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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN, TITULACIÓN Y GRADUACIÓN
“ESTUDIO COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO
ANTIBACTERIANO COMO MEDICAMENTO INTRACONDUCTO
ENTRE EL HIDRÓXIDO DE CALCIO Y EL EXTRACTO DE
PROPÓLEO SOBRE EL ENTEROCOCCUS FAECALIS”
PROYECTO PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE ODONTÓLOGO
AUTOR: LILIAN PATRICIA GONZALÓN LÓPEZ
TUTOR: DRA. RAQUEL ESMERALDA GUILLÉN GUILLÉN
QUITO
ABRIL - 2015
ii
DEDICATORIA
Dedico este trabajo especialmente a Dios nuestro creador quien me dio el regalo más
grande que es la vida, por darme la bendición de tener la familia más hermosa y por
haberme guiado por el buen camino.
A mis padres que me han apoyado incondicionalmente con mucho amor, dedicación y
entrega han hecho de mí una persona de bien; y a ti madre principalmente que nunca has
soltado mi mano, con tus consejos, paciencia y confianza siempre has creído en mí.
A mis hermanas Angélica y Arelys mis grandes amigas y compañeras de la vida que día
a día con su amor me han animado e incentivado a salir adelante y han sido mi motor
diario de lucha.
A ti Nikolas mi gran amigo incondicional que llegaste en un punto muy difícil de mi
vida que con tus travesuras y ternura, llenaste de ilusión y alegría mi corazón.
iii
AGRADECIMIENTO
Agradezco principalmente a Dios por permitirme llegar a este punto tan importante de
mi formación profesional, enseñándome a enfrentar las adversidades sin perder la
dignidad ni decaer en el intento, y ahora me permite cumplir mi sueño.
A mis padres que me han permitido llegar a esta instancia de mis estudios, ustedes son
parte de este gran logro junto a mis hermanas, gracias por ser las personas más
incondicionales en mi vida.
A mí querida Dra. Raquel Guillen, por ser mi guía académica, por su apoyo, tiempo,
mediante el cual se hizo posible el desarrollo de este presente trabajo de investigación.
A mi prima y amiga Sulay Morales que me ha entregado su valioso tiempo y me ha
sabido guiar con sus conocimientos en este largo camino de mi investigación.
A mí estimada Dra. Maira Rojas y su grupo de trabajo de la Universidad de las
Américas en los Laboratorios de Biotecnología, quien me abrió las puertas con mucha
amabilidad y paciencia para la realización de mi estudio, infinitamente agradecida por
sus conocimientos y tiempo prestado.
A la Universidad Central del Ecuador, Facultad de Odontología, de manera especial a
mis maestros quienes a través de este tiempo me han inculcado conocimientos y gracias
a ellos he podido realizarme como profesional.
A mis queridas amigas que a lo largo de mi vida universitaria pude conocerlas me
brindaron su amistad y apoyo incondicional, con las que compartí buenas y malas
experiencias.
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
INSTITUTO SUPERIOR DE INVESTIGACÓN Y POSGRADO
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN GRADUACIÓN Y TITULACIÓN
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, Lilian Patricia Gonzalón López en calidad de autor del trabajo de investigación o
tesis realizada sobre "ESTUDIO COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO
ANTIBACTERIANO COMO MEDICAMENTO INTRACONDUCTO ENTRE
EL HIDRÓXIDO DE CALCIO Y EL EXTRACTO DE PROPÓLEO SOBRE EL
ENTERECOCCUS FAECALIS", por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD
CENTRAL DEL ECUADOR hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de
parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de
investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su
Reglamento.
Quito, 23 de Abril del 2015
C.I. 100278151-4
Correo: [email protected]
IV
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
INSTITUTO SUPERIOR DE INVESTIGACÓN Y POSGRADO
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN GRADUACIÓN Y TITULACIÓN
INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR
En mi carácter de Tutora del trabajo de Grado, presentado por la señorita Lilian Patricia
Gonzalón López, para optar el Titulo de Odontólogo, cuyo título es sobre "ESTUDIO
COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO COMO
MEDICAMENTO INTRACONDUCTO ENTRE EL HIDRÓXIDO DE CALCIO
Y EL EXTRACTO DE PROPÓLEO SOBRE EL ENTERECOCCUS
FAECALIS". Considero que dicho Trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes
para ser sometido a la presentación pública y evaluación por parte del jurado
examinador que se designe.
En la ciudad de Quito a los 23 días del mes de Abril del 2015.
t-Dra. Raquel Esmeralda Guillen Guillen
Directora del Proyecto
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
INSTITUTO SUPERIOR DE INVESTIGACÓN Y POSGRADO
UNIDAD DE INVESTIGACIÓN GRADUACIÓN Y TITULACIÓN
CERTIFICADO DE APROBACIÓN DEL TRIBUNAL
TEMA: "ESTUDIO COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO
ANTIBACTERIANO COMO MEDICAMENTO INTRACONDUCTO ENTRE
EL HIDRÓXIDO DE CALCIO Y EL EXTRACTO DE PROPÓLEO SOBRE EL
ENTERECOCCUS FAECALIS"
AUTORA: Lilian Patricia Gonzalón López
El presente Trabajo de Investigación, luego de cumplir con todos los requerimientos
normativos, en nombre de la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR,
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA es aprobado; por lo tanto el jurado que se detalla a
continuación, autoriza a la postulante presentación a efectos de la sustentación pública.
Quito, Jueves 23 de Abril del 2015.
PRESIDENTE DEL TRIBUNAL
Dr. Rogelio Patricio Pazán León
PRIMER MIEMBRO DEL TRIBUNAL
Dr. Guillermo Alberto Lanas Terán
SEGUNDO MIEMBRO DEL TRIBUNAL
Dra. Mayra Elizabeth Paltas Miranda
vi
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA ............................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO ..................................................................................................... iii
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL ............................................... iv
INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR ................................................................ v
CERTIFICADO DE APROBACIÓN DEL TRIBUNAL ............................................... vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS .......................................................................................... vii
RESUMEN ..................................................................................................................... xii
ABSTRACT .................................................................................................................. xiii
INTRODUCCIÓN ......................................................................................................... xiv
CAPÍTULO I .................................................................................................................... 1
1.1. Planteamiento del Problema .................................................................................. 1
1.2 Hipótesis ................................................................................................................. 2
1.3 Formulación del Problema...................................................................................... 2
1.4. Objetivos ................................................................................................................ 3
1.4.1. General............................................................................................................ 3
1.4.2 Objetivos Específicos ...................................................................................... 3
1.5. Justificación ........................................................................................................... 3
CAPÍTULO II ................................................................................................................... 6
2.1. Enterococcu Faecalis ............................................................................................. 6
2.1.1. Características microbiológicas de Enterococcus faecalis ............................. 7
2.1.2. Factores de virulencia de Enterococcus faecalis ............................................ 8
2.1.3. Incidencia de enterococcus faecalis en las infecciones endodóncicas ......... 10
2.1.3.1. Infección endodóncica primaria ................................................................ 11
2.1.3.2. Infección endodóncica secundaria o persistente y fracaso del tratamiento 12
2.1.4. Control microbiológico de Enterococcus faecalis ........................................ 14
viii
2.2 Medicación intraconducto ................................................................................... 15
2.2.1 Hidróxido de Calcio ...................................................................................... 16
2.2.2 Propóleo ......................................................................................................... 22
CAPÍTULO III ............................................................................................................... 30
3.1 Tipo de Investigación ........................................................................................... 30
3.2. Diseño de la Investigación ................................................................................... 30
3.3. Población y Muestra ............................................................................................ 30
3.3.1. Criterios de inclusión .................................................................................... 31
3.3.2. Criterios de exclusión .................................................................................. 32
3.4. Variables .......................................................................................................... 32
3.4.1. Variable independiente ................................................................................. 32
3.4.2 Variable Dependiente .................................................................................... 32
3.4.3. Operacionalización de variables ................................................................... 32
3.5.1. Evaluación de la susceptibilidad del Enterococcus faecalis frente al extracto
de propóleo al 10 y 20% e Hidróxido de calcio .................................................... 34
3.5.2. Preparación del extracto de propóleo ........................................................... 35
3.5.3. Obtención de la muestra: .............................................................................. 36
3.5.4. Siembra de la cepa Enterococcus faecalis ATCC ........................................ 36
3.5.5. Preparación de los discos de papel filtro ...................................................... 39
3.5.6. Determinación de la sensibilidad del Enterococcus faecalis ATCC, a través
de halos de inhibición ............................................................................................. 39
CAPÍTULO IV ............................................................................................................... 49
RESULTADOS .............................................................................................................. 49
4.1 Análisis de resultados ........................................................................................... 49
4.1.1. Análisis Estadísticos ..................................................................................... 50
4.2 Discusión .............................................................................................................. 56
CAPÍTULO V ................................................................................................................ 59
ix
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ............................................................. 59
5.1. Conclusiones ........................................................................................................ 59
5.2. Recomendaciones ................................................................................................ 59
ANEXOS ........................................................................................................................ 68
Certificado Aprobación Sistema Urkund ....................................................................... 68
x
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 Cámara de bioseguridad y mechero eléctrico (material e instrumental estéril) 34
Figura 2 Hidróxido de calcio en pasta (UltraCal XS) .................................................... 35
Figura 3 a. Extracto de propóleo al 10% b. Extracto de propóleo al 20% .................... 36
Figura 4: a. colocación de la cepa de Enterococcus faecalis en TSB b. incubación ...... 37
Figura 5: Observación de la turbidez (crecimiento bacteriano) ..................................... 37
Figura 6: Toma de muestra del cultivo de TSB .............................................................. 38
Figura 7: siembra en Agar Nutritivo............................................................................... 38
Figura 8: preparación de los discos de papel filtro ......................................................... 39
Figura 9: preparación agar Mueller Hinton .................................................................... 40
Figura 10: medición del pH del agar Mueller Hinton .................................................... 40
Figura 11: Colocación del agar en cajas petri................................................................. 41
Figura 12: Toma de colonias del agar Nutritivo ............................................................. 41
Figura 13: Colocación de colonias en solución salina estéril ......................................... 42
Figura 14: ajuste a la escala McFarland ......................................................................... 42
Figura 15: Toma de la muestra con un hisopo de algodón Fuente: Patricia Gonzalón
(Lab. Biológicos UDLA) ................................................................................................ 43
Figura 16: inoculación de la muestra en el agar Mueller Hinton ................................... 43
Figura 17: toma de un disco de papel filtro .................................................................... 44
Figura 18: Embebimiento de los discos e papel filtro con micropipeta ......................... 44
Figura 19: colocación de la pasta de Hidróxido de calcio .............................................. 45
Figura 20: rotulación de las cajas petri ........................................................................... 45
Figura 21: Colocación de los discos de papel con las diferentes sustancias (1. Hidróxido
de calcio, 2. Extracto de propóleo al 10%, 3. Extracto de propóleo al 20%, 4. Agua
destilada control negativo).............................................................................................. 46
Figura 22: Muestras en la incubadora............................................................................. 46
Figura 23: Formación de Halos de Inhibición ................................................................ 47
Figura 24: Medición de los halos de inhibición ............................................................. 48
Figura 25: Resultados promedios ................................................................................... 55
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1: Resumen de halos de inhibición expresados en milímetros. ............................ 50
Tabla 2: Estadísticos descriptivos .................................................................................. 51
Tabla 3: Resultados Anova ............................................................................................. 52
Tabla 4: Test Tukey ........................................................................................................ 53
Tabla 5: Resultados Tukey ............................................................................................. 54
Tabla 6: Resultados Kruskal-Wallis ............................................................................... 54
xii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
AUTOR: LILIAN PATRICIA GONZALÓN LÓPEZ
“ESTUDIO COMPARATIVO IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO
COMO MEDICAMENTO INTRACONDUCTO ENTRE EL HIDRÓXIDO DE
CALCIO Y EL EXTRACTO DE PROPÓLEO SOBRE EL
ENTEROCOCCUS FAECALIS.”
RESUMEN
El Enterococcus faecalis es considerado un microorganismo resistente en infecciones
endodóncicas por lo cual se lo expuso a distintas sustancias con propiedades
antibacterianas entre ellas el Hidróxido de calcio medicamento intraconducto
convencional utilizado frecuentemente en la práctica odontológica y el extracto de
propóleo al 10% y 20% medicamento natural; para esto se procedió a colocar discos de
papel filtro impregnados las sustancias en medios de cultivo Mueller Hinton en los que
previamente se inoculo al Enterococcus f. ATCC 29212; posteriormente los medios de
cultivos fueron incubados por 24horas a 37°C. Las lecturas de los halos de inhibición se
recolectaron en tablas pre elaboradas y analizados por programas estadísticos con las
pruebas de ANOVA y TUKEY, los resultados fueron el extracto de propóleo al 10%
obtuvo un promedio de 14.8mm siendo el más efectivo contra el Enterococcus f.,
extracto de propóleo al 20% una media de 12.4mm y el hidróxido de calcio con 8,7mm.
Palabras claves: HIDRÓXIDO DE CALCIO, EXTRACTO DE PROPÓLEO,
ENTEROCOCCUS FAECALIS, MEDICAMENTO INTRACONDUCTO.
xiii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
SCHOOL OF DENTISTRY
AUTHOR: LILIAN PATRICIA GONZALÓN LÓPEZ
“IN VITRO COMPARATIVE STUDY OF THE ANTIBACTERIAL AFFECT AS
AN INTRA-DUCT MEDICAMENT BETWEEN CALCIUM HYDROXIDE AND
PROPOLEO EXTRACT ON ENTEROCOCCUS FAECALIS.”
ABSTRACT
Enterococcus faecalis is deemed resistance microorganisms in endodontic infections. It
was exposed to diverse substances with antibacterial properties, among them, calcium
hydroxide, a conventional duct medicament, frequently used in the dentistry practice
and the 10% and 20% propoleo extract. Filter paper disks impregnated with diverse
substances in Mueller Hinton culture means, with a prior inoculation of Enterococcus f.
ATCC 29212. Afterwards, culture means were incubated for 24 hours at 37°C.
Readings of inhibition halos were made in prepared tables and then analyzed by
statistical programs with ANOVA and TUKEY. Results showed that 10% propoleo
extract had an average of 14.8mm, which was the most effective against Enteroccocus
f., followed by 20% propoleo extract with a median of 12.4mm; and finally the calcium
hydroxide with 8.7mm.
Keywords: CALCIUM HYDROXIDE, PROPÓLEO EXTRACT, ENTEROCOCCUS
FAECALIS, INTRA-DUCT MEDICAMENT
xiv
INTRODUCCIÓN
Aproximadamente en el año de 1890, adquirió un gran interés el tratamiento del
sistema de conductos radiculares en el campo de la Endodoncia la que se encarga de la
prevención y tratamiento de las enfermedades de la pulpa dentaria y los tejidos
periapicales tratando de conservar las piezas dentarias en la cavidad bucal. En esta
época varias sustancias fueron introducidas en la terapia endodóncica así como la
creosota, también conocida como aceite de humo, que fue empleada en los diferentes
consultorios odontológicos. Posteriormente fue añadido el yodoformo que en la
actualidad ya no es empleado, Harlam, en 1900, recomendó el uso de una solución de
papaína; por estos años también la pirozona, una solución concentrada de peróxido de
hidrógeno, tomó gran popularidad para la esterilización de los conductos radiculares; el
tricresol y la formalina, fueron introducidos por Buckley en 1906. Así mismo Herman
en el año 1920 introdujo el Hidróxido de calcio Ca(OH)2 siendo la sustancia más
utilizada en los tratamientos de endodoncia hasta la actualidad. (Canalda, 2006)
El hidróxido de calcio, es un compuesto álcalis, con alta concentración de iones
(OH)- tienen la propiedad de promover un ambiente químicamente hostil para la
proliferación de las bacterias que degradan los tejidos pulpares. Sus propiedades para
controlar la inflamación, y su actividad antimicrobiana, lo hacen aconsejable para su
empleo como medicación tópica entre sesiones o como componente de materiales de
obturación temporarios y definitivos. Este medicamento es el más usado en
endodoncia, especialmente en diagnósticos de necrosis pulpar, que además presenta
otras propiedades como menos irritantes, poco tóxicas y tiene superiores resultados. En
la práctica odontológica el hidróxido de calcio es sumamente eficaz, logra reducir el
exudado debido a sus propiedades y es un excelente estimulador en la reparación apical
y periapical, evitando molestias al paciente. (Peters, 2002).
Hoy en día se realizan nuevos estudios para dar a conocer nuevas elecciones
farmacéuticas, muchas de ellas son procesadas en laboratorios y otras de origen natural;
así como es el extracto de propóleo el cual es considerado como una sustancia capaz de
solucionar varias dificultades en cavidad oral; por lo que se están realizando varias
xv
investigaciones acerca del propóleo con diversos orígenes ya que presenta una acción
antibacteriana muy efectiva. (Telleria & Pacheco, 2003).
El propóleo es una sustancia resinosa, de consistencia pegajosa, de color oscuro
pardo rojizo amarillento de los árboles y plantas silvestres que las abejas Apis mellífera
adultas recolectan, producen y recubren a sus colmenas con una capa delgada para
garantizar la total asepsia de la colmena y prevenir así cualquier tipo de infección dentro
de la misma; su empleo en la terapia endodóncica gracias a sus diferentes
características, principalmente las bacteriostáticas y bactericidas. De igual forma
presenta una tasa baja de efectos adversos. (Telleria & Pacheco, 2003).
Así mismo esta sustancia se encuentra formada por varios aceites y cera por lo que es
considerada una estructura compleja, la cual puede ser soluble en alcohol como éter,
acetona, benceno. Presenta varias propiedades como antibacteriana, antifúngica de
amplio espectro y cicatrizante. Presenta un elevado índice anestésico mayor a la
cocaína. De igual manera características estimulantes, bactericidas, bacteriostáticas,
antisépticas, antiinflamatorias y antitóxicas. Al mismo tiempo, engrandece la actividad
de los antibióticos (Telleria & Pacheco, 2003).
Según Nair (2006), la Enterococcus Faecalis, es muy resistente a los procedimientos
de desinfección del conducto; así mismo, Pumarola J. nombrado en Canalda (2006),
sugiere que la segunda especie bacteriana más comúnmente aislada en los fracasos
endodóncicos con imagen periapical es el Enterococcus Faecalis, bacteria Gram positiva
anaerobia facultativa.
De allí, que esta investigación tiene como objetivo principal comparar los efectos
antibacterianos tanto del hidróxido de calcio sustancia empleada en la práctica diaria
odontológica y el extracto de propóleo al 10% y 20% sustancia natural frente al
Enterococcus Faecalis. Con el propósito así mismo de dar a conocer a esta sustancia
natural alternativa como es el extracto de propóleo el cual presenta varias propiedades
importantes, no exhibe efectos adversos al ser humano, es de muy bajo costo y accesible
tanto para el odontólogo como para el paciente.
xvi
La investigación se la realizó en la Universidad de las Américas en los laboratorios
biotecnológicos (ciudad de Quito) en el período de marzo – julio 2014, el estudio fue
experimental realizado en in vitro con cultivos de Mueller Hinton inoculados con la
bacteria Enterococcus faecalis y con discos de papel filtro de las sustancias a
investigarse. A las 24 horas se tomaron las mediciones de los halos de sensibilidad de
los 20 cultivos realizados. Los resultados posteriormente fueron sometidos a procesos
estadísticos para una mejor interpretación.
1
CAPÍTULO I
1.1. Planteamiento del Problema
La Endodoncia es un procedimiento en el tratamiento dental que ha contribuido
eficazmente a disminuir las extracciones; es decir, la conservación de las piezas propias
de los individuos aún sin pulpa dental; el éxito de la intervención endodóncica depende
de los diversos procedimientos y técnicas empleadas; la medicación intraconductos
juega un papel importante en este procedimiento y tiene como objetivo principal inhibir
la proliferación de bacterias. Se debe considerar el diagnóstico clínico para la selección
de una correcta medicación intraconducto ya que muchos pueden ser nocivos para la
salud y podrían originar una posible irritación y pérdida de los tejidos dentarios.
(Canalda, 2006).
En el medio bucal es posible encontrar o identificar de 50 a 150 especies bacterianas
en cada uno de los individuos de alrededor de 700 especies que se conocen de la
cavidad oral. Se ha logrado determinar varias áreas dentro de boca que son más idóneas
de ser colonizadas entre estas se encuentran: saliva, tejidos blandos, tejidos duros (zonas
dentales) y en partes rehabilitadas con prótesis, restauraciones. (Canalda, 2006).
El conducto radicular constituye un espacio ideal para la colonización de bacterias
proporcionando un entorno húmedo, cálido, nutritivo y anaerobio al que, por lo general,
no pueden acceder las defensas del huésped, siendo así, un entorno bastante fértil para el
crecimiento bacteriano y que casi ninguna de las especies bacterianas tendría problemas
para colonizar (Torabinejad, 2010).
El hidróxido de calcio fue introducido por Herman en 1920 y hasta la actualidad es
uno de los medicamentos intraconductos de elección por parte de los profesionales
odontólogos (Leonardo, 1996). Presenta propiedades de interés para la terapéutica
endodóncica como son activación de enzimas del tejido (fosfatasa alcalina que va a
producir un resultado mineralizante y la inhibición de enzimas bacterianas que producen
efectos antibacterianos (Martínez, 2007).
2
El propóleo como solución a diversos problemas de salud oral debido a sus
propiedades de acción antibacterianas ha sido objeto de una amplia gama de estudios;
es un producto natural complejo que en su mayor formación intervienen productos
resinosos entre ellos la cera y aceites esenciales, por lo general es de un color oscuro
pardo que es sintetizado por las abejas.
Esta sustancia natural presenta una acción antimicrobiana complicada la cual se cree
que es conferida gracias al sinergismo que existe por parte de sus componentes como
son los compuestos fenólicos, grupos de hidroxiácidos, ácidos grasos y aromáticos,
flavonoides, varios ésteres y sesquiterpenos. (Grange & Davey, 1990).
De otro modo, la bacteria Enterecoccus Faecalis presenta alta resistencia a los
medicamentos, de allí que el problema radica en obtener una substancia de efectos
tóxicos para este microorganismo el cual, entre otros, es causante de múltiples procesos
infecciosos que degeneran los tejidos dentarios.
1.2 Hipótesis
El efecto antibacteriano del extracto de propóleo es más efectivo que el hidróxido
de calcio en los cultivos in vitro del Enterecoccus faecalis.
1.3 Formulación del Problema
¿Cuáles son los efectos antibacterianos del Extracto de Propóleo e Hidróxido de
calcio frente a la Enterecoccus Faecalis en cultivo in vitro?
¿Cuáles son las características y propiedades del extracto de Propóleo e
Hidróxido de Calcio?
3
1.4. Objetivos
1.4.1. General
Determinar el efecto antibacteriano del extracto del Propóleo en comparación con
el hidróxido de calcio en cultivo in vitro del Enterococcus faecalis como medicamento
intraconducto.
1.4.2 Objetivos Específicos
Medir la actividad antibacteriana del extracto Propóleo y del Hidróxido de
Calcio frente al Enterococcus faecalis.
Evaluar la actividad antibacteriana del extracto de Propóleo al 10% y del
Propóleo al 20% frente al Enterococcus faecalis
Comparar la eficiencia entre los diversos extractos de Propóleo y el Hidróxido
de calcio frente al Enterococcus faecalis por medio de las medidas de los halos
bacterianos.
1.5. Justificación
En el tratamiento de Endodoncia la mayoría de los diagnósticos están relacionados
con presencia y contaminación bacteriana, la cual se da a través de varias estructuras
dentarias como son los túbulos dentinarios los que se convierten en vías de acceso de
microrganismos hacia el sistema de conducto radicular. Según la literatura y estudios
realizados en el campo de la medicina odontológica existen varias especies bacterianas;
pero, la que con mayor frecuencia se presenta en los tejidos periapicales la Enterococcus
Faecalis; consecuentemente, una salida para remediar las afecciones bacterianas es la
medicación intraconducto.
4
El objetivo de emplear medicación intraconducto entre sesiones en la terapia
endodóncica es eliminar bacterias, e impedir una proliferación bacteriana, creando
ambientes poco viables para los microorganismos. También se trata de disminuir los
procesos inflamatorios de los tejidos periapicales y de posibles remanentes pulpares en
casos de que no sea factible si retiración completa. (Ghon, Pitt Ford 1992) (Souza
1989).
En la actualidad el compuesto químico más utilizado como medicamento
intraconducto es el Hidróxido de Calcio químicamente puro, por sus propiedades
antibacterianas, antiinflamatorias lo hacen aconsejable para su empleo como medicación
tópica entre sesiones; además es un material de fácil manejo, de sencilla aplicación y de
muy bajo costo.
Con esta investigación se trata de manifestar la existencia de medicamentos
facultativos, como el extracto de propóleo que podría ser empleado en la terapia
endodóncica, ya que presenta un inapreciable número de efectos adversos y a su vez
exhibe grandes propiedades a diferencia de otras sustancias que se encuentran en el
mercado; así también tiene un bajo costo y es una excelente línea de investigación en las
ramas odontológicas.
Indudablemente, es de vital importancia investigar nuevos medicamentos
intraconducto para evitar la proliferación de microorganismos durante los tratamientos
odontológicos, especialmente en el área de endodoncia. Gracias a varias investigaciones
realizadas acerca de los extractos de propóleo se ha logrado identificar varias
propiedades de importancia como son antibacterianas, antifúngicas, antivirales,
antiinflamatorias y varias regenerativas.
Evidentemente, para utilizar con certeza los nuevos medicamentos, es necesario
establecer la eficacia antimicrobiana de los medicamentos intraconductos comúnmente
utilizados, en este caso, frente a las características terapéuticas atribuidas al propóleo;
para ello se requiere de un trabajo experimental comparativo entre las dos opciones; el
mismo que durante el proceso investigativo determinará los niveles de acción
antibacteriana de cada uno de ellos.
5
El propóleo, sustancia seleccionada como material comparativo en este trabajo
experimental está compuesta por una diversidad de agregados químicos, la cual no suele
ser constante y puede variar de acuerdo al lugar de procedencia (Farré, Frasquet,
Sánchez, 2004). Entre las principales propiedades se encuentra su acción antibacteriana,
y se cree que es gracias a la presencia de los flavonoides que forman parte de su
composición (Koo, Rosalen, y cols, 1999).
Al igual que la miel, existe una historia bastante amplia acerca de los beneficios del
propóleo y su uso en las diversas culturas. El campo de la farmacéutica ha ido
evolucionando brevemente en especial manera en el medio natural por lo cual se
realizan con mayor frecuencia estudios acerca de las sustancias sintetizadas por las
abejas y sus grandes aportes en la salud bucal. (Tolosa & Cañizares, 2002).
6
CAPÍTULO II
2. MARCO TEÓRICO
Tellería, C; Pacheco, A. (1999). Utilización del propóleo acuoso al 22% como
tratamiento pulpo radicular comparado con el Ca(OH)2.
Martínez y otros (2004). Evaluación in vitro de la actividad antimicrobiana del
hidróxido de calcio en dos preparaciones en presencia del enterococcus faecalis.
Rodríguez, M. (2007) Actividad antibacteriana de cuatro soluciones del extracto de
propóleo en bacterias anaerobias frecuentes en necrosis pulpar con reacción periapical.
Herrera y otros (2008). Efecto antibacteriano del hidróxido de cálcio y iodoformo
sobre Enterococcus faecalis y Pseudomonas aeruginosa.
Tovalino, F; Contreras, S. (2010). Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del
extracto etanólico de propóleo de Oxapampa - Perú sobre cultivos de Streptococcus
mutans (ATCC 25175) y Staphylococcus aureus (ATCC 25923).
Kayaoglu y otros (2011). Acción antibacteriana de extractos de propóleo, el hidróxido
de calcio y la clorhexidina sobre el Enterococcus faecalis.
2.1. Enterococcu Faecalis
El Género Enterococcus son especies morfológicamente similares a los
estreptococos. Siendo la especie más comúnmente aislada los Enterococcus faecalis
(80-90%) y Enterococcus faecium (5-10%). Pueden causar diversidad de infecciones y
se relacionan en procesos oportunistas. Suelen asociarse en cadenas, por lo general su
medio de desarrollo es el intestino, pero se ha logrado aislar en la flora bacteriana oral
de tejidos blandos. Asimismo se encuentran asociados a infecciones pulpo-periapicales
y bolsas periodontales. (Liébana, 2002)
Los enterococos aproximadamente hasta 1980 no eran considerados un género
bacteriano independiente, más bien estaban incluidos dentro de los estreptococos a pesar
de sus diferentes características. Lancefield realizó una tipificación serológica y también
con el hallazgo del antígeno del grupo D, se clasificó a los enterococos como
7
estreptococos de este grupo, capaces de tolerar cloruro de sodio. La mayoría de las
bacterias Gram positivas presentan el antígeno del grupo D es un ácido lipoteicoico, el
cual es un variante del antígeno presente en otros estreptococos. Los enterococos
pasaron a formar parte de otro género formal en 1984 después de realizar varios
estudios de hibridación ADN-ADN o ADN-ARN donde se demostró mayores
diferencias en comparación con los estreptococos. (Portenier, Waltimo, & Haapasalo,
2003)
La fijación a los tejidos del hospedador por parte de los enterococos se realiza
mediante los ligandos adhesivos específicos. En el momento de la invasión el
entorococo debe encontrarse en un entorno ideal con la presencia de nutrientes, células
leucocitarias y con un pH elevado. Y con la ayuda de todos estos elementos favorecer
el crecimiento del microorganismo. (Liébana, 2002)
El Enterococcus faecalis se considera como el microorganismo patógeno más
relacionado a las infecciones endodóncicas persistentes, ya que suele ser aislado con
frecuencia en la flora mixta. Eventualmente esta bacteria logra sobrevivir en los
conductos radiculares ya que tiene una capacidad de adaptarse y soportar circunstancias
ecológicas extremas debido a sus propiedades microbiológicas y su habilidad de formar
el biofilm. (Liébana, 2002)
2.1.1. Características microbiológicas de Enterococcus faecalis
Enterococcus faecalis es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo, no presenta
movilidad, no esporulado, puede presentarse solo, en pares o en cadenas, el tamaño de
cada célula oscila entre 0,5 y 0,8 micrómetros; puede crecer a una temperatura de su
35°C; e incluso a temperaturas entre 10 y 45°C. Es una bacteria tolerante al cloruro de
sodio al 6.5% y a sales biliares, así también son especies fermentativas que no producen
gases. Ostenta pared celular constituida por peptidoglucanos y ácido teicoico. (Liébana,
2002)
8
Así mismo, esta bacteria presenta una característica muy importante como es crecer
en medios con pH ácido y alcalino, siendo este último inhibidor del crecimiento y
supervivencia de otros microorganismos, por lo que varios estudios sugieren que esta
bacteria puede ser inhibida en pH mayores a 11. Varios autores describen que el
hidróxido de calcio usado como medicamento intraconducto alcanza un pH crítico en el
interior del sistema de conductos radiculares (SRC) el cual no se logra a nivel de la
dentina luego de su aplicación, lo que explicaría la persistencia del microorganismo en
el interior de los túbulos dentinarios y así volver a infectar los conductos radiculares.
(McHugh, Zhang, Michalek, & Eleazer, 2004). Nakajo y cols (2006), refieren que el E.
Faecalis presenta esta resistencia a medios con elevado o bajo potencial de hidrógeno
gracias a la estructura de su membrana citoplasmática.
Varios estudios han demostrado la presencia del E. faecalis en las biopelículas en
conductos radiculares de piezas dentarias extirpadas, las cuales se fueron tratadas
endodóncicamente y obturadas con pastas de Hidróxido de Calcio, lo que evidencia que
este microorganismo puede colonizar conductos medicados. También se cree que al
desarrollarse en los biofilms adquieren la resistencia a los tratamientos antimicrobianos,
medicamentos intraconductos y a diversos protocolos de irrigación. (Duggan &
Sedgley, 2007)
Otras investigaciones han sido dirigidas a determinar la acción de los factores de
virulencia del E. Faecalis en la colonización del sistema de conductos radiculares en un
entorno escaso de nutrientes, e incluso en medios con medicación intraconducto , lo que
sugiere que las proteasas sintetizadas por esta bacteria, así como la proteína de unión al
colágeno son las que influyen en la adhesión bacteriana, y por lo que permite que la
bacteria colonice el conducto radicular. (Hubble, Hatton, Nallapareddy, Murray, & M.,
2003)
2.1.2. Factores de virulencia de Enterococcus faecalis
La virulencia se conoce a la capacidad de un microorganismo para producir
alteraciones patológicas y producir un daño tisular en el hospedero; la cual va a
9
depender de varios aspectos que afectan a estas capacidades los que se denominan
factores de virulencia. (Liébana, 2002)
Existen varios factores de virulencia los que desempeñan un papel importante en el
desarrollo y resistencia de esta bacteria en medios ambientes con condiciones extremas
teniendo así los más principales (Kayaoglu & Ørstavik, 2004):
Sustancia de agregación: es una proteína superficial originada por el plásmido, el
que confiere al Enterococcus faecalis la capacidad de ocultarse y fijarse en los
tejidos del hospedador y subsistir al sistema de defensa. La sustancia de
agregación es el factor preciso de virulencia del Enterococcus faecalis, el que
mediante varios mecanismos como son : jugar un papel importante en la
diseminación de los factores de virulencia codificados por plásmidos, como la
citolisina enterocóccica y determinadas resistencias antibióticas, entre las
especies, esta sustancia de agregación facilita la adherencia de Enterococcus
faecalis a las células epiteliales renales e intestinales, y a la colonización de estas
superficies, protege al microorganismo contra los leucocitos polimorfonucleares
y de la lisis mediada por macrófagos y finalmente la sustancia de agregación y
las citolisinas tienen acciones sinérgicas, lo cual aumenta la virulencia; esto
resulta en daño tisular e invasión tisular profunda.
Adhesinas y proteínas superficiales: se hallan en la pared celular donde las
proteínas y adhesinas admiten al microorganismo adherirse a la matriz
extracelular y posteriormente constituir biopelículas enterocócicas.
Feromonas sexuales: son péptidos hidrofóbicos ayudan en la recepción de
células donadoras las cuales poseen plásmidos para inhibir una respuesta
inflamatoria. Se ha señalado que algunas feromonas y sus péptidos inhibidores
poseen el potencial de ofrecer funciones adicionales como quimiorreceptor a los
neutrófilos, causando secreción enzimática granular e induciendo a una
explosión respiratoria. A pesar de que E. faecalis secreta normalmente múltiples
feromonas y los efectos quimiotácticos de las feromonas aparecen en bajas
concentraciones, se desconoce por qué estos péptidos y sus inhibidores modulan
significativamente la respuesta inflamatoria in vivo.
10
Ácido lipoteicoico: son un grupo de moléculas o polímeros anfipáticos
íntimamente relacionados y asociados con la pared celular es una sustancia la
cual actúa ayudando a la transferencia de plásmidos y formando agregados los
cuales contribuyen con la virulencia de la bacteria.
Producción de superóxido extracelular: Los aniones superóxidos son radicales
de oxígeno altamente reactivos relacionados con el daño tisular y celular en una
gran variedad de desórdenes, incluyendo las enfermedades inflamatorias. La
producción de radicales libres extracelulares por parte de Enterococcus faecalis
promueve la inestabilidad cromosomal y el daño causado en el ADN
Gelatinasa: es una metaloproteinasa que va actuar en la adherencia del
microorganismo en los túbulos dentinarios, varias investigaciones no revelan
totalmente pero también se cree que beneficia en la supervivencia de la bacteria
ya que subsiste reflejando ser una fuente de nutrientes gracias a la acción de la
gelatinasa.
Hialuronidasa: actúa como un ácido hialurónico, y es principalmente, una
enzima degradativa que está coligada con el daño tisular. Otra función
importante es suministrar de nutrientes a las bacterias, gracias a los productos de
degradación de los sustratos son los disacáridos, que pueden ser transportados y
metabolizados intracelularmente por los microorganismos. Es también razonada
a manera de facilitador de la proliferación bacteriana, de sus toxinas, mediante
los tejidos del hospedero. Igualmente de su propio efecto dañino, asimismo es
capacitada de admitir los efectos deleatorios de toxinas bacterianas, aumentando
así la extensión del daño.
Citolisina: una enzima tóxica codificada por plásmidos la que media como
destructor de eritrocitos, neutrófilos polimorfonucleares y macrófagos, matar
células bacterianas y reducir el acto de la fagocitosis, igualmente por su
actividad organotóxica alcanza contrarrestar y reducir la terapia antibacteriana y
antiinflamatoria.
2.1.3. Incidencia de enterococcus faecalis en las infecciones endodóncicas
Existen diversos grupos bacterianos que pueden mantenerse dentro del sistema de
conductos radiculares (SCR) aún después de finalizar el tratamiento endodóncico, los
11
cuales son responsables del fracaso en el tratamiento no quirúrgico de los conductos
radiculares. (Villena, 2012)
Sundqvist y col (2003) sugieren, que un microorganismo patógeno endodóncico es
aquel capaz de provocar destrucción de tejidos en la periodontitis apical, la que se
caracteriza por ser una infección polimicrobiana y, en las que ciertos microorganismos
determinados desempeñan diferentes funciones en los estadios de la infección.
La infección del SCR de la pieza es considerado el agente etiológico primario de las
distintas formas de enfermedades inflamatorias perirradiculares. Una vez instaurada la
infección endodóncica los microorganismos van a ingresar por medio del foramen
apical y en entran en contacto con los tejidos causando daño a los tejidos y produciendo
estadios inflamatorios. (Siqueira & Rocas, 2005)
Varios autores señalan al Enterococcus faecalis como una bacteria persistente en las
infecciones endodóncicas tanto primarias como secundarias, por lo cual es necesario
revisar la prevalencia de este microorganismo en este tipo de infecciones.
2.1.3.1. Infección endodóncica primaria
Este tipo de infecciones tiene como característica principal presentar microbiota
mixta o polimicrobiana, en la que se destacan bacterias Gram positivas y Gram
negativas, siendo las segundas las de mayor predominio en las infecciones.
Pertenecientes a este grupo encontramos varias bacterias como Dialister invisius y
pneumosintes, Treponema denticola y socranskii, Fusobacterium nucleatum,
Porphyromonas gingivalis y endodontalis, Prevotella intermedia y nigrescens.
Habitualmente dentro del SRC se pueden aislar más de tres bacterias. (Torabinejad &
Walton, 2010)
Se han realizado varios estudios para identificar a los microorganismos presentes en
el conducto radicular, Baumgartner & Falkler (1991) en su investigación identificaron
que en piezas dentarias con caries coronal y lesiones periapicales inflamatorias existe
una mayor tasa de bacterias anaerobias en los últimos 5mm apicales, en los cuales
12
también se identificó al Enterococcus faecalis en 4 de las 10 muestras es decir en un
40%.
Siqueira & Rocas (2005) compararon una serie de estudios para analizar las
microbiota de las infecciones primarias, donde se encontró un predominio de
Pseudoramibacter alactolyticus, Porphyromonas endodontalis, Treponema denticola,
Dialister pneumosintes, Filifactor alocis, Tanerella forsythia. Se encontraron también
cepas de Enterococcus faecalis su prevalencia fue de 30% relacionada a lesiones
perirradiculares asintomáticas, y en un 5% ligadas con periodontitis apical aguda.
La presencia de Enterococcus faecalis en infecciones endodóncicas primarias fue de
33% (7 de 21) asociada a las lesiones perirradiculares crónicas asintomáticas, del 10%
(1 de 10) de conductos con periodontitis apical aguda y el 5% (1 de 19) relacionada con
abscesos perirradiculares agudos, es decir se encontró en 18% (9 de 50) de los casos con
infección endodóncica primaria. Demostrando así, que este microorganismo está muy
relacionado con las alteraciones asintomáticas. (Rocas, Siqueira, & Santos, 2004)
2.1.3.2. Infección endodóncica secundaria o persistente y fracaso del tratamiento
Villena (2012) sugiere, que es importante tomar en cuenta el momento cuando las
bacterias persistentes son detectadas en los conductos tratados. Los estudios abarcan
fundamentalmente tres momentos a saber:
1. Muestras obtenidas post instrumentación (obtenidas inmediatamente después de
la preparación biomecánica).
2. Muestras post medicación (obtenidas luego de la remoción de la medicación
entre sesiones).
3. Muestras post obturación (obtenidas de conductos ya tratados y obturados
asociados a lesiones de periodontitis apical en un tiempo dado, meses o aún años
después del tratamiento).
Las bacterias encontradas en los tres diferentes momentos mencionados pueden
varían en tipo de especie, número y virulencia, debido al tiempo que los
13
microorganismos requieren para sobrevivir y adaptarse a nuevos medios como son el
conducto medicado y otro con material obturado. (Villena, 2012)
La microflora bacteriana persistente en el SRC es la que está presente en pulpas
necróticas y logran sobrevivir a los protocolos biomecánicos, estas bacterias pueden
encontrarse en conductos no localizados y áreas no instrumentadas. De igual manera
puede existir una colonización de bacterias de la cavidad bucal en el interior de los
conductos radiculares al momento del tratamiento por falta de control aséptico, o por la
presencia de microfiltraciones coronales luego de la terapia endodóncica. (Pinheiro, y
otros, 2003)
En los fracasos de tratamiento de conductos se ha demostrado que la flora
microbiana es diferente a la encontrada en dientes con necrosis pulpar no tratados. Los
microorganismos observados en piezas dentarias con previa terapia endodóncica y con
diagnóstico de una periodontitis apical van a tener la presencia de una o dos especies.
Donde las bacterias Gram positivas prevalecen, y especialmente especies anaerobias
facultativas. (Siqueira & Rocas, 2005). Estos microorganismos son menos susceptibles
a las terapias antimicrobianas por lo cual persisten con mayor frecuencia en el SCR
después de técnicas endodóncicas mal empleadas. (Molander, Reit, Dahlén, & Kvist,
1998)
Los microorganismos que se encuentran en pulpas necróticas de conductos no
tratados presentan similares rasgos fisiológicos requeridos por las bacterias para
ingresar y establecerse en primera instancia, como se ha demostrado la destreza para
para situar diferentes sustancias nutritivas, su capacidad de lidiar con otras bacterias y
también la de evadir los diferentes estadios inmunológicos del hospedador. (Sundqvist
& Figdor, 2003)
Se ha demostrado a través de varias investigaciones que el Enterococcus faecalis es
el microrganismo con mayor prevalencia de 12 a 77% en las infecciones persistentes.
(Rocas, Siqueira, & Santos, 2004).
14
El E. faecalis puede causar lesiones periapicales y fracasos crónicos en piezas
dentarias endodóncicamente tratadas, ya que presenta la capacidad de ingresar y
conservarse en el interior del sistema de túbulos dentinarios. Love (2001) comprueba
esto al realizar un estudio con el que trata de identificar como el E. faecalis sobrevive y
se desarrolla en el interior de los túbulos dentinarios, y así contaminar nuevamente al
conducto radicular; para lo cual coloco durante 56 días en un medio de agar líquido
(infusión cerebro-corazón rico en suero humano) una muestra de la bacteria.
Demostrando de esta manera que el E. faecalis conserva su capacidad de colonizar y así
adherirse al colágeno en presencia de suero humano.
Siqueira & Rocas (2005) efectuaron un análisis de las especies bacterianas más
comúnmente aisladas en piezas dentarias con fracasos endodóncicos mediante una PCR
(Reacción en cadena de la Polimerasa). Donde señalan que en un 77% de los casos
analizados se aisló al E. faecalis, siendo una de las bacteria más prevalente. De igual
manera se observó con mayor frecuencia microorganismos como Dialister
pneumosintes, Pseudoramibacter alactolyticus, Filifactor alocis.
Se realizó un estudio donde se analizó cincuenta piezas dentarias con lesión primaria
y otras cincuenta piezas dientes con lesión persistente a través de cultivo tradicional y
análisis por PCR. En el que se demostró que el E. faecalis fue encontrado mediante
cultivo en 2 de las 50 muestras con piezas dentarias con infección primaria que refiere
al 4% y en 21 de 50 muestras de piezas dentarias con infección persistente que
representa 42%. Otros resultados obtenidos a través de otro análisis evidenciaron el
80% es decir que 41 del total de muestras con lesión primaria presentaron E. faecalis y
el 76% en lesiones persistentes (38 casos). Siendo el E. Faecalis encontrado en 23 de
100 muestras por medio de cultivo bacteriano y en 79 de 100 muestras a través de PCR.
Confirmando los estudios anteriores donde existe un elevado índice de prevalencia del
enterococcus en las lesiones persistentes y fracasos endodóncicos. (Gomes, y otros,
2006)
2.1.4. Control microbiológico de Enterococcus faecalis
15
La terapia endodóncica tiene como objetivo biológico principal la erradicación
microbiana de los conductos radiculares; a través del empleo correcto de los distintos
protocolos endodóncicos como son la preparación biomecánica, el uso de irrigantes y
medicación intraconducto. (Stuart, Schwartz, Beeson, & Owatz, 2006)
El enterococcus faecalis como se ha señalado previamente se encuentra relacionado a
lesiones endodóncicas persistentes, gracias a sus diferentes características
microbiológicas y sus factores de virulencia, por lo que puede sobrevivir en condiciones
extremas en el Sistema de conductos radicular e invadir áreas donde se imposibilita la
preparación biomecánica la irrigación y el uso de medicamentos intraconducto. Por lo
que se realizan diversos estudios para controlar la presencia de E. faecalis mediante
medicación local como irrigantes entre los principales se encuentran el hipoclorito de
sodio (NaOCl) el más usado; medicación intraconducto como el Hidróxido de calcio
usado de manera universal. (Stuart, Schwartz, Beeson, & Owatz, 2006)
2.2 Medicación intraconducto
Los medicamentos intraconducto se han empleado en la terapia endodóncica entre
sesiones a lo largo de muchos años, como un complemento en el control del crecimiento
bacteriano (Harold, 1984). Este procedimiento se determina por el empleo de un
medicamento o solución en el sistema de conductos radiculares en las diferentes
sesiones de la planificación del tratamiento endodóncico. (Soares & Goldberg, 2003)
Para la administración de los medicamentos intraconducto es necesario tomar en
cuenta las mismas consideraciones que se aplican para los fármacos en forma general
en las distintas partes del organismo las cuales son cantidad, localización y tiempo de
aplicación. (Soekanto, 1996)
Chon y PittFord en 1996, sugieren varias ventajas que presenta la utilización de
medicación intraconducto como: Antisepsia bacteriana persistente, bloqueo de restos
tóxicos y antígenos, disminución de procesos inflamatorios, reducción de secreciones
persistentes y la formación de una barrera mecánica
16
Las técnicas de preparación han ido evolucionado, por lo que los clínicos rechazan
la medicación intraconducto y recomiendan el tratamiento en una sola sesión, en los
últimos años se ha incluido nuevamente a la medicación temporal en el sistema de
conductos radiculares de dientes con periodontitis apical, preferentemente con pastas de
Hidróxido de Calcio. En piezas dentarias con vitalidad pulpar, por el contrario, se cree
que es preferible realizar el tratamiento de conductos en una única sesión. (Canalda,
2006)
Con el transcurrir del tiempo se han empleado diversas sustancias como medicación
intraconducto, las mismas que poseen ventajas y desventajas en su aplicación entre las
principales se encuentra en el Hidróxido de calcio medicamento convencional de mayor
uso. (Basrani, 1999)
Así mismo en la actualidad se está introduciendo nuevas sustancias de origen natural
entre estas se encuentra el Extracto de propóleo con una diversidad de propiedades.
2.2.1 Hidróxido de Calcio
El hidróxido de calcio es una de las sustancias más utilizadas en el mundo, pues
cuenta con una variedad de propiedades como son la disociación iónica, es una buena
sustancia antiséptica, puede instaurar ambientes propicios para que se dé una
reparación de los tejidos afectados, entre otras. Hermann (1920) fue quien introdujo a
este medicamento para su uso en endodoncia para favorecer los procesos de curación.
(Estrela, 2005)
Es un medicamento utilizado como medicación intrarradicular, pudiendo ser entre
sesiones o en períodos largos de tiempo; está indicado en el control y tratamiento de
reabsorciones radiculares, perforaciones, tratamientos de fracturas transversales,
apicogénesis e inducción de cierre apical, tanto en dientes vitales o sin vitalidad. (Lima,
2009)
Es un polvo blanco, inodoro que se forma a partir de la combustión del carbonato
cálcico obteniendo un óxido de calcio y anhídrido carbónico. Al someter a la
17
hidratación el primer compuesto se obtiene así el hidróxido de calcio. Al considerarse
un agregado poco estable puede convertirse en carbonato cálcico, al encontrarse en
contacto con gas carbónico del aire. (Canalda, 2006)
Sundqvist (1992), realizo un estudio donde comparo el hidróxido de calcio y el fenol
como medicaciones intraconducto temporal dando como resultado que el hidróxido de
calcio tras su aplicación en el conducto el 97 % no presento bacterias a diferencia del
fenol que solo presento los conductos libres de bacterias en un 66%. (Celis, 2004)
2.2.1.1 Características Químicas
El hidróxido de calcio es una base muy fuerte con un pH de 12.6 lo que le confiere
sus propiedades letales contra las bacterias, escasamente soluble en agua – 1.2g/L e
insoluble en alcohol. Las propiedades de este medicamento las confieren su capacidad
de disociación en iones calcio e iones de hidroxilo, los mismos que van actuar sobre los
tejidos y las bacterias, lo que explica sus propiedades biológicas y antimicrobianas.
(Estrela, 2005)
2.2.1.2 Pastas de Hidróxido de Calcio
Cuando el hidróxido de calcio se usa como medicación temporal intraconducto, se
emplean preparados que no fraguan, que se solubilizan y reabsorben en los tejidos
vitales; por lo que se lo utiliza combinado con diversos vehículos. Se denominó a estas
combinaciones pastas alcalinas por su elevado pH. El añadir otras sustancias tiene
varios objetivos como son facilitar el uso clínico, conservar sus propiedades biológicas,
optimizar su fluidez e incrementar la radioopacidad. (Canalda, 2006)
Fava y Sauders (1999) piensan que el vehículo más indicado debe:
1. Acceder la disociación lenta y gradual de los iones de calcio e hidroxilo.
2. Permitir una liberación lenta en los tejidos, con solubilidad baja en sus fluidos.
3. No presentar efectos adversos en la acción de favorecer la aposición de los
tejidos calcificados.
18
Se usan tres tipos de vehículos como son: acuosos (solución fisiológica, anestésicos,
solución salina) permiten una liberación de iones de manera rápida con relativa
solubilidad, viscosos (glicerina, polietilenglico y propilenglicol) reducen la solubilidad
y aumentan la liberación iónica, aceites (aceite de oliva, de silicona y ácidos grasos)
retardan aún más la liberación de iones prolongando así la efectividad. (Canalda, 2006).
Simon y cols (1995) sugieren que el mejor solvente además del acuoso es el
propilenglicol ya que posee una liberación de iones de Ca, así como el control del
cambio de pH.
Se realizó investigaciones sobre la capacidad de difusión en la dentina del
propilenglicol haciendo comparación con el agua destilada, se concluyó que la primera
sustancia tuvo una distribución más rápida y eficaz siendo un vehículo adecuado en la
medicación intraconducto; además se conoce que el propilenglicol es un líquido sin
color, de baja toxicidad, con actividad antimicrobiana sumamente beneficiosa, presenta
propiedad higroscópica que permite la absorción de agua, el cual garantiza una
liberación del medicamento por períodos prolongados. (Cruz, 2002)
2.2.1.3 Mecanismo de Acción
La acción de hidróxido de calcio se basa en la mencionada ya disociación iónica que
aumenta el pH ambiental en los tejidos con un efecto de inhibición del crecimiento
bacteriano y una acción que ayuda en la reparación hística. (Canalda, 2006)
Heithersay (1975) sugiere que los iones hidroxilo promueve una alcalinidad en el
área de acción invirtiendo así el pH del medio inflamado, claramente ácido; Siqueira &
Lopes (1999) proponen que además esto crea condiciones desfavorables para el
crecimiento bacteriano en función de la inhabilidad de las bacterias en subsistir a estas
condiciones. (Lima, 2009)
Estrela (2005), sugiere que sus efectos letales sobre las bacterias se deben a tres
principales mecanismos:
19
Daño a la membrana citoplasmática bacteriana: los iones hidroxilos inducen
la lipoperoxidación, resultando en la destrucción de los fosfolípidos,
componente estructural de la membrana citoplasmática, que desempeña un rol
esencial en la supervivencia celular.
Denaturación proteica: la alcalinidad provista por el Hidróxido de Calcio
induce la caída de las uniones iónicas, que sustentan la estructura proteica,
dichos cambios, resultan en la pérdida de la actividad biológica de las enzimas y
alteración del metabolismo celular.
Daño al DNA: los iones hidroxilos reaccionan con el DNA bacteriano e inducen
el fraccionamiento de las cadenas generando pérdida de estructura, la replicación
del DNA es inhibida y se provoca una consecuente actividad celular alterada.
2.2.1.4 Inhibición del crecimiento bacteriano
La liberación de iones hidroxilo aumenta el pH del hidróxido de calcio, ejerciendo de
esta manera su acción antibacteriana impidiendo el crecimiento de los microorganismos,
Kontakiotis y cols en (Canalda, 2006) sugieren que este efecto puede deberse a la
absorción de dióxido de carbono por parte del hidróxido de calcio, lo que es muy
importante para el desarrollo de muchas bacterias.
El hidróxido de calcio actúa sobre las bacterias anaerobias Gram negativas
hidrolizando los lipopolisacáridos que se encuentran en su pared celular de igual forma
va a anular la acción estimulante en los tejidos óseos y evitar su destrucción,
consecutivamente favoreciendo a la destrucción bacteriana. (Canalda, 2006).
En estudios realizados in vivo se demostró que el hidróxido de calcio tiene mayor
efecto de inhibición microbiana. Sjogren y cols y Orstavik y cols, señalaron que para
ejercer su acción este medicamento y sea eficaz es necesario que se encuentre en el SCR
por 1, en periodos menores no se observa ningún resultado. Holland y cols dejaron la
medicación por 2 semanas y consiguieron mejor reparación periapical. (Estrela, 2005)
20
Los iones de hidroxilo tienen la capacidad de difundirse a través de la dentina gracias
a los túbulos dentinarios y así ejercer su efecto antibacteriano a distancia. Foster y cols,
en (Canalda, 2006) realizaron una valoración sobre la transmisión de iones calcio a
través de la dentina radicular. Para lo cual se eliminó el barrillo dentinario, se colocó
hidróxido de calcio en pasta acuosa, para de esta forma conseguir una mayor
penetración del medicamento y sus iones en la superficie radicular, teniendo como
resultado que a los siete días presento una mayor difusión. Concluyendo así que el
hidróxido de calcio alcanza a las dos semanas su mayor incremento del pH. (Canalda,
2006)
2.2.1.5 Disolución del tejido pulpar
El hidróxido de calcio en pasta ayuda en la disolución de los restos del tejido pulpar
en condiciones de anaerobiosis. Cuando se emplea en varias sesiones este medicamento
es necesario trabajar con la ayuda de una sustancia irrigante como hipoclorito de sodio o
EDTA, para eliminar por completo los residuos de la pasta de hidróxido de calcio ya
que puede disminuirse la dureza de la dentina para evitar así un sellado del conducto
defectuoso. (Canalda, 2006)
2.2.1.6 Reparación Hística
Se ha empleado la pasta de hidróxido de calcio como medicación temporal en el
conducto radicular para estimular la aposición de tejidos calcificados que obliteren el
orificio apical cuando el ápice está incompleto en su formación, para beneficiar la
reparación periapical en los casos de periodontitis con osteólisis, en lesiones quísticas y
prevenir reabsorción inflamatoria radicular. (Canalda, 2006)
Aún no se tienen resultados convincentes de que el hidróxido de calcio, sea un
mediador en la reparación hística periapical a través de la neoformación tisular. Se ha
tratado de relacionar a esta propiedad con su capacidad antimicrobiana y establecer de
esta manera un ambiente en situaciones ideales para la reparación, lo que no sucedería
en presencia de contaminación. (Soekanto, 1996)
21
2.2.1.7 Resistencias bacterianas
El hidróxido de calcio como medicación intraconducto ha dado buenos resultados en
los conductos radiculares especialmente en casos de periodontitis apicales, aunque sigue
siendo un tema de debate su capacidad inhibitoria bacteriana. Stevens y Grossman
demostraron gracias a un estudio que el paramonoclorofenol alcanforado tenía mayor
capacidad antimicrobiana que el hidróxido de calcio. Bystrom y cols consiguieron un
mejor resultado in vivo colocando Ca(OH)2 por un mes, que puntas de papel
impregnadas con paramonoclorofenol. Se ha observado al Enterococcus faecalis ser una
bacteria resistente a esta medicación, ya que ha sido encontrada en los túbulos
dentinarios, después del transcurso de 10 días no era destruida. Para evitar las
resistencias bacterianas los autores sugieren combinar con solución acuosa o con
glicerina de hidróxido de calcio con una moderada cantidad de paramonoclorofenol
alcanforado. (Canalda, 2006)
Cohen & Hargreaves (2008) sugieren que, el hidróxido de calcio a pesar de presentar
un gran espectro bactericida, tiene un efecto reducido frente al enterococcus faecalis,
razón por la cual esta bacteria es encontrada con mucha frecuencia en los conductos
radiculares que presentan infecciones persistentes.
Se realizó un estudio para observar la acción bactericida del Hidróxido de calcio con
asociación a la clorhexidina con y sin Hidróxido de Calcio, donde se demostró que
todos los tratamientos presentaron un efecto antibacteriano contra el E. faecalis, siendo
el más eficiente el que presentaba clorhexidina. Por lo que se cree que la clorhexidina
puede ser eficaz para la terapia endodóncica. Aunque en el transcurso de 14 días de
iniciado el tratamiento se observaron colonias de E. faecalis, lo que demuestra la
persistencia de este patógeno. (Delgado, 2010)
Zerrella y otros (2005) señalaron en su estudio que la desinfección del sistema de
conductos radiculares con fracaso endodóncico tratados con clorhexidina 2% e
Hidróxido de Calcio tiene similar acción al Hidróxido de Calcio acuoso. Por lo que no
se encontró diferencias estadísticas entre los dos tipos de sustancias. No se logró una
22
limpieza total, pero si se observó con éxito la desinfección de E. faecalis al usar el
Hidróxido de Calcio en combinación con clorhexidina 2%.
2.2.2 Propóleo
El propóleo es una sustancia resinosa, de consistencia pegajosa, de color oscuro de
los árboles y plantas silvestres que las abejas Apis mellífera adultas recolectan,
producen y recubren a sus colmenas con una capa delgada para garantizar la total
asepsia de la colmena y prevenir así cualquier tipo de infección dentro de la misma,
gracias a su propiedad antibacteriana y de igual manera proteger de invasores. (Marielsa
Gil, 2012)
La palabra própolis deriva del griego pro, para o en defensa, y polis, la ciudad, es
decir, “defensa de la ciudad (o la colmena). (Ghisalberti, 1979)
El propóleo es un producto que se lo conoce desde hace mucho tiempo atrás por las
distintas poblaciones mundiales, gracias al desarrollo de la farmacéutica y terapias
fitoterápicas se dio renacimiento en su empleo. Y en la actualidad es de gran interés en
investigaciones ya que presenta grandes beneficios para la salud bucal. (Mahmoud,
2006)
Entre sus propiedades se encuentra principalmente la acción antibacteriana que es
mayor en bacterias Gram positivas, gracias a que en su estructura se encuentran
compuesto como son los flavonoides, ésteres, compuestos fenólicos, sesquiterpenos y
una variedad de ácidos aromáticos y grasos. (Park, y otros, 1998). Su potencial
antiinflamatorio es otra de sus propiedades importantes la cual cree que se presenta
gracias a la acción de estimular la inmunidad celular dando lugar así a la fagocitosis e
interrupción de la síntesis de las prostaglandinas. (Bankova V. , 2005)
2.2.2.1 Composición
El propóleo presenta una estructura compleja, la cual puede variar según las
diferentes regiones debido a la presencia de la diversa vegetación de cada zona, que se
23
ve influenciada por cambios tanto ambientales como temperatura, suelos así como
progresivos de la diferente flora. Aunque se sugiere que existen compuestos que se
mantienen estables y no varían en el propóleo extraído de las diferentes localidades
geográficas. (A Gómez, 2006)
En su composición se encuentra principalmente resinas que están en un 55% siendo
de esta manera el componente mayoritario, las ceras en un porcentaje del 30%, los
aceites en 10% y los granos de polen en 5%. (Grange, 1990). Los porcentajes de los
diferentes compuestos pueden variar gracias a diferentes factores como son la especie
de las abejas sintetizadoras, la flora de la zona geográfica y la estación de la
recolección. (Chaillou, 2004)
2.2.2.2. Composición Química
Algunos autores gracias a varios estudios plantean la existencia de alrededor de más
de 160 compuestos presentes en el propóleo encontrándose en mayor porcentaje
compuesto fenólicos en un 50% a los que se les confiere su acción farmacológica.
(Bankova V. , 2005). Investigaciones acerca de la composición química de propóleos
dan como resultado varios componentes químicos entre ellos se encuentran:
flavonoides, azúcares, ácidos grasos, ésteres y ácidos aromáticos, cetonas, aldehídos,
flavanonas, esteroides, flavonas. (Marcucci, 1995). Los flavonoides son considerados
los compuestos principales ya que estos son los que confieren al propóleo su actividad
antimicrobiana, encontrándose así las flavonas, flavononas y flavones. (Burdock, 1998)
(Asís, 1989)
Los flavonoides son pigmentos naturales que se forman por el aminoácido
fenilalanina, que es responsable de la coloración brillante de las flores. Se sitúan en las
células de las plantas verdes. Los flavonoides van a inhibir a varios microorganismos y
enzimas virales, entre ellas las proteasas y transcriptasa reversa, también tienen la
capacidad de destruir algunos significativos protozoos. (Havsteen, 2002)
Presenta diversas propiedades entre estas tenemos antiinflamatoria, captadora de
radicales libres, antimutagénica, antioxidante, moduladora de actividad enzimática
24
antialérgica. Así mismo, tiene un gran aporta en la salud ya que puede prevenir
patologías cardiacas como ataques al corazón y también actúa como agente
quimiopreventivo en pacientes que presentan cáncer. Presenta en las células animales
una baja toxicidad. Tienen la capacidad de eliminar radicales libres, inhabilita enzimas
específicas y puede figurar varios neurotransmisores y hormonas. (Konig, 1985)
En el propóleo hay la presencia de otras sustancias de vital importancia en su acción
biológica y que van a influir en ciertas reacciones celulares como son la lactosa, varios
polisacáridos, el ácido nicotínico y pantoténico. Estudios del propóleo manifiestan la
presencia de una gran variedad de vitaminas, sustancias proteicas, dichos compuestos
son los que explican la amplitud de sus propiedades biológicas de este compuesto
natural. (Bracho, 2003)
2.2.2.3 Características físico – químicas
El propóleo es considerado una sustancia muy adhesiva. Chaillou y otros (2004)
estudió varias características físicas de una clase de propóleo proveniente de zonas de
Argentina, en las que se pudo determinar:
1. Características organolépticas: se observó estructura homogénea al 100%,
exhibió una envoltura de trozos irregulares con brillo el 45%, presento un 30 %
con escases de brillo, y la presencia de fragmentos opacos. Estudios de solidez
revelaron que las muestras eran mínimamente blandas en un 45%, las partículas
duras se encontraron en un 40% y blandas fueron un 15%. El color, fue marrón
oscuro en el 65% de las ejemplares, y un marrón más claro con la presencia de
pigmentaciones amarillas en un 20% y solo un 10% con tintes castaños. Con
respecto al olor se encontró que el 75% fue resinoso, con un sabor picante.
2. Punto de fusión: se encontraron diversos factores según los lugares de
observación donde oscilaron entre los 64°C y 89.5°C, en promedio de 70°C. lo
que se concluye que su punto de fusión va de 60 º C a 70 º C, pudiendo alcanzar
los 100 º C.
3. Impurezas mecánicas, ceras y resinas: se encontró un 24,063% de impurezas
mecánicas, en un 44.770% están las resinas y en un 30.048% las ceras.
25
4. Índices de oxidación, compuestos fenólicos y flavonoides: en promedio se
obtuvo 9.8 segundos.
2.2.2.4 Mecanismo de acción
El propóleo presenta un mecanismo de acción muy complejo y poco entendido.
Amoros et al (1994) sugieren que la actividad en contra de los microorganismos se
encuentra ligada al sinergismo de los flavonoides (y otros fenoles). También pudieron
observar que usaba varios mecanismos para desempeñar la función antibacteriana como
inhabilitación de la síntesis proteica, lisis bacteriana parcial, y la desorganización de las
varias estructuras celulares como pared celular, membrana y citoplasma.
Se observó también que en presencia del propóleo se inhibía la división celular, por
lo que refirieron que también puede bloquear la replicación del ADN mediante el ARN
polimerasa e, indirectamente, afectando la división celular.
2.2.2.5 Propiedades y actividad biológica
Es de gran interés el propóleo en los campos de la medicina y la industria
farmacéutica, ya que presenta propiedades terapéuticas enunciadas a nivel mundial
como son antiinflamatorias, antivirales, antibacterianas (bactericidas y bacteriostáticas),
antiparasitaria, antifúngicas, anticolesterolémica, antialérgicas, antituberculosas,
citostáticas, desodorantes, epitelizantes, estimulantes de la inmunogénesis,
fitoinhibidoras, hipotensoras, analgésicas, anestésicas, termoestabilizadoras,
antioxidantes, antitóxicas,. (Quintana, Alonso, Díaz, & López, 1997)
Especialmente la característica biocida del propóleo experimentada en bacterias de
utilidad en medicina, muestra favorables efectos tanto in vitro como in vivo ya que
privó la proliferación de bacterias Gram positivas como Gram negativas (anaerobias y
aerobias). Siendo mayor su efecto contra las bacterias Gram positivo y levaduras, que
en las bacterias Gram negativo. (Drago, y otros, 2000)
26
Investigaciones, relacionan la dosis de propóleo con su acción bactericida y
bacteriostática por lo que se requieren concentraciones superiores de 2.8mg/ml para la
inhibición las bacterias aeróbicas Gram negativas. De esta manera se puede sugerir que
la mayoría de microorganismos pueden ser inhabilitados gracias a los extractos de
propóleos. Este extracto va disminuyendo el contenido de sus flavonoides conforme se
alarga su almacenamiento por lo que esto también minimiza su capacidad inhibitoria.
(Serra & Ventura, 2000)
Entre las actividades biológicas de los compuestos del propóleos se encuentran:
Pinocembrina: presenta una actividad antibacteriana, fungicida, y tiene una
utilidad como anestésico local. (Muñoz, y otros, 2001)
Galangina flavonoide que se presenta frecuentemente en propóleos, muestra
actividad antioxidante, modulador de actividad de enzimas metabólicas,
secuestrador de radicales libres y antimutagénica, capacidad antigenotóxica.
(Heo & Sohin, 2001)
Conferido: actúa sobre enzimas protectoras como la quinona y reductasa
convirtiéndose en un agente. (Jin, y otros, 2005)
Investigadores en Brasil ejecutaron una exploración para indagar la actividad
antibacteriana del propóleo en distintas bacterias de la cavidad bucal como es el
Streptococcus mutans, Streeptococcus sanguis y Actinomyces naeslundi, observando
inhibición de todas las bacterias analizadas. (Park, Antimicrobial Activity Of Propolis
On Oral Microorganisms, 1998). Se analizó a través de la concentración mínima
inhibitoria a propóleos de procedencia chilena y extranjera y su acción sobre bacterias
productoras de caries con lo que se demostró que existe una inhibición del
Streptococcus mutans. (Hwang, y otros, 2005)
Varios investigaciones realizadas in vitro para demostrar la influencia del propóleo
sobre la remineralización del esmalte dentario, aumenta de una manera notable el valor
del test de dureza de Vickers. (Giamalia, Steinberg, Grobler, & Gedalia, 1999)
27
Entre las propiedades del propóleo se encuentra la antimicótica, Oliveira y otros,
(2006) sugiere que esta acción es principalmente en varias especies de Candida y de
Trichosporon. (Peña, 2008). Otros componentes del propóleo como los fenólico así la
quercetina y la naringenina, el como el ácido cafeico y el éster del ácido fenil-etil
cafeico, son los responsable de propiedad antiinflamatoria. (Mirzoeva & Calder, 1996)
2.2.2.6 Dosis Terapéutica
Se recomienda una dosis para el uso humano vía oral de 5mg por cada kilogramo de
peso de la persona al día y para usos externos como son cutáneos a placer y necesidad
de cada paciente. Su uso no presenta contraindicaciones.
2.2.2.7 Usos en Odontología
Se han realizado varios estudios relacionados al campo de la odontología entre los
que se encuentra en la endodoncia.
2.2.2.7.1. Uso en Endodoncia
Se ha observado varias investigaciones donde se da un amplio uso del propóleo en
afecciones de la cavidad bucal y en endodoncia, ya que se ha verificado que en los
conductos infectados pueden vivir un grupo de microorganismos que son susceptibles a
la acción del própolis. Además es un compuesto de producción nacional, que al
compararlo con las sustancias tanto irrigadoras como medicamentos intraconducto de
elección en el mundo que son la clorhexidina, el hidróxido de calcio y el hipoclorito de
se obtienen similares resultados y a bajos costos. (Gutiérrez & Romero, 1999)
El hidróxido de calcio (Ca(OH)2) se ha convertido en el medicamento de elección en
tratamientos endodóncicos, pero Tellería y otros (2003) seleccionaron un grupo de
pacientes para tratarlos con un propóleo acuoso al 22% en tratamiento endodóncicos y
otro grupo de personas fue sometido a un tratamiento con hidróxido de calcio,
observando así k a los 21 días el 82.2% de los pacientes tratados con la primera
sustancia presentaron conductos listos para ser obturados mientras que el grupo de
28
estudio dos presento el 85.7% podían ser obturados y al transcurrir 28 días de iniciado
el procedimiento el 92,8% del grupo de estudio tenían conductos óptimos para obturar a
diferencia del grupo control que el 97,1%, sugiriendo de esta manera que la sustancia
usada en el grupo de estudio es decir el Propóleo Acuoso al 22% es una solución muy
buena en la terapia endodóncica, teniendo similares resultados al Ca(OH)2. (Tellería &
Pacheco, 2003)
Se realizaron investigaciones para el descubrimiento de otras sustancias
antibacterianas para el tratamiento de conductos radiculares, en el que se observó la
acción del hidróxido de calcio y propóleo sobre fibroblastos que se encuentran en el
periodonto y pulpa dentaria, el que obtuvo como resultado que el propóleo presenta
menor toxicidad y es en un 75% más viable celular. (Al-Shaher, Wallace, Agarwal,
Bretz, & Baugh, 2004)
Varios investigadores efectuaron estudios para determinar el efecto antiséptico de
varias sustancias entre ellas el propóleo hidroalcohólico al 4%, alcohol al 70%, agua,
cloranfenicol sódico al 10%, para esto se tomó 200 exámenes bacteriológicos de los
conductos radiculares, de los que se obtuvo alrededor de 77 cepas bacterianas, se
procedió a realizar cultivos y someterlos a las diferentes sustancias mencionadas para
observar su eficiencia mediante halos de inhibición. Los resultados que se obtuvieron
son la solución de propóleo tuvo un 62% de sensibilidad frente al grupo viridans, 85%
al Lactobacillus sp y al Estreptococcus aureus un 85%. (Gutiérrez S. , Romero, Hidalgo,
Pérez, & Díaz, 1999)
Ferreira y col, (2007) obtuvieron similares resultados al observar que el propóleo en
solución alcohólica fue efectivo de igual manera k otros medicamentos intraconductos
contra bacterias como son: Actinomyces israelii, Fusobacterium nucleatum, Clostridium
perfringes, Prevotella nigrescens.
Kayaoglu y col. (2011) realizo la comparación del hidróxido de calcio, clorhexidina
y dos extractos de propóleo sobre el Enterococcus faecalis. Con el que demostró que el
propóleo ejerció una notable acción antibacteriana, no obstante no superior a la
clorhexidina.
29
Así mismo Madhubala y col. (2011) realizaron un estudio sobre la efectividad
antimicrobiana de la pasta triantibiótica y extracto etanólico de propóleo en conductos
radiculares que fueron infectados con E. faecalis. Sus resultados fueron que en un
período de dos días el E. faecalis fue más susceptible al propóleo, y al transcurrir siete
días las dos sustancias tuvieron el mismo efecto. Por lo que proponen que se realice más
estudios en el área clínica para obtener resultados más precisos sobre el efecto
antibacteriano.
En otros estudios se propuso que se empleara como un irrigante al propóleo en los
procesos de preparación de los conductos radiculares en los procesos biomecánicos,
para lo cual se utilizó la bacteria E. coli obteniendo buenos resultados de inhibición.
Aun así no es capaz de bloquear endotoxinas bacterianas, por lo que sugieren que el
medicamento de elección sigue siendo el Hidróxido de calcio. (Velera y otros, 2010)
2.2.2.8 Efectos Adversos
El propóleo presenta un índice bajo en reacciones adversas y cuando se presentan son
relacionadas con reacciones alérgicas de hipersensibilidad de tipo dermatitis de
contacto. Solo se ha determinado que un grupo mínimo de personas presentan algún tipo
de reacción alérgica o sensibilidad frente al propóleo y sus componentes u otras
sustancias apícolas. (Lee, Lee, You, Park, & Son, 2006). Por lo cual es importante
realizar pruebas de sensibilidad antes de suministrar o iniciar un tratamiento con
propóleo. Las personas que presentan este tipo de alergia son aquellas que no toleran
abejar o a sus picaduras, o tienen afecciones respiratorias. (Hsu, Chiang, Weng, Chen,
& Yuan, 2004)
Estudios sugieren que el componente 3-metil-2-butenil cafeato y feniletil cafeato,
presente en la composición del propóleo es el causante a estas reacciones alérgicas.
Aunque no se puede descartar la posibilidad de la presencia de más sustancias
sensibilizantes. (Fernandez, y otros, 2004)
30
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
3.1 Tipo de Investigación
Este proyecto de investigación, es experimental ya que se encuentra constituido por
un conjunto de actividades metódicas y técnicas las cuales tienen como objetivo
conseguir información y datos necesarios acerca del tema a investigar y el problema a
resolver.
3.2. Diseño de la Investigación
Cuasi experimental: Se manipula deliberadamente al menos una variable
independiente para ver su efecto y la relación con una o más variables dependientes. Las
muestras no son asignadas al azar a los grupos, ni emparejados; sino que dichos grupos
ya estaban formados antes del experimento, son grupos intactos (Hernández, 1991).
El diseño experimental utilizado para esta investigación será el de Series cronológicas
de un solo grupo:
Ge: O1A – O1B– O1C – O1 D
Dónde:
Ge= Grupo experimental (bacterias Enterococcus faecalis)
O1= Observación a las 24h
A= Extracto de Propóleo al 10%
B = Extracto de Propóleo al 20%
C= Hidróxido de calcio
3.3. Población y Muestra
31
El tamaño de la población de estudio es indeterminada, por ello el tamaño de la
muestra se calcula en función de la fórmula:
Dónde:
Z= valor de 1,96 (95% de confiabilidad)
p: proporción de individuos que poseen en la población la característica de estudio. Este
dato es generalmente desconocido y se suele suponer que p=q=0.5 que es la opción más
segura.
q: proporción de individuos que no poseen esa característica, es decir, es 1-p.
p=q= 0,5 * 0,5 = 0,25 probabilidad de que suceda el evento
e = es el margen de error de la muestra (5% al 15%)
n = 61 al 12,5% del margen de error
Las muestras estarán constituidas por 20 cajas petri de cultivos bacterianos de
Enterococcus Faecalis sometidas a las mismas condiciones, en las cuales se colocaran 3
discos de papel filtro con los diferentes sustancias antibacteriales, por lo que
obtendremos 20 muestras para cada solución medicamentosa.
3.3.1. Criterios de inclusión
Cultivos de bacterias Enterococcus faecalis provenientes de la cepa ATCC
29212 que cumplan todos los requisitos de un medio ideal.
Se utilizará Hidróxido de calcio en pasta de la marca Ultradent.
El propóleo se utilizará en solución alcohólica en concentraciones de 10 y 20%.
2
2 *
e
PQZn
32
3.3.2. Criterios de exclusión
Cultivos que no cumplan los requerimientos normales como disponibilidad de
nutrientes, consistencia adecuada del medio, condiciones adecuadas de
humedad, luz ambiental, pH adecuado, Temperatura, Esterilidad.
Hidróxido de calcio de diferente casa comercial o en otra presentación.
Extractos de propóleos que no estén entre las concentraciones establecidas.
3.4. Variables
3.4.1. Variable independiente
Medicamentos intraconducto para el tratamiento endodóncico.
Soluciones de Hidróxido de calcio puro
Solución de propóleo
3.4.2 Variable Dependiente
Efecto antibacteriano sobre la bacteria Enterococcus Faecalis
3.4.3. Operacionalización de variables
VARIABLES CONCEPTO INDICADORES EVALUACIÓN ESCALA
DEPENDIENTE
Enterococcus faecalis
Enterococcus
faecalis es un
coco Gram
positivo,
anaerobio
Halos de
inhibición que son
zonas alrededor de
un disco de
antibiótico en un
Evaluación
(medida con que
aparato, regla
milimétrica)
Numérica
(mm)
33
facultativo, no
presenta
movilidad,
puede
presentarse solo
o en cadenas, el
tamaño oscila
entre 0,5 y
0,8um; crece a
una temperatura
de 35°C.
Tolerante al
cloruro de sodio
al 6.5% y a sales
biliares. Se
relaciona a
infecciones
persistentes y a
fracasos
endodóncicos.
(Pardi, Guilarte ,
Cardozo, &
Briceño, 2009)
antibiograma en el
que no se produce
crecimiento
bacteriano en una
placa de agar
inoculada con una
bacteria
INDEPENDIENTE
MEDICAMENTOS
INTRACONDUCTOS
Sustancias
empleadas para
la desinfección
del sistema de
conductos
radiculares
especialmente
frecuentes en la
zona apical.
(Canalda Shali &
Brau Aguadé,
2006)
Solución prepara
por un experto,
formulación
EVALUACIÓN
(formula química
del compuesto)
NOMINAL
1:
Hidróxido
de Calcio
2: Extracto
de propóleo
al 10%
3: Extracto
de propóleo
al 20%
4: Agua
destilada
34
3.5. Procedimiento
3.5.1. Evaluación de la susceptibilidad del Enterococcus faecalis frente al extracto
de propóleo al 10 y 20% e Hidróxido de calcio
Para la realización de todos los procedimientos se utilizó una cámara de bioseguridad
que garantiza la esterilidad del área de trabajo al igual que el uso de un mechero
eléctrico. Las sustancias empleadas en este estudio son Hidróxido de calcio en pasta
(Ultracal de la casa comercial Ultradent), Extracto de Propóleo al 10 y 20% previamente
preparados bajo normas adecuadas. (Figura 1), (Figura 2).
Figura 1 Cámara de bioseguridad y mechero eléctrico (material e instrumental
estéril)
Fuente: Patricia Gonzalón
35
Figura 2 Hidróxido de calcio en pasta (UltraCal XS)
Fuente: Patricia Gonzalón
3.5.2. Preparación del extracto de propóleo
Para la preparación del extracto de propóleo, se adquiere las muestras de propóleo en
un centro de apicultura en la provincia de Imbabura, para posteriormente ser preparado
en los laboratorios de la Universidad Técnica del Norte siguiendo el siguiente protocolo:
se procedió al almacenar el Propóleo en bolsas atóxicas transparentes (las cuales se usan
para la conservación de los alimentos), se realizó la eliminación de las impurezas
presentes, se congeló el propóleo por 48 horas para facilitar su trituración con la ayuda
de un mortero, se pesó la cantidad necesaria para obtener la concentración del extracto
final, en este caso 600 gramos y 1200 gramos para la elaboración de extractos al 10% y
20% respectivamente.
El propóleo una vez pesado se colocó en frascos ambar de igual manera se añadió
1200ml y 2000ml de solución etanólica al 70% (al 96% consumible), se dejó en reposo
por 2h, se calentó en un baño de agua a una temperatura de 38°C para obtener una
mejor disolución del propóleo, posteriormente se dejó macerar al extracto de propóleo
por 15 días en un lugar seco y fresco, alejado de la luz, se realizaba una agitación en el
día, finalizado el proceso de la maceración se procedió a filtrar las soluciones con la
ayuda de papel filtro, obteniéndose de esta manera un extracto de Propóleo al 10%
(concentración 100ug/ml) y Propóleo al 20% (concentración 200ug/ml). (Figura 3).
36
Figura 3 a. Extracto de propóleo al 10% b. Extracto de propóleo al 20%
Fuente: Patricia Gonzalón
3.5.3. Obtención de la muestra:
Se utilizará la cepa de Enterococucs Faecalis ATCC 29212.
3.5.4. Siembra de la cepa Enterococcus faecalis ATCC
Se prepararon primeramente los medios de cultivo, en nuestro caso un medio de agar
Nutritivo y un caldo de Tripticasa soja (TSB) para lo cual se pesó en una balanza
analítica, 5.9gr de agar y 250ml de agua destilada los cuales fueron colocados en frascos
de vidrio de 250ml; para la obtención del caldo TSB igual se procedió a pesar 7.5gr y
250ml de agua destilada colocados en un frasco de vidrio; posteriormente se colocaron
los frascos en el autoclave a 121°C por 2h.15min, se dejaron enfriar y consecutivamente
se colocó 12ml del agar Nutritivo en cajas Petri y de igual forma el caldo TSB se instaló
en tubos de ensayo. (Figura 4, a-b).
37
a b
Figura 4: a. colocación de la cepa de Enterococcus faecalis en TSB b. incubación
Fuente: Patricia Gonzalón
Posteriormente se procedió a colocar la cepa de Enterococcus faecalis ATCC en un
tubo de ensayo en caldo TSB se llevó a la incubadora por 3 horas a 37°C hasta observar
turbidez que es un indicador de crecimiento bacteriano. (Figura 5).
Figura 5: Observación de la turbidez (crecimiento bacteriano)
Fuente: Patricia Gonzalón
Una vez obtenida dicha turbidez se tomó una asa de siembra previamente se flameo
en el mechero eléctrico hasta que alcance un rojo incandescente, se dejó enfriar por
38
unos segundos y se introdujo en el tubo de ensayo y se tomó una pequeña muestra del
cultivo; se transfirió el inóculo a otro medio de cultivo estéril (agar Nutritivo ya
preparado) y se realizó la siembra en forma de zigzag sobre la superficie. Se incubó por
24 horas a 37°C. (Figura 6) (Figura 7).
Figura 6: Toma de muestra del cultivo de TSB
Fuente: Patricia Gonzalón
Figura 7: siembra en Agar Nutritivo
Fuente: Patricia Gonzalón
39
3.5.5. Preparación de los discos de papel filtro
Se tomaron varias hojas de papel filtro las que se perforaron en discos de 5mm de
diámetro con ayuda de una perforadora, fueron consecutivamente colocados en un
frasco ámbar para ser llevadas a la autoclave. (Figura 8).
Figura 8: preparación de los discos de papel filtro
Fuente: Patricia Gonzalón
3.5.6. Determinación de la sensibilidad del Enterococcus faecalis ATCC, a través
de halos de inhibición
3.5.6.1. Preparación del medio Mueller Hinton
Para la realización de esta prueba se utilizó el método de difusión en agar en el que
la bacteria inoculada se enfrenta a una solución antibacteriana. Para cual preparamos
primeramente medios de cultivo Mueller Hinton ya que ha sido recomendado
universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos por Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI) es un medio no selectivo, no diferencial con un
pH de 7.1. Se suspendió 18.5gr de polvo en 500ml de agua destilada, se calentar y se
hirvió durante 1 minuto para disolución total con la ayuda de un microondas. Luego se
llevó a autoclavar a 121°C durante 2 horas con 15 minutos, se distribuyó en cajas de
40
Petri estériles, en volumen apropiado para que el espesor sea de 4 mm sobre una
superficie horizontal y se rotuló cada caja con el número de cada medicamento. (Figura
9) (Figura 10) (Figura 11).
Figura 9: preparación agar Mueller Hinton
Fuente: Patricia Gonzalón
Figura 10: medición del pH del agar Mueller Hinton
Fuente: Patricia Gonzalón
41
Figura 11: Colocación del agar en cajas petri
Fuente: Patricia Gonzalón
3.5.6.2. Traspaso de la bacteria al medio de Mueller Hinton
Para ejecutar este procedimiento se empleó solución salina estéril en la misma que se
agregó colonias de la bacteria Enterococcus faecalis ATCC sembrada en el agar
nutritivo con la ayuda de una asa estéril, esta solución con colonias bacterianas se ajustó
a una turbidez equivalente al estándar 0.5 de McFarland. (Figura 12) (Figura 13) (Figura
14).
Figura 12: Toma de colonias del agar Nutritivo
Fuente: Patricia Gonzalón
42
Figura 13: Colocación de colonias en solución salina estéril
Fuente: Patricia Gonzalón
Figura 14: ajuste a la escala McFarland
Fuente: Patricia Gonzalón
Una vez obtenida la suspensión se tomó un hisopo de algodón estéril y se lo
sumergió y se retiró el exceso presionando en la pared interna del tubo que lo contiene;
consecutivamente se procedió a inocular la superficie de la placa de agar de Mueller
43
Hinton en toda la superficie en tres direcciones y al final por el perímetro externo del
agar. Se dejó secar por 5 minutos. (Figura 15) (Figura 16).
Figura 15: Toma de la muestra con un hisopo de algodón
Fuente: Patricia Gonzalón
Figura 16: inoculación de la muestra en el agar Mueller Hinton
Fuente: Patricia Gonzalón
Se procedió a embeber los discos de papel filtro con cada solución (Extracto de
propóleo al 10%, 20 % y agua destilada que es un control negativo) con una micropipeta
de 10ml, a excepción del hidróxido de calcio ya que su presentación es pasta la cual se
44
colocó primeramente en un porta objetos para facilitar la colocación en el disco de
papel. (Figura 17) (Figura 18) (Figura 19).
Figura 17: toma de un disco de papel filtro
Fuente: Patricia Gonzalón
Figura 18: Embebimiento de los discos e papel filtro con micropipeta
Fuente: Patricia Gonzalón
45
Figura 19: colocación de la pasta de Hidróxido de calcio
Fuente: Patricia Gonzalón
Posterior a esto se colocó cada disco en la caja Petri ubicado en el número rotulado
para cada sustancia es decir a una distancia mayor de 15 mm cada uno, por lo que un
medio presenta 4 discos; este procedimiento se repitió 20 veces; las placas se dejaron 15
minutos a temperatura ambiente para que se difunda el medicamento. (Figura 20)
(Figura 21).
Figura 20: rotulación de las cajas petri
Fuente: Patricia Gonzalón
46
Figura 21: Colocación de los discos de papel con las diferentes sustancias (1.
Hidróxido de calcio, 2. Extracto de propóleo al 10%, 3. Extracto de propóleo al
20%, 4. Agua destilada control negativo)
Fuente: Patricia Gonzalón
Transcurrido este tiempo se llevaron a la incubadora todas muestras que se pusieron
en forma invertida por 24 horas a 37°C. (Figura 22).
Figura 22: Muestras en la incubadora
Fuente: Patricia Gonzalón
47
3.5.6.3 Lectura de los halos de inhibición
Los halos de inhibición son zonas alrededor de un disco antibacteriano en un
antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de agar
inoculada con la bacteria. Es una medida de la potencia de la sustancia antibacteriana
frente al microorganismo. Para este caso se realizó la medición en un tiempo de 24
horas de colocados los discos de papel filtro con la ayuda de una regla milimetrada.
(Figura 23) (Figura 24).
Figura 23: Formación de Halos de Inhibición
Fuente: Patricia Gonzalón
48
Figura 24: Medición de los halos de inhibición
Fuente: Patricia Gonzalón
3.5.6.4 Recolección de datos
Los datos recolectados fueron analizados a través de procesos estadísticos
específicos, mediante pruebas de ANOVA y Test de Tukey.
49
CAPÍTULO IV
RESULTADOS
4.1 Análisis de resultados
Los resultados fueron tratados en una base de datos en el programa Excel de
Microsoft, con los datos referidos a la variación de medidas de los halos de crecimiento
de cada muestra, los mismos que se presentan en las siguientes tablas, elaboradas
mediante el paquete estadístico SPSS, con el fin de permitir la elaboración de tablas
gráficas y análisis de datos mediante las pruebas de ANOVA y Test de Tukey para
muestras pareadas. Se tomaron 20 cajas Petri con cultivos de la bacteria Enterococcus
faecalis en las cuales se colocó 4 discos con Hidróxido de calcio, Extracto de propóleo
al 10% y 20% y agua destilada como control negativo; en el siguiente cuadro se
describe los resultados en medición de los halos de inhibición. (Tabla 1).
CAJAS/
MUESTRAS
SUSTANCIAS
HIDRÓXIDO
DE CALCIO
EXTRACTO
DE
PROPÓLEO
AL 10%
EXTRACTO
DE
PROPÓLEO
AL 20%
AGUA
DESTILADA
(control
negativo)
1 9mm 15mm 13mm 0mm
2 9mm 14mm 12mm 0mm
3 8mm 14mm 11mm 0mm
4 9mm 16mm 14mm 0mm
5 9mm 15mm 13mm 0mm
6 8mm 13mm 12mm 0mm
7 9mm 14mm 11mm 0mm
8 8mm 16mm 12mm 0mm
9 10mm 15mm 13mm 0mm
10 10mm 14mm 12mm 0mm
11 8mm 17mm 14mm 0mm
12 9mm 15mm 12mm 0mm
50
13 8mm 13mm 12mm 0mm
14 10mm 14mm 13mm 0mm
15 8mm 13mm 13mm 0mm
16 9mm 15mm 11mm 0mm
17 9mm 16mm 12mm 0mm
18 8mm 17mm 14mm 0mm
19 8mm 14mm 12mm 0mm
20 8mm 15mm 12mm 0mm
Tabla 1: Resumen de halos de inhibición expresados en milímetros.
Fuente: Datos de la investigación
4.1.1. Análisis Estadísticos
Los resultados estadísticos demuestran que el medicamento con mayor media es el
extracto de propóleo 10% con su media de 14.8, propóleo 20% con una media 12.4 y
del hidróxido de calcio su media de 8.7, siendo los propóleos los que presentan mayor
efecto antibacteriano contra la Enterococcus faecalis. (Tabla 2).
51
Tabla 2: Estadísticos descriptivos
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
Descriptivos
MEDIDA
N Media Desviación
típica
Error
típico
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Mínimo Máximo
Límite
inferior
Límite
superior
HIDRÓXIDO DE
CALCIO
20 8,7000 0,73270 ,16384 8,3571 9,0429 8,00 10,00
PROPÓLEO AL
10%
20 14,7500 1,20852 ,27023 14,1844 15,3156 13,00 17,00
PROPÓLEO AL
20%
20 12,4000 0,94032 ,21026 11,9599 12,8401 11,00 14,00
Total 60 11,9500 2,68975 ,34725 11,2552 12,6448 8,00 17,00
52
Las Hipótesis a demostrar son:
Ho: Hipótesis inicial = Los promedios de los diámetros de los halos de las
bacterias al aplicar el medicamentos son estadísticamente similares
Ha: Hipótesis alternativa= Los promedios de los diámetros de los halos de las
bacterias al aplicar el medicamentos NO son estadísticamente similares
4.1.1.1. Prueba de Anova
Se muestra Significancia = 0,000 < 0,05 (5%), por lo que se rechaza Ho, que
refiere que promedios de los diámetros de los halos de las bacterias al aplicar los
medicamentos son estadísticamente similares; por lo que se toma a la Ha como aceptada
donde los promedios de los diámetros de los halos de las bacterias al aplicar los
medicamentos NO son estadísticamente similares. (Tabla 3).
Tabla 3: Resultados Anova
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
ANOVA de un factor
MEDIDA
Suma de
cuadrados
gl Media
cuadrática
F Sig.
Inter-
grupos
372,100 2 186,050 193,696 0,000
Intra-
grupos
54,750 57 ,961
Total 426,850 59
53
4.1.1.2. Test de Tukey
El test de Tukey realiza comparaciones por pares lo que permite verificar cuales
dimensiones de los halos son similares. (Tabla 4).
Tabla 4: Test Tukey
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
Según Tukey todos los diámetros de los Halos son distintos: los mayores halos son
los del Propóleo al 10%, le sigue los del Propóleo al 20% y los más pequeños el
hidróxido de calcio. (Tabla 5).
Comparaciones múltiples
Variable dependiente: MEDIDA
HSD de Tukey
(I)
MEDICAMENTO
(J)
MEDICAMENTO
Diferencia
de medias
(I-J)
Error típico Sig.
Intervalo de confianza
al 95%
Límite
inferior
Límite
superior
HIDRÓXIDO DE
CALCIO
PROPÓLEO AL
10%
-6,05000 ,30992 0,000 -6,7958 -5,3042
PROPÓLEO AL
20%
-3,70000 ,30992 0,000 -4,4458 -2,9542
PROPÓLEO AL
10%
HIDRÓXIDO DE
CALCIO
6,05000 ,30992 0,000 5,3042 6,7958
PROPÓLEO AL
20%
2,35000 ,30992 0,000 1,6042 3,0958
PROPÓLEO AL
20%
HIDRÓXIDO DE
CALCIO
3,70000 ,30992 0,000 2,9542 4,4458
PROPÓLEO AL
10%
-2,35000 ,30992 0,000 -3,0958 -1,6042
54
Tabla 5: Resultados Tukey
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
4.1.1.3. Prueba de Kruskal –wallis
Determina que las tres muestras provienen de poblaciones diferentes, el resultado es
muy similar al obtenido con el Anova. (Tabla 6).
Tabla 6: Resultados Kruskal-Wallis
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
MEDIDA
HSD de Tukey
MEDICAMENTO N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3
HIDRÓXIDO DE
CALCIO
20 8,7000
PROPÓLEO AL 20% 20 12,4000
PROPÓLEO AL 10% 20 14,7500
Sig. 1,000 1,000 1,000
55
Se realiza una agrupación de las medias de los diferentes medicamentos utilizados en
los que observa al propóleo al 10% es más efectivo sobre el Enterococcus faecalis ya
que presenta una media mayor a diferencia de la media más baja que es del hidróxido de
calcio. (Figura 25).
Figura 25: Resultados promedios
Fuente: Patricia Gonzalón
Elaboración: Ing. Jaime Molina
8,7
14,8
12,4
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
16,0
HIDROX. CALCIO EXTR. PROP 10% EXTR. PROP 20%
PROMEDIO ENTRE SUSTANCIAS
56
4.2 Discusión
En esta investigación proyectada al estudio comparativo in vitro de la eficacia
antimicrobiana del Hidróxido de calcio y el extracto de Propóleo sobre el Enterococcus
faecalis; se evidenció que el extracto tuvo mayor actividad antimicrobiana, cuyos
resultados fueron tomados con la medición de los halos de inhibición presentes en los
cultivos bacterianos formados a las 24 horas de incubación los cuales estadísticamente
mostraron medias de 14.8mm para el extracto de propóleo al 10%, 12.4mm el extracto
de propóleo al 20% y para el hidróxido de calcio de 8.7mm.
Estudios previos realizados por varios investigadores como Kayaoglu y otros en
2011 investigaron la acción antibacteriana de dos extractos de propóleo, el hidróxido de
calcio y la clorhexidina sobre el Enterococcus faecalis teniendo como resultado que los
medios de cultivos que tenían el extracto de propóleo poseen un trascendental efecto
antimicrobiano superior al hidróxido de calcio pero no fue superior a la clorhexidina,
concordando de esta manera con el presente estudio donde se evidencio una mejor
acción de los extractos de propóleo ya que los dos fueron realizados en medios de
cultivos.
De la misma manera Madhubala y otros en el año 2011 realizaron un estudio en
conductos radiculares infectados con E. faecalis en el cual se comparó la eficacia
antibacteriana del extracto de propóleo e hidróxido de calcio los que demostraron que el
propóleo tiene una mayor acción antibacteriana que el hidróxido de calcio en un periodo
de 2 días, los cuales refieren que se analice al extracto de propóleo y su actividad
antibacteriana en la práctica clínica en vivo para garantizar un resultado previsible en la
terapéutica endodóncica, corroborando de esta forma la investigación realizada donde
los extractos de propóleos en el lapso de 1 día mostraron mejor eficacia que el hidróxido
de calcio, ambos estudios se efectuaron de manera in vitro.
Tellería y otros en el 2003 emplearon un propóleo acuoso al 22% como tratamiento
pulporadicular y lo compararon contra el Ca(OH)2 observando que a los 21 días del
tratamiento, el 82,2% (54/70) de los pacientes tratados con el propóleo acuoso al 22%
exhibieron sus conductos en condiciones de ser obturados, a diferencia con el 85,7%
57
(60/70) tratados con Ca(OH)2, y a los 28 días del tratamiento el 92,8% (65/70) de los
pacientes tenían sus conductos listos para ser obturados sin presentar casos de
empeoramiento o alergia al medicamento con respecto al 97,1% (68/70) del grupo
control (Ca(OH)2); indicando que el Propóleo Acuoso al 22% es un producto poderoso
en el tratamiento endodóncico ya que demuestra similares resultados al Ca(OH)2, lo que
difiere de la presente investigación ya que no se presenta similitud de acción
antibacteriana entre el extracto de propóleo en las distintas concentraciones con el
Ca(OH)2, este puede deberse a que el extracto de própoleo empleado por los autores fue
destilado con agua mientras que en la presente investigación se utilizó para su
destilación etanol, además que los estudios fueron realizados en diferentes campos
como son in vivo e in vitro.
Solórzano (2011) en su investigación demostró que el hidróxido de calcio presenta
una mayor acción antibacteriana a las 24 horas y 7 días de observación a diferencia del
extracto acuoso de propóleo al 0.37% el cual a las 72 horas expuso más eficacia
antibacteriana, no concordando así con la presente investigación ya que el propóleo a las
24 horas indicó mayor efecto antibacteriano que el hidróxido de calcio, se sugiere que la
discrepancia de los resultados podría deberse a las diferentes concentraciones del
extracto de propóleo utilizadas en los estudios, además que el solvente del propóleo
empleado en la actual investigación es el alcohol y en el otro un acuoso.
Por otra parte Delgado y col. (2010) valoraron el hidróxido de calcio y clorhexidina
frente al E. faecalis en el que se comprobó que el hidróxido de calcio muestra una
menor eficacia antibacteriana por lo que se evidenciaron colonias de E. faecalis viables
a los 14 días de iniciado el tratamiento, donde se demostró la persistencia del
microorganismo, por otro lado Canalda (2006), Cohen (2008), Zerrella y otros (2005),
sugieren que, el E. faecalis es una bacteria resistente al hidróxido de calcio ya que ha
sido encontrada en los túbulos dentinarios, después del transcurso de una semana e
incluso mayor a 10 días, lo que se corrobora con la investigación expuesta donde se
observa resistencia del microorganismo a este medicamento ya que presenta
estadísticamente la media más inferior.
58
De esta misma forma Tanriverdi (1997) coincide con el resultado de esta
investigación en que períodos cortos de tiempo de aplicación de hidróxido de calcio son
ineficaces para una desinfección apropiada del sistema de conductos radiculares ya que
en el estudio planteado el hidróxido de calcio en los cultivos de Enterococcus faecalis
expuestos a las 24 horas, los halos de crecimiento experimentan un promedio de 8.7mm
determinando resistencia bacteriana, a comparación del extracto de propóleo el que
demuestra ser más eficaz, ambos estudios fueron realizados en medios de cultivo.
Eguizábal y col (2007), en su estudio analizaron extractos de própoleos a distintas
concentraciones sobre un grupo de bacterias Gram positivas en el que sugieren que el
efecto antimicrobiano de esta sustancia muestra una mayor tendencia de actividad
inversamente proporcional a su concentración, obteniendo así resultados similares en el
estudio expuesto en el que el extracto de propóleo al 10% presenta una mejor actividad
que el propóleo al 20%, los cuales estadísticamente no son similares, en ambas
investigaciones se utilizaron extractos etanólicos y en medios in vitro, por lo que se cree
la similitud de resultados.
Drago y cols (2000), Serra y Ventura (2000), sugieren que especialmente la actividad
biocida del propóleo experimentada en varios casos tanto in vitro como in vivo frente a
diversas bacterias tiene un mayor predomino en bacterias Gram positivo y levaduras,
que en las bacterias Gram negativas, de esta manera se puede afianzar con el estudio
expuesto que el extracto de propóleo tiene una gran efectividad antibacteriana frente al
E. faecalis ya que este microorganismo pertenece al grupo de las bacterias Gram
positivas.
Confirmando de esta manera la hipótesis planteada donde el efecto antibacteriano del
extracto de propóleo en sus distintas concentraciones es más efectivo que el hidróxido
de calcio en los cultivos in vitro del Enterecoccus faecalis. Confirmando de igual forma
su gran propiedad antibacteriana especialmente en bacterias Gram positivas por lo que
se sugiere su empleo en procedimientos clínicos endodóncicos donde exista la
persistencia de microflora bacteria ya que además cuenta con una variedad de
propiedades de beneficio para la salud oral.
59
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1. Conclusiones
Los resultados de la presente investigación permiten concluir lo siguiente:
La zona de inhibición antibacteriana del hidróxido de calcio frente a la bacteria
Enterococcus faecalis medida a las 24 horas fue menor en las 20 muestras de
cultivo en comparación a la del extracto etanólico de propóleo.
El extracto de propóleo al 10% tuvo un mayor halo de inhibición en comparación
al propóleo al 20%.
La diferencia promedio en la zonas de inhibición del extracto de propóleo de las
dos concentraciones (10 – 20%), se dan porque en tres de 20 muestras se obtienen
valores relativamente altos (16-17mm)
El hidróxido de calcio presento una zona de inhibición promedio de 8.7 mm,
mientras que el extracto de propóleo al 20% obtuvo una medición de 12.4 mm, el
propóleo al 10% de 14.8 mm, siendo este el que presento el mayor diámetro de
inhibición bacteriana.
5.2. Recomendaciones
Se recomienda la introducción del extracto de propóleo en la terapia
endodóncica como medicamento intraconducto en el caso de obtener
diagnósticos de infecciones persistentes y fracasos del tratamiento ya que posee
propiedades antibacterianas frente al Enterococcus faecalis mejores que el
hidróxido de calcio.
60
La bacteria Enterococcus faecalis es uno de los microorganismos aislados con
mayor frecuencia en las infecciones persistentes secundarias y fracasos
endodóncicos y ha mostrado resistencia al hidróxido de calcio, por lo que se
recomienda el uso del extracto de propóleo como parte del tratamiento en estos
diagnósticos.
Para garantizar una antisepsia total del conducto radicular y lograr un
tratamiento exitoso se sugiere previo al uso del extracto de propóleo como
medicamento intraconducto emplear una buena técnica biomecánica de
preparación y un buen irrigante cumpliendo así todos los protocolos
endodóncicos.
Se debería promover el uso del extracto de propóleo en la terapia endodóncica
ya que se logra buenos resultados en la antisepsia antimicrobiana en periodos
breves de tiempo, lo que beneficiaria tanto al paciente como profesional además
es un medicamento natural de bajo costo.
Realizar investigaciones posteriores acerca del extracto de propóleo y sus
propiedades ya que es un medicamento natural con grandes ventajas y escasos
efectos adversos, de muy bajo costo, para que sea utilizado en diferentes ramas
de odontología.
61
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