hg 2+ reacts with different components of the nadph: protochlorophyllide oxidoreductase macrodomains

11
Original Paper Abstract: The molecular background of Hg 2+ -induced inhibition of protochlorophyllide (Pchlide) photoreduction was investigat- ed in homogenates of dark-grown wheat leaves. Our earlier work showed that 15 min incubation with 10 ±2 M Hg 2+ complete- ly inhibits the activity of NADPH : Pchlide oxidoreductase (Lenti et al., 2002). Detailed analysis of spectra recorded at 10 K indi- cated the appearance of emission bands at 638 and 650 nm, which are characteristic for NADP + -Pchlide complexes. Fluores- cence emission spectra recorded with different excitation wave- lengths, fluorescence lifetime measurements and the analysis of acetone extractions revealed that Hg 2+ can also react directly with Pchlide, resulting in protopheophorbide formation. At 10 ±3 M Hg 2+ , the phototransformation was complete but the blue shift of the chlorophyllide emission band speeded up re- markably. This indicates oxidation of the NADPH molecules that have a structural role in keeping together the etioplast inner membrane components. We suggest a complex model for the Hg 2+ effect: depending on concentration it can react with any components of the NADPH : Pchlide oxidoreductase macrodo- mains. Key words: Mercury, Hg 2+ , protochlorophyllide, NADPH, proto- pheophorbide, Shibata shift, activity loss. Abbreviations: Pchlide: protochlorophyllide Chlide: chlorophyllide Chl: chlorophyll Ppheo: protopheophorbide POR: NADPH : protochlorophyllide oxidoreductase P xxx : protochlorophyllide form with emission maximum at XXX nm C xxx : chlorophyllide form with emission maximum at XXX nm Introduction Mercury is a potent pollutant, and is present in the Earths crust, sea, ground, and rain water in dissolved forms, which can enter the ecological cycles. Only one third of the mercury release is manmade, the rest of the input comes from natural emissions (Patra and Sharma, 2000). The physiological effects of mercury have been widely studied in various fields of sci- ence and on different organizational levels. Large efforts are put into studies on the effects of mercury on plants. Hg 2+ re- duces whole biomass production (Cho and Park, 2000; Roma- nowska, 2002), has an effect on plant growth (De Filippis et al., 1981a; Romanowska, 2002), influences cell structure, and a large number of biochemical effects have also been reported (Vallee and Ulmer, 1972; De Filippis et al., 1981b; Romanow- ska, 2002; Patra and Sharma, 2000; Cho and Park, 2000). The inhibitory effect of mercury depends on the uptake, transport and defence systems of different plant species. An experimen- tal problem is how to study these effects in laboratory condi- tions, because the treatment of intact plants with mercury does not necessarily show definite symptoms. Mercury ions often do not reach the studied target molecules; they are ar- rested in various organs or tissues (Schlegel et al., 1987; Sus- zcyn Âsky and Shann, 1995; for review see Clijsters and van Asche, 1985; Boening, 2000). Despite the fact that heavy metals often interfere with chloro- phyll (Chl) biosynthesis and cause stress-induced chlorosis, the molecular background and the mode of action of the inhi- bition have not been described in detail; there exist, however, a few data about their possible biochemical effects. Knowledge of heavy metal effects on chlorophyll biosynthesis is impor- tant, because any inhibitory effect influences the structure and function of the photosynthetic apparatus and thus global photosynthesis. Mercury is thought to have an impact on the transformation of glutamic acid into d-aminolevulinic acid ± a primary reaction of the chlorophyll biosynthetic pathway ± and on the transfor- mation of d-aminolevulinic acid into porphobilinogen by in- hibiting the ALA-dehydratase enzyme (for review see Mys Âli- wa-Kurdziel and Strzaøka, 2002). Recently, inactivation of the NADPH:protochlorophyllide oxidoreductase (POR) enzyme at high (10 ±2 M) inorganic Hg 2+ concentrations has been reported (Lenti et al., 2002). This high Hg 2+ concentration is probably not present in intact plants; however, in the case of repeated Hg 2+ Reacts with Different Components of the NADPH : Protochlorophyllide Oxidoreductase Macrodomains K. Solymosi 1 , K. Lenti 1 , B. Mys Âliwa-Kurdziel 2 , J. Fidy 3,4 , K. Strzaøka 2 , and B. Böddi 1 1 Department of Plant Anatomy, Eötvös University, Budapest, Hungary 2 Department of Plant Physiology and Biochemistry, Jagiellonian University, Krakow, Poland 3 Department of Biophysics and Radiation Biology, Semmelweis University, Budapest, Hungary 4 MTA-SE Research Group for Biophysics, Hungarian Academy of Science, Budapest, Hungary Received: October 30, 2003; Accepted: January 24, 2004 Plant Biology 6 (2004): 358 ± 368 Georg Thieme Verlag KG Stuttgart ´ New York ISSN 1435-8603 ´ DOI 10.1055/s-2004-817893 358

Upload: sote

Post on 16-May-2023

0 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

�������� ���

��������� ��� ������� ��� ���� �� � ���������� ������������ ����������������� ��������� ������������� �� ������� ���� �� ���� ����� �� ��� ��� ���� ������ � ������� ������ ��� !"��� ��������� ���� !#$�%� �� ����������� �������� ��� ������� �� &'(��)������� �*���������� �+������ ��, �##��� (������ ������ �� ����� ������ � !# - ��������� ��� ������ �� �������� ���� � ./0 �� ."# ��,����� � ���������� �� &'(���������� ������*��� 1����������� �������� ����� ������ ���� �������� �*������� ������� ���, ����������� �������� ���������� �� ��� ������ �������� �*������� ������ ��� � �� �� ��� ��� ����������� �������, ������� �� ��������������� �������� '�!#$/% � ��, ��� ��������������� �� �������� ��� ������� ����� �� ��� ������������� �������� ��� ������� �� �������� ���� �������� �*������ �� ��� &'(�� ��������� ������ ������� ��� �� ������ �� ���� ��� �������� ���������� ����������� 2� �� ��� ������* ����� �� ���� �� ������) �������� �� ����������� �� �� ��� ���� ������������ �� ��� &'(��)������� �*���������� �����������

� � ���� %����, � ��, �����������������, &'(��, ����������������, 3���� �����, ������� �����

��������� ����������) �����������������4�����) �������������4��) ���������������) ���������������� 5) &'(��)����������������� �*�����������***) ����������������� ��� ���� �������� �*����

� 666 ��4***) ������������� ��� ���� �������� �*����

� 666 ��

�����������

������� �� ��� � ����� �� � �� ���� � � ��� ������������ ��� ���� �� � �� ���� � ��������� ������ ������ � ��� ��� ��������� ������� � �� � � ����� �� ��� ������������� �� � ���� ��� ���� �� ��� � �� ����� ���� ����������� � ���� � ����� ���� � !�� ����������� ��������� ������� ��� "�� ������ ������� � ������ ������ �� ���#� �� � � ������� � ��� �$��� � ������� %��� ������� ���� � �� ������� � ��� ������� �� ������� � � ��� &��' ��#����� ����� "����� �������� �(�� � ��)� ����* +��# ���)� ���� � �� ������ � � � ������ �,� -����� �� ���./0.* +�� ���)� ���� � � ���� ��� ���� ���������� � ���� ��"�� �� "��������� ������� ��� ��� "�� ��������1���� � 2����� ./3�* ,� -����� �� ��� ./0."* +�� ��#�)� ����* ��� � ����� ����* (�� � ��)� ���� � !��� ��"����� ������ �� ������� ��� �� � ��� ��)�� �� ���� � ���� �� ������� �� ������� � � � ������� 4 �5����� #�� ��"��� �� ��� �� ����� ����� ������� � �"������ �� ��#��� �� "����� ��� ������ � �� � ��� � �� ���� ����������� �� ��������� ���� ���� ��� �������� ������� �� ����� �� �� ���� ��� ������� ����� ���������* ���� �� �#������ � ������ ��� � �� ������� ��������� �� ��� ./03* ���#$�� 6 �)� � �� � .//7* ��� ������ ��� (��8����� � � 4����� ./07* 9�� � �� ���� �

,����� ��� ��� ��� ���� ����� ���� � ������� ���� ������#���� �(�� "���� ������ � ���� ������#� ����� ������������� �������� "�)���� � � ��� ���� �� ���� �� ��� � ��#"���� ��� �� "�� ������"�� � �����* ����� �5���� �������� ��� �� "��� ����� ����"�� "��������� �������� : ��������� ���� ���� ������� � ���������� "���� ������ �� ����#� �� "����� � � ��"����� ������ � ���� ��� ��� ��������� � �� ���� �� ��� ������ ������ ���� � ���� ���"������� �������

������� �� ������� �� ��� ���� � ��� �� �������� ��������� ��� � �� �#�� ������� �� ��� ; ����� ������ �� ��� ���������� "���� ������ ���� ; � � ��� �� ����#���� �� �#�� ������� �� ��� � �� ����"��� ��� "� � #��"��� � ��� 4%4#��������� � $��� ���� ������ ��� ���6��#�#:���$��� � ���$<)� ���� � +��� ���� � ������� �� ���=4,�&>����������������� �5����������� ���+ � $��� ����� �.�;� � � ��� �� &��' �� �� ����� � �� "�� ��������%� �� �� ��� ���� � !��� ���� &��' �� �� ����� �� ��""�� �� ���� � � � ��� � ��* �������� � ��� ��� �� ������

�� ������ ��� �������� ���������� �� �������������������������� � ����������� !����������

�� �������� �� � ��� �� ������������� ��� �� ������� �� ������ ��� ��� �� �!��

" #���� �� �$ %���� &������� '!�(!� )�( ����� ����# ��� *��+���� " #���� �� �$ %���� %,�����+� ��� ��-, ������ ��+ ������ )�( ����� ��� ��� %�����

� " #���� �� �$ ��#,��-� ��� .������ ����+�� � �� �� � )�( ����� ����# ��� *��+���� �/&��' . � ��-, 0���# $�� ��#,��-�� *��+���� &-�� �� �$ �- �- � ����# ��� *��+���

. - ( �1 2-��3 � �4� �44�5 &-- #� �1 ������� ��� �44�

�� � 9������ ? ����@ > A70;A?0B C���� !����� 1���� :C �������� D =�� E��)F��= .@A7#0?�A D ,�F .��.�77G�#���@#0.30/A

"#$

� �� �#���� ������� � ���� ��� �� �� ��� ���� ���� � "� ���������� ���� � ����� � ��� �� �� �� ����������� -�� �5���� � �������#������ ������ ��� ������� �� �� �@;?0 ����� ���� &��' �� ��� ������ � ��� &��'

�� �� � ���� ��� ����� � ����� �� ������� � ��� �(�� ���)� ���� �

!�� � $��� ��+ �� )�� ��������� ���� � (�� "���� �������F�� ������� � "� ������� � ��)#���� ������ � ��� � ����� ��� ���� ���� � ��� ��������� �������� !��� ��#�� � � � � �� ��� ��+ � $��� �������� ���� ��+#4 ���#����� � ��� �������� "����� �G�� ������)���� �� ����������� �+�"��� � �� �H����� ./0�* ���� �� ��� ���� �4� ��� ������ �� ������� � �������� � ���� �� �� � �#� ���� ��� ���� � ������ ������� �����5�� ���� ��� ����������� ����� ���"� �� �9I��� �� ��� .//� � !�� �8����� ��������� �� "���� � �� ��� �� �����5�� ���� ��� � $��� ���� ��#��"������ =4,�& �C��������� ./30 � !�� ��� �� ���#��5�� � "� �� ������� � ��"� ���� �� �� ���� ��� �� #�� �� ��� ������� �������� � ,����� �� ��+ ��"� ��� ���� �� �����$�� � ���"� � ������� � ��� ����� ������ ����� �%9� � � "� ��������$�� ���� ?@@ � ��������� ��������� �5���� �� 33 : � ����� ����� �������� �� "����� �� ��� � �� ���"� �� �� �%9� � ��� ������� �5#���� � ?73 � �+�"��� � ,������ ./0?* 9I��� �� ��� ./0/*��$$ �#(���� �� ��� .//0 � 9��� �����5�� �� ����#����#������ �� ������ ��� ���� �� ���� ��� ������� �������������� � � ��� ����� ����� �� ��� ��+ ��"� ��� � �� ���������#���� �(����� � ������� � � (�����#��+ �����5�� ���� ������� �5�� � ?0@ � ?/? �� ����������� �9I��� �� ��� .//. � 4������ "��� ����� ; ����� ��� ���"� ����� ����"�� ./73 ;�)�� ��� ���� ��� �������� �� ��� ?0@ � ?/? � ����#�� � (����� �����5��� ����� ������� � (����� �� (�� ���������� ������� �5���� � ?0� �� F � ��� ������ ��������� �� �������� ����� ��;@� �� � ��� �� � � ������������ � ��� �� �� ��� ����� ���������� �� ��� .//7*��� �� ��� ./30 � ����� ������� �����5�� ���� ?�0� ?AA� � ?3@ � ��������� �� ������� �5�� � .� : �:��#����)�� ��� ./// �� ��� �)� �� � (�� ������� "�� � �� � ��#������ �9I��� �� ��� ./0/* ��� ������ ��� C��������� .//. �

2 ��� ����� �� ����� �� ��� ������� �� ������� � (����������5�� �� �� � � �5���$�� =4,�' �� �"������* �������#��+#=4,�' ������ ��� ������� �5���� � ?A0 �� � ��� ������ �������� � ?7� � ��� &����� � ���� ���./0�* -� �) �� ��� .///* 9I��� �� ��� ���A � (����� �(��' � ������� �� � �&��' � �5���$� =4,�&� � ���� ����# ��� �� ������ �� "� �� ���� ���� ���� ��"�� ��� ������ ��"����� ������ � =4,�&#�����$� � � $���� �-����� ./0A*9I��� �� ��� .//7* %� �� �� �� ���� �

!�� �������� ��� �� ��+ �� ������ ����"�� ����� ���������� ������� �� � � ��� -�� �5���� ����� �� ����� �� #�������� ������ � ��������> ��� ���../ �� � �� ��� � � ��� ���������#"� �� � ��)�� �� ��� � $���� ����0. �� ���� ����/? �� � ��� ����� ����� � ���A�0 �� ������ � ����� ��5����� �� ��� ����� ����� !���� �������� ��� "�� ��#����� �� ��� � ���� �� � ���"� � "� �� � � ��� A,��������� �� ��+ � ���� � � ��"����� "� �� � � ����#�������� �!�)�� � C��������� .//A* %�"���� � !��)��.//0* ,��� �� ��� .///* &���� �� ��� ����* 4�� ��� �� ������. �

&��� ����� � ������� �� � �� ���� ����� � � =4,�&� "��� ��� ���� �������� ���� ��� ������������� ���� � ���#������� &��� ���� ��"�������� ����������� ���� ��� � � ���� � �� �:J�� �� ��� .//0 � � �� ����� �5����� �� �#�� ������ ��� ��"�������� �� ��� �� ��� �� ����� "� ��������� � ����������� �:J�� �� ��� .//? � �������� �� ������5����� ��� �������� ��� �� �� ���� ��� ��"�������� �� ����� ��� �� ����� "� &��'� "�� ������ ���� ���� �5��#��� � ��� ���������� �� ��� ���� �� ��� -������ ./3/ �&��� ���� � ������� � ���� ��� � ���� ���� ����� ��#���� �� ��)� 7�.��.7���#����)���@#����� ���� �� #������ �!"�� .//7 � � ����� �#�� �����5 ������� �� "�� ������� ��� ������ ������ � �-� ���� �� ��� ���. � !� ���) �������� �������� � � ��������� �� "�� ��� � ��������� � ������� "����� ������� � ��������

!�� �� �� ���� ���) �� �� �5�� ��� �������� "�)���� ��� ��� � ��"���� �� ��+ ������� ����� "� &��'� ����� �� �5#�� ��� ��� ������� ������ ���� ������� �5���� �?77 � �� ����� ����� � &��'#������ ��� ������ ����%� �� �� ��� ���� � -�������� �� ������� ��������� ������#�� � .� :� ���� ���� ��������� ���. � � ���� ������� � �5#������ ����� ����� � ��� ��������� �� �������� �� ���#����� !������ ��� ������ ������� � �� ��� ��������� ��������� ����� � ���� ���������� ��� ������ �� ��������� ��� ������� � ��� ���"� ������ !�� ������ ������ ��&��' ���� ������� ������� �� ��� �������� � ��� "��� ������� �������� ����� �� ���� ��� ����� � ������ ��� ����#"�� ��� ������� �� � � � ������� ���� ��+ ������� � ������� ������ � �)� � ��� ���������� ���� ������� ����#�� �������� �

!������� ��� !������

���������� � ���� ����� ��� ����� ��� ����� ������

��5#��#���� ��)#����� ��� ���� ������ �� ������� �� ����� %� ���� ���� � ��� �5����� ��� 4"��� .#�� ����� ���� ��� ����� ��� ��� ���� �������� � ������ ������� ����� ���� ��� �5� @#�� ����� �� �� ��� ����� � ������ ������ !�� ������ �$��� "����� �� �� �� ��K��G� �������� �� �� &���� �=#�#�����5���������$� �#=�#�#��� ������ �� ��� � � 7�K ��G� ��������� !�� & ����� ������ �� �8����� �� 3�� ���� :�&� F ��� ��� �� ���#���� ������ �� &�(�� �� ���� �� ��� ������ ��� ���� ����) ������� � ��� �� � �� �� ����� � �� ������� ���� .�;A

�� .�;� �� !�� ������ ��� ���� � ��"��� � � �( � ��� ��)��� .7 � ?� �� � ��� �� .�;� � &��' � .�;A � �� �� ��#��� �� ������������ 4�� � ������ � ���� �� � � ��� ���� ������ ����� ��� �� ���� ������ �������� � !�� ��������� �� ����� �� ��� ������ ��� ����� "����� 3 L .�;? � � @ L .�;7 �� -�� .� : �������� ��� ��� ����� ���� ���#����� ���� ����� ����� ��� ���� ��� �� @7� M��� �;� �;.

�������� � �� ���� ��� .� � � ��� ������ �� 33 :�

���������� � ������������������� ��������

������������������ �5����� ���� ����� ���� ��� ������# ��� "� ��� � ���� � �����) �� �� � �� �� ����� ��0�K � ��� ��)� !�� ����� ���� ��� �� �������� ���.� �� � 7��� � � ��� ���� � �� ���� ���� ��� ������#�� ��� ������� �� ���� ���� ����) ������� �� �� � �� #�� ����� �� .�;� � �� .�;A �� !� ���� ����������"���

'$$ -� �$ *+�6 �� 7&"%*1%����-,����#,���� 28��� ��-��� %���� ����+� 9 :�44�; "#%

����� � ����� ��� �����) �� ���� �� ��� ������ ��� �� ��� �� ����� �� 7�K ��G� �

����������� ������������ �� �� �

!�� ��� ������ ��� ���� ������ �� .� : � ������ ����� &������������ ��� �(��������� �4� C� ��� ����$��� � � !����������� �� ������� ����� ���� ������� ���� -�/�� (,���� ������ ���� "���� 4 ������ F ������ ��� 2: �H��#�� ���� 5� � ����� ������� � ������ &����� +/77������������� ��"� � ��������� !�� ��������� �� ��� ����# ������ �� ��7 � ��. �� !�� � ������� ���� �� ��7 ��"��� ��� �5������ � ��� ������� ����� ���� � �� 4�� ���#�� ���� �������� ���� ��� ����� �� A �� �� !�� �������#�� �� ������� ����� ���� ��������� ��� ��� ����� ���#��#� �� � �� �������� ������ �� ��� �������� �

����������� ������������ �� �� � �� ���� �����������

!�� 33: ��������� �� ������� ����� ���� �������� ���� -������5#A ����������������� �N�"� E�� #&���"� -� �� �!�� � ������� ���� �� ��. �� ��� �� ���H�� �� �� ��7 ��!�� �5������ � ������� ����� ���� � � 7 �� !�� ������� A ����� �� �������� ���������� � ��� ���� !������� ���� ��������� ��� ��� ����� ���#��� �� � �� ��#������ ������ � �� ��� �������� � 9���� � ��������� �� �� �� ����� �� ����� �� ��� ������ �� ����� ������� �� -�� �����#� � ��� ���"� ������ A �� ����� ���� ������ ��� ��������� ����� �� 3� M��� �;� �;. ��� .� � � ����� ����� ����������� � ������� � ���� ������ � .7 �(� F ���� ��� � ��� � ������� �� ���������

����������� ������� �����������

-�������� �� �������� �������� �� ���� �� � ���� �����#���H�� �� �������������� ��� � �������� ������������:� F��� 2�4 �C���� � %��)�� � ./0A �H���� ���� A�� O 5� � �� � �;�7� �&$ ���)��� ���� ���������!�� ����� ���� �5����� � @@� �� !�� ��� ����� � ���#����� ���� ������� ��� ��� �� .�;.7 �������� ���H�� #���� "����� �;��� �&$ � ������ �� �� ������� � ������� �� ������� �����) � ���� ��� ������� � ��������� �� ����#���� � � � !�� ����� �A �� ���� ������� ���� � ��� ���#����� � � ��� ��������� �� ��5� .� �(� !�� ����#�� �������� �� ��� ����� ���� � ��� �������� � ������)�� ������ � �� ����� � �� ��� .//0* �� ����� �5����� #�� �� ����� � ���� � � ���6���#:���$��� �� �� �./// �

���� �������

!�� ����� ���� �������� ���� 7#�� � �� �� ������� �������� ����� �� ������ � ��� �� �� �� ��� ��������� ����� ������ !�� ���� � � ������ �������� �� ��� ����� ��������� �� ����� ���� �������� �� �"�� � ������� ������ C���� ��������� �� ��� ������ ����� �� �� � ��������+1 1A�.@ ������� ��������� (�� 9��� )� F ������� ��9�������� � 9������ +������ (� ��� �� ��� &� ��� 4����� �� ���� ��� �$����� &� ��� ���� ��������� ��#����"�� � 9I��� �� �� �.//� �

-�������� �� ��������� �� ������� ���� �������� ���� ��� �"#�� �� ��� ����� � �������� �� ��� � ��� ������5�# � ��� ����� �� ��� ��������� �� ���� "� ��� � #�� ��

����#�H��� ����� �F��� 2�4 � � ������"�� "� ���6���#:���$��� �� �� �./// � !�� ����� � ��� ������ � ��� �������� � �������� ���� �H�� �� P ��� � P ����?� �����#������� -�������� �� �������� ����� � ����� ������� �� ������� � �"�� �� ��� ������ �������� � ���� ������ ���� �� ��� ������� � �� �������� ����� � ������ � ������ "�����

F ��� ����� �� ��� ���"� ������ ��� �5���� ������ ����� ������� ������� �� ������� �� "� ����� "���� ��� ����$)�#C��� ������ �����$)� � C����./?@* �����#��� .//0 � !� ������� ��� ��� �������� ������ ��� ����� �� ������������ �� ������� �5���� �� ������ ���� �5� � ���)� ������ ������� ����� ���� �������� � .� �� A� @� 7� ?� 3� 0�/� .�� .�� .7� ��� � A� �� ���� �������� � !�� ����� ���� �����$�� � ����� �5��� !�� ������ �� ��� �����$��������� � �� ���� �� ��������� ��� ���#� �� ���� �� �� ������� ���� ��8����� ������������

4�� �������� �� ���� ������ ���� � ���� A ������� ����"� � ������ �� �� �� ��� ����� � ���� � �� #�� ��� � ���� ��� ��+G&��' ���� ����� � ��� ������ ������� ����� �� ��� ����� �5����� �� ���� �� ������� !�������� �� ��� �� �� �� ��� ���� �� !�� ������� ���� ��#���� ����� ������

�������

!�� ����� �� ��� ������ ��� ����� ���� �������� ��������� ���� ������ �� ����� �� � ��� �������� ����� �:��#����) �� ��� ./// � !��� �� ���� �� � " � � ?73 � ������ ���� ��������� � ?AA � ?3� � �-����� 4 � !�� ���������� � �� ��� ������� ���� ���� ������� �5���� �?@@ � ��?@@ � ��� � �� � �������� � ��� ������� �� ����"����� ��� ������ �� �� ����� ���� ��� � ������:��� � ������� ./3� � !��� ������ �� �� ����� ��� ������ ��&��' � "��� ��� �?@@ � �?77 � ������ 4���� ������ ��� ���� ������� �5���� ������� �� ?03 �� � ����� � ��� ��#��������� �� ��+ � ��� ������� �� (����� �-����� ( � ,�� ����� �� �� ��� ���� �� �� ��� �?@@ ����� ���� ��� � ����� (����� ���� ���� ������� �5���� � ?0@ � �(?0@ #����� �������� ���� ��� ?/? � ������ � ���� �(?/? * �������� �� ����� ������� " �� �������� � ��� �5���� �?03 � �-����� ( �

4� .�;A � �� ��� ������ &��' �� �� ����� � ��� ��� �� ������������ �� ����� ��� �� �� ��� 4� .�;� � �� �� ����� ��������� ��� ����� ����� ��� " � � ?A�;?AA � "�������� � � ��� �������� "�� � @@� � �5������ � ���?77 � ������� " � �� ���� �� � ������"�� ������ �%� ���� ��� ���� � -�� "����� ������ ��������� � ����� � ����� ������� �� ����� ���� � ������� ��� "����� ��� ������ ��#������ �� ��� �?77 �����5 �� �� ���� � &��'#������ ��) ������� ��� ������ ��������� �� ������� ����� ���� ��#������ � .� : ���� ��. � ��������� � 4���� � ��"��� ���.7 �� ���� .�;� � &��'� ��� ����� ����� ��� " � "�������� �� ����� ��� ������� ������� �� ��� �?77 " � ��#������ ����)"��� 4 �������� ���� � 3.��7 � "��������� � ������ ��"���� � " �� �� ��� ����� ����� ��� ������ ��� � ?/A � �-����� 9 � !�� ��� �� ��� ����� �� ������# ��� ����� �-����� , �� ����� ��� ���� ���� ��� �� ��)����� �-����� 9 � ����� � ������ ������� ���� �� ��� ��+�

%���� ����+� 9 :�44�; �� ������� � ���"&'

2�� � ��� @�� ���������� � �� ���� ��� ��������� �:��#����) �� ��� ./// � ��� ����� ���� � -���� ���� ���� �����#�� � �� C���� ���� � �� � ��� ?��;?3� � ����� � F ��� �� ��� ����� ��� ����� � � ���� ������� �� ��� "�#���� �� ��� ���� � ����� �� ��� ������� ��"���� � " �� ����� ������� ����� �9I��� �� ��� .//A � F � #������ ��� ��#���� C��� ���� � �� ���� ��� � ���� �5���� ������ �� ?�3�?� ?A��3� ?@A��� � ?7?�� �� ����� ������� � �� ���" �� ������"�� ������ �:��#����) �� ��� ./// � &������� � &��'#������ ������ ���� ��� � ������ �� ��� ���� ����# � �� ���� �5�� � ?A3�0 � � ?7� � �� ������� ��� ���� ���� !�� � ����� �� ��� �5����� �� ����� �� �)� ��.��K � ��� ������� �� ���"���� � �� ��� C���� � ���� ��#������ �-��� � � F �� ���� ������ ��� ?@A�� � ?7?�� �C���� � �� �? � �?K� ����� ��� ����� ����� ��� C��#�� � � ?�3�? � ?A��3 � �� ��������� ���� 3K � @�7K��� ���"���� � ������������ �� �� ��� � ����� ����� �� �����#�� "� ��� �������� � ���#" ������ ����� �� ��� " ��� � ��� " � � ?@A�� � �� ����� �� ��� � ?7?�� ��9I��� �� ��� .//� � ��� ��������� �� ��� ������� �� ���"���� ��� �� ������� �� F .�;� � ������� ������ �� ��� ��������� ���"���� �� ��� ?�3�? � C���� � ������ �� �/K� ���� �� ��� ?A��3 � ���� � � �� /�@K� !�� ������� � ���������� �� ��� ?@A�� � ?7?�� � " �� ��������� "��� �� .AK�� ��� �� ��� ����� �������� !�� C���� ���� � �� �?A3�0 � ?7� � � ����� �� &��'#������ ������ ��� ��0K � �K ������� �� ���"���� ��

-�� ������� ������ ��� ������� ����� ���� ������� ���������� �5������ ����� ����� 4� @?� � �5������ � ��� �� ������ ��� ������� ����� ���� �5����� ������� ���� ��� �������#�� �� ������� �5���� �� � ?7? � � ��� ����� �� ��)����� �� �� ���� ������ ��� � � �5���� �� ��� �� ?AA � �-��� � � !�� ����� �� ��� �������#������ ��������� ������� �� ��� ������� �5���� �� � ?@��7 � �� �� ��) �������� ���� � ?7? � �-��� �� 9� ( � !��

��������� �� � �� ���� �������� ����)"�� � ��� ��� ����� &��'#������ ����� � ���� � � ��� ����� �������� ��#� � @@� � �5������ ��� �� ���� � !��� ������ �� ���������� � ��� ��� �� ����� �������� � 33 : �%� �� �� ������� � ,�� �� ��� ����� ���� ������ � � � �������� � ��� �������� �������� �� ����� �� H� ��������� ��������$����� �� ��� � � ��� ������� � .� :�

(�) � <,��+ � �$ �, � ���( -����3����� �$ �, �� +���� �$ �, 0������ -��#�� ��� $���� � $���� �- �- ����� �# -��� �$ ��� �+���� �, �� � �$ ,���+ ��� �� � ���� � �� 4 �� /, �� +���� �$ 8�# �� ���� �# -��� :� ���� � 3 �� � =>4?@>4 ��; � � �� � ��44A� /, ��8��� #������ �$ �, 0������ -��#�� ��� �� ���-�� � 3 ��� �, -������� /, � -��(������ ��� ��� � ��( ���3 �$��-��� �$ �# -��� ��� �, � ����� � � -��( �� � ��� ��( � �+�,$��-���� /, ���� �$ �, $� ��� � �� �,�� A�

(�) " ����� �- �- ����� �# -��� �$ ����������� � �, �� � �$,���+ ��� � � ���� � ��, �94 �� 8-����� �� 4 �� &1 -������5 �1�� �� � ��, 4?�� *+<��5 <1 �� �� � ��, 4?�� *+<�� ��� �������� � �� �, ����� ��8��� �$ �, -������ ���#� �

(�)* ����� �- �- ����� �# -��� �$ ����� � ��� ������ ��, �� � �$ ,���+ ��� � � -��� � �� 4 �� '8-����� ��( � �+�,1��4 ��� /, �# -��� �� ������� � �� �, � ��8��� &1 ����� � -�������5 �1 �� �� � ��, 4?�� *+<��5 <1 -������� ������ � $�� 4 �5 "1�� �� � ��, 4?� � *+<�� � �, ��� ��� ������ � $�� 4 �� /, ��������� �+,� �� ���� ��� �=4 B��� �?� �?�

'$$ -� �$ *+�6 �� 7&"%*1%����-,����#,���� 28��� ��-��� %���� ����+� 9 :�44�; "&*

!�� ��������� �� ��������� �� ������� �� ��)#)�� �� ���� ��������#������ �.�;� � &��' ��� ������ ��� ���� ���#���� � .� �( �� ��������$� ��� �����5�� ������� "� ���#���� ������ �� F ��� ������ �� ������ � ���"�� �5�# � ��� ����� �� ��������� �� ���� ��� ����"�� ����� ���� ����� � � ����� ������"���� �������� ��������� 4 ������������ �� �������� ���� � � �� ��� ��� � ���� ������ ��7 �� � ���� ���� � � ���� @�� � �!"�� � � !�� ���#��� � � �� ������ ���� ��.3 � ��0A� ������������ F ����������� ���� .�;� � &��'� ��� �������� �� ��� ��� ���� � ������ � ��� ������ � � �� ���� � ������� � �� ������ �� � ��� �������� ���� �� ��� ���� ���� � � �� ��� ����� ������ � � �� ����� �������� �������� �!"�� � � !�� ���#�� ������� ��������� �� �������� ���� �� ��� �������� ��� Q �� D ��� !��� ���� �������� ���� A�? � �� A�. � � ������������� ��

!�� ������ �� ����� �5� � ��� ����� �� ��������� ������ ���� ��������� � ����� � ��� ��������� �� ����������� ������� � ������� ������� � �� ���"� � ����6���#:���$��� �� ��� ./// ��� �� ������ ��� ��� � �� ��� � �����#���� ������

4���� ��� �������� �������� �� 0�K ��G� ���� � �5��������� ����� ���� ��� ����� � ����� �� ����) ��� ��� ��� ������ �������� � � �� �������� �� ���� ����#�� �������� ��� "���� .�K ���� ������ ������ � �� ���.//0* ���6���#:���$��� �� ��� ./// � F ������� ������ �� � (����� �� ������� "�� �� �5���� �� �������� � ��� ��������� �� ����� �� ��� ���� � �5����� � 3�? � � �������� ���� � ��� � ?7� �� ��� ��� �5���#��� ����� ��� �� � @�� ��

!�� �������� �� ��� ?A3�� � ?7� � C���� ���� � ��� ��� ����� �� ��� ������ ��� ������ ���� .�;� � &��' � ��� ��) �� ��� �� ������ �5����� =4,�& ��������� "�&��' �� �� �� �� �� �� ��� =4,�& ��������� �� ������������� � )��� � �������� ��� ������������ �����5�� ���%9� �+�"��� � �� �H����� ./00 � ��� H������ �� ������������ ��� �5����� �� ����� =4,�& ��������� �� ������� ��� ���"� ������ !��������� ������ ��� ���� � ��"������� .�;A � &��' ��� ?� �� � ��� ��) � � �( � ���� ��� ���$� � ��H��� ������ �-��� �� 4� 9 � !�� ���� �� ��� �������� �� �� �� ��� ���� ��� ���� � ��� ������ �� ������� ������� �� � #��������� �?AA �� ��������� �?7? � ������ � ��� ������� ������ �� ������������ �� ����)�� "� ����$� ���� ����� �� 33: .� ��� ���� ������ ��� � 4 " � ����� ?/��7 �� � ����� � ��� ������� �� (����� �����5�� � "��� �� ���� � �������#������ ����� �-��� �� (� , � &��#����� ��� ���� �� �?AA �� �?/� � ������ � �������#������ ��#����

!� ����� ��� )� ����� �� ��� ���"� ������ �� ���� � .�;A �&��'#������ ����� ���� ������ ��� ��� .� � ���� 3� M����;� �;. ����� � ����� ��������� �� ������� ����� ���� ��#������ � .7 �( ���� ������� � ���� ������� !�� ��������������� ���� �� ��� �����$�� ��������� �� ����� ����������� � ��� �5���� ���� ������ ������ ��� ������#��� �� ��� ���"� ����� �-��� � � F �� ���� ������ ��� � �� #���� �� ��� ��������� �� ������� �5���� � ?A0 � �������� � ������� �������� ���� � ��� �������� � �-��� �� �#�� �� � F &��'#������ ����� ��� � �� ���� �� ��� �������#�� �� �5���� �� ��� ������� ������ ��� � ?A0 � � #������ ������� � ��� .7 �� � ��� �������� �-��� �� ���#�� �� � F ����� ���� ���� ������� ����� �� �"���������� ?A0 � �� ?A7 �� !��� ������$��� ��� � ������ �������� ����� �� ��� (����� ������� " �� !�� ��������� ��������� �5���� ������� ���� ?00 � �� ?0� � ����� #��5� 7� �� � ��� �� ����� � ����� .� �� � �������#������ ����� �-��� � � !�� ������� �5���� ������ ��������� �� � ��� ����� � ��� �5�������� �� ������� �� ���� �� ���� ���� ������ �������� � !�� )� ���������� �� ��� ����� ����� "� ������ ���� � � �5� � ��� � "�������* ��� ���#���� ����� �� ��� ������ ���� �A�0 �� ��� ����� ���� � 7�� �� ��� �������#������ ������

+�,�� * ����� �- �- �$ �� :�; � �� ��� $��-����� �� ���� :$; (��� � � � ��� � $��� ���3� 8#�� ���� $� �� �, $���� �- �- � -�� �$ ����� � �, �� � �$ ,���+ ��� � 8-� � �� ��4 �� �� 4 �<� /, $���� �- �- �� ���� ��� � � -� � �,���+, � ==4 �� -����$$ $�� �� C�D � #� �� ��� �, �( ��+ � ���( $���� �- �- �$ �� (��� �

� $ �� $� C�D

<������ 4��E F 4�4@ 4�@ F 4�4� ���4 F 4�4 4�>� F 4�4� ��=@ F 4�4�4?�� *+<�� 4�E F 4�4� 4�� F 4�4� ���4 F 4�4 4�@4 F 4�4� ��� F 4�4�

(�) - @@ � $���� �- �- ����� ��8�� �$ ��� �+���� �, �� � �$,���+ ��� � 3 $�� ��� �$� � 4 � ���������� '8-����� ��( �� �+�,1 ��4 ��� /, �# -��� �� ������� � �� �, � ��8��� &1 ��� -������5 �1 ��� � �� �� � ��, 4?�� *+<��5 <1 -������� 4 � �$� � $���,���������5 "1 4?�� *+<��� 4 � �$� � $���, ���������� G���������+,� �� ���� ��� @4 B��� �?� �?�

%���� ����+� 9 :�44�; �� ������� � ���"&�

!�� �� �� �� ��� 3.� � ������� " � � ����� ����� � �5����� �� &��'#������ ������ ���� � ���� � ������� �� ��� ����������� �� ��+� "������ � ��� ����"����� ���� ���� �� �� ����� � ������� �� � ������ �������� ���� ������� � ���������� !� ����� ���� �� ��� � � ��� ���� ������ �5������ ���� ��� �� ���� � ���� �������#������ ��#���� ��� ���� .� 7� .7� A�� ?�� .��� � �@� �� � ��"��� � � ��� ����� �� ��� ���� � �5����� ���� ��������� ����#��� " �� ������ �� � ������� ���� ���� � � ��� �� ���� � � ��� �� �� ����� � �.�;A � �� &��'� &������� ��� ���#�� �� ��� �5����� ���� ������ ��� ������ ���� .�;� � &��'

������ ��� ���� � �� ���� ������� " �� ���� � ?@� � 3�/ �� � ����� � ��� ������� �� ����������"�������� �-��� � �

-������ �� ����� �5����� �� ����� ��� ����"����� �� ������������ "����� &��' �� � � �������� &��' ���� �� � �� #�� ����� �� .�;� � �� ���� �� ���� � ������� ��������� �5������ ���� �������� ���� ������ !�� ������� ����� ���� ��� ���� �� ����� �� �5����� ����� ���� ����������� ��� ������ ��� � ��"��� ���� &��'� "�� ��� " �������������� ��� ���� ���� ����� ��� ���� �� ��� �� ���� � ������ ����� ���� �"������ ��� ����� ���7�K ��G� �� ���� �� ��� ���� � ������� �� �������� ���#� � ��� ������� �� ���� ��� �� ���� �

4� ��� �� �� �� �� ���� � � ��� ������ ����� � � ���� �� ��� ��������� �� �������� ������ �� ������ ������������ �� �������� �� �� ������ ������� � ���� � ��#�� �� !�� �������� �� ������� �� @�7� P ��� � ����� ��� ������ �� @�/ P ��� ��

��������

������� �� � ������ ����� � � ��� � ���� �� �� ���� �������� "��� ��� ���� �� ���� �� �� "��� ����� ��� ���#���� �� ��� � � ��"���� ��� ������ �� � $���� � � ���� ���� ��� �� �� ��� ./37* R��� � 9������ .//?*�� �"��� �� ��� .///* 9�� � �� ����* ��� � ��������� � F � � ����� ��� &��' �� � ���� �������� ���� ��������� �� �� � ��� �������� �� ����� �� ���� �� ���� � �������� ���� ��� ��������� �� ��� ����� ���� �� ������ ��� � #$��� ��������� � ���� ���������� �� �� � ��� �� ������� �� ��� � $��� ������� �1���� � 2����� ./3�* 9���� � ������ ./3A* %� � ��)�� ./3/ � &������� ����� ������ ��� �� ���� � ��� ������ � ������� �� ������� �����& ����� �� ����� � � ��� �� �5����� �� ����� ��� ������ ����� �� �������� ���� �����5 ���� �� ���� ���� "��� ������� �(��8����� � � 4����� ./07 �

F ��"���� �� ��+ "� &��' �� ������� ���� ��� �%� �� �� ������� � (� ������ � ��� ���� �.�;� � ������� �� �� ����� ��������� ��� ������� �� ��� ���) ������ "� �� ������� ������ ����� �� ��������� �� ��� ���� ������ "����� &��' � ��+� !���� �� � �� � ��� ��������� "��� ���������� �� �� � �� �������� ����� �� ����"�� ������� �� #�� ����� � ��� ������ �������� � ���� �� � �� ��+� !��������� � ��� � �� ���"� � ������� �� ��������� ������� ���� � � ��� ��� ������ ��� ���� � ���� ���� � ���)������� � ������� �������� � "����� � ����� �� � �� ������������ �� ���� �����5�� �� ��+ � ����� ������ ����# ���� !�� ������ �� �� ����� �� &��' �� ���� ������������� ��� "�� ��� ��"�� �� ��������� ��������� � �� "� ��#������ "����� ������� �� � � ����� ���� ������� ����#

(�) # /�#���+-�� #� � ������ �$ �, -,��+ � �$ $���� �- �- ������ �# -��� � �� �� �� =� 9� @� >� E� 4� �� =� �4� ��� �4�� �$� � ���������� /, �# -��� � � � -��� � �� = �<� �+,� �� ���� �$ ���������1 @4 B��� �?� �?� '8-����� ��( � �+�,1 ��4 ��� /, �# -���� � ������� � �� �, � ��8��� )## � #�� �1 -������� ��� � #�� �1,���+ ��� �� �� � ��, 4?�� *+<��� � $�� ���������� �, ,����+ ��� � � � �-�3�� � $�� 94�� �� 4 �<�

(�) & ����� �- �- ����� �# -��� �$ �- ��� 8���-�� $��� -������� :&; ��� 4?� � *+�6��� �� � �, �� � �$ ,���+ ��� �� /, 8���-��� � #� #�� � �$� � �� :�;� =�� :<;� ��� ��4�� :"; �-�3���� ��4 �<� '8-����� ��( � �+�,1 ��4 ��� /, �# -��� �� ������� � ���, � ��8���

'$$ -� �$ *+�6 �� 7&"%*1%����-,����#,���� 28��� ��-��� %���� ����+� 9 :�44�; "&"

� �� � ��� ����� ��)� ��� ���� ���� ������� � ��������� ������ � ����� ��

4 ������������ �� ��� �� ��������� ��+ �������� ����� ��������� �� ������� " � ��� � � ?77;?73 � � ���#�� ������� � 33 : �C���������.//.* 9I���� .//@ � F�� ���� ��� ����� �� &��'#������ � ����#� ����� �����5�� ��������� � �-������� � !�� ���� �� ����������� ���� �� ������ ������� ��������� ��� ����� �� ���� ��� ����� ������ ��+ ��"� ���� ����� =4,�& ��������� �� ��� ���� � � #��� ���� �� ����� �� ����� ��� ��+ ��"� ��� �� ��� �� ���#��5�� �C��������� ./30 � ���� ��������� �� �� � ��� ������#�� � ���� �� � ���� � ���� �� ��� � ������� ������ �� ������������� ; ���� ��� ������� �����5�� ;� �� ��H�� ������ ��� � ������ �������� � "� �5������ !�� ����������� �� �� ��� ���� ������ "� �� ��� � ��� ����� ���#���� ��������� �� �������� ������ ����� �������� ���� A�? ��� A�. � � &��' ������ �� ,������ ����� ������� �������� �� ��� �� �� �������� ���� ��� ������� � �������#�� �� �������� ���� �� ��� ��� ���� � � � � ��� � ������� ��� ������ � � �� ����� F� �� ����� "�� ��� � "� 1 9������ �� �� �./0@ ��� ��� ����� �������� ���� � � ��. � �� ������������ ��� ��������� �������#��+ �����5��������� ��� 7 � ���� � � �� ���� �� �� � #����������������� F ��� ����� �5� � ��� ����� ���� "� ���6���#:���$��� �� �� �./// � ��� ��������� �� �������� ���� � ���� "��� ���7 � � � ���� ����"�� �� ��� �?7? ����� !������� �� ��� � �������� ���� ��� � � ��� ���� � ����� � "� ����"���� �� ���� �� ����������� ����� "� &� ������ ��!"�� � � &������� ��� ������� � ��������� �� �������� ������ ��� ����� ���� � � ������ ��� � ��������� ��� ���������� ��������� ������� ���� ��� �������#��+ �����5���� �� �5��� � S����T ���� �� "�� � ������� �������� �� �S����T ���� �� ���� � ��� ���"� ��� F ���� ����� ������� ��������� �� �� ��� ���� � ����� "� ���� ��� H�� ����"� ��� ���� �� �� &��'�

!�� ������� ����������� ����� ���"� �� ���� �� ����� �5#����� �� � ���� ���) �-��� � ���� �5� ��� ��� ����#� ������� �� ��� �����5 �� �����5�� ��� � ������� �5�#��� � ��� � ?77 �� !�� ���� ��������� ���. � � ���������� ���������� � .� : ������� ��� �����5��� �� ���?77;?7? � " � � ����� �� ������ ��� � � #������# ��� ������ ���� !�� �"������� �� ��� ������� " �� �?A3�0 � ?7� � �-��� � � ����� �� ������������ ��� =4,�'#�������#��+ �����5�� �9I��� � -� �)� .//3* -� �) �� ���.///* 9I��� �� ��� ���A � �������� ��� ��� ���� �� ���������#�� �� ��� ; � ���� ���� ; �� ������ �5����� �� =4,�& "�&��'� !��� �� ��� ���� ������ �� ��� ������������ ��������� �� ���� �C��������� .//. � ��� ��������� ��� �������5�� ���� ����� ������������ &��'G&�� ������ �� �������� �� ��� ����5 ��� ��� ����� ����� ������ �5����� ��=4,�& �4����� � -� ���� ./3@ � 4� ��� �?@@ ���������������� ���� �� ������ ��� � ��������� ���� ��� �� � ��#���� ��� ����� ���� ��� � ����� �:��� � �������./3� � �� ����� ��� �"����� ��� � ������� �� &��' ���� ��������� !�� ���� � �� ���� �� ��� " � � ?A3�0 � �-������� � "� �5�� �� "� ��� ���� ��� � �� �?@@� ������ ���� "� �#� � �� =4,�& � ������� �� ��+ �������� ��� ������ � ����#���� �� ��� � $��� ���� ����� ���� �� � �� ����� �5����� ���&���� �� ��� ���� � !��� ����� ��� �5����� �� =4,�& ����#� ��� ����� ���� � ��� ��������� �� ��H�� ��� � ��� �� #������� �� ��+� F ������ � ���� ������ � ��� &��' ����#

�� � � �� ���"��� �� ��� �� �� �� ��� ?77 � ������� " � ���� "���� �

!�� �?77;?73 ���� �� �5������ �5���� � @7. � �9I�#�� �� ��� .//A � ���� ��� ?77 � " � ���� ��� ��� ����� ��#������ ���� @?� � �5������ � �� ���� ������ ��� �-��� � ��� �� ��� �5������ " �� �� ������� ����� ������ � � ������������ ��� ��� � �� ���� �� ��� � �� ���� � @?� �� ������������ " �� �� �� ���� � �� ���� �� ���� ��) �9I����� ��� .//A � !�� ����� �� .�;� � &��'#������ ������ ����� ����)"�� ������� � ���� ����� �� ��� �� ����� �� ��� ���#�� ���� �������� ���� @?� � �5������ � !���� ����� �� �5���� � ?@��7 �� ����� ������ ���� ������ ��) " ����� � ?7�;?77 � �-��� � � !�� ������� �� ��� ?@��7 �" � ���� "� �����5* �� ��""�� ������ �� ����� ��" �� ������� �� � �� ��� =4,�'#�� �� � � �����5�������� ��� ������� �5�� � ?A3�0 � ?7� � �9I��� �-� �)� .//3* -� �) �� ��� .///* 9I��� �� ��� ���A � F� �������� ������ � �����5�� �� S����T� ����"�� � ������� ���#������� !�� ��) �������� �"������ � � ?7�;?77 � � "�������� � � �� �����"��� ��� �?7? ����� �������� �� �� � #��������� � �� "����� �5����� � @@� � �� � @?� ��!��� �������� ��� ����"�� ���� �� �� ������� � ������������ �������� 4"��� ?3� �� ����� � �� "� ����� "�#���� �� ��� ���� ���� ����� �-��� � �

9������ ��� �� �� � ��� �� ��� �������� ����)"�� ��#����� � ��������� �� ����� �� ��� ��� � � ����� ������������ �5������ � @@� � @?� � � 33 : �%� �� �� ��� ������� �� ���� � !��� �� ��� � �� ���� ��� "� � #����� �� ��� ��������� �� �������� �� ��� ���� ���� � ��!"�� � � !���� �� ��� � "� �5�� �� "� ��� �������� �� ���� � ���� � �5����� �� ��� ������ ��� �-��� � � �� ����� ��������� �� ���� ��� ��� � ��� �� ��� �� ���� ����� &��' ������ �� � � � �� ����� ��� � ���� ���� �� �� #����� � ������ ������ "����� &��' �� � � ������� � ������� 4� ������� ���' �� � ���� ����� �� ��� ��� � ��������� �� � � ���� �� �������� !��� ������ �� ��������� �� ������ ������� ���� � ������� � �� ���� � ����������� ������ ���� &��' �� .�;� � �� � �� �� ����� ����� ����� ���� F "��� ����� ���� ������� �� ����������� �� ���� � !�� ����� �5������ �5���� �� ���� ��� @�� � �C������� ./?? � ���� �� ����� "� �������� � ������������� ���� ���� �5������ ����� ���� ���� �� �������#�� �� �������� ������ �� ����������� � ��� ������� �� #����� �� " � � � ?7� � � " � � � 3.7 � �C��������./?? � ��� ������ �� ����� ��� �� � ��� � ���� �� �� !�������� �� ������� " �� � ��� "� � ���� ��� "� ��� ���#� �� �� ����� ���� �� "����� �� ������ � �� ����� " ������ "��� �#� �� ����� � � ��"���� � ������������� �� ���#�� ���� ��� 4� ���� �� ���� ��� ��������� �� ������ ���#���� ����� � "� ���� ���� ��"�� ��� ��� ������� � ��������� �� ����� �"������ � &��'#������ ������ 4� ������������ �� �������� �� ���� �� ������ �� ��� �� ����������� � ����� �"������ � ��� ���� �������� ���� � � � ���"� ����"���� �� ��� �� �� �� ��������� �� �� ���� �� #����� � ���� � �5����� �!"�� � �

!���� �� �� ��������� ������� "��� ���� ���� ��"�������� �� ���' � ������������ &��� ���� � �������� � �����"����� �� ���� ���� ��"�������� ������ � ��� � ���� �#�� � ��� ��$� �� ��� ���� �� �� � ��� ���� � =#= ���� �� ����� ������ � � � & �� ��� ������ �&� �� ��� ���� �

%���� ����+� 9 :�44�; �� ������� � ���"&-

:J�� �� �� ������"�� ���� ���� ��"�������� ������������� ����� � �� ����� ������� � ����� ���� ���� ��� ����������#��"�������� ����������� �:J�� �� ��� .//?� .//0����� � ������ �� ���� � �� ����� ������� �� ������ ��� ��"���#����� �� ���' � �� "� (��' �� � ��� -������ ./3/ � !�� ����#�� ������ ���� � ���������� �"������ � ������ � ���������� ����� �� ����"���� �� � � ���� � �� �5������ ����#����� �������� � ����� "� ���� ����� ���� �5��� &��' �F ����� ���� ���� �� ��� � � �������������� �G��������� ��������� �� �"������ � �� ������ � ����� � � #��"���� �� ��� �������� �� ������� � �� (����� �,� -����� �������� ./3?* �� -����� �� ��� ./0. � ����� �#�� �����5������� �� ��� �"������ ��� ������ ������ � �-� #���� �� ��� ���. � ����� �� ������ "��� ��� � ���� ���� � "��� ������ ��� "� �)� � �� �� �������� ��� ���#����� � ��� ������� �� ����;������ �����5�� ����#�� � ./?A � !��� ������� � ���� � ��� ��$� �� ������� �� ���)� ����� � �������� � �� ��� ������ �� � � ��)����!���� �� � �5����� �� �� � ���� ���� � �������� � �� �������� ��� ������� � ����� ��� ���� ������� �� � #����� "� &��'�

������ �� ������ �+�"��� � �� �H����� ./00 ��� =4,�&��"���$�� ��� �����5�� ���� � � ������� � �� ���#"� ��� F ��� ���� �� �� ������ =4,�&� ��� ��"����� �� ��� � #������ ��� ���"� � ������ � ������� F ���#��� � ���� ������ ��� � ��� ��#������ (����� �����5 ��#� � ��������� �� ������� �5���� � ?/? � �� ��"��* � "��� ����� ���) ��� �+�"��� � �� �H����� ./00 � F �#���� ���� ��� "��� ������ ����������� �� ��� �����5�)�� ��� ; ����� ��� ���"� ����� �� � ��� ����� ;� ��� ��#���� �� ����� � ����� �� ���� (����� � ��"����� ��� ������������� �� ���� � $��� ����"�� ./73* O�)������ ����� .//�� .//A � F &��' ������ �� ��� ������� ������� ����� ����� ����� ��� ������� ����� � ������� � ����� � ���#�������� �� ��� �����5�� � � #������ ��� �����

�-�������� � � ��������� ������� "��� ����� �� ��� �5������ ��� � �� ?�0 � � .�;� � &��'� ����� ����� ��� ������ ��� ������� ��������� ��� ���� ��� ����� �����5���-������� � !���� S����T ������� ��������� � ���� ������������ &��' �� �� 4� ����� &��' �� �� ����� �.�;A � � ���������������� �� �� � ���� ��� � � �� �� �� ��� ?77 �������� �����5 �� ������� � �� ?AA � ���� �-��� � � ����#����� �� ��� ������ "��� ����� �� ��� �� � ����� ��� (�����" � �� ��� � �-��� � � ����� � "� ��� �� �5����� �� ������������ ��"���$� � =4,�& ��������� �� ��� ��������������5�

-��� ������$�� ��� ����"�� ������ �� &��' �� ��

!�� ������� �� ���� �� ���� ��� �����5��� �� ������ � � ����� ���� �����5�� �� �5���� �� &��' �� ����� ���������� 4� ��� ��� ����� ���� ��� ���� ��� ���"� ��� �� ������� � ������� � �����5 ������ ����� �� ����#��� ��� �5�� ��������� �� ��� ������ �� �� ���� ���#��5��� !�� ������ ��������� �� � �-���� � %� �� �� ������� ���� �� ��������� �� ��� ���� ����������� (� ���#��� � ��� � �H�� ������"���� �� ���� ����� �� ���� � ������ ��� � �� ���� ��� �� �� ��� ����� � ���� ����� � ��� ��� �� ������ � ������� ������ ��""�� �� �� �� ��� ��#����� ������� �� � ����� =4,�& ��������� ��� � ��������� ���� � "����� � � �%9� �� ��� ���� ��""�� ��#���� �� &��' � ����� �5����� ����� �������� �� ��#�� �� � ������

��.�������������

!�� ������ �� ������� �� C��$�U� ���� ��� ��� ����� ������ .� : ����������� ����� ���� ��� =��� � ���� ��-�� ���� �� &� ��� ��� �� �!:4 !�A�..3 � !�A0��A �� ������ �������� !��� �� �� ��� ������� "� �������� 2 �� ��� ���� �� 9F�+ F(4.#(!#����#3��.� �

(�) / . �-���� �$ *+�6 ��� ��, �$$ � ��-��#�� ��� �$ ��#���� �� � � �3��� ��%888 � #� � ��� #����-,����#,���� $������, ����� ��8��� �� HHH ��� <888 � #�� � ��� -,����#,���� $���� ��, �������8��� �� HHH ��� %2. � �, �33� (�����$ 7&"%*1%����-,����#,���� �8��� ��-���� � %-,�� � �,�� �$ #����-,����#,���� �%#, � -��� �#���� �� #����#, �#,��3� �

'$$ -� �$ *+�6 �� 7&"%*1%����-,����#,���� 28��� ��-��� %���� ����+� 9 :�44�; "&#

����������

4�� ��� � &�� �� �H����� (�� !��)�� �� ��� � ,��� � (� ����. !������� �� �� ��� (#����� � ����� � (�� �������� ��� ������"� � �������� �� ��� =4,�&>����������������� �5���#�������� � �� -�9� %���� 7��� ..;.7�

4������ C� &� � -� ���� !� N� 1� �./3@ �� F� (������ ,�� ��� ��>N�� O���� � �� ��

9���� � ,� � ������ 4� �� �./3A ������� "� �� � �� ��� ��#�����"� � �5���� �� �/� ..30;..3/�

9I���� 9� �.//@ ������� "��������� � ��������� �� ��� �� # ����� �� ����������������� ������������ � ���������� "��#�� ������� &�� � ���� ���� A� A/;77�

9I���� 9� � -� �)� -� �.//3 +��� ��������� ��������� �� ���#�� �� ����������������� � ������������� ����� � ��������"� ������ N� ���������� �����"���� @.� 3A;0��

9I���� 9�� %� ���� � 4�� +�"���� ��� � �� �H����� (� �./0/ � ��� �#������� � ����� �� ����������������� � ��� ����� ���#��5�� � ���� ��������� �������� �� �� 3?� .A7;.@A�

9I���� 9�� �����$� 4� +�� � %����$)�� �� �.//7 ������ �� ������ � ��� �$��� � ������������ �� ����������������� � ��)#���� ����� � ������� � �� ���"� � ������ � ������� ������� ������ A.� @..;@���

9I���� 9�� ������� +�� � -� �)� -� ����A ���� ������ � �� �����#� #����� ����������������� � ������������� �� �������� � ��$�� �� ���� � ���� ��������� ���� ����� ��� ������#������������ N� ���������� �����"���� 9> 9���� ?/� A.;A/�

9I���� 9�� +�"���� ��� � �� �H����� (� �.//. !�� ������� �� �����#����� ��� ������������� ���� � ���� ������ �����#��� �� ����������������� � ������� � �� ���"� ��� �����#����� �����"���� 7A� ??3;?3A�

9I���� 9�� +�"���� ��� � �� �H����� (� �.//� F�� �������� �� ����� ������ ����������������� ����� � ��)#���� ����� "� �#���� �� ��� 33: ��������� �� ������� ������ N� ���������� ���#��"���� 9> 9���� .�� A0/;@�.�

9I���� 9�� +�"���� ��� � �� �H����� (� �.//A 4 ����� �� ��� 33:��������� �� �5������ ����� �� ������� ������� � �� ���#"� ��� N� ���������� �����"���� 9> 9���� �.� .�7;.AA�

9�� � �� ,� O� ����� ��������� �������� �� ����� � ��� �� ���#����> �� ��� ������� (��������� @�� .AA7;.A7.�

(��� 2� &� � ��)� N� �� ����� �������#� ����� �5������ ������ � ����� ������ ��� �� � ���� .7?� .;/�

(��8������ &� � � 4����� -� �./07 F ��"���� �� ������ ������ "����� ������ ������� ��� +��� 3� A.;@��

,��� � (�� 4�� ��� � &�� O��)�� &� ��� %�"����� =�� �� �H����� (�� �!��)�� �� �� �./// !�� ���� �� ����� ������ ����� � �������������� � ��������� ���"� � �������� �� ��� � =4,�&#����������������� �5����������� � ������� "� � � � �� # � � ����� ����� �� �� ���� 9���� A/� A�/;A�A�

,� -������ %� -� �./3/ !�� ������ �� ���� ����� � ��� "������ ����� �� (������� ����� � ���������� ������� �� R� ��� $� #������� /A� .�/;.A3�

,� -������ %� -� � ������� (� :� �./3? !�� ������ �� ��"#����� �� #�� ����� � �� ������� � $� � � ���������� FF� ������� ������ � ���� � ��������� � R� ��� $� ������� 30� A.@;A���

,� -������ %� -�� &�� +�� � R������� &� �./0. !�� ������� �� ��"#����� �� �� ����� � �� $� �� ������ � ������� � �������C����� � ���� ��� R� ��� $� ������� .�.� A3;@3�

,� -������ %� -�� &�� +�� � R������� &� �./0. " !�� ������� ����"����� �� �� ����� � �� $� �� ������ � ������� � �������� FF� +������� � ������ ������ � ����������� ����������4���� �����"���� .�0� @�3;@..�

�� &������ 9� � ���� ��� (� �./0� =4,�'G=4,�& �� ���� �� ��������������������#� �������������#����� � � �����"�� ����#����� ���������� �����"������ .� �./;��A�

���������� ��� ������� +�� -� �)� -�� � ������� +� �.//7 !����#���� ��� �� �� �� �������������� ������ ������ � �����#���� ����������������� ���� ����� ���� ���� � �������� "�#��� ������ ���������� �����"���� ?�� 37.;37?�

-������ !� N� �./0A ������ ������� �� ������ �� �� �������"������� � ��5�� ���� �� � � "������ �����"���� +��� @3� A?.;@�/�

-� �)� -�� 9���$� 9�� � 9I���� 9� �./// ������������������#=4,�' � �����������������#=4,�& �����5�� � ����� ��#�� ����� ���� ���� ������ ��� � ����� � ������� ���#"� �� �� ��)#���� ����� ������� ��� +��� 7/� 7A;?.�

-� ����� ��� F �� E�� � F ��� �� ����. ,� ��� ����� �� ���#�#�� � �������� � �� ������ � "��� � ��� �� ��� ���#�����$��� �� ���� �� � � ����� �#�� �����5 ������� �4 �� ���� .3� /.3;/�3�

C�������� N� (� �./?? 1���"�� "������ � ��������� �� �� ����#������ � ��� �������� � ������� � F !�� (���������� �1��# � � %� �� � ������ C� +�� ���� � =�� E��)� 9���� > 4������ �������.@3;.0@�

C���� � �� � %��)�� � �� �./0A 4 �� �� ������ ���"�� ���#H�� �� �����#��������� ��� ����������� ���� ������� � ����#����� � 9������ N� @@� A.7;A�@�

C��������� O� !� �./30 +��� �������� �� ���������� ������� "� ���#���� ������ ���"� ��� 9������� N� .3@� ?0.;?/��

C��������� O� !� �.//. ������������������ ������������ � F (���#������� ������� &�� ��� � 9�� +�� � -�����> (+( ����� F ����@AA;@7��

&����� ,� N�� ���� � C� �� ��� +���� +� N�� &� ���� (� =�� � O��)�� &� ������� =4,�&> ����������������� �5����������� ���� �� �#���������> �����5������ � ��������� � ������ �� �������#����� � -�9� %���� @0A� @3;7.�

&�� V�� E �� C�� E� � N�� � E�� E� ����� ,������ ��� �� ���� ���������� � ������� "� � #�� � ����� � ������ � ��������"� +�#&�%( � ����#����#�@#"������ �� #������ ��������!� � 73� 37.;37?�

:��#����)� :�� 9I���� 9�� :���� 4� ,�� � -���� N� �./// �����������#������� ����� � � ���� �� ���� � ��)#���� ���� ������������� "� �� �� ��� � � ���� �5����� ��������� �� ���������#� "����� .� :#.�� :� ������� ��� +��� ?�� 03;/0�

:��� � �� � ������� N� 4� �./3� !�� ��������� �� �� �� ���#����� "������ ������������������ ������� � ��� ���"� ��������� � �������� � �� "� �������� � ��� ��)� �� �� ��������@/� ?./;?�?�

:J��� &�� :J��� -�� � ������� �� �.//? � ���� �� �� ����#� �� �� ���� ����#��"�������� ����������� ��� � ��� �5����� ���� � ��� N� �5� 9��� @3� �7/;�??�

:J��� &�� :J��� -�� � ������� �� �.//0 �� �� �������� �� �������� ��"�������� ����������� � ���� � ��� ������� ��� +���70� .�A;.AA�

:J��� &�� �W����)� F�� ������� ��� :J��� -� (�� � ��U�W��� �� ����� &��� ����#� ����� � ��"���� �� ������ ������> ������ �� � ���� ���� ���� ���������� ������� � N� ������� A0� @�/;@@.�

%)����$� N� +�� %�)�� C�� (����)� &�� C���� � ��� � %��)�� � ���./0@ 4 ����� �� ��������� �� ���� )� ����� ���� ���"��#���#H�� �� ��� ����� � �������� ��� 9������ N� @?� @?A;@33�

%�� �� � ��)�� 9� �./3/ F ��� �� ��������FF #"� �� � ����# � � � ���� ��� "���� ������ N� !�5����� � ���� � &���� 7�/�3;/.?�

%�"����� =� � !��)�� �� �� �.//0 ������������������ ���������#��� � ������� ��� +��� 70� 7;�A�

%� ��� :�� -����� -�� � 9I���� 9� ����� ������� � ��"��� ��� ��������� ��� =4,�&>����������������� �5����������� ���+ � �����#�� ������ @�� .@7;.7.�

�� ��� +�� 9���� +�� � !�������� N� �./37 ������������� ������� �� ����� ������� ���� ���������� ���� �5����� �� A.�@�?;@�3�

%���� ����+� 9 :�44�; �� ������� � ���"&&

���6���#:���$���� 9� � ���$<)� :� ����� F ���� �� �� ����� � "���� ������ �� ������ ������ ���� ��� F ���������� � 9��#��������� �� ���� !�5����� � !���� �� � �� �� ������ �� =�1� � ���$<)� :�� ���� � ,��������� 9���� � %� �� > :����� 4�#����� ��"�������� ���.;��3�

���6���#:���$���� 9�� -� �)� -�� � ���$<)� :� �./// 4 ����� ����������� �� �������� �� ����������������� � ������������� � ������� ������� ���"� �� ������� ���� ��������H�� �������#��������� ��� ������������ ���������� �����"���� 3��?.?;?�A�

���� ��� !������� E�� � :� ����� �� �./30 ������� �� ������ ��� � "������ �) ������ � ����� �� � ��� �������� �������� ��� �������� ���� FF� ������� �� ��� �� � ����������������� ���� #����� � ��� ���"� ������ �� � (��� �������� ./� .�3;.A��

����� =�� ����� !�� 4��� :�� -���� =�� ������ &�� ����� &�� � !)���� :� ����� F�� �������� � �����#� ����� �5���#��� �� ���� �� � �� =4,�&>����������������� �5��������#��� ������� � �������� � ��������� -�9� %���� @3@� ..A;.A?�

��$$ �#(����� �� 4�� �������� 9�� � -� �)� -� �.//0 F������ � ������������ �� ��������� �����5�� �� =4,�&>����#������������� �5����������� ���� ����� �� � ��?� ?3A;?0��

���� �� � ����� 4� ����� ������� ��5����� � � ��� 9��� +���??� A3/;@���

����� � +� C� �./?A &�� � ���� ���� � "���� N� 4�� (���� ����07� A7AA;A7A/�

+�� ���)� �� ����� C� �5�� �� �� ���� � � ���� ��������� ��� F ���������� � 9����������� �� ���� !�5����� � !����# �� � �� �� ������ �� =� 1� � ���$<)� :�� ���� � ,���������9���� � %� �� > :����� 4������ ��"�������� ��73;�07�

+�"���� �� � ,������ :� �./0? %����$��� �� =4,�&>��������#��������� �5����������� � ��)#���� ���� ������� �� ����� "� ���� �#������� ��������� "����� � ���� �� ����#���� �� ��� �������� "������ �������� �� �� ??� ?.?;?�@�

+�"���� �� � �� �H����� (� �./0� ������ ����� �� ����������#������� � �������� "����� � ������)���� ������ ������� ���� ��������� �������� �� �� 7?� .AA;.A0�

+�"���� �� � �� �H����� (� �./00 !�� ������ ������������� �� ���#���� �������� "����� ��� �� � ��� ���� �� �� ���"� �#"�� � =4,�&#����������������� �5������������ �������� �� ��3A� �.0;��?�

����$)�� 4� � C���� �� N� �� �./?@ ������� � � ������� ����� �� �� "� ��������� ���� �H��� ���������� 4 �� (���� A?�.?�3�

��������� &�� ,������ %�� � &J����� � 4� �./03 O���� � � �#���� �� ���� ���� � ����� �� ��� � (�� ��)� � ���� ��#���� � �� ����� ������ ���� � ������ ��� �������� �� �� ?/� �?7;�3��

���"�� :� �./73 ����������� ������� � ���������� ������� � � ��� ������ N� 9������� @@� .@3;.3A�

�������� %� �.//0 &�� ������ �� ��� ������ � �� �������#�����#�� �� �)�X 4�� ��������� 7�� .?�A;.?�?�

����� �� 2�� -� �)� -�� � (����� 9�� -���)� C�� 4��� :�� � 4������ ��C� 4� �.//0 ������� ������� ���� � �������� � � "��� ��+4 ���+9 ������� ��� �������� "��� � ��������� ����������#�������#�?77 �� ��� ��. ����������� �� ��� �� �� � (���.�� �0A;�/?�

�� �"���� N�� ����� � 9�� %I ����� 9�� � ��)���� � 4� �./// ���#��� "� �� � �� ������� � ���) � ��� ���� ���� � � ; ������� "����� ������������� � � ��� �� ��������!�5������� .A3� .?/;.0@�

���$�� 6 �)�� �� �� � �� � N� +� �.//7 �������5����� � �����#���� �� ������� � ��"��� ��"8����� �� ������� � �5������������ � ���� � !�5����� (���� .@� ?.;?3�

!"�� �� �.//7 :� ���� ����� �� ��� �����#����� � ���������� � ������������ ������� � N� ���� %�H���� ?7;??� ��.;��0�

!�)��� C� +� � C��������� O� !� �.//A (�� � �� ��������$��� ������ ������� � ����������������� �������� ���� ���� �������� �� ����� 9������� N� �/?� ��7;�A��

1����� 9� %� � 2����� ,� ,� �./3� 9��������� ������� �� �������������� � ���� 4 � +��� 9������� @.� /.;.�0�

1 9������� 4� (�� C��������� O� !�� � 1 C�� ������ +� �./0@ !������� ������ � ��� ������������ �� ������������������� ������ "� ����� � ��������� �� �������� ��� �����#����� �����"���� A/� .�.;.�?�

O�)������ � 9�� � ����� ��� R�� �� %� 9�� 9I���� 9�� +�"���� ��� ��� �H����� (� �.//A !�� ������ �� �����#�� )� � �� ��� ��"� ��� ��=4,�&>����������������� �5����������� � ��� �������� ����� �� ������������������ ������� ������ �/� ��7;�.0�

O�)������ � 9� ��� +�"���� ��� C����� ��� � �� �H����� (� �.//� F��#�������� ������ � �� ���� �#����� �����5�� ����"���$�� ���� � #�������� � �������� �������� "������ �������� �� ��07� ?7/;??/�

R���� +� :� � 9������ ,� O� �.//? =������5����� �� � ��� ��������� ��#��� ������� ���� %#������ �� !�5������� .�/� .7;�/�

9� 9I���

,����� � �� �� � 4 �����I��I� 2 ���������U$�U � �� �Y�U � .G(9����� &#...3&� ���

�#���> ""�����Z���� ���������

C���� ������> -� %�����

'$$ -� �$ *+�6 �� 7&"%*1%����-,����#,���� 28��� ��-��� %���� ����+� 9 :�44�; "&/

%���� ����+� 9 :�44�;"&$