Manual de Laboratorio

Cátedra de Microbiología

Microbiología para Medicina

Universidad de Ciencias Médicas

UCIMED

Julio 2010

Dr. Marco Luis Herrera Hidalgo MQCSr. Cristian Sánchez DLC

Universidad de Ciencias MédicasUCIMED

Cátedra de MicrobiologíaMicrobiologías para Medicina

Manual de Laboratorio

Personal Docente:

DLC. Cristian Sánchez (Instructor)Dr. Marco Luis Herrera (Coordinador)

Introducción

El laboratorio de Microbiología y el presente manual, son unas guías que le ayudará a comprender con mayor claridad los conceptos discutidos durante las clases teóricas.

El laboratorio como tal, se realizará el día martes y será ese día cuando se efectuará el montaje de las diversas pruebas, realizándose la lectura de las mismas el día jueves.

Durante este primer día, además, se realizará una prueba rápida (quiz), donde el alumno debe demostrar su conocimiento sobre lo que se va a realizar durante el laboratorio y en el cual podrían tocarse temas vistos en las clases teóricas.

El promedio de los quices realizados se tomará en cuenta como un examen más del curso teórico, por lo que los 5 parciales más la nota de laboratorio se promediarán para obtener la nota de aprovechamiento.

Como requisitos para realizar el laboratorio están: la presentación de una gabacha en buen estado, una toalla de manos, libreta de apuntes y un marcador indeleble.

Instrucciones Generales

1. El estudiante debe vestir su gabacha durante todo el periodo de la práctica.2. Está totalmente prohibido comer o fumar dentro del laboratorio.3. En todo momento, se debe mantener el orden y la disciplina dentro del

laboratorio.4. El área de trabajo debe de estar despejada, por lo que se solicita mantener allí

solo lo estrictamente necesario.5. Desinfecte el área de trabajo, al inicio y al final de cada sección de laboratorio.6. El material contaminado debe ser descartado en los recipientes dispuestos para

tal fin. 7. Si emplea el poder de inmersión del microscopio (100x), este debe quedar limpio

al concluir el laboratorio.8. Todos los microorganismos empleados en las prácticas, son patógenos

humanos, por lo tanto, para reducir el riesgo de una contaminación entre usted mismo o en alguno de sus compañeros, estos agentes deben ser considerados como peligrosos y tratados como tal, por lo que las bromas o cualquier otra distracción que ponga en peligro la seguridad general, será objeto de una fuerte sanción.

9. La inasistencia a un laboratorio, implicaría la no presentación del quiz, por lo que la nota obtenida será un 0. Pero si usted presenta una justificación aceptada por la oficina del Dr. Casas, se le permitirá realizar el quiz, en la próxima seción de laboratorio.

Laboratorio 1Omnipresencia de los microorganismos

y su susceptibilidad a diversos agentes físicos

Introducción

Este laboratorio tiene por objeto demostrar, que los microorganismos están por doquier, en el aire, en el ambiente, depositados sobre muebles, paredes, pisos y principalmente en nosotros mismos, por lo que el empleo de técnicas asépticas en el trabajo de laboratorio y en la práctica médica es imprescindible.

Por otra parte, pretende introducirlos en las medidas de control para los microorganismos, demostrando que el lavado de manos es de suma importancia, además de insistir en otras formas de control como es el efecto oligodinámico de los metales, la acción de los colorantes y la ebullición del agua.

Por último, como un refuerzo de lo estudiado en teoría, se estudiarán los medios de cultivo selectivos y diferenciales y las reacciones observadas para diferentes microorganismos sobre dichos medios de cultivo.

Materiales

9 platos de agar sangre4 platos de agar McConkey2 plato de agar manitol sal1 plato de agar nutritivo con cristal violeta diluido 1:100.0001 plato de agar nutritivo con cristal violeta diluido 1:10.0001 plato de agar nutritivo con cristal violeta diluido 1:1.0001 tubo de agar inclinado con una cepa de Escherichia coli (bacilo Gram negativo)1 tubo de agar inclinado con una cepa de Klebsiella pneumoniae (bacilo Gram negativo)1 tubo de agar inclinado con una cepa de Pseudomonas aeruginosa (bacilo Gram negativo)1 tubo de agar inclinado con una cepa de Staphylococcus aureus (coco Gram positivo en racimos)1 tubo de agar inclinado con una cepa de Staphylococcus epidermidis (coco Gram positivo en racimos)1 tubo con caldo nutritivo y una cepa de Bacillus sp. (bacilo Gram positivo esporulado)1 tubo de agua destilada estéril2 monedas estériles de cobreAplicadores estérilesAsas estériles

Método

1. Moje un aplicador estéril con al agua destilada y haga un raspado sobre la superficie de la mesa de trabajo, el piso, suela de los zapatos o las paredes y con él, raye la superficie de un plato de agar sangre.

2. Coloque su labio, su lengua o su pelo sobre la superficie de un plato de agar sangre.

3. Con un marcador indeleble, divida un plato de agar sangre y rotule ambas secciones como 1 y 2. Sobre la sección rotulada como 1, coloque sus dedos sobre la superficie del agar y luego, lávese la manos con agua y jabón. Séquese adecuadamente y luego, sobre la sección rotulada como 2, coloque sus dedos lavados.

4. Con un asa estéril, raye la mitad de cada una de los agares nutritivos más el cristal violeta con la cepa de Escherichia coli y en la otra mitad la cepa de Staphylococcus aureus.

5. Usando una asa estéril raye la mitad de una placa de agar sangre con la cepa de Escherichia coli y la otra mitad, haga lo mismo pero con la cepa de Staphylococcus aureus y luego coloque, con una pinza estéril, una moneda de cobre en el centro de cada rayado.

6. Usando el tubo con el caldo y la cepa de Bacillus sp., ponga a hervir agua y luego coloque el tubo dentro del agua hirviendo, por un periodo de 10 minutos. Luego de enfriar el tubo, saque una asada e inocule un plato de agar sangre.

7. Empleando asas estériles, raye la superficie de una agar sangre, un agar McConkey y un agar manitol sal con cada una de las cepas de las siguientes cepas: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis.

8. Incube todas las placas, de todas las actividades, en la incubadora a 35°C por 24 horas.

Extracción de ADN

Introducción

En los tiempos presentes, los estudios de identificación de ADN, han cobrado una gran importancia y se emplean en la identificación de tejidos humanos así como en la identificación de agentes que pueden causar enfermedades. Por esta razón, queremos desarrollar una investigación que pretende demostrar que es relativamente sencillo el aislamiento de ADN y que a partir de materiales de fácil adquisición, se puede aislar el ADN de cualquier ser vivo.

Materiales

Una cebolla,Un cuchilloUn embudo2 beaker de 250 mlSal de mesaAlcohol de 95 en fríoDetergente Filtro de caféAgua destiladaColorante Azul de MetilenoCucharas plásticas

Método

1. Antes de iniciar el procedimiento, coloque un poco de alcohol de 95°C dentro del refrigerador, para que se enfríe.

2. En un beakers, rotulado cebolla, coloque 30 ml de agua, agregue 5 gramos de sal de mesa y 2 cucharadas de detergente

3. Pese 100 gramos de la parte central de una cebolla y haga cuadrados pequeños.

4. Coloque los 100 gramos del vegetal en el beaker rotulado para tal fin.5. Haga un macerado con todo el material, procurando no hacer mucha espuma6. Deje reposar por 10 minutos7. Usando un filtro de café, filtre todo el material anterior y recójalo en un segundo

beaker, a su vez rotulado como cebolla.8. Con mucho cuidado agregue el alcohol de 95 en frío a cada uno de los beakers9. Se va a formar un precipitado lechoso que puede ser recogido con una cuchara

de plástico10. Este precipitado es el ADN del vegetal11. Para hacerlo más evidente puede agregar unas gotas de azul de metileno

Laboratorio 3Morfología de las Células Sanguíneas

Introducción

El presente laboratorio tiene como objeto realizar un repaso general sobre la morfología de las células del tejido sanguíneo, tales como los polimorfonucleares o neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos, monocitos, eritrocitos y plaquetas.

Además de repasar lo discutido en las clases de teoría con respecto a la diferenciación entre un hemograma de tipo viral, uno bacteriano y uno parasitário.También, se aprovecha la oportunidad para presentar frotis sanguíneos de pacientes con leucemia, drepanocitosis y con presencia de hemoparásitos tales como malaria y chagas.

Materiales

1 lámina con un frotis sanguíneo normal1 lámina con un frotis sanguíneos de una médula ósea normal1 lámina con un frotis sanguíneo con monocitos enfocados1 lámina con un frotis sanguíneos con linfocitos enfocados1 lámina con un frotis sanguíneos con bandas enfocadas1 lámina con un frotis sanguíneos con desviación a la izquierda1 lámina con un frotis sanguíneos con neutrofília1 lámina con un frotis sanguíneos con presencia de células inmaduras o blastos1 lámina con un frotis sanguíneos con eritroblastos o eritrocitos nucleados1 lámina con un frotis sanguíneos con Drepanocitosis1 lámina con un frotis sanguíneos con Malaria1 lámina con un frotis sanguíneos con Tripanosomas de la enfermedad de ChagasObserve un reporte de laboratorio o histograma

Método

1. Utilizando el objetivo de inmersión, observe cada una de las láminas suministradas y realice dibujos que le permitan recordar cada una de ellas

2. Observe la morfología de los eritrocitos y de las plaquetas en la lámina normal3. En el histograma suministrado, observe como se realiza un reporte de un

hemograma, observe los recuentos leucocitarios, la determinación de la hemoglobina, el hematocrito y el cálculo del CHCM, así como el diferencial celular realizado.

Laboratorio 4Reacciones de aglutinación y

otras reacciones de tipo inmunológico

Introducción

Este laboratorio tiene como objeto, demostrar la utilidad de los métodos inmunológicos en la identificación de los microorganismos y la aplicación de métodos como el ELISA y la aglutinación en el diagnóstico clínico de algunas enfermedades.

Se hace énfasis en los dos tipos de métodos, directos en los que se detecta antígeno e indirectos en los que se detecta anticuerpos

Materiales

Un tubo de antisuero contra Shigella sonnei1 placa de agar sangre con un cultivo de Shigella sonnei y uno de Shigella flexneri1 kit de microelisa para Helycobacter pilori 1 kit para diagnóstico directo contra Streptococcus pyogenes

Método

1. Usando una placa de petri estéril, haya dos círculos con una lápiz de cera y coloque una pequeña cantidad de la cepa de Shigella sonnei en uno de los círculos. Haga lo mismo pero con la cepa de Shigella flexneri

2. Coloque una gota del antisuero contra Shigella sonnei en ambos círculos3. Con un aplicador estéril haga una emulsión de cada cepa en el antisuero4. Después de 2 minutos, observe por aglutinación y realice la identificación de la

cepa de Shigella sonnei.5. Obtenga 3 cc de sangre venosa de un voluntario, separa el suero y procesa a

montar la microelisa buscándo anticuerpos contra Helicobacter pilori. En todo momento, siga la instrucciones suministradas por el kit.

6. Con una aplicador estéril, procesa a recolectar secreción faríngea de alguno de sus compañeros y realice una búsqueda de antígeno de Streptococcus pyogenes. En todo momento, siga las instrucciones suministradas por el kit.

Laboratorio 5Determinación del grupo sanguíneo

Introducción

Este laboratorio pretende ampliar en el estudiante las reacciones inmunológicas, específicamente las reacciones de aglutinación, además del estudio de los grupos sanguíneos más importantes en el hombre.Además se presenta el avance logrado en la inmunohematología con la introducción al mercado de las tarjetas con gel

Materiales

1 kit para la determinación del grupo sanguíneo1 caja de porta objetosAplicadoresLancetasAlgodónAlcohol de 70°CTubos de vidrioTarjetas de grupos sanguíneos

Método

1. Para la determinación del grupo sanguíneo, limpie la yema del dedo anular con un algodón impregnado con alcohol

2. Una vez seco, empleando una lanceta estéril, realice una punción3. Recolecte cuatro gotas de sangre sobre sendo porta objetos4. Coloque un algodón seco sobre el sitio de la punción5. Agregue una gota de cada uno de los diferentes antisueros (A, B, AB, Rh)6. Con un aplicador estéril, haga una mezcla homogénea y observe por un periodo

no mayor de 1 minuto, por una reacción de aglutinación.7. Obtenga sangre venosa anticoagulada y usando tubos de vidrio rotulados como

A, B, AB, Rh, coloque una pequeña cantidad de sangre en cada uno de ellos y luego agregue una gota de cada uno de los reactivos. Centrifugue por 30 segundos y lea la reacción. La reacción positiva se verá la formación de grumos, en la negativa no

8. Observe reacciones de aglutinación usando geles (tarjetas) de identificación de grupos sanguíneos (solo demostrativo)

Laboratorio 6Reacciones de inmunofluorescencia para bacterias y virus

Introducción

La inmunofluorescencia es una técnica de diagnóstico que utiliza principios inmunológicos y consiste en unir una sustancia fluorescente (un fluorocromo como auramina, rojo neutro, fluoresceína etc), con una anticuerpo de alta especificidad dirigido contra un agente específico.

Es tecnología se emplea en el diagnóstico y detección de virus que causan infecciones respiratorias, los cuales son de muy difícil aislamiento. Además, esta técnica se utiliza en la detección de antígenos de agentes como la Bordetella pertussis, Chlamydia trachomatis, Treponema pallidum y Mycobacterium tuberculosis.

MaterialMicroscópio de FluorescenciaLáminas positivas contra Virus Respiratorios (VRS, Influenza, Adenovirus, Parainfluenza)Láminas positivas contra Mycobacterium tuberculosis (auramina)Láminas positivas contra Treponema pallidum (FTA)

Método

En este caso, el laboratorio será demostrativo, sin embargo observe, en los virus respiratorios, la formación de sincicios celulares típicos del VRS, en las pruebas de auramina, la morfología de los Mycobacterium, en los FTA, la morfología espirilar del los Treponemas y por último en los casos de Ch. trachomatis, los cuerpos elementales característicos de este agente

Laboratorio 7Toma de muestras clínicas

Introducción

El presente laboratorio tiene como objeto familiarizar al estudiante con una toma de muestra, iniciando con la flebotomía y obteniendo muestras faríngeas y nasofaríngeas.

Además, presentar al estudiante los diferentes tubos que se emplean en los hospitales para la recolección de muestras clínicas, lo que puede ser un antecesor para la hora de la llegada a los hospitales.

MaterialAlcohol, algodón, torniquete, agujas y jeringasAplicadores estériles y baja lenguasTubos con tapón: rojo, amarillo, lila, verde y de algodón

Método

1. Flebotomíaa. Localice el área a puncionar (se utiliza con mayor frecuencia el área del

antebrazo)b. Con un algodón con alcohol, limpie en forma centrífuga, la zona a

puncionarc. Coloque el torniqueted. Libere la aguja e. Introduzca la aguja y retire lentamente el émbolof. Aspire tres cc de sangreg. Saque la aguja lentamenteh. Coloque el algodón sobre el sitio de la puncióni. Pídale al paciente que doble el brazo y que permanezca así por unos

minutos.2. Faríngeo

a. Utilice un baja lenguas y baje la lenguab. Con el aplicador estéril, toque la faringe del paciente

3. Nasofaríngeoa. Introduzca un aplicador de alginato en una de las fosas nasales,

lentamente empújelo hasta llegar a la nasofaringe 4. Tubos

a. Tapón rojo: sin anticoagulante, puede ser estéril o no y puede estar al vacío o no.

b. Tapón amarillo: anticoagulante ACD y se emplea en banco de sangre e inmunología

c. Tapón lila: con EDTA y se utiliza en procedimientos hematológicosd. Tapón verde: con heparina y se emplea en Inmunología para estudios de

HLA, Antigenemia por CMV, etc.e. Tapón de algodón: para secreciones y no tiene anticoagulante

Laboratorio 8Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana

PSAUna de las actividades más importantes de un laboratorio bacteriológico es la

determinación de la prueba de susceptibilidad y que se realiza contra las bacterias aisladas a partir de una muestra clínica. Esta susceptibilidad “in vitro”, se puede extrapolar a “in vivo” y sería una guía para el personal médico hacia la escogencia certera de un antibiótico, que permita la ihibición del crecimiento bacteriano en el paciente.

La técnica a emplear se conoce como Bauer and Kirby y se define como un método manual de difusión antimicrobiana, donde, sobre un medio de cultivo (Agar Mueller Hinton), se coloca un inóculo estandarizado de una bacteria y se realiza una distribución confluente de la bacteria, tratando de que en toda la superficie del medio de cultivo, se encuentre la misma cantidad de ellas. Luego se colocan discos de antibióticos, los cuales absorben líquido del medio y el antibiótico difunde en forma centrífuga.

La forma de lectura de una PSA realizada de esta manera, es por medio de la medición del halo de inhibición producido en el inóculo bacteriano, donde un zona de inhibición se mide y se compara contra estandares internacionales (tablas) y se decide se la cepa es sensible o no. Por otra parte no observar la formación de un halo se interpreta como resistencia al antibiótico empleado.

Otra forma de detección de la acción de un antibiótico sobre una bacteria es por medio de lo que se conoce como Epsilon test o E-test, en el cual, la formación de una elipse, concuerda con la Concentración Mínima Inhibitoria (CIM).

Otra forma de detección de la resistencia a un antibiótico es la determinación de la prueba de beta lactamasa, empleando la cefalosporina cromogénica (cefinasa)

Material

Cultivos frescos en caldo de Staphylococcus aureus (Gram positivo) y Escherichia coli (Gram negativo)Placas de agar Mueller Hinton (dos por estudiante)Dos tubos de caldo de cultivos estérilAplicadores estérilesDiscos de los siguientes antibióticos:

Gram positivo: vancomicina, oxacilina, septran Gram negativo : gentamicina, ampicilina, nitrofurantoína, septran, ciprofloxacina

PinzasRegla milimétricaPlacas inoculadas con tiras de E-testDiscos de cefinasaRepirte de una PSA lograda con un sistema automatizado

Método

1. Con un asa estéril, recoja un pequeño inóculo de la cepa de Escherichia coli y colóquelo en uno de los tubos de caldo de cultivo estéril.

2. Haga una buena emulsificación del inóculo bacteriano.3. Introduzca una aplicador estéril dentro del caldo y elimine el exceso de líquido

en las paredes del tubo y proceda a rayar en forma confluente una placa de agar Mueller Hinton.

4. Utilizando una pinza estéril, coloque los siguientes discos: ampicilina, septran, ciprofloxacina, vancomicina y gentamicina.

5. Haga lo mismo con la cepa de Staphylococcus aureus, pero coloque los siguientes antibióticos: ampicilina, oxacilina, vancomicina, ciprofloxacina y septran

6. Coloque ambos platos en la incubadora a 35°C por 24 horas y después de este periodo de incubación y usando una regla milimétrica, proceda a medir los halos de inhibición.

7. Realice una prueba de beta lactamasa, para lo cual coloque sobre el disco de cefinasa una asada de la cepa de Staphylococcus aureus y observe el cambio de color del disco.

8. Observe las placas inoculadas con las tiras de E-test y observe la formación de la elipse y determine la CIM en las cepas suministradas.

9. Estudie el reporte de PSA logrado con un sistema automatizado, en especial a la cepa, los antibióticos y la sensibilidad o resistencia reportada para el agente en estudio

Laboratorio 9Técnicas de cultivo puro y fenómenos hemolíticos

Introducción

En el presente laboratorio, el objetivo pretende que el estudiante desarrollo la destreza necesaria para separar diversos agentes bacterianos en una mezcla, por medio de la técnica de rayado separando colonias.

Por otra parte, apoyando la parte teórica, estudiar los fenómenos hemolíticos presentados por las bacterias: gamma hemólisis, alfa hemólisis y beta hemólisis, para lo cual se tendrán cepas de Enterococcus faecalis (gamma hemólisis), Streptococcus pneumoniae (alfa hemólisis) y Streptococcus pyogenes (beta hemólisis).

Por otra parte, un importante objetivo es la observación de la morfología colonial de algunos agentes bacterianos entre ellos el Haemophilus influenzae y su forma de identificación conocida como satelitismo.

Material3 placas de agar sangre1 placa de agar McConkey1 placa de agar manitol sal1 tubo con una mezcla de Escherichia coli y Staphylococcus aureusAsas estérilesPlacas demostrativas de Enterococcus faecalis, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes.Placas de agar chocolate con cepas de Haemophilus influenzaePlacas de agar sangre con el fenómeno del satelitismo

Método

1. Empleando asas estériles, raye los 5 platos suministrados con la mezcla bacteriana

2. Sigua la instrucciones ofrecidas por su instructor3. Observe los resultados después de un periodo de incubación de 24 horas a

35°C4. Observe los platos inoculados con las bacterias, gamma, alfa y beta hemolíticas,

note sus diferencias5. Observe la placa de agar chocolate inoculada con la cepas de Haemophilus

influenzae

Laboratorio 10Tinción Diferencial de Gram yTinción de Acido Resistencia

Introducción

La tinción de Gram, permite diferenciar las bacterias, según los constituyentes de la pared celular, en tres grandes grupos: Gram positivo, Gram variables y Gram negativo.

La coloración diferencial de Acido resistencia o Ziehl-Neelsen, es de gran uso en la búsqueda e identificación de las bacterias de la familia Mycobacteriaceae, las cuales son positivas para esta tinción.

Materiales

Cultivos frescos de Escherichia coli y Staphylococcus aureusReactivos para la tinción de GramAplicadores estérilesPorta objetosLáminas demostrativas de Mycobacterium sp.Láminas demostrativas y teñidas con la tinción de Gram de Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Campylobacter sp. y Bacillus sp.

Método

1. Prepare frotis sobre porta objetos del cultivo de Escherichia coli y Staphylococcus aureus, usando para tal fin aplicadores estériles.

2. Deje secar.3. Cubra la preparación con cristal violeta y déjela por pocos segundos y lave

suave con agua del tubo4. Agregue una gotas de Lugol (yodo más yoduro de potasio)5. Lave con agua del tubo y decolore con alcohol de 95°, hasta que la preparación

no suelte color6. Lave con agua del tubo y agregue safranina por 30 segundos.7. Lave con agua del tubo y deje secar8. Observa con el objetivo de inmersión.9. Observe cada una de las láminas demostrativas y anote la morfología observada

para cada agente:a. Streptococcus pneumoniae: DCGPb. Streptococcus pyogenes: CGP en cadenasc. Enterococcus faecalis: CGP en cadenasd. Haemophilus influenzae: BGNPLe. Klebsiella pneumoniae: BGNf. Campylobacter sp.:BGN espirilarg. Bacillus sp.: BGP esporulado

Laboratorio 11Morfología bacteriana

Bacilos Gram Negativo

Introducción

Durante el presente laboratorio, se pretende que los estudiantes se familiarecen con la morfología de los agentes bacterianos más frecuentes en la práctica médica.

Esto permitirá entender mejor las clases teóricas y se hará énfasis en el crecimiento exclusivo en agar chocolate de los agentes fastidiosos.

Se hará especial incapié en que los estudiantes entiendan la reacción en el medio de Triple azúcar hierro (TSI) y su importancia taxonómica dentro de los bacilos Gram negativo.

Materiales

Placas de agar sangre de los siguientes agentes: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Shigella sonnei, Campylobacter sp. y Haemophilus influenzae.Placa de agar chocolate inoculado con una cepa de Haemophilus influenzaeTubos de TSI de los siguientes agentes: Salmonella sp., Shigella sp., Escherichia coli, Klebsiella sp. y Pseudomonas aeruginosaTubos positivos y negativos de urea

Método

1. Observe la morfología colonial de cada uno de los agentes suministrados, anotando el color, el olor, el tipo de hemólisis y cualquier otra característica que facilite la identificación de estos agentes.

2. Observe los tubos de TSI correspondientes a cada agente y compare sus reacciones

3. Observe el color desarrollado por una bacteria urea positivo y una urea negativo4. Para la interpretación de estas reacciones escuche las explicaciones de su

instructor

Laboratorio 12Reacciones bioquímicas de ayuda

en la identificación de los microorganismos

Introducción

Las bacterias son muy pleomórficas y cada grupo requiere de condiciones específicas para su identificación y es por esto que se han desarrollado métodos que permitan una rápida clasificación de los agntes antes mencionados.

La oxidasa es de gran ayuda en la diferenciación de los bacilos Gram negativo entre sí.

La catalasa es una prueba que permite separar los cocos Gram positivo en dos grandes grupos, la coagulasa permite clasificar lo cocos Gram positivo catalasa positivo en dos y la prueba de indol es de gran utilidad en la identificación de Escherichia coli.

Por otra parte, el empleo del optochin permite clasificar a Streptococcus pneumoniae y la bacitracina a Streptococcus pyogenes.

Materiales

Reactivos de catalasa, oxidasa, coagulasa y discos de optochin y bacitracinaPlacas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae.Papel de filtro

Método

1. Realice una prueba de catalasa, para lo cual remueva un poco de la colonia y coloquela sobre un portaobjeto y agregue una gota del reactivo.

2. Emplee una cepa de Staphylococcus aureus como control positivo (burbujas) y una cepa de Streptococcus pyogenes como control negativo (no burbujas)

3. Realice una prueba de oxidasa, para lo cual remueva un poco de la colonia de Pseudomonas aeruginosa y colóquela sobre la superficie de un disco de oxidasa, la cepa positivo virará el disco hacia un color azul oscuro

4. Realice una prueba de indol, para lo cual sobre un pedazo de papel de filtro, coloque un poco de la cepa de Escherichia coli y agregue una gota del reactivo de indol, la producción de un color rosado indicará una prueba positiva.

5. Realice una prueba de coagulasa, para lo cual utilice la cepa de Staphylococcus aureus sobre un portaobjetos y una gota de un pool de plasma humano

6. Para la prueba de bacitracina, observe la cepa de Streptococcus pyogenes suministrada

7. Para la prueba de optochin, observe la placa de Streptococcus pneumoniae suministrada

Laboratorio 13Micología

Introducción

Los agentes micóticos presentan características morfológicas y microscópicas propias de cada grupo, por lo que su estudio, es de gran valor, tanto en los aspectos diagnósticos de la micosis como en aspectos taxonómicos.

Materiales

Cultivos en agar Saboureud Inclinado de los siguientes agentes: Candida albicans, Aspergillus sp., Microsporum sp., Fusarium sp., Geotrichum sp. y Cryptococcus neoformans.Láminas preparadas en azul de lactofenol de los agentes anterioresPorta objetosAplicadoresTinta China

Método

1. Observe las características visuales de los agentes entregados2. En la lámina demostrativa de Candida albicans, observa la formación de las

blastosporas.3. En la lámina demostrativa de Aspergillus sp., observa las estructuras

reproductivas (cabezas aspergilares)4. En las láminas demostrativas de Mycrosporum sp. y Fusarium sp., se debe

observan las macroconidias características de cada uno de los agentes5. En la lámina demostrativa de Geotrichum sp., observa la fragmentación del

micelio que da origen a las artroconidias6. En un porta objetos limpio, coloque una pequeña asada de la cepa de

Cryptococcus neoformans, y agregue una gota de tinta china y observe la tinción de cápsula característico de este agente.

Anexo 1Lavado de manos

Cuando debo lavarme las manos?

1. Antes de cada comida 2. Antes de amantar al bebe 3. Después de ir al sanitario o de ayudar a un niño a ir al sanitario 4. Después de cambiarle los pañales al bebe 5. Después de sonarse la nariz o limpiarle la nariz a su hijo

Como lavarme las manos?

1. Utilice agua y jabón y recuerde que el agua sola no elimina los gérmenes 2. Mójese las manos 3. Enjabónese bien y recuerde que no es necesario usar un jabón antibacteriano 4. Restriéguese las manos por al menos 30 segundos. Si usted es católico, rece un Padre Nuestro y si no lo es, cante Cumpleaños Feliz por tres veces. 5. Enjuáguese las manos, al menos, durante 10 segundos o rece un Ave María 6. Séquese las manos con una toalla limpia ya sea de tela o Pape

7. Elimine el papel en un basurero y lave la toalla de tela de forma conveniente y rutinaria