es

compartida con endopeptidasas neutras presentes en la circulación sanguínea, aunque a

diferencia de NPR-C, éstas degradan ANP fundamentalmente y en menor proporción BNP

(92, 145). ANP y BNP estimulan la producción de GMPc a partir de la activación del receptor

NPR-A (98, 99, 195). CNP, en cambio, estimula la producción de GMPc a partir de su acción

específica sobre el receptor NPR-B (97). El GMPc generado, a partir de la activación de la

CG, es degradado, luego de cumplir con su actividad biológica, por enzimas con actividad

fosfodiesterasa, como la PDE5 (98), la cual se encuentra en los riñones, corazón y vasos

sanguíneos (180). Los fragmentos inactivos NT-proANP y NT-proBNP, por su parte, son

excretados sin modificaciones vía renal, en contraste con la eliminación vía receptores

específicos y/o enzimas de degradación que sufren los fragmentos activos (111). Presentan,

además, una menor variabilidad biológica (58, 125) y una mayor vida media que las

fracciones activas (146).

ANP y BNP son liberados por el tejido cardíaco en respuesta a incrementos en el

estrés parietal de atrios y ventrículos (157). La síntesis, regulación y liberación de éstos

péptidos presentan diferencias puntuales entre sí (112). El estímulo primario para la liberación

de ANP es la sobrecarga de volumen y/o de presión que soportan los atrios cardíacos,

independientemente de cuál sea la etiología de la patología cardiovascular. En respuesta a la

misma, los niveles sanguíneos de ANP aumentan rápidamente como consecuencia, en primer

lugar, de la rápida descarga a partir de los gránulos de reserva ubicados en los miocitos

atriales y, en segundo lugar, por el incremento de su síntesis (120). A pesar de ésta pronta

21

respuesta y de la elevación temprana de los niveles sanguíneos, frente a patologías cardíacas

crónicas los niveles de ANP no se elevan en la misma proporción que en los primeros estadios

(112). En animales sanos, la mayor parte del BNP circulante se origina, en forma primaria y

de manera similar a ANP, a partir de la síntesis y liberación de miocitos atriales y, en forma

secundaria, de miocitos ventriculares (120). Una diferencia significativa entre ANP y BNP

radica en que, este último, no presenta un proceso de almacenamiento extenso en las células

cardíacas que le permitan una rápida liberación frente a condiciones patológicas (111). De

esta forma, el estiramiento de la pared atrial y, principalmente, el estrés parietal ventricular

desencadenan la síntesis y liberación gradual de BNP con el consecuente aumento de su

concentración plasmática (117). Aumentos marcados, como los que se observan en pacientes

con insuficiencia cardíaca crónica, son provocados, a su vez, por el incremento de la síntesis

proteica a partir de una mayor regulación génica en ventrículos cardíacos, primariamente

(132, 171). Así, y a diferencia de ANP, los niveles de BNP incrementan de una manera más

lenta, pero más persistente, como consecuencia de cambios hemodinámicas crónicos (111,

132). La síntesis y secreción de BNP se incrementa, de esta forma, en respuesta a fuerzas

hemodinámicas como las que se generan a partir de la sobrecarga de volumen y/o presión que

soportan las cámaras ventriculares principalmente (115). En síntesis, los niveles circulantes de

BNP se correlacionan positivamente con la severidad de la insuficiencia cardíaca (156) y

proporcionan un sensible biomarcador para el diagnóstico, seguimiento y pronóstico de la

insuficiencia cardíaca (12, 66, 165).

La determinación de las concentraciones circulantes de los péptidos natriuréticos se

considera parte de los análisis que se realizan para diagnosticar enfermedades cardíacas en el

hombre (142). El requisito fundamental para utilizar un péptido como biomarmador es que

exista una prueba confiable, tanto en sensibilidad como en su especificidad (163). Los

22

polipéptidos precursores, así como los fragmentos activos e inactivos, presentan diferencias

significativas, tanto en ANP como en BNP, que van más allá de su actividad biológica y que

son determinantes a la hora de cuantificar las concentraciones séricas o plasmáticas de los

mismos. Estas diferencias muestran que los fragmentos inactivos, NT-proANP y NT-proBNP,

son utilizados como test diagnóstico en pacientes humanos, en lugar de los fragmentos activos

C-ANP y C-BNP, ya que son mas estables a temperatura ambiente (25) y presentan una vida

media mas larga que los fragmentos activos (184). Así, a modo de ejemplo, la vida media de

C-BNP en caninos es de 1.5 minutos, considerablemente inferior que la del fragmento

inactivo (174) y la de GMPc, generado a partir de su acción biológica, es de unos 30 minutos

(16). Las determinaciones de los péptidos natriuréticos en suero y plasma muestran resultados

discrepantes a partir de distintos estudios. Algunas investigaciones demostraron

concentraciones mas altas en muestras séricas en comparación con las plasmáticas, obtenidas

de forma pareada a partir de pacientes caninos sanos (91), en contraposición con otros

resultados, también en caninos sanos, donde no se observaron diferencias significativas (22).

La secuencia molecular de ANP y BNP, por otra parte, a pesar de estar altamente conservada

entre las especies mamíferas, presentan diferencias significativas. Así, por ejemplo, el ANP

canino muestra un 87% de homología con el ANP humano (107), mientras que BNP muestra

sólo un 43% de homología entre estas especies (6, 7, 140). Esto generó dificultades, en un

principio, para determinar los niveles circulantes de los NP, en caninos y felinos, cuando se

empleaban test humanos específicos. Por esta razón, se han desarrollado test caninos y felinos

específicos (14), tanto para los fragmentos activos como residuales de los péptidos ANP (22)

y BNP (100, 164) y se encuentran disponibles comercialmente, en la actualidad, por

diferentes laboratorios. A pesar de estos recientes ensayos, y de la alta especificidad y

sensibilidad que poseen, los mismos son incapaces de distinguir entre las formas circulantes

23

de C-ANP versus proANP, C-BNP versus proBNP, NT-proANP versus proANP y NT-

proBNP versus proBNP (104). La razón para esto es que el fragmento activo y el inactivo

comparten, cada uno por separado, con el polipéptido precursor los extremos carboxilo

terminal y amino terminal, respectivamente. Lo expresado aquí determina que, cuando se

cuantifica el fragmento activo, por ejemplo, los valores hallados son el resultado de la suma

de la fracción activa y del precursor polipeptídico que da origen a la misma (104).

En los últimos años los NP ocupan un lugar destacado dentro del diagnóstico de las

cardiopatías humanas. Su determinación es recomendada como uno de los primeros pasos del

examen clínico cardiológico (49, 87, 177, 178) y es utilizada, a su vez, como guía para

evaluar el tratamiento y el pronóstico en esos pacientes (24, 38, 49, 80, 89, 134, 169). En

pacientes caninos los NP permiten realizar el diagnóstico, evaluación y monitorear el

tratamiento de la enfermedad cardíaca (141, 142), con ciertas limitaciones puntuales. Los

niveles sanguíneos de C-ANP (69, 188), NT-proANP (21, 22), C-BNP (118) y NT-proBNP

(143) permiten diferenciar caninos con enfermedad cardíaca, � Clase II de la International

Small Animal Cardiac Health Council Heart Failure Classification (ISACHC), de caninos

sanos, correlacionándose, dicha concentración, con el grado de murmullo cardíaco, los

hallazgos en el examen físico, radiológico y ecocardiográfico. Permiten distinguir, a su vez,

entre caninos con insuficiencia cardíaca congestiva, Clase II o III (ISACHC), de pacientes con

enfermedad cardíaca sin signos de congestión (6, 72, 73, 79, 118, 142). La concentración de

los NP, de igual forma, se encuentra más elevada en pacientes Clase II con enfermedad

cardíaca activa que en pacientes Clase II con enfermedad cardíaca compensada, sugiriendo

que la concentración de los NP (NT-proBNP) disminuye en respuesta al tratamiento (142) y

aumenta significativamente a medida que se hace más severa la enfermedad cardíaca (74, 91,

142, 170). En estos pacientes, por otra parte, las concentraciones de C-BNP (149), NT-

24

proANP (149) y NT-proBNP (57) permiten distinguir si la causa de tos y disnea obedecen a

un origen cardíaco o no cardíaco (pulmonar). En pacientes Clase Ia (ISACHC), por otro lado,

la concentración de los NP (NT-proBNP) es comparativamente inferior que en pacientes

caninos Clase Ib (pacientes con enfermedad cardíaca subclínica con exámenes

complementarios que evidencian la presencia de enfermedad cardíaca). Es, en la sensibilidad

de los NP en estos últimos pacientes, donde se presenta la zona más gris de la utilidad clínica

de este biomarcador. Los valores de corte establecidos por distintos laboratorios son

claramente eficaces en distinguir entre caninos sanos de los Clase II y III, pero, en los de

Clase I, tanto Ia como Ib, se encuentra una proporción importante de falsos positivos y

negativos, que no hacen posible, hasta el momento, su uso como único medio para realizar el

diagnóstico de enfermedad cardíaca con certeza. Esta variabilidad puede obedecer a causas

raciales (75, 141, 142) ó a factores que deben ser más profundamente estudiados como la

edad, el sexo, etc. (179). Dentro de las principales patologías cardíacas, que afectan a los

animales domésticos, los NP también presentan hallazgos significativos. En pacientes con

enfermedad valvular crónica (CVD) las concentraciones de los NP (NT-proANP y NT-

proBNP) permiten diferenciar entre caninos con severa regurgitación mitral de aquellos con

leve a moderada regurgitación mitral (22, 183). Cuando los pacientes con CVD presentan, a

su vez, insuficiencia cardíaca congestiva se manifiesta una positiva correlación entre la

concentración de los NP circulantes y la severidad de la patología valvular, el grado de

mortalidad y el tamaño del jet de regurgitación (68, 118, 183). Las concentraciones de los NP

(NT-proBNP), por ejemplo, para los estadios Clase Ia, Ib, II y IIIa (ISACHC) fueron de 302,8

pmol/lts± 257,1, 634,2 pmol/lts ± 642,5, 1277,9 pmol/lts ± 756,2 y 1908,9 pmol/lts ± 538,8,

respectivamente. Esto pone en evidencia que la concentración en pacientes Ib, o más grave,

fue significativamente mas alta que en los controles sanos y que en pacientes asintomáticos

25

con exámenes complementarios normales. La misma aumenta, a su vez, con la severidad de la

insuficiencia cardíaca y se asocia con la clasificación del estado de la función cardíaca

realizada por la ISACHC (179). En pacientes con soplos cardíacos de grado 1/6 a 2/6, por otra

parte, no se observaron diferencias significativas en la concentración de NT-proBNP

comparada con los controles sanos. En caninos con soplos 3/6 o mayores, en cambio, la

concentración de los NP fue significativamente más elevada que en los controles sanos y se

correlacionó positivamente con la intensidad del soplo cardíaco (31, 32, 57). La concentración

circulante de NT-proBNP se correlacionó positivamente con la frecuencia cardíaca, la

frecuencia respiratoria, el tamaño cardíaco vertebral (VHS), la relación Ao/AI (57, 77, 110,

192), la relación Ao/DVID, la relación Ao/DVIS, la uremia, la creatininemia y negativamente

con la cloremia en estos pacientes (142, 183). De esta manera, los hallazgos en el diagnóstico

por imágenes y los niveles de los NP (NT-proBNP) se asocian positivamente con la severidad

de la CVD (179). En este tipo de patología, por último, la concentración de los NP (NT-

proBNP) fue significativamente mayor en pacientes con hipertensión pulmonar asociada a

insuficiencia valvular mitral comparada con caninos sanos y disminuyó significativamente a

partir de la terapia con pimobendan en las primeras etapas del tratamiento. Nuevos estudios,

sugieren que, además, caninos con hipertensión pulmonar asociada a patología cardíaca o no,

presentan concentraciones de NP (NT-proBNP) significativamente más elevadas en

comparación con pacientes caninos afectados de enfermedades respiratorias primarias (57,

142, 183). Esta hipótesis se refuerza al observar que en caninos con insuficiencia cardíaca el

inhibidor específico de la PDE5, Sildenafil, mejoró los efectos hemodinámicas de los NP

exógenos (C-BNP) en la circulación pulmonar. Estos hallazgos soportan la idea del rol de la

PDE5 como desensibilizante de la acción de los NP sobre su actividad en la vasculatura

sistémica (59). Esta última actividad, sumada a la disminución concomitante de la síntesis de

26

GMPc en pacientes con insuficiencia cardíaca, genera efectos adversos como la disminución

de la actividad de los receptores NPR-A, una mayor acción de los receptores NPR-C y un

incremento en el catabolismo de GMPc por una mayor producción de PDE5 (147). Dentro de

las restantes causas de enfermedad cardíaca, presentes en caninos domésticos, se evidencian

los mismos hallazgos que para la CVD, pero se presentan particularidades que merecen su

consideración. Las concentraciones de C-BNP y NT-proBNP (142, 144) permiten diferenciar,

significativamente, entre las distintas causas de enfermedad cardíaca y muestran que los

pacientes con cardiomiopatía dilatada (CMD) presentan niveles de NP mucho más elevados

que aquellos afectados por otras causas de enfermedad cardíaca, independientemente de la

severidad que presente la patología. En caninos de la raza Bóxer con cardiomiopatía

arritmogénica de ventrículo derecho, una variante de cardiomiopatía dilatada, la

concentración de NP (C-BNP) se halla sensiblemente más baja cuando se la compara con los

niveles circulantes de NP presentes en otras razas caninas con cardiomiopatía dilatada y en

similares estadios de la enfermedad (9). En caninos Doberman pinschers, con CMD

idiopática, en cambio, las concentraciones de los NP (C-ANP y NT-proBNP) se hallan

significativamente más elevadas en comparación con caninos de otras razas gigantes con esta

misma afección (138, 144, 190). Otros estudios realizados en una colonia de Golden retriever

con miocardiopatía distrófica oculta mostraron, además, un incremento en los niveles

circulantes de C-BNP cuando se comparaba a estos pacientes con controles sanos (31). En

modelos caninos experimentales de estenosis aórtica, que originan cambios a nivel

miocárdico, se observo que las concentraciones de C-ANP se incrementa en forma temprana

ante sobrecargas de volumen y/o de presión sobre las cámaras cardíacas, en cambio, C-BNP

se eleva mas lentamente pero de forma más constante y sus niveles se correlacionan

significativamente con las alteraciones halladas a partir del examen ecocardiográfico (84).

27

Estas observaciones concuerdan con las halladas en pacientes humanos con enfermedad

cardíaca en donde una de las mayores causas de incremento de C-BNP es el aumento del

estrés parietal que sufre la pared ventricular izquierda al final de la diástole (88). Así, en estos

modelos caninos, la presión diastólica final del ventrículo izquierdo y el espesor del septum

interventricular en diástole son predoctores de la concentración de los NP (NT-proBNP) (84,

85). El taponamiento cardíaco, por último, no presenta niveles significativos de C-BNP que

permitan diferenciarlo de un paciente sano y/o de pacientes con enfermedad cardíaca

asintomática leve a moderada. Iguales hallazgos se han obtenido en pacientes humanos (102).

Los NP, como se menciono anteriormente, juegan un importante rol en la regulación

de la homeostasis cardiovascular y renal (65, 66). Modificaciones en la función de órganos no

miocárdicos o variables sistémicas, como el riñón (136) y la presión arterial, respectivamente,

alteran los niveles circulantes de NP, de manera independiente de la función cardíaca. En

caninos la concentración de NP se correlaciona con la función renal. En estos pacientes, con

insuficiencia renal crónica, los niveles de NP (NT-proBNP) se hallaron dos veces más

elevados comparados con caninos sanos (188), en concordancia con estudios realizados en

humanos con C-BNP (133, 134). En estos últimos, se observó una fuerte correlación negativa

con el grado de filtración glomerular (3, 41, 123, 129, 150) y que, además, las mismas están

afectadas por el índice de masa corporal y la edad del paciente (108, 174). En estudios

realizados en caninos y felinos, se demostró que la concentración de los NP se correlaciona

positivamente con los niveles séricos de urea y creatinina, tanto en pacientes caninos sanos

como en los que presentan enfermedad renal, enfermedad cardiaca (22) o cuando se presentan

ambas disfunciones juntas. La función renal, por lo tanto, puede influenciar los valores de

corte para el diagnóstico de enfermedades cardíacas puras y/o mixtas. La presión sistémica es

otra variable orgánica que incide sobre la concentración circulante de los NP. Los niveles

28

séricos de los NP (NT-proANP y NT-proBNP) se correlacionan positivamente con la presión

arterial sistólica en felinos domésticos y sus determinaciones permiten diferenciar entre

pacientes normotensos con enfermedad renal crónica, de hipertensos con enfermedad renal

crónica y de pacientes felinos sanos. En lo que respecta a las distintas determinaciones

utilizadas, sólo NT-proBNP fue estadísticamente significativo para diferenciar felinos

normotensos de hipertensos, ambos con enfermedad renal crónica, estando más elevada en

estos últimos. De esta manera, tanto la hipertensión arterial como las patologías renales

producen aumentos en la concentración de los NP.

Los niveles circulantes de NP, publicados en los distintos ensayos hasta el momento,

se han asociado con resultados diferentes a las variables constitutivas y raciales. En lo que

respecta a las primeras, edad, sexo, estado reproductivo, peso y tamaño corporal, varios

ensayos no hallaron correlación entre estas y la concentración sérica o plasmática de los NP

(NT-proBNP) tanto en pacientes con enfermedad cardíaca como en pacientes sanos (22, 52,

53, 91, 100, 128, 142, 183). Si, en cambio, observaron diferencias entre caninos de raza pura

y mestizos, estando, la concentración de los NP (NT-proBNP), más elevada en los primeros

en la población general sanos-enfermos (142). Por su parte, sobre un estudio de 330 caninos

(sanos + enfermos cardíacos + enfermos no cardíacos), De Francesco et al., hallaron

diferencias en relación a la edad y el sexo de los pacientes de manera similar a otros ensayos

(42, 179). En este, se observó que los machos presentaban niveles ¼ más elevados que las

hembras en igual forma que los mayores de 8 años con respecto a los menores de 8 años de

edad. En pacientes humanos, por su parte, se presentan correlaciones significativas con la

edad, el sexo, la raza, la condición corporal y la función renal. Se observan mayores niveles

en mujeres que en hombres y en adultos que en jóvenes (94, 151, 153). Es importante

mencionar que estos estudios son multicéntricos y presentan un muestreo muy amplio. La

29

obesidad en estos pacientes, se correlaciona negativamente, a su vez, con la concentración de

los NP a causa, probablemente, de una disminución en la síntesis o secreción de los NP (NT-

proBNP) (10). En caninos de la raza Cavalier King Charles Spaniels con regurgitación mitral

adquirida se observa una relación inversa entre el peso corporal y las concentraciones de los

NP (NT-proANP y NT-proBNP). La razón para estos hallazgos es probablemente la pérdida

ponderal que sufren estos pacientes a causa de la enfermedad cardíaca (183). Por último, se

observa una amplia variabilidad individual y semanal, en las concentraciones de los NP (NT-

proBNP) en caninos sanos (91). Estos hallazgos concuerdan con resultados obtenidos en

pacientes humanos (130), en los cuales las variaciones diarias en los niveles de los NP (NT-

proBNP) son hasta del 50% en pacientes con enfermedad cardíaca compensada, pudiendo

claramente influir en la interpretación de los resultados (137). Estas mismas variaciones, en

caninos, quedan aún por ser estudiadas.

Considerando que las patologías cardíacas crónicas representan más del 95% de las

afecciones cardiológicas en caninos domésticos, no cabe duda que los biomarcadores antes

señalados formen parte de los estudios complementarios de diagnóstico. En este marco, ¿Cuál

sería el problema para su utilización fiable?: la estandarización de los valores de base.

Recientemente se han validado los Kits canino específicos que permiten un uso confiable en

esta especie. Pudiendo afirmarse 1): Que confirman tanto desde el punto de vista diagnóstico

como del pronóstico los datos obtenidos por el resto del arsenal de que dispone la medicina

cardiológica a la fecha, 2): A través de su concentración, más la de urea y creatinina sérica, se

relacionan las funciones renales y cardíacas, 3) Que los valores obtenidos no son afectados

por la técnica de recolección ni por la utilización de anticoagulantes, y si lo son, por los

fármacos utilizados para tratar la enfermedad cardiovascular primaria.

30

Un hallazgo común es la amplia variabilidad en la concentración de estos péptidos en

las distintas investigaciones. Los valores de referencia y puntos de corte no se encuentran

claramente establecidos, observándose además, una sobreposición en los valores medios;

apareciendo en el diagnóstico un porcentaje de pacientes falsos positivos sin enfermedad

cardíaca. Esto podría deberse a que en los estudios realizados se han utilizado poblaciones

muy heterogéneas y de pequeño tamaño, en los grupos correspondientes a los animales sanos,

no teniendo en cuenta variables como la raza, edad, sexo, peso/talla y estado reproductivo, las

cuales pudiesen ser responsables de la variabilidad encontrada.

Todas las afecciones del aparato cardíaco terminan incidiendo en la función

ventricular, con el consecuente estrés parietal de esta cámara, por lo tanto, el indicador más

apropiado de enfermedad ventricular cardíaca en caninos, dentro de la familia de péptidos

natriuréticos, es la porción amino terminal del Péptido Natriurético Tipo B (NT-proBNP),

siendo su indicación primaria el diagnóstico, evaluación del tratamiento y pronóstico de los

pacientes caninos con enfermedad cardíaca.

Sobre la base del marco teórico expuesto este trabajo de tesis presentó como:

Objetivo general:

• Estudiar la asociación entre la concentración sérica de NT-proBNP y factores

constitutivos (peso vivo, sexo, edad y tamaño cardíaco) en una población de caninos

sanos.

Objetivos particulares:

• Estudiar la variabilidad de la concentración sérica de NT-proBNP en caninos sanos

dentro de cada grupo en base a las variables constitutivas sexo y edad.

• Determinar la concentración sérica del péptido natriurético NT-proBNP en caninos

sanos para establecer los valores fisiológicos normales.

31

• Relacionar las determinaciones cuantitativas ecocardiográficas con la concentración

sérica del péptido natriurético NT-proBNP a medida que aumenta el peso y el tamaño

corporal en caninos sanos con una condición corporal no mayor a 3.5.

• Correlacionar el tamaño cardíaco radiológico relativo (VHS) con la concentración

sérica de NT-proBNP a medida que aumenta la talla/peso en caninos sanos con

condición corporal no mayor de 3.5

32

MATERIALES Y MÉTODOS

Animales

Se estudiaron 159 caninos sanos, 80 machos y 79 hembras, 80 menores de 7 años y 79

mayores de 7 años, 53 de talla pequeña y peso menor de 12 kg. – 53 de talla mediana y peso

corporal entre 12 kg. y 25 kg. – 53 de talla grande y peso corporal mayor de 25 kg., 107

enteros y 52 castrados. Todos los animales utilizados contaron con el consentimiento de su

propietario para la realización de los estudios correspondientes enmarcados en este trabajo de

tesis.

Los 159 caninos se dividieron en 12 grupos según sexo, edad y peso/talla corporal.

- El Grupo I (machos – menores de 7 años – talla pequeña y peso menor de 12 kg.).

- Grupo II (machos – menores de 7 años – talla mediada y peso entre 12 - 25 kg.).

- Grupo III (machos – menores de 7 años – talla grande y peso mayor de 25 kg.).

- Grupo IV (hembras – menores de 7 años – talla pequeña y peso menor de 12 kg.).

- Grupo V (hembras – menores de 7 años – talla mediana y peso entre 12 – 25 kg.).

- Grupo VI (hembras – menores de 7 años – talla grande y peso mayor de 25 kg.).

- Grupo VII (machos – mayores de 7 años – talla pequeña y peso menor de 12 kg.).

- Grupo VIII (machos – mayores de 7 años – talla mediana y peso entre 12 – 25 kg.).

- Grupo IX (machos – mayores de 7 años – talla grande y peso mayor de 25 kg.).

- Grupo X (hembras – mayores de 7 años – talla pequeña y peso menor de 12 kg.).

- Grupo XI (hembras – mayores de 7 años – talla mediana y peso entre 12 – 25 kg.).

- Grupo XII (hembras – mayores de 7 años – talla grande y peso mayor de 25 kg.).

La selección de los animales, es decir, la definición de canino sano estuvo sujeta a la

valoración de un examen clínico y estudios complementarios de diagnóstico dentro de los

33

parámetros normales para la especie. A cada animal incluido se le realizó una exploración

física exhaustiva, luego de una anamnesis detallada con sus propietarios, para descartar signos

clínicos de enfermedad. Todo canino con signos clínicos o sospecha de enfermedad

asintomática fue descartado del ensayo.

Los estudios diagnósticos complementarios efectuados a los animales fueron, en orden

de realización, los siguientes: 1) Registro de presión arterial sistólica; 2) Registro

electrocardiográfico; 3) Evaluación ecocardiográfica; 4) Evaluación radiológica de tórax; 5)

Hemograma y 6) Bioquímica sérica.

1) Presión arterial sistólica

El registro de presión arterial sistólica sistémica se realizó mediante la utilización de

un equipo Doppler Vascular Pulsado (Marca MEDMEGA® – Modelo DV 610), manguitos

perivasculares de distintos tamaños (Marca SURGI-CUF® – Modelos 5201-5202-5203-5204-

5205), manómetro neumático (Marca HEINE® – Modelo Gamma 4.5) y gel para trasmisión

de ultrasonido (Marca CARBOGEL®).

La medición de la presión arterial se realizó sobre el miembro posterior derecho, con

el animal en decúbito lateral derecho, sobre la arteria metatarsiana dorsal derecha. Todos los

pacientes fueron rasurados sobre la zona topográfica correspondiente con cuchillas N°50

(Marca OSTER®) para mejorar el contacto con el transductor. El tamaño del manguito

utilizado, en cada canino, se determinó en base a la circunferencia de la epífisis proximal del

metatarso derecho (ancho del manguito � a la mitad de la circunferencia). A cada animal se le

realizaron 6 registros simultáneos y consecutivos. Dependiendo del carácter y estado del

animal al momento del registro se lo sujeto por 1, 2 y/o 3 auxiliares de investigación.

34

2) Electrocardiografía

El registro electrocardiográfico se realizó mediante la utilización de 2 equipos de

electrocardiografía (Marca TEMIS® – Modelos TM 300 y TM 1210). Todos los animales

fueron colocados en decúbito lateral derecho para la toma del registro.

Se estudiaron las derivaciones I, II, III, AVr, AVl, AVf y CV6LU. Las mediciones se

realizaron sobre la derivación II a una velocidad de 50 mm/seg. y 10 mm/1 milivolt (TEMIS®

TM 300). El estudio del ritmo cardíaco se realizó a las velocidades de 12.5 mm/seg. y 25

mm/seg.

3) Radiología toráxica

La evaluación radiológica del aparato cardiovascular y sistema respiratorio inferior se

realizó mediante la utilización de un equipo de radiología fijo (Marca LADEM® – Modelo

REMS 200). Todos los animales se posicionaron en decúbito lateral derecho y decúbito dorsal

para la obtención de las incidencias laterolateral izquierda-derecha (LLD) y ventrodorsal

(VD), respectivamente. Los caninos no fueron sedados ni anestesiados para la realización del

estudio. Para la técnica radiográfica se fijaron como constantes el miliamperaje (100 mA) y el

tiempo de exposición (0.04 seg.) y se varió el kilovoltaje de acuerdo al ancho y el alto del

tórax de cada paciente. Estas medidas se tomaron a nivel del ángulo caudal de la escápula con

los miembros anteriores en extensión craneal, ídem ubicación para la focalización del haz de

incidencia radiológico.

Se midieron, en base a parámetros pre-establecidos (185), las siguientes estructuras:

eje cardiaco largo (EL), eje cardíaco corto (EC), vena cava caudal sobre RX LLD (VCC1),

vena cava caudal sobre RX VD (VCC2), largo de la quinta vértebra torácica (L5ta), alto de la

quinta vértebra torácica (A5ta), arterias pulmonares craneales (APCr), venas pulmonares

35

craneales (VPCr), cuello de la cuarta costilla (C4ta), arterias pulmonares caudales (APCa),

venas pulmonares caudales (VPCa) y cuerpo de la novena costilla (C9na). Se establecieron, a

su vez, las siguientes relaciones: VHS, EL/EC, L5ta/A5ta, L5ta/VCC1, L5ta/VCC2, C4ta/APCr,

C4ta/VPCr, C9na/APCa y C9na/VPCa.

4) Ecocardiografía

La evaluación ecocardiográfica se realizó mediante la utilización de un equipo

ecocardiográfico convencional portátil (Marca MINDRAY® – Modelo DP 6900) y, la

evaluación doppler, realizada en forma posterior a los animales seleccionados, con un equipo

doppler (Marca SONOSCAPE® – Modelo S6V – Transductores 2P1 y 5P1).

Los animales examinados no fueron sedados ni anestesiados para la realización de los

estudios. Las determinaciones camerales ventriculares izquierdas se realizaron durante 3 (tres)

ciclos cardíacos consecutivos y se promediaron sus resultados. Los animales se colocaron en

decúbito lateral derecho e izquierdo y se examinaron, luego de rasurar ambos precordios, las

ventanas paraesternal derecha, apical y caudal izquierda,

Se midieron, en base a parámetros pre-establecidos (20), las siguientes estructuras:

diámetro del ventrículo izquierdo en diástole (DVID), diámetro del ventrículo izquierdo en

sístole (DVIS), espesor del septum interventricular en diástole (SIVD), espesor del septum

interventricular en sístole (SIVS), espesor de la pared libre del ventrículo izquierdo en

diástole (PLVID), espesor de la pared libre del ventrículo izquierdo en sístole (PLVIS),

distancia EPSS (distancia entre el punto e y el septum interventricular), distancia APSS

(distancia entre el punto a y el septum interventricular), AO (diámetro aórtico plano 5 cámaras

tracto de salida del ventrículo izquierdo), AI (diámetro del atrio izquierdo plano 5 cámaras

tracto de salida del ventrículo izquierdo), VVID (volumen del ventrículo izquierdo en

36

diástole), VVIS (volumen del ventrículo izquierdo en sístole) y LVID (largo del ventrículo

izquierdo en diástole). Se establecieron, a su vez, las siguientes relaciones: FA (fracción de

acortamiento del ventrículo izquierdo), FESIV (fracción de engrosamiento del septum

interventricular), FEPLVI (fracción de engrosamiento de la pared libre del ventrículo

izquierdo), relación AI/AO, FE (fracción de eyección del ventrículo izquierdo).

Extracción de muestra

A cada canino se le extrajo 5 ml de sangre venosa a partir de las venas cefálica

antebraquial ó yugular, colectando 1 ml en un tubo con anticoagulante EDTA 3K+ (Marca

DVS®) y 4ml en un tubo sin anticoagulante.

5) Hemograma

La muestra con EDTA fue refrigerada a 4°C y analizada dentro de las 24hs posteriores

a la extracción. Los parámetros determinados fueron: Recuento de Glóbulos Rojos, Recuento

de Glóbulos Blancos, Hemoglobina, Hematocrito y Fórmula Leucocitaria Relativa y

Absoluta. Las determinaciones se realizaron mediante la utilización de un equipo de

hematología automático (Marca SYSMEX® – Modelo XS1000). Para la observación del frotis

sanguíneo se utilizó la coloración de May-Gründwall-Giemnsa.

6) Bioquímica Sérica

Las muestras obtenidas en tubos sin anticoagulante fueron refrigeradas a 4°C durante

60 min. Posteriormente se realizó la centrifugación a 2500 rpm durante 15 min, para la

obtención del suero. El mismo fue dividido en dos eppendorf de 1.5 ml de capacidad y se lo

conservó entre -20°C a -28°C hasta su procesamiento. Uno de ellos se utilizó para obtener

37

las siguientes determinaciones: Glucosa, Urea, Creatinina, ALT, AST, Proteínas Totales,

Albúmina, Globulinas y relación Albúmina/Globulina. Todas las muestras fueron

identificadas de acuerdo al paciente. Para su procesamiento se utilizaron reactivos

comerciales (Laboratorio BIOSYSTEMS®) y un espectrofotómetro (Marca METROLAB® –

Modelo PLUS 1600).

Determinación de NT-proBNP

La determinación de la concentración sérica de la fracción amino terminal del péptido

natriurético Tipo B (NT-proBNP) se realizó mediante un Kit ELISA (Enzyme Linked

Immunosorbent Assay) en sándwich canino específico (Marca USCN® Life Science Inc. –

Catálogo: E90485Ca – Canis familiaris: Canine / Dog) (Imagen 1). Los valores obtenidos

fueron expresados en pmol/lts, unidad internacionalmente utilizada para la determinación de

la concentración sérica de esta molécula, sobre la base de un peso molecular de NT-proBNP

de 8.500 gr/mol (8.5 KDa) y un factor de conversión de 8.5 pg/ml = 1 pmol/lts (37, 169).

Para la realización de la técnica se siguieron estrictamente las indicaciones

recomendadas por el fabricante en el manual de instrucciones (Imagen 2) y cada una de las

determinaciones se realizó por duplicado (Imagen 3). Se utilizó el suero conservado a -20ºC

durante un período máximo de 10 meses. El cálculo de la concentración final de cada grupo se

obtuvo promediando los resultados obtenidos.

38

Análisis Estadístico

Se realizó un análisis estadístico analítico, aplicando modelos de asociación, para

evaluar la relación entre la concentración sérica del NT-proBNP y el peso/talla corporal, la

edad, el sexo, variables radiológicas y ecocardiográficas en caninos sanos.

Estos análisis se realizaron mediante un software de dominio público: R & R

Commander (R cmdr) versión i386 - 3.0.1.

Imagen 1. Kit ELISA en sándwich Marca USCN® Life Science Inc. – Catálogo: E90485Ca.

39

Imagen 2. Lectura de la Técnica de ELISA en las instalaciones del laboratorio de Virología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata

Imagen 3. Los 4 Kit ELISA utilizados para la obtención de 159 valores por duplicado. Arriba a la izquierda el manual de instrucciones.

40

RESULTADOS

La presentación de resultados respetará al siguiente orden:

1) Descripción de características (peso y edad) de los 12 grupos de caninos sanos estudiados.

2) Presentación de valores medios y desviación estándar de los parámetros registrados en los

estudios diagnósticos complementarios.

3) Descripción de la concentración sérica de NT-proBNP para las variables constitutivas.

4) Obtención de correlaciones y análisis de significancia estadística.

Población muestral

Se presentan en la Tabla 1 el número de individuos para cada uno de los 12 grupos y

los parámetros correspondientes a las variables peso y edad: media, rango y valores mínimos

y máximos. Todos los caninos incluidos tenían una condición corporal mayor a 2.5 y menor a

3.5 (Score corporal 1 – 5) (47).

Tabla 1. Parámetros de peso y edad (media, rango y mínimo-máximo) de cada uno de los 12 grupos incluidos en el estudio.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

N 13 14 14 13 13 13 13 13 13 14 13 13

PM 7.42 19.1 36.4 6.4 17.1 30.4 8.9 19.7 32.8 7.9 18.6 32.8

Rango 8.9 8.5 21.6 9.1 10.5 11.9 5.6 10.5 18.5 7.8 12.7 19.3

Min -

Max

3.0 -

11.9

13.8 -

22.3

26.7 -

48.3

2.9 -

12.0

13.1 -

23.6

25.0 -

36.9

6.4 -

12.0

14.7 -

25.2

26.0 -

44.5

3.8 -

11.6

13.1 -

25.8

26.8 -

46.1 ED 2.8 3.5 3.1 3.2 3.6 3.9 9.5 9.4 9.2 10.5 10.7 9.1

Rango 3.8 5.3 4.5 4.5 4.8 4.5 6.8 5.8 8.5 7.0 7.8 5.5

Min -

Max

1.2 -

5.0

1.2 -

6.5

1.5 -

6.0

1.5 -

6.0

1.2 -

6.0

1.5 -

6.0

7.2 -

14.0

7.2 -

13.0

7.5 -

16.0

7.5 -

14.5

7.2 -

15.0

7.5 -

13.0

Ref.: N: Número de individuos por grupo, PM: Peso promedio, Min - Max: Valores mínimos y máximos y ED: Edad Promedio.

41

Estudios Diagnósticos Complementarios

Presión arterial sistólica sistémica

Se exponen, en la Tabla 2, la frecuencia cardíaca media de cada grupo y la media para

cada una de las 6 determinaciones de presión arterial sistólica sistémica. Se presentan,

además, la media general del grupo, el desvío estándar y los valores mínimos y máximos para

cada uno de los 12 grupos incluidos en el ensayo.

Tabla 2. Valores de presión arterial sistólica sistémica en mmHg correspondientes a los 12 grupos analizados.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

FC 114 121 110 121 117 116 122 107 109 127.9 119 115

1° 145.5 154.7 155.4 133.4 141.0 147.8 141.1 151.3 148.6 139.8 147.9 141.6

2° 147.7 154.0 151.1 135.0 141.5 147.9 142.8 152.1 151.1 138.7 148.4 145.3

3° 149.8 154.1 153.1 135.4 144.2 145.1 141.2 157.7 149.1 138.7 149.1 144.0

4° 149.5 153.5 154.9 139.1 142.5 145.7 142.0 154.9 148.5 139.5 150.5 147.2

5° 151.2 156.9 153.3 137.7 145.6 146.3 143.2 157.2 149.2 139.6 150.5 147.4

6° 148.8 157.9 152.9 134.9 144.5 146.5 140.6 157.4 147.5 139.1 149.7 147.6

M 148.8 155.2 153.4 135.9 143.2 146.5 139.3 155.1 149.0 139.3 149.3 145.6

DS 21.0 17.3 13.9 17.6 16.6 12.9 27.2 15.4 16.2 23.7 15.6 22.9

Min -

Max

127.8 -

169.8

137.9 -

172.6* 139.5 -167.4

118.3 -

153.5

126.6 -

158.9

133.5 -

159.4

112.1 -

166.4

139.7 -

170.5*

132.8 -

165.2

115.6 -

162.9

133.7 -

164.9

122.6 -

168.5

Registro Electrocardiográfico

La Tabla 3 presenta los valores de amplitud (milivolt) y tiempo (segundos) para cada

una de las ondas, segmentos, complejos e intervalos. Se presentan la media y el desvío

estándar para cada uno de los registros de los 12 grupos presentados en el ensayo.

Ref.: FC: Frecuencia cardíaca, 1°- 6°: Registros consecutivos, M: Media; DS: Desviación estándar y Min – Max: Valores mínimos y máximos registrados. Con (*) se presentan valores extremos que fueron incluidos en el ensayo.

42

Tabla 3. Valores medios y desviación estándar de las ondas, segmentos, complejos e intervalos electrocardiográficos analizados.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

P(a) 0.29

±0.07

0.25

±0.09

0.24

±0.07

0.24

±0.06

0.27

±0.08

0.24

±0.05

0.22

±0.09

0.25

±0.07

0.23

±0.07

0.31

±0.08

0.27

±0.08

0.24

±0.07

P(t) 0.03

±0.003

0.04

±0.005

0.04

±0.003

0.03

±0.003

0.04

±0.007

0.04

±0.004

0.03

±0.004

0.04

±0.005

0.04

±0.006

0.03

±0.003

0.04

±0.004

0.04

±0.006

P-Q 0.09

±0.02

0.10

±0.015

0.11

±0.019

0.08

±0.014

0.10

±0.018

0.11

±0.024

0.08

±0.013

0.10

±0.013

0.10

±0.02

0.09

±0.019

0.10

±0.017

0.10

±0.03

Q(a) 0.48

±0.17

0.54

±0.21

0.24

±0.26

0.36

±0.15

0.59

±0.25

0.44

±0.23

0.41

±0.31

0.39

±0.23

0.26

±0.13

0.39

±0.21

0.53

±0.16

0.39

±0.18

QRS

(a) 1.42

±0.46

1.52

±0.45

1.49

±0.61

1.25

±0.58

1.61

±0.49

1.69

±0.55

1.48

±0.63

1.46

±0.47

1.53

±0.47

1.61

±0.65

1.55

±0.46

1.38

±0.51

QRS

(t) 0.04

±0.003

0.04

±0.005

0.05

±0.004

0.04

±0.004

0.04

±0.004

0.05

±0.005

0.04

±0.005

0.04

±0.004

0.05

±0.005

0.04

±0.004

0.04

±0.003

0.05

±0.006

T(a) 0.33

±0.14

0.42

±0.22

0.34

±0.13

0.29

±0.16

0.28

±0.13

0.35

±0.18

0.42

±0.13

0.41

±0.13

0.29

±0.12

0.36

±0.22

0.38

±0.21

0.35

±0.16

Q-T 0.20

±0.016

0.20

±0.055

0.22

±0.011

0.20

±0.016

0.21

±0.016

0.21

±0.014

0.21

±0.019

0.22

±0.013

0.22

±0.011

0.20

±0.02

0.21

±0.015

0.21

±0.014

Los caninos incluidos en el ensayo presentaron ritmo sinusal o arritmia sinusal

respiratoria, frecuencia cardiaca dentro de los parámetros normales para la especie, talla y

edad del animal (186). No se evidenció la presencia de arritmias debidas a trastornos en la

conducción, origen del impulso o ritmo cardíaco.

Radiología Torácica

La Tabla 4 muestra, para los 12 grupos de caninos analizados, la media y la desviación

estándar de las variables y relaciones estudiadas en el examen radiológico de tórax. Las

variables se presentan en milímetros y las relaciones como cocientes entre variables.

Ref.: P(a): Amplitud de la onda P (pre-sístole); P(t): Tiempo de la onda P; P-Q: Intervalo P-Q (suma de onda P y segmento P-Q); Q(a): Amplitud de la onda Q; QRS(a): Amplitud del complejo QRS (despolarización ventricular); QRS(t): Tiempo del complejo QRS; T(a): Amplitud de la onda T (repolarización ventricular) y Q-T: Intervalo Q-T (suma de complejo QRS – segmento S-T y onda T).

43

Tabla 4. Valores medios y desviación estándar de las variables y relaciones radiológicas analizadas.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

EL 71.8

±9.1

102.6

±9.05

128.2

±9.6

70.3

±11.2

97.3

±12.5

121.2

±10.7

69.7

±7.78

98.0

±8.86

117.7

±13.2

68.6

±8.8

95.0

±11.9

118.2

±10.7

EC 59.9

±8.6

86.8

±7.3

104.4

±11.8

56.9

±8.8

79.9

±8.3

99.9

±7.5

62.2

±5.9

82.4

±7.1

103.7

±10.1

60.1

±8.9

82.4

±10.6

102.8

±10.2

VCC1 9.9

±1.6

15.1

±1.59

18.8

±1.74

9.6

±1.99

13.3

±2.31

16.9

±2.19

10.9

±1.71

15.0

±2.12

17.1

±2.33

10.2

±1.34

14.3

±2.54

17.1

±1.81

VCC2 9.7

±2.1

14.8

±2.27

1.85

±2.88

9.4

±1.53

12.3

±2.43

17.5

±1.75

11.0

±1.11

15.3

±2.17

17.5

±2.83

10.6

±1.68

14.3

±2.83

17.7

±1.89

L5ta 13.1

±2.13

17.1

±1.49

20.3

±1.91

12.0

±1.68

16.8

±1.32

19.7

±1.46

13.1

±1.28

17.1

±1.57

19.9

±1.72

12.3

±1.29

16.8

±2.14

20.2

±2.04

A5ta 8.0

±0.77

12.1

±1.39

14.2

±1.85

7.7

±1.33

11.4

±1.62

13.6

±1.15

9.2

±1.12

12.6

±1.46

14.8

±1.94

7.9

±1.27

12.2

±2.01

14.5

±2.21

APCr 2.3

±0.52

3.9

±0.53

5.1

±0.72

2.5

±0.72

3.9

±0.58

5.3

±1.01

2.9

±0.42

4.4

±0.62

5.0

±1.03

2.8

±0.50

4.2

±0.12

5.0

±0.80

VPCr 2.4

±0.51

3.9

±0.53

5.2

±0.10

2.3

±0.69

3.7

±0.39

5.3

±0.91

2.9

±0.40

4.5

±0.56

5.2

±0.92

2.7

±0.50

4.2

±0.12

5.1

±0.80

C4ta 3.4

±0.98

5.4

±0.76

7.0

±0.98

3.1

±0.74

5.0

±0.75

7.2

±0.69

4.0

±0.56

5.7

±0.95

7.3

±0.128

3.4

±0.55

5.5

±0.13

7.2

±1.18

APCa 2.5

±0.6

3.8

±0.43

5.0

±0.81

2.8

±0.72

3.3

±0.55

4.8

±0.61

3.0

±0.63

4.3

±0.56

5.2

±0.85

2.8

±0.40

4.0

±0.66

5.2

±0.9

VPCa 2.6

±0.7

3.8

±0.43

5.2

±0.80

2.8

±0.72

3.5

±0.43

4.7

±0.72

3.0

±0.63

4.3

±0.47

5.2

±0.86

2.8

±0.50

4.0

±0.66

5.2

±1.0

C9na 3.3

±0.93

5.0

±0.41

7.0

±0.102

3.3

±0.69

4.5

±0.35

6.0

±0.57

3.9

±0.57

5.5

±0.54

6.7

±0.77

3.6

±0.51

5.0

±0.79

6.6

±0.84

VHS 9.46

±0.55

9.91

±0.44

10.24

±0.43

9.62

±0.48

9.62

±0.61

10.0

±0.42

9.3

±0.77

9.59

±0.51

10.12

±0.67

9.41

±0.61

9.56

±0.60

10.04

±0.38

EL/EC 1.20

±0.096

1.18

±0.072

1.24

±0.114

1.24

±0.082

1.22

±0.113

1.22

±0.112

1.12

±0.066

1.19

±0.064

1.14

±0.110

1.15

±0.113

1.16

±0.067

1.15

±0.073

L5ta/A5ta 1.64

±0.18

1.42

±0.16

1.45

±0.13

1.57

±0.14

1.49

±0.16

1.45

±0.12

1.44

±0.111

1.37

±0.14

1.36

±0.17

1.56

±0.16

1.4

±0.14

1.41

±0.15

L5ta/VCC1 1.34

±0.204

1.14

±0.102

1.08

±0.078

1.26

±0.159

1.29

±0.234

1.19

±0.191

1.22

±0.172

1.16

±0.131

1.18

±0.148

1.21

±0.157

1.20

±0.153

1.19

±0.148

L5ta/VCC2 1.38

±0.255

1.17

±0.148

1.11

±0.148

1.29

±0.146

1.41

±0.274

1.13

±0.112

1.20

±0.100

1.14

±0.203

1.16

±0.161

1.18

±0.201

1.20

±0.167

1.15

±0.097

C4ta/APCr 1.44

±0.246

1.40

±0.136

1.42

±0.226

1.30

±0.289

1.30

±0.137

1.40

±0.224

1.36

±0.074

1.32

±0.189

1.49

±0.296

1.27

±0.169

1.35

±0.215

1.46

±0.218

C4ta/VPCr 1.42

±0.257

1.41

±0.135

1.36

±0.208

1.36

±0.264

1.35

±0.092

1.37

±0.147

1.36

±0.076

1.29

±0.196

1.44

±0.220

1.29

±0.170

1.34

±0.224

1.43

±0.243

C9na/APCa 1.33

±0.25

1.33

±0.141

1.43

±0.293

1.19

±0.115

1.39

±0.355

1.27

±0.175

1.31

±0.169

1.29

±0.137

1.30

±0.164

1.31

±0.153

1.24

±0.101

1.29

±0.141

C9na/APCa 1.29

±0.25

1.33

±0.140

1.36

±0.217

1.19

±0.115

1.32

±0.170

1.29

±0.186

1.31

±0.166

1.27

±0.122

1.29

±0.161

1.29

±0.159

1.24

±0.101

1.31

±0.193

Ref.: Para interpretación de siglas dirigirse al listado de abreviaturas de las páginas VII-IX.

44

Todos los caninos estudiados presentaron variables y relaciones dentro de los

parámetros normales para la especie, talla/peso y conformación toráxica del animal sobre la

base de parámetros pre-establecidos (185).

Ecocardiografía

Las determinaciones ecocardiográficos registradas, para cada uno de los 12 grupos

analizados, se presentan en la Tabla 5. Se exponen la media y la desviación estándar de las

variables y relaciones estudiadas. Las primeras se expresan en milímetros y las últimas como

cocientes entre variables.

Todos los caninos estudiados presentaron variables y relaciones dentro de los

parámetros normales para la especie y talla del animal, sobre la base de parámetros pre-

establecidos (20).

45

Tabla 5. Valores medios y desviación estándar de las variables y relaciones ecocardiográficos analizadas.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

DVID 25.46

±3.07

36.61

±3.42

45.61

±3.70

25.74

±4.24

36.39

±5.34

41.52

±4.09

25.82

±3.17

34.94

±3.06

42.05

±3.64

26.60

±4.46

35.12

±5.59

43.05

±4.42

DVIS 15.59

±2.22

24.46

±2.55

29.56

±2.43

16.48

±3.67

24.57

±5.92

26.94

±2.59

16.06

±2.78

22.40

±1.47

26.58

±1.78

16.93

±3.44

22.65

±4.02

27.70

±3.17

FA 38.72

±5.26

33.19

±2.61

35.10

±3.73

36.39

±5.41

33.22

±5.76

34.95

±4.53

37.93

±5.54

35.69

±3.51

36.62

±3.02

36.72

±4.58

35.59

±3.53

35.62

±3.87

SIVD 5.95

±1.02

8.31

±0.62

11.54

±1.43

5.62

±0.83

7.79

±0.43

10.81

±1.75

6.35

±1.33

8.62

±0.68

11.06

±1.75

6.04

±0.98

8.25

±0.81

10.01

±1.38

SIVS 9.30

±1.20

12.95

±1.13

15.89

±1.95

8.79

±1.31

11.16

±0.93

15.35

±1.91

9.18

±2.06

13.54

±1.47

15.89

±1.79

9.46

±1.49

12.57

±1.36

15.48

±2.02

FESIV 36.16

±6.93

35.68

±4.22

27.20

±6.01

35.55

±9.48

29.92

±4.62

29.68

±6.26

33.80

±7.92

36.03

±4.37

30.57

±6.28

35.77

±6.69

34.16

±4.03

35.23

±5.57

PVID 5.35

±1.08

8.23

±0.93

11.04

±1.91

5.65

±0.87

7.87

±0.88

10.85

±1.46

6.20

±1.78

8.78

±0.79

10.50

±1.53

6.52

±1.18

8.39

±1.08

10.19

±1.66

PVIS 8.71

±1.41

12.83

±1.11

15.79

±2.09

8.80

±0.76

11.22

±0.94

15.13

±1.37

9.05

±2.03

13.20

±1.05

15.35

±1.39

10.31

±1.97

12.32

±1.49

14.71

±2.1

FEPLVI 34.57

±6.35

35.75

±3.87

29.97

±8.56

35.84

±7.10

29.65

±7.85

28.29

±6.89

32.06

±9.43

33.47

±3.93

31.62

±7.35

36.44

±5.73

31.64

±6.58

30.82

±3.86

EPSS 2.06

±0.50

3.55

±0.63

4.87

±0.80

2.36

±0.67

3.08

±0.80

4.24

±0.70

2.23

±0.73

3.67

±0.83

4.28

±0.66

2.29

±0.50

3.47

±0.76

4.38

±1.00

APSS 6.65

±1.52

9.54

±2.15

12.31

±2.77

7.20

±1.89

10.10

±3.45

12.28

±3.03

6.30

±2.21

9.35

±2.05

10.72

±2.76

5.92

±2.49

8.68

±2.16

11.97

±3.43

AO 13.88

±2.36

19.77

±1.78

25.04

±3.04

13.68

±1.87

19.95

±2.40

23.55

±2.34

13.93

±1.68

21.98

±3.32

25.00

±3.47

14.12

±2.01

20.82

±2.59

25.71

±3.13

AI 14.66

±2.23

20.30

±1.96

25.71

±2.87

14.42

±1.89

20.65

±2.47

24.45

±1.79

14.64

±1.70

23.06

±3.33

25.99

±3.41

14.56

±2.13

21.44

±2.90

26.55

±2.60

AI/AO 1.06

±0.054

1.03

±0.045

1.03

±0.036

1.06

±0.049

10.4

±0.032

1.04

±0.037

1.05

±0.047

1.05

±0.043

1.04

±0.028

1.02

±0.026

1.03

±0.033

1.04

±0.043

VVID 17.08

±7.09

41.34

±9.08

74.23

±14.03

16.06

±7.55

38.83

±11.24

57.90

±12.17

17.90

±6.09

41.71

±10.49

71.70

±19.25

16.27

±5.29

39.13

±14.04

63.03

±18.09

VVIS 7.03

±3.02

17.78

±5.31

33.22

±10.86

6.76

±3.55

17.05

±5.41

25.29

±4.40

7.44

±2.38

18.34

±5.17

32.47

±7.92

6.95

±2.96

16.74

±6.67

30.18

±14.56

FE 59.0

±4.10

57.7

±4.52

55.91

±8.75

58.49

±4.44

56.39

±4.08

55.76

±5.28

55.62

±7.24

55.97

±5.63

54.21

±4.97

55.28

±12.39

57.47

±4.40

53.48

±8.06

LVID 41.6

±6.0

58.0

±5.8

63.4

±6.2

40.6

±6.7

55.4

±3.3

63.3

±5.4

40.8

±5.4

56.4

±4.6

67.7

±6.0

38.7

±4.2

54.1

±5.9

61.6

±8.2

Ref.: Para interpretación de siglas dirigirse al listado de abreviaturas de las páginas VII-IX.

46

Hemograma

A continuación se exponen, en la Tabla 6, la media y la desviación estándar de los

parámetros analizados. Debajo de cada determinación se expresan las unidades

correspondientes.

Tabla 6. Valores medios y desviación estándar correspondientes a la serie hematológica roja y blanca.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

GR (x 106 /µl)

7.10

±0.53

6.95

±0.84

6.29

±0.60

6.87

±0.71

7.10

±0.77

6.57

±0.92

7.30

±0.54

7.11

±0.56

7.05

±0.71

7.34

±0.67

7.30

±0.55

7.30

±0.80

Hb (gr%)

16.68

±1.01

15.66

±2.19

14.55

±1.12

15.52

±1.48

16.59

±1.92

15.13

±2.11

16.40

±1.36

15.85

±1.95

15.97

±1.73

16.92

±4.69

16.70

±1.34

16.23

±1.49

Hto (%)

48.62

±2.93

47.00

±5.91

43.50

±3.46

45.46

±3.66

42.31

±5.18

45.08

±5.00

46.77

±4.11

47.62

±5.31

47.85

±4.99

49.50

±4.09

50.23

±4.08

44.62

±4.15

VCM (fl)

68.62

±3.18

67.64

±3.25

68.86

±3.06

66.38

±3.45

69.92

±4.07

68.85

±4.32

70.23

±3.14

69.08

±3.35

68.08

±2.72

69.14

±3.86

68.92

±2.56

67.54

±2.22

HCM (pg)

23.46

±0.88

22.57

±1.09

23.07

±1.00

22.69

±1.31

23.46

±0.87

23.08

±1.04

22.62

±1.12

22.92

±1.11

22.62

±0.87

23.29

±1.54

23.00

±0.57

22.46

±0.66

CHCM (%)

34.15

±1.21

33.14

±1.35

33.71

±1.14

34.15

±1.41

33.54

±1.05

33.54

±1.61

32.62

±0.65

33.08

±0.64

33.31

±1.12

33.71

±1.07

33.23

±1.16

33.15

±0.9

GB (x 103/µl)

10.69

±2.1

11.16

±2.2

11.89

±1.9

11.02

±1.7

9.42

±2.3

11.79

±2.8

10.22

±2.53

9.72

±2.21

10.26

±2.73

9.86

±3.23

9.66

±2.59

9.69

±3.07

NB (%)

1.23

±0.93

1.21

±1.19

1.00

±0.68

1.00

±0.82

0.54

±0.78

0.92

±1.12

1.31

±0.85

0.92

±0.76

0.92

±0.64

0.79

±0.89

0.69

±0.85

0.92

±0.95

NSeg (%)

67.15

±7.03

67.21

±5.60

66.86

±4.47

65.92

±7.93

63.38

±5.42

68.23

±4.59

69.69

±5.79

67.23

±5.19

69.23

±3.44

69.71

±7.52

66.85

±6.32

67.54

±6.23

Eos (%)

2.85

±1.10

2.43

±0.85

2.86

±1.00

2.77

±0.83

2.38

±1.26

2.62

±1.1

2.62

±0.96

2.69

±1.44

3.23

±1.30

2.71

±1.70

3.00

±0.82

2.38

±1.30

Bas (%)

0.23

±0.44

0.07

±0.27

0.07

±0.27

0.08

±0.28

0.15

±0.38

0.00

±0.00

0.00

±0.00

0.08

±0.28

0.00

±0.00

0.07

±0.27

0.08

±0.28

0.08

±0.28

Linf (%)

27.08

±6.69

27.43

±6.12

27.64

±4.73

28.85

±7.64

31.92

±6.14

26.77

±5.23

25.08

±6.47

27.92

±5.17

25.15

±3.87

25.21

±7.14

27.92

±6.33

27.62

±5.12

Mon (%)

1.46

±1.20

1.64

±0.63

1.57

±1.00

1.38

±0.87

1.62

±0.65

1.46

±0.8

1.31

±0.75

1.23

±0.83

1.46

±0.78

1.50

±0.80

1.23

±0.44

1.54

±0.80

Ref.: GR: Glóbulos rojos, Hb: Hemoglobina, Hto: Hematocrito, VCM: Volumen corpuscular medio, HCM: Hemoglobina corpuscular media, CHCM: Concentración de hemoglobina corpuscular media, GB: Glóbulos blancos, NEnc: Neutrófilos en cayado, NSeg: Neutrófilos segmentados, Eos: Eosinófilos, Bas: Basófilos, Linf: Linfocitos, Mon: Monocitos. Debajo de cada determinación se indican las unidades correspondientes.

47

Todos los caninos estudiados presentaron valores dentro de los parámetros normales

para la especie y edad del animal de acuerdo a la bibliografía (50).

Bioquímica Sérica

La Tabla 7 expone, para los 12 grupos analizados, la media y la desviación estándar de

las determinaciones bioquímicas analizadas. Debajo de cada determinación se expresan las

unidades correspondientes.

Tabla 7. Valores medios y desviación estándar correspondientes a la determinaciones bioquímicas analizadas.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

Glu (gr/l)

0.98

±0.124

1.01

±0.249

0.93

±0.186

0.95

±0.214

1.05

±0.222

1.00

±0.242

1.01

±0.229

1.04

±0.161

0.98

±0.192

0.99

±0.110

1.02

±0.128

0.92

±0.130

Urea (gr/l)

0.35

±0.145

0.41

±0.188

0.39

±0.112

0.36

±0.122

0.42

±0.112

0.41

±0.138

0.47

±0.126

0.40

±0.112

0.36

±0.117

0.37

±0.115

0.38

±0.124

0.37

±0.096

Cre (mg/dl)

1.23

±0.251

1.11

±0.284

1.26

±0.224

1.25

±0.209

1.22

±0.169

1.18

±0.213

1.19

±0.165

1.12

±0.270

1.23

±0.175

1.16

±0.268

1.07

±0.357

1.30

±0.196

ALT (UI/L)

31.65

±13.15

21.40

±5.30

31.19

±13.31

22.82

±7.33

22.98

±7.65

23.00

±6.82

31.20

±15.73

26.86

±7.47

33.91

±15.48

42.84

±17.94

26.82

±8.42

28.69

±13.84

Pt (gr/dl)

6.72

±0.71

6.54

±0.33

6.65

±0.54

7.13

±0.69

6.75

±0.32

6.42

±0.49

6.69

±0.58

6.69

±0.64

6.63

±0.71

6.65

±0.58

6.47

±0.39

6.45

±0.58

Alb (gr/dl)

3.30

±0.286

2.96

±0.412

3.00

±0.445

3.19

±0.482

3.09

±0.229

2.78

±0.314

3.04

±0.602

3.11

±0.645

3.22

±0.456

3.06

±0.517

3.05

±0.419

3.24

±0.328

Todos los caninos estudiados presentaron valores dentro de los parámetros normales

para la especie y edad del animal (90).

Ref.: Glu: Glucosa, Cre: Creatinina, ALT: Alanina amino transferasa, Pt: Proteínas totales, Alb: Albumina. Debajo de cada determinación se indican las unidades correspondientes.

48

Concentración Sérica de NT-proBNP

La concentración media sérica de NT-proBNP en la muestra de caninos sanos

analizados fue de 260.28 pmol/lts con una desviación estándar de +/- 135.48 pmol/lts y

valores mínimo de 42.16 pmol/lts y máximo de 603.71 pmol/lts. Ver Gráfico 1.

La concentración sérica media de NT-proBNP, según sexo, para las hembras fue de

238.99 pmol/lts, con una desviación estándar de +/- 123.52 pmol/lts y valores mínimo de

66.55 pmol/lts y máximo de 587.74 pmol/lts. En tanto que, para los machos, la media sérica

fue de 281.31 pmol/lts, con una desviación estándar de +/- 144.84 pmol/lts y valores mínimo

de 42.16 pmol/lts y máximo de 603.71 pmol/lts. Ver Gráficos 2 y 3.

100

200

300

400

500

600

NT

prob

BN

P

144.87 pmol/lts

347.79 pmol/lts

241.73 pmol/lts

Gráfico 1. Diagrama de caja que muestra la distribución levemente asimétrica de la variable hacia los límites superiores, la ausencia de valores atípicos y los valores que presentan la mediana (241.73 pmol/lts), el 1° cuartil (144.87 pmol/lts) y el 3° cuartil (347.79 pmol/lts).

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

49

Plot of Means

ntprobnp$SEXO

mea

n of

ntp

robn

p$N

Tpr

obB

NP

240

260

280

300

H M

SEXO

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 2. Plot para medias que muestra las diferencias presentes en las concentración sérica de NT-proBNP para el grupo de caninos hembras y machos.

H M

100

200

300

400

500

600

SEXO

NTp

robB

NP

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 3. Diagrama de cajas que muestra la homogeneidad de varianzas entre los dos grupos analizados (hembras y machos) y la ausencia de valores atípicos. En cada caja se exponen los valores de la mediana de cada grupo.

SEXO

221,31 pmol/lts

285.50 pmol/lts

50

La concentración sérica media de NT-proBNP, según edad, para los caninos menores

de 7 años fue de 235.19 pmol/lts, con una desviación estándar de +/- 119.72 pmol/lts y

valores mínimo de 72.06 pmol/lts y máximo de 575.89 pmol/lts. En tanto que, para los

mayores de 7 años, la media sérica fue de 285.69 pmol/lts, con una desviación estándar de +/-

146.97 pmol/lts y valores mínimo de 42.16 pmol/lts y máximo de 603.71 pmol/lts. Ver

Gráficos 4 y 5.

Plot of Means

ntprobnp$EDAD

mea

n of

ntp

robn

p$N

Tpr

obB

NP

220

240

260

280

300

< 7 años > 7 años

EDAD

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 4. Plot para medias que muestra las diferencias presentes en las concentración sérica de NT-proBNP para el grupo de caninos menores de 7 años y mayores de 7 años.

51

La concentración sérica media de NT-proBNP, según talla/peso con condición

corporal 2.5 – 3.5, para los caninos menores de 12 kg fue de 235.78 pmol/lts, con una

desviación estándar de +/- 129.18 pmol/lts y valores mínimo de 42.16 pmol/lts y máximo de

587.74 pmol/lts; para caninos entre 12 kg y 25 kg la media fue de 281.85 pmol/lts, con una

desviación estándar de +/- 134.34 pmol/lts y valores mínimo de 44.83 pmol/lts y máximo de

575.89 pmol/lts y; para caninos mayores de 25 kg la media fue de 263.21 pmol/lts, con una

desviación estándar de +/- 142.46 pmol/lts y valores mínimo de 49.81 pmol/lts y máximo de

603.81 pmol/lts. Ver Gráfico 6 y 7.

< 7 años > 7 años

100

200

300

400

500

600

EDAD

NTp

robB

NP

Gráfico 5. Diagrama de cajas que muestra la homogeneidad de varianzas entre los dos grupos analizados (< 7 años y > 7 años) y la ausencia de valores atípicos. En cada caja se exponen los valores de la mediana de cada grupo.

EDAD

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

210.95 pmol/lts

293.60 pmol/lts

52

G M P

100

200

300

400

500

600

TAMAÑO

NTpr

obBN

P

87

Gráfico 7. Diagrama de cajas que muestra la homogeneidad de varianzas entre los tres grupos analizados y la presencia de 1 valor atípico en la muestra de caninos menores de 12 kg. Se exponen los valores de la mediana de cada grupo.

TALLA / PESO

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

240.08 pmol/lts

291.34 pmol/lts

202.53 pmol/lts

Plot of Means

ntprobnp$TAMAÑO

mea

n of

ntp

robn

p$N

Tpr

obBN

P

220

240

260

280

300

G M P

TALLA / PESO

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 6. Plot para medias que muestra las diferencias presentes en las concentración sérica de NT-proBNP para el grupo de caninos menores de 12 kg (P), entre 12 – 25 kg (M) y mayores de 25 kg (G).

53

Las concentraciones séricas de NT-proBNP, para los 12 grupos de caninos sanos

analizados, se presentan como la media, desviación estándar y valores mínimos y máximos.

Ver Tabla 8 y Gráfico 8.

Tabla 8: Concentraciones séricas de NT-proBNP correspondientes a los 12 grupos incluidos en el ensayo.

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII

Media 211.0 315.3 192.7 214.0 259.9 215.3 269.5 342.5 361.0 247.0 207.1 289.2

DS 108.7 143.0 98.7 102.6 121.5 112.7 140.1 140.6 164.9 160.1 98.2 134.4

Mínimo 90.9 92.1 72.1 107.2 120.5 83.56 42.16 44.83 49.81 80.93 66.55 104.3

Máximo 467.4 575.9 395.9 403.4 466.1 461.8 492.9 552.7 603.7 587.7 333.5 553.2

Ref.: DS: Desviación estándar. Los valores son expresados en pmol/lts.

Gráfico 8. Diagrama de cajas para los 12 grupos incluidos en el ensayo. Abreviaturas: G = Canino talla grande con peso mayor a 25 kg; M = Canino talla mediana con peso entre 12 – 25 kg; P = Canino talla pequeña con peso menor a 12 kg; H = Canino sexo hembra; M = Canino sexo macho; J = Canino edad menor de 7 años y A = Canino edad mayor de 7 años. Se observan la homocedasticidad de varianzas (Levene’s Test p = 0.718) y la presencia de valores atípicos en algunos de los grupos.

GHA GHJ GMA GMJ MHA MHJ MMA MMJ PHA PHJ PMA PMJ

100

200

300

400

500

600

GRUPO

NT

prob

BN

P

77

80

150

158 87

GRUPO

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

54

La concentración media sérica para caninos de raza pura fue de 251.58 pmol/lts, con

una desviación estándar de +/- 136.19 pmol/lts y valores mínimo y máximo de 44.83 pmol/lts

y 603.71 pmol/lts. En tanto que, para caninos de raza indefinida y mestizos, la media sérica de

NT-proBNP fue de 266.78 pmol/lts, con una desviación estándar de +/- 136.09 pmol/lts y

valores mínimo y máximo de 42.16 pmol/lts y 575.89 pmol/lts. Ver Gráficos 9 y 10.

Plot of Means

res$RAZA

mea

n of

res$

NTpr

oBN

P

240

250

260

270

280

INDEFINIDA RAZA PURA

RAZA

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

PUROS INDEFINIDOS / MESTIZOS

Gráfico 9. Plot para comparación de medias de las concentraciones séricas de NT-proBNP entre caninos de razas puras y caninos mestizos o sin raza definida.

55

Análisis de correlaciones y significancia estadística

La concentración sérica de NT-proBNP, en la muestra de caninos sanos utilizados en

el presente trabajo de tesis, presentó diferencias estadísticamente significativas respecto al

sexo (p = 0.0392) y a la edad (p = 0.0124) como se aprecia en el Gráfico 11; pero no respecto

a la talla/peso del animal (p = 0.183), como se presenta en el Grafico 12, sobre la base de un

análisis de varianza individual.

INDEFINIDA RAZA PURA

100

200

300

400

500

600

RAZA

NTpr

oBNP

PUROS INDEFINIDOS / MESTIZOS

RAZA

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 10. Diagrama de cajas que muestran la ausencia de valores atípicos en ambos grupos y la homocedasticidad de varianzas. Se expone, tanto para caninos puros como caninos sin raza definida o mestizos, el valor de la mediada.

246.14 pmol/lts

220.56 pmol/lts

56

100 200 300 400 500 600

1020

3040

50

NTproBNP

PES

O

TALLA

GRANDE MEDIANOPEQUEÑA

Gráfico 12. Rectas de correlación, establecida para caninos de talla grande (> 25kg, identificados con círculos), talla mediana (12 – 25 kg, identificados con triángulos) y pequeña (< 12 kg, identificados con signo positivo), establecidas entre talla/peso y la concentración sérica de NT-proBNP. Condición corporal de los caninos 2.5 – 3.5 ( Escala 1 – 5).

CONCENTRACIÓN DE NT-proBNP

PESO

5 10 15

100

200

300

400

500

600

EDAD

NT

proB

NP

SEXO

HM

EDAD

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

Gráfico 11. Rectas de correlación, para machos (triángulos) y hembras (círculos), establecidas entre la edad y la concentración sérica de NT-proBNP.

57

El análisis de varianza para múltiples factores mostró que no se presentan diferencias

estadísticamente significativas para las combinaciones edad/sexo (p = 0.107), sexo/tamaño (p

= 0.189) y edad/sexo/tamaño (p = 0.765). Asimismo, si se presentaron diferencias

estadísticamente significativas entre edad/tamaño (p = 0.030). Ver Gráficos 13 y 14.

HM

EDAD

100 300 500

510

15

100

300

500 NTproBNP

5 10 15 10 20 30 40 50

1020

3040

50PESO

Gráfico 13. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, peso vivo, sexo y edad de los caninos analizados.

58

El análisis realizado muestra que, además de aumentar la concentración sérica de NT-

proBNP con la edad (caninos mayores de 7 años presentan concentraciones séricas,

estadísticamente significativas, más altas que caninos menores de 7 años) y el sexo (machos

presentan concentraciones séricas mayores que las hembras, siendo estas diferencias

estadísticamente significativas), la concentración sérica aumenta con la edad y el incremento

de la talla/peso, analizados como variables relacionadas.

GRANDE MEDIANOPEQUEÑA

EDAD

100 300 500

510

15

100

300

500 NTproBNP

5 10 15 10 20 30 40 50

1020

3040

50

PESO

Gráfico 14. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, talla, peso vivo y edad de los caninos analizados.

59

El análisis de varianza para los 12 grupos incluidos en el trabajo muestra diferencias

estadísticamente significativas (p = 0.0062). Las mismas se presentaron, puntualmente, entre

caninos machos menores de 7 años de más de 25 kg de peso y caninos machos mayores de 7

años de más de 25 kg de peso (p = 0.0412), como se aprecia en el Gráfico 15. En contraste,

entre el resto de los grupos evaluados a partir de un análisis múltiple de comparación de

medias (Tukey Contrasts), no se obtuvieron diferencias estadísticamente significativas (p >

0.05). Entre los caninos de razas puras versus los caninos sin raza definida y mestizos no se

presentaron diferencias estadísticamente significativas (p = 0.487).

5 10 15

100

200

300

400

500

600

EDAD

NT.

proB

NP

Gráfico 15. Diagrama de dispersión para la variable concentración sérica de NT-proBNP y edad en caninos machos mayores de 25 kg de peso vivo.

Con

cent

raci

ón d

e N

T-p

roB

NP

60

La escala cardiaca vertebral (VHS) no presentó diferencias estadísticamente

significativas respecto al estado reproductivo (castrados – enteros), el sexo (machos –

hembras), la edad (menores de 7 años – mayores de 7 años) y la talla/peso (pequeña –

mediana – grande), en la muestra de caninos analizados (p > 0.05). Ver Gráfico 17.

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció, en el presente ensayo, con la

escala cardíaca vertebral – VHS (p = 0.329), como se aprecia en el Gráfico 18.

Gráfico 17. Diagramas de cajas que muestran la distribución de la variable VHS respecto al estado reproductivo (A), el sexo (B), la talla (C) y la edad (D). No se presentaron diferencias significativas en el análisis de homogeneidad de varianzas (p > 0.05) en los grupos estudiados. NO: Enteros, SI: Castrados, H: Hembras, M: Machos.

GRANDE MEDIANO PEQUEÑA

8.0

8.5

9.0

9.5

10.0

11.0

TALLA

VH

S

148

< 7 años > 7 años

8.0

8.5

9.0

9.5

10.0

11.0

EDAD

VH

S

148

C D

NO SI

8.0

8.5

9.0

9.5

10.0

11.0

CASTRADA

VH

S

131

148

117

H M8.

08.

59.

09.

510

.011

.0SEXO

VH

S

A B

ESTADO REPRODUCTIVO SEXO

TALLA EDAD

61

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció con el diámetro diastólico del

ventrículo izquierdo (r = 0.070, p = 0.375) ni con el espesor de la pared libre del ventrículo

izquierdo al final de la diástole cameral (r = -0.034, p = 0.666), como puede apreciarse en los

diagramas A - A’ y C - C’, respectivamente, del Gráfico 19.

100 200 300 400 500 600

8.0

8.5

9.0

9.5

10.0

10.5

11.0

11.5

NTproBNP

VH

S

Gráfico 18. Diagrama de dispersión que muestra la falta de correlación entre la variable VHS y la concentración sérica de NT-proBNP en caninos sanos.

NT-proBNP

62

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció con la distancia septal al punto e

(EPSS) (r = 0.132, p = 0.095) ni con el espesor del septum interventricular en final de

diástole (r = 0.0296, p = 0.71), como puede apreciarse en los diagramas B – B’ y C - C’,

respectivamente, del Gráfico 20.

HM

DVIDias

100 300 500

2030

4050

100

300

500 NTproBNP

20 30 40 50 6 8 10 12 14

68

1012

14

PLVIDias

Gráfico 19. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, diámetro del ventrículo izquierdo en diástole (DVID) y espesor de la pared libre del ventrículo izquierdo en diástole (EPLVID).

A

A’

B

B’

C

C’

63

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció con el largo del ventrículo

izquierdo al final de la diástole (LVID) (r = 0.139, p = 0.081) ni con el volumen del

ventrículo izquierdo al final de la diástole (VVID) (r = 0.084, p = 0.289), como puede

apreciarse en los diagramas A – A’ y B - B’, respectivamente, del Gráfico 21.

HM

E.S

4 6 8 10 12 14

12

34

56

46

810

1214

ESIDias

1 2 3 4 5 6 100 300 500

100

300

500NTproBNP

Gráfico 20. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, distancia septal al punto e (EPSS) y espesor del septum interventricular en diástole (ESIVD).

A

A’

B

B’

C

C’

64

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció con la fracción de acortamiento

del ventrículo izquierdo (FA) (r = -0.0259, p = 0.745) ni con la fracción de eyección del

ventrículo izquierdo (FE) (r = -0.0211, p = 0.791), como puede apreciarse en los diagramas B

– B’ y C - C’, respectivamente, del Gráfico 22.

HM

LVID

100 300 500

34

56

78

100

300

500 NTproBNP

3 4 5 6 7 8 20 40 60 80

2040

6080

VolVID

Gráfico 21. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, largo del ventrículo izquierdo en diástole (LVID) y volumen diastólico final del ventrículo izquierdo (VVID).

A

A’ B

B’

C

C’

65

La concentración sérica de NT-proBNP no se asoció con la fracción de engrosamiento

de la pared libre del ventrículo izquierdo (FEPLVI) (r = 0.141, p = 0.076) ni con la fracción

de engrosamiento del septum interventricular (FESIV) (r = 0.134, p = 0.091), como puede

apreciarse en los diagramas B – B’ y C - C’, respectivamente, del Gráfico 23.

HM

FA

20 30 40 50 60 70

2535

45

2030

4050

6070

FE

25 35 45 100 300 500

100

300

500NTproBNP

Gráfico 22. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, fracción de acortamiento del ventrículo izquierdo (FA) y fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FE).

B

B’

C

C’

A

A’

66

Gráfico 23. Diagrama de matriz de dispersión que asocia las variables concentración sérica de NT-proBNP, fracción de engrosamiento de la pared libre del ventrículo izquierdo (FEPLVI) y la fracción de engrosamiento del septum interventricular (FESIV).

HM

F.E.PVI

20 30 40 50

1020

3040

50

2030

4050 F.E.SIV

10 20 30 40 50 100 300 500

100

300

500NTproBNP

A

A’

B

B’

C

C’

67

DISCUSIÓN

En el presente trabajo de tesis doctoral, la concentración sérica de la fracción amino

terminar del péptido natriurético tipo B (NT-proBNP) fue determinada en una población de

159 caninos adultos sanos, utilizando procedimientos pre-establecidos bajo estrictos criterios

de inclusión y exclusión con la finalidad de minimizar las causas de variaciones previas a la

determinación, no asociadas a las variables en análisis.

A pesar de estas precauciones, la concentración sérica de NT-proBNP presentó un

coeficiente de variación de 52%, de forma similar a lo observado por otros investigadores en

su población de caninos controles sanos, pero con un número muestral inferior a 30 animales

(32, 38, 91, 79, 165). El rango más amplio en la variación de la concentración sérica de NT-

proBNP se observó en la población de caninos mayores de 25 kg de peso, sobre todo en los

machos, en los cuales, además, se observaron diferencias significativas asociadas a sexo/talla.

Estos hallazgos muestran que la variabilidad observada no está asociada a la talla o peso del

animal.

La concentración sérica media observada en la muestra analizada fue similar a las

observadas por otros investigadores (142, 170, 179, 183). Por su parte, los valores máximos

hallados no se corresponden con valores de corte establecidos por algunas marcas comerciales

alternativas no empleadas en este trabajo. En este sentido, el 58% de los caninos sanos

analizados tuvieron una concentración sérica media de NT-proBNP superior a 210 pmol/lts

(valor de corte del Test ELISA comercialmente provisto por VetSign Canine CardioScreen,

Guildhay) y un 9 % presentaron un valor superior a 445 pmol/lts (valor de corte del Test

ELISA comercialmente provisto por IDEXX). Sin embargo, el valor máximo hallado en este

trabajo fue similar al observado por otros investigadores (142).

68

La concentración sérica de NT-proBNP presentó diferencias estadísticamente

significativas asociadas al sexo y a la edad, de manera similar a estudios multicéntricos

realizados en humanos, por otros investigadores, en poblaciones muestrales que contaron con

entre 2.000 y 5.000 pacientes (94, 108, 151, 153). A diferencia de estos trabajos y de otras

investigaciones recientes en caninos (128, 192), donde la concentración sérica y/o plasmática,

tanto de C-BNP como de NT-proBNP, se presentó más elevada en las mujeres y en las

hembras caninas respectivamente; en este ensayo, son los machos caninos los que muestran

una concentración sérica de NT-proBNP más alta que las hembras. Asimismo, en ambas

especies, es la población de adultos gerontes y caninos mayores de 7 (siete) años, los que

mostraron concentraciones de NT-proBNP más elevadas que los pacientes jóvenes, al igual

que en el presente estudio. A pesar de esta similitud y de observarse diferencias

estadísticamente significativas como las expuestas, las mismas no representan la magnitud

observada en pacientes humanos en los cuales se evidencian variaciones entre dos y tres veces

en la concentración de los péptidos natriuréticos a favor de los adultos gerontes respecto a las

poblaciones jóvenes. En este estudio solo se demostró un aumento del 30% en la

concentración, a favor de los caninos mayores de 7 años. En investigaciones realizadas por,

Misbach et al 2013 sobre 154 caninos sanos de raza pura y talla pequeña (menores de 12 kg

de peso), se observó ausencia de diferencias significativas asociadas a la edad. Este hallazgo

no concordante con los resultados obtenidos aquí, podría asociarse a que los animales adultos

en ese ensayo, no presentaron una edad mayor de 8 años, en comparación con una edad media

adulta de 9.75 años (rango 7.2 a 16 años) muestreada en este estudio. Esta última afirmación,

es sostenida, además, por Wess et al. 2011 cuando demostró que en caninos de la raza

Doberman Pinscher sanos la concentración de NT-proBNP incrementaba significativamente

cuando superaban los 8 años. A pesar de estas observaciones, los resultados presentados en

69

distintas investigaciones, tanto en el grupo control de caninos sanos como en el de enfermos

cardíacos, respecto a las variables constitutivas de sexo y edad, muestran resultados diversos.

Un importante número de trabajos no observan diferencias significativas asociadas a estas

variables tanto en caninos de raza pura (183) como en animales mestizos o sin raza definida

(22, 53, 142), a pesar de observar una tendencia a presentarse mas incrementada en la

población de adultos gerontes (42, 52). Por su parte, considero que las diferencias

estadísticamente significativas observadas en este trabajo, como en otros con hallazgos

similares, se corresponden con un muestreo homogéneo tanto en las características

constitutivas de los animales analizados como en el tamaño de cada uno de los grupos.

El peso corporal y la talla del animal no se asociaron a variaciones en la concentración

sérica de NT-proBNP en los caninos sanos analizados, a pesar de presentarse diferencias entre

las medias de los grupos estudiados (< 12kg / 12-25 kg = 46.07 pmol/lts; 12-25 kg / > 25 kg =

18.64 pmol/lts; < 12 kg / > 25 kg = 27.43 pmol/lts). Todos los animales analizados

presentaban una condición corporal entre 2.5 a 3.5, score que se consideró como pre-requisito

en la selección de los caninos utilizados en este ensayo. Sin embargo, esta situación puede

entenderse como una limitación, ya que no permite evaluar si la concentración de NT-

proBNP, en una población de caninos sanos que tenga una condición corporal enmarcada en

un rango más amplio, presentará variaciones estadísticamente significativas asociadas al

efecto de la grasa corporal, como se ha observado en otras investigaciones tanto en caninos

como en felinos (183, 192).

La concentración sérica de NT-proBNP no se correlacionó con el tamaño cardíaco

vertebral en los distintos grupos de animales estudiados (p = 0.329). Estos resultados

colaboran con hallazgos presentados por otros investigadores que evidencian una correlación

positiva, entre ambas variables, en pacientes que presentan tanto patologías cardíacas

70

congénitas (77) como adquiridas (110, 142) y anula el sesgo que pudiese originarse a partir

del efecto peso / talla corporal en los grupos controles sanos utilizados. Asimismo, es

importante señalar que los caninos utilizados en el presente estudio presentaban una condición

corporal entre 2.5 a 3.5, en los cuales la talla guardó una correlación positiva con el peso

corporal en los animales seleccionados (r = 0.87; r2 = 0.76). Una limitante que presentó este

ensayo es que la asociación entre NT-proBNP y el tamaño cardíaco vertebral no fue estudiada

sobre la base de la conformación torácica, dependiente de las características raciales de los

caninos, situación de análisis que requiere futuras investigaciones.

Las variables ecocardiográficas asociadas al tamaño cardíaco ventricular (DVID,

SIVD, PLVID, EPSS, VVID y LVID) no se correlacionaron con las concentraciones séricas

de NT-proBNP en los caninos sanos estudiados. Estos hallazgos permiten afirmar, desde la

base de que los miocitos ventriculares son los que en forma prioritaria sintetizan y liberan el

péptido natriurético tipo B (100, 146), que la masa ventricular de pacientes sanos no es

responsable de una mayor concentración sérica. En este sentido, es razonable sostener que una

mayor producción de NT-proBNP es esperable en masas ventriculares mayores como las

observadas en caninos de mayor talla o peso corporal, pero que la misma experimenta, como

es lógico, un efecto de dilución al presentar estos pacientes una mayor volemia o volumen de

distribución. Y, por último, concuerdan con los hallazgos observados por otros investigadores

en la afirmación de que son las alteraciones que se generan a consecuencia de patologías

cardíacas, las que modifican tanto las cámaras como las paredes cardíacas, siendo las

responsables de las variaciones analizadas en la concentración sérica de los NP (21, 22, 32,

53, 80, 142, 192).

71

CONCLUSIONES FINALES

Los resultados observados en este trabajo de tesis muestran que

• La concentración de NT-proBNP en caninos sanos muestra variaciones

asociadas al sexo, considerándose mayor en los machos.

• La concentración de NT-proBNP en caninos sanos muestra variaciones

asociadas a la edad, considerándose mayor en los animales de más de 7 años.

• Ambas variables deben ser consideradas al realizar la interpretación de la

concentración de NT-proBNP tanto en pacientes sanos como enfermos, pero

que requiere de un mayor número de trabajos para determinar los factores de

ajuste.

• La concentración sérica de NT-proBNP en caninos sanos presentó una media

de 260.28 pmol/lts con una desviación estándar de +/-135.48 pmol/lts y

valores mínimo de 42.16 pmol/lts y máximo de 603.71 pmol/lts (ELISA -

Marca USCN® Life Science Inc. – Catálogo: E90485Ca – Canis familiaris:

Canine / Dog).

• La concentración sérica de NT-proBNP en caninos sanos, considerando la

talla, el peso, así como el tamaño cardíaco vertebral (VHS) y las variables

ecocardiográficas, que se relacionan con las dimensiones cardíacas, no

muestran asociación.

72

BIBLIOGRAFÍA

1. Abdulle AM, Nagelkerke NJ, Adem A, et al. Plasma N-terminal pro-brain natriuretic

peptide levels and its determinants in a multi-racial population. J Hum Hyperten

2007;21:647-653.

2. Almeida FA, Suzuki M, Scarborough RM, et al. Clearance function of type C receptors of

atrial natriuretic peptide factor in rats. Am J Physiol 1989;256:469-475.

3. Anwaruddin S, Lloyd-Jones DM, Baggish A, et al. Renal function, congestive heart

failure, and amino-terminal pro-brain natriuretic peptide measurement. J Am Coll Cardiol

2006;47(1):91-97.

4. Arias D, Tórtora M, Cruz A, et al. Ecocardiografía Doppler color y evaluación del grado

de insuficiencia mitral canina. Analecta Veterinaria 2004;24(1):21-24.

5. Asano K, Kadosawa T, Okumura M, Fujinaga T. Peri-operative Changes in

Echocardiography Measurements and Plasma Atrial and Brain Natriuretic Peptide

Concentrations in 3 Dogs with Patents Ductus Arteriosus. J Vet Cardiol Sci 1998;61:89-

91.

6. Asano K, Masuda K, Okumura M, et al. Plasma atrial and brain natriuretic peptide levels

in dogs with congestive heart failure. J Vet Med Sci 1999;61:523-529.

7. Asano K, Murakami M, Endo D, et al. Complementary DNA cloting, tissue distribution,

and synthesis of canine brain natriuretic peptide. Am J Vet Res 1999;60:860-864.

8. Bartolomeo M, Graciano A. Bases de la ecocardiografía Doppler y sus aplicaciones

prácticas. Selecciones Veterinarias 2006;14(1):31-34.

73

9. Baumwart RD, Meurs KM. Assessment of plasma brain natriuretic peptide concentration

in Boxers with arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy. Am J Vet Res

2005;66:2086-2089.

10. Bayes-Genis A, De Filippi C, Januzzi Jr JL. Understanding amino-terminal pro-B-type

natriuretci peptide in obesity. Am J Cardiol 2008;101:89-94.

11. Bayón A, Fernández del Palacio MJ, Montes A, et al. Aspectos ecocardiográficos

normales en perros Beagle y Mastín Español en crecimiento. Anales Veterinarios 1994;9-

10:3-15.

12. Berger R, Huelsman M, Strecker K, et al. B-type natriuretic peptide predicts sudden death

in patients with chronic heart failure. Circulation 2002;105:2392-2397.

13. Biondo AW, Ehrhart EJ, Sisson DD, et al. Immunohistochemitry of atrial and brain

natriuretic peptides in control cats and cats with hypertrophy cardiomyopathy. Vet Pathol

2003;40:501-506.

14. Biondo AW, Liu ZL, Wiedmeyer CE, et al. Genomic sequence and cardiac expression of

atrial natriuretic peptide in cats. Am J Vet Res 2002;63:236-240.

15. Blixen K. Tejido Muscular. En: Geneser F. Histología. 2 ed. México: Panamericana;

1993. p. 256-259.

16. Blonde L, Wehmann RE, Steiner AL. Plasma clearance rates and renal clearance of 3H-

labeled cyclic AMP and 3H-labeled cyclic GMP in the dog. J Clin Invest 1974;53:163-

172.

17. Boerrigter G, Burnett JC Jr. Recent advances in natriuretic peptides in congestive heart

failure. Expert Opin Investig Drugs 2004;13:643-652.

74

18. Boerrigter G, Costello-Boerrigter LC, Harty GJ, et al. Des-serine-proline brain natriuretic

peptide 3-32 in cardiorenal regulation. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol

2007;292:897-901.

19. Book WM, Hott BJ, McConnell M. B-Type Natriuretic Peptide Levels in Adults with

Congenital Heart Disease and Right Ventricular Failure. Am J Cardiol 2005;95:545-546.

20. Boon JA. Manual of Veterinary Echocardiography. Iowa: Blackwell Publishing; 2006.

21. Boswood A, Attree S, Page K. Clinical validation of a proANP 31-67 fragment ELISA in

the diagnosis of heart failure in the dog. J Small Anim Pract 2003;44:104-108.

22. Boswood A, Dukes-MacEwan J, Loureiro J, et al. The diagnostic accuracy of different

natriuretic peptide in the investigation of canine cardiac disease. J Small Anim Pract

2008;49:26-32.

23. Brandt I, Lambeir AM, Ketelslegers JM, et al. Dipeptidyl-peptidase IV converts intact B-

type natriuretic peptide into its des-serine form. Clin Chem 2006;52:82-87.

24. Braunwald E. Biomarkers in heart failure. N Engl J Med 2008;358:2148-2159.

25. Bucley MG, Marcus NJ, Yacoub MH. Cardiac peptide stability, aprotinin and room

temperature: Importance for assessing cardiac function in clinical practice. Cli Sci

1999;97:689-695.

26. Canaff L, Brechler V, Reudelhuber TL, et al. Secretory granule targeting of atrial

natriuretic peptide correlates with its calcium-mediated aggregation. Proc Nat Acad Sci

Unit Sta Am 1996;93:9483-9487.

27. Cataliotti A, Schirger JA, Martin FL, et al. Oral human brain natriuretic peptide actives

cyclic guanosine 3´5´-monophosphate and decreases mean arterial pressure. Circulation

2005;112:836-840.

75

28. Chen HH, Grantham JA, Chirger JA, et al. Subcutaneous administration of brain

natriuretic peptide in experimental heart failure. J Am Coll Cardiol 2000;36:1706-1712.

29. Chen HH, Huntley BK, Schirger JA, et al. Maximizing the renal cyclic 3´5´-guanosine

monophosphate system with type V phosphodiesterase inhibition and exogenous

natriuretic peptide: A novel strategy to improve renal function in experimental overt heart

failure. J Am Soc Nephrol 2006;17(10):2742-2747.

30. Chen HH, Schirger JA, Cataliotti A, Burnett Jr JC. Intact acute cardiorenal and humoral

responsiveness following chronic subcutaneous administration of the cardiac peptide BNP

in experimental heart failure. Eur J Heart Fail 2006;8:681-686.

31. Chetboul V, Tessier-Vetzel D, Escriou C, et al. Diagnostic potential of natriuretic peptides

in the occult phase of Golden retriever muscular dystrophy cardiomyopathy. J Vet Intern

Med 2004;18:845-850.

32. Chetboul V, Serres F, Tissier R, et al. Association of plasma N-terminal pro-B-type

natriuretic peptide concentration with mitral regurgitation severity and outcome in dogs

with asymptomatic degenerative mitral valve disease. J Vet Intern Med 2009;23:984-994.

33. Clavell A, Stingo A, Wei CM, et al. C-type natriuretic peptide: a selective cardiovascular

peptide. Am J Physiol Reg Integrative Comp Physiol 1993;264:290-295.

34. Colucci WS, Elkayam U, Horton DP, et al. Intravenous nesiritide, a natriuretic peptide, in

the treatment of descompensated congestive heart failuire. N Engl J Med 2000;343:246-

253.

35. Connolly DJ, Soares Magalhaes RJ, Syme HM, et al. Circulating Natriuretic Peptides in

Cats with Heart Disease. J Vet Intern Med 2008;22:96-105.

36. Cornell CC, Kittleson MD, Della Torre P, et al. Allometric Scaling of M-Mode Cardiac

Measurements in Normal Adults Dogs. J Vet Intern Med 2004;18:311-321.

76

37. Coto CE. Curso de Introducción al conocimiento científico experimental de las ciencias

naturales. Química Viva 2008;5:23-29.

38. Cunningham SM, Rush JE, Freeman LM. Systemic inflammation and endothelial

dysfunction in dogs with congestive heart failure. J Vet Intern Med 2012;26:547-557.

39. De Bold AJ, Borenstein HB, Veress AT, Sonnenberg H. A rapid and potent natriuretic

response to intravenosus injection of atrial myocardial extracts in rats. Life Science

1981;28:89-94.

40. De Bold AJ. Tissue fractionation studies on the relationship between an atrial natriuretic

factor and specific atrial granules. Can J Physiol Pharm 1982;60:324-330.

41. De Filippi C, Can Kimmenade RR, Pinto YM. Amino-terminal pro-B-type natriuretic

peptide testing in renal disease. Am J Cardiol 2008;101:82-88.

42. De Francesco TC, Rush JE, Rozanski EA, et al. Prospective Clinical Evaluaction of an

ELISA B-Type Natriuretic Peptide Assay in the Diagnosis of Congestive Heart Failure in

Dogs Presenting with Cough or Dyspnea. J Vet Intern Med 2007;21:243-250.

43. De Simone DH. Examen Radiográfico. En: Belerenian G, Mucha CJ, Camacho AA y

Manubens Grau J. Afecciones Cardiovasculares en Pequeños Animales. 2 ed. Buenos

Aires: Intermédica; 2007. p. 67-75.

44. Desmarás E, Babusci M, López E. Fisiología Cardiovascular. En: Lightowler CH. Manual

de Cardiología del Caballo. Buenos Aires: Chinfield; 2006. p. 17-47.

45. Detweiler DK, Patterson DF. The prevalence and types of cardiovascular disease in dogs.

Ann New York Acad Sci 1965;127:481-516.

46. Detweiler DK, Luginbühl H, Buchanan JW, Patterson DF. The natural history of acquired

cardiac disability of the dog. Ann New York Acad Sci 1968;147:318-329.

77

47. Diez M, Nguyen P. Obesity: epidemiology pathophysiology and management of the obese

dog. En: Pibot P, Biourge V, Elliot D. Encyclopedia of Canine Clinical Nutrition. Paris:

Aniwa SAS; 2006. p. 21-24.

48. Doust JA, Glasziou PP, Pietrzak E, et al. A systematic review of the diagnostic accuracy

of natriuretic peptides for heart failure. Arch Intern Med 2004;164:1978-1984.

49. Doust JA, Pietrzak E, Dobson A, et al. How well does B-type natriuretic peptide predict

death and cardiac events in patients with heart failure. Systematic Review 2005;330:625-

633.

50. Duncan & Prasse’s. Patología Clínica Veterinaria. Latimer KS, Mahaffey EA, Prasse KW.

4 ed. Barcelona: Multimedia Ediciones Veterinarias; 2005.

51. Dyce KM, Sack WO, Wensing CJ. Anatomía Veterinaria. 2 ed. Philadelphia,

Pennsylvania, USA: McGraw-Hill Interamericana; 1999.

52. Eriksson AS, Jarvinen AK, Eklund KK, et al. Effect of age and body weight on

neurohumoral variables in healthy Cavalier King Charles Spaniels. Am J Vet Res

2001;62:1818-1824.

53. Ettinger SJ, Farace G, Forney SD, et al. Evaluation of plasma N-terminal pro-B-type

natriuretic peptide concentrations in dogs with and without cardiac disease. J Am Vet Med

Assoc 2012;240:171-180.

54. Falk T, Jonsson L. Ischaemic heart disease in the dog: a review of 65 cases. J Small Anim

Prac 2000;41:97-103.

55. Feldman EC, Nelson RW. Endocrinología y Reproducción en Perros y Gatos. 2 ed.

Philadelphia, Pennsylvania, USA: McGraw-Hill Interamericana; 2000.

78

56. Ferraris SR. Ecocardiografía. En: Belerenian G, Mucha CJ, Camacho AA, Manubens

Grau J. Afecciones Cardiovasculares en Pequeños Animales. 2 ed. Buenos Aires:

Intermédica; 2007. p. 129-177.

57. Fine DM, Declue AE, Reinero CR. Evaluation of circulating amino terminal-pro-B-type

natriuretic peptide concentration in dogs with respiratory distress attributable to

congestive heart failure or primary pulmonary disease. J Am Vet Med Assoc

2008;232:1674-1679.

58. Fontana M, Zyw L, Poletti R, et al. Improved early diagnosis of heart failure with B-type

natriuretic peptides: comparison between BNP and Nt-proBNP diagnostic accuracy. Eur J

Heart Fail 2007;6,14.

59. Forfia PR, Lee M, Tunin RS, et al. Acute phosphodiesterase 5 inhibition mimics

hemodynamic effects of B-type natriuretic peptide and potentiates B-tipe natriuretic

peptide effects in failing but not normal canine heart. J Am Coll Cardiol 2007;49:1079-

1088.

60. Fox PR, Oyama MA, MacDonald K, et al. Comparison of Nt-proBNP concentration in

cats with acute dyspnea from cardiac or respiratory disease. J Vet Intern Med

2008;22:719-724.

61. Fox PR, Oyama MA, Reynolds C, et al. Utility of plasma N-terminal pro-brain natriuretic

peptide (NT-proBNP) to distinguish between congestive heart failure and non-cardiac

causes of acute dyspnea in cats. J Vet Cardiol 2009;11:51-61.

62. Ghoshal NG. Corazón y arterias de los carnivoros. En: Getty R, Sisson S, Grossman JD.

Anatomía de los animales domésticos. 5 ed. Buenos Aires: Salvat; 1982. p.1746-1750.

63. Giuliani I, Rieunier F, Larue C, et al. Assay for measurement of intact B-type natriuretic

peptide prohormona in blood. Clin Chem 2006;52:1054-1061.

79

64. Goetze JP, Kastrup J, Rehfeld JF. The paradox of increaser natriuretic hormones in

congestive heart failure patients: does the endocrine heart also fail in heart failure. Eur

Heart J 2003;24:1471-1472.

65. Goetze JP, Rehfeld JF, Videbaek R, et al. B-type natriuretic peptide and its precursor in

cardiac venous blood from failing hearts. Eur J Heart Fail 2005;7:69-74.

66. Goetze JP. Biochemistry of pro-B-type natriuretic peptide-derived peptides: the endocrine

heart revisited. Clin Chem 2004;50:1503-1510.

67. Gompf RE. Soplo Cardíaco. En: Ford RB. Signos clínicos y diagnóstico en pequeños

animales. Buenos Aires: Médica Panamericana; 1992. p. 141-158.

68. Graham JP. Diagnóstico por imágenes en caninos y felinos. Clinical Handbook Series. St.

Louis, Missouri: The Gloyd Group. Inc.; 2002. p. 61-109.

69. Greco DS, Biller B, Van Liew CH. Measurement of plasma atrial natriuretic peptide as an

indicator of prognosis in dogs with cardiac disease. Can Vet J 2003;44:293-297.

70. Gurfinkel EP, Barra JG, Duronto E, et al. Valor del BNP y de la Proteína C Reactiva en

el diagnóstico diferencial entre angina primaria y secundaria por hipertensión arterial.

Revista Argentina de Cardiología 2006;74:268-275.

71. Guyton AC, Hall JE. Tratado de Fisiología Médica. 11 ed. España: Elseiver Saunders;

2006.

72. Häggström J, Hansson K, Karlberg BE, et al. Plasma concentration of atrial natriuretic

peptide in relation to severity of mitral regurgitation in Cavalier King Charles Spaniels.

Am J Vet Res 1994;55:698-703.

73. Häggström J, Hansson K, Kvart C, et al. Effects of naturally acquired decompensated

mitral valve regurgitation on the rennin-angiotensin-aldosterone system and atrial

natriuretic peptide concentration in dogs. Am J Vet Res 1997;58:77-82.

80

74. Häggström J, Hansson K, Kvart C, et al. Relationship between different natriuretic peptide

and severity of naturally acquired mitral regurgitation in dogs with chronic myxomatous

mitral valve disease. J Vet Cardiol 2000;2:7-16.

75. Häggström J, Meadows J, Olsen LH, et al. Results from the canine LUPA project.

Proceedings of the 22th ECVIM-CA Congress. 2012. p. 149-152.

76. Hansson K, Häggström J, Kvart C, Lord P. Left atrial to aortic root indices using two-

dimensional and M-Mode echocardiography in Cavalier King Charles Spaniels with and

without left atrial enlargement. Vet Radiol 2002;43(6):568-575.

77. Hariu CD, Saunders AB, Gordon SG, et al. Utility of N-terminal pro-brain natriurético

peptide for assessing hemodynamic significance of patent ductus arteriosus in dogs

undergoing ductalk repair. J Vet Cardiol 2013;15:197-204.

78. Harvey W. Aparato Circulatorio. En: Geneser F. Histología. 2 ed. Buenos Aires: Médica

Panamericana; 1993. p. 323-327.

79. Hezzell MJ, Boswood A, Chang YM, et al. The combined prognostic potential of serum

high-sensitivity cardiac troponin I and N-terminal pro-B-type natriureic peptide

concentrations in dogs with degenerative mitral valve disease. J Vet Intern Med

2012;26:302-311.

80. Hinderliter AL, Blumenthal JA, O’Conner C, et al. Independent prognostic value of

echocardiography and N-terminal pro-Btype natriuretic peptide in patients with heart

failure. Am Heart J 2008;156(6):1191-1195.

81. Hogenhuis J, Voors AA, Jaarsma T, et al. Anemia and renal dysfunction are

independently associated with BNP and Nt-proBNP levels in patients with heart failure.

Eur J Heart Fail 2007;9:787-794.

81

82. Holtwick R, Gotthardt M, Skrybin B, et al. Smooth muscle-selective deletion of guanylyl

cyclase-A prevents the acute but not chronic effects of ANP on blood pressure. Proc Natl

Acad Sci 2002;99:7142-7147.

83. Hooper JD, Scarman AL, Clarke BE, et al. Localization of the mosaic transmembrane

serine protease corin to heart myocytes. Eur J Biochem 2000;267;6931-6937.

84. Hori Y, Katou TA, Ono Y, et al. Evaluation of NT-proBNP and CT-ANP as Markers of

Concentric Hypertrophy in Dogs with a Model of Compensated Aortic Stenosis. J Vet

Intern Med 2008;22:1118-1123.

85. Hori Y, Tsubaki M, Katou A, et al. Evaluation of Nt-proBNP and CT-ANP as Markers of

concentric hypertrophy in dogs with a model of compensated aortic stenosis. J Vet Intern

Med 2008;22:1118-1123.

86. Hori Y, Yamano S, Iwanaga K, et al. Evaluation of plasma C-terminal atrial natriuretic

peptide in healthy cats and cats with heart disease. J Vet Intern Med 2008;22:135-139.

87. Issac Dl. Biomarkers in heart failure management. Curr Opin Cardiol 2008;23:127-133.

88. Iwanaga Y, Nishi I, Furuichi S, et al. B-type natriuretic peptide strongly reflects diastolic

wall stress in patients with chronic heart failure: comparison between systolic and

diastolic heart failure. J Am Coll Cardiol 2006;47:742-748.

89. Jourdain P, Jondeau G, Funck F, et al. Plasma brain natriuretic peptide-guide therapy to

improve outcome in heart failure: the STARS BNP Multicenter Study. J Am Coll Cardiol

2007;49:1733-1739.

90. Kaneco J, Harvey W, Bruss M. Clinical Biochimestry of Domestic Animals. 5 ed.

California: Academic Press; 1997. p. 932.

91. Kellihan HB, Oyama MA, Reynolds CA, Stepien RL. Weekly variability of plasma and

serum Nt-proBNP measurements in normal dogs. J Vet Cardiol 2009;11:96-97.

82

92. Kenny AJ, Bourne A, Ingram J. Hydrolysis of human and pig brain natriuretic peptides,

urodilatin, C-type natriuretic peptide and some C-receptor ligands by endopetidase-24-11.

Biochem 1993;291:83-88.

93. Kjelgaard-Hansen M, Kristensen AT, Jensen AL. Evaluation of a Commercially Available

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Determination of C-Reactive

protein in Canine Serum. J Vet Med 2003;50:164-168.

94. Koch AM, Rauh M, Zinc S, et al. Decreasing ratio of plasma N-terminal pro-B-type

natriuretic peptide and B-type natriuretic peptide according to age. Acta Paediatr

2006;95:805-809.

95. Kogure K. Pathology of Chronic Mitral Valvular Disease in the Dogs. J Jap Vet Sci

1980;42:323-335.

96. Koller K, Goeddel D. Molecular biology of the natriuretic peptide and their receptors.

Circulation 1992;86:1081-1088.

97. Koller KJ, Lowe DG, Bennett GI, et al. Selective activation of the B natriuretic peptide

receptor by C-type natriuretic peptide (CNP). Sciencie 1991;252:120-123.

98. Kuhn M. Molecular physiology of natriuretic peptide signaling. Basic Res Cardiol

2004;99:76-82.

99. Kuhn M. Structure, regulation, and function of mammalian membrane guanylyl cyclase

receptors, with a focus on guanylyl cyclase-A. Circ Res 2003;93:700-709.

100. Lainchbury JG, Burnnett JC Jr, Meyer D, et al. Effects of natriuretic peptides on load

and myocardial function in normal and heart failure dogs. Am J Physiol Heart Circ

Physiol 2000;278:33-40.

101. Levin ER, Gardner DG, Samson WK. Natriuretic Peptides. New Eng J Med

1998;339:321-328.

83

102. Leya FS, Arab D, Joyal D, et al. The efficacy of brain natriuretic peptide levels in

differentiating constrictive pericarditis from restrictive cardiomyopathy. J Am Coll

Cardiol 2005;45:1900-1902.

103. Liang F, O´Rear J, Schellenberger U, et al. Evidence for functional heterogeneity of

circulating B-type natriuretic peptide. J Am Coll Cardiol 2007;49:1071-1078.

104. Liang F, Wu J, Garami M, et al. Mechanical strain increases expression of the Brain

Natriuretic Peptide in rat cardiac myocytes. J Biol Chem 1997;272(44):28050-28056.

105. Lightowler CH. Manual de Cardiología del Caballo. Buenos Aires: Chinfield; 2006.

106. Lisy O, Redfield MM, Schirger JA, Burnett JC. Atrial BNP endocrine function during

chronic unloading of the normal canine heart. Am J Physiol Regul Integ Com Physiol

2005;288:158-162.

107. Liu ZL, Wiedmeyer CE, Sisson DD, Solter PF. Cloning and characterization of feline

brain natriuretic peptide. Gene 2002;292:183-190.

108. Loke I, Squire JB, Davies JE, et al. Reference ranges for natriurético peptides for

diagnostic use are depended to age, gender and heart rate. Eur J Heart Fail 2003;5:599-

606.

109. Lopez EF. Fisiología cardiovascular en pequeños animales. En: Belerenian G, Mucha

CJ, Camacho AA y Manubens Grau J. Afecciones Cardiovasculares en Pequeños

Animales. 2 ed. Buenos Aires: Intermédica; 2007. p. 18-21.

110. Lord PF, Hansson K, Carnabuci C, et al. Radiographic heart size and its rate of increase

as tests for Honest of congestive heart failure in Cavalier King Charles Spaniels with

mitral valve regurgitation. J Vet Cardiol 2012;14:193-202.

84

111. Luchner A, Hengstenberg C, Lowel H, et al. Effect of compensated renal dysfunction on

approved heart failure markers: direct comparison of brain natriuretic peptide (BNP) and

N-terminal pro-BNP. Hypertension 2005;46:118-123.

112. Luchner A, Muders F, Dietl O, et al. Differential expression of cardiac ANP and BNP in

a rabbit model of progressive left ventricular dysfunction. Cardiovasc Res 2001;51:601-

607.

113. Luchner A, Stevens TL, Borgeson DD, et al. Differential atrial and ventricular

expression of myocardial BNP during evolution of heart failure. Am J Physiol Heart

Circle Physiol 1998;274:1684-1689.

114. Luginbühl H, Detweiler DK. Cardiovascular lesions in dogs. An New York Acad Sci

1965;127:517-540.

115. Ma KK, Banas K, de Bolt AJ. Determinants of inducible brain natriuretic peptide

promoter activity. Regul Pept 2005;128:169-176.

116. Maack T, Suzuki M, Almeida FA, et al. Physiological role of silent receptors of atrial

natriurético factor. Science 1987;238:675-678.

117. Maack T. The broad homeostatic role of natriuretic peptides. Arquivos brasileiros de

endocrinología e metabología. 2006;50:198-207.

118. MacDonald KA, Kittleson MD, Munro C, et al. Brain natriuretic peptide concentration

in dogs with heart disease and congestive heart failure. J Vet Intern Med 2003;17:172-

177.

119. MacLean HN, Abbott JA, Ward DL, et al. N-terminal atrial natriuretic peptide

immunoreactivity in plasma of cats with hypertrophic cardiomyopathy. J Vet Intern Med

2006;20:284-289.

85

120. Maeda K, Tsutamoto T, Wada A, et al. Insufficient secretion of atrial natriuretic peptide

at acute phase of myocardial infarction. J Appl Physiol 2000;89:458-464.

121. Magga J, Vuolteenabo O, Tokola H, et al. Involvement of transcriptional and

posttranscriptional mechanisms in cardiac overload-induced increase of B-type natriuretic

peptide gene expression. Circ Res 1997;81:694-702.

122. Mäntymaa P, Vuolteenaho O, Marttila M, et al. Atrial stretch induces rapad increase in

brain natriuretic peptide but not in atrial natriuretic peptide gene expression in vitro.

Endocrinology 1993;133(3):1470-1473.

123. Mark PB, Stewart GA, Gansevoort RT, et al. Diagnostic potential of circulating

natriuretic peptides in chronic kidney disease. Nephrol Dial Transplant 2006;21:402-410.

124. Martin M. ECG en Pequeños Animales. Buenos Aires: Intermédica; 2001.

125. McDowell G, Patterson C, Maguire S, et al. Variability of NT-proANP and C-ANP. Eur

J Clin Invest 2002;32:545-548.

126. McGrath MF, de Bold ML, de Bold AJ. The endocrine function of the heart. Trends

Endocrinol Metab 2005;16:469-477.

127. Millar SM, Tilley LP, Detweiler DK. Electrofisiología del corazón. En: Swenson MJ,

Reece WO. Fisiología de los animales domésticos de Dukes. 5 ed. California: Limusa;

1999. p. 105-144.

128. Misbach C, Chetboul V, Concordet D, et al. Basal plasma concentrations of N-terminal

pro-B-type natriuretic peptide in clinically healtly adult small size dogs: Effect of body

weight, age, gender and breed, and reference intervals. Res Vet Sci 2013;95:879-885.

129. Miyagawa Y, Tominaga N, Toda N, Takemura N. Relationship between glomerular

filtration rate and plasma N-terminal pro B-type natriurétic peptide concentrations in dogs

with chronic kidney disease. Vet J 2013;197:445-450.

86

130. Mlezid´Eril G, Tagnochetti T, Nauti A, et al. Biological variation of N-terminal pro-

brain natriuretic peptide in healthy individuals. Clin Chem 2003;49:1554-1555.

131. Moe GW, Grima EA, Wong NL, et al. Plasma and cardiac tissue atrial and brain

natriuretic peptides in experimental heart failure. J Am Coll Cardiol 1996;27:720-727.

132. Moro C, Berlan M. Cardiovascular and metabolic effects of natriuretic peptides.

Fundam Clin Pharmacol 2006;20:41-49.

133. Mueller C, Breidthardr T, Laule-Kilian K, et al. The integration of BNP and Nt-proBNP

into clinical medicine. Swiss Med Whly 2007;134:4-12.

134. Mueller C, Laule-Kilian K, Scholer A, et al. B-type natriuretic peptide for acute dyspnea

in patients with kidney disease: Insights from a randomized comparison. Kidney Internal

2005;67:278-284.

135. Mukoyama M, Nakao K, Hosoda K, et al. Brain natriuretic peptide as a novel cardiac

hormone in humans: evidence for an exquisite dual natriuretic peptide system, atrial

natriuretic peptide and brain natriuretic peptide. J Clin Invest 1991;87:1402-1412.

136. Nishida Y, Morita H, Minamino N, et al. Effects of Brain Natriuretic Peptide on

Hemodynamics and Renal Function en Dogs. Jap J Physiol 1990;40:531-540.

137. O´Hanlon R, O´Shea P, Ledwidge M, et al. The biologic variability of B-type natriuretic

peptide and N-terminal pro-B-type natriuretic peptide in stable heart failure patients. J

Cardiol Fail 2007;13:50-55.

138. O´Sullivan ML, O´Grady MR, Minors SL. Plasma big endothelin-1, atrial natriuretic

peptide, aldosterone, and norepinephrine concentrations in normal Doberman Pinschers

and Doberman Pinschers with dilated cardiomyopathy. J Vet Intern Med 2007;21:92-99.

87

139. Oikawa S, Imai M, Inuzuka C, et al. Structure of dog and rabbit precursors of atrial

natriuretic polypeptides deduced from nucleotide sequence of cloned cDNA. Biochem

Biophys Res Commun 1985;132:892-899.

140. Oikawa S, Imai M, Ueno A, et al. Cloning and sequence analysis of polypeptide. Nature

1984;309:724-726.

141. Oyama M, Reynolds C. Interés de los Biomarcadores en Cardiología. Veterinary Focus

2008; 18(3):2-5.

142. Oyama MA, Fox PR, Rush JE, et al. Clinical utility of serum N-terminal pro-B-type

natriuretic peptide concentration for identifying cardiac disease in dogs and assessing

disease severity. J Am Med Assoc 2008;232:1496-1503.

143. Oyama MA, Sisson DD, Solter PF. Prospective screening for occult canine dilated

cardiomyopathy using B-type and atrial natriuretic peptide and cardiac troponin-I assay. J

Vet Intern Med 2005;19:195-196.

144. Oyama MA, Sisson DD, Solter PF. Prospective screening for occult cardiomyopathy in

dogs by measurement of plasma atrial natriuretic peptide, B-type natriuretic peptide, and

cardiac troponin-I concentrations. Am J Vet Res 2007;68:42-47.

145. Ozaki J, Shimizu H, Hashimoto Y, et al. Enzymatic inactivation of major circulating

forms of atrial and brain natriuretic peptides. Eur J Pharmacol 1999;370:307-312.

146. Pemberton CJ, Johnson ML, Yandle TG, et al. Deconvolution analysis of cardiac

natriuretic petides during acute volume overload. Hypertension 2000;36:355-359.

147. Potter LR, Abbey-Hosch S, Dickey DM. Natriuretic peptide, their receptors and cGMP-

dependent signaling functions. Endocr Rev 2006;27:47-72.

148. Poutanen T, Tikanoja T, Jaaskelainen P, et al. Diastolic dysfunction without left

ventricular hypertrophy is an early finding in children with hypertrophic cardiomyopathy-

88

causing mutations in the beta-myosin heavy chain, alpha-tropomyosin, and myosin

binding protein C genes. Am Heart J 2006;151:725-729.

149. Prosek R, Sisson DD, Oyama MA, Solter PF. Distinguishing Cardiac and Noncardiac

Dyspnea in 48 Dogs Using Plasma Atrial Natiruretic Factor, B-Type Natriuretic Factor,

Endothelin and Cardiac Troponin I. J Vet Intern Med 2007;21: 238-242.

150. Raffan E, Loureiro J, Dukes-McEwan J, et al. The cardiac biomarker NT-proBNP is

increased in dogs with azotemia. J Vet Intern Med 2009;23:1184-1189.

151. Raymond I, Groenning BA, Hildebrandt, et al. The influence of age, sex and other

variables on the plasma level of N-terminal pro brain natriuretic peptide in a large sample

of the general population. Heart 2003;89:745-751.

152. Recchiuti N, Zuccolilli G. Corazón: Desarrollo, Anatomía Sistémica y Aplicada. En:

Belerenian G, Mucha CJ, Camacho AA y Manubens Grau J. Afecciones Cardiovasculares

en Pequeños Animales. 2 ed. Buenos Aires: Intermédica; 2007. p. 8-15.

153. Redfield MM, Rodeheffer RJ, Jacobsen SJ, et al. Plasma Brain Natriuretic Peptide

Concentration Impact of Age and Gender. J Am Coll Cardiol 2002;40(5):976-982.

154. Richards AM. The rennin-angiotensin-aldosterone system and the cardiac natriurético

peptides. Heart 1996;76:36-44.

155. Rishniw M, Erb HN. Evaluation of Four 2-Dimensional Echocardiographic Methods of

Assessing Left Atrial Size in Dogs. J Vet Intern Med 2000;14:429-435.

156. Rodeheffer RJ. Measuring plasma B-type natriuretic peptide in heart failure. J Am Coll

Cardiol 2004;44:740-749.

157. Roncon-Albuquerque R, Vasconcelos M, Lourenco AP, et al. Acute changes of

biventricular gene expression in volume and right ventricular pressure overload. Life Sci

2006;78:2633-2642.

89

158. Rush JE, Lee ND, Freeman LM, Brewer B. C-Reactive protein concentration in dogs

with chronic valvular disease. J Vet Intern Med 2006;20:635-639.

159. Sabrane K, Kruse MN, Fabritz I, et al. Vascular endothelium is critically involved in the

hypotensive and hypovolemic actions of atrial natriuretic peptide. J Clin Invest

2005;115:1666-1674.

160. Sagnella GA. Measurement and significance of circulating natriurético peptides in

cardiovascular disease. Biochem Soc Med Res Soc 1998;95:519-529.

161. Saida Y, Tanka R, Yamane Y, et al. Relationships between Vertebral Heart Size (VHS)

and Echocardiographic Parameters in Dogs with Mitral Regurgitation. Adv Anim Cardiol

2006;39(2):55-63.

162. Saito Y, Nakao K, Itho H, et al. Brain natriuretic peptide is a novel cardiac hormone.

Biochem Biophys Res Commun 1989;158:360-368.

163. Schellenberg S, Grenacher B, Kaufmann K, et al. Analytical validation of commerdial

immunoassays for the measurement of cardiovascular peptides in the dog. Vet J

2008;178:85-90.

164. Schellenberger U, O´Rear J, Guzzetta A, et al. The precursor to B-type natriuretic

peptide is an O-linked glycoprotein. Arch Biochem Biophys 2006;451:160-166.

165. Schmidt MK, Reynolds CA, Estrada AH, et al. Effect of azotemia on serum N-terminal

pro BNP concentration in dogs with normal cardiac function: A pilot study. J Vet Cardiol

2009;11:81-86.

166. Seilhamer JJ, Arfsten A, Miller JA, et al. Human and canine gene homologs of porcine

brain natriuretic peptide. Biochem Biophys Res Commun 1989;165:650-658.

167. Shimizu H, Masuta K, Aono K, et al. Molecular forms of human brain natriuretic

peptide in plasma. Clin Chim Acta 2002;316:129-135.

90

168. Silver MA, Chairman AM, Yancy CW, et al. BNP Consensus Panel 2004: A clinical

approached for the diagnostic, prognostic, screening, treatment monitoring and therapeutic

roles of natriuretic peptides in cardiovascular disease. Congest Heart Fail 2004;10(Supl

3):1:30.

169. Silver MA, Maisel A, Yancy CW, et al. Consensus Panel 2004: a clinical approach for

the diagnostic, prognostic, screening, treatment monitoring, and therapeutic roles of

natriuretic peptide in cardiovascular disease. Congest Heart Fail 2004;10(3):1-30.

170. Singletary GE, Morris NA, Lynne O´Sullivan SG, et al. Prospective Evaluation of NT-

proBNP Assay to Detect Occult Dilated Cardiomyoathy and Predict Survival in

Doberman Pinschers. J Vet Intern Med 2012;26:1330-1336.

171. Sisson DD, Oyama MA, Solter PF. Plasma levels of ANP, BNP, epinephrine,

norepinephrine, serum aldosterone, and plasma rennin activity in healthy cats and cats

with myocardial disease. J Vet Intern Med 2003;17:483-486.

172. Sisson DD. Neuroendocrine evaluation of cardiac disease. Vet Clin North Am Small

Anim Pract 2004;34:1105-1026.

173. Stephenson RB. Fisiología Cardiovascular. En: Cunninghan JG. Fisiología Veterinaria.

Buenos Aires: McGraw-Hill Interamericana; 1994. p. 143-153.

174. Sudoh M, Gustafsson F, Kistorp CN, et al. Effects of body mass index and age on N-

terminal pro-brain natriuretic peptide are associated with glomerular filtration rate in

chronic heart failure patients. Clin Chem 2007;53:1928-1935.

175. Sudoh T, Kangawa K, Minamino N, Matsuo H. A new natriuretic peptide in porcine

brain. Nature 1988;332:78-81.

91

176. Sudoh T, Minamino N, Kangawa K, Matsuo H. C-type natriuretic peptide (CNP): a new

member of natriuretic peptide familiy identified in porcine brain. Biochem Biophys Res

Commun 1990;168:863-870.

177. Swedberg K, Cleland J, Dargie H, et al. Guidelines for the diagnosis and treatment of

chronic heart failure: executive summary (update 2005): the Task Force for the Diagnosis

and Treatment of Chronic Heart Failure of the European Society of Cardiology. Eur Heart

J 2005;26:1115-1140.

178. Takase H, Toriyama T, Sugiura, et al. Brain natriuretic peptide detects cardiac

abnormalities in mass screening. Eur J Clin Invest 2007;37:257-262.

179. Takemura N, Toda N, Miyagawa Y, et al. Evaluation of Plasma N-Terminal Pro-Brain

natriuretic Peptide (NT-proBNP) Concentrations in Dogs with Mitral Valve Insufficiency.

J Vet Med Sci 2009;71(7):925-929.

180. Takimoto E, Champion HC, Li M, et al. Chronic inhibition of cyclic GMP

phosphodiesterase 5A prevents and reverses cardiac hypertrophy. Nat Med 2005;11:214-

222.

181. Tamura N, Ogawa Y, Chusho H, et al. Cardiac fibrosis in mice lacking brain natriuretic

peptide. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:4239-4244.

182. Tanaka M, Hiroe M, Nishikawa T, et al. Cellular localization and structural

characterization of natriuretic peptide-expressing ventricular myocytes from patients with

dilated cardiomyopathy. J Histochem Cytochem 1994;42(9):1207-1214.

183. Tarnow I, Olsen LH, Kvart C, et al. Predictive value of natriuretic peptide in dogs with

mitral valve disease. Vet J 2009;180:95-201.

92

184. Thomas CJ, Woods RL. Haemodynamic action of B-type natriuretic peptide

substantially outlasts its plasma half-life in conscious dogs. Clin Experim Pharmacol

Physiol 2003;30:369-375.

185. Thrall DE. Tratado de Diagnóstico Radiológico Veterinario. 5 ed. Buenos Aires:

Intermédica; 2009.

186. Tilley LP. Essentials of canine and feline electrocardiography: interpretation and

treatment. 3 ed. Philadelphia: Lea & Febiger; 1992.

187. Turk JR. Physiologic and patophysiologic effects of natriuretic peptides and their

implications in cardiopulmonary disease. J Am Vet Med Assoc 2000;216:1970-1976.

188. Vollmar AM, Reusch C, Kraft W, et al. Atrial natriuretic peptide concentration in dogs

with congestive heart failure, chronic renal failure, and hyperadrenocorticism. Am J Vet

Res 1991;52:1831-1834.

189. Ware WA. Enfermedades del Sistema Cardiovascular. En: Nelson RW, Couto CG.

Medicina Interna de Animales Pequeños. 3 ed. Buenos Aires: Intermédica; 2005. p. 13-50.

190. Wess G, Butz V, Mahling M, Hartmann K. Evaluation of the N-terminal pro-B-type

natriurético peptide as a diagnostic marker of various stages of cardiomyopathy in

Doberman Pinscher. Am J Vet Res 2011;72:642-649.

191. Wilkins MR, Redondo J, Brown LA. The natriuretic-peptide family. Lancet

1997;349:1307-1310.

192. Wolf J, Gerlach N, Weber K, et al. The diagnostic relevance of NT-proBNP and

proANP 31-67 measurements in staging of myxomatous mitral valve diasease in dogs.

Vet Clin Pathol 2013;42:196-206.

93

193. Yan W, Wu F, Morser J, Wu Q. Corin, a transmembrane cardiac serine protease, acts as

pro-atrial natriuretic peptide-converting enzyme. Proc Natl Acad Sci USA

2000;97:8525:8529.

194. Yassue H, Yoshimura M, Sumida H, et al. Localization and mechanism of secretion of

B-Type Natriuretic Peptide in comparison with those of A-Type Natriuretic Peptide in

normal subjects and patients with heart failure. J Am Heart Assoc 1994;90:195-203.

195. Zhou HL, Fiscus RR. Brain natriuretic peptide (BNP) causes endothelium-independt

relaxation and elevation of cyclic GMP in rat thoracic aorta. Neuropeptides 1989;14:161-

169.