tselepis 1

Αλέξανδρος Δ. Τσελέπης, MD, PhDΚαθηγητής Βιοχηµείας - Κλινικής Χηµείας

ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝΤΜΗΜΑ ΧΗΜΕΙΑΣΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ

Μέθοδοι για την εργαστηριακή διερεύνηση της λειτουργικότητας των αιµοπεταλίων

Platelet Aggregation

0.5 µΜ ADP

1.0 µΜ ADP

2.5 µΜ ADP

5.0 µΜ ADP

10 µΜ ADP

Διαπερατότητα,

%

1 min

Χρόνος, min

Υπολοιπόµενη Αιµοπεταλιακή Ενεργότητα

Υπολοιπόµενη Αιµοπεταλιακή Ενεργότητα

Mahla E, et al. JACC;2009:857–9

Θεραπευτικό παράθυρο

Φαρµακοκινητικές µέθοδοι

Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322


Το συνολικό ιόν της κλοπιδογρέλης

Πορεία θραυσµατοποίησης της κλοπιδογρέλης

Φάσµα MS της κλοπιδογρέλης

κύριο ιόν m/z 322

Φασµατοµετρία Μάζας

Πρότυπο του ανενεργού µεταβολίτη SR26334

: Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322 : Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322

Το συνολικό ιόν MRM σε buffer του SR26334 σε συγκέντρωση 5 µg/ ml (Rt = 0.6 min)



κύριο θυγατρικό ιόν m/z 198

Responders

Nonresponders

Kalantzi KI, et al. J Thromb Haemost. 2011;9:875-878

The clopidogrel-induced platelet inhibition are improved in

clopidogrel non-responders at 30 days of therapy with 75 mg/day

Φαρµακοδυναµικές µέθοδοι

Michelson AD, et al. Am J Cardiol 2006;98[suppl]:4N–10N

Platelet function tests for the detection of Clopidogrel resistance

Michelson AD, et al. Am J Cardiol 2006;98[suppl]:4N–10N

Platelet function tests for the detection of Aspirin resistance

<> <>

Light transmittance aggregometry (LTA)

Whole blood aggregometry (Electrical impedance aggregometry)

ATP release by the luminescence method

Whole Blood/Optical Lumi-Aggregometer (Chrono-log)

Platelet Aggregation

PRP Whole blood

10 µΜ ADP

30 ηµέρες

5 ηµέρεςπριν την κλοπιδογρέλη

Αντίσταση

Ανταπόκριση των αιµοπεταλίων στην Κλοπιδογρέλησε ACS ασθενείς

Ασπιρίνη: 75mg/ ηµέρα, Κλοπιδογρέλη: 300mg, 75mg/ηµέρα

Φυσιολογική ανταπόκριση

<> <>

Flow Cytometer (FACSCalibur)

Pathways Activated Following

Stimulation of P2Y12 by ADP

Kleiman NS, et al. JACC. 2008; 51: 1412-1414

VASP: Vasodilator-Stimulated Phosphoprotein

VASP Test

Anti-VASP-P mAb (Flow Cytometry) Platelet Reactivity Index (PRI)

PRI: Kακή ανταπόκριση στην κλοπιδογρέλη

PRI: Καλή ανταπόκριση στη κλοπιδογρέλη)

PRI = 74%

Mab VASP-P, PGE1

Mab VASP-P, PGE1+ADP

Αρνητικό control, PGE1+ADP

VASP test: Kακή ανταπόκριση στην κλοπιδογρέλη

VASP analysis with Flow Cytometry

Clopidogrel responderPRI= 17,6%

Clopidogrel nonresponderPRI= 76,4%

P-selectin and PAC-1 with Flow Cytometry

Study design

Bonello et al. JACC 2008;51:1404–11

VASP index was measured 24 h after the first 600-mg bolus of clopidogrel

Effects of Each Additional Bolus of Clopidogrelon the VASP Index in the VASP-Guided Group

Bonello et al. J Am Coll Cardiol 2008;51:1404–11

After the initial dose up to 3 additional boluses of 600 mg may be given in 24 h increments. The VASP index was assessed after 12 h until a VASP index below 50% was obtained

Kaplan-Meier Analysis for 30-Day Major Adverse Cardiovascular Events (MACE)

Bonello et al. J Am Coll Cardiol 2008;51:1404–11

VASP-guided group

Control group

Point of care platelet function testing

Platelet function assays for the bedside evaluation of antiplatelet therapy

Price M. Circulation 2009; 119: 2625-2632

Determination of platelet function with the VerifyNow system

Simple - Whole blood, samples require no preparation for analysis Rapid - Platelet response is reported in 5 min or lessResults in P2Y12 reaction units (PRU)Is not usable in the presence of GPIIb/IIIa inhibitorsCV < 8% in volunteers and <3.2% in CAD patientsThe diagnostic performance by receiver-operating characteristics curve (ROC) analysis

Prospective Studies Examining the Relationship Betweenthe VerifyNow Assay and Clinical Outcome After PCI


Relation between CV event rates and residual platelet reactivity after clopidogrel exposure stratified by quartile

(Q) of PRU in 3 prospective observational studies using the VerifyNow assay


CV death, MI, 12 mo

CV death, MI, ST, 6 mo

CV death, MI, TVR, 30 d

Multiple electrode platelet aggregometry (MEA) (Dynabyte, Munich, Germany)

The PFA-100 System quickly and easily measures platelet plug formation on a collagen/ADP or collagen/epinephrin-coated membrane under high-shear flow in a small whole blood sample (800 µL) and reports a ”closure time” of an apetrure in 5–8 min

Assesses the platelet dysfunction due to the effect of Aspirin

It can not distinguish thienopyridine effect

Platelet Function Assay (PFA-100® System)

<> <>

Plateletworks (Helena Laboratories)

Plateletworks Arachidonic Acid Kit

ICHOR® Hematology Analyzer

Plateletworks ADP Kit

Plateletworks Collagen Kit

<> <>

Thromboelastography Platelet Mapping (Hemoscope Corp.)

Gremmel T, et al. Thromb Haemost 2009; 101: 333–339

Correlations between the maximal aggregation (%) of LTA with various platelet assays

Prevalence of aspirin resistance determined by various platelet function assays

Lordkipanidze M. Eur Heart J 2007;28:1702-1708

Bonello L. J Am Coll Cardiol. 2010; 56: 919-33

PRI >50%, µε τη µέθοδο VASPPRU >235-240, µε τη συσκευή Verify Now P2Y12MPA (Maximal Platelet Aggregation) >46% στα 5-µmol/l ΑDP, µε τη µέθοδο LTA>468 units/min µετά από ενεργοποίηση µε ADP µε τη συσκευή Multiplate analyzer.

Εργαστηριακά κριτήρια ορισµού της αντίστασης στην κλοπιδογρέλη

Pharmacogenetis

Varenhorst Ch, et al. Eur Heart J. 2009;30:1744–1752

20-30% στους Καυκάσιους

Association between the CYP2C19*2 Reduced-Function Allele and the Primary Efficacy Outcome or Stent

Thrombosis in Subjects Receiving Clopidogrel

Mega JL, et al. N Engl J Med 2009;360:354-62

Sibbing D, et al. Circulation. 2010;121:512-518

CYP2C19*17 genotypes

Incidence of TIMI bleedingsPlatelet aggregation

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ IΗ ελλιπής ανταπόκριση στη θεραπεία µε αντιαιµοπεταλιακά φάρµακα αποτελεί παράγοντα κινδύνου για ισχαιµικά επεισόδια µετά από PCI

Ο έλεγχος της λειτουργίας των αιµοπεταλίων στην κλινική πράξη στις καρδιολογικές κλινικές προσφέρει σηµαντική βοήθεια στη διάγνωση της ελλιπούς ανταπόκρισης των ασθενών στην αντιαιµοπεταλιακή αγωγή

Επίσης ο έλεγχος της λειτουργίας των αιµοπεταλίων είναι χρήσιµος οδηγός για τη διαπίστωση του κατάλληλου χρόνου χειρουργικής επέµβασης µετά τη διακοπή της αντιαιµοπεταλιακής θεραπείας

Οι µέθοδοι ελέγχου της λειτουργικότητας των αιµοπεταλίων πρέπει να είναι αξιόπιστες και έγκυρες, εύκολες στη χρήση τους, να καθορίζουν µε ακρίβεια τις τιµές του διαγνωστικού cutoff και να µην έχουν υψηλό κόστος

Καµία µέθοδος µέχρι στιγµής δεν πληρεί όλες τις παραπάνω προϋποθέσεις

Προοπτικές τυχαιοποιηµένες µελέτες που έχουν ως στόχο να διερευνήσουν εάν ο έλεγχος της αιµοπεταλιακής λειτουργίας µπορεί επαρκώς και µε ασφάλεια να οδηγήσει στην επιλογή της κατάλληλης αντιαιµοπεταλιακής αγωγής µε στόχο τη µείωση των θροµβωτικών επεισοδίων σε ασθενείς υψηλού κινδύνου, βρίσκονται σε εξέλιξη

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ IΙ

tselepis 1

Documents