Download - Tselepis 1
![Page 1: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/1.jpg)
Αλέξανδρος Δ. Τσελέπης, MD, PhDΚαθηγητής Βιοχηµείας - Κλινικής Χηµείας
ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝΤΜΗΜΑ ΧΗΜΕΙΑΣΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ
Μέθοδοι για την εργαστηριακή διερεύνηση της λειτουργικότητας των αιµοπεταλίων
![Page 2: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/2.jpg)
![Page 3: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/3.jpg)
Platelet Aggregation
0.5 µΜ ADP
1.0 µΜ ADP
2.5 µΜ ADP
5.0 µΜ ADP
10 µΜ ADP
Διαπερατότητα,
%
1 min
Χρόνος, min
![Page 4: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/4.jpg)
![Page 5: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/5.jpg)
Υπολοιπόµενη Αιµοπεταλιακή Ενεργότητα
Υπολοιπόµενη Αιµοπεταλιακή Ενεργότητα
Mahla E, et al. JACC;2009:857–9
Θεραπευτικό παράθυρο
![Page 6: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/6.jpg)
Φαρµακοκινητικές µέθοδοι
![Page 7: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/7.jpg)
ABCB1
![Page 8: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/8.jpg)
Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322
Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322
Το συνολικό ιόν της κλοπιδογρέλης
Πορεία θραυσµατοποίησης της κλοπιδογρέλης
Φάσµα MS της κλοπιδογρέλης
κύριο ιόν m/z 322
Φασµατοµετρία Μάζας
![Page 9: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/9.jpg)
Πρότυπο του ανενεργού µεταβολίτη SR26334
: Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322 : Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 322
Το συνολικό ιόν MRM σε buffer του SR26334 σε συγκέντρωση 5 µg/ ml (Rt = 0.6 min)
Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 308
Φάσµα MS2 του κύριου ιόντος m/z 308
κύριο θυγατρικό ιόν m/z 198
![Page 10: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/10.jpg)
Responders
Nonresponders
Kalantzi KI, et al. J Thromb Haemost. 2011;9:875-878
The clopidogrel-induced platelet inhibition are improved in
clopidogrel non-responders at 30 days of therapy with 75 mg/day
![Page 11: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/11.jpg)
Φαρµακοδυναµικές µέθοδοι
![Page 12: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/12.jpg)
Michelson AD, et al. Am J Cardiol 2006;98[suppl]:4N–10N
Platelet function tests for the detection of Clopidogrel resistance
![Page 13: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/13.jpg)
Michelson AD, et al. Am J Cardiol 2006;98[suppl]:4N–10N
Platelet function tests for the detection of Aspirin resistance
![Page 14: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/14.jpg)
<> <>
Light transmittance aggregometry (LTA)
Whole blood aggregometry (Electrical impedance aggregometry)
ATP release by the luminescence method
Whole Blood/Optical Lumi-Aggregometer (Chrono-log)
![Page 15: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/15.jpg)
Platelet Aggregation
PRP Whole blood
![Page 16: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/16.jpg)
10 µΜ ADP
30 ηµέρες
5 ηµέρεςπριν την κλοπιδογρέλη
Αντίσταση
Ανταπόκριση των αιµοπεταλίων στην Κλοπιδογρέλησε ACS ασθενείς
Ασπιρίνη: 75mg/ ηµέρα, Κλοπιδογρέλη: 300mg, 75mg/ηµέρα
Φυσιολογική ανταπόκριση
![Page 17: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/17.jpg)
<> <>
Flow Cytometer (FACSCalibur)
![Page 18: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/18.jpg)
Pathways Activated Following
Stimulation of P2Y12 by ADP
Kleiman NS, et al. JACC. 2008; 51: 1412-1414
VASP: Vasodilator-Stimulated Phosphoprotein
![Page 19: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/19.jpg)
VASP Test
Anti-VASP-P mAb (Flow Cytometry) Platelet Reactivity Index (PRI)
PRI: Kακή ανταπόκριση στην κλοπιδογρέλη
PRI: Καλή ανταπόκριση στη κλοπιδογρέλη)
![Page 20: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/20.jpg)
PRI = 74%
Mab VASP-P, PGE1
Mab VASP-P, PGE1+ADP
Αρνητικό control, PGE1+ADP
VASP test: Kακή ανταπόκριση στην κλοπιδογρέλη
![Page 21: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/21.jpg)
VASP analysis with Flow Cytometry
Clopidogrel responderPRI= 17,6%
Clopidogrel nonresponderPRI= 76,4%
![Page 22: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/22.jpg)
P-selectin and PAC-1 with Flow Cytometry
![Page 23: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/23.jpg)
Study design
Bonello et al. JACC 2008;51:1404–11
VASP index was measured 24 h after the first 600-mg bolus of clopidogrel
![Page 24: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/24.jpg)
Effects of Each Additional Bolus of Clopidogrelon the VASP Index in the VASP-Guided Group
Bonello et al. J Am Coll Cardiol 2008;51:1404–11
After the initial dose up to 3 additional boluses of 600 mg may be given in 24 h increments. The VASP index was assessed after 12 h until a VASP index below 50% was obtained
![Page 25: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/25.jpg)
Kaplan-Meier Analysis for 30-Day Major Adverse Cardiovascular Events (MACE)
Bonello et al. J Am Coll Cardiol 2008;51:1404–11
VASP-guided group
Control group
![Page 26: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/26.jpg)
Point of care platelet function testing
![Page 27: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/27.jpg)
Platelet function assays for the bedside evaluation of antiplatelet therapy
Price M. Circulation 2009; 119: 2625-2632
![Page 28: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/29.jpg)
Determination of platelet function with the VerifyNow system
Simple - Whole blood, samples require no preparation for analysis Rapid - Platelet response is reported in 5 min or lessResults in P2Y12 reaction units (PRU)Is not usable in the presence of GPIIb/IIIa inhibitorsCV < 8% in volunteers and <3.2% in CAD patientsThe diagnostic performance by receiver-operating characteristics curve (ROC) analysis
![Page 30: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/30.jpg)
Prospective Studies Examining the Relationship Betweenthe VerifyNow Assay and Clinical Outcome After PCI
Price M. Circulation 2009; 119: 2625-2632
![Page 31: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/31.jpg)
Relation between CV event rates and residual platelet reactivity after clopidogrel exposure stratified by quartile
(Q) of PRU in 3 prospective observational studies using the VerifyNow assay
Price M. Circulation 2009; 119: 2625-2632
CV death, MI, 12 mo
CV death, MI, ST, 6 mo
CV death, MI, TVR, 30 d
![Page 32: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/32.jpg)
Multiple electrode platelet aggregometry (MEA) (Dynabyte, Munich, Germany)
![Page 33: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/33.jpg)
The PFA-100 System quickly and easily measures platelet plug formation on a collagen/ADP or collagen/epinephrin-coated membrane under high-shear flow in a small whole blood sample (800 µL) and reports a ”closure time” of an apetrure in 5–8 min
Assesses the platelet dysfunction due to the effect of Aspirin
It can not distinguish thienopyridine effect
Platelet Function Assay (PFA-100® System)
![Page 34: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/34.jpg)
<> <>
Plateletworks (Helena Laboratories)
Plateletworks Arachidonic Acid Kit
ICHOR® Hematology Analyzer
Plateletworks ADP Kit
Plateletworks Collagen Kit
![Page 35: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/35.jpg)
<> <>
Thromboelastography Platelet Mapping (Hemoscope Corp.)
![Page 36: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/36.jpg)
Gremmel T, et al. Thromb Haemost 2009; 101: 333–339
Correlations between the maximal aggregation (%) of LTA with various platelet assays
![Page 37: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/37.jpg)
Prevalence of aspirin resistance determined by various platelet function assays
Lordkipanidze M. Eur Heart J 2007;28:1702-1708
![Page 38: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/38.jpg)
Bonello L. J Am Coll Cardiol. 2010; 56: 919-33
PRI >50%, µε τη µέθοδο VASPPRU >235-240, µε τη συσκευή Verify Now P2Y12MPA (Maximal Platelet Aggregation) >46% στα 5-µmol/l ΑDP, µε τη µέθοδο LTA>468 units/min µετά από ενεργοποίηση µε ADP µε τη συσκευή Multiplate analyzer.
Εργαστηριακά κριτήρια ορισµού της αντίστασης στην κλοπιδογρέλη
![Page 39: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/39.jpg)
Pharmacogenetis
![Page 40: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/40.jpg)
Varenhorst Ch, et al. Eur Heart J. 2009;30:1744–1752
20-30% στους Καυκάσιους
![Page 41: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/41.jpg)
Association between the CYP2C19*2 Reduced-Function Allele and the Primary Efficacy Outcome or Stent
Thrombosis in Subjects Receiving Clopidogrel
Mega JL, et al. N Engl J Med 2009;360:354-62
![Page 42: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/42.jpg)
Sibbing D, et al. Circulation. 2010;121:512-518
CYP2C19*17 genotypes
Incidence of TIMI bleedingsPlatelet aggregation
![Page 43: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/43.jpg)
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ IΗ ελλιπής ανταπόκριση στη θεραπεία µε αντιαιµοπεταλιακά φάρµακα αποτελεί παράγοντα κινδύνου για ισχαιµικά επεισόδια µετά από PCI
Ο έλεγχος της λειτουργίας των αιµοπεταλίων στην κλινική πράξη στις καρδιολογικές κλινικές προσφέρει σηµαντική βοήθεια στη διάγνωση της ελλιπούς ανταπόκρισης των ασθενών στην αντιαιµοπεταλιακή αγωγή
Επίσης ο έλεγχος της λειτουργίας των αιµοπεταλίων είναι χρήσιµος οδηγός για τη διαπίστωση του κατάλληλου χρόνου χειρουργικής επέµβασης µετά τη διακοπή της αντιαιµοπεταλιακής θεραπείας
Οι µέθοδοι ελέγχου της λειτουργικότητας των αιµοπεταλίων πρέπει να είναι αξιόπιστες και έγκυρες, εύκολες στη χρήση τους, να καθορίζουν µε ακρίβεια τις τιµές του διαγνωστικού cutoff και να µην έχουν υψηλό κόστος
![Page 44: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/44.jpg)
Καµία µέθοδος µέχρι στιγµής δεν πληρεί όλες τις παραπάνω προϋποθέσεις
Προοπτικές τυχαιοποιηµένες µελέτες που έχουν ως στόχο να διερευνήσουν εάν ο έλεγχος της αιµοπεταλιακής λειτουργίας µπορεί επαρκώς και µε ασφάλεια να οδηγήσει στην επιλογή της κατάλληλης αντιαιµοπεταλιακής αγωγής µε στόχο τη µείωση των θροµβωτικών επεισοδίων σε ασθενείς υψηλού κινδύνου, βρίσκονται σε εξέλιξη
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ IΙ
![Page 45: Tselepis 1](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022070505/568c514f1a28ab4916b21dd9/html5/thumbnails/45.jpg)