guia de validacion ensayos

8/12/2019 Guia de Validacion Ensayos

http://slidepdf.com/reader/full/guia-de-validacion-ensayos 1/51

Requerimientos sobre Validación de Métodosen el marco de la Acreditación de Laboratorios

según la norma ISO 17025

Disertante:

Lic. Pablo ÁlvarezCalidad y Competitividad

INTI-Química

Guías de referencia

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco dela Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025

EURACHEMEURACHEM www.eurachem.orgwww.eurachem.org

The Fitness for Purpose of Analytical Methods - ALaboratory Guide to Method Validation and Related Topics

(1998)

Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement -

Edition (2000)

Guide to Quality in Analytical Chemistry – An Aid to

Accreditation (2002)

IUPACIUPAC

Harmonized Guidelines for Single-LaboratoryValidation of Methods of Analysis - 2002

www.iupac.orgwww.iupac.org

Nomenclature in Evaluation of Analytical Methodsincluding Detection and Quantification Capabilities

(IUPAC Recommendations 1995)

Validation of Analytical Procedures:Text and Methodology – Q2(R1) - 2005

www.ich.orgwww.ich.orgICHICH

¿Qué es validar?

ISO/IEC 17025:2005ISO/IEC 17025:2005

Confirmación, mediante el examen y el aportede evidencias objetivas, de que se cumplen losrequisitos particulares para un uso específico

previsto.

DefiniciDefinicióónn::

¿Qué se puede validar?

Métodos analíticos

Métodos de control de limpieza

Equipos e instalaciones

Procesos

Programas de computación Personal

¿Cómo se valida un método de ensayo?

Estudio colaborativo

“Collaborative study”

Existen dos formas de validar un método de ensayo:

Un solo laboratorio

“In-house validation”“Single-laboratory validation”

validar el método

evaluar el método

ajustar elmétodo

establecer requisitos

¿apto para elpropósito?

Aptitudpara el

propósito

evaluaciónglobal de los

parámetros de

validación

evaluación delos parámetros

en forma

individual

criterios para

cada parámetro

incertidumbre

de medición

Parámetros típicos de validación

Selectividad (Especificidad)

Linealidad Límite de Detección

Límite de Cuantificación

Precisión

Veracidad (Exactitud)

Rango Robustez

Incertidumbre de Medición

Selectividad

DefiniciDefinicióónn

Capacidad de un método para cuantificarexactamente un analito en presencia de

interferencias

IUPACIUPAC

Selectividad

Una interferencia es aquella especie química que causaun error sistemático en la determinación de un analito.

Se pueden dar dos casos:

la presencia de interferencias que puedan dar unarespuesta analítica que no se diferencie de la

respuesta del analito. la presencia de interferencias que afecten la señal del

analito (“efecto matriz”)

¿¿QuQuéé es una interferencia?es una interferencia?

Selectividad

¿¿CCóómo se evalmo se evalúúa?a?

• Un blanco de reactivos

• Una matriz natural o sintética libre de analito

• Analito en un solvente adecuado

• La misma matriz con el agregado de una cantidadconocida de analito o una muestra real

• Potenciales interferencias en presencia de analito

Análisis simultáneo de:

Linealidad

Capacidad de un método analítico deproducir resultados que sean directamente,o por medio de una transformación

matemática definida, proporcionales a laconcentración de analito en la muestra.

ICHICH

Linealidad

RecomendacionesRecomendaciones

• Cantidad de puntos: 6 concentraciones

• Igualmente espaciados

• Cantidad de replicados por concentración: 3

• Replicados independientes

• Usando analito puro o analito en matriz

• Medidos aleatoriamente

Linealidad

Evaluación visual

Evaluación estadística (cuadrados mínimos) Gráfico de los residuos

Coeficiente de correlación (R)

Ordenada al origen y pendiente

EvaluaciEvaluacióónn

Linealidad

A partir de la información obtenida en la evaluación de lalinealidad, se determinará la estrategia a utilizar en el

método de rutina. Puede ser que sólo sea necesariocalibrar con un punto o tal vez con dos puntos. En otroscasos será necesario calibrar con varios puntos.

Es importante tener en cuenta que los siguientesparámetros de validación, en particular la precisión y laveracidad, sean evaluados utilizando la estrategia decalibración que se usará en el procedimiento elegido.

EvaluaciEvaluaci

R i i t b V lid ió d Mét d l d

Límites de Detección y de Cuantificación

LD:Menor concentración de analito en una muestra

de ensayo que puede ser confiablementedistinguida del blanco.

EURACHEMEURACHEM

DefinicionesDefiniciones

LQ:Menor concentración de analito en una muestra quepuede ser determinada con un aceptable nivel deincertidumbre.

R i i t b V lid ió d Mét d l d

LD = 3 . s

MMéétodos de determinacitodos de determinacióónn

s = desviación estándar de un blanco o deuna muestra fortificada a baja concentración

LQ = 10 . s

Si bien existen diferentes metodologías para calcular loslímites de detección y cuantificación, la más utilizada es lasiguiente:

Req erimientos sobre Validación de Métodos en el marco de

IMPORTANTEIMPORTANTE

Cuando sea necesario establecer la posiblepresencia o ausencia de un componente en unamuestra, el resultado del ensayo nunca deberácontrastarse con el límite de detección (LD).

En este caso, el parámetro indicado es el llamadoLím ite o Nivel c rítico (L

Además, se recomienda informar “no detectado”y evitar hacer declaraciones como “ausente”,“ausencia” o “no contiene”.

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco de

Errores aleatorios y sistemáticos

DefinicionesDefiniciones (VIM 2008)(VIM 2008)

error de medic ión: diferencia entre el resultado deuna medición y un valor de referencia.

error aleator io: componente del error de mediciónque, en mediciones repetidas, varía de formaimpredecible.

erro r s is temático : componente del error de mediciónque, en mediciones repetidas, permanece constanteo varía de forma predecible.

x xverdaderodel mesurando

error sistemático

(bias)

aleatorio

error de la

medición x i

Error Error dede medicimedicióónn

errores aleatorios

Precisión

“Precision”

errores sistemáticos

Veracidad

“Trueness”

Exactitud

“Accuracy”

• •

• •••

••••

• • •

• •

error aleatorio

e r r o r s i s t e m á t i c o

requisito 1

requisito 2

c t i t u

precisión

v e r a c i d a d

Precisión

Grado de concordancia entre resultadosobtenidos en mediciones repetidas de un mismo

objeto o de objetos similares, bajo condicionesespecificadas

VIM 2008VIM 2008

Precisión

Diferentes condicionesDiferentes condiciones

Repetibilidad

Precisión intermedia

Reproducibilidad

Precisión

EvaluaciEvaluacióónn

La precisión de un método de ensayo se expresacuantitativamente como “imprecisión” a través delcálculo de la desviación estándar de una serie de

resultados (s).En una validación es conveniente evaluar laprecisión tanto en condiciones de repetibilidad

como de precisión intermedia.Si el rango del método es amplio deberá evaluarsela precisión para distintos valores dentro del rango.

Veracidad (trueness)

qla Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025

Grado de concordancia entre el promedio de unnúmero infinito de resultados y un valor de

referencia.

VIM 2008VIM 2008

Diferencia

Recuperación

A través de la medición del sesgo (bias), el cual sepuede expresar como:

= valor medio observadoxref

= valor de referencia

= xobs – xref

100x%xobs

Analizar varias veces un material de referenciacertificado (MRC) o una muestra/matriz fortificadadentro del rango del método.

También puede evaluarse la veracidad comparando elmétodo con otro previamente validado o con un métodoprimario.

En cualquier caso conviene llevar a cabo algún testestadístico para evaluar si existen diferenciasestadísticamente significativas.

la Acreditación de Laboratorios según la norma ISO 17025

Intervalo de concentraciones de analitodentro del cual se puede considerar al

método validado

IUPACIUPAC

No hay criterio unificado con respecto alsentido de este parámetro; mientras algunoshacen referencia al rango l ineal , otros hablan

de rango de trabajo , pero lo más importanteen una validación es establecer el rango deconcentraciones de analito en la muestra para

el cual el método está validado.

Robustez

La robustez de un procedimiento analítico es unamedida de su capacidad para mantenerse sincambios ante pequeñas pero deliberadas

variaciones en los parámetros del método, queprovee una indicación de su confiabilidad duranteel uso normal.

ICHICH

Requerimientos sobre Validación de Métodos en el marco del A dit ió d L b t i ú l ISO 17025

Incertidumbre

Parámetro, asociado con el resultado de unamedición, que caracteriza la dispersión de losvalores que podrían ser razonablemente

atribuidos al mesurando.

GUMGUM

Incertidumbre

La incertidumbre puede evaluarse a partir de la

información obtenida en una validación, en particulara partir de la precisión intermedia y de la veracidaddel método. (ver guías Eurachem 2nd ed. - 2000 yEurolab Technical Report Nº1/2007)

www.eurachem.orgwww.eurachem.org www.eurolab.orgwww.eurolab.org

Dependiendo de los criterios establecidospreviamente a la validación, este parámetro puedeservir para establecer el “fitness for purpose” delmétodo analítico.

Requisito normativo

5.4.5.2 Validación de los métodosEl laboratorio debe validar los métodos no normalizados,los métodos que diseña o desarrolla, métodos

normalizados empleados fuera del alcance previsto, asícomo las ampliaciones y modificaciones de los métodosnormalizados, para confirmar que los métodos son aptospara el fin previsto.

ISO/IEC 17025:2005ISO/IEC 17025:2005

Requisitos generales para la competencia de losRequisitos generales para la competencia de loslaboratorios de ensayo y de calibracilaboratorios de ensayo y de calibracióónn

Requisito normativo

5.4.2 Selección de los métodos

... El laboratorio debe confirmar que puede aplicarcorrectamente los métodos normalizados antes deutilizarlos para los ensayos. Si el método normalizado

cambia, se debe repetir la confirmación...verificaciverificacióón deln del

mméétodotodo

ISO/IEC 17025:2005ISO/IEC 17025:2005

Requisitos generales para la competencia de losRequisitos generales para la competencia de loslaboratorios de ensayo y de calibracilaboratorios de ensayo y de calibracióónn

Requisito normativo

¿¿QuQuéé es la verificacies la verificacióón de un mn de un méétodo?todo?

La verificación de un método es el proceso de asegurarque los parámetros de performance del método,previamente establecidos, pueden ser alcanzados por

el laboratorio.

Los parámetros que típicamente se verifican, son laprecisión y la veracidad (t rueness ) del método. En

algunos casos puede ser necesario verificar tambiénalgún otro parámetro, por ejemplo, el límite dedetección o la linealidad.

Requisito normativo

Método

elegido

¿Yavalidado?

verificación

validación

Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)

Habitualmente los organismos de acreditaciónestablecen los requisitos indicados en las normasde referencia y además suelen agregar

requerimientos propios.La Guía para Validación de Métodos de Ensayo(DC-LE-05) del OAA establece los criterios de

dicho organismo con respecto al grado devalidación requerido para los métodos, en funciónde sus características.

GuGuíía para Validacia para Validacióón de Mn de Méétodos de Ensayo del OAAtodos de Ensayo del OAA

La guía establece que la validación es un proceso de tresetapas:

1. establecimiento de los requisitos a cumplir, ya sea para

los parámetros de validación en forma individual oconjunta.

2. determinación de los parámetros de validación.

3. evaluación de los resultados obtenidos para losparámetros validados comparados con los requisitosestablecidos previamente.

Etapas del proceso de validaciEtapas del proceso de validacióónn

La guía también establece el alcance de la validación

dependiendo de las características del método:1. método normal izado , ejecutado tal y como se estableceen el documento.

2. método norm alizado mod ifi cado , en el cual se hayanrealizado cambios que puedan tener repercusión sobre lacalidad de los resultados; por ejemplo cambio en la

metodología de extracción, cambio en la matriz, extensióndel rango, equipamiento nuevo, etc.

3. método in terno , elaborado por el laboratorio o sacado de

la bibliografía pero sin datos de performance del método.

Tipos de mTipos de méétodostodosCriterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)

Criterios del Organismo Argentino de Acreditación (OAA)MMéétodo normalizadotodo normalizadoUn método normalizado, en general, está totalmente validado

y por lo tanto el laboratorio, para demostrar que lo ejecutacorrectamente, sólo deberá veri f icarlo . Esto significa quedeberá demostrar que puede alcanzar la performanceadecuada para ciertos parámetros de validación.

Si bien no se pueden establecer criterios rígidos con respectoa qué parámetros verificar, es habitual que se controlen laprecisión y la veracidad, en particular cuando estos

parámetros están indicados en las normas de referencia.Tambíen se puede confirmar el método a través de laparticipación en ensayos de aptitud y/o la elaboración de

gráficos de control.

métodos publicados por organismos de normalización

internacionales, regionales o nacionales, ej.:ISO, EN, NM, ASTM, BS, DIN, IRAM, etc.

métodos publicados por organizaciones reconocidasen diferentes ámbitos, ej:

AOAC, FIL-IDF, EPA, SMW&W, USP, etc.

MMéétodo normalizadotodo normalizado

En el marco de la acreditación de laboratorios se consideranmétodos “normalizados” a:

MMéétodo normalizado modificadotodo normalizado modificado

Los métodos normalizados que han sido modificados debenser validados de tal forma de evaluar qué incidencia tienenlos cambios realizados sobre los distintos parámetros devalidación.

El laboratorio debe tener la competencia para evaluar quéparámetros deberían revalidarse en función de los cambiosrealizados.

Por ejemplos, cambios en el método de extracción podríanafectar la selectividad por la posible presencia deinterferencias y también podría afectar la veracidad.

MMéétodo normalizado modificadotodo normalizado modificado

Otros ejemplos:

Modificación Posible efecto sobre...

tipo de matriz selectividad, veracidad, LD, LQ

extensión del rango linealidad, precisión

cambio de analista precisión, veracidad

sistema de detección selectividad, linealidad; LD

MMéétodo internotodo interno

Los métodos desarrollados internamente o los métodosobtenidos de bibliografía que no presenten valores deperformance declarados, deberán ser validadoscompletamente.

El grado de validación y los parámetros a evaluardependerán de cada método.

En la tabla siguiente se pueden observar algunosejemplos:

Incertidumbre

Robustez

Veracidad

Precisión

Límite de cuantificación

Límite de detección

Linealidad

Selectividad

Físico-químico

Comp.mayoritario

Análisisde trazas

MétodoCualitativo

depende

Informe de validaciInforme de validacióónn

Un informe de validación, típicamente, debe contener lasiguiente información:

Objetivo y alcance (matrices, concentraciones)

Instrumentación y materiales utilizados Personal involucrado

Protocolo de validación

Resultados y conclusiones Procedimiento de ensayo

Firma del/de los responsable/s de la aprobación

Muchas gracias por su atenciMuchas gracias por su atencióón!n!

guia de validacion ensayos

Documents

validacion procesos

guia para la elaboracion de ensayos de diagnostico

validacion hvac.pdf

guia validacion laboratorios pag 19

1era guia de materiales y ensayos

21 cfr part 211 guia completa validacion de software

guia validacion on-line colegio farmaceutico de … guia...

validacion prodip

guia fda validacion de procesos

guia validacion papers fie

guia validacion aoac 25

validacion :

dt guia tecnica para ensayos clinicos en biosimilares

resultados parcelas de validacion y ensayos colaborativos...

tesis validacion

guia de ensayos de economia y finanzas

guia para resumen y ensayos

validacion hva

guia para validacion de procesos asepticos.doc

guia de validacion colegio