pemeriksaan lab.docx

http://kloworzberly.blogspot.co.id/2013/04/protap-pemeriksaan-kimia-klinik.html

PEMERIKSAAN GLUKOSA

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah

B. Metode : GOD-PAP

C. Prinsip : Glukosa diukur setelah oksidase enzimatik, adanya glukosidase hidrogen peroksidase di bawah katalisa peroksidase bereaksi dengan phenol dan 4-amino phenazone membentuk zat warna merah violet, quinoneimine sebagai indikator.D. Bahan : Serum

E. Alat : 1. Micropipet 10µl & 1000µl 4. Tabung reaksi

2. Blue tipe & yelow tip 5. Centrifuge

3. Beackerglass 6. Fotometer

F.Reagensia :1. Reagen enzim (buffer pH 7,5)

2. Reagen satandar

G.Cara Kerja :

Sampel Standart Blanko

Sampel 10µl

Standart 10µl

Reagen 1000µl 1000µl 1000µl

Masing – masing tabung dihomogenkan, diinkubasi 10 menit pada suhu 20 –

25 °C atau 5 menit pada suhu 37 °C

Diukur absorbance standar dan sampel terhadap blanko reagen dalam 60

menit

Λ = 546 nm Standar = 200

Suhu = 25oC Program = c/st

H. Nilai Rujukan : a. Darah segar (puasa) 70 – 100 mg/dl

b. Serum & plasma (puasa) 75 – 115 mg/dl

http://kloworzberly.blogspot.co.id/2013/04/protap-pemeriksaan-kimia-klinik.html

PEMERIKSAAN CHOLESTEROL TOTALPemeriksaan : Cholesterol TotalTujuan : Untuk mengetahui kadar kolesterol seseorangMetode : CHOD-PAPPrinsip : Cholesterol diukurr setelah hidrolisa enzimatik dan oksidasi indikator quinoneimine dibentuk dari hidrogen peroksidase dan 4-aminophenazone. Absorben warna diukur dengan terbentuknya warna yang dibaca pada spektrofotometer dalam phenol dan peroxidaseBahan : SerumAlat : Tabung reaksi Beacker glass Pipet automaticReagensia : Cholesterol liquicolorNilai Nomal : 200 mg/dlCara Kerja :Skema pemipetan Blanko R/ Standart TestStandart 10 μlSampel 10 μlR/ Cholesterol 1000 μl 1000 μl 1000 μl

- Dihomogenkan- Diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20 - 25° C- Diukur absorbance sampel tehadap blanko reagen dalam waktu tidak lebih dari 60 menit ( λ =

546 nm, program = c/st, angka faktor = 200,0 mg/dl )

PEMERIKSAAN LDL

A.Tujuan : untuk pengukuran kuantitatif LDL-cholesterol (LDL)

B. Metode : Test warna-Enzymatik

C. Prinsip : Chylomicrons,VLDL dan HDL cholestrol dihilangkan secara khusus melalui reaksi

enzymatik.kemudian LDL cholesterol yang tertinggal diukur melalui reaksi enzymatik

khusus ,juga memakai surfactans spesific untuk LDL

D. Bahan : Serum

E. Alat : 1. Tabung 3. Mikropipet 5. Centrifuge

2. Beacker Glass 4. Yellow tip . blue tip 6. Photometer

F.Reagensia : 1. R1

2. R2

G.Cara Kerja :

Hangatkan reagen dan kufet sampai 37°C.suhu harus dijaga konstan (±0,5°C) selama test.

Campur dengan hati-hati,inkubasi pada suhu 37°C dan baca absorbance AA calibrator

dan sampai terhadap blanko reagen (RB) setelah 5 menit.

F. Nilai Rujukan :

Laki - Laki Perempuan

Resiko menurun untuk CHD < 50 mg/dl < 63 mg/dl

Resiko meningkat untuk CHD > 172 mg/dl > 167 mg/dl

PEMERIKSAAN TRIGLISERIDA

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar trigliserida dalam sample

B. Metode : GOD-PAP

C. Prinsip : Trigliserida diukur setelah hidrolisa enzimatik dengan lipase indicator quinonemine

dibentuk dari hydrogen peroksida 4amino pryme chlorophenol dibawah pengaruh katalisa

peroksida

Blanko

reagen

Calibrator/

sampel

Air 10 µ

Calibrator/Sampel 10 µ

R1 750 µ 750 µ

R2 250 µ 250 µ

D. Bahan : Serum

E. Alat : 1. Tabung 4. Mikropipet

2. Beacker Glass 5. Yellow tip . blue tip

3. Fotometer 4010

F.Reagensia : 1. Reagen enzym

2. Reagen standart

G.Cara Kerja :

Blanko Standar Tes

Standar 10 ul

Sampel 10 ul

Rg Enzym 1000ul 1000 ul 1000 ul

Dicampur diinkubasi pada 20-25°C selama 10 menit


Suhu = 25oC Program = c/s

PEMERIKSAAN TOTAL PROTEIN

A. Pemeriksaan : Total Protein

B. Tujuan : Untuk mengetahui kadar protein dalam serum

C. Metode : Biuret

D. Prinsip : Ion tembaga bereaksi dengan protein dalam media alkali

membentuk kompleks ungu. Absorbans kompleks ini sebanding dengan konsentrasi protein

dalam serum.

E. Reagen : 4 x 100 ml atau 1000 ml reagen warna

Natrium hidroksida 200 mmol/l

Kalium natrium tartrat 32 mmol/l

Cuprum sulfat 18 mmol/l

Kalium iodida 30 mmol/l

F. Bahan : Serum, plasma heparin atau EDTA

G. Alat : Tabung reaksi , mikropipet 20 µl , 1000 µl, blue and yellow tip,

beacker glass, fotometer

H. Cara kerja :

Filter : 546 nm

Program : C/F

Tebal kuvet : 1 cm

Temperature : 20-250 C

Pengukuran terhadap blanko reagen

Factor : 19,00

I. Perhitungan :

C = 19 x ΔA (g/dl) atau C = 190 x ΔA (g/l)

J. Nilai normal dalam serum atau plasma :

Bayi : 4,6 – 7.0 g/dl atau 46 – 70 g/l

3 tahun s/d dewasa : 6,6 – 8,7 g/dl atau 66 – 77 g/l

PEMERIKSAAN ALBUMIN

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar albumin dalam serum penderita.

B. Metode : BCG (Bromcresol Green

C. Prinsip :Bromcresol Green dengan albumin dalam larutan buffer sitrat membentuk

Sampel Blanko

Sampel 20 µl

Blanko 1000 µl 1000 µl

Dicampur, diinkubasi 20 menit dengan suhu 20-

250C. diukur absorbans sampel terhadap blanko

reagen dalam waktu 30 menit.

kompleks warna.Absorbance dari kompleks warna ini proporsional dengan konsentrasi albumin

dalam sampel.

D. Reagen :Reagen warna dan Standart

E. Bahan :Serum atau plasma

F. Alat : ●Fotometer

●Pipet Automatik 10 dan 1000

●Beacker Glass

●Tabung Reaksi

●Blue dan Yellow tipe

G. Cara Kerja : Panjang gelombang 546nm Program c/st

Tebal Kuvet 1cm

Temperatur 20-25ᵒC

Pengukuran terhadap Blanko Reagen

Blanko Standart Test

Sampel - - 10

Standart - 10 -

Reagen Warna 1000 1000 1000

Campur,diinkubasi 5 menit,ukur absorbance standart dan sampel terhadap

blanko reagen dalam waktu 30 menit.

H. Nilai Rujukan :Dalam serum atau plasma 3,8-5,1 gr/dl atau 38-51 gr/l

Pemeriksaan UREUM

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar ureum dalam serum

B. Metode : Berthelet

C. Prinsip :Urea dihidrolisa dengan adanya air dan urease membentuk ammonia dan

carbon dioksida . pada metode modifikasi Bedrthelet ini,ion ammonia bereaksi dengan

hypochlorit dan sallycilate membentuk zat warna hijau, Peningkata Abs.Pada 578 nm

proporsional dengan konsentrai urea dalam sample.

D. Bahan : Serum,plasma (semua plasma kecuali ammoniumheparinat ),urine.

Encerkan urine 1 + 100 dengan aquadest.

Jangan gunakan serum lipemic.stabil 3 hari pada 4 C.

E. Alat :

l. Spektrofotometer

2. Tabung reaksi

3. Beacker glaas

4. Pipet automatic

5. Blue tip dan Yellow tip

F.Reagensia : 1. Reagen standart

2. Reagen R1A

3. Reagen R2

KOMPOSISI REAGEN

R1 R2 R31. 10505 100 ml 100 ml 1 ml2. 10506 1000 ml - 10 ml3. 10507 - 1000 ml -

STD 3 ml std. urea 80 mg/dl ( 13,3 mmol/l) atau BUN 37,28 mg/dl (6,2 mmol/l)

PERSIAPAN REAGEN

R1A : Campuran reagen 3 dengan reagen 1 sbb :

Missal : 1 ml R3 + 100 ml R1 ( 1 = 100 bag. )

R2 dan STD siap pakai tanpa pengenceran.

G.Cara Kerja :

Panjang gelombang : Hg 578

Tebal kuvet : 1 cm

Temperatur : 20 – 250 C

Pengukuran terhadap blanko reagen

RB STD SPLSampel - - 10 ulStandard - 10 -Reagen RIA 1000 1000 1000 ulCampur , inkubasi 5 mnt (20-25 C) atau 3 mnt ( 37 C )

Reagen R2 1000 1000 1000 ulCampur, inkubasi 10 menit pada 20 - 25 C atau 5 menit pada 37 C. Ukur Abs. standard dA( STD ) dan sampel

dA ( SPL ) terhadap RB dalam waktu 60 menit

G. Nilai Rujikan : Serum : 10 – 50 mg/dl atau 1,7 – 8,3 mmol/l

Urine : 20 – 35 mg/24 jam atau 333 – 583 mmol/24 jam

PEMERIKSAAN ASAM URAT

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar asam urat dalam darah

B. Metode : Uricase PAP

C. Prinsip :

Kadar asam urat diukur melalui reaksi dengan uricase. H2O2 bereaksi dibawah katalisa

peroksidase dengan 3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid (DCHBS) dan 4-

aminophenazone (PAP) membentuk zat warna merah violet quinoneimine sebagai indicator

D. Reaksi :

UricaseAsam Urat + O2 + 2 H2O allantoin + CO2 + H2O2

peroxidase2 H2O + DCHBS + PAP N–(4-antypiryl) 3-chloro-5-sulfonate- p-

benzoquinoneimine + HCl + 4 H2O

E. Bahan : Serum

F. Alat :

⁻ Pipet automatic 20 µl , 1000 µl

⁻ Blue tip

⁻ Yellow tip

⁻ Becker glass

⁻ Tabung venoject

G. Reagensia :

⁻ Reagen enzyme

⁻ Larutan standart asam urat 8 mg/dl

H. Cara Kerja :

⁻ Disiapkan alat dan bahan

⁻ Disiapkan 3 buah tabung venoject, beri tanda (B, St , T)

⁻ Masing – masing tabung dipipet

Blanko Standart Test

Sampel - - 20 µl

Lart. Standart - 20 µl -

Rg. Enzym 1000 µl 1000 µl 1000 µl

- Dihomogenkan

- Diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 5 menit atau 20-25⁰C selama 10 menit

- Dibaca Absorbance standart dan sampel terhadap reagen blanko pada fotometer

Filter : 546 nm

Program : C/St

Standart : 8,00

- Dicatat dan dilaporkan hasilnya

I. Nilai Rujukan : Pria : 3,4 – 7 mg/dl atau 200 – 420 µmol/liter

Wanita : 2,4 – 5,7 mg/dl atau 140 – 340 µmol/liter

PEMERIKSAAN KREATININ ( Dengan Deprot)

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum

B. Metode : Jaffe (dengan deproteinase)

C. Prinsip : Kreatinin dalam suasana alkali akan membentuk kompleks warna merah sampai jingga dengan asam pikrat. Kompleks warna yang terbentuk

sebanding dengan kadar kreatinin dalam sampel.D. Bahan : Serum

E. Alat : 1. Micropipet 500µ 4. Tabung reaksi

2. Blue tipe 5. Centrifuge

3. Beackerglass 6. Fotometer

F.Reagensia :1.TCA (Tri Chlor Acid) 1,2 N 20

2. Asam pikrat dan NaOH = sebagai reagen kerja 1:1

3. Standar 2

G.Cara Kerja :

Deproteinase

Blanko Standar Tes

Aquadest 0,5 ml

Standar 0,5 ml

Sampel 0,5 ml

Rg TCA 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Dicentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 10 menit

Diambil supernatannya



Blanko Standar Tes

Aquadest 0,5 ml

standar 0,5 ml

Sampel 0,5 ml

Rg kerja 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Diinkubasi pada suhu 25oC selama 20 menit . Dibaca pada

fotometer dengan λ 546 nm, program c/st , standar 200.

H. Nilai Rujikan : Laki-laki = 0,5-0,9 mg/dl

Perempuan = 0,6-1,1mg/dl

PEMERIKSAAN KREATININ (Tanpa Deprot)

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum

B. Metode : Jaffe (tanpa deproteinase)

C. Prinsip : Kreatinin dengan asam pikrat membentuk kompleks warna orange merah dalam larutan alkali. Absorbance warna kompleks ini sebanding dengan konsentrasi kreatinin dalam sampel. D. Bahan : Serum

E. Alat : 1. Micropipet 500µ 4. Tabung reaksi

2. Blue tipe 5. Centrifuge

3. Beackerglass 6. Fotomete

F.Reagensia :1.Asam pikrat

2. Natrium hidroksida

3. Standar 2 mg/dl

G.Cara Kerja :



Dipipet ke dalam kuet semi micro macro

Sampel/standar 100µl 200µl

Reagen kerja 1000µl 2000µl

Dicampur dan jalankan stopwatch. Setelah 30 detik dibaca

pada

Fotometer

H. Nilai Rujikan : Serum : Laki-Laki :0,6-1,1 mg/dl

Perempuan :0,5-0,9 mg/dl

Urine : 1000-1500 mg/24 jam

PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T)

B. Metode : Jendrassik / Grof

C. Prinsip :

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah

azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam

sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang

mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA,

dibantu adanya accelerator (zat pemercepat).

Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect.

D. Reaksi : Asam sulfanilic + natrium nitrit DSA

Bilirubin +DSA DIRECT azobilirubin

Bilirubin + accelerator TOTAL azobilirubin

E. Bahan : Serum atau plasma heparin.

Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar.

Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8°C.

F. Reagen :

1. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih)

Asam sulfanilic 14 mmol/l

Asam hydroclorit 250 mmol/l

Caffeine (accelerator) 200 mmol/l

Natrium benzoate 420 mmol/l

2. 1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih)

untuk pengukuran Bilirubin Total

Natrium nitrit 14 mmol/l

3. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah)

Asam sulfanilic 14 mmol/l

Asam hydroclorit 250 mmol/l

4. 1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah)

untuk pengukuran Bilirubin Direct

Natrium nitrit 0.9 mmol/l

G. Alat :

1. Micropipet

2. Tip biru dan tip kuning

3. Tabung reaksi

4. Fotometer

H. Cara Kerja :

a. Persiapan reagen dan stabilitas

1. Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai.

2. Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25°C.

b. Pemeriksaan

Panjang gelombang : 546 nm

Celah optik : 1 cm

Suhu : 20-25°C

Pengukuran : terhadap blanko sampel

c. Prosedur

1. Bilirubin Total

Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel

Reagen, bilirubin total (1)

Reagen T-Nitrit

1000 µl 1000 µl

- 40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit.

Sampel 100 µl 100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit.

Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

2. Bilirubin Direct

Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel

Reagen, bilirubin direct (3)

Reagen D-Nitrit

1000 µl 1000 µl

- 40 µl

Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit.

Sampel 100 µl 100 µl

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat.

Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (∆A546)

I. Interpretasi Hasil :

Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25

mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan.

Kalikan hasil dengan 5.

J. Perhitungan :

Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0

Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = ∆A546 x 13.0

(mg/dl) x 17.1 = (µmol/l)

K. Nilai Rujukan :

ALKALI PHOSPATASE

A. Pemeriksaan : Alkali Phosphatase

B. Tujuan : Untuk mengetahui kadar Alkali phosphat

C. Metode : Optimised Standard Methode sesuai dengan rekomendasi

DGKC.

D. Prinsip : p – Nitrophenyl phosphate + H2O <===> phosphatase

+ p - nitrophenol

E. Reagen : 1. Reagen Buffer

2. Larutan Substrat

F. Bahan : Serum, plasma heparin atau EDTA

G. Alat : Tabung reaksi , mikropipet 20 µl , 1000 µl, blue and yellow tip,

beacker glass, fotometer

H. Cara kerja :

Filter : 405 nm

Program : K20

Tebal kuvet : 1 cm

Temperature : 20-250 C

Pengukuran terhadap udara

Faktor : 2757

Bilirubin total mg/dl µmol/l

Pada kelahiran, sampai

5 hari, sampai

1 bulan, sampai

Dewasa, sampai

5

12

1.5

1.1

85.5

205.0

25.6

18.8

Bilirubin direct

Dewasa, sampai 0.25 4.3

Test

Reagen Kerja 1000 µl

Sampel 20 µl

Campur, ukur absorbans dan pada saat bersamaan jalankan

stopwatch. Ulangi pengukuran setelah 1, 2 dan 3 menit.

I. Nilai normal dalam serum atau plasma :

Wanita : 64 – 306 U/L

Pria : 80 – 306 U/L

PEMERIKSAAN SGOT

1. Tujuan : Untuk mengetahui kadar SGOT di dalam darahseseorang secara

fotometris.

2. Metode Pemeriksaan : Modifikasi IFCC

3. Prinsip : NADH dioksidasi menjadi NAD+ menghasilkan penurunan absorben

pada 340nm yang secara langsung sebanding dengan aktivitas GOT

(Glutamin Okdaloasetat Transaminase)

4. Reaksi : L-Aspartat + 2-oxoglutarate

GOT Oxaloacetate + L-GlutamateOxaloacetate + NADH + H+

MDH L-Malate + NAD + H

5. Reagen :

a. Aquadest

b. Reagen 1

c. Reagen 2

7. Alat :

Tabung reaksi

Rak tabung reaksi

Mikropipet 100cc , 200cc , 1000cc

Fotometer

8. Prosedur :

a. Pembuatan Reagen Kerja

Reagen 1 = 800 u/L + Reagen 2 = 200 u/L . Perbandingan = 4 : 1

b. Prosedur Kerja

c. Pengukuran

Program : Kinetik 2

Panjang Gelombang : 340nm

Suhu : 37◦C

Faktor : 1745

d. Homogenkan , baca absorbansi terhadap udara setelah 1 menit dan jalankan timer . Baca

absorbansi lagi setelah tepat 1, 2, dan 3 menit

e. Nilai Normal : Laki – Laki = <37 u/L , Perempuan = < 31 u/L

PEMERIKSAAN SGPT

Tujuan

untuk mengetahui fungsi hati

Metode

IFCC (International Federation of Clinical Chemistry

Prinsip

metode kinetik untuk mengukur akivitas ALAT berdasarkan rekomendasi Expert Panel of the

IFCC(International Federation of Clinical Chemistry)

Reaksi

2-Oxoglutarate + L-alanine GPT→L-glutamate + pyruvate

Pyruvate + NADH + H → LDH L-lactate + NAD

Bahan

Serum,plasma Heparin atau EDTA.Hindari hemolisa!

Alat

Fotometer 4010

Pipet automatic 200ul,1000ul,100ul

Stopwatch

Sampel 100 u/L

Reagen Kerja 1000 u/L

Cuvet

Cara kerja

Panjang gelombang : Hg 365nm,340nm,atau 334nm

Celah optic : 1cm

Suhu : 25-37°C

Pengukuran : terhadap udara (penurunan absorbans)

Hangatkan reagen dan cuvet pada suhu yang dikehendaki.Suhu harus dijaga konstan( ±0,5°C)

selama pemeriksaan.

Prosedur 1 dengan start sampel

Pipet ke dalam

cuvet

25°C atau 30°C 37°C

Sampel 200ul 100ul

Reagen kerja 1000ul 1000ul

Campur,baca absorbans setelah 1 menit dan jalankan

stopwatch.

Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2 dan 3 menit

Prosedur 2 dengan start reagen

Pipet ke dalam

cuvet

25°C,30°C 37°C

Sampel 200ul 100ul

Reagen 1 1000ul 1000ul

Campur,inkubasi selama 5 menit dan jalankan stopwatch

Reagen 2 250ul 250ul

Campur,baca absorbans setelah I menit dan jalankan

stopwatch.

Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2,3 menit.

Perhitungan/Interpretasi hasil

Untuk perhitungan absorbans per menit dalam 0,06-0,08 (Hg 365nm) atau 0,12-0,16 (Hg

334,340nm) , prosedur 1+2 pengukuran hanya dari 2 menit pertama digunakan untuk (1

menit inkubasi,2 menit pengukuran).Hitung aktivias GPT dalam sampel menggunakan factor

berikut:

Prosedur 1 dengan start sampel

Hg 334nm Hg 340nm Hg 365nm

Ul (25°C,30°C) 971 952 1765

Ul (37°C) 1780 1745 3235

Prosedur 2 dengan start reagen

Hg 334nm Hg 340nm Hg 365nm

Ul (25°C,30°C) 1173 1151 2132

Ul (37°C) 2184 2143 3971

Nilai rujukan

Suhu 25°C 30°C 37°C

Pria 22ul 30ul 42ul

Wanita 17ul 23ul 32ul

pemeriksaan lab.docx

Documents