coleccion de semen

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ASOCIACIÓN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA INTERNADO DE ANIMALES MAYORES Y MENORES BANCO DE SEMEN COLECCIÓN, EVOLUCIÓN Y PROCESAMIENTO DEL SEMEN DE TOROS” NOMBRE: JUAN MANUEL APELLIDO: MORALES VILCA CICLO: X Página 1

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ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

INTERNADO DE ANIMALES MAYORES Y MENORESBANCO DE SEMEN COLECCIN, EVOLUCIN Y PROCESAMIENTO DELSEMEN DE TOROS

NOMBRE: JUAN MANUEL

APELLIDO: MORALES VILCA

CICLO: X

2013

DEDICADO A DIOS Y A TODO LOS SERES QUERIDOS

A mis padres Carlos David morales loza y Maria Venedicta Vilca Cardenas; gracias por su apoyo Y comprensin, por todos los sacrificios que Han realizado a lo largo de mi vida para Ayudarme a tratar de ser una mejor persona Cada dia; y por el simple y sencillo hecho de Ser mis padres.

NDICE:

I. Introduccin Pg. 4, 5

II. Factores que afectan la calidad seminal Pag. 6, 7, 8

III. Coleccin Pag. 9, 10, 11

IV. Evaluacin del semen Pag. 12, 13, 14, 15

V. Procesamiento del semen Pag. 16, 17, 18, 19

VI. Agentes crioprotectores y efectos de la congelacin sobre las clulas espermticas Pag. 20, 21

VII. Descongelacin Pag. 22

VIII. Recomendaciones Pag. 23

IX. Anexos Pag. 24, 25

X. Resumen Pag. 26

XI. conclusiones Pag. 27, 28

XII. Bibliografa Pag. 29, 30

I. INTRODUCCION:La calidad seminal puede cambiar significativamente dependiendo de si un toro est pasando por, o recuperndose, de un proceso que afecta la espermatognesis. El espermograma deber interpretarse teniendo en cuenta el examen fsico y la historia del toro. Teniendo en cuenta que en una poblacin coexisten individuos frtiles, infrtiles, subfrtiles y estriles, quienes han incorporado el anlisis de semen a la evaluacin de los toros, lo hacen con el objetivo de seleccionar para la reproduccin nicamente animales frtiles. Los toros segn su calidad seminal en satisfactorios, cuestionables e insatisfactorios. Considera satisfactorios a aquellos que tienen un mnimo de 60% de espermatozoides con motilidad progresiva y un 70% de ellos, con morfologa normal. La reproduccin juega un papel preponderante. Machos y hembras deben tener caractersticas fenotpicas y genotpicas deseables, y adems producir descendencia, proceso en el cual el macho tiene un gran impacto, bien sea utilizado en monta directa o inseminacin artificial.Dado que un solo macho se aparea con muchas vacas, de su calidad seminal depende que las vacas preen y por consiguiente sea ptima la reproduccin del hato.

Este particular detalle hace que sea una necesidad la valoracin de la calidad seminal en donde no solo se analiza, la concentracin espermtica, la motilidad, el volumen seminal, aspecto, color, Ph, sino que adems sirve para evaluar la forma de los espermatozoides y establecer el porcentaje de espermatozoides vivos y muertos, mediante las tcnicas de tincin tambin llamadas de morfologa espermtica.Para que se produzcan espermatozoides frtiles, los toros deben contar con una temperatura testicular de 2 a 6 grados centgrados menor que la temperatura corporal central y presentar en promedio temperatura de 35. 5, 34.6, 33.1 grados centgrados respectivamente en la cabeza, cuerpo y cola del epiddimo.Los criadores frecuentemente solicitan evaluaciones reproductivas rutinarias de sus machos (examen androlgico) para confirmar su fertilidad antes de una compra de una venta, para controlar su produccin espermtica diaria (PED) especialmente en reproductores de alto costo, para valorar el potencial reproductor como donante desemenpara inseminacin artificial (IA) con semen congelado refrigerado, para una orientacin en problemas de infertilidad aparente y/o anormalidades testiculares.

Tales evaluaciones reproductivas dependen de que se logre recolectar el semen apropiadamente y sobretodo de una precisa valoracin del mismo.

La falta de xito reproductivo frecuentemente se debe a ms de un factor. Por lo tanto una evaluacin de aptitud reproductiva (EAR), incluir una prueba de libido o de capacidad de servicio, un examen de los genitales externos, una medicin testicular, una palpacin testicular y de los genitales internos, una evaluacin seminal, as como ecografa de test-culos y vesculas seminales y prstata en algunos casos. Las pruebas para determinar enfermedades de transmisin sexual, especialmente brucelosis, Paratuberculosis, IBR, etc., son parte crucial de la EAR.

II. FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD SEMINALLA TEMPERATURAEs uno de los factores ambientales ms importantes que modifican la espermatogenesis. La temperatura corporal puede verse afectada por periodos de temperatura ambiental alta al igual que extremadamente bajas o por cuadros de pirexia ocasionado por enfermedades y/o heridas.Argumenta que el mecanismo de dao por temperatura, es la hipoxia testicular, esto se debe a que los testculos operan normalmente en un punto muy cercano a la hipoxia y al ser activados los mecanismos de prdida de calor, hay vaso dilatacin y aumento de la actividad metablica con una necesidad directa de incrementar el oxigeno, este incremento de oxigeno es una tasa mayor que la del flujo sanguneo por tanto los testculos se tornan hipoxicosEl calentamiento de los testculos provoca que los espermatocitos en la fase meiotica sean destruidos y se den alteraciones en la transformacin de espermatozoides a espermatozoides, principalmente cambios en la condensacin de la cromatina nuclear, formacin de la cola y desarrollo del casquete acrosmico de los espermatozoides. Al igual se ve afectado el epiddimo y sus funciones normales absorbentes y secretoras que ocasionan cambios en la composicin de los fluidos, e incrementan la tasa de paso espermtico que conlleva a una prematura maduracin espermtica.EL ESTRSAn cuando se tienen diferentes interpretaciones de estrs lo define como aquel estado generado por toda situacin interna o externa que perturbe el equilibrio fsico y an social del animal, creando tensin y tendiendo a colocar los mecanismos de defensas del mismo en un estado de alerta y actividad que le permitan responder ante situaciones adversas.El organismo responde, mediante la produccin excesiva de cortisol por parte de las glndulas adrenales lo cual reduce la produccin de LH. Por la pituitaria. Lo que conduce a una disminucin en la produccin de testosterona por las clulas de Leydig,El estrs prolongado provoca cuadros de degeneracin testicular, que pueden variar de ligera hasta aplasia completa del epitelio seminfero, segn la intensidad y el tiempo de accin del estmulo. Se provoca un aumento de espermatozoides con anormalidades de cabeza, periforme, alongadas y estrechas. En casos severos podra provocar una azoospermia.

LOS FACTORES NUTRICIONALESLa nutricin, tiene mayor impacto sobre las funciones endocrineas mas que las espermatognicas. Debido a que el estrs nutricional provoca retardo en el crecimiento de los testculos y supresin de la actividad endocrnea lo que conduce a tener un mayor impacto en animales jvenes en crecimiento ya que retarda la pubertad y deprime la produccin y caractersticas del semen.Los factores nutricionales mas comunes que afectan la calidad seminal incluyen la obesidad y sobrealimentacin, las diferencias calricos (raciones bajas en energa disminuyen la libido y la produccin de testosterona), protenicas (especialmente en machos jvenes), vitaminas y de minerales (deficiencias de yodo, cobre, cobalto, zinc y magnesio afectan la produccin de semen y la fertilidad, igualmente es causa de baja de libido) y agentes txicos (los estrgenos vegetales, adems las tierras raras y radiaciones ionizantes.Las dietas ricas en energa permiten a animales jvenes de 12 meses una circunferencia escrotal mayor, pero por el contrario en animales mayores se ve transformado en grasa lo que conlleva a una mala termorregulacin de los testculos. Adems de anormalidades de aplomos y conformacin que conducen a Laminitis y posibles epifitis. Las dietas ricas en energa, constituyen una de las causales de ruminitis y abscesos de hgado que conducen a vesiculitis y epididimitis.EFECTO DE LA EDADLa produccin de espermatozoides est asociada en forma directa con la pubertad. Sostiene que la edad de pubertad depende de variaciones propias que hay entre las razas de leche y carne. As se explica en general que las razas de tamao adulto grande con altas ganancias de peso que las razas de tamao adulto menor que poseen menores ganancias. Y que las razas histricamente seleccionadas por su produccin de leche, tiene un comienzo de la pubertad ms temprano y un mayor desarrollo testicular a menor edad y madurez que las razas que producen poca cantidad de leche. Adems, para el caso de razas de doble msculo poseen un comienzo de la pubertad ms lento y poseen un tamao testicular ms pequeo a la pubertad y a la madurez.

GENES RECESIVOSLas razas bovinas al igual que cualquier especie tienen caracteres deseables e indeseables y en sus cromosomas hay genes recesivos indeseables, algunos letales altamente deletreos que se encuentran en forma heterocigtica y que tienen mayor oportunidad de manifestarse en los casos de consanguinidad.Defectos hereditarios el sndrome de cabeza plegada, cresta nuclear, cabezas gigantes, debilidad de la membrana, mitocondrias y separacin de la membrana mitocondrial, estas ltimas que ocasionan casos de espermatozoides decapitados, con defectos de pieza distal doblada y defecto dag. Los cuales fueron diagnosticados en animales Holstein, Jersey y Herefort.MALFORMACIONES CONGNITASLa produccin y fertilidad de los espermatozoides, se ve afectada por malformaciones congnitas que van desde la ausencia del espitelio semifero y segmentos de los conductos wolffanes hasta el criptorquidio y testculos ectpicos, entre otros.Hay malformaciones congnitas que conllevan a inhabilidades copulativas, como es el caso de la espondilosis lumbar, garrones dbiles, msculo retractor del pene corto o pene corto, frenulos peneanos, desviacin espiral del pene, etc.

III. COLECCIN:COLECCIN DE SEMENExisten diferentes mtodos para la recoleccin de semen en los bovinos, entre los cuales tenemos:1) La vagina artificial.2) Electro eyaculacin.3) Masajes de las glndulas genitales accesorias.Coleccin de semen con electro eyaculadorEl electro eyaculador es un aparato elctrico que provee una estimacin rectal que desencadena la ereccin y eyaculacin. Est formado esencialmente por: transformador, restato electrodo bipolar, voltmetro. Su manejo consiste en aumentar gradualmente el voltaje desde cero hasta 10-15 voltios, con incrementos de 2 voltios e intervalos de 5-10 segundos, volviendo a cero.El electro eyaculador permite extraer semen a todos los toros sin previo acostumbramiento especialmente en animales indmitos, con libido pobre o ausente, con afecciones de los miembros posteriores que le impiden cubrir la hembra o en el caso de examen de infertilidad de varios animales.Coleccin de semen por medio de masaje transrectalPara realizar la tcnica de masaje, el operador debe introducir su mano en el recto y luego de la exanimacin de la glndulas accesorias y los anillos inguinales, se aplica un masaje longitudinal de atrs hacia adelante sobre las amputas, la prstata y la uretra. Cuando el msculo de la uretra comience las contracciones, el operador debe tratar de masajear en sincrona con ellas y continuar el masaje hasta producirse la eyaculacin.El masaje transrectal, es una tcnica agotadora para la persona que realiza el masaje; que adems incluye irritacin de la mucosa rectal por la excesiva frotacin manual y una falta de prolusin del pene.

Coleccin de semen con vagina artificial (VA)La vagina artificial es una construccin simple y simula la copula natural. La unidad proporciona temperatura adecuada, presin y friccin que favorece la eyaculacin y se adosa a un tubo calibrado para la colecta de semen. La recoleccin de semen con vagina artificial, permite que el volumen eyaculado sea igual al obtenido por monta natural. Adems de permitir una adecuada excitacin sexual del macho, lo que permite obtener semen de buen volumen y alta concentracin espermtica. Con intervalos cortos de 10-15 minutos se pueden obtener hasta 4 eyaculados.El ms comnmente utilizado es la vagina artificial, por cuanto ofrece al macho, condiciones parecidas a la vagina de la hembra.Descripcin de la vagina artificialCuerpo de la vagina: consiste en un tubo cilndrico, provisto de una vlvula y una tapa, generalmente de caucho resistente, tienen 40 a 50 centmetros de largo y 7 a 10 centmetros de dimetro.Funda interna:goma elstica o de ltex que se ubica en el interior del tubo cilndrico y representa las paredes de la vagina, sus extremos se doblan sobre la parte externa del tubo y se fija con bandas de caucho.Cono de ltex:se fija en uno de los extremos de la vagina cerca de la vlvula para el agua.Tuvo colector de semen:se coloca en el otro extremo del cono; este tubo est protegido por una cubierta protectora, que generalmente es una jeringa plstica, cuya finalidad es proteger el semen de la luz y de los cambios de temperatura. (Fig. 1)

Recoleccin de SemenPor una vlvula ubicada en la vagina artificial se introduce agua a una temperatura de 50 a 60 grados centgrados, hasta llenar los dos tercios de su capacidad totalEn el momento de recoger el semen, la temperatura ptima en el interior de la vagina debe ser de 38 a 39C. Sin embargo, existen toros que exigen una mayor temperatura para eyacular.Luego se procede a la toma del eyaculado, sujetando una hembra en celo u otro macho o un maniqu. El tcnico encargado de la recoleccin se coloca a la derecha del toro y mantiene la vagina artificial en la mano derecha, con la abertura dirigida hacia el pene, mientras que con la mano izquierda colocada sobre el prepucio lo dirige hacia la abertura de la vagina.Debe evitarse tocar directamente el pene, ya que la ereccin puede ser inhibida y el toro negarse a montar. Es recomendable practicar la falsa monta, con la finalidad de que el toro alcance el mximo grado de ereccin y de esta manera obtener un semen de buena calidad. Luego de practicar la falsa monta, se procede a efectuar la recoleccin, mediante la introduccin del pene en la vagina artificial hasta lograr la eyaculacin; despus el operador retira la vagina artificial y el eyaculado o semen se deposita en el tubo colector.

IV. EVALUACIN DEL SEMEN:Una vez realizada la recoleccin del eyaculado, debe conservarse en un recipiente con agua a 37C para evitar los cambios de temperatura que afectan su calidad.La evaluacin del semen se divide en dos partes:1) Examen macroscpicoVolumen:vara desde uno hasta ocho centmetros cbicos. La mayora de los toros proporcionan de 3 a 6 cc.La calidad del semen vara segn las especies, el estado fisiolgico, individuo, raza, edad, tamao, nmero de saltos, mtodos de recoleccin, factores alimentarios, sanitarios y medio ambientales. La eyaculacin media es de 4 a 6 centmetros cbicos y vara entre 1-12 cm3; los toros jvenes pueden suministrar de 1 a 3 centmetros cbicos de semen, mientras que los adultos pueden eyacular de 10 a 15 cm3.Color:depende de la cantidad de espermatozoides; cuando el semen es de buena calidad, presenta una coloracin blanco lechosa o cremosa y cuando es de baja calidad su color es similar a leche aguada.Posee una coloracin blanquecina o ligeramente amarillenta y su opacidad se halla en funcin de la concentracin espermtica. Los eyaculados muy buenos tienen apariencia granulosa con una concentracin de 750 a 1.000 millones o ms de espermatozoides por mililitro Buenos, semen opaco, lechoso con 400 a 750 millones de espermatozoides por ml. Regular, semen con leche aguada con 250 a 400 millones de espermatozoides por ml. Malo, semen translcido y acuoso con menos de 250 millones de espermatozoides por ml.

Olor:el semen en buenas condiciones presenta un olor similar a la leche fresca. El olor a orina nos indica que el semen est contaminado con sta. Cuando el olor es muy desagradable, se sospecha alguna enfermedad en los testculos o en otra parte del aparato reproductivo.Aspecto:depende de la concentracin de espermatozoides y se mide por el mayor o menor grado de opacidad que presenta la muestra de semen.El eyaculado como tal, es un lquido denso, cremoso, ligeramente amarillento, que contiene una suspensin de espermatozoides en un medio llamado plasma seminal.pH:se determina mediante el empleo de una cinta colorimtrica, su valor vara entre 6,4 a 6,9; valores por encima de 6,9 son indicativos de semen de baja calidad.2) Examen microscpicoMortalidad masal:Es el resultado de la concentracin espermtica, el porcentaje de clulas con movimiento progresivo y velocidad de movimiento de los espermatozoides. Lo cual provoca movimientos de flujo y la existencia de verdaderas olas de zoospermios, que al estas disminuidos o en baja concentracin provocan disminucin. La observacin se hace sobre una gota de semen de 5 a 10 mm de dimetro, colocada sobre un porta objetos tibio y sin cubre objetos. La observacin se realiza, con semen sin diluir y bajo un campo luminoso y con un aumento de 40-125 x observando varios campos microscpicos. (Tabla. 1)Luego se observa al microscopio con pequeo aumento. En toda la gota de semen se observa la presencia de ondas y remolinos y ste se puede clasificar atendiendo a las caractersticas de las ondas en: Semen muy bueno: presenta ondas oscuras marcadas en rpido movimiento. Semen bueno: se observan ondas menos oscuras que el anterior, marcadas con movimiento moderado. Semen regular: presenta ondas claras con movimiento muy ligero. Semen malo: no hay ondas, se observan los espermatozoides inmviles.

Motilidad individual:Es el resultado de la evaluacin del movimiento progresivo de los espermatozoides y de los cambios en su motilidad. Este seguimiento se hace en una superficie de 1 mm2 y una altura de 0.1 mm., lo cual se consigue al colocar en un porta objetos perfectamente limpio y tibio una gota de 3 a 4 mm de semen diluido y colocando una laminilla encima.Igualmente, la motilidad progresiva, debe ser observada en un aumento de 200 x - 500 x, preferentemente bajo contraste de fase, y los resultados se expresan en porcentaje o en una escala de 1 a 5. La clasificacin se muestra bajo parmetros que se muestran en la (Tabla 2.)Debe evaluarse colocando sobre el portaobjetos una gota de semen diluido con suero fisiolgico o citrato de sodio. Luego se coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio con mayor aumento. De acuerdo al movimiento individual, el semen se clasifica de la siguiente manera: Semen muy bueno:igual o mayor de 70% de motilidad individual. Semen bueno:50-69% de motilidad individual. Semen regular:30-49% de motilidad individual. Semen malo:menor de 29% de motilidad individual.Morfologa:se determina mediante la observacin al microscopio de un frotis de semen coloreado con tinciones especiales; generalmente, se utiliza la tinta china. Las anormalidades observadas se clasifican en primarias y secundarias. Para las primeras se aceptan un valor entre 2 a 5% y para las segundas un valor de 10 a 14%La morfologa espermtica es un factor determinante en la capacidad de fertilizacin del semen, ya que existe una correlacin entre defectos espermticos e infertilidad.Los espermatozoides son traslucidos y virtualmente invisibles al microscopio de luz directa. Se requiere el uso de colorantes que provean de un fondo oscuro para visualizarlos. Lo ms recomendable es la tcnica en un solo paso, (en donde se mezcla el colorante con el espermatozoide sobre el porta objetos), porque todo lo que se encuentra en el semen puede ser observado, Alguna de estas funciones son cosa de bengala, tinta china, la tincin de eosina - nigrosina o llamada vital. (Vivos - muertos).

La coloracin vital (eosina, azul de anilina, o eosina - nigrosina) es la ms comnmente usada en la examinacin morfolgica de esperma, el azul de anilina y nigrosina proveen un fondo oscuro, sobre el cual resaltan los espermatozoides, la eosina por su pare tie las clulas, penetrando la membrana de las clulas daadas, tiendo las lesiones y espermatozoides no viables o muertas de rosa.Para la preparacin del extendido se coloca una gota de 5 - 6 mm de dimetro de tincin eosina nigrosina en un extremo de porta objetos tibio, y seguido se coloca una gotica de semen de 3 a 5 mm de dimetro cerca de la tintura, luego de haber mezclado la tintura con el semen, y dejar actuar un minuto, la mezcla es extendida de un lado hasta el otro con otro portaobjetos tibio, formando una pelcula delgada en la cual despus de seca se puede hacer la evaluacin con un objeto de inmersin de aceite a 1000 - 1250 aumentos. Aumentos menores no revelan la mayora de los defectos que existen. Cuando hay pocas anormalidades es suficiente contar 100 espermatozoides y cuando encontramos gran cantidad de anormalidades es recomendado contar 300 o ms. Concentracin:el nmero de espermatozoides por mm3 se determina diluyendo 0,1 cc de semen en 7.9 cc de citrato de sodio. Luego con la ayuda de un aparato denominado Spectronic, se obtiene una lectura que se compara con una tabla para obtener la concentracin de espermatozoides. Generalmente, la concentracin vara de 1000000 a 1200000 espermatozoides/mm3Para la determinacin se usan mtodos tales como: cmara de Newbauer, la nefelometra, la espermio-densi-metra y la espectofotometra. Figura 8.Cmara de Newbauer utilizada para determinar el nmero de espermatozoide por ml. El recuento se realiza con cmara de Newbauer contando las cabezas de los espermatozoides (EPZ) y observados en 5 cuadros tomados en diagonal, del cuadro central grande y se aplica la siguiente frmula:EPZ/ml = n x 200 x 10 x 5000Donde, n = Numero de clulas contadas200 = Factor de dilucin en la pipeta10 = Por ser la altura de la cmara de 0.15 000 = Cuadros pequeos contados en mm3

V. PROCESAMIENTO DEL SEMENLos propsitos del procesamiento del semen son los siguientes: aumentar el volumen del eyaculado para inseminar mayor nmero posible de hembras. Proteger los espermatozoides para mantenerlos frtiles el mayor tiempo posible. El procesamiento del semen comprende las siguientes fases: Dilucin: para diluir el semen se utilizan diferentes dilutores, entre los ms conocidos tenemos citrato-yema, fosfato-yema y dilutores a base de leche. A estos dilutores se les agrega antibiticos, con el propsito de frenar el desarrollo de grmenes que pudieran estar presentes en el eyaculado.Para el procesamiento del semen se utiliza el dilutor a base de citrato-yema, en la siguiente proporcin:Citrato de sodio 74 partesYema de huevo 25 partesGlucosa 1 partePenicilina 1000 UI/ccEstreptomicina 500 mg/ccDiluyentes Utilizados para la Congelacin del Semen Bovino Un diluyente seminal debe reunir una serie de propiedades bsicas relacionadas con su pH, capacidad tampn, osmolaridad, y fuerza inica. Adems debe aportar una fuente de energa, no debe deteriorarse durante el almacenamiento previo a su uso, debe proteger a los espermatozoides durante el enfriamiento, congelacin y descongelacin, y finalmente, debe ser resistente al crecimiento bacteriano.Ningn diluyente cumple todos estos requisitos, y adems, cada especie requiere unas condiciones especficas. No obstante, los diluyentes utilizados para la congelacin del semen de la mayora de las especies domsticas, invariablemente incluyen los siguientes ingredientes:

1. agua bidestilada o ultrapura, como disolvente para el resto de los componentes. 2. sustancias inicas y no inicas para mantener la osmolaridad y amortiguar el pH del medio. 3. materiales orgnicos, generalmente yema de huevo o leche, con capacidad para prevenir o atenuar el shock por fro 4. agentes crioprotectores, normalmente el glicerol 5. azcares simples como fuente de energa, o di- y trisacridos como crioprotectores adicionales. 6. antibiticos para controlar el crecimiento bacteriano (Salisbury y col., 1978). 7. y opcionalmente, otros aditivos, como enzimas, detergentes o aminocidos que puedan mejorar la fertilidad

CONSERVACIN A TIEMPO CORTO Conservacin a mas de 4 o 5 C (4 a 5 das) Conservacin a temperatura ambiente (20 C) por 2 o 3 semanas (agua de coco)CONSERVACIN A TIEMPO LARGO. Congelacin en nitrgeno liquido (Congelacin en nitrgeno liquido (-196 C)El grado de dilucin del semen depende de la concentracin espermtica y de la tcnica de conservacin.Conservacin a 5C:cuando el semen se va a mantener a temperatura de 5oC, el grado de dilucin que se realiza es menor, en comparacin con la tcnica de la congelacin. Bajo estas condiciones el semen conserva su poder fecundante por un periodo de cuatro a cinco das.Conservacin mediante congelacin:el grado de dilucin que se realiza es mayor que el anterior y una vez congelado en nitrgeno lquido, el semen se conserva por un tiempo indefinido. Proceso de congelacin en nitrgeno lquido Una vez determinada la concentracin espermtica se procede a determinar la cantidad de dilutar que se puede agregar al semen, en base a la siguiente frmula

N de pajuelas=V x Ml x C(ml)

N de espermetazoide/pajuelas

Donde:V = volumen del semen en mLMI = motilidad individual en porcentajeC = concentracin espermtica expresada en mlDespus de determinar el nmero de pajuelas se procede a calcular el volumen del dilutor de la siguiente manera:Volumen dilutor = NP x 0,5 - V

Donde:NP = nmero de pajuelas0,5 = corresponde al volumen de las pajuelas medianasV = volumen del semen en mlEl dilutor a base de citrato-yema, se divide en dos fracciones: la fraccin A que no contiene glicerol y la fraccin B a la cual se le agrega glicerol en la proporcin del 14%.Seguido de la recoleccin del semen y despus de calcular el volumen del dilutor, se agrega la fraccin A para conservarlo. El semen diluido en la fraccin A, se lleva hasta una temperatura de 5oC. Una vez que alcanza esta temperatura se le agrega la fraccin B.Luego de agregar la fraccin B es necesario esperar un perodo de tiempo de tres a seis horas, que se llama perodo de estabilizacin, antes de empezar a congelar. Con el propsito de ganar tiempo, antes del perodo de estabilizacin, se procede al llenado y sellado de las pajuelas.

El llenado se efecta corrientemente utilizando una bomba de vaco y el sellado de la pajuela se realiza con el polvo sellador a base de polietileno.Despus del llenado y sellado de las pajuelas y una vez que se ha alcanzado el perodo de estabilizacin se procede a la congelacin en nitrgeno lquido. Primeramente se colocan las pajuelas en un termo con vapores de nitrgeno hasta alcanzar la temperatura de 120C en 10 minutos. Este proceso se llama precongelacin.Inmediatamente las pajuelas se introducen directamente en el nitrgeno lquido para alcanzar una temperatura de 196c, este proceso recibe el nombre de congelacin.

VI. AGENTES CRIOPROTECTORES Y EFECTOS DE LA CONGELACIN SOBRE LAS CLULAS ESPERMTICASEventos que ocurren durante la Congelacin y DescongelacinEn el proceso de criopreservacin espermtica, cuando la temperatura desciende por debajo del punto de congelacin del medio extracelular, comienza la formacin de hielo. El agua pura cristaliza dejando a los solutos en mayor concentracin en el agua que permanece en estado lquido. Las membranas celulares impiden la extensin de los cristales de hielo hacia el interior de la clula y por lo tanto el contenido intracelular se encuentra superenfriado, permaneciendo lquido por debajo del punto de congelacin, con lo cual se establece una diferencia en el potencial qumico del agua intra y extracelular, crendose una tendencia a que el agua salga de la clula a favor del gradiente osmtico.A partir de este momento pueden ocurrir dos cosas: si la velocidad de enfriamiento es lo suficientemente lenta, el agua sale de la clula y sta se deshidrata progresivamente. Pero si la velocidad de enfriamiento es demasiado alta, el agua no puede moverse de la clula lo suficientemente rpido y hay un incremento en el grado de superenfriamiento hasta que ocurre la congelacin intracelular para restaurar el equilibrio. La velocidad de enfriamiento ptima vara considerablemente entre tipos celulares desde menos de 1C/min para embriones, hasta 2000-3000C/min para glbulos rojos.

El ptimo puede ser alterado por la presencia de agentes crioprotectores, y adems, la mayora de los tipos celulares no sobreviven a la congelacin en ausencia de algn crioprotector. Para las clulas espermticas, la tasa ptima de enfriamiento oscila entre 10-100C/min. Velocidades ms rpidas o ms lentas resultarn en menor supervivenciaCausas de Muerte Celular por CongelacinA velocidades de enfriamiento superiores a la ptima, la formacin de cristales de hielo intracelulares es el factor letal, mientras que a velocidades ms bajas que la ptima, los efectos solucin son los responsables de la prdida de viabilidad.

No hay discusin en cuanto a la idea de que la muerte celular est asociada con la presencia de gran cantidad de cristales de hielo intracelulares, pero algunos estudios han demostrado que pequeas cantidades de hielo intracelular, no necesariamente son incompatibles con la supervivencia. La cantidad de hielo intracelular y el tamao de los cristales son lo que determina la supervivencia. Las clulas congeladas rpidamente (conteniendo cristales de hielo intracelulares), sobrevivirn slo si son descongeladas rpidamente. El recalentamiento lento da tiempo para la recristalizacin, proceso de crecimiento de los cristales durante la descongelacin, que es perjudicial.

VII. DESCONGELACIN Para alcanzar una ptima supervivencia espermtica se requiere que la velocidad de descongelacin sea acorde con la velocidad de congelacin. Sin embargo, varios estudios llevados a cabo con semen bovino obtuvieron resultados que ponen en entredicho esta teora. La velocidad de congelacin no afectaba a la motilidad o a la integridad acrosmica postdescongelacin.Siempre que el semen se descongelase rpidamente. Observaron que si la congelacin del semen era lenta la supervivencia espermtica era peor, independientemente de la velocidad de descongelacin. Existen gran variedad de estudios en los que se evaluaron diferentes velocidades de descongelacin para el semen bovino. En general, la mayora de los trabajos publicados concluyeron que si la velocidad de descongelacin es rpida se obtiene un mayor porcentaje de espermatozoides mviles y mayor integridad acrosmica. En ausencia de especificaciones concretas para la descongelacin del semen bovino, independientemente del tipo de diluyente utilizado y de la velocidad de congelacin empleada, actualmente se recomienda descongelar las pajuelas a 33-35C durante 30-40 segundos. Sin embargo, algunos estudios demostraron que la descongelacin en un bao de agua a 75C durante 6,5 segundos permita obtener mejores porcentajes de motilidad y de integridad acrosmica postdescongelacin Encontraron que descongelando a 36C-45C obtenan mayores porcentajes de integridad acrosmica.

VIII. RECOMENDACIONES: Los toros son sensibles a cambios espermticos, por lo cual se deben hacer evaluaciones de la calidad seminal antes de ser establecidos en un programa de servicio a campo.

Se debe establecer programas de alimentacin y suplementacin que permita obtener una condicin corporal de 3.5 - 4.0 y cumplir con sus necesidades de minerales (Zn, Cu, Mg, I, P, Se), vitaminas A y E, fundamentales para un buen proceso espermatognico.

Se deben establecer en los programas ganaderos, chequeos peridicos que permitan diagnosticar y tratar procesos inflamatorios, realizar tratamientos de heridas y evaluar libido y capacidad de monta.

En los programas de reposicin de toros, se recomienda para minimizar el efecto de la reubicacin sobre la subsecuente fertilidad: Comprar los toros lo ms cerca posible; Traer toros desde grandes distancias solo si las condiciones son las mejores. (Esto significa la estacin seca temprana, cuando las pasturas son buenas y la actividad de los virus est declinando).

Introducir los toros gradualmente a su nuevo ambiente alimentndolos sobre poca superficie, liberndoles luego a pequeos potreros bajo constante supervisin; Comprar toros de un ao, para que tengan tiempo de adaptarse al ambiente antes de la madurez.Precauciones para mantener una fertilidad del semen pos semen pos-congelacin: El proceso de enfriamiento debe hacerse lentamente para reducir la muerte celular. Se utiliza glicerina que protege durante la congelacin y descongelacin en el proceso de descongelacin mueren del 20 al 50% de los espermatozoides.

Antes de la dilucin el eyaculado debe tener mnimo el 70% de los espermatozoides vivos. Despus de la congelacin los buenos eyaculados contienen del 50 a 65% de los espermatozoides vivos, sin embargo un semen con el 30% de clulas vivas despus de la congelacin tienen capacidad suficiente de fertilizar.

IX. ANEXOS:

Fig. 1. Partes de la vagina artificial

Tabla 1. Escala basada en el porcentaje de clulas mviles

Tabla 2. Escala basada en el porcentaje de clulas mviles

Figura 2. Recuento de espermatozoides utilizando la cmara de Neubauer.

Fig. 3 Planillas de evaluacin de la calidad seminal

X. RESUMEN: Factores que afectan la calidad seminalLa temperatura: Es uno de los factores ambientales ms importantes que modifican la espermatogenesis. La temperatura corporal puede verse afectada por periodos de temperatura ambiental alta al igual que extremadamente bajas o por cuadros de pirexia ocasionado por enfermedades y/o heridas.El estrs: An cuando se tienen diferentes interpretaciones de estrs lo define como aquel estado generado por toda situacin interna o externa que perturbe el equilibrio fsico y an social del animal, creando tensin y tendiendo a colocar los mecanismos de defensas del mismo en un estado de alerta y actividad que le permitan responder ante situaciones adversas.Coleccin de semen: Existen diferentes mtodos para la recoleccin de semen en los bovinos, entre los cuales tenemos:1) La vagina artificial.2) Electro eyaculacin.3) Masajes de las glndulas genitales accesorias.Recoleccin de Semen: Por una vlvula ubicada en la vagina artificial se introduce agua a una temperatura de 50 a 60 grados centgrados, hasta llenar los dos tercios de su capacidad totalEn el momento de recoger el semen, la temperatura ptima en el interior de la vagina debe ser de 38 a 39C. Sin embargo, existen toros que exigen una mayor temperatura para eyacular.

XI. CONCLUSIONES:

Este trabajo permiti observar como la calidad seminal de un toro puede cambiar bastante y rpidamente, dependiendo de si el toro est pasando o recuperndose de un proceso que afecte la espermatogenesis o la espermiogenesis. Al se comprueba importancia de evaluar la calidad seminal antes de ingresar los toros al servicio o para que se eliminen del mismo.

Analizar el semen a travs de las pruebas de laboratorio es muy importante ya que permite evaluar alteraciones de su calidad luego de los procesos de congelacin y descongelacin.

Los toros de alta fertilidad pueden compensar a los de baja fertilidad. Sin embargo, a medida que los sistemas de produccin se intensifican y se utilizan perodos de servicio cortos, con bajas relaciones toro vaca, la inclusin del anlisis de semen en la evaluacin del reproductor puede significar una medida acertada.

La transferencia de semen entre termos de nitrgeno durante un lapso prolongado (ms de 10 segundos) o el almacenamiento en termos con bajos niveles de nitrgeno lquido, puede alterar la viabilidad del mismo.

Los resultados obtenidos permiten conocer si el semen evaluado cumple con las condiciones mnimas para ser utilizado en Inseminacin Artificial.

La evaluacin microbiolgica y el aislamiento de virus en semen permiten determinar la presencia de patgenos especficos o grmenes de contaminacin.

Valores mnimos aceptados para un semen post-descongelacin:

a) 25% de clulas mtiles a velocidad 3.

b) 50% de acrosomas intactos.

c) 70% de espermatozoides normales.

d) 10 millones de clulas mtiles x dosis de semen descongelado.

e) Sin desarrollo de bacterias patgenas especficas y hasta 500 VFC por ml. de bacteria banales.

f) Sin aislamiento viral.

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