aktivitas penghambatan dan penghancuran biofilm dekokta
TRANSCRIPT
AKTIVITAS PENGHAMBATAN DAN PENGHANCURAN BIOFILM
DEKOKTA DAUN JAMBLANG (Syzygium cumini (L.) Skeels) TERHADAP
Staphylococcus aureus
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Agustina Lilik Endah Permatahati
NIM: 168114108
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
AKTIVITAS PENGHAMBATAN DAN PENGHANCURAN BIOFILM
DEKOKTA DAUN JAMBLANG (Syzygium cumini (L.) Skeels) TERHADAP
Staphylococcus aureus
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Agustina Lilik Endah Permatahati
NIM: 168114108
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“Sebab TUHAN, Dia Sendiri akan berjalan di depanmu, Dia
sendiri akan menyertai engkau, Dia tidak akan membiarkan
engkau dan tidak akan meninggalkan engkau; janganlah takut
dan janganlah patah hati.”
Ulangan 31: 8
Karya ini kupersembahkan kepada : Tuhan Yesus Kristus, dan Bunda Maria.
Bapak, ibu, adik, dan seluruh keluarga besar. Seluruh teman yang selalu memberi
doa, motivasi dan bantuan di kondisi suka maupun duka. Serta almamater tercinta
Universitas Sanata Dharma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................. iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ................................ vi
PRAKATA ........................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ............................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xi
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xii
ABSTRAK ....................................................................................................... xiii
ABSTRACT ....................................................................................................... xiv
PENDAHULUAN ............................................................................................... 1
METODE PENELITIAN ..................................................................................... 4
HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................................... 11
KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................................... 23
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 24
LAMPIRAN ...................................................................................................... 29
BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 58
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR TABEL
Tabel I. Nilai OD Penghambatan Biofilm........................................................ 15
Tabel II. Hasil Analisis Penghambatan Uji Post Hoc Games Howell ................ 16
Tabel III. Persen Penghambatan Biofilm ............................................................ 16
Tabel IV. Nilai OD Penghancuran Biofilm ......................................................... 19
Tabel V. Hasil Analisis Penghancuran Uji Post Hoc Games Howell ................. 20
Tabel VI. Persen Penghancuran Biofilm ............................................................. 20
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. 96-Well Plate Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm ............................ 7
Gambar 2. 96-Well Plate Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm ............................. 9
Gambar 3. Surat Determinasi Tanaman Jamblang .............................................. 29
Gambar 4. Simplisia Daun Jamblang.................................................................. 30
Gambar 5. Serbuk Daun Jamblang ..................................................................... 30
Gambar 6. Penetapan Kadar Air ......................................................................... 31
Gambar 7. Surat Keterangan Analisis Data CE&BU .......................................... 54
Gambar 8. Uji Aktivitas Penghambatan Dekokta Daun Jamblang....................... 55
Gambar 9. Uji Aktivitas Penghancuran Dekokta Daun Jamblang ....................... 56
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil Identifikasi Tanaman Jamblang ........................................ 29
Lampiran 2. Simplisia Daun Jamblang .......................................................... 30
Lampiran 3. Serbuk Daun Jamblang ............................................................. 30
Lampiran 4. Hasil Penetapan Kadar Air ........................................................ 31
Lampiran 5. Hasil Pengukuran OD dan Persen (%) Penghambatan Biofilm .. 31
Lampiran 6. Hasil Pengukuran OD dan Persen (%) Penghancuran Biofilm ... 32
Lampiran 7. Hasil Analisis Statistik Uji Shapiro-Wilk dan Levene’s Test
Penghambatan Biofilm dengan SPSS ........................................ 32
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik One Way ANOVA Penghambatan Biofilm
dengan SPSS ............................................................................. 38
Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Games Howell
Penghambatan Biofilm dengan SPSS ........................................ 38
Lampiran 10. Hasil Analisis Statistik Uji Shapiro-Wilk dan Levene’s Test
Penghancuran Biofilm dengan SPSS ......................................... 43
Lampiran 11. Hasil Analisis Statistik One Way ANOVA Penghancuran Biofilm
dengan SPSS ............................................................................. 48
Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Games Howell
Penghancuran Biofilm dengan SPSS ......................................... 49
Lampiran 13. Surat Keterangan Penggunaan Program IBM SPSS Statistik ..... 54
Lampiran 14. Dokumentasi Uji Aktivitas Penghambatan dan Penghancuran
Biofilm Dekokta Daun Jamblang .............................................. 55
Lampiran 15. Jadwal Kegiatan ........................................................................ 57
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
ABSTRAK
Infeksi nosokomial, infeksi kulit, endokarditis, bakteremia, pneumonia,
dan keracunan makanan merupakan penyakit yang disebabkan oleh bakteri
Staphylococcus aureus. S. aureus adalah patogen yang diketahui dapat
menyebabkan resistensi dengan membentuk biofilm sehingga mengakibatkan
kegagalan terapi antibiotik. Biofilm yang dihasilkan berguna untuk
mempertahankan kelangsungan hidupnya. Jamblang (Syzygium cumini)
merupakan salah satu tumbuhan yang digunakan untuk mengobati berbagai
penyakit. Daun jamblang mengandung senyawa flavonoid, terpenoid, fenol, dan
tanin. Kandungan tanin dan flavonoid diketahui memiliki manfaat sebagai
antibiofilm terhadap S. aureus dengan mekanisme pencegahan pembentukan dan
penghancuran EPS. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas
penghambatan dan penghancuran biofilm dekokta daun jamblang terhadap S.
aureus dengan metode microtiter plate assay pada panjang gelombang 595nm
menggunakan pewarnaan crystal violet 0,1 %.
Penelitian diawali dengan uji induksi pertumbuhan biofilm. Hasilnya
menunjukkan bahwa penambahan glukosa 1% dapat meningkatkan pertumbuhan
biofilm yang terklasifikasi dalam strong-biofilm former. Uji aktivitas
penghambatan dan penghancuran biofilm dekokta daun jamblang menggunakan
konsentrasi 1 - 8%. Uji statistik menggunakan one way ANOVA dengan tingkat
kepercayaan 95% terdapat perbedaan yang signifikan (p=0,000). Hasil tersebut
menunjukkan bahwa dekokta daun jamblang memiliki aktivitas sebagai
penghambat biofilm dengan range penghambatan 71,18 – 74,83 % serta tidak
memiliki aktivitas penghancuran biofilm.
Kata kunci : Staphylococcus aureus, biofilm, penghambatan, penghancuran,
Syzygium cumini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
ABSTRACT
Nosocomial infections, dermatitis, endocarditis, bacteremia, pneumonia,
and food poisoning are diseases caused by the Staphylococcus aureus bacteria. S.
aureus is a known pathogen that can cause resistance by forming biofilms
resulting in the failure of antibiotic therapy. The resulting biofilm is useful for
maintaining its survival. Jamblang (Syzygium cumini) is one of the plants used to
treat various diseases. The jamblang leaves contain flavonoid compounds,
terpenoids, phenols, and tannins. The content of tannins and flavonoids are known
to have the benefits against S.aureus with the prevention mechanism of formation
and destruction of EPS. The research aims to determine the activity of inhibition
and breakdown biofilms by jamblang leaves decocta against S. aureus and percent
(%) inhibition and breakdown of the concentration of the jamblang leaves decocta
againts S. aureus with the method of microtiter plate assay at 595nm wavelength
using crystal violet coloring of 0.1%.
Research begins with biofilm growth induction test. The results showed
that the addition of 1% glucose could increase the growth of the classified
biofilms in the strong-biofilm former. Percent (%) inhibition and breakdown
biofilms by jamblang leaves decocta against S. aureus using concentration of 1 -
8%. The statistical test was conducted using the one way ANOVA with a
confidence level of 95% there is a significant difference (p=0,000). The results
showed that the inhibition biofilm by jamblang leaves decocta has activity as a
biofilms inhibitor with inbitition range of 71,18 – 74,83 % and does not have the
breakdown of biofilms activity.
Keywords: Staphylococcus aureus, biofilm, inhibition, breakdown, Syzygium
cumini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Staphyloccous aureus adalah patogen utama yang menyebabkan berbagai
penyakit seperti infeksi kulit, endokarditis, bakteremia, pneumonia dan keracunan
makanan (Tong et al., 2015) dan juga infeksi nosokomial (Utami dkk., 2019).
Infeksi nosokomial kini menjadi perhatian di seluruh dunia, karena meningkatkan
morbiditas dan mortilitas pasien. Berdasarkan survei yang dilakukan oleh WHO
di 55 rumah sakit pada 14 negara yang mewakili 4 wilayah WHO (Eropa,
Mediterania Timur, Asia Tenggara dan Pasifik Barat) menunjukkan rata-rata 8,7%
pasien di rumah sakit mengalami infeksi nosokomial.
Infeksi nosokomial dapat berupa infeksi kronis yaitu infeksi yang timbul
oleh pemasangan implan dan kateter (Utami dkk., 2019). Selain menyebabkan
infeksi, S. aureus memiliki kemampuan resistensi dengan membentuk biofilm
(Gnanamani et al., 2017). Bakteri pembentuk biofilm menyebabkan kesulitan
untuk diobati karena memiliki ketahanan yang lebih besar terhadap agen
antibakteri akibatnya pengobatan menjadi terbatas sehingga terjadi peningkatan
angka kematian dan peningkatan biaya pengobatan (Purbowati, 2016). Biofilm
tersebut terjadi karena S. aureus membentuk matriks Extracelluler Polymeric
Substance (EPS) (Rabin et al., 2015).
Pembentukan biofilm dimulai ketika sel-sel bakteri menempel pada
permukaan implan atau jaringan inang. Bakteri yang menempel pada permukaan
akan berkembang biak dan merekrut sel-sel dari sekitarnya untuk membentuk dan
berdiferensiasi menjadi struktur biofilm (Chen et al., 2013). Biofilm merupakan
suatu bentuk komunitas mikroorganisme yang menempel pada permukaan untuk
melindungi diri dengan membentuk matriks EPS (Utami dkk., 2019). Biofilm
dapat melindungi bakteri dari pertahanan tubuh inang (Kining dkk., 2016).
S. aureus membentuk biofilm dengan tiga proses yaitu : penempelan,
pematangan dan pelepasan. Dari tahapan pembentukan tersebut dapat dilakukan
penghambatan pembentukan dan penghancuran biofilm. Penghambatan tersebut
dapat dilakukan dengan menghambat pertumbuhan sel S. aureus yang merupakan
awal mula tahapan pembentukan biofilm atau menghambat pembentukan EPS.
Penghancuran biofilm terjadi jika biofilm sudah terbentuk. Penghancuran tersebut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
dilakukan dengan cara merusak matriks yang diproduksi oleh mikroorganisme
atau mendegradasi enzim pada sinyal QS (Algburi et al., 2017).
Salah satu penelitian Raorane et al., (2019) tentang antibiofilm
menyatakan bahwa kandungan metabolit yaitu flavonoid memiliki potensi sebagai
antibiofilm dengan menghambat pembentukan biofilm. Penelitian lain dari
Aviantina, (2019) tentang uji aktivitas penghambatan biofilm ekstrak etanol daun
kirinyu terhadap S. aureus menyatakan bahwa ekstrak etanol daun kirinyu
menunjukkan adanya aktivitas penghambatan biofilm terhadap S. aureus diduga
karena memiliki senyawa flavonoid dan tanin yang ditemukan di dalam ekstrak
etanol daun kirinyu. Adapun penelitian dari Putri, (2019) tentang aktivitas
penghambatan pembentukan biofilm ekstrak etanol pegagan terhadap S. aureus
menyatakan bahwa senyawa fenol yang terkandung dalam ekstrak etanol pegagan
diduga merupakan senyawa yang berpengaruh dalam aktivitas penghambatan
pembentukan biofilm terhadap S. aureus.
Penghambatan pembentukan biofilm dapat terjadi jika Quorum Sensing
(QS) terganggu. Kandungan flavonoid dan tanin dapat mempengaruhi QS. Dari
pengaruh QS tersebut mengakibatkan terhambatnya pembentukan dan
penghancuran matriks EPS (Slobodnikova et al., 2016). Penelitian tentang
pemanfaatan tanaman sebagai agen penghambatan dan penghancuran biofilm di
Indonesia masih sedikit. Oleh karena itu, dibutuhkan tambahan penelitian
pemanfaatan tanaman sebagai agen alternatif tersebut.
Salah satu tumbuhan yang mudah ditemukan di Indonesia adalah jamblang
(Syzygium cumini) yang merupakan tumbuhan asli Asia, Afrika dan Amerika.
Jamblang dimanfaatkan sebagai antioksidan, antiinflamasi, antiulserogenik,
gastroprotektif, dan antibakteri (Silalahi, 2018). Pada penelitian ini dimanfaatkan
daun karena studi terkait pemanfaatan tersebut masih sangat sedikit. Menurut
Pushpahasni et al., (2015) daun jamblang berguna untuk mengobati keputihan,
demam, gastritis, gastropati, sembelit dan menghambat keluarnya darah dalam
tinja. Kandungan daun jamblang menurut Sowjanya et al., (2013) adalah flavonol
glikosida, quersetin, myrisetin, esterase dan tanin.
Ekstrak air daun jamblang yang direbus menunjukkan aktivitas antibakteri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
pada S. aureus menggunakan metode difusi agar dengan zona hambat 17mm.
Semakin besar zona penghambatan maka semakin besar aktivitas antibakteri
(Elfadil et al., 2015). Skrining fitokimia yang dilakukan secara kualitatif dengan
uji tabung pada ekstrak air daun jamblang menggunakan metode sokletasi
menghasilkan kandungan flavonoid, glikosida, fenol, dan terpenoid (Gowri and
Vasantha, 2010). Dekokta merupakan ekstraksi menggunakan pelarut air. Dekokta
memiliki waktu dan suhu yang menungkinkan lebih banyak mengeluarkan
senyawa fenolik (Silva et al., 2019). Secara umum, dekokta menunjukkan
konsentrasi tertinggi dari senyawa fenolik seperti asam fenolik dan flavonoid
(Martins et al., 2015). Metabolit sekunder tanaman seperti flavonoid dan tanin
menunjukkan aktivitas antibakteri dan antibiofilm terhadap S. aureus
(Slobodnikova et al., 2016).
Berdasarkan studi literatur belum ada penelitian tentang aktivitas
penghambatan dan penghancuran biofilm dekokta daun jamblang terhadap S.
aureus, maka penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas penghambatan
dan penghancuran biofilm dekokta daun jamblang terhadap S. aureus dengan
metode microtiter plate assay menggunakan pewarnaan crystal violet 0,1%.
Selain itu, penelitian ini juga untuk mengetahui persen (%) penghambatan dan
penghancuran biofilm dari konsentrasi dekokta daun jamblang terhadap S. aureus.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini: Neraca analitik (Ohaus PA213),
jarum ose, bunsen, vortex (Gallenkamp Spinmix), blue dan yellow tip, mikropipet
(Gilson), microplate flat bottom 96-well (Iwaki), microplate reader (Synergi HTX
Multi-Mode Reader Gen 5), autoclave (ALP Co. Ltd Japan Model KT-40), hot
plate (IKA C-MAG Tipe Hs-7), magnetic stirrer, oven (WTB Binder 7200 Tipe
33053099003100 dan Memmert 30-1060), inkubator (Memmert dan Heraeus Tipe
B.5050), Biology Safety Cabinet (ESCO Model LA2-3A1-E Class II Serial 2016-
95067), nephelometer (BD Phoenix Spec), destilator (M. Topo Tipe MS. E 103),
termometer, stopwatch, ayakan nomor mesh 40, mesin serbuk (Retsch), panci
enamel, syringe filter 0,45 µm (Minisart), syringe 10 cc (Terumo), sendok dan
alat-alat gelas (Pyrex).
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini: serbuk daun jamblang, kultur
bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 (Oxoid), media Nutrien Agar
(Oxoid), media Nutrien Broth (Merck), media Trypticase Soy Broth (BD), glukosa
(Merck), aquades steril, streptomycin sulphate (Phapros), dan crystal violet
(Merck).
Pengumpulan Bahan
Daun jamblang diperoleh dari Lembaga Pendamping Usaha Buruh Tani,
Pandowoharjo, Kabupaten Sleman, Yogyakarta dengan kriteria daun segar,
berwarna hijau, menyirip, permukaan mengkilap, memiliki panjang 7-18 cm dan
lebar 3-8 cm. Pangkal daun membundar, ujung tumpul atau agak melancip dan
tepi daun rata.
Pembuatan Simplisia
Daun segar yang telah memenuhi kriteria tersebut dilakukan pencucian
lalu dioven pada suhu 40oC selama 2-3 hari.
Determinasi Simplisia
Determinasi simplisia menggunakan daun jamblang yang sudah kering di
Laboratorium Sistematik Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada
Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Pembuatan Serbuk
Simplisia kering daun jamblang diserbuk menggunakan mesin serbuk.
Kemudian diayak menggunakan ayakan dengan nomor mesh 40 lalu disimpan
dalam wadah tertutup rapat dan kering serta diberi silica gel.
Penetapan Kadar Air
Menurut Farmakope Herbal Indonesia, Penetapan kadar air dilakukan
dengan metode destilasi toluene (Depkes RI, 2008). Sebanyak 10 gram serbuk
simplisia daun jamblang ditimbang seksama lalu dimasukkan 200 mL toluen p.a
ke dalam labu. Labu dihubungkan dengan tabung penerima dan pendingin. Labu
dipanaskan selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, dilakukan penyulingan
yang diatur kecepatannya kurang lebih 2 tetes per detik hingga sebagian besar air
tersuling, lalu kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes per detik.
Kemudian tabung penerima didinginkan hingga mencapai suhu ruang. Setelah
toluen dan air terpisah sempurna maka volume air dibaca. Penetapan kadar dapat
dihitung menggunakan rumus :
(%) Kadar air =
x 100%
(Handayani dkk., 2016).
Pembuatan Dekokta
Serbuk kering daun jamblang ditimbang sebanyak 10 gram dimasukkan ke
dalam 100 mL pelarut air dan dipanaskan pada suhu 90oC selama 30 menit pada
panci di atas hotplate. Ketika suhu mencapai 90oC maka waktu 30 menit mulai
dihitung. Setelah 30 menit, selagi panas campuran diperas menggunakan kain
flanel hingga diperoleh volume dekokta yaitu 100 mL dan didapatkan konsentrasi
dekokta daun jamblang sebesar 10% (BPOM, 2012). Setelah itu, disaring
menggunakan filter berukuran 0,45µm. Dekokta daun jamblang 10% diambil
sebanyak 4 mL, 3 mL, 2 mL, 1 mL dan 0,5 mL kemudian dimasukkan ke dalam
tiap labu takar 5 mL dan ditambahkan aquades steril hingga batas tanda sehingga
didapatkan konsentrasi 8%, 6%, 4%, 2% dan 1%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
Kultur Bakteri Uji
S. aureus dinokulasikan pada media Nutrien Agar dengan metode streak.
Pada media Nutrien Broth diambil 2-3 ose bakteri kemudian diinokulasikan dan
diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37oC.
Penyiapan Kontrol Negatif
Aquades steril digunakan sebagai kontrol negatif yang merupakan pelarut
dalam pembuatan dekokta daun jamblang.
Penyiapan Kontrol Positif
Serbuk streptomycin sulfate digunakan sebagai kontrol positif yang dibuat
dengan menimbang serbuk sebanyak 5,12 mg lalu dimasukkan ke dalam labu
takar 10 mL sehingga didapatkan larutan stok dengan konsentrasi 5,12 mg/mL
atau setara dengan 512 µg/mL.
Pembuatan Media Biofilm
Trypticase Soy Broth (TSB) digunakan sebagai media biofilm yang
dilarutkan dalam 35 mL aquades dan dipanaskan. Larutan disterilisasi dengan
menggunakan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit kemudian media
ditambahkan glukosa 1%.
Penyiapan Suspensi Bakteri Uji
Kultur bakteri disetarakan dengan 0.5 Mc Farland menggunakan
nephelometer kemudian diencerkan dengan media TSB + glukosa 1%.
Induksi Pertumbuhan Biofilm
Suspensi bakteri uji bersama dengan media TSB + glukosa 1% sebanyak
200 µL diinokulasi ke dalam mikroplat. Mikroplat ditutup dan diinkubasi selama
48 jam pada suhu 37oC.
Klasifisikasi Pembentukan Biofilm
Klasifikasi pembentukan biofilm sebagai berikut : tidak ada produksi
biofilm (0), lemah (+ atau 1), sedang (++ atau 2), dan kuat (+++ atau 3). Hal
tersebut dikategorikan berdasarkan perhitungan dari nilai ODc sebagai berikut:
OD ≤ ODc tidak ada produksi biofilm
ODc <OD ≤ 2 × ODc produksi biofilm yang lemah
2 × ODc <OD ≤ 4 × ODc produksi biofilm sedang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
4 × ODc <OD produksi biofilm yang kuat
(Kirmusaoglu, 2019).
Nilai ODc didapatkan dari OD pada kontrol media TSB saja ditambah
dengan 3 kali standar deviasi dari OD kontrol media TSB tersebut. OD didapatkan
dari kontrol pertumbuhan pada media TSBG (Avdic et al., 2019).
Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm
Media TSBG sebanyak 100 µL yang telah berisi suspensi bakteri uji
diinokulasi bersama 100 µL dekokta daun jamblang dengan konsentrasi 8%, 6%,
4%, 2% dan 1% pada mikroplat. Kontrol pertumbuhan berisi 200 µL media TSBG
+ bakteri. Kontrol negatif berisi 100 µL media TSBG + bakteri dan 100 µL
aquades steril. Kontrol positif berisi 100 µL media TSBG + bakteri dan 100 µL
streptomycin. Kontrol media dengan gula berisi 200 µL media TSBG. Kontrol
media tanpa gula berisi 200 µL media TSB. Kemudian diinkubasi pada suhu 37oC
selama 48 jam. Setelah diinkubasi, mikroplat dicuci sebanyak 3x dengan aquades
steril lalu dibiarkan kering selama 10 menit kemudian dilakukan pewarnaan
dengan menggunakan 125 µL crystal violet 0,1% dan dibiarkan selama 15 menit.
Mikroplat dicuci dengan aquades steril sebanyak 3x. Setelah dicuci, ditambahkan
200 µL etanol 96% ke dalam mikroplat. Mikroplat dishake dengan kecepatan 282
rpm selama 1 menit. Pengukuran dilakukan menggunakan microplate reader pada
panjang gelombang 595nm kemudian dilakukan perhitungan dengan rumus :
% Penghambatan =
x 100%
(Pratiwi et al., 2015).
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A P1 P1 P1 KP KP KP
B P2 P2 P2 KP KP KP
C P3 P3 P3 K- K- K-
D P4 P4 P4 K- K- K-
E P5 P5 P5 K+ K+ K+
F
G KM1 KM1 KM1
H KM2 KM2 KM2
Gambar 1. 96-Well Plate Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm
Keterangan :
P1 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 8 %.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
P2 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 6 %.
P3 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 4 %.
P4 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 2 %.
P5 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 1 %.
KP : Kontrol pertumbuhan.
K- : Kontrol negatif.
K+ : Kontrol positif.
KM1 : Kontrol media dengan gula.
KM2 : Kontrol media tanpa gula.
Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm
Media TSBG sebanyak 200 µL yang telah berisi suspensi bakteri uji
diinokulasi pada mikroplat. Kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam.
Setelah diinkubasi, mikroplat disedot hingga bersih lalu dimasukkan 100 µL
dekokta daun jamblang dengan konsentrasi 8%, 6%, 4%, 2% dan 1% serta 100 µL
media TSBG. Kontrol pertumbuhan berisi 200 µL media TSBG. Kontrol negatif
berisi 100 µL media TSBG dan 100 µL aquades steril. Kontrol positif berisi 100
µL media TSBG dan 100 µL streptomycin. Kontrol media dengan gula berisi 200
µL media TSBG. Kontrol media tanpa gula berisi 200 µL media TSB. Kemudian
diinkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam. Setelah diinkubasi, mikroplat dicuci
sebanyak 3x dengan aquades steril lalu dibiarkan kering selama 10 menit
kemudian dilakukan pewarnaan dengan menggunakan 125 µL crystal violet 0,1%
dan dibiarkan selama 15 menit. Mikroplat dicuci dengan aquades steril sebanyak
3x. Setelah dicuci, ditambahkan 200 µL etanol 96% ke dalam mikroplat.
Mikroplat dishake dengan kecepatan 282 rpm selama 1 menit. Pengukuran
dilakukan menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 595nm
kemudian dilakukan perhitungan dengan rumus :
% Penghancuran =
x 100%
(Pratiwi et al., 2015).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A P1 P1 P1 KP KP KP
B P2 P2 P2 KP KP KP
C P3 P3 P3 K- K- K-
D P4 P4 P4 K- K- K-
E P5 P5 P5 K+ K+ K+
F
G KM1 KM1 KM1
H KM2 KM2 KM2
Gambar 2. 96-Well Plate Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm
Keterangan :
P1 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 8 %.
P2 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 6 %.
P3 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 4 %.
P4 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 2 %.
P5 : Perlakuan dekokta daun jamblang konsentrasi 1 %.
KP : Kontrol pertumbuhan.
K- : Kontrol negatif.
K+ : Kontrol positif.
KM1 : Kontrol media dengan gula.
KM2 : Kontrol media tanpa gula.
Teknis Analisis Data Penelitian
Data yang diperoleh merupakan data kuantitatif berupa nilai absorbansi
atau Optical Density (OD595nm). Data berupa nilai rata-rata OD kontrol
pertumbuhan dan perhitungan ODc kontrol media tanpa gula dibandingkan untuk
mendapatkan klasifikasi pembentukan biofilm. Jika OD ≤ ODc tidak ada produksi
biofilm, ODc <OD ≤ 2 × ODc produksi biofilm yang lemah, 3 × ODc <OD ≤ 4 ×
ODc produksi biofilm sedang dan 4 × ODc <OD produksi biofilm yang kuat.
Kemudian dari nilai rata-rata OD kontrol positif, kontrol negatif dan perlakuan
dari masing-masing konsentrasi dihitung persen (%) penghambatan dan
penghancuran sehingga dapat diketahui kemampuan menghambat dan
menghancurkan biofilm.
Data tersebut dianalisis secara deskriptif. Uji normalitas distribusi data
menggunakan Shapiro-Wilk. Jika p-value > 0,05 maka data terdistribusi normal
dan jika p-value < 0,05 maka data tidak terdistribusi normal. Uji homogenitas data
menggunakan uji Levene’s Test. Jika p-value > 0,05 maka varian data homogen
dan jika p-value < 0,05 maka varian data tidak homogen. Untuk data yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
terdistribusi normal dan homogen menggunakan one way ANOVA dengan tingkat
kepercayaan 95% dilanjutkan dengan uji Post Hoc Bonferroni. Jika terdistribusi
normal dan tidak homogen dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tamhane’s atau Post
Hoc Games Howell pada taraf kepercayaan 95%. Jika tidak terdistribusi normal
atau tidak homogen, data diuji menggunakan Kruskall Wallis dengan uji Post Hoc
Mann-Whitney.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi Simplisia
Berdasarkan hasil determinasi simplisia di Laboratorium Sistematik
Tumbuhan, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
menggunakan daun jamblang kering menunjukkan bahwa tanaman yang
digunakan sudah benar yaitu Syzygium cumini yang di Indonesia dikenal dengan
sebutan jamblang. Kebenarannya dibuktikan dengan surat keterangan dari
Lembaga terkait (Lampiran 1).
Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan untuk mengetahui kandungan air di dalam
serbuk daun jamblang. Berdasarkan hasil penetapan kadar air menggunakan
metode destilasi toluene dari serbuk daun jamblang diperoleh sebesar 3%
(Lampiran 4). Hasil tersebut menunjukkan bahwa kadar air tersebut memenuhi
standar yaitu tidak lebih dari 10% (Depkes RI, 2008). Jika kadar air dalam
simplisia lebih besar dari 10% maka akan memudahkan pertumbuhan jamur dan
mikroba lainnya (Sulistyani, 2018).
Dekokta Daun Jamblang
Daun jambang pada pengujian ini diekstraksi menggunakan pelarut air
dengan metode dekokta. Pada penelitian tentang aktivitas antibiofilm dinyatakan
bahwa tanaman herbal asal Italia memiliki aktivitas antibiofilm menggunakan
metode dekokta (Quave et al., 2008). Selain itu, dekokta dipilih karena memiliki
waktu dan suhu yang memungkinkan lebih banyak mengeluarkan senyawa fenolik
(Silva et al., 2019) seperti asam fenolik dan flavonoid (Martins et al., 2015).
Flavonoid merupakan senyawa fenolik (Manner et al., 2013). Senyawa fenolik
dapat mengganggu produksi EPS yang berperan penting dalam pembentukan
biofilm sehingga senyawa fenolik dapat menghambat atau menghancurkan
biofilm (Wahyudi et al., 2020). Secara umum flavonoid ditemukan efektif sebagai
antibiofilm dan beberapa di antaranya memiliki aktivitas terhadap S. aureus
(Blando et al., 2019). Flavonoid larut dalam air. Flavonoid glikosida adalah
metabolit sekunder yang larut dalam air (Ferreira and Pinho, 2012) dan lebih
tahan panas (Chaaban et al., 2017). Flavonoid terikat dalam bentuk glikosida
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
maka dengan menggunakan pelarut air yang merupakan pelarut yang baik untuk
flavonoid glikosida (Arifin dan Ibrahim, 2018). Flavonoid glikosida meliputi
kuersetin dan rutin. Rutin ditemukan efektif dalam penghambatan biofilm
terhadap S. aureus (Blando et al., 2019). Dalam pengujian ini tidak dilakukan uji
kandungan fitokimia dari dekokta daun jamblang. Namun, skrining fitokimia yang
dilakukan dengan uji tabung pada ekstrak air dari daun jamblang menggunakan
metode sokletasi ditemukan kandungan flavonoid, glikosida, dan fenol (Gowri
and Vasantha, 2010), flavonoid dan tanin (Tripathi et al., 2017), flavonoid dan
fenol (Gopinath et al., 2012).
Pada pengujian ini menggunakan 5 konsentrasi dekokta daun jamblang
yaitu 8%, 6%, 4%, 2% dan 1%. Hal tersebut berdasarkan BPOM, (2012) dekokta
memiliki konsentrasi maksimal sebesar 10% sehingga uji aktivitas penghambatan
dan penghancuran biofilm dekokta daun jamblang menggunakan konsentrasi di
bawah konsentrasi maksimal dekokta tersebut.
Kontrol Negatif, Kontrol Positif dan Kontrol Media
Kontrol negatif dan kontrol positif digunakan dalam pengujian ini. Kontrol
negatif yang digunakan adalah aquades steril karena pelarut yang digunakan
adalah aquades steril. Kontrol negatif digunakan sebagai pembanding dan pelarut
untuk pembuatan larutan kontrol positif dan larutan uji (dekokta daun jamblang)
(Kirmusaoglu, 2019). Kontrol positif yang digunakan adalah antibiotik
streptomycin dengan konsentrasi 512 µg/mL dalam bentuk serbuk. Kontrol positif
digunakan karena untuk memastikan bahwa metode yang digunakan valid. Pada
penelitian Pratiwi et al., (2015) streptomycin konsentrasi 512 µg/mL yang
digunakan sebagai kontrol positif menunjukkan kemampuan penghambatan
pembentukan biofilm terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas
aeruginosa.
Kontrol media yang digunakan yaitu media dengan gula (TSBG) dan
media tanpa gula (TSB). Kontrol media berhubungan dengan produksi biofilm
berdasarkan kategori kuat, sedang dan lemah. Menurut penelitian Lade et al.,
(2019), TSB secara umum digunakan sebagai media untuk pengujian biofilm dan
biasanya ditambahkan dengan glukosa untuk menginduksi pembentukan biofilm
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
S. aureus. Penambahan glukosa dapat meningkatkan produksi biofilm S. aureus
(Agarwal and Jain, 2013). Pada penelitian Costa et al., (2015) pengujian
antibiofilm terhadap S. aureus ATCC 25923 menggunakan media TSB dengan
penambahan glukosa 1%. Oleh karena itu, pada pengujian ini media yang
digunakan adalah media TSBG karena dengan penambahan glukosa 1%
meningkatkan pembentukan biofilm yang lebih tinggi daripada TSB pada S.
aureus.
Klasifikasi Pembentukan Biofilm
Klasifikasi pembentukan biofilm dilihat dari nilai ODc dan OD kontrol
pertumbuhan. Nilai ODc didapatkan dari OD pada kontrol media TSB saja
ditambah dengan 3 kali standar deviasi dari OD kontrol media TSB tersebut. OD
didapatkan dari kontrol pertumbuhan pada media TSBG (Avdic et al., 2019).
Hasil pembentukan biofilm pada pengujian aktivitas penghambatan
biofilm diperoleh nilai 4 x ODc. Jika dibandingkan dengan nilai OD kontrol
pertumbuhan, maka pembentukan biofilm terklasifikasi produksi biofilm yang
kuat. Pada pengujian aktivitas penghancuran biofilm diperoleh nilai 4 x ODc jika
dibandingkan dengan nilai OD kontrol pertumbuhan, maka pembentukan biofilm
terklasifikasi produksi biofilm yang kuat. Menurut Novoa et al., (2018), S. aureus
ATCC 25923 merupakan bakteri yang membentuk biofilm pada kategori kuat.
Pada penelitian sebelumnya tentang antibiofilm terhadap S. aureus ATCC 25923
menunjukkan bahwa produksi biofilm yang terbentuk adalah kuat (Aviantina,
2019; Putri, 2019).
Aktivitas Penghambatan dan Penghancuran Biofilm
Agen antibiofilm dapat beraktivitas melalui beberapa mekanisme meliputi:
penghambatan komponen matriks EPS bakteri sehingga mengurangi pembentukan
biofilm, mengganggu proses pematangan biofilm, dan mengganggu sistem
pensinyalan QS (Chung and Toh, 2014). Penghambatan biofilm terjadi sebelum
biofilm dari bakteri uji terbentuk dengan menghambat pembentukan matriks EPS
atau mengganggu QS bakteri uji dalam membentuk biofilm (Chung and Toh,
2014) sedangkan, penghancuran terjadi setelah biofilm dari bakteri uji telah
terbentuk dengan menghancurkan matriks EPS yang merupakan komponen utama
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
dari pembentuk biofilm atau mendegradasi enzim pada sinyal QS (Algburi et al.,
2017).
Berdasarkan perbedaan di atas, jika S. aureus belum membentuk biofilm
yang mengakibatkan resistensi maka dapat dilakukan penghambatan dan jika S.
aureus telah membentuk biofilm yang menyebabkan resistensi maka dilakukan
penghancuran biofilm. Oleh karena itu, dilakukan uji aktivitas penghambatan dan
penghancuran biofilm terhadap S. aureus.
Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm
Pada pengujian aktivitas penghambatan biofilm, suspensi bakteri uji dan
perlakuan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37oC. Suhu dan waktu optimum
pertumbuhan S. aureus adalah selama 48 jam pada suhu 37oC (Abdallah et al.,
2014). Pengujian menggunakan pewarnaan dengan crystal violet (CV) 0,1%. CV
yang digunakan adalah 0,1% yang merupakan standar untuk mengukur biomassa
biofilm pada pengujian mikrotiter (Metzler, 2016). CV merupakan pewarna dasar
yang mengikat molekul bermuatan negatif dan polisakarida dalam matriks EPS
(Dewi dkk., 2015). CV akan mewarnai biofilm yang terbentuk sehingga
menghasilkan warna ungu pada wells. Semakin pekat warna ungu berarti semakin
banyak CV yang terikat pada biofilm sehingga biofilm yang terbentuk semakin
tebal dan jika diukur maka menghasilkan nilai OD yang tinggi. Etanol 96% yang
ditambahkan berguna untuk melarutkan CV yang terbentuk pada biofilm.
Banyaknya CV yang terikat berbanding lurus dengan banyaknya sel biofilm atau
berbanding lurus dengan ketebalan biofilm yang terbentuk (Sari dkk., 2014).
Pada pengujian ini, tujuan melakukan pencucian sebelum dan setelah
pewarnaan sebanyak 3x adalah sebagai berikut: Pencucian sebelum pewarnaan
berguna untuk menghilangkan sel yang menempel pada mikroplat, sedangkan
pencucian setelah pewarnaan berguna untuk menghilangkan sel yang terwarnai
CV tetapi tidak menempel pada mikroplat. Setelah itu, dilakukan pengukuran OD
dengan panjang gelombang 595nm menggunakan microplate reader. Pengukuran
pada panjang gelombang tersebut karena merupakan serapan panjang gelombang
CV (Sun et al., 2007). Pada penelitian Pratiwi et al., (2015) juga menggunakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
panjang gelombang 595nm dalam pengujian antibiofilm terhadap Staphylococcus
aureus and Pseudomonas aeruginosa.
Pada tabel I tersaji nilai OD yang diperoleh dari pengujian ini sebagai
berikut: Tabel I. Nilai OD Penghambatan Biofilm
No Kelompok OD SD
1 Kontrol Pertumbuhan 2,997 0,161
2 Kontrol Negatif (Aquadest steril) 2,445 0,095
3 Kontrol Positif (Streptomycin) 0,236 0,013
4 P1 (8 %) 0,864 0,070
5 P2 (6 %) 0,767 0,035
6 P3 (4 %) 0,769 0,056
7 P4 (2 %) 0,754 0,004
8 P5 (1 %) 0,831 0,023
Berdasarkan tabel I di atas, hasil data kuantitatif yang diperoleh digunakan
untuk mengetahui efek masing-masing perlakuan terhadap pembentukan biofilm
S. aureus. Nilai OD menggambarkan pembentukan produksi biofilm (Wahyudi et
al., 2020). Nilai OD dari kontrol pertumbuhan (2,997) dan kontrol negatif (2,445)
lebih tinggi jika dibandingkan dengan kontrol positif (0,236) dan perlakuan dalam
5 konsentrasi yang berbeda. Hal ini sesuai dengan penelitian Wangi dkk., (2017)
yang menyatakan bahwa nilai OD pada kontrol positif diperoleh paling rendah,
dan dapat diketahui bahwa semakin tinggi nilai OD maka pertumbuhan biofilm
semakin besar.
Data OD yang diperoleh kemudian dianalisis secara statitika. Hasil uji
statistik Shapiro-Wilk dan Levene’s Test menunjukkan bahwa data penghambatan
pembentukkan biofilm terdistribusi normal (p>0,05) dan tidak homogen (p<0,05)
(Lampiran 7). Analisis data selanjutnya dilanjutkan dengan One Way ANOVA
dengan taraf kepercayaan 95%. Berdasarkan hasil uji One Way ANOVA
(p=0,000) menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan (Lampiran 8).
Kemudian dilanjutkan dengan uji Post Hoc Games Howell. Berbeda bermakna
jika p<0,05 dan berbeda tidak bermakna jika p>0,05 (Lampiran 9). Hasil analisis
penghambatan uji Post Hoc Games Howell disajikan dalam tabel II.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
Tabel II. Hasil Analisis Penghambatan Uji Post Hoc Games Howell
KP K- K+ P1 P2 P3 P4 P5
KP - BTB BB BB BB BB BB BB
K- BTB - BB BB BB BB BB BB
K+ BB BB - BB BB BB BB BB
P1 BB BB BB - BTB BTB BTB BTB
P2 BB BB BB BTB - BTB BTB BTB
P3 BB BB BB BTB BTB - BTB BTB
P4 BB BB BB BTB BTB BTB BTB BTB
P5 BB BB BB BTB BTB BTB BTB BTB
Keterangan : KP = Kontrol Pertumbuhan; K- = Kontrol Negatif (aquadest steril); K+ =
Kontrol Positif (streptomycin 512µm/mL); P1 (dekokta daun jamblang 8%) P2 (dekokta daun
jamblang 6%); P3 (dekokta daun jamblang 4%); P4 (dekokta daun jamblang 2%); P5
(dekokta daun jamblang 1%); BB = Berbeda Bermakna; BTB = Berbeda Tidak Bermakna.
Berdasarkan tabel II di atas, jika kontrol negatif dibandingkan dengan
kontrol pertumbuhan menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna berarti
pelarut tidak memiliki aktivitas penghambatan biofilm. Jika kontrol positif
dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan menunjukkan hasil yang berbeda
bermakna berarti streptomycin memiliki aktivitas penghambatan biofilm. Jika
dekokta daun jamblang dengan konsentrasi 1 – 8 % dibandingkan dengan kontrol
pertumbuhan menunjukkan hasil yang berbeda bermakna berarti konsentrasi –
konsentrasi tersebut memiliki aktivitas penghambatan biofilm.
Data dari nilai OD yang diperoleh juga akan digunakan untuk menghitung
persen (%) penghambatan biofilm dengan membandingkan selisih OD perlakuan
dan OD kontrol pertumbuhan dengan OD kontrol pertumbuhan yang tersaji dalam
tabel III.
Tabel III. Persen Penghambatan Biofilm
No Kelompok Persen (%) Penghambatan
1 Kontrol Positif (Streptomycin) 92,11
2 P1 (8 %) 71,18
3 P2 (6 %) 74,42
4 P3 (4 %) 74,35
5 P4 (2 %) 74,83
6 P5 (1 %) 72,28
Berdasarkan data persen penghambatan biofilm pada tabel III di atas
menunjukkan bahwa kontrol positif (streptomycin) menunjukkan persen
penghambatan paling tinggi sebesar 92,11 %. Streptomycin memiliki mekanisme
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
mendegradasi enzim pembentuk biofilm (Algburi et al., 2017) atau mengganggu
QS yang mempengaruhi pembentukan biofilm (Saroj and Rather, 2013).
Pada pengujian ini persen penghambatan dekokta daun jamblang memiliki
range 71,18 - 74,83%. Salah satu penelitian Kanja et al., (2016) tentang aktivitas
penghambatan biofilm menyatakan bahwa penghambatan biofilm ekstrak etanol
daun bintaro pada S. aureus dengan range 71 – 93%. Penelitian Lopes et al.,
(2017) tentang efek penghambatan flavonoid pada pembentukan biofilm S. aureus
menunjukkan penghambatan biofilm di atas 70%. Adapun penelitian Khanifah,
(2016) menunjukkan bahwa persen penghambatan air perasan jeruk nipis terhadap
biofilm S. aureus dengan range 56 – 79%. Dari penelitian sebelumnya diketahui
penghambatan biofilm pada S. aureus dapat terjadi jika memiliki persen
penghambatan di atas 50%.
Dari uji statistika menunjukkan bahwa kelima konsentrasi tersebut
menghasilkan hasil yang berbeda tidak bermakna maka dapat diartikan bahwa
peningkatan konsentrasi tidak berpengaruh signifikan terhadap efek
penghambatan biofilm. Besar persen penghambatan dekokta daun jamblang tidak
bergantung dengan peningkatan konsentrasi. Hal ini dapat dilihat dari tabel III di
atas bahwa kelima konsentrasi yang berbeda menghasilkan persen penghambatan
yang tidak begitu jauh nilainya seiring bertambahnya konsentrasi. Hal ini sesuai
dengan penelitian Keerthiga and Anand, (2015) bahwa pada konsentrasi kecil
memiliki daya hambat yang kurang kuat namun, senyawa aktif dapat berpenetrasi
dengan baik ke dalam bakteri. Pada konsentrasi besar senyawa aktif memiliki
daya hambat yang kuat namun, tidak dapat berpenetrasi dengan baik ke dalam
bakteri sehingga aktivitas penghambatan biofilm yang paling baik dihasilkan pada
konsentrasi yang tidak terlalu kecil dan tidak terlalu besar.
Pada pengujian ini, dekokta daun jamblang pada konsentrasi 8%
menunjukkan persen penghambatan terendah. Hal ini dikarenakan kemungkinan
kejenuhan pada protein reseptor yang berikatan dengan senyawa aktif yang
terkandung dalam dekokta daun jamblang. Kejenuhan reseptor menyebabkan
senyawa tidak mampu menghambat QS yang berperan dalam pembentukan
biofilm. Menurut Abrams et al., (2009) jika senyawa aktif banyak atau
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
konsentrasi besar namun, reseptor yang tersedia sedikit maka reseptor akan
mengalami kejenuhan sehingga peningkatan konsentrasi senyawa tidak akan
menambah efek.
Uji kandungan fitokimia dalam pengujian ini tidak dilakukan. Namun,
sudah ada beberapa penelitian tentang skrining fitokimia ekstrak air daun
jamblang. Aktivitas penghambatan biofilm oleh dekokta daun jamblang dapat
terjadi karena diduga daun jamblang mengandung metabolit sekunder seperti
flavonoid. Menurut Bouyahya et al., (2017) flavonoid dapat berguna untuk
mengatasi resistensi bakteri dengan menargetkan sistem QS. Flavonoid juga
memiliki kemampuan menghambat atau mengganggu sistem QS (Skogman et al.,
2016 ; Quecan et al., 2019). S. aureus mengatur pembentukan dan penyebaran
biofilm menggunakan agr sistem QS, maka dengan menghambat sistem QS
tersebut akan menghambat pembentukan biofilm (Chung and Toh, 2014). Pada
pengujian aktivitas penghambatan biofilm ini juga menargetkan sistem QS. QS
berperan untuk mengatur produksi EPS yang bertindak sebagai pelindung sel dan
meningkatkan pembentukan biofilm (Gopu et al., 2015). EPS merupakan
komponen yang terdiri dari polysaccharide intercellular adhesin, extracellular
DNA dan extracellular protein (Rabin et al., 2015). Oleh karena itu, dengan
mengganggu sistem QS mengakibatkan terganggunya produksi EPS (Gopu et al.,
2015) sehingga dapat menghambat pembentukan biofilm.
Penelitian tentang penghambatan biofilm dekokta daun jamblang terhadap
S. aureus belum pernah dilakukan, namun ada beberapa penelitian terkait
penghambatan biofilm. Pada penelitian Chen et al., (2016) yaitu baicalein (ekstrak
Scutellaria baicalensis) menunjukkan bahwa ekstrak tersebut dapat menghambat
pembentukan biofilm bakteri S. aureus dengan mempengaruhi sistem QS. Pada
penelitian Onsare and Arora, (2014) yaitu tentang ekstrak dari kulit biji Moringa
oleifera menunjukkan flavonoid berpotensi sebagai penghambat serta pengganggu
aktivitas pembentukan biofilm terhadap S. aureus.
Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm
Pada pengujian aktivitas penghancuran biofilm diawali dengan induksi
penghancuran biofilm. Induksi tersebut diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37oC
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
yang merupakan waktu dan suhu optimum pembentukan biofilm S. aureus
(Abdallah et al., 2014). Pewarnaan dilakukan menggunakan crystal violet 0,1%
lalu dimasukkan etanol 96%. Kemudian dilakukan pengukuran OD dengan
panjang gelombang 595nm menggunakan microplate reader. Pada penelitian
Pratiwi et al., (2015) juga menggunakan panjang gelombang 595nm dalam
pengujian antibiofilm terhadap Staphylococcus aureus and Pseudomonas
aeruginosa.
Pada tabel IV tersaji nilai OD yang diperoleh dari pengujian ini sebagai
berikut : Tabel IV. Nilai OD Penghancuran Biofilm
No Kelompok OD SD
1 Kontrol Pertumbuhan 3,004 0,191
2 Kontrol Negatif (Aquadest steril) 2,908 0,107
3 Kontrol Positif (Streptomycin) 0,535 0,068
4 P1 (8 %) 2,114 0,006
5 P2 (6 %) 2,733 0,208
6 P3 (4 %) 2,676 0,376
7 P4 (2 %) 2,626 0,471
8 P5 (1 %) 2,672 0,179
Berdasarkan tabel IV di atas, hasil data kuantitatif yang diperoleh
digunakan untuk mengetahui efek masing-masing perlakuan terhadap
pnghancuran biofilm S. aureus. Nilai OD menggambarkan pembentukan produksi
biofilm (Wahyudi et al., 2020). Nilai OD dari kontrol pertumbuhan (3,004) dan
kontrol negatif (2,908) lebih tinggi jika dibandingkan dengan kontrol positif
(0,535) dan perlakuan dalam 5 konsentrasi yang berbeda. Hal ini sesuai dengan
penelitian Wangi dkk., (2017) yang menyatakan bahwa nilai OD pada kontrol
positif diperoleh paling rendah dan dapat diketahui bahwa semakin tinggi nilai
OD maka pertumbuhan biofilm semakin besar.
Data OD yang diperoleh kemudian dianalisis secara statitika. Hasil uji
statistik Shapiro-Wilk dan Levene’s Test menunjukkan bahwa data penghancuran
biofilm terdistribusi normal (p > 0,05) dan tidak homogen (p<0,05) (Lampiran
10). Analisis data selanjutnya dilanjutkan dengan One Way ANOVA dengan taraf
kepercayaan 95%. Berdasarkan hasil uji One Way ANOVA (p=0,000)
menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan (Lampiran 11).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Kemudian dilanjutkan dengan uji Post Hoc Games Howell. Berbeda bermakna
jika p<0,05 dan berbeda tidak bermakna jika p>0,05 (Lampiran 12). Hasil analisis
penghancuran uji Post Hoc Games Howell disajikan dalam tabel V.
Tabel V. Hasil Analisis Penghancuran Uji Post Hoc Games Howell
KP K- K+ P1 P2 P3 P4 P5
KP - BTB BB BTB BTB BTB BTB BTB
K- BTB - BB BB BTB BTB BTB BTB
K+ BB BB - BB BB BB BTB BB
P1 BTB BB BB - BTB BTB BTB BTB
P2 BTB BTB BB BTB - BTB BTB BTB
P3 BTB BTB BB BTB BTB - BTB BTB
P4 BTB BTB BTB BTB BTB BTB BTB BTB
P5 BTB BTB BB BTB BTB BTB BTB BTB
Keterangan : KP = Kontrol Pertumbuhan; K- = Kontrol Negatif (aquadest steril); K+ =
Kontrol Positif (streptomycin 512µm/mL); P1 (dekokta daun jamblang 8%) P2 (dekokta daun
jamblang 6%); P3 (dekokta daun jamblang 4%); P4 (dekokta daun jamblang 2%); P5
(dekokta daun jamblang 1%); BB = Berbeda Bermakna; BTB = Berbeda Tidak Bermakna. Berdasarkan hasil analisis tabel V di atas, jika kontrol negatif
dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan menunjukkan hasil yang berbeda tidak
bermakna berarti pelarut tidak memiliki aktivitas penghancuran biofilm. Jika
kontrol positif dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan menunjukkan hasil
yang berbeda bermakna berarti steptomycin memiliki aktivitas penghancuran
biofilm. Jika dekokta daun jamblang dengan konsentrasi 1 - 8% dibandingkan
dengan kontrol pertumbuhan menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna
berarti konsentrasi-konsentrasi tersebut tidak memiliki aktivitas penghancuran
biofilm.
Data dari nilai OD yang diperoleh juga akan digunakan untuk menghitung
persen (%) penghancuran biofilm dengan membandingkan selisih OD perlakuan
dan OD kontrol pertumbuhan dengan OD kontrol pertumbuhan yang disajikan
dalam tabel VI.
Tabel VI. Persen Penghancuran Biofilm
No Kelompok Persen (%) Penghancuran
1 Kontrol Positif (Streptomycin) 82,20
2 P1 (8 %) 29,63
3 P2 (6 %) 9,01
4 P3 (4 %) 10,91
5 P4 (2 %) 12,57
6 P5 (1 %) 11,03
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
Berdasarkan data persen penghancuran biofilm pada tabel VI di atas
menunjukkan bahwa kontrol positif (streptomycin) menunjukkan persen
penghancuran sebesar 82,20% sehingga dinyatakan kontrol positif tersebut
mampu menghancurkan biofilm. Streptomycin memiliki mekanisme
mendegradasi enzim pembentuk biofilm (Algburi et al., 2017) atau mengganggu
QS yang mempengaruhi pembentukan biofilm (Saroj and Rather, 2013).
Pada pengujian ini persen penghancuran dekokta daun jamblang memiliki
range 9,01 - 29,63%. Salah satu penelitian Zainal et al., (2020) tentang aktivitas
antibiofilm menyatakan bahwa penghancuran biofilm allicin pada S. aureus
adalah sebesar 52,56%. Adapun penelitian Khanifah, (2016) menunjukkan bahwa
persen penghancuran air perasan jeruk nipis terhadap biofilm S. aureus dengan
range 57 – 64%. Dari penelitian sebelumnya diketahui penghancuran biofilm pada
S. aureus dapat terjadi jika memiliki persen penghancuran di atas 50%.
Jika diketahui dari uji statistika bahwa kelima konsentrasi tersebut
menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna maka dapat diartikan bahwa
peningkatan konsentrasi tidak berpengaruh signifikan terhadap efek penghancuran
biofilm tersebut. Besar persen penghancuran dekokta daun jamblang tidak
bergantung dengan peningkatan konsentrasi. Hal ini dapat dilihat dari tabel VI di
atas bahwa kelima konsentrasi yang berbeda menghasilkan persen penghancuran
yang tidak begitu jauh nilainya seiring peningkatan konsentrasi.
Senyawa yang terkandung di dalam dekokta daun jamblang diduga tidak
memiliki aktivitas penghancuran biofilm. Menurut Nugrahani dkk., (2016) hal ini
dapat terjadi karena biofilm yang telah terbentuk dan sudah matang akan lebih
sulit dirusak dan saat biofilm sudah terbentuk bakteri akan mengeluarkan EPS
sebagai bentuk pertahanan sehingga kemampuan varian konsentrasi tersebut sama
dalam berpenetrasi ke dalam matriks EPS. Menurut Ardani dkk., (2010)
menyatakan proses penghancuran biofilm dari suatu senyawa berkaitan dengan
kemampuan penetrasi senyawa tersebut ke dalam biofilm yang terbentuk yakni
mampu berpenetrasi pada lapisan EPS yang menyelubungi bakteri dengan
mekanisme mendegradasi EPS yang sudah terbentuk.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Uji kandungan fitokimia dalam pengujian ini tidak dilakukan. Pengujian
aktivitas penghancuran biofilm dari dekokta daun jamblang kemungkinan tidak
dapat terjadi diduga karena metabolit sekunder dari daun jamblang tidak mampu
berpenetrasi ke dalam matriks EPS. Salah satu metabolit tersebut adalah
flavonoid. Hal ini terjadi karena menurut Danihelova et al., (2012) flavonoid
mempunyai sifat hidrofilik ditandai dengan banyaknya gugus hidroksil yang
menyusun flavonoid tersebut. Hal ini berbeda dengan matriks EPS yang menurut
Felmming, (2016) matriks EPS mempunyai sifat lipofilik karena tersusun dari
protein, asam nukleat dan lipid.
Penelitian tentang penghancuran biofilm dekokta daun jamblang terhadap
S. aureus belum pernah dilakukan, namun ada beberapa penelitian terkait
penghancuran biofilm. Salah satunya penelitian Kining dkk., (2016) tentang
ekstrak air daun papaya mengandung enzim protease yang berperan dalam
mendegradasi lapisan EPS pada biofilm yang terbentuk dan flavonoid yang dapat
menyebabkan EPS terdenaturasi. Pada penelitian Ardani dkk., (2010), kombinasi
minyak cengkeh dan minyak kayu manis dapat meningkatkan kemampuan
degradasi biofilm karena kandungan senyawa dalam kedua minyak tersebut
mempunyai aksi yang sama yaitu dapat menghilangkan lapisan eksopolisakarida
pada biofilm.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa dekokta daun jamblang memiliki
aktivitas penghambatan dan tidak memiliki aktivitas penghancuran biofilm
terhadap S. aureus. Persen (%) penghambatan biofilm dekokta daun jamblang
pada konsentrasi 1 - 8 % yaitu dengan range 71,18 - 74,83 %.
SARAN
Pada penelitian ini belum dilakukan identifikasi senyawa aktif secara
spesifik sehingga disarankan untuk penelitian selanjutnya melakukan uji
kandungan fitokimia secara spesifik untuk mengetahui senyawa spesifik yang
memiliki aktivitas penghambatan dan penghancuran biofilm terhadap S. aureus.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
DAFTAR PUSTAKA
Abdallah, M., Chataigne, G., Ferreire, P., Benoliel, C., Drider, D., Dhulster, P.,
Chihib E, N., 2014. Effect of Growth Temperature , Surface Type and
Incubation Time on The Resistance of Staphylococcus aureus Biofilms to
Disinfectants. Appl Microbial Biochemical, 98(1), 2597–2608.
Abrams, A.C., Pennington, S.S., Lammon, C.B., 2009. The Clinical Drug
Therapy Rationales for Nursing Practice, Wolters Kluwer Health, Lippincott
Williams & Wilkins. pp. 15-17.
Agarwal, A., Jain, A., 2013. Glucose & Sodium Chloride Induced Biofilm
Production & Ica Operon in Clinical Isolates of Staphylococci. Indian J Med,
1(1), 262–266.
Algburi, A., Comito, N., Kashtanov, D., Dicks, L.M.T., Chikindas, M.L., 2017.
Control of Biofilm Formation: Antibiotics and Beyond. Applied and
Environmental Microbiology, 83(3), 1–16.
Ardani, M., Utami, S., Pratiwi, T., Hertiani, T., 2010. Efek Campuran Minyak
Atsiri Daun Cengkeh dan Kulit Batang Kayu Manis sebagai Antiplak Gigi.
Majalah Farmasi Indonesia, 21(3), 191–201.
Arifin, B., Ibrahim, S., 2018. Struktur, Bioaktivitas dan Antioksidan Flavonoid.
Jurnal Zarah, 6(1), 21–29.
Avdic, M., Dzuzic, N., Hasanic, O., Spahic, A., Smajlovic-Skenderagic, L.,
Badnjevic, A., Hukic, M., 2019. Development of A Novel Biofilm
Classification Tool and Comparative Analysis of Result Interpretation
Methodologies for The Evaluation of Biofilm Forming Capacity of Bacteria
Using Tissue Culture Plate Method. Medicinski Glasnik, 16(1), 7–12.
Aviantina, M.E., 2019. Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm Ekstrak Etanol Daun
Kirinyu (Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus. Universitas Sanata Dharma. Yogyakarta.
Blando, F., Russo, R., Negro, C., De Bellis, L., Frassinetti, S., 2019.
Antimicrobial and Antibiofilm Activity against Staphylococcus aureus of
Opuntia ficus-indica (L.) Mill. Cladode Polyphenolic Extracts. Antioxidants,
8(5), 1–13.
Bouyahya, A., Dakka, N., Et-Touys, A., Abrini, J., Bakri, Y., 2017. Medicinal
Plant Products Targeting Quorum Sensing for Combating Bacterial
Infections. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 10(8), 729–743.
BPOM, 2012. Acuan Sediaan Herbal Volume ke 7 Edisi I, Direktorat Obat Asli
Indonesia Badan Pengawasan dan Makanan RI. Jakarta. hal. 7.
Chaaban, H., Ioannou, I., Chebil, L., Slimane, M., Gérardin, C., Paris, C.,
Charbonnel, C., Chekir, L., Ghoul, M., 2017. Effect of Heat Processing on
Thermal Stability and Antioxidant Activity of Six Flavonoids. Journal of
Food Processing and Preservation, 41(5), 1–12.
Chen, M., Yu, Q., Sun, H., 2013. Novel Strategies for The Prevention and
Treatment of Biofilm Related Infections. International Journal of Molecular
Sciences, 14(1), 18488–18501.
Chen, Y., Liu, T., Wang, K., Hou, C., Cai, S., Huang, Y., 2016. Baicalein Inhibits
Staphylococcus aureus Biofilm Formation and The Quorum Sensing System
In Vitro. PLOS ONE, 11(4), 1–18.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
Chung, P.Y., Toh, Y.S., 2014. Anti-biofilm Agents: Recent Breakthrough against
Multi-Drug Resistant Staphylococcus aureus. Pathogens and Disease, 70(3),
231–239.
Costa, G.M., Endo, E.H., Cortez, D.A.G., Ueda-nakamura, T., Nakamura, C.V.,
Filho, B.P.D., Filho, D., 2015. Effect of Plant Extracts on Planktonic Growth
and Biofilm of Staphylococcus aureus and Candida albicans. International
Journal of Current Microbiology an Applied Sciences, 4(6), 908–917.
Danihelova, M., Viskupicova, J., Sturdik, E., 2012. Lipophilization of Flavonoids
for Their Food, Therapeutic and Cosmetic Applications. Acta Chimica
Slovaca, 5(1), 59–69.
Depkes, 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Jakarta. hal. 83.
Dewi, Z.Y., Nur, A., Hertriani, T., Studi, P., Ilmu, M., Gigi, K., Gigi, F.K., Mada,
U.G., Biomedika, B., Gigi, K., Gigi, F.K., Mada, U.G., Farmasi, B.B.,
Farmasi, F., Mada, U.G., Biologi, F., Gadjah, U., Bakteri, Y., Antar, P., Pau,
U., Bakteri, U.G.M., 2015. Efek Antibakteri dan Penghambatan Biofilm
Ekstrak Sereh (Cymbopogon nardus L.) terhadap Bakteri Streptococcus
mutans. Majalah Kedokteran Gigi Indonesia, 1(2), 136–141.
Elfadil, A.G., Karamallah, A.A., Abualhassan, A.M., Hamid, A.A., Sabahelkhier,
M.K., 2015. Antimicrobial Activities of Syzygium cumini Leave Extracts
Against Selected Microorganisms. Journal of Medical and Biological
Sciences, 04(02), 1–10.
Felmming, H.C., 2016. EPS-Then and Now. Microorganisms, 4(41), 1–18.
Ferreira, O., Pinho, S.P., 2012. Solubility of Flavonoids in Pure Solvents.
Industrial & Engineering Chemistry Research, 51(1), 6586–6590.
Gnanamani, A., Hariharan, P., Satyaseela, M.P., 2017. Staphylococcus aureus:
Overview of Bacteriology, Clinincal Diseases, Epidemiology, Antibiotic
Resistance and Therapeutic Approach, Intech.
Gopinath, S.M., Rakesh, C.K., Patil, A., Dayananda, K.S., 2012. Preliminary
Phytochemical Evaluation of Leaf Extracts of Euphorbia hirta, Syzygium
cumini of Siddarabetta, Tumkur District, Karnataka. International Journal of
Pharma and Bio Sciences, 3(2), 431–436.
Gopu, V., Kothandapani, S., Shetty, P.H., 2015. Microbial Pathogenesis Quorum
Quenching Activity of Syzygium cumini (L.) Skeels and Its Anthocyanin
Malvidin Against Klebsiella pneumoniae. Microbial Pathogenesis, 79(1), 1–
9.
Gowri, S.S., Vasantha, K., 2010. Phytochemical Screening and Antibacterial
Activity of Syzygium cumini (L.) (Myrtaceae) Leaves Extracts. International
Journal of PharmTech Research, 2(2), 1569–1573.
Handayani Sriherfyna, F, H., Yunianta., H., 2016. Ekstraksi Antioksidan Daun
Sirsak Metode Ultrasonic Bath (Kajian Rasio Bahan: Pelarut dan Lama
Ekstraksi). Jurnal Pangan dan Agroindustri, 4(1), 262–272.
Kanja, F.S., Soegianto, L., Wijaya, S., City, P., 2016. Effectiveness of Bintaro
(Cerberra odollam Gaertn.) Leaf Ethanolic Extract Against Staphylococcus
aureus In - Vitro Biofilm Formation. ICMHS, 1(1), 59–61.
Keerthiga, M., Anand, S.P., 2015. Anti-Infective and Anti-Biofilm Activity of
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
Geodorum densiflorum (Lam.) Schltr. against Methicillin Resistant and
Sensitive Staphylococcus aureus. Advances in Applied Science Research,
6(5), 43–46.
Khanifah, F., 2016. Efek Pemberian Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus aurontifolia)
terhadap Pertumbuhan, Pembentukan dan Penghancuran Biofilm
Staphylococcus aureus Secara In Vitro. UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta.
Kining, E., Falah, S., Nurhidayat, N., 2016. Aktivitas Antibiofilm Ekstrak Air
Daun Pepaya (Carica papaya L.) terhadap Pseudomonas aeruginosa Secara
In Vitro. Current Biochemistry, 2(3), 150–163.
Kirmusaoglu, S., 2019. The Methods for Detection of Biofilm and Screening
Antibiofilm Activity of Agents, Intech.
Lade, H., Park, J.H., Chung, S.H., Kim, I.H., Kim, J.-M., Joo, H.-S., Kim, J.-S.,
2019. Biofilm Formation by Staphylococcus aureus Clinical Isolates is
Differentially Affected by Glucose and Sodium Chloride Supplemented
Culture Media. Journal of Clinical Medicine, 8(11), 1853.
Lopes, L.A.A., dos Santos Rodrigues, J.B., Magnani, M., de Souza, E.L., de
Siqueira-Júnior, J.P., 2017. Inhibitory Effects of Flavonoids on Biofilm
Formation by Staphylococcus aureus That Overexpresses Efflux Protein
Genes. Microbial Pathogenesis, 107, 193–197.
Manner, S., Skogman, M., Goeres, D., Vuorela, P., Fallarero, A., 2013.
Systematic Exploration of Natural and Synthetic Flavonoids for the
Inhibition of Staphylococcus aureus Biofilms. International Journal of
Molecular Sciences, 14(10), 19434–19451.
Martins, N., Barros, L., Santos-Buelga, C., Silva, S., Henriques, M., Ferreira,
I.C.F.R., 2015. Decoction, Infusion and Hydroalcoholic Extract of Cultivated
Thyme: Antioxidant and Antibacterial Activities, and Phenolic
Characterisation. Food Chemistry, 167(1), 131–137.
Metzler, A., 2016. Developing a Crystal Violet Assay to Quantify Biofilm
Production Capabilities of Staphylococcus aureus.
Novoa, M.G.A., Moreno, M.I., Velizquez, O.A.S., Gomes, J.P.G., Medina, P.J.G.,
Lomeli, M.G., 2018. Biofilm Formation by Staphylococcus aureus Isolated
from Food Contact Surfaces in the Dairy Industry of Jalisco, Mexico.
Journal of Food Quality, 17(4), 1–8.
Nugrahani, N.A., Kunarti, S., Setyowati, A., 2016. Konsentrasi Efektif Daya
Antibiofilm Kitosan Cangkang Udang terhadap Streptococcus viridans.
Conservative Dentistry Journal, 6(2), 47–51.
Onsare, J.G., Arora, D.S., 2014. Antibiofilm Potential of Flavonoids Extracted
from Moringa oleifera Seed Coat Against Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans. Journal of Applied
Microbiology, 118(2), 313–325.
Pratiwi, S.U.T., Lagendijk, E.L., Hertiani, T., Weert, S.D., Hondel,
C.A.M.J.J.V.D., 2015. Antimicrobial Effects of Indonesian Medicinal Plants
Extracts on Planktonic and Biofilm Growth of Pseudomonas aeruginosa and
Staphylococcus aureus. Journal of Horticulture, 2(1), 1–14.
Purbowati, R., 2016. Hubungan Biofilm dengan Infeksi : Implikasi pada
Kesehatan Masyarakat dan Strategi Mengontrolnya. Jurnal Ilmiah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Kedokteran, 5(1), 1–14.
Pushpahasni, K., Sharmila R., S., Dhasarathan, P., 2015. Efficiency of In Vitro
Antibacterial Activity of Syzygium cumini Phenolic Extract from Leaves.
Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 8(6), 6–9.
Putri, F.E., 2019. Aktivitas Penghambatan Pembentukan Biofilm Ekstrak Etanol
Pegagan (Centella aslatica (L.) Urban) terhadap Staphylococcus aureus.
Universitas Sanata Dharma. Yogyakarta.
Quave, C.L., Plano, L.R.W., Pantuso, T., Bennett, B.C., 2008. Effects of Extracts
from Italian Medicinal Plants on Planktonic Growth, Biofilm Formation and
Adherence of Methicillin - Resistant Staphylococcus aureus. NIH, 118(3),
418–428.
Quecan, B.X. V, Santos, J.T.C., Rivera, M.L.C., Hassimotto, N.M.A., Almeida,
F.A., Pinto, U.M., 2019. Effect of Quercetin Rich Onion Extracts on
Bacterial Quorum Sensing. Frontiers in Microbiology, 10(1), 1–16.
Rabin, N., Zheng, Y., Temeng, C.O., Du, Y., Bonsu, E., Sintim, H.O., 2015.
Biofilm Formation Mechanisms and Targets for Developing Antibiofilm
Agents. Future Medicinal Chemistry, 7(4), 493–512.
Raorane, C.J., Lee, J.H., Kim, Y.G., Rajasekharan, S.K., García-Contreras, R.,
Lee, J., 2019. Antibiofilm and Antivirulence Efficacies of Flavonoids and
Curcumin Against Acinetobacter baumannii. Frontiers in Microbiology,
10(1), 1–12.
Sari, S.P.W., Rahmapuspita, F., Iriyani, N., Utami, S., Pratiwi, S.U.T., Hertiani,
T., 2014. Penelusuran Potensi Kapulaga, Temu Putri dan Senggugu sebagai
Penghambat Pembentukan Biofilm. Jurnal Ilmu Kefarmasian, 12(1), 17–24.
Saroj, S.D., Rather, N., 2013. Streptomycin Inhibits Quorum Sensing in
Acinetobacter baumannii. AAC, 57(4), 1926–1929.
Silalahi, M., 2018. Jamblang (Syzygium cumini (L.) dan Bioaktivitasnya. Jurnal
Ilmu Kesehatan, 7(2), 127–130.
Silva, A.M., Pinto, D., Fernandes, I., Albuquerque, T.G., Costa, H.S., Freitas, V.,
Rodrigues, F., Oliveira, M.B.P.P., 2019. Infusions and Decoctions of
Dehydrated Fruits of Actinidia arguta and Actinidia deliciosa: Bioactivity,
Radical Scavenging Activity and Effects On Cells Viability. Food
Chemistry, 289, 625–634.
Skogman, M.E., Kanerva, S., Manner, S., Vuorela, P.M., Fallarero, A., 2016.
Flavones as Quorum Sensing Inhibitors Identified by A Newly Optimized
Screening Platform Using Chromobacterium violaceum as Reporter Bacteria.
Molecules, 21(9), 1–11.
Slobodnikova, L., Fialova, S., Rendekova, K., Kovac, J., Mucaji, P., 2016.
Antibiofilm Activity of Plant Polyphenols. Molecules, 21(17), 1–15.
Sowjanya, K.M., Swathi, J., Narendra, K., Satya, K.A., 2013. A Review on
Phytochemical Constituents and Bioassay of Syzygium cumini. International
Journal of Natural Product Science, 3(2), 1–11.
Sulistyani, N., 2018. Modul 008: Pengembangan Sediaan Obat Tradisional.
Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan Kementerian Riset, Teknologi dan
Pendidikan Tinggi. Jakarta. hal. 23.
Sun, W., Han, J., Li, Q., Jiao, K., 2007. Spectrophotometric and Voltammetric
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
Studies on the Interaction of Heparin with Crystal Violet and Its Analytical
Application. JCHEM, 60(1), 42–46.
Tong, S.Y.C., Davis, J.S., Eichenberger, E., Holland, T.L., Fowler, V.G., 2015.
Staphylococcus aureus Infections: Epidemiology, Pathophysiology, Clinical
Manifestations, and Management. Clinical Microbiology Reviews, 28(3),
603–661.
Tripathi, I.P., Dwivedi, N., Singh, R., 2017. Phytochemical Studies on Syzygium
cumini: A Tradisional Drugs for Diabetes. Paripex - Indian Journal Of
Research, 6(6), 1989–1992.
Utami, R., Aini, S.R., Wirasisya, D.G., 2019. Aktivitas Antibiofilm Getah Jarak
Pagar (Jatropha curcas L.) pada Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Natural B, 5(1), 7–12.
Wahyudi, I.A., Ramadhan, F.R., Wijaya, R.I.K., Ardhani, R., Utami, T.W., 2020.
Analgesic, Anti-Inflammatory and Anti-Biofilm-Forming Activity of Potato
(Solanum tuberosum L.) Peel Extract. Indonesian Journal of Cancer
Chemoprevention, 11(1), 30.
Wangi, R.P.L., Suswati, E., Wisudanti, D.D., 2017. Aktivitas Ekstrak Metanol
Bawang Putih (Allium sativum) sebagai Penghambat Pembentukan Biofilm
pada Pseudomonas aeruginosa. Jurnal Pustaka Kesehatan, 5(3), 537–543.
Zainal, M., Mohamad Zain, N., Mohd Amin, I., Ahmad, V.N., 2020. The
Antimicrobial and Antibiofilm Properties of allicin against Candida albicans
and Staphylococcus aureus – A Therapeutic Potential for Denture Stomatitis.
Saudi Dental Journal, 1(1), 1–7.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil Identifikasi Tanaman Jamblang
Gambar 3. Surat Determinasi Tanaman Jamblang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
Lampiran 2. Simplisia Daun Jamblang
Gambar 4. Simplisia Daun Jamblang
Lampiran 3. Serbuk Daun Jamblang
Gambar 5. Serbuk Daun Jamblang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
Lampiran 4. Hasil Penetapan Kadar Air
Gambar 6. Penetapan Kadar Air
Lampiran 5. Hasil Pengukuran OD dan Persen (%) Penghambatan Biofilm
No Kelompok Replikasi Rata-
rata
Standar
Deviasi
(Persen)
% 1 2 3
1 Kontrol
Pertumbuhan
3,18 2,879 2,931 2,997 0,161 -
2 Kontrol Negatif
(Aquadest steril)
2,384 2,396 2,554 2,445 0,095 18,42
3 Kontrol Positif
(Streptomycin)
0,248 0,223 0,238 0,236 0,013 92,11
4 Kontrol TSBG 1,09 0,765 1,466 1,107 0,351 -
5 Kontrol TSB 0,181 0,161 0,172 0,171 0,010 -
6 P1 (8 %) 0,84 0,942 0,809 0,864 0,070 71,18
7 P2 (6 %) 0,772 0,799 0,729 0,767 0,035 74,42
8 P3 (4 %) 0,799 0,704 0,803 0,769 0,056 74,35
9 P4 (2 %) 0,759 0,753 0,751 0,754 0,004 74,83
10 P5 (1 %) 0,85 0,837 0,805 0,831 0,023 72,28
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Lampiran 6. Hasil Pengukuran OD dan Persen (%) Penghancuran Biofilm
No Kelompok Replikasi Rata-
rata
Standar
Deviasi
(Persen)
% 1 2 3
1 Kontrol
Pertumbuhan
3,096 3,131 2,784 3,004 0,191 -
2 Kontrol Negatif
(Aquadest steril)
2,804 2,904 3,017 2,908 0,107 3,17
3 Kontrol Positif
(Streptomycin)
0,463 0,543 0,598 0,535 0,068 82,20
4 Kontrol TSBG 0,699 0,709 0,971 0,793 0,154 -
5 Kontrol TSB 0,179 0,203 0,196 0,193 0,012 -
6 P1 (8 %) 2,119 2,115 2,107 2,114 0,006 29,63
7 P2 (6 %) 2,533 2,718 2,948 2,733 0,208 9,01
8 P3 (4 %) 2,247 2,831 2,95 2,676 0,376 10,91
9 P4 (2 %) 2,994 2,095 2,789 2,626 0,471 12,57
10 P5 (1 %) 2,831 2,479 2,707 2,672 0,179 11,03
Lampiran 7. Hasil Analisis Statistik Uji Shapiro-Wilk dan Levene’s Test
Penghambatan Biofilm dengan SPSS
Case Processing Summary
VAR00001
Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
VAR00002 1.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
2.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
3.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
4.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
5.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
6.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
7.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
8.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Descriptives
VAR00001 Statistic Std. Error
VAR00002 1.00 Mean 2.9967 .09289
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.5970
Upper Bound 3.3963
5% Trimmed Mean .
Median 2.9310
Variance .026
Std. Deviation .16089
Minimum 2.88
Maximum 3.18
Range .30
Interquartile Range .
Skewness 1.531 1.225
Kurtosis . .
2.00 Mean 2.4447 .05478
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.2090
Upper Bound 2.6804
5% Trimmed Mean .
Median 2.3960
Variance .009
Std. Deviation .09488
Minimum 2.38
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
Maximum 2.55
Range .17
Interquartile Range .
Skewness 1.701 1.225
Kurtosis . .
3.00 Mean .2363 .00726
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .2051
Upper Bound .2676
5% Trimmed Mean .
Median .2380
Variance .000
Std. Deviation .01258
Minimum .22
Maximum .25
Range .02
Interquartile Range .
Skewness -.586 1.225
Kurtosis . .
4.00 Mean .8637 .04018
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .6908
Upper Bound 1.0365
5% Trimmed Mean .
Median .8400
Variance .005
Std. Deviation .06959
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Minimum .81
Maximum .94
Range .13
Interquartile Range .
Skewness 1.353 1.225
Kurtosis . .
5.00 Mean .7667 .02038
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .6790
Upper Bound .8544
5% Trimmed Mean .
Median .7720
Variance .001
Std. Deviation .03530
Minimum .73
Maximum .80
Range .07
Interquartile Range .
Skewness -.664 1.225
Kurtosis . .
6.00 Mean .7687 .03235
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .6295
Upper Bound .9079
5% Trimmed Mean .
Median .7990
Variance .003
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
Std. Deviation .05604
Minimum .70
Maximum .80
Range .10
Interquartile Range .
Skewness -1.722 1.225
Kurtosis . .
7.00 Mean .7543 .00240
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .7440
Upper Bound .7647
5% Trimmed Mean .
Median .7530
Variance .000
Std. Deviation .00416
Minimum .75
Maximum .76
Range .01
Interquartile Range .
Skewness 1.293 1.225
Kurtosis . .
8.00 Mean .8307 .01337
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .7731
Upper Bound .8882
5% Trimmed Mean .
Median .8370
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Variance .001
Std. Deviation .02316
Minimum .81
Maximum .85
Range .04
Interquartile Range .
Skewness -1.139 1.225
Kurtosis . .
Tests of Normality
VAR00001
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
VAR00002 1.00 .325 3 . .875 3 .310
2.00 .363 3 . .803 3 .121
3.00 .219 3 . .987 3 .780
4.00 .300 3 . .913 3 .429
5.00 .227 3 . .983 3 .749
6.00 .373 3 . .780 3 .068
7.00 .292 3 . .923 3 .463
8.00 .274 3 . .944 3 .543
a. Lilliefors Significance Correction
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
VAR00002 Based on Mean 6.230 7 16 .001
Based on Median .777 7 16 .615
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Based on Median and
with adjusted df
.777 7 5.281 .632
Based on trimmed mean 5.358 7 16 .003
Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik One Way ANOVA Penghambatan
Biofilm dengan SPSS
ANOVA
VAR00002
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 19.582 7 2.797 499.245 .000
Within Groups .090 16 .006
Total 19.672 23
Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Games Howell
Penghambatan Biofilm dengan SPSS
Multiple Comparisons
Dependent Variable: VAR00002
(I)
VAR00001
(J)
VAR00001
Mean
Difference
(I-J)
Std.
Error Sig.
95% Confidence
Interval
Lower
Bound
Upper
Bound
Tamhane 1.00 2.00 .55200 .10784 .285 -.4648 1.5688
3.00 2.76033* .09317 .029 .6503 4.8704
4.00 2.13300* .10120 .012 .8892 3.3768
5.00 2.23000* .09510 .031 .4438 4.0162
6.00 2.22800* .09836 .017 .7952 3.6608
7.00 2.24233* .09292 .047 .0806 4.4040
8.00 2.16600* .09385 .042 .1823 4.1497
2.00 1.00 -.55200 .10784 .285 -1.5688 .4648
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
3.00 2.20833* .05526 .014 1.0234 3.3933
4.00 1.58100* .06793 .001 1.0327 2.1293
5.00 1.67800* .05845 .008 .8673 2.4887
6.00 1.67600* .06362 .002 1.0769 2.2751
7.00 1.69033* .05483 .028 .4227 2.9579
8.00 1.61400* .05638 .018 .6017 2.6263
3.00 1.00 -2.76033* .09317 .029 -4.8704 -.6503
2.00 -2.20833* .05526 .014 -3.3933 -1.0234
4.00 -.62733 .04083 .086 -1.4455 .1908
5.00 -.53033* .02164 .013 -.8403 -.2204
6.00 -.53233 .03316 .068 -1.1495 .0848
7.00 -.51800* .00765 .001 -.6335 -.4025
8.00 -.59433* .01522 .001 -.7480 -.4407
4.00 1.00 -2.13300* .10120 .012 -3.3768 -.8892
2.00 -1.58100* .06793 .001 -2.1293 -1.0327
3.00 .62733 .04083 .086 -.1908 1.4455
5.00 .09700 .04505 .973 -.3856 .5796
6.00 .09500 .05158 .987 -.3022 .4922
7.00 .10933 .04025 .964 -.8136 1.0322
8.00 .03300 .04234 1.000 -.6038 .6698
5.00 1.00 -2.23000* .09510 .031 -4.0162 -.4438
2.00 -1.67800* .05845 .008 -2.4887 -.8673
3.00 .53033* .02164 .013 .2204 .8403
4.00 -.09700 .04505 .973 -.5796 .3856
6.00 -.00200 .03824 1.000 -.3442 .3402
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
7.00 .01233 .02052 1.000 -.4354 .4601
8.00 -.06400 .02438 .861 -.2757 .1477
6.00 1.00 -2.22800* .09836 .017 -3.6608 -.7952
2.00 -1.67600* .06362 .002 -2.2751 -1.0769
3.00 .53233 .03316 .068 -.0848 1.1495
4.00 -.09500 .05158 .987 -.4922 .3022
5.00 .00200 .03824 1.000 -.3402 .3442
7.00 .01433 .03244 1.000 -.7226 .7512
8.00 -.06200 .03501 .997 -.5088 .3848
7.00 1.00 -2.24233* .09292 .047 -4.4040 -.0806
2.00 -1.69033* .05483 .028 -2.9579 -.4227
3.00 .51800* .00765 .001 .4025 .6335
4.00 -.10933 .04025 .964 -1.0322 .8136
5.00 -.01233 .02052 1.000 -.4601 .4354
6.00 -.01433 .03244 1.000 -.7512 .7226
8.00 -.07633 .01359 .525 -.3490 .1964
8.00 1.00 -2.16600* .09385 .042 -4.1497 -.1823
2.00 -1.61400* .05638 .018 -2.6263 -.6017
3.00 .59433* .01522 .001 .4407 .7480
4.00 -.03300 .04234 1.000 -.6698 .6038
5.00 .06400 .02438 .861 -.1477 .2757
6.00 .06200 .03501 .997 -.3848 .5088
7.00 .07633 .01359 .525 -.1964 .3490
Games-
Howell
1.00 2.00 .55200 .10784 .075 -.0863 1.1903
3.00 2.76033* .09317 .005 1.9143 3.6064
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
4.00 2.13300* .10120 .002 1.4487 2.8173
5.00 2.23000* .09510 .005 1.4400 3.0200
6.00 2.22800* .09836 .003 1.5051 2.9509
7.00 2.24233* .09292 .007 1.3878 3.0969
8.00 2.16600* .09385 .007 1.3412 2.9908
2.00 1.00 -.55200 .10784 .075 -1.1903 .0863
3.00 2.20833* .05526 .002 1.7194 2.6973
4.00 1.58100* .06793 .000 1.2100 1.9520
5.00 1.67800* .05845 .002 1.2586 2.0974
6.00 1.67600* .06362 .000 1.2997 2.0523
7.00 1.69033* .05483 .005 1.1876 2.1931
8.00 1.61400* .05638 .003 1.1556 2.0724
3.00 1.00 -2.76033* .09317 .005 -3.6064 -1.9143
2.00 -2.20833* .05526 .002 -2.6973 -1.7194
4.00 -.62733* .04083 .015 -.9772 -.2775
5.00 -.53033* .02164 .003 -.6881 -.3726
6.00 -.53233* .03316 .012 -.8066 -.2581
7.00 -.51800* .00765 .000 -.5752 -.4608
8.00 -.59433* .01522 .000 -.6876 -.5011
4.00 1.00 -2.13300* .10120 .002 -2.8173 -1.4487
2.00 -1.58100* .06793 .000 -1.9520 -1.2100
3.00 .62733* .04083 .015 .2775 .9772
5.00 .09700 .04505 .527 -.1875 .3815
6.00 .09500 .05158 .634 -.1798 .3698
7.00 .10933 .04025 .418 -.2583 .4770
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
8.00 .03300 .04234 .980 -.2831 .3491
5.00 1.00 -2.23000* .09510 .005 -3.0200 -1.4400
2.00 -1.67800* .05845 .002 -2.0974 -1.2586
3.00 .53033* .02164 .003 .3726 .6881
4.00 -.09700 .04505 .527 -.3815 .1875
6.00 -.00200 .03824 1.000 -.2224 .2184
7.00 .01233 .02052 .994 -.1708 .1954
8.00 -.06400 .02438 .363 -.2023 .0743
6.00 1.00 -2.22800* .09836 .003 -2.9509 -1.5051
2.00 -1.67600* .06362 .000 -2.0523 -1.2997
3.00 .53233* .03316 .012 .2581 .8066
4.00 -.09500 .05158 .634 -.3698 .1798
5.00 .00200 .03824 1.000 -.2184 .2224
7.00 .01433 .03244 .999 -.2807 .3093
8.00 -.06200 .03501 .675 -.3032 .1792
7.00 1.00 -2.24233* .09292 .007 -3.0969 -1.3878
2.00 -1.69033* .05483 .005 -2.1931 -1.1876
3.00 .51800* .00765 .000 .4608 .5752
4.00 -.10933 .04025 .418 -.4770 .2583
5.00 -.01233 .02052 .994 -.1954 .1708
6.00 -.01433 .03244 .999 -.3093 .2807
8.00 -.07633 .01359 .116 -.1928 .0402
8.00 1.00 -2.16600* .09385 .007 -2.9908 -1.3412
2.00 -1.61400* .05638 .003 -2.0724 -1.1556
3.00 .59433* .01522 .000 .5011 .6876
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
4.00 -.03300 .04234 .980 -.3491 .2831
5.00 .06400 .02438 .363 -.0743 .2023
6.00 .06200 .03501 .675 -.1792 .3032
7.00 .07633 .01359 .116 -.0402 .1928
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Lampiran 10. Hasil Analisis Statistik Uji Shapiro-Wilk dan Levene’s Test
Penghancuran Biofilm dengan SPSS
Case Processing Summary
VAR00001
Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
VAR00002 1.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
2.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
3.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
4.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
5.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
6.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
7.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
8.00 3 100.0% 0 0.0% 3 100.0%
Descriptives
VAR00001 Statistic Std. Error
VAR00002 1.00 Mean 3.0037 .11030
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.5291
Upper Bound 3.4782
5% Trimmed Mean .
Median 3.0960
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Variance .036
Std. Deviation .19104
Minimum 2.78
Maximum 3.13
Range .35
Interquartile Range .
Skewness -1.667 1.225
Kurtosis . .
2.00 Mean 2.9083 .06153
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.6436
Upper Bound 3.1731
5% Trimmed Mean .
Median 2.9040
Variance .011
Std. Deviation .10657
Minimum 2.80
Maximum 3.02
Range .21
Interquartile Range .
Skewness .183 1.225
Kurtosis . .
3.00 Mean .5347 .03919
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound .3660
Upper Bound .7033
5% Trimmed Mean .
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Median .5430
Variance .005
Std. Deviation .06788
Minimum .46
Maximum .60
Range .13
Interquartile Range .
Skewness -.544 1.225
Kurtosis . .
4.00 Mean 2.1137 .00353
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.0985
Upper Bound 2.1288
5% Trimmed Mean .
Median 2.1150
Variance .000
Std. Deviation .00611
Minimum 2.11
Maximum 2.12
Range .01
Interquartile Range .
Skewness -.935 1.225
Kurtosis . .
5.00 Mean 2.7330 .12003
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.2165
Upper Bound 3.2495
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
5% Trimmed Mean .
Median 2.7180
Variance .043
Std. Deviation .20791
Minimum 2.53
Maximum 2.95
Range .42
Interquartile Range .
Skewness .323 1.225
Kurtosis . .
6.00 Mean 2.6760 .21723
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 1.7413
Upper Bound 3.6107
5% Trimmed Mean .
Median 2.8310
Variance .142
Std. Deviation .37626
Minimum 2.25
Maximum 2.95
Range .70
Interquartile Range .
Skewness -1.539 1.225
Kurtosis . .
7.00 Mean 2.6260 .27202
95% Confidence Interval Lower Bound 1.4556
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
for Mean Upper Bound 3.7964
5% Trimmed Mean .
Median 2.7890
Variance .222
Std. Deviation .47114
Minimum 2.10
Maximum 2.99
Range .90
Interquartile Range .
Skewness -1.371 1.225
Kurtosis . .
8.00 Mean 2.6723 .10308
95% Confidence Interval
for Mean
Lower Bound 2.2288
Upper Bound 3.1159
5% Trimmed Mean .
Median 2.7070
Variance .032
Std. Deviation .17854
Minimum 2.48
Maximum 2.83
Range .35
Interquartile Range .
Skewness -.841 1.225
Kurtosis . .
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Tests of Normality
VAR00001
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
VAR00002 1.00 .352 3 . .825 3 .175
2.00 .183 3 . .999 3 .933
3.00 .216 3 . .989 3 .797
4.00 .253 3 . .964 3 .637
5.00 .195 3 . .996 3 .881
6.00 .326 3 . .873 3 .303
7.00 .302 3 . .910 3 .419
8.00 .244 3 . .972 3 .677
a. Lilliefors Significance Correction
Test of Homogeneity of Variances
Levene Statistic df1 df2 Sig.
VAR00002 Based on Mean 4.145 7 16 .009
Based on Median .802 7 16 .597
Based on Median and with
adjusted df
.802 7 6.131 .614
Based on trimmed mean 3.738 7 16 .014
Lampiran 11. Hasil Analisis Statistik One Way ANOVA Penghancuran
Biofilm dengan SPSS
ANOVA
VAR00002 Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 13.488 7 1.927 31.385 .000
Within Groups .982 16 .061
Total 14.470 23
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Uji Post Hoc Games Howell
Penghancuran Biofilm dengan SPSS
Multiple Comparisons
Dependent Variable: VAR00002
(I)
VAR00001
(J)
VAR00001
Mean
Difference
(I-J)
Std.
Error Sig.
95% Confidence
Interval
Lower
Bound
Upper
Bound
Tamhane 1.00 2.00 .09533 .12630 1.000 -1.1518 1.3425
3.00 2.46900* .11705 .020 .7884 4.1496
4.00 .89000 .11035 .344 -1.6728 3.4528
5.00 .27067 .16301 .995 -.9354 1.4767
6.00 .32767 .24363 1.000 -2.2806 2.9359
7.00 .37767 .29353 1.000 -3.4275 4.1829
8.00 .33133 .15097 .936 -.7827 1.4453
2.00 1.00 -.09533 .12630 1.000 -1.3425 1.1518
3.00 2.37367* .07295 .001 1.7263 3.0210
4.00 .79467 .06163 .151 -.6205 2.2099
5.00 .17533 .13488 1.000 -1.2569 1.6076
6.00 .23233 .22578 1.000 -3.5240 3.9887
7.00 .28233 .27889 1.000 -4.8928 5.4575
8.00 .23600 .12005 .984 -.8849 1.3569
3.00 1.00 -2.46900* .11705 .020 -4.1496 -.7884
2.00 -2.37367* .07295 .001 -3.0210 -1.7263
4.00 -1.57900* .03935 .016 -2.4617 -.6963
5.00 -2.19833* .12627 .037 -4.1222 -.2745
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
6.00 -2.14133 .22074 .212 -6.5678 2.2851
7.00 -2.09133 .27482 .345 -7.8994 3.7168
8.00 -2.13767* .11028 .021 -3.6423 -.6331
4.00 1.00 -.89000 .11035 .344 -3.4528 1.6728
2.00 -.79467 .06163 .151 -2.2099 .6205
3.00 1.57900* .03935 .016 .6963 2.4617
5.00 -.61933 .12009 .636 -3.4104 2.1717
6.00 -.56233 .21726 .974 -5.6271 4.5024
7.00 -.51233 .27204 .998 -6.8571 5.8324
8.00 -.55867 .10314 .601 -2.9522 1.8349
5.00 1.00 -.27067 .16301 .995 -1.4767 .9354
2.00 -.17533 .13488 1.000 -1.6076 1.2569
3.00 2.19833* .12627 .037 .2745 4.1222
4.00 .61933 .12009 .636 -2.1717 3.4104
6.00 .05700 .24819 1.000 -2.4135 2.5275
7.00 .10700 .29732 1.000 -3.4856 3.6996
8.00 .06067 .15822 1.000 -1.1292 1.2505
6.00 1.00 -.32767 .24363 1.000 -2.9359 2.2806
2.00 -.23233 .22578 1.000 -3.9887 3.5240
3.00 2.14133 .22074 .212 -2.2851 6.5678
4.00 .56233 .21726 .974 -4.5024 5.6271
5.00 -.05700 .24819 1.000 -2.5275 2.4135
7.00 .05000 .34811 1.000 -2.6401 2.7401
8.00 .00367 .24045 1.000 -2.7262 2.7336
7.00 1.00 -.37767 .29353 1.000 -4.1829 3.4275
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
2.00 -.28233 .27889 1.000 -5.4575 4.8928
3.00 2.09133 .27482 .345 -3.7168 7.8994
4.00 .51233 .27204 .998 -5.8324 6.8571
5.00 -.10700 .29732 1.000 -3.6996 3.4856
6.00 -.05000 .34811 1.000 -2.7401 2.6401
8.00 -.04633 .29089 1.000 -4.0253 3.9326
8.00 1.00 -.33133 .15097 .936 -1.4453 .7827
2.00 -.23600 .12005 .984 -1.3569 .8849
3.00 2.13767* .11028 .021 .6331 3.6423
4.00 .55867 .10314 .601 -1.8349 2.9522
5.00 -.06067 .15822 1.000 -1.2505 1.1292
6.00 -.00367 .24045 1.000 -2.7336 2.7262
7.00 .04633 .29089 1.000 -3.9326 4.0253
Games-
Howell
1.00 2.00 .09533 .12630 .986 -.6700 .8607
3.00 2.46900* .11705 .004 1.6148 3.3232
4.00 .89000 .11035 .064 -.1241 1.9041
5.00 .27067 .16301 .713 -.5795 1.1208
6.00 .32767 .24363 .841 -1.2103 1.8656
7.00 .37767 .29353 .859 -1.6600 2.4154
8.00 .33133 .15097 .487 -.4549 1.1176
2.00 1.00 -.09533 .12630 .986 -.8607 .6700
3.00 2.37367* .07295 .000 1.9551 2.7922
4.00 .79467* .06163 .025 .2314 1.3580
5.00 .17533 .13488 .857 -.6726 1.0233
6.00 .23233 .22578 .933 -1.5373 2.0020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
7.00 .28233 .27889 .936 -2.0211 2.5858
8.00 .23600 .12005 .590 -.4710 .9430
3.00 1.00 -2.46900* .11705 .004 -3.3232 -1.6148
2.00 -2.37367* .07295 .000 -2.7922 -1.9551
4.00 -1.57900* .03935 .003 -1.9347 -1.2233
5.00 -2.19833* .12627 .007 -3.1468 -1.2498
6.00 -2.14133* .22074 .039 -4.0333 -.2494
7.00 -2.09133 .27482 .067 -4.5064 .3238
8.00 -2.13767* .11028 .004 -2.9227 -1.3527
4.00 1.00 -.89000 .11035 .064 -1.9041 .1241
2.00 -.79467* .06163 .025 -1.3580 -.2314
3.00 1.57900* .03935 .003 1.2233 1.9347
5.00 -.61933 .12009 .148 -1.7233 .4846
6.00 -.56233 .21726 .448 -2.5624 1.4378
7.00 -.51233 .27204 .647 -3.0173 1.9926
8.00 -.55867 .10314 .135 -1.5061 .3888
5.00 1.00 -.27067 .16301 .713 -1.1208 .5795
2.00 -.17533 .13488 .857 -1.0233 .6726
3.00 2.19833* .12627 .007 1.2498 3.1468
4.00 .61933 .12009 .148 -.4846 1.7233
6.00 .05700 .24819 1.000 -1.4532 1.5672
7.00 .10700 .29732 1.000 -1.8866 2.1006
8.00 .06067 .15822 1.000 -.7717 .8930
6.00 1.00 -.32767 .24363 .841 -1.8656 1.2103
2.00 -.23233 .22578 .933 -2.0020 1.5373
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
3.00 2.14133* .22074 .039 .2494 4.0333
4.00 .56233 .21726 .448 -1.4378 2.5624
5.00 -.05700 .24819 1.000 -1.5672 1.4532
7.00 .05000 .34811 1.000 -1.8080 1.9080
8.00 .00367 .24045 1.000 -1.5595 1.5668
7.00 1.00 -.37767 .29353 .859 -2.4154 1.6600
2.00 -.28233 .27889 .936 -2.5858 2.0211
3.00 2.09133 .27482 .067 -.3238 4.5064
4.00 .51233 .27204 .647 -1.9926 3.0173
5.00 -.10700 .29732 1.000 -2.1006 1.8866
6.00 -.05000 .34811 1.000 -1.9080 1.8080
8.00 -.04633 .29089 1.000 -2.1196 2.0269
8.00 1.00 -.33133 .15097 .487 -1.1176 .4549
2.00 -.23600 .12005 .590 -.9430 .4710
3.00 2.13767* .11028 .004 1.3527 2.9227
4.00 .55867 .10314 .135 -.3888 1.5061
5.00 -.06067 .15822 1.000 -.8930 .7717
6.00 -.00367 .24045 1.000 -1.5668 1.5595
7.00 .04633 .29089 1.000 -2.0269 2.1196
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
Lampiran 13. Surat Keterangan Penggunaan Program IBM SPSS Statistik
Gambar 7. Surat Keterangan Analisis Data CE&BU
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
Lampiran 14. Dokumentasi Uji Aktivitas Penghambatan dan Penghancuran
Biofilm Dekokta Daun Jamblang
TSBG + S. aureus TSBG + S. aureus + Dekokta Daun Jamblang
Saat Pewarnaan CV Setelah Pewarnaan CV
Gambar 8. Uji Aktivitas Penghambatan Dekokta Daun Jamblang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Sebelum Inkubasi (TSBG + S.aureus) Setelah Inkubasi (TSBG + S.aureus)
Saat Pewarnaan CV
Gambar 9. Uji Aktivitas Penghancuran Dekokta Daun Jamblang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
Lampiran 15. Jadwal Kegiatan
No Nama Kegiatan
Bulan 1 Bulan 2 Bulan 3
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
1 Pengumpulan bahan
2 Pembuatan simplisia
3 Determinasi simplisia
4 Pembuatan serbuk dan
penetapan kadar air
5 Pembuatan dekokta daun
jamblang
6 Kultur bakteri, penyiapan
kontrol, penyiapan bakteri uji
dan induksi pembentukan
biofilm
7 Uji aktivitas penghambatan
dan penghancuran biofilm
8 Pengolahan dan analisis data
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
BIOGRAFI PENULIS
Skripsi berjudul “Aktivitas Penghambatan dan
Penghancuran Biofilm Dekokta Daun Jamblang
(Syzygium cumini (L.) Skeels) Terhadap Staphylococcus
aureus” ini ditulis oleh Agustina Lilik Endah
Permatahati. Penulis lahir di Sorong, 31 Agustus 1998
dan merupakan anak pertama dari dua bersaudara
pasangan Petrus C Hermawan dan Trivonila J
Maturbongs. Penulis mengawali proses pembelajaran di
TK Santa Agnes Sorong (2003-2004) dan melanjutkan
Pendidikan di SD Kristus Raja I Sorong (2004-2010). Pada Tahun 2010 hingga
2013 penulis melanjutkan Pendidikan di SMP Don Bosco Sorong dan
melanjutkan di tingkat menengah ke atas di SMA Agustinus Sorong pada tahun
2013 hingga 2016. Penulis kemudian melanjutkan Pendidikan sarjana strata satu
di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharna Yogyakarta pada Tahun 2016.
Selama masa kuliah, penulis aktif dalam beberapa kegiatan seperti Sekretaris pada
salah satu student club di Fakultas Farmasi yaitu Herbal Garden Team tahun
2016/2017, menjadi anggota divisi konsumsi dalam acara KPU tahun 2016, dan
menjadi Sekretaris Unit Kegiatan Mahasiswa Basket tahun 2016-2017. Tahun
2017 menjadi Sekretaris Pelepasan Wisuda II, menjadi koordinator divisi
konsumsi dan DDU dalam kegiatan Latihan Kepemimpinan Mangerial
Mahasiswa Farmasi 1. Tahun 2018 menjadi koordinator divisi pendaftaran dalam
kegiatan Future Pharmacist in Action #3. Selain itu, penulis juga pernah menjadi
asisten dosen praktikum Mikrobiologi Farmasi pada tahun 2019 dan 2020.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI