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TEMA 3ORGANIZACIÓN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN PROCARIOTAS
GENÓFORO DE LOS VIRUS-Características generales-Virus ADN-fago λ
GENÓFORO BACTERIANO-Cromosoma bacteriano-ADN extracromosómico: PLÁSMIDOS
-clasificación-utilización tecnología ADN recombinante
GENÓFOROS VIRALESVIRIÓN(diámetro 10-400 nm)
DNA/RNA
nucleocápside
organización simple y acelular
ausencia DNA y RNA en el mismo virión
incapacidad reproducirse de forma independiente y llevar a cabo división celular
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GENÓFOROS VIRALES
Retrovirus (Ribodesoxivirus) - Sarcoma de Rous (Pollo)
- Leucemia de Rauscher (ratón) - HIV (virus de inmunodeficiencia humana
causante del SIDA)
AnimalSencillaLineal
Familia de virusTipo de virus según huésped.
Tipo de Hélice
Tipo de Molécula
VIRUS ARN-ADN
Hepatitis BAnimalDoble (gap)Circular
Familia de virusTipo de virus según huésped.
Tipo de Hélice
Tipo de Molécula
VIRUS ARN-ADN
VIRUS HEP. B
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GENÓFOROS VIRALES
FAGO λ
infecta E. coli
cápside icosaédrica, DNA doble hélice lineal con ~ 48.000 pb
extremos cohesivos: extremos 5’ monocatenarios (12 nucleótidos de secuencia complemenaria)
lisis bacteria ciclo lisogénico
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GENÓFORO BACTERIANO
ADN → doble hélice circular→ tamaño variable (0,1 a 8 x109 dalton)→ E. coli (1.100 m longitud, 3,2 x105 pares nucleótidos)
Material genético → NUCLEOIDE
ADN (60%)
LÍPIDOS (1%)
PROTEÍNA (5-10%)
ARN (30%)
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ADN altamente organizadoPlegamiento formando DOMINIOS →SUPERENRROLLAMIENTO
GENÓFORO BACTERIANO
Nº dominios en E. coli variable (12 a 80 dominios)Composición: ADN dúplex condensado + proteínas básicas
GENÓFORO BACTERIANO
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ProtaminasDesconocidoSububnidad de 3.000 d.P
Desconocida20.000 copias
Monómero de 15.000 d.HLP1
Desconocida10.000 copias
Subunidad de 15.000 d.H1
DesconocidaDesconocido
Subunidad α de 10.500 d.
Subunidad β de 9.500 d.
IHF
Histona H2B30.000 dímero
Dímero subunidades idénticas de 28.000 d.
H
Histona H2A40.000 dímeros
Dímero subunidades α y β de 9.000 d.HU
Semejanza con eucariontesContenido por célulasComposiciónProteína
PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS
GENÓFORO BACTERIANO
-Fis-Dan (DNA-binding protein underanaerobic conditions) = YgiP(Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 11 3605–3618)
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ADN EXTRACROMOSÓMICOPLÁSMIDOS
ADN doble y circular
Replicación autónoma; información no vital
Posibilidad de integración en cromosoma principal bacteriano → EPISOMA
- secuencias inserción y transposones
Tamaño variable: 2.000 a 100.000 pb ADN bacterianoplásmidos
FUNCIÓN PLÁSMIDOS
TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F)ENTRE BACTERIAS → CONJUGACIÓN
F+
F-
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FUNCIÓN PLÁSMIDOS
Hfrfactor F integrado en genóforo bacteriano
transferencia de marcadores cromosómicos a F- con elevada frecuencia
transferencia desde punto fijo y en un orden determinado (integración específica factor F)
FUNCIÓN PLÁSMIDOS
plásmido E. coli resistente a ampicilina (ampr) y tetraciclina (tetr)
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ESTIRPE A ESTIRPE B
cys+, leu+, thr+ cys-, leu-, thr--
medio mínimo con leucina y treonina
medio mínimo con:
-treonina
-leucina
-sin suplementos
A.- Medio mínimo con leucina y treonina:
-cys+, leu+, thr+
-cys+, leu-, thr-
B.- Medio mínimo con:
- TREONINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu+, thr-
- LEUCINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu-, thr+
- MEDIO MÍNIMO: cys+, leu+, thr+
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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”
-rasgos característicos gen (nº intrones, posición)
-estructura producto proteico gen → FUNCIÓN
comparación secuencias ADN de ≠ genes → evolución
modificación parte de secuencia ADN de un gen y reinserción
CONSTRUCCIÓN ADN RECOMBINANTE
TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”
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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”
DIGESTIÓN ADN
(enzimas de restricción)
corte ADN en fragmentos para su clonación
cortes escalonados → ADN recombinante
TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”
clonación gen específico
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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”
diseño plásmidos
como vectores de clonación de ADN
TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”