fiksasyonu etkileyen faktörlerii

7/30/2019 fiksasyonu etkileyen faktörlerii

http://slidepdf.com/reader/full/fiksasyonu-etkileyen-faktoerlerii 1/25

FİKSASYONU ETKİLEYEN FAKTÖRLER



• Fiksastonu etkileyen faktörler şunlardırTamponlama ve ph

Penetrasyon

Volume

Sıcaklık

Konsantrasyon

Zaman aralığı

Osmolarite

İyonik içerik

Fiksatife eklenen maddeler



Ph

• Fiksasyon en iyi nötralph olan 6-8 de ph da olur.

• Hipoksik dokularınasiditesi artar.

• Asiditede dokularda siyahpolarize depositler olarakgörülen hem –formalinpigmentlerininoluşmasına neden olur.

• Ayrıca asidite dokunun üçboyutlu yapısınınbozulmasına da nedenolur.



Ph

• En yaygın tamponlar fosfat ,bikarbonat dır.

• Ticari formalin ph 7 de fosfat ile tamponlanır.

•

Fikasasyonda düşük tuz içeriğine sahiptamponlanmış formalin kullanılarak dokuhazırlamada kullanılan makinenin temizkalması sağlanır.



Penetrasyon

• Penetrasyon fiksatifin dokuya difüzyon

kapasitesine ve fiksasyonunu uygulanma

süresine bağlıdır.

• Formalin ve alkol en iyi penetre olan

fiksatiflerken, gluteraldehit en kötüsüdür.



Penetrasyon

• Birleşik fiksatiflerdebirleşiği oluşturan herfiksatifin dokuya

penetrasyon derecesifarklı olduğundan dolayıince kesitler

alınmalıdır.(2-3 nm).



Penetrasyon

• Büyük dokular fikse edilecekse bu dokular

fiksasyonu içeren kontaynerin taban kısmınadeğmemelidir,böylece dokunun tüm

kısımlarının fikse olması sağlanabilir. Ayrıcafikse edilecek ve daha sonra da parafinlenecek

büyük dokular 0.5 cm den de kalın

olmamalıdır.



Penetrasyon

• Kanlı dokularda kanproteinleri fiksatifleri

inaktive ettiğinden

dolayı bu dokularafiksasyon

uygulanmadan önce

dokular salin ile

yıkanmalıdır.



Volüm

• Fiksatif volumu/doku

volumu 10:1 olmalıdır.



Sıcaklık

• Sıcaklığın arttırılması

fiksasyonu arttırır.



Konsantrasyon

• Fiksasyon konsantrasyonumaddi nedenlerden dolayıolabildiğince düşük olmalıdır.

• Formalin en iyi %10konsantrasyonda olmalıdır. Bu

konsantrasyonun üzerindedokular sertleşir ve büzüşür

• Gluteraldehit de %0.25-4civarında olmalıdır. Fazlamiktarda konsantraskonartefaktlara neden olabilir.

• % 70 in altında etonolkonsantrasyonunda ise dokusuyu tam olarakuzaklatırılamaz.



Zaman

• Doku ne kadar hızlı eldeedilip fikse edilirse o

kadar iyidir.• Fiksasyonda ne kadar

gereksiz beklerse o

kadar fazla organel

kaybı meydanagelecektir



Osmolarite

• Hipertonik solüsyonlar dokunun büzüşmesineneden olurken , hipotonik solüsyonlar da

dokunun şişmesine yol açar.

• Hipertonik solüsyonlar ile doku fiksasyonu için

en iyi osmolarite 400-450 mosmol dür;fakat

nötral buffered formalinin osmolaritesi 1500

mosmoldür



İyonik içerik

• Na,K,Ca,Mg gibi birçok

iyon hücrenin şeklini veyapısını osmatik etkiden

bağımsız olarakdeğiştirir. Dolayısıylasıvıların iyonik içeriğidokularınkine

olabildiğince yakınolmalıdır.




• Fiksatife eklene elektroliter veya elektrolit dışımaddeler fixe edilmiş dokunun morfolojisinideğiştirebilir. Bu maddeler genellikle

elektrolitlerdir.Kalsiyum klorid,

dİpotasyum thiocyanat,

amonyum sülfat,

potasyum dihidrojen fosfattır.




• Elektrolitler ya direkt protein

denaturasyonuna neden olarak ya da

bağımsız olarak fiksatif veya hücre yapıları ile

ilişkiye girerek hücre morfolojisini etkilerlerfosfat gibi elektrolitler ile tamponlanmışfiksatifler tuzların çökmesi nedeniyle bazı doku

hazırlama makinelerinde sorunlara nedenolabilir.




Non elektrolit olarak da sükrozun,dekstranın ve

deterjanların fiksasyonu geliştirmek amaçlıkullanıldığı bilinmektedir.



DOKULAR VE SPESİFİK FİKSATİFLERİ

• Göz:

• Globdan iyi bir kesit eldeedebilmek için glob çok iyibir şekilde fixe edilmelidir.

Gözler nötral bufferedformalinde genellikle 48saatte fixe edilebilir.Fiksasyonu hızlandırmakiçin 24 saatten sonra

globta bir veya birkaçtane küçük pencereaçılmalıdır(retina ve irisharici bölgelerde




• Gross incelemeden sonra

anterior(iris) ve

posterior(optik sinir)

parçalar kesilir ve glob

parçaları ek bir 48 saatdaha fixe edilir. Gömme

parafirin veya selloidin ile

olabilir. Schlemm kanalıve gözyaşı yolları içinperfüzyon fiksasyonu

önerilmektedir.




• Beyin

• Beyin fiksasyonu geneldeiki hafta alır. Orta serebralarterden perfüzyon ile de

beyin fixe edilebilir.• Mikrodalga teknolojisi

kulanılarak fiksasyonhızlandırılabilir

• . İmmunhistokimyada

Biyotin –avidin metodları kullanılacaksa alkolikformalin fiksatif olarakkullanılmamalıdır.




• Akciğerler:

• Akciğer biyopsileri tipikolarak nöral bufferedformalinde fixe edilir.

• Trakea veya majör bronşkullanılarak infiltrasyonşeklinde de fiksasyonyapılabilir. İnfiltrasyonla fiksasyon yapıldıysa budokular iki saat içinde

kesilebilir.• Gross kesitler gece boyu

fixe edilir ve ertesi gün dokuhazırlanır.




• Lenfoid doku:

• Birçok organizma lenfoiddokuyu tutabildiğinden budoku hazırlanırken çok

dikkat edilmelidir. Geneldetaze lenfoid doku floresanakım sitometresi çalışılmaküzere gönderilir fakat geridekalan doku NBF de fixe

edilebilir. Bazı labaratuvarlarB5 veya çinko ile defiksasyon yaparlar.




• Testis:

• Testis biyopsileri rutin

olarak NBF de fixe edilir.




• Kas:

• Taze alınan kasbiyopsilerinin bir kısmıenzim histokimyayagönderilir. Rutin histolojide

NBF ile fixe edilir vegömülür. Böylecepreperatlarda kas liflerilongitudinal olarakgörülebilir. Doku

hazırlandıktan sonra H-E,trikrom, congo kırmızısıile(glikojendenşüphelenildiyse) boyanabilir.




Renal biyopsiler:

Renal biyopsiler üç parça şeklindeelde edilir. Her parça daha sonradoku incelemesinde kullanılacakmetoda göre fixe edilir:

• Rutin histoloji için NBF vemodifiye Milloning fiksatifi ile

• Yapısal analiz için Carson’smodifiye Milloning fiksatifi veya%2 tamponlanmış gluteraldehidfiksatifi ile(ph 7.3)

• İmmunfloresan inceleme içinticari transfer solüsyonları( Zeusgibi) ile fiksasyon yapılır.

fiksasyonu etkileyen faktörlerii

Documents