manual de inmuno
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1
SEP. SEIT.
Dirección General de Educación
Tecnológica Industrial
M a n u a l d e P r á c t i c a s
I N M U N O L O G Í A
Q.B.P. Marcelino J. Campos Tejeda
C.B.T.i s 194 Cd. Ayala Mor
2
Introducción
1 Diluciones 4
2 Sangrado de animales 8
3 Inmunización de animales 11
Reacciones de Precipitación
4 Precipitación capilar 20
5 Imnunodifución doble 24
6 Inmunudifución radial 27
Reacciones de Aglutinación
Aglutinación activa
7 Tipificación de grupos sanguíneos 29
8 Prueba de coombs 35
9 Pruebas cruzadas 39
10 Reacciones febriles 46
Aglutinación Pasiva
11 Inhibición de la hemaglutinación 49
12 Inhibición dela aglutinación 51
13 Factor Reumatoide 52
14 Proteína c reactiva 55
15 Antiestreptolisinas 57
REGLAMENTO DEL LABORATORIO
3
Los laboratorios se destinan fundamentalmente a la experimentación y la investigación
científica, las actividades que se realizan en los laboratorios son de tipo practico.
Finalidades:
Lograr al máximo el aprovechamiento de los recursos humanos y materiales con los que se
cuentan dentro del laboratorio, para obtener mejores resultados tanto individuales como en
conjunto, fomentando en el educando los hábitos de observación, responsabilidad e
investigación.
Seguridad:
Todos los educandos deben de poner en práctica las reglas de higiene y seguridad dentro del
laboratorio, debiendo dar aviso inmediatamente al maestro de cualquier desperfecto o
accidente que pudiese ocurrir (en fusibles e interruptores eléctricos, conexiones de gas, llaves
de agua), por higiene no debe tirar papeles, dejar muestras en las coladeras de las mesas de
trabajo, no tirar sustancias en el piso.
Disciplina:
1.- La hora de entrada será la que indique su horario, dando una tolerancia de 10 minutos.
2.- El alumno debe recibir y entregar el equipo y material en buen estado al finalizar la
práctica (si nota algún desperfecto en los materiales debe de reportarlo
inmediatamente).
3.- Durante su estancia en el laboratorio, el alumno deberá usar la bata de trabajo,
(blanca).
4.- El alumno para poder realizar su objetivo de la práctica debe traer el material o
muestras en ellas se le pidan.
Práctica Nº 1
4
Nombre de la practica......Diluciones
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá los conocimientos necesario para poder
realizar concentración o dilución de soluciones que son de gran utilidad en el laboratorio
clínico.
Introducción:
Una de las ramas importantes que apoyan a la inmunología son las matemáticas ya que es
necesario realizar cálculos que son vitales para poder realizar una metodología lo que nos
indica que cualquier error en los cálculos traerá como consecuencia un mal diagnostico del
proceso patológico.
Como algunas metodologias requieren de preparar soluciones es necesario saber que es una
solución esta se puede definir como un sistema homogéneo y estable donde participan
moléculas, átomos o sustancias. Los componentes que participan en una solución son el
soluto y el disolvente el primero siempre se encuentra en menor proporción y el segundo
se encuentra en mayor proporción .
Las soluciones para su estudio se pueden clasificar en:
1.- Empíricas .-Estas soluciones se caracterizan por que para su preparación no se requiere
de cálculos matemáticos dentro de este grupo se pueden encontrar:
a.- Insaturadas
b.- Saturadas
c.- Sobresaturadas
2.- Valoradas.- Son soluciones que para poderla preparar se requiere realizar cálculos
matemáticos tomando en cuenta la composición química del soluto aforando a un litro
dentro de éstas se tiene:
a.- Sol. Molares( soluto en gramos o moles a un Litro)
b.- Sol. mólales ( soluto en gramos o moles en un litro )
c.- Sol Normales( soluto en equivalentes químicos a un litro)
3.- Porcentuales.- Soluciones donde el soluto se expresa en gramos o mililitro aforando a
cien mililitros dentro de éstas se encuentran:
a.- Peso
b.- Volumen
En el laboratorio por cuestión de economía en la mayoría de las ocasiones es necesario
preparar pequeñas cantidades de una solución apartar de una mas concentrada (realizar
una dilución )dependiendo del caso se puede realizar los siguiente.
A.- Disminuir la concentración adicionando disolvente en cantidades conocidas.- En este
caso la dilución se puede expresar en forma de proporciones, donde el primer dígito nos
Práctica Nº 1
5
indica el volumen de la solución original el cual se puede expresar en mililitros, microlitros
etc. y el segundo no indica el volumen final de la nueva solución.
V.g. 1 : 2 ( 1 + 1 = 2 )
1 : 3 ( 1 + 2 = 3 )
1 : 4 ( 1 + 3 = 4 )
1 : 5 ( 1 + 4 = 5 )
Etc.
B.- Cuando se realizan diluciones seriadas.- En este caso se acostumbra referirse a un
factor de dilución que es el que multiplica a la dilución anterior.
Vg.
Realizar una serie de diluciones con factor de dilución de dos y tres
1 : 2, 1 : 4, 1 : 8, 1 :16, 1 : 32
1 : 3, 1 : 9, 1 : 27, 1 :71, 1 : 213
C.- Cuando se tiene una solución a una concentración determinada y se requiere diluirla.-
para esto se divide la dilución final que se requiere entre la dilución con que se cuenta .
Vg. se tiene una solución 1: 6 y se necesita una que tenga una proporción 1: 54 para esto
se procede a dividir 54 entre 6 y el resultado es 9 lo cual no quiere decir que se tomara un
volumen de la dilución 1:6 y se le agregara ocho del diluyente lo cual no da una solución
1:54 con respecto a la original.
D.- Cuando se requiere un volumen final determinado y preciso diferente al calculado
teóricamente ya que por lo general el volumen que se necesita es menor al teórico para esto
se toma en cuenta el volumen que se requiera y la dilución que se desea.
V.g. se necesita 25 mililitro de una solución 1:250 en teoría se tendría que preparar 1
volumen del soluto mas doscientos cuarenta y nueve del solvente apartar de esta solución se
tomaría veinticinco y se desecharía doscientos veinticinco lo que se puede observar de lo
anterior que se desecharía la gran mayoría de la solución para evitar esto se realiza lo
siguiente:
En primer lugar se haría la relación entre el volumen deseado y el teórico 25/250 lo cual
daría 0.1 este resultado se multiplica por la expresión 1 + 249 donde el siguiente resultado
0.1 + 24.9 = 25 que es el volumen deseado sin alterar la relación 1:250 que es la que se
desea.
Material:
Safranina
Azul de Metileno
Práctica Nº 1
6
Tubos de ensaye
Pipetas
Balanza
Espectrofotometro
Agua
Metodología:
1.- Pesar 0.1 gramo de safranina y disolverlo en 4.5 militros de agua
2.- Colocar en nueve tubos de ensaye 4.5 ml de agua y marcarlos del uno al nueve.
3.- Tomar 0.5 mililitros con una pipeta del tubo que contiene la safranina/agua y colocarlo
en el tubo uno y homogeneizar
4.- Del tubo uno tomar con una pipeta y depositarlo en el tubo numero dos homogeneizar
5.- Repetir el procedimiento anterior hasta el tubo nueve de este descartar 0.5 mililitros
después de homogeneizar.
6.- Valorar la disminución de color en forma visual .
7.- Con ayuda de un espectrofotometro realiza una curva ( selecciona longitud de onda de
acuerdo a l espectro de emisión)
Nota. Realiza el mismo procedimiento para el colorante azul de metileno y registra tus
resultados
Cuestionario:
1.- Prepara una solución 0.2 Molal de ácido sulfúrico a un volumen final de 250 ml.
2.- Prepara una solución 0.2 Molar de ácido sulfúrico a un volumen final de 300 ml
3.- Prepara una solución 0.2 Normal de ácido sulfúrico a un volumen final de 300 ml
4.- Realiza una serie de diez diluciones de una solución con un factor de dilución de 6
5.- Se tiene una dilución 1:6 y se requiere para realizar una metodología una dilución
1:70 realiza los cálculos necesarios para obtener esta dilución.
6.- Reporta los resultados de tus dos procedimientos incluyendo.
7.- Reporta la conclusión a la que llegas en la practica
Práctica Nº 2
7
Nombre de la practica...... Sangrado de animales
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá la habilidad de manipular y sangrar animales
de experimentación lo cual gran utilidad para la obtención de productos biológicos en el
laboratorio
Introducción:
El sangrado de animales se realiza antes y después de un protocolo de inmunización que
sucede después de 4-7 dais después de la ultimas inoculación pero es importante realizar un
sangrado previa al esquema de inmunización lo cual nos sirve como testigo negativo del
protocolo de inmunización. el suero obtenido después del protocolo de inmunización se le
determina el titulo de anticuerpo presentes lo cual valora la
potencia del producto biológico.
Material
Jeringas con agujas del 25
Jeringas con agujas del 22
Jeringas con agujas del 20
Cepo ( caja para sujetar conejos )
Trampa para ratón
Torundas impregnadas de alcohol
Crema depiladora
Metodología:
Sangrado de conejo
Oreja
1.- Introducir el conejo en el cepo
Práctica Nº 2
8
2.- Localizar la arteria central
3.- Limpiar con una torunda impregnada de alcohol
4.- Sangrar el conejo con una jeringa con aguja del 20
5.- Obtener la cantidad necesaria de sangre
6.- Retirar la aguja y presionar el sitio de la punción con una torunda impregnada del
alcohol
Corazón
1.- Sujetar el conejo d las cuatro patas colocándolo con el tórax hacia arriba
2.- con el dedo índice y medio localizar en la zona del tórax el corazón por medio del
latido cardiaco
3.- Limpiar con una torunda impregnada de alcohol el tórax
4.- Realizar la punción con una aguja del 20
5.- Si la aguja no se encuentra en cavilad cardiaca sacarla y volver a introducirla
6.- Seccionar la sangra hasta obtener el volumen de sangre deseado
7.- Retirar la aguja y colocar una torunda de algodón
Nota.- cuando se introduce la aguja en cavidad cardiaca se siente por que la jeringa
registra las pulsaciones del corazón si esto no sucede no se esta en región cardiaca. si la
aguja se mueve en el interior del tórax puede haber riesgo de desgarra tejido cardiaco y
pulmonar ocasionando la muerte del animal
Sangrado de cobayo
Se realiza en forma similar al sangrado de conejo por vía cardiaca
Sangrado de ratones
1.- Sujetar el conejo colocándolo dentro de una trampa para ratones o sobre la jaula jalar
ligeramente la cola
Práctica Nº 2
9
2.- Introducir una pipeta Pasteur o un capilar sin heparina en la región interna del ojo hasta
encontrar el seno venoso, esto sucede cuando la sangre fluye por capilaridad hasta la luz
de objeto de punción
cuestionario:
1.- Cual es la razón por la cual se debe de sangrar un animal de laboratorio
2.- Que animal sangraste y a que problemas te enfrentaste
3.- Que es un producto biológico
4.- Que entiendes por esquema de inmunización
Práctica Nº 3
10
Nombre de la practica...Inmunización de animales
Objetivo
Al término de practica el alumno tendrá la habilidad de realizar un esquema de inmunización en
animales para la obtención de productos biológicos con gran cantidad de anticuerpos inducidos
Introducción:
Se entiende por inmunización al proceso mediante el cual un individuo competente desarrolla una
respuesta inmunología al entrar en contacto con un antígeno especifico esta respuesta puede ser natural
o artificial
La obtención de anticuerpos por medio de una vía de inmunización es de gran ayuda en la terapéutica
humana y animal en diferentes procesos infecciosos o tóxicos adamas de que estos antisueros son de
gran ayuda para la identificación de bacterias
Cuando un inmunogeno penetra al organismo, se activan una serie de mecanismos inespecificos y
específicos (donde interactuan células portadoras del antígeno < CPA >, linfocitos t y b. como
resultado de esta interacción se induce una respuesta inmune primaria con la formación de anticuerpos
loa cuales pueden detectarse en el suero después de cuatro días de inmunización <fase lag>,
aumentando lentamente <fase Log> hasta llegar a un máximo <meseta> para después decaer
rápidamente en este tipo de respuesta es
Producido principalmente por IgM seguida por IgG . si hay un segundo contacto con el inmunogeno la
fase la disminuye considerablemente y alcanza un máximo de diez veces mas la concentración del
anticuerpo que en la respuesta inicial esta respuesta es mediada por IgG .
El antígeno producido por efecto de una respuesta inmunologica va a estar en función de :
1.- Ruta de inmunización
2.- Naturaleza del inmunogeno
3.- Vía de procesamiento del inmunogeno
4.- Presentación del inmunogeno a linfocitos
La dosis del inmunogeno es importante ya que si se inocula una dosis no adecuada se puede presentar
el fenómeno de tolerancia que es un estado de no respuesta a un antígeno particular.
Para que se puede producir una respuesta inmunologica es necesario tomar en cuenta los siguientes
factores
1.- Antígeno ya que su inmunogenicidad va a estar en función de, complejidad estructural, peso
molecular, conformación y naturaleza química <se ha visto que las proteínas son mas inmunogenicas
que los carbohidratos y lípidos> es importante recordar que un antígeno se comporta de manera
diferente en diferentes especies animales adamas que es importante la edad, el sexo y la genética.
Práctica Nº 3
11
2.- Estado físico del antígeno <soluble o particulado> esto es importante ya que de aquí va a
depender la vía de inmunización que se eligiera :
Antígenos particulados <bacterias, glóbulos rojos células y partículas inertes> de preferencia son
introducidos por vía intravenosa
Antígenos solubles pueden ser introducidos por diferentes vías <intramuscular (IM),intraperitoneal (IP)
subcutánea (SC) intradermica (ID) cuando se utiliza la vía SC e ID se recomienda que se acompañe de
un inmunopotenciador o adyuvante
Un adyuvante es un estimulador de la respuesta inmunologica para que esto suceda debe de reunir los
siguientes requisitos:
a.- Ser capaz de formar un deposito para proteger al antígeno del catabolismo rápido dentro del
organismo
b.- ser capaz de estimular la respuesta inmune no especifica para lograr incrementar las linfocinas
favoreciendo la inducción de linfocitos B, proliferación de timocitos, interacción de células T y B,
estimularon de fagocitosis, procesamiento del antígeno, causa una reacción inflamatoria local en el sitio
de la inoculación .
Adyuvantes antigénicos
Endotoxinas de bacterias Gram neg.(Micobacterias, Bordetella pertusis )
Adyuvantes no antigénicos
Tartrato aluminico de potasio o alumbre fosfato de calcio aceite mineral lanolina
polinucleotidos algunos agentes tensodepresores
Dentro del las practicas inmunologicas el adyuvente que mas se trabaja es el Freund del cual se
conocen dos tipos:
Incompleto.- es una mezcla de aceite mineral con un detergente
Aceite ( drakeol, bayol, nujol )
Detergente ( falfa, arlacel, aquafor )
vg. arlacel-drakerol ( 1:9 )
arlacel-bayol ( 3:17)
Práctica Nº 3
12
Completo.- contiene además una micobacteria
vg. M. tuberculosis
M. bovis
M. phlei
Estas micobacterias se utilizan a razón de 1-5 mg. de peso seco por cada ml de adyuvante incompleto
En humanos no se recomienda utilizar ningún adyuvante de Freund debido a que frecuentemente su
utilización conduce al desarrollo de granulomas severos
Un adyuvante puede funcionar
1.- Aumentando directamente el numero de células involucradas en la formación de anticuerpos
2.- Favoreciendo el mejor procesamiento del antígeno por la célula fagociticas
3.- Prolongando la duración del antígeno en el animal inmunizado
Cuando se va a realizar una ruta de inmunización es necesario tomar en cuenta las siguientes
consideraciones
a.- El volumen administrado
b.- El regulador y los componentes que deben de ser administrados junto con el inmunogeno
c.- La rapidez con la que el inmunogeno es liberado dentro de la circulación linfática y sanguínea
vg. Para un conejo se recomienda de 2-5 ml por vía subcutánea para un ratón 0.3-1ml intraperitoneal
Cuando un inmunogeno se administra por vía intramuscular o intradermica su liberación es lenta, pero
si el intravenosa su liberación es rápida. nunca se debe de aplicar un inmunogeno junto con un
adyuvente por vía intravenosa
Material
Jeringa con aguja del 25
Jeringa con aguja del 22
Jeringa con aguja del 20
Cepo
Trampa para ratón
Crema depiladora
Torundas impregnadas del alcohol
Inmunogenos
Práctica Nº 3
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Metodología
Inmunización de conejos
Vía intravenosa
1.- Colocar el conejo en el cepo
2.- Localizar las venas marginales
3.- Sujetar bien la vena con el dedo anular y medio
4.- Limpiar la zona de inmunización con una torunda impregnada de alcohol al 70 %
5.- Proceder a inocular el inmunogeno para esto se recomienda que se inicie la inmunización en el
entramo mas distante a la cabeza procediendo a inyecta hacia abajo.
Vía subcutánea
1.- Elegirá la zona de inoculación
2.- Cortar el pelo con ayuda de tijeras
3.- Limpiar con una torunda impregnada de alcohol
4.- Levantar ligeramente la piel del conejo
5.- Introducir la aguja lentamente, aproximadamente una tercera parte del aguja .
6.- Depositar el antígeno sin que se forme papula en el sitio de la inoculación
Vía intradermica
1.- Rasurar el lomo del animal
2.- En este sitio aplicar crema depiladora y dejar actuar durante 5-8 min.
3.- Limpiar en su totalidad la crema con ayuda de un trapo húmedo
Práctica Nº 3
14
4.- Introducir la aguja en la dermis del animal con el bisel hacia arriba una vez dentro de la piel, girar
120º y depositar el inoculo
5.- En el sitio dela inoculación se debe de observar la formación de una papula
Inoculación de cobayos
Vía intradermica
1.- Rasurar el lomo del animal
2.- Aplicar crema depiladora y dejar actuar durante 5-8 min.
3.- Limpiar con un trapo húmedo la crema depiladora en su totalidad
4.- Introducir la aguja en la dermis con el bisel hacia arriba y una vez dentro girar 120º y depositar el
inoculo
5.- En el sitio del inoculación se debe de formar una papula
Intraperitoneal
1.- Sujetar el cobayo de las cuatro patas con el tórax hacia arriba
2.- Colocar el cobayo en forma inclinada con la cabeza hacia abajo
3.- Limpiar la región abdominal con una torunda impregnada de alcohol
4.- Introducir la aguja en posición lateral y proceder a inocular el inmunogeno
Práctica Nº 3
15
Inmunización de ratones
Vía intraperitoneal
1.- Colocar el animal en la jaula para ratones
2.- Sujetar la cola del animal y cabeza con una mano
3.- Exponer la región abdominal
4.- Colocar el animal con la cabeza hacia abajo
5.- Limpiar la región donde se puncionara
6.- Introducir la aguja en posición lateral e inocular el antígeno
Vía intravenosa
1.- Colocar el animal en la jaula para ratones y sujetar la cola en forma horizontal
procurando que la vena caudal quede expuesta
2.- Limpiar la cola con una torunda impregnada de alcohol
3.- Introducir el antígeno usando una aguja de calibre 25 esto sucede cuando se desliza
suavemente el antígeno
DEPENDIENDO DEL INMUNOGENO Y DEL ANIMAL A INOCULAR SE PUEDE
SEGUIR EL SIGUIENTE ESQUEMA DE INMUNIZACIÓN.
Antígenos particulados
Inoculación Día Fecha Dosis Vía
1 0 0.5 ml IV
2 4 1.0 ml IV
3 8 2.0 ml IV
4 12 3.0 ml IV
Sangrado 18
Los antígenos bacterianos que se pueden utilizar son cepas Salmonella choleraesuis H y O
ajustados a una concentración aproximada 900 millones de bacterias por ml de suspensión
cuando ya se completo el esquema de inmunización se debe de titular obteniendo un titulo
de 1:640 para el antígeno somático “ O “ y para el antígeno flagelar “ H “ 1:5000 si esto no
Práctica Nº 3
16
sucede se recomienda realizar una quinta inoculación con 3 ml del antígeno después del
cuarto o sexto día del sangrado y volver a sangrar seis días después de la inoculación.
Inmunización con Eritrocitos
Inoculación Día Fecha Dosis Vía
1 0 1 IV
2 2 1 IV
3 4 1 IV
4 6 1 IV
5 8 1 IV
6 10 2 IV
7 12 2 IV
8 14 2 IV
9 16 2 IV
Sangrar 21
Los eritrocitos se deben de preparar al 10% en solución salina isotónica
Antígenos solubles
Inoculación Día Fecha Dosis Vía
1 0 5 mg de Ag disuelto en 1 ml de
solución salina emulsificado en 1 ml
de adyuvante completo de Freund.
ID o SC
2 15 5 mg de Ag disuelto en 1 ml de
solución salina emulsificados en 1 ml
de Ayuvante incompleto de Freund
ID o SC
3 30 0.25 mg de Ag en solución salina IV
4 31 0.5 mg de Ag en solución salina IV
5 32 1.0 mg de Ag en solución salina IV
Sangrar 39
Los antígenos solubles que se que se pueden utilizar son fracciones séricas como la
Albúmina, Gama globulina, Albúmina de Huevo.
Práctica Nº 3
17
Suero Total
Inoculación Día Fecha Dosis Vía
1
0
1 ml de Ag diluido 1:10 en sol.
sal. emulsificada en 1 ml de
adyuvante completo de Freund
ID o SC
2
15
1 ml de Ag diluido 1:10 en
solución salina emulsificada
en 1 ml de adyuvante
incompleto de Freund
ID o SC
3 30 1 ml de Ag diluido 1:50 en
solución salina.
IV
4 31 1 ml de Ag diluido 1:25 en
solución salina.
IV
5 32 1 ml de Ag diluido 1:10 en
solución salina.
IV
Sangrar 39
Cuestionario
1.- Que vía de inmunización utilizaste y por que
2.- Que es un antígeno
3.- Que antígeno utilizaste
4.- Cual es la función de un adyuvante
Práctica Nº 3
18
Introducción
Las reacciones de precipitación ( inmunoprecipitación ) se presentan cuando antígenos
solubles y polivalentes se combinan con su anticuerpo especifico ( antisuero homologo )
dando lugar a complejos insolubles que pueden aparecer al cabo de unos minutos, los
cuales son visibles y cuantificables para que la reacción Ag-Ab se lleve acabo va a
depender de varios factores:
Ph
Fuerza ionica
Temperatura
Tiempo
Concentración de antígeno
Concentración de anticuerpo
Las reacciones de precipitación pueden ser cuantificadas además que pueden realizarse en
medios líquidos, sólidos, o semisolidos
Medio liquido
Medio solidó
Medio semisolido
Inmunodifución radial o simple
Inmunodifución doble
Inmunoelectroforesis
Contrainumoelectroforesis
Electroinmunoelectroforesis unidimensional
Inmunoelectroferesis cruzada
Las reacciones de precipitación en medios semisolidos permiten identificar individualmente
cada constituyente de una mezcla de antígenos y anticuerpos, así como su cuntificación por
comparación con otros ya conocidos los cual es mas fidedigno si se combina con
electroforesis. cuando se trabaja con inmunodifución es importante valorar la velocidad de
difusión de los reactivos ya que esta va a estar en función de físicas e inmunoquimicas del
sistema las cuales son:
..concentración de las moléculas ( la velocidad de definición es proporcional a la
concentración )
..tamaño de las moléculas ( la vel. de difusión es inversamente proporcional al tamaño de
las moléculas )
..forma de las moléculas
..viscosidad del medio
..temperatura
La interpretación de prueba va a estar en función del numero de bandas que resulten las
cuales van a estar formadas por un complejo antigeno-anticuerpo
Práctica Nº 4
19
Nombre de la practica.... Precipitación en medio liquido
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá la habilidad de cuantificar la cantidad de
anticuerpos presentes en una muestra determinada con ayuda de un método capilar liquido
Introducción
Cuando se realiza una precipitación en medio liquido es necesario mezclar cantidades
crecientes de antígeno y concentración constante de anticuerpo o viceversa la cantidad de
precipitado varia según la proporción de los reaccionantes a pequeñas concentraciones de
antígeno no se observa formación de precipitado , pero conforme va aumentando la
concentración de antígeno este precipitado va a aumentar en forma proporcional hasta
alcanzar un máximo y empezar a disminuir si se analizaran los tubos capilares después de
la
formación del precipitado es posible observar antígeno libre en la en zona ascendente de la
curva ( zona de exceso de anticuerpo ) o antígeno libre en la región descendente de la curva
( zona de exceso de anticuerpo ) pero en la región central de la curva no hay Ag. ni ab libre
lo cual se le nombre zona de equivalencia .
Si se realiza una gráfica donde se graficara cantidad de precipitado formado contra cantidad
de antígeno agregado el resultado seria tres zonas y éstas quedarían de la siguiente manera.
1.- Exceso de anticuerpo
2.- Equivalencia
3.- Exceso de antígeno
Material
Tubos capilares
Tubos de ensaye
Pipetas
Gradilla de plastilina
Solución salina
Solución de albúmina de huevo
Suero anti albúmina de huevo
Metodología
1.- Dividir en tres partes iguales 11 tubos capilares
2.- En ocho tubos de ensayo realizar Diluciones al doble de la albúmina con solución
salina usando como volumen final un mililitro.
3.- Se llena un tubo capilar por capilaridad con antisuero hasta la primer marca se limpia
la parte externa del tubo
Práctica Nº 4
20
4.- Se gira 180º el capilar y se hace descender hasta la marca el antisuero
5.- En forma similar se absorbe antígeno sin diluir que llegue hasta la segunda marca
limpiar la parte externa del tubo con papel absorbente
6.- Mezclar por inversión repetida
7.- Tapar uno de los extremos con el dedo y dejar que el contenido quede centrado en el
tubo
8.- Repetir los pasos 3 hasta el 7 pero utilizando las Diluciones de la albúmina
9.- Se usan testigos utilizando solución salina mas antisuero sin diluir y solución salina
mas antígeno
10.- Colocar los tubos en una gradilla de plastilina y dejarlos unos minutos a temperatura
ambiente y guardarlos en refrigeración durante 24-48 hrs.
11.- Medir la precipitación en milímetros
12.- Anotar los resultado
Cuestionario:
1.- Anota las Diluciones que realizaste en cada tubo capilar
2.- Que precipitado resulto en cada capilar
3.- Que concentración de antígeno hay en cada capilar antes de reaccionar
4.- Que concentración de anticuerpo hay en cada capilar antes de reaccionar
5.- Que cantidad de antígeno hay libre en cada capilar después de reaccionar
6.- Que cantidad de anticuerpo hay libre en cada capilar después de reaccionar
Práctica Nº 5
21
Nombre de la practica ... Inmunodifución doble método de Ouchterlony
Objetivo:
Al termino de practica el alumno adquirirá la habilidad de cuantificar la cantidad de
anticuerpo presente en un producto biológico problema con ayuda de un método de
inmunodifución doble
Introducción
El método de Ouchterlony se basa en que el antígeno y el anticuerpo difunden atrevas de un
medio semisolido y formen complejos inmunes estables los cuales pueden ser analizados
visualmente para valorar la reacción antigeno-anticuerpo que nos puede dar idea de la
pureza del antígeno o del anticuerpo en forma muy gruesa, esta metodología también nos
puede ayudar para cuantificar la concentración de antígeno o titular antisueros la
desventaja de este método es que tiene una baja sensibilidad
Material
Porta objetos limpios y desengrasados
Cajas de petri
Aplicadores de madera
Pipetas
Matraz erlenmeyer
Pipetas Pasteur
Papel absorbente
Solución salina isotónica
Timerosal al 1%
Antígeno especifico
Anticuerpo especifico
Metodología
1.- Preparar una solución de agarosa al 0.1% en solución salina isotónica disolverla por
calentamiento reponer el volumen perdido con agua destilada caliente
2.- Sumergir los porta objetos en la solución de agarosa caliente, escurrir y dejar secar (
barnizado de portaojbetos )
Práctica Nº 5
22
3.- Preparar solución de agarosa al 0.1 % en solución salina isotónica y disolverla por
calentamiento reponiendo el volumen perdido con agua destilada caliente ; adicionar
timerosal hasta obtener una
concentración final de 0.1 %
Práctica Nº 5
23
4.- Colocar los portaobjetos barnizados secos en un puente de tinción y con ayuda de una
pipeta inundarlos con agarosa al 1% caliente
5.- Dejar gelificar los potaobjetos a temperatura ambiente y guardarlos en ambiente
húmedo hasta su uso
6.- realizar perforaciones en el gel con ayuda de un capilar de acuerdo al siguiente
esquema
O O
O
O O
Nota El agar residual de la perforaciones se elimina con ayuda de aplicadores
7.- Los posos realizados se llenan con un antígeno al centro y los anticuerpos a los lados
8.- En ambiente húmedo se colocan los portaobjetos sobre aplicadores de madera
9.- Incubar a temperatura ambiente de 24 - 48 horas y buscar bandas de precipitación
(observar las placas identificando las bandas de precipitación de identidad total, identidad
parcial o no identidad )
10.- Anota tus resultados
Cuestionario:
1.- Que antígeno utilizaste
2.- Que anticuerpos utilizaste
3.- En que posos hubo identificación de Ag-Ab
4.- Para que se utiliza el ambiente húmedo
5.- Por el antígeno debe de estar en el centro
Práctica Nº 6
24
Nombre de la practica ........ Inmunodifución radial
Objetivo
Al termino de la practica el alumno cuantificara la cantidad de antígeno o que tenga en un
producto biológico con ayuda de la inmunodifución radial
Introducción
Este método es de gran ayuda para la cuantificación de antígenos los cuales conforme van
difundiendo va diluyéndose hasta que adquiere una concentración proporcional al
anticuerpo generando un halo de precipitación cuyo diámetro es directamente proporcional
ala concentración de antígeno. El anticuerpo cuando se encuentra en su concentración
inicial es muy alta lo cual favorece la formación de complejos solubles. para que esta
determinación sea confiable se necesita tener muestras estandarizadas de antígeno lo cual
funciona como patrón de referencia .
Este método se basa en la difusión del antígeno y el anticuerpo a a través de un medio
semisolido generando complejos inmunes estables los cuáles pueden ser valorados
visualmente identificando el sistema Ag-Ab así como la posible relación inmunologica
entre dos antígenos así como para realizar estimaciones a grandes rasgos de la pureza de un
anticuerpo o un antígeno aunque también es de gran ayuda la determinación para
semicuantificar la cantidad de anticuerpo presente de un producto biológico o el titulo
precipitante de un antisuero la desventaja de este método radica en su baja sensibilidad.
Material
Portaobjetos
Cajas de petri
Pipeta serológica
Pipeta Pasteur
Matraz erlenmeyer
Papel absorbente
Regla graduada en milímetros
Agarosa
Solución salina isotónica
Timerozal al 1%
Antisueros
Solución de antígenos a diferentes concentraciones
Metodología
1.- Barnizar portaobjetos
2.- Preparar solución de agarosa al 1% con solución salina y disolver la agarosa por
calentamiento reemplazando el volumen con agua destilada caliente . dejar enfriar la
Práctica Nº 6
25
agarosa hasta una temperatura de 45¦c y adicionar 1-5% ( v/v ) del antisuero, mezclar
perfectamente y adicionarle timerosal hasta una concentración final de 0.1%.
3.- colocar los portaobjetos barnizados sobre un puente de tinción y con ayuda de un pipeta
inundarlos con la mezcla antisuero-agarosa dejar gelificar a temperatura ambiente y
guardarlos en ambiente húmedo hasta su uso.
4.- sobre una línea horizontal realizar perforaciones de 3 mm de diámetro separadas 0.5 cm
O O O O
5.- Llenar cuatro posos con un volumen determinado de las soluciones de antígeno y un
poso con la solución problema del antígeno
6.- Incubar las placas en cámara húmeda a temperatura ambiente durante 24-48 hrs.
Anotar los resultados midiendo los diámetros de inhibición y realizar una gráfica donde se
colocara concentración de antígeno contra el cuadrado del diámetro de inhibición.
interpolar el valor de la solución problema para conocer su concentración.
Cuestionario
1.- Que Diluciones realizaste del antígeno
2.- Que diámetro de inhibición obtuviste
Práctica Nº 7
26
Nombre de la practica Determinación de Grupos sanguíneos
Objetivo:
Al termino de la practica el alumno será capaz de identificar las determinantes antigenicas
mas frecuentes en la superficie de los eritrocitos.
Introducción
En la membrana de los eritrocitos se encuentran estructuras químicas con propiedades
especificas las cuales se pueden detectar con un anticuerpo homólogo donde se implica la
aglutinación del eritrocito de ahí que al anticuerpo se le denomina Hemaglutinina y al
antígeno Hemaglutínogeno. Se dice que son isoaglutinógenos ( Ag) e isoaglutininas (Ag )
que diferencian los glóbulos rojos de individuos de los de otros de la misma especie .
Tomando como base las características genéticas, morfológicas y químicas de los glóbulos
rojos se observa un polimorfismo que depende de las características inmunohematológicas
además de que presentan características importantes como ser detectados por su actividad
especifica con el Ab correspondiente que producen aglutininas o lisis, se transmiten por
herencia según las leyes de Mendel aparecen en ciertas etapas de la vida fetal y están
plenamente formados al nacer persistiendo durante toda la vida de ahí que se puedan
clasificar en un gran numero de grupos o sistemas sanguíneos bien definidos dentro de los
cuales se pueden mencionar los siguientes sistemas.
1.- ABO
2.- Rh
3.- MNS
4.- Lewis
5.- Luteran
6.- Duffy
7.- Kidd
8.- Diego
9.- Y
10.- Xg
Etc.
Los que se determinan en forma rutinaria en la mayoría de los laboratorios son el ABO y el
Rh.
Sistema ABO
Práctica Nº 7
27
Es el que se descubrió en primer lugar por Landstainer y se caracteriza por que es el único
que en el plasma y en el suero contiene siempre aglutininas que reaccionan con factores
sanguíneos presentes en glóbulos rojos de otras personas. Las isoaglutinas que contiene se
dice que son del tipo completo (IgM) de ahí sean altamente aglutinantes y buenos fijadores
del complemento razón por la cual la determinación de los grupos sanguíneo sea de gran
importancia en las transfusiones sanguíneas .
En la superficie de los glóbulos rojos es posible encontrar uno dos o ningún de los dos
antígeno ( A y B ) tomando como base lo anterior se puede decir el sistema ABO se pueden
clasificar de la siguiente manera:
G. Sanguíneo Isoaglutinogeno Isoaglutininas en suero
O Ninguno Anti-A Anti-B
A A Anti-B
B B Anti-A
AB A y B Ninguno
Sistema Rh
Se descubrió como resultado del experimento con animales ( Landsteiner) tomando como
base a levine y Stetson que reportaron el caso de una mujer con severa reacción hemolítica
después de una transfusión con sangre de su esposo. Tomando en cuenta la suposición de
que en los eritrocitos de monos Macacus rhesus podían existir antígenos similares a los de
los humanos se inmunizaron conejos y cobayos con eritrocitos de Macacus rhesus y el que
se obtenía aglutinaba los eritrocitos del mono y del 85% de la población blanca aunque
otras investigaciones demostraron que estos antígenos eran diferentes pero se determino
que la mayoría de los eritrocitos humanos tienen el antígeno del mono rhesus y otro
diferente pero que se relaciona de ahí que se conservó la denominación del Rh para el
antígeno humano y asignó el nombre de LW al antígeno común del hombre y del mono esta
denominación esta echa por Levine.
Una vez que se descubrió el sistema Rh se siguió realizando investigaciones resultando dos
clasificaciones para este sistema una la propone Weiner y la otra Fhiser-Race .
Weiner Fisher-Race Rh positivo Rh negativo
Rho D Siempre Nunca
rh’ C Con frecuencia rara vez
rh” E con frecuencia rara vez
hr’ c con frecuencia casi siempre
hr” e con frecuencia casi siempre
Según Fisher-Race se habían identificado cinco como pertenecientes al sistema Rh estos
son C, c, D, E ,e . Estos se combinan entre si para dar lugar a diferentes patrones
antigénicos donde el D tiene dominancia antigénica de ahí que los individuos que presenta
Práctica Nº 7
28
el antígeno D se dice que son Rh positivo mientras que los que no lo tiene se les denomina
Rh negativo tomando como base lo anterior se pueden clasificar de la siguiente manera.
Factores Rh Tipo Rh
Rho ( D ) rh’ ( C ) rh” ( E ) W F-R Designación
-- -- -- rh cde Rh neg.
-- + -- rh’ Cde Rh neg.
-- -- + rh” cdE Rh neg
-- + + rh’,rh”o rhy CdE Rh neg.
+ -- -- Rho cDe Rh pos.
+ + -- Rh1 CDe Rh pos.
+ -- + Rh2 cDE Rh pos
+ + + Rh1,Rh2
öRhz
CDE Rh pos.
-- Ausente
+ Presente
Material
Centrifuga
Torundas
Pipetas Pasteur
Portaobjetos
Jeringa
Tubos de ensaye
Aplicadores
Suero anti-A
Suero anti- B
Suero anti- AB
Suero anti-D
Suero de Coombs
Albúmina bovina al 22%
Glóbulos rojos Humanos A. B y O al 5%
Solución salina isotónica
Metodología
1.- Tomar una muestra de sangre aproximadamente tres mililitros y dejar coagular a
temperatura ambiente.
2.- Centrifugar para separar el suero del paquete
3.- Rotular una placa de la siguiente manera
Práctica Nº 7
29
Anti-A Anti-B Anti-AB Autotestigo
4.- Con ayuda de una pipeta Pasteur Tomar eritricitos del fondo del tubo y colocarlos en
cada una de las marcas .
5.- A un lado de cada gota de eritrocitos colocar una gota de antígeno comercial según
corresponda a la marca y en la marca de autotestigo colocar una gota de albúmina al 22%.
6.- Mezcla las gotas con ayuda de un aplicador para cada marca y posteriormente con
movimientos circulares.
7.- Buscar la presencia de aglutinación en 25 segundos e interpretar el resultado
Nota.- La presencia de aglutinación en la marca como autotestigo nos índica la presencia de
autoanticuerpos anti-eritrocito y se debe de reporta
Búsqueda de Isoaglutininas
1.- Rotular una placa de la siguiente manera
A B O
2.- Agregar una gota de eritricitos previamente identificados como A, B y O en la marca
correspondiente
3.- Adicionar una gota de suero problema
4.- Mezclar ambas gotas con ayuda de un aplicados y posteriormente con movimientos
circulares.
5.- Buscar la presencia de aglutinación e interpretar el resultado de acuerdo al siguiente
esquema.
Práctica Nº 7
30
Reacción de eritrocitos con suero
comercial
Reacción del suero con antígenos
conocidos
Grupo
sanguíneo
Anti-A Anti-B Anti-AB A B O
+ -- + -- + - A
-- + + + -- - B
+ + + -- -- -- AB
-- -- -- + + -- O
Sistema Rh
Metodología
1.- Colocar una gota de glóbulos rojos en dos tubos de ensaye
2.- A un tubo adicionarle una gota de suero anti-D y agitar suavemente
3.- A otro tubo adicionarle una gota de albúmina bovina al 22% y agitar suavemente
4.- Centrifugar ambos tubos 60 seg. a 1000 r.p.m.
5.- Buscar la presencia de aglutinación en primer lugar en el tubo que contiene albúmina al
22% y los glóbulos rojos posteriormente en el tubo que contiene el suero comercia anti-D si
solamente se presenta aglutinación en este tubo se reporta con Rh positivo.
6.- Si no hay aglutinación en ningún tubo se incuban los tubos a 37º C durante 30 min. y
posteriormente lavar los eriotrocitos con solución salina ( hasta que el sobrenadante quede
transparente no mas de tres lavados) 3400 r.p.m. durante 2 min.
7.-Desechar el sobrenadante y agregarle una gota de suero de Coombs
8.- Resuspender el paquete suavemente y centrifugar a 1000 r.p.m. durante 60 seg. ambos
tubos
9.- Buscar la presencia de aglutinación si el tubo problema presenta aglutinación se dice
que el individuo es de grupo Du Rh Positivo Si no hay aglutinación se dice que el individuo
es Rh negativo. Pero si hay aglutinación en el tubo autotestigo se dice que puede ser debido
a una respuesta autoinmune y para fines de transfusión el individuo se clasifica como Du y
se considera Donador Rh positivo y receptor Rh negativo.
Cuestionario
1.- Define lo que es una hemaglutinina
2.- Define lo que es un hemaglutinógeno
3.- Que es una isoaglutinina
4.- Que es un isoaglutinógeno
5.- Que son las heteroaglutininas
6.- Plasma tu conclusión de la practica.
Práctica Nº 8
31
Nombre de la practica Prueba de Coombs
Objetivo
Al termino de la practica el alumno será capas de realizar reacciones de antiglobulinas que
son de gran importancia en inmunología.
Introducción
En algunas ocasiones, los anticuerpos se encuentran unidos a los antígenos
correspondientes presentes en la membrana de los eritrocitos los cuales no reaccionan con
una aglutinación visible para coombs diseño un método el cual donde reaccionan las
antiglobulinas tomando en cuenta dos aplicaciones para detectarlas.
1.- Los isohematoanticuerpos humanos son globulina del tipo gama
2.- Cuando se adiciona un anticuerpo antiglobulínico a eritrocitos revestidos de un
isoanticuerpo resulta en la aglutinación de los Gr. revestidos.
La determinación de las globulinas ocurre en dos fases.
1.- Los anticuerpos IgG se unen o revisten a los eritrocitos
2.- Se adiciona un reactivo antiglobulínico se manifiesta por la aglutinación de los
eritrocitos revestidos con globulina.
El suero de Coombs se obtiene inmunizando conejos con globulina humana y es de gran
ayuda en casos de histocompatiblidad en el sistema Rh entre la madre y su producto , puede
haber isonmunzación con la producción de anti-D de la clase IgG estos anticuerpos pueden
atravesar placenta y unirse a los eritrocitos del producto ocasionando enfermedad la cual se
denomina eritriblastosis fetal, <enfermedad hemolítica del recién nacido y kerniteros
aunque también se pueden utilizar en casos de anemia hemolítica autoimune o
incompatibilidad por otros sistemas de grupos sanguíneos.
Cuando los anticuerpos anti-D no reaccionan se recurre a la prueba de coombs que puede
ser de dos manera directa o indirecta.
Prueba de coombs directa
Sirva para demostrar el revestimiento in vivo de los eritrocitos se aplica cuando los
eritrocitario están recubiertos con anticuerpos no aglutinantes en la enfermedad hemolítica
del recién nacido, en la anemia hemolítica autoinmune o en la investigación de reacciones
de reacciones consecutivas a transfusiones de sangres incompatibles.
Práctica Nº 8
32
Prueba de coombs indirecta
Sirva para que los anticuerpos IgG reaccionen in vitro con eritrocitos que contengan el
aglutinogeno correspondiente que después de el tratamiento adecuado se le adiciona suero
antiglobulínico y espera la respuesta.
La determinación de la prueba de coombs indirecta es de gran ayuda para.
1.- Identificar la presencia de Ab no aglutinantes en suero de personas sensibilizados a uno
mas antígenos sanguíneos.
2.- Estudiar el suero de mujeres con isoinmunizacion materno-fetal
3.-Pruebas de compatibilidad sanguínea.
Material
Centrifuga
Baño María
Glóbulos rojos problema al 2%
Glóbulos rojos normales al 2%
Glóbulos rojos al 5%
Solución salina isotónica
Suero de coombs
Suero problema
Suero anti-D diluido a titulo sub aglutinante
Tubos de ensaye
Metodología
Prueba directa
1.- En un tubo de ensaye adicionar dos gotas de suspensión al 2% de eritrocitos problema
2.- Añadir dos gotas de suero coombs
3.- a otro tubo adicionarle dos gotas de globulos rojos normales y dos gotas de suero de
coombs ( testigo negativo)
4.- Centrifugar los tubos a 1000 r.p.m. durante 60 seg.
5.- Desprender el botón y buscar la presencia de aglutinación en el problema y no
aglutinación en testigo.
Práctica Nº 8
33
Prueba indirecta
1.- Etiquetar tres tubos problema, testigo negativo, testigo positivo .
2.- Al tubo problema adicionarle dos gotas de suero problema y dos gotas de eritrocitos al
5% ORh positivo.
3.- Al tubo T.negativo adicionarle dos gotas de solución salina y dos gotas de eritrocitos
ORh positivo al 5%
4.- Al tubo T.positivo adicinarle dos gotas de suero anti-D diluido y dos gotas de
eritrocitos ORh positivo al 5%
5.- Centrifugar los tubos a 1000 r.p.m./60 seg.
6.- Desprender los eritrocitos y buscar la presencia de aglutinación en el problema si esta es
negativa resuspender e incubar en baño a 37º durante 20 minutos
7.- Lavar los eritrocitos con solución salina y resuspender en sol salina remanente.
8.- Agregar dos gotas de suero d coombs.
9.- Mezclar y centrifugar 1000 r.p.m./60 seg.
10.- Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación .
Cuando los Glóbulos rojos con suero problema aglutinan en la primer ocasión indican la
presencia de anticuerpos aglutinantes.
Cuando aglutinan los Gr. con suero problema y suero de coombs nos indica la presencia de
anticuerpos no aglutinantes en el suero problema.
El testigo negativo no debe de aglutina.
La aglutinación del testigo positivo no indica que el suero de coombs esta funcionado.
Cuestionario:
Práctica Nº 10
34
Nombre de la practica Pruebas de compatibilidad
Objetivo
Al termino de la practica el alumno sabrá determinar los anticuerpos incompletos que se
encuentren dirigidos contra antígenos de sistemas menores
Introducción
Antes de realizar una transfusión sanguínea entre individuos compatibles en el sistema
ABO y Rh es necesario realizar pruebas de compatibilidad sanguínea ( prueba cruzada) la
cual se lleva acabo con eritrocitos del donador y suero del receptor ( prueba mayor ) y con
eritrocitos del receptor y suero del donador ( prueba menor ) . esta determinación tiene
como fin poner de manifiesto la existencia de anticuerpos dirigidos contra antígenos de
sistemas menores o secundarios las cuales deben de realizarse en condiciones diferentes las
cuales favorezcan la reacción Ag-Ab y la formación de aglutinación celular.
En forma rutinaria las reacciones se realizan en solución salina al 0.85 % donde solo
aglutinan principalmente los anticuerpos de la clase IgM
Cuando se utiliza albúmina bovina facilita la detección de anticuerpos[pos de la clase IgG
ya que este anticuerpo se ve impedidos frecuentemente por el potencial z ( fuerza repulsiva
entre eritrocitos por cargas eléctricas negativas sobre la membrana ) .
Cuando se utiliza la anti-inmunoglobulina de coombs sirve para poner de manifiesto
anticuerpos que no tienen actividad aglutinante, unidos a la membrana del eritrocito.
Cuando se utiliza enzimas como papaina, ficina, o la bromelina nos ayudan a potenciar la
actividad de algunos anticuerpos, como los dirigidos contra el sistema Rh, Lewis, kidd, vel
e i . también modifica y destruye los antígeno tales como : Mns, Duffy, por, Xga, Yta, Csa,
Cha, esta propiedad se utiliza para identificar los correspondientes anticuerpos.
Antes de realizar una prueba cruzada es necesario conocer los datos clínicos del donador y
receptor para poder elegir los análisis adecuados pero si no se conocen estos datos es
necesario realizar los siguientes estudios.
--Paciente que nunca ha sido transfundido o que no haya tenido embarazos. esto es con el
fin de que pueden existir anticuerpos contra antígenos de los sistemas menores adquiridos
en forma natural
Prueba salina rápida
Albúmina rápida
Ficina o papaina rápida
Práctica Nº 10
35
--Paciente politransfundido, que haya tenido varios embarazos o que no se desconozcan sus
antecedentes . además de los anticuerpos contra antígenos menores y los adquiridos en
forma natural pueden existir otros inducidos por transfusiones previas por el producto
hacia la madre por medio de eritrocitos.
Salina rápida
Albúmina rápida
Ficina o papaina rápida
Salina a 37º / coombs
Albúmina a 37º/ coombs
Ficina o papaina a 37º/ coombs
Material
Centrifuga
Jeringas
Tubos de ensayo
Pipeta Pasteur
Albúmina bovina al 25 %
Solución salina al 0.85%
Ficina ( 1mg/ml) o papaina ( 10 mg/ml)
Metodología
1.- Tomar una muestra sanguínea de 5 ml y colocar 0.2 ml en un tubo de ensayo que
contenga 5 ml de solución salina (gr. al 5%) el resto de sangre depositarla en un tubo de
ensayo sin anticoagulante para obtener suero
2.- Realizar el mismo proceso con el receptor
Prueba salina rápida
a.- marcar un tubo de ensayo como PM (prueba mayor ) y adiciona dos gotas de gr. del
donador y dos gotas de suero del receptor.
b.- A otro tubo de ensayo marcarlo como PM (prueba menor ) y colocarle dos gotas de gr.
del receptor y dos gotas de suero del donador
c.- Centrifugar los dos tubos a 1000 r.p.m. durante 60 seg.
Práctica Nº 10
36
d.- Observar el sobrenadante de ambos tubos para la búsqueda de hemolisis. resuspender
suavemente el botón eritrocitario en busca de aglutinación
Albúmina
E.- En caso de no observar aglutinación en los dos tubos de la solución salina rápida
agregar a ambos tubos solución de albúmina al 25%
F.- Incubar a 37§ durante 15 min.
G.- Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 60 seg.
H.- Resuspender el paquete eritrocitario para la búsqueda de aglutinación.
Prueba indirecta de coombs
I.- Si no ha observado aglutinación en los tubos lavar los eritrocitos con solución salina a
3400 r.p.m. durante 2 min. cuantas veces sea necesario
J.- Después del ultimo lavado eliminar el sobrenadante y adicionar al paquete dos gotas de
suero de coombs y mezclar
K.- Centrifugar los tubos a 1000 r.p.m. durante 60 seg.
L.- Buscar la presencia de aglutinación
Prueba con ficina, papaina o bromelina
Esta determinación es de gran utilidad para potenciar la actividad de algunos anticuerpos
como los dirigidos contra el sistema Rh, Lewis, i, kidd, vel pero también modifican o
destruyen antígenos tales como Mns, Duffy, Xga, lo cual es de gran utilidad para la
identificación de los anticuerpos correspondientes. el inconveniente de esta determinación
es que las enzimas pueden actuar contra los anticuerpos y otras enzimas del suero.
Preparar ficina
Disolver 1 g. de ficina y disolverla en 100 ml de solución salina de fosfatos a Ph 7.3 (
guardarla en refrigeración a menos 20 ¦c y para su uso diluirla 1:10 con regulador de
fosfatos 0.1 m Ph 7.3
Preparación de papaina
Disolver 0.5 g. de papaina en 190 ml de amortiguador de fosfatos Ph 5.5 y agregar 10 ml
de L-cisteina al 0.6 % en agua destilada incubar a 37 ¦c durante una hora y centrifugar
recuperar el sobrenadante y almacenar a -20¦c
Práctica Nº 10
37
Preparación de Gr.
Lavar Gr. en solución salina y el paquete celular con un volumen igual de papaina o ficina
mezclar e incubar a 37¦c durante 15 min. .lavar los gr. con solución salina y ajustar a una
concentración al 2%
Metodología
1.- En un tubo de ensayo colocar dos gotas de suero
2.- Agregar dos gotas de gr. al 2% de gr. tratados
3.- Incubar a 37ºc durante 30 min.
4.- Centrifugar a 100 r.p.m. durante 60 seg. y resuspender suavemente par la búsqueda de
aglutinación
Otra forma de determinar las pruebas cruzadas
1.- Tomar una muestra de 5 ml de sangre sin anticoagulante del donador y colocar 0.1 ml
de esta sangre en un tubo que contenga 5 ml de solución salina el resto de la sangre se
deposita en un tubo de ensayo para que se coagule
2.- repetir lo mismo con el receptor
3.- en una serie de 12 tubos se etiquetan como se indica en el cuadro
A B C D E F G
PM 1 -- -- 1 -- -- --
pm -- 1 1 -- -- -- --
Auto -- -- 1 1 -- -- --
PM 1 -- -- 1 2 -- --
pm -- 1 1 -- 2 -- --
Auto -- -- 1 1 2 -- --
PM 1 -- -- 1 -- 1 --
pm -- 1 1 -- -- 1 --
Auto -- -- 1 1 -- 1 --
PM 1 -- -- 1 -- -- 1
pm - 1 1 -- -- -- 1
Auto -- -- 1 1 -- -- 1
A.- Gr. al 2% de donador B.- Suero del donador C.- Gr. al 2% del receptor
D.- Suero del receptor E.- Albúmina al 25% F.- Papaina G.- Ficina
Nota.- los números de los cuadros indican gotas
Práctica Nº 10
38
4.- Mezclar todos los tubos y centrifugar 60 seg. a 2500 r.p.m.
5.- Buscar la presencia de aglutinación en los tubos
6.- Si no se presenta aglutinación en ningún tubo incubar a 37¦c durante 30 min.
7.- Centrifugar los tubos a 2500 r.p.m. durante 5 min. y descartar el sobrenadante
8.- Lavar el paquete celular de cada tubo con solución salina ( 2500 R.P.M. durante 5 min. )
dos veces
9.- Agregar una gota de suero de coombs al paquete celular de cada tubo
10.- Homogeneizar y buscar la presencia de aglutinación
Para saber si la determinación esta bien realizada es necesario introducir un testigo positivo
y un negativo
Testigo positivo
1.- Adicionarle dos gotas de anti-D diluido 1:32 y dos gotas de gr. al 2% de un individuo o
Rh positivo
2.- Incubar a 37¦c durante 30 min.
3.- Centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
4.- Lavar los gr. con solución salina
5.- Adicionar una gota de suero de coombs y buscar la presencia de aglutinación
Testigo negativo
1.- A un tubo adicionarle dos gotas de anti-D diluido 1:32 y dos gotas de gr. al 2% de un
individuo o Rh negativo
2.- Incubar a 37¦c durante 30 min.
3.- Centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.
4.- Lavar los gr. con solución salina
5.- Adicionar una gota de suero de coombs y buscar la presencia de aglutinación
Nota Cualquier indicio de aglutinación en un tubo es indicativo de que hay
incompatibilidad entre el posible
donador y el receptor
Práctica Nº 10
39
Nombre de la practica.. Reacciones Febriles
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá la habilidad para determinar los anticuerpos
presentes en un individuo que ha padecido un infección bacteriana por microorganismos
pirogenicos
Introducción
Cuando un paciente presenta un cuadro febril en primer termino se sospecha de un agente
pirogenico dentro de los cuales se pueden encontrar las Salmonellas , Brucellas ,
Rickettsias y otros agentes pirogenicos los de importancia clínica son los menciondos estos
microorgansmos cuando penetran al arganismo desencadenan una respuesta inmunologica
la cual es mediada por anticuerpos los cuales se pueden cuantificar dependiendo de fecha
en la cual se haya estado en contacto con el agente etiologico. Pero tomando como base lo
anterior tambien es importante que el médico mande el estudio en el momento en el cual se
puede detectar ls niveles mas altos de anticuerpos .
Cuando se quiere detectar anticuerpos por salmonellas s decie que se practica la reacción de
Widal para demostrar la presencia de agltininas esta reación inicialmente se diseño para
detectar Salmonella typhi pero posteriormente se pudo demostrar que otras especies de
salmonela producian fiebre tifoidea de ahi que para poder identifcar las aglutininas del
flagelo (H) o del soma (O) se requiere de tomar en cuenta las Salmonellas las cuales se
clasifican en cinco grupos A, B, C, D, y E. Donde en cada grupo se puede encontrar:
A S. paratyphi A
B
S. typhimurium
S.paratyphi B
S. derby
S. san diego
C
S. paratyphi C
S. cholerasuis
S. newport
S. montevideo
D
S. typhi
S. enteritidis
S. dublin
S. gallinarum
S. pullorum
E
S. anatum
S. meleagridis
S. give
S. newington
S. illinois
S. senftenberg
Práctica Nº 10
40
Cuando se requiere diagnosticar los titulos de salmonella se debe de tomar en cuenta que
estos se elevan al final de la cuarta semana de la infección.
Otro microorganismo que puede producir elevación de temperatura son la Brucella las
especies que los hacen son B abortus , B. suis . B. mellitensis las cules responden de la
misma manera cuando se requiere demostrar las aglutininas su diagnostico es relativamente
sencillo cuando se encuentra en la fase aguda ( apartir de la segunda semana de la
enfermedad alcanzando su maximo en la tercer y sexta semana si reporta un titulo 1:320 es
indicativo) de la enfermedad pero cuando se hace cronica se dificulta su diagnostico.
La fiebre producida por Rickettsias se diagnostica por la reacción de Weil-Felix quienes
aislaron una cepa de Proteus de una muestra de orina en un paciente con tifus ademas de
que en el paciente tambioen se encontraron aglutininas contra este mismo Proteus al cual
se le denomino OX-19 posteriormente se aislaron otras cepas de proteus las cuales se les
denomino OX-2 y OX-K que son los mas utilizados para el diagnostico de enfermedades
producidas por Rickettsias esto se hace debido a que es muy dificil y peligrosos el cultivo
de Rickettsias para el personal de laboratorio tomando como base lo anterior se puede
clasificar las reacciones serológicas de las enfermedades producidas por rickettsias:
Reacción deWeil-Felix
Especie Enfermedad OX-19 OX-2 OX-K
R.prowasekii Tifus epidémico +++ + 0
R. mooseri Tifus murino +++ + 0
R. reckettsi Fiebre maculatosa de
la montaña
+++ + 0
R. conori Fiebre mediterranea + +++ 0
R.siberica Tifus siberiano + +++ 0
R. austarlis Tifus de Queensland + +++ 0
R. akari Viruela rickettsial 0 0 0
R. tsutsugamushi Fiebre fluvial
Japonesa
0 0 +++
R. quintana Fiebre de Tricheras 0 0 0
R. burnet Fiebre Q 0 0 0
Material
Placas de vidrio para reacciones febriles
Aplicadores
Pipetas de 0.1 ml
Antígenos de
Salmonella typhi O
Salmonella typhi H
Práctica Nº 10
41
Salmonella paratyphi A
Salmonella paratyphi B
Brucella abortus
Proteus ox-19
Metodología
Cualitativo
1.- Tomar tres ml de sangre sin anticoagulante
2.- Dejar que se coagule y extraer el suero
3.- Marcar la placa de vidrio de la siguiente manera
S.typhi O
S. typhi H S.paratyphi A
S.paratyphi B
B.abortus Proteus OX-19
4.- En cada marca colocar 0.4 ml de suero
5.- Al lado del suero colocar una gota de cada uno de los antígenos
1.- Salmonella typhi O
2.- Salmonella typhi H
3.- Salmonella paratyphi a
4.- Salmonella paratyphi b
5.- Brucella abortus
6.- Proteus ox-19
6.- Mezclar las dos gotas con ayuda de un aplicador
7.- Oscilar la placa durante dos minutos
8.- Buscar la presencia de aglutinación en la placa
9.- Si hay aglutinación en alguna de las marcas realizar una determinación cuantitativa por
cada marca que resulte positiva
Método cuantitativo
Práctica Nº 10
42
1.- Marcar una placa de la siguiente manera
1
2 3
4
5 6
2.- A cada marca agregar el siguiente volumen
1.- 0.08 ml(dil 1:20) 4.- 0.01 ml (dil 1:160)
2.- 0.04 ml(dil 1:40) 5.- 0.005 ml (dil 1:320)
3.- 0.02 ml(dil 1:80) 6.- 0.0025 ml (dil 1:640)
3.- A cada marca agregar una gota de antígeno que corresponda este va a ser el que resulto
positivo
4.- Mezclar el antígeno y el suero con ayuda de un aplicador
5.- Con movimientos circulares homogeneizar la mezcla Ag-Ab
6.- Al cabo de dos minutos observar la presencia de aglutinación
7.- el titulo se reporta como la reciproca de la dilución mas alta donde todavía se observa
aglutinación
Cuestionario
1.- De que depende la determinación de una enfermedad febril
2.- Cuantas salmonellas puedes identificar serologicamente
3.- Cuantas Brucellas puedes identificar serologicamente
4.- Como identificas las enfermedades producida por rickettsias
Práctica Nº 11
43
Nombre de la practica...... .Inhibición de la Hemaglutinación
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá la habilidad para determinar la presencia de
gonadotropina coriónica humana con ayuda de diferentes metodologias
Material
Orina o suero con GCH en altas concentraciones
Centrifuga
Tubos de ensayo
Anti GCH
Glóbulos rojos recubiertos con GCH
Látex recubierto con anti-GCH
Metodología
Inhibición de la hemaglutinación
Fundamento
La reacción se basa en la inhibición de la hemaglutinación basándose en que los gr. se ha
revestido con GCH y al adicionar anticuerpos contra GCH se lleva acabo un reacción de
aglutinación formando un anillo difuso pero si a esta reacción se le adiciona una GCH libre
(orina) bloquea los anticuerpos y evita la reacción con los gr. lo cual trae como
consecuencia sedimentaron de gr. y formación de un anillo característico
1.- Centrifugar 5 ml de muestra (orina)
2.- Abrir un tubo que contenga Gr. recubiertos de GCH y anti GCH
3.- Por cada problema adicionar 400 microlitros agua destilada
4.- Adicionar 100 microlitros de muestra
5.- Agitar suavemente el tubo para mezclar el contenido del tubo
6.- Depositar el tubo el lugar donde se encuentre libre de vibraciones y del calor de tal
forma que se puede observar de abajo hacia arriba
7.- Dejar reposar durante dos horas y observar la reacción
Práctica Nº 12
44
Nombre de la practica Aglutinación en partículas de látex
Fundamento
La reacción se basa en una aglutinación directa con partículas de látex las cuales están
recubiertas de anti-GCH para cuando se pone en contacto con la muestra problema y esta
presente la GCH en cantidades detectables reaccionan para formar un agregado Ag-Ab lo
cual se demuestra por medio de una aglutinación visible
Metodología
1.- Coloca un portaobjetos limpio y desengrasado sobre una superficie horizontal
2.-Homogenizar el reactivo que contenga las partículas de látex y transferir al portaobjetos
25 microlitros de este
3.-Adicionar 50 microlitos de la muestra problema a un lado de el reactivo de látex
4.-Con ayuda de un aplicador homogeneizar ambas soluciones
5.-Con movimientos circulares mezclar ambas soluciones
6.-Al cabo de dos minutos observar la reacción
Práctica Nº 13
45
Nombre de la practica.... Factor Reumatoide
Objetivo
Al termino de la practica el alumno tendrá la habilidad de identificar la presencia de
anticuerpos dirigidos contra inmunoglobulina en procesos inflamatorios
Introducción
En el suero de personas con ciertos padecimientos inflamatorios como puede ser artritis y
fiebre reumática aparecen anticuerpos dirigidos contra las inmunoglobulinas del individuo a
estos anticuerpos se les denomina Factor Reumatoide. la especificidad de esta reacción es
variable y se puede ver tres formas características
a.- Reacción de inmunoglubulinas extrañas de conejo o de caballo
b.- Reacción de inmunoglubulinas humanas desnaturalizada
c.- Inmunoglobulinas autologas
El factor reumatiode por lo general es un anticuerpo de la clase IgM que puede reaccionar
con uno o mas antígenos específicos
La producción del factor Reumatoide es resultado de respuesta del individuo hacia uno o
mas determinantes antigénicos específicos presentes en sus propias gamaglobulinas. el
factor Reumatoide reacciona con complejos Ag-Ab, en casi todos los casos el factor
Reumatoide forma complejos solubles con IgG in vivo los cuales pueden ser eliminados de
la circulación sin causar ninguna alteración por el sistema retículo endotelial. en raros casos
el complejo factor reumatoide-inmunoglobulinas son solubles a temperatura corporal, pero
en frío se pueden precipitar en el suero por el frío ( crioglobulinas ) los individuos que
presentan crioglubulinas son mas predispuestos a sufrir lesiones secundarias . los niveles
sericos de FR guardan relación con la aparición de nódulos subcutáneos. por lo general el
factor Reumatoide esta constituido por inmunoglobulinas con especificidad par los
fragmentos FC de la IgG la mayoría de los métodos de laboratorio detectan el Factor
Reumatoide IgM 19s pero también hay reacción en las inmunoglobulinas de la clase IgM ,
IgG 7s y de la IgA . el Factor Reumatoide esta presente en los siguientes padecimientos
artritis, Lupus eritematoso, esclerosis, Mononuclosis infecciosa y algunos casos de
poliomielitis la determinación del factor Reumatoide no es muy especifica pero si es muy
sensible lo cual puede dar positiva en los siguientes padecimientos
hipergamaglubulinemia, hepatopatias, sífilis padecimientos infecciosos crónicos como son
lepra y tuberculosis pero se hacen negativas cuando el individuo mejora. En investigaciones
se a visto que un reducido numero de personas sanas dan positiva la prueba y personas
enfermas con artritis dan negativa la prueba . el principio de la prueba se basa en la
reacción del látex sensibilizado con gama globulina humana y el factor Reumatoide.
Práctica Nº 13
46
La granulocidad del látex puede confundir con una prueba positiva, sueros lipémicos
pueden dar resultados falsos positivos.
Material
Látex sensibilizado
Solución amortiguadora
Aplicadores
Placa de aglutinación
Tubos de ensayo
Metodología
Cualitativa
1.- Tomar una muestra sanguínea y dejar que se retraiga el coagulo separa el suero
2.- Preparar una dilución 1:20 del suero problema con la solución amortiguadora
3.- Marcar una placa de la siguiente manera
Testigo Positivo
Problema Testigo Negativo
3.- Colocar 0.05 ml del dilución del suero en la marca Prob.
4.- Colocar 0.05 ml de testigo positivo en la primer marca
5.- Colocar 0.5 ml de testigo negativo en la tercer marca
6.- Adicionar 1 gota de reactivo de látex a cada uno de los controles y del problema
7.- Con ayuda de un aplicador mezclar las gotas y con movimientos circulares
homogeneizar
8.- Al cabo de dos minutos ver la reacción de los testigos y el problema (buscar presencia
de aglutinación )
Práctica Nº 13
47
Cuantitativa
1.- Prepara una serie de Diluciones con factor de 2 partiendo del suero diluido hasta una
dilución final de 1:640
2.- Colocar 0.05 ml de cada dilución en un laminilla
3.- Adicionar a cada dilución 1 gota de partículas de látex
4.- Con ayuda de un aplicador mezclar y homogeneizar con movimientos circulares
5.- Al cabo de dos minutos buscar la presencia de aglutinación
6.- El titulo de factor Reumatoide se expresa como la reciproca de la dilución mas alta
donde se presente aglutinación
Práctica Nº 14
48
Nombre de la practica.... Proteína C reactiva
Objetivo
Al termino de la practica el alumno adquirirá la habilidad para identificar por medio de una
reacción la
presencia de la proteína c reactiva en el suero de un paciente con una infección bacterina de
tipo agudo
Introducción
El nombre de proteína C reactiva deriva de que en personas que padecían neumonía lobular
se extraía suero y el extracto era un carbohidrato que se le denomino c y al proteína humana
capas de precipitarlo se le denomino PC reactiva
La proteína c reactiva aparece en el plasma en individuas que padecen procesos patológicos
donde hay inflamación o necrosis como sucede en la fase aguda de infecciones bacterianas
de ahí que la proteína c reactiva se puede detectar de 18 a 24 hrs. después del inicio de la
enfermedad alcanzando un máximo
durante la fase aguda disminuyendo cuando el paciente sana.
Un elevado titula de proteína c reactiva no es especifica de inflamación ,ya que resulta
positiva en todas la infecciones bacterianas y en algunos procesos neoplasicos así como en
destrucción de tejidos como es el caso de infarto al mioacardio. esta determinación es de
gran ayuda con fines epidemiologicos ya que se puede monitorear la actividad con
pacientes con fiebre reumática y artritis Reumatoide.
La velocidad de eritrosedimentación se eleva con prueba positiva de PC aumentando
primero la PC después la VSE pero la PC retorna antes a la normalidad después de la VSE.
La PC es un glicoproteína que aparece en el suero con padecimientos antes mencionados.
Esta determinación se basa en el principio de que la PC presente en el suero del paciente
sirve como anticuerpo y el látex sensibilizados contra la glicoproteína que se encuentra en
el suero produciéndose un aglutinación si esta presente
Material
Látex sensibilizado anti PC
Amortiguador salino de glicina
Suero control negativo
Suero control positivo
Aplicadores
Placa de aglutinación
Centrifuga
Tubos de ensayo
Práctica Nº 14
49
Metodología
1.- Tomar una muestra sanguínea sin anticoagulante y esperar que se retraiga el coagulo
2.- Separar el suero
3.- Con el suero realizar una dilución 1:20 con la solución amortiguadora
4.- Poner 0.05 ml de la dilución en la laminilla
5.- Colocar 0.05 ml de suero control positivo
6.- Colocar 0.05 ml de suero control negativo
7.- Agregar una gota de partículas de látex sensibilizado a cada gota adicionada ( problema,
positivo, negativo )
8.- Con ayuda de un aplicador mezclar las gotas (utilizar aplicador diferente para cada
mezcla)
9.- Con movimientos circulares homogeneizar la laminilla
10.-Esperar dos minutos y verificar los controles por medio de aglutinación en el control
positivo y no aglutinación en el control negativo reportar el suero problema de acuerdo a
su comportamiento con los controles
Práctica Nº 15
50
Nombre de la practica.... Antiestreptolisinas
Objetivo
Al termino de la practica el alumno ser capas de demostrar en un suero problema la
presencia de estreptolisinas
Introducción
Las infecciones estreptococicas son frecuentes en niños en edad escolar de ahí que sea
posible detectar los anticuerpos en respectivos tal es el caso de la antiestrptolisina-O
(ASO) esta es una hemolisina labil al oxígeno, pero es activa a eritrocitos humanos y a los
de conejo. La estreptolisina es producida por la mayoría de las cepas Lancefield de
estreptococos del grupo A aunque algunas cepas del grupo C y G también la producen .
La determinación de los títulos de antiestroptolisina se basa en hacer reaccionar el antígeno
del estreptococo del grupo A con Diluciones del suero del paciente y glóbulos rojos del tipo
ORh positivo al 5% para valor la no hemilisis( que es donde se inactiva toda la
estreptolisina).
Los títulos estreptolisina se elevan en pacientes que presentan infecciones estreptococicas
no supurativa tal es el caso de Fiebre Reumática y Glomerulonefritis aguda.
Los estreptococos no solamente producen reacción Ag-Ab por antiestreptolisinas sino que
también producen otro tipo de enzimas tal es el caso de:
1.- Hialuronidas ( AH)
2.- Antiestreptocinasa
3.- Antidesoxirribonucleasa B (anti-DNAasa)
4.- Antidifosfopiridinanucleotidasa ( anti-DPNasa )
En los pacientes que se sospecha de una infección no supurante por estreptococo la
determinación de elección para detectarla es la ASO pero para descartar cualquier error se
recomienda realizar dos o mas determinaciones de las enzimas que producen reacción Ag-
Ab.
Material
Suero problema
Tubos de ensaye
Glóbulos rojos o Rh positivo
Solución salina amortiguada
cloruro de sodio 7.40 g
fosfato ácido de potasio 3.70 g.
fosfato ácido disodico 1.81 g.
agua destilada 1000.00 ml
Estreptolisina
Práctica Nº 15
51
Metodología
1.- Adicionar 10 ml de agua destilada al vial que contenga la estreptolicina liofilizada
2.- Por cada 5 ml de agua se utiliza un tubo capilar que contenga hidrosulfito de sodio
3.- Mezclar por inversión la estreptolisina reconstituida la cual al adicionarle el hidrosulfito
se activa y se encuentra lista para su utilización
4.- Prepara una solución al 5 % de glóbulos rojos con solución salina amortiguada
( antes de preparar la suspención de Gr. se lavan con solución salina)
5.- Prepara las siguientes Diluciones del suero problema con solución salina amortiguada
dilución 1: 10
dilución 1:100
dilución 1:500
...La dilución 1:10 se puede preparar agregando una parte de suero y nueve partes de
solución salina amortiguada
...La dilución 1:100 se prepara agregando una parte de la dilución 1:10 mas nueve partes de
la solución salina amortiguada
...La dilución 1:500 se prepara agrando dos partes de la dilución 1:10 mas ocho partes de
solución salina amortiguada
6.- Rotular 14 tubos de ensayo de la siguiente manera
Tubo 1 dilución 1: 12 Tubo 8 dilución 1: 500
Tubo 2 dilución 1: 50 Tubo 9 dilución 1: 625
Tubo 3 dilución 1:100 Tubo 10 dilución 1: 833
Tubo 4 dilución 1:125 Tubo 11 dilución 1:1250
Tubo 5 dilución 1:166 Tubo 12 dilución 1:2500
Tubo 6 dilución 1:250 Tubo 13 testigo neg.
Tubo 7 dilución 1:333 Tubo 14 testigo pos.
Práctica Nº 15
52
7.- seguir el siguiente protocolo
1:10 1:100 1:500 Testigos
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
A 0.8 0.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.3 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 0.0
B 0.2 0.8 0.0 0.2 0.4 0.6 0.7 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.5 1.0
Agitar los tubos
C 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.0 0.5
Agitar los tubos e incubar a 37º C durante quince minutos
D 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
A.- Dilución en mililitros
B.- Solución salina Amortiguada en mililitros
C.- Volumen de estreptolisina en mililitros
D.- Suspensión de globulos rojos en mililitros
8.- El titulo se reporta en unidades TODD que es la reciproca de la dilución mas alta donde
se neutraliza completamente la estreptolisina
De ahí que se toma como neutralización cuando no se presenta hemolisis en el tubo se
comprueba con el tubo numero 13 del protocolo
La hemolisis se comprueba con el tubo numero 14 del protocolo
Práctica Nº 15
53
Bibliografia
1.- Manual de laboratorio de la Escuela Nacional de Ciencia Biológicas ( I. P. N. ) Autores
varios 1992
2.- Diagnostico Clínico por el Laboratorio Todd-Sanford Editorial Salvat Sexta edición
1980
3.- Inmunología Básica y Clínica Daniel P. Stites Abba I.Terr Editorial el Manual Moderno
Séptima edición 1991
4.- Microbiología e Inmunología Warren E. Levinson Ernest Jawetz Editorial el Manual
Moderno primera edición 1992
5.-Manual de diagnostico Clínico y de Laboratorio Krupp, Tierney, Jawetz, Roe, Camargo
Editorial el mnual Moderno Tercera edición 1991
6.- Hematología Clínica Byrd S. Leavell, Oscar A Thorup Editorial Interamericana Cuarta
edición
7.- Histología Roland Leeson Thomas Editorial Interamericana Tercera edición
8.- Hematología Básica A.V. Hoffbrand ,J.E. Pettit Editorial Limusa
9.- Fisiología Medica William F. Ganong Editorial Manual Moderno
10.- Métodos de laboratorio Lynch, Stanley, Lesli, Spore Editorial Inteamericana
11.- Inmunología Rojas W. Editorial Manual Moderno