uji aktivitas penghambatan enzim alfa …
TRANSCRIPT
UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA GLUKOSIDASE
EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO
(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.)
SKRIPSI
Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Katarina Agnes F. B. Langkeru
NIM : 168114007
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2021
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Jiwaku memuliakan Tuhan, dan hatiku bergembira karena Allah,
Juruselamatku, sebab Ia telah memperhatikan
kerendahan hamba-Nya.
Luk. 1:46-48
Skripsi ini saya persembahkan untuk Yesus Sang Sumber Hidup serta Maria
Bunda penolong selalu; Bapak Alexander Langkeru, Mama Anastasia Lazar,
Kakak Yance Langkeru, segenap keluarga besar, teman-teman;
serta almamater tercinta Universitas Sanata Dharma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN ...................................................... vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiv
ABSTRAK ............................................................................................................ xv
ABSTRACT ......................................................................................................... xvi
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
METODE PENELITIAN ........................................................................................ 2
Bahan Penelitian .................................................................................................. 2
Alat Penelitian ..................................................................................................... 3
Tata Cara Penelitian ............................................................................................ 3
Pengumpulan bahan dan Identifikasi serbuk simplisia ....................................... 3
Penentuan kadar air serbuk simplisia .................................................................. 3
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sambiloto ....................................................... 4
Uji kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis .................................................. 4
Uji kualitatif dengan reaksi warna ....................................................................... 5
Uji penghambatan alfa-glukosidase secara in vitro ............................................. 5
Analisis Hasil ...................................................................................................... 8
HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 9
Identifikasi serbuk simplisia daun sambiloto ...................................................... 9
Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto ....................................... 10
Ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto ....................................................... 10
Uji kualitatif andrografolid ................................................................................ 11
Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ........................................................ 15
KESIMPULAN ..................................................................................................... 24
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
SARAN ................................................................................................................. 24
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 25
LAMPIRAN .......................................................................................................... 28
BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 29
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Perhitungan nilai Rf ................................................................................. 13
Tabel II. Perbandingan IC50 acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto .......... 21
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol daun sambiloto setelah dielusi ................... 12
Gambar 2. Uji reaksi warna senyawa terpenoid.................................................... 15
Gambar 3. Reaksi DNS dengan gula pereduksi .................................................... 16
Gambar 4. Kurva hubungan konsentrasi acarbose dengan persen inhibisi enzim
alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3 ............................................. 18
Gambar 5. Kurva hubungan konsentrasi ekstrak etanol daun sambiloto dengan
persen inhibisi enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3 .......... 19
Gambar 6. Struktur Andrografolid ........................................................................ 20
Gambar 7. Perbandingan % penghambatan acarbose dan ekstrak etanol daun
sambiloto ............................................................................................................... 20
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Identifikasi Serbuk Simplisia Daun Sambiloto.... 26
Lampiran 2. Certificate Of Analysis 3,5- Dinitrosalysilic acid (Sigma Aldrich) . 27
Lampiran 3. Serbuk Simplisia Daun Sambiloto dan Ekstrak Etanol Daun
Sambiloto ................................................................................................................... 28
Lampiran 4. Uji Kadar Air Serbuk Simplisia Daun Sambiloto .............................. 29
Lampiran 5.Data Penimbangan dan Perolehan Rendemen Ekstrak Etanol Daun
Sambiloto ................................................................................................................... 30
Lampiran 6. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum dan Waktu Optimasi ... 31
Lampiran 7. Data perhitungan % Inhibisi dan IC50 Acarbose dan Ekstrak Etanol
Daun Sambiloto ......................................................................................................... 31
Lampiran 8. Uji normalitas Shapiro-wilk ................................................................ 33
Lampiran 9. Uji T tidak berpasangan ....................................................................... 33
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
ABSTRAK
Diabetes melitus adalah sekelompok gangguan metabolik kronis yang
ditandai dengan kondisi hiperglikemia karena kerusakan pada produksi insulin,
kerja insulin, dan atau keduanya. Acarbose merupakan salah satu terapi antidiabetes
yang bekerja dengan cara menghambat aktivitas enzim alfa-glukosidase di dalam
usus sehingga konsentrasi puncak glukosa darah postprandial berkurang dan kadar
gula darah terkendali. Penggunaan obat acarbose dalam jangka waktu panjang dapat
memberikan efek samping gangguan saluran pencernaan, sehingga penggunaan
obat bahan alam sebagai terapi alternatif dapat dipertimbangkan untuk digunakan.
Salah satu jenis obat herbal yang telah diteliti mampu menurunkan kadar glukosa
dalam darah adalah Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.).
Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas penghambatan enzim alfa-
glukosidase dari ekstrak etanol daun sambiloto dengan metode kolorimetri
menggunakan reagen asam 3,5-dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 536 nm. Berdasarkan data yang
telah diperoleh pada penelitian ini, ekstrak etanol daun sambiloto memiliki aktivitas
penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan nilai IC50 2,293 ± 0,050 mg/mL.
Acarbose sebagai kontrol positif memiliki nilai IC50 sebesar 2,187 ± 0,077 mg/mL.
Hasil uji statistik menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara nilai IC50
acarbose dengan ekstrak etanol daun sambiloto (P > 0,05).
Kata kunci : Sambiloto, alfa-glukosidase, ekstrak etanol, maserasi, IC50
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
ABSTRACT
Diabetes mellitus is a group of chronic metabolic disorders characterized by
hyperglycemia due to damage to insulin production, insulin action, or/and both.
Acarbose is an anti-diabetic therapy that works by inhibiting the activity of the en-
zyme alpha-glucosidase in the intestine so that the peak postprandial blood glucose
concentration decreasing and the blood sugar levels being controlled. The use of
long-term acarbose can provide side effects from the digestive tract, so the use of
natural medicines as alternative therapies can be used for substitute. One type of
herbal medicine that has been owned is capable of lowering blood sugar levels is
Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.). Data were obtained from
IC50 values of the ethanol extract of sambiloto against the alpha-glucosidase en-
zyme. This study aims to discuss the inhibitory activity of the alpha-glucosidase
enzyme from the ethanol extract of sambiloto leaves with colorimetry method using
a 3’,5-dinitrosalicylic acid (DNS) and measured by UV-Vis spectrophotometer at
a wavelength of 536 nm. Based on the data obtained in this study, the ethanol extract
of sambiloto leaves had the inhibitory activity of the alpha-glucosidase enzyme with
an IC50 value of 2,293 ± 0,050 mg / mL. Acarbose as a positive control had an
IC50 value of 2,187 ± 0,077 mg / mL. The results of statistical tests showed that
there was no significant difference between the IC50 value of acarbose and the eth-
anol extract of sambiloto leaves (P > 0,05).
Keywords: Sambiloto, alpha-glucosidase, ethanol extract, maceration, IC50
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Diabetes merupakan salah satu masalah kesehatan yang cukup serius dan
sering dijumpai di dunia termasuk Indonesia. Berdasarkan data yang dihimpun dari
International Diabetes Federation (IDF) tahun 2017, prevalensi diabetes melitus
secara global terjadi sebanyak 425 juta kasus, terus mengalami peningkatan yang
signifikan hingga 48% dan diprediksi akan mencapai 629 juta kasus pada tahun
2045. Indonesia menempati urutan ke enam dalam sepuluh besar negara dengan
kasus diabetes tertinggi di dunia. Jumlah kasus yang tercatat pada tahun 2017
adalah 10,3 juta kasus dalam rentang usia 20-79 tahun, dan diperkirakan akan naik
hingga 16,7 juta kasus pada tahun 2045 (International Diabetes Federation, 2017).
Diabetes melitus merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan
karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja
insulin atau kedua-duanya. Berdasarkan klasifikasi etiologis, diabetes melitus
dibagi menjadi diabetes melitus tipe I, diabetes melitus tipe II, diabetes gestasional,
dan diabetes tipe lain (PERKENI, 2015). Sebanyak 90% kasus diabetes melitus
yang terjadi adalah diabetes melitus tipe II (DiPiro J.T., Wells B.G., 2015).
Enzim alfa-glukosidase merupakan enzim di saluran pencernaan yang
mempunyai peran dalam penyerapan karbohidrat, yakni memecah polisakarida
menjadi monosakarida yang kemudian diserap oleh usus dan berakibat
meningkatkan glukosa darah setelah makan. Pada orang yang mengalami diabetes
melitus, obat inhibitor alfa-glukosidase bekerja dengan memperlambat absorbsi
glukosa dalam usus halus, sehingga mempunyai efek menurunkan kadar glukosa
darah sesudah makan (PERKENI, 2015).
Penggunaan tanaman herbal untuk tujuan pengobatan ataupun tujuan
lainnya cenderung meningkat didukung dengan era back to nature (Hasanuddin dan
Kusyanti, 2016). Beberapa obat inhibitor alfa-glukosidase seperti acarbose dan
voglibose yang awalnya diperoleh dari sumber alami melalui fermentasi, dapat
secara efektif mengontrol kadar glukosa darah setelah asupan makanan dan telah
digunakan secara klinis dalam pengobatan diabetes melitus (Nyemb et al., 2018;
Pujirahayu et al., 2019). Akan tetapi, obat ini secara klinis dapat memberikan efek
samping gangguan gastrointestinal seperti perut kembung dan nyeri, mual, reaksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
kulit, abnormalitas fungsi hati, dan kemungkinan diare sehingga penggunaan obat
bahan alam pada saat ini sebagai terapi alternatif lebih dipertimbangkan karena
potensi dan minimalnya efek samping yang diberikan (Yin et al., 2014; Pujirahayu
et al., 2019). Pengobatan DM secara tradisional biasanya dengan memanfaatkan
berbagai jenis tanaman obat yang memiliki kandungan bahan aktif yang dapat
menurunkan kadar gula darah.
Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) adalah salah satu jenis
obat herbal yang telah diteliti mampu menurunkan kadar glukosa dalam darah.
Sambiloto memiliki kandungan kimia diterpen lakton dengan komponen utama
andrografolid, neoandrografolid dan deoksiandrografolid (BPOM RI, 2004).
Beberapa pengujian terkait potensi sambiloto dalam aktivitasnya sebagai
antidiabetes telah diteliti, seperti pada penelitian yang dilakukan oleh Hossain et
al. (2007), ekstrak air dan ekstrak etanol herba sambiloto terbukti mampu
menunjukkan efek penurunan gula darah yang signifikan pada tikus diabetes
terinduksi glukosa dan aloksan. Andrografolid dalam ekstrak etanol herba
sambiloto yang diteliti berperan dalam perbaikan sel-sel β-insulin Langerhans dan
meningkatkan sekresi insulin. Sedangkan pada penelitian yang dilakukan oleh
Sukmawati et al. (2016), kombinasi ekstrak etanol daun sambiloto 234 mg/kgBB
dengan acarbose 2,05 mg/kgBB efektif dalam menurunkan kadar glukosa darah
tikus terinduksi aloksan.
Pengujian aktivitas enzim alfa-glukosidase terhadap tanaman sambiloto masih
tergolong sedikit, sehingga dari beberapa uraian di atas peneliti ingin melakukan
penelitian lebih lanjut terkait potensi daun sambiloto terhadap aktivitas
penghambatan enzim alfa-glukosidase. Penelitian dilakukan secara in vitro dengan
sampel serbuk simplisia daun sambiloto yang diperoleh dari PT. HRL Internasional
Jawa Timur dengan metode kolorimetri menggunakan reagen asam 3,5-
dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis.
METODE PENELITIAN
Bahan Penelitian
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk simplisia daun
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
sambiloto yang diperoleh dari PT. HRL Internasional Gresik, Jawa Timur. Bahan
lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah enzim alfa-glukosidase (Sigma
Aldrich), acarbose (PT. Dexa Medica), Reagen Liebermann-burchard, aquadest,
DMSO, etanol p.a, kloroform p.a, maltosa, metanol p.a., reagen DNS, plat KLT gel
60 F254, toluen p.a.
Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometer UV-Vis
(UVmini-1240 Shimadzu), Vacuum Rotary Evaporator (Buchi), pH meter, neraca
analitik, waterbath, shaker (Innova 2100), vortex, corong pisah, gelas beaker,
erlenmeyer, tabung reaksi, pipet volume, labu alas bulat, pipet tetes, batang
pengaduk, penjepit kayu, cawan porselen.
Tata Cara Penelitian
Pengumpulan bahan dan Identifikasi serbuk simplisia
Bahan uji berupa serbuk simplisia daun sambiloto diperoleh dari PT. HRL
Internasional Gresik, Jawa Timur. Identifikasi serbuk simplisia dilakukan di
Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada,
Yogyakarta.
Penentuan kadar air serbuk simplisia
Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto mengacu pada Farmakope
Herbal Indonesia (2017) menggunakan metode destilasi toluen. Tahap awal
dilakukan dengan membuat pereaksi toluen jenuh air. Pereaksi toluen jenuh air
dibuat dengan cara mencampur toluen P sebanyak 200 mL ke dalam corong pisah
dengan sedikit air, kemudian digojog dan dibiarkan memisah, lapisan air lalu
dibuang. Serbuk simplisia daun sambiloto sebanyak 10 gram ditimbang seksama,
dilarutkan ke dalam 200 mL toluen jenuh air kemudian dimasukkan ke dalam labu
alas bulat. Labu kemudian dipanaskan selama 15 menit sampai mendidih. Setelah
toluen mulai mendidih, penyulingan diatur dengan kecepatan lebih kurang 2 tetes
tiap detik, hingga sebagian besar air tersuling, kemudian kecepatan penyulingan
dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Penyulingan tetap dilanjutkan selama 5 menit.
Setelah selesai, labu dan rangkaian alat didinginkan hingga suhu ruang kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
dibersihkan. Volume air dibaca setelah air dan toluen memisah sempurna dan
dihitung kadar air dengan menggunakan rumus :
% kadar air = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑎𝑖𝑟 (𝑚𝐿)
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) x 100 %
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sambiloto
Pembuatan ekstraksi serbuk simplisia sambiloto dilakukan dengan metode maserasi.
Ekstraksi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut etanol
teknis 95% dengan perbandingan 1:10 w/v. Serbuk simplisia 10 gram ditimbang
seksama, dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian dilarutkan dengan 100 mL
pelarut etanol, lalu diaduk menggunakan shaker dengan kecepatan 200 rpm.
Ekstrak dibiarkan sampai 24 jam. Hasil maserat kemudian dipisahkan dengan cara
divakum menggunakan corong butchner yang sebelumnnya telah dilapisi kertas
saring Whatman no.1. Serbuk simplisia hasil maserasi yang telah terpisah
dimaserasi kembali dengan pelarut etanol yang baru (100 mL) dengan metode yang
sama. Proses maserasi diulangi 2x hingga didapatkan tiga kali hasil maserat. Semua
hasil maserat dikumpulkan dan diuapkan dengan menggunakan vacuum rotary
evaporator dengan suhu 60o C selama 15 menit hingga pekat. Setelah memekat,
ekstrak dikeluarkan dari labu penampung dan dituang ke dalam cawan porselen,
kemudian diuapkan lagi dengan menggunakan waterbath hingga diperoleh ekstrak
kental. Ekstrak yang didapatkan merupakan ekstrak kental dengan bobot tetap dan
sesuai dengan persyaratan (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik
Indonesia, 2010). Rendemen kemudian dihitung dengan menggunakan rumus :
% Rendemen = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑔)
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) x 100 %
Uji kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis
Pengujian secara kualitatif dengan KLT dilakukan dengan menyiapkan larutan uji
sambiloto 0,1 mg/mL dalam etanol dan pembanding androgafolid standar 0,1
mg/mL dalam etanol. Fase gerak yang digunakan adalah n-heksana : etil asetat
(1:2). Fase diam menggunakan plat KLT gel 60 F254. Volume penotolan larutan uji
sebanyak 20 μL dan larutan pembanding sebanyak 10 μL, kemudian bercak noda
diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Jarak tiap bercak dari
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
titik penotolan diukur, dihitung nilai Rf kemudian dibandingkan nilai Rf sampel
dengan nilai Rf andrografolid standar (Departemen Kesehatan RI, 2017).
Uji kualitatif dengan reaksi warna
Uji kualitatif dengan reaksi warna dilakukan dengan reagen Liebermann-Burchard.
Ekstrak sebanyak 100 mg ditimbang dan dilarutkan, kemudian dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dan dilanjutkan dengan penambahan 3 mL reagen Liebermann-
Burchard ke dalam tabung. Terbentuk cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan
larutan menunjukkan adanya kandungan terpenoid (Illing et al., 2017).
Uji penghambatan alfa-glukosidase secara in vitro
Pengujian terhadap penghambatan enzim alfa-glukosidase mengacu pada penelitian
Subramanian et al. (2008) dan Rais et al. (2013) dengan modifikasi.
Preparasi larutan uji
Pembuatan larutan dapar fosfat pH 7 dibuat dengan menimbang sebanyak 3,4 g
KH2PO4 dan dilarutkan dalam 200 mL aquadest, ditambah dengan penambahan
NaOH sebanyak 0,59 g. pH larutan diukur hingga diperoleh pH 7, kemudian dit-
ambah aquadest hingga volume larutan menjadi 250 mL.
Pembuatan larutan enzim alfa-glukosidase dibuat dengan melarutkan 1,0 mg alfa-
glukosidase ke dalam 100 mL dapar fosfat (pH 7).
Pembuatan reagen DNS dilakukan dengan menimbang serbuk DNS sebanyak 500
mg dan dilarutkan dalam 10 mL NaOH 2M (0,8 g/10mL aquadest), ditambahkan
15 g Na K Tartrat sedikit demi sedikit hingga larut, kemudian ditambah aquadest
50 mL sampai larutan bening dan berwarna kuning kemerahan.
Pembuatan larutan stok sampel dilakukan dengan menimbang ekstrak 100 mg,
dilarutkan dalam pelarut DMSO (Dimethyl sulfoxide) hingga 10 mL, dan dilakukan
pembuatan seri konsentrasi hingga mendapatkan konsentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13;
dan 4,16 mg/mL.
Pembuatan larutan stok pembanding acarbose dilakukan dengan menimbang
ekstrak 100 mg, dilarutkan dalam pelarut DMSO (Dimethyl sulfoxide) hingga 10
mL, dan dilakukan pembuatan seri konsentrasi acarbose hingga mendapatkan kon-
sentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
Penentuan panjang gelombang maksimal
Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7
sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak konsentrasi terkecil (0,52 mg/mL) sebanyak
0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5
menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar
fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC.
Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10
menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan
Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm.
Penentuan Operating Time (OT)
Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7
sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak konsentrasi terkecil (0,52 mg/mL) sebanyak
0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5
menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar
fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 5; 10; 15; 20; dan 30 menit
pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanas-
kan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan
menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimal.
Pengujian efek penghambatan larutan blanko
Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan DMSO sejumlah 0,3 mL
dan larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,5 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi
dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kemudian dit-
ambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan
diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS
sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzi-
matik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada pan-
jang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.
Pengujian efek penghambatan larutan kontrol blanko
Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,8 mL dan larutan DMSO sejumlah 0,3 mL
dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit
pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan
penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk
menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektro-
fotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum. Dilakukan 3 kali replikasi
Pengujian efek penghambatan larutan uji
Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7
sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak seri 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL
masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan
pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat
maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15
menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan
dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur
dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksi-
mal. Dilakukan 3 kali replikasi.
Pengujian efek penghambatan larutan kontrol uji
Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,8 mL, larutan ekstrak seri konsentrasi 0,52;
1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC.
Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah
0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan
reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan
reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.
Pengujian efek penghambatan larutan acarbose
Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7
sejumlah 0,5 mL, dan larutan pembanding acarbose dengan seri konsentrasi 0,52;
1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC.
Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah
0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan
reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.
Pengujian efek penghambatan larutan kontrol acarbose
Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,5 mL, larutan pembanding acarbose dengan
seri konsentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak
0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5
menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar
fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC.
Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10
menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan
Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali
replikasi.
Analisis Hasil
Data nilai absorbansi sampel yang diperoleh digunakan untuk menghitung persen
penghambatan enzim alfa-glukosidase, dan dilakukan perhitungan nilai IC50
menggunakan persamaan regresi linear.
Persen penghambatan dihitung dengan rumus:
% penghambatan = Absorbansi kontrol – Absorbansi sampel uji
Absorbansi kontrol X 100
Keterangan :
Absorbansi kontrol (DMSO) = tanpa sampel (kontrol-blanko)
Absorbansi sampel uji = S1-S0
S1 = Absorbansi sampel dengan penambahan enzim
S0 = Absorbansi sampel tanpa penambahan enzim
Nilai IC50 dapat dihitung dari persamaan y = bx + a dengan menggunakan rumus:
IC50 = 𝟓𝟎 – 𝐚
𝐛
Untuk melihat normalitas distribusi data digunakan uji Shapiro-Wilk. Jika data yang
didapatkan terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan uji T tidak berpasangan
dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui apakah ada perbedaan data antara
dua kelompok.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk menguji ekstrak etanol daun sambiloto terhadap
aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase. Pengujian terhadap aktivitas
penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan metode kolorimetri menggunakan
reagen asam 3,5-dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan spektrofotometer UV-
Vis pada panjang gelombang 400-800 nm.
Identifikasi serbuk simplisia daun sambiloto
Dalam penelitian ini, bahan uji yang digunakan adalah serbuk simplisia daun
sambiloto yang diperoleh dari dari PT. HRL Internasional Gresik, Jawa Timur.
Simplisia adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang digunakan untuk
pengobatan dan belum mengalami pengolahan, kecuali dinyatakan lain suhu
pengeringan tidak lebih dari 60oC (BPOM, 2014). Dalam pembuatan simplisia
dilakukan beberapa tahapan seperti pengumpulan bahan baku, sortasi basah,
pencucian, perajangan, pengeringan, sortasi kering, pengepakan, penyimpanan dan
pemeriksaan mutu (Departemen Kesehatan RI, 1985).
Identitas simplisia daun sambiloto dapat diketahui dari pemeriannya berupa
serbuk daun kering, warna hijau, tidak berbau, dan berasa sangat pahit. Batang
tanaman sambiloto tidak berambut, tebal 2-6 mm, persegi empat, batang bagian atas
seringkali dengan sudut agak berusuk. Daun bersilang berhadapan, umumnya
terlepas dari batang, bentuk lanset sampai bentuk lidah tombak, rapuh, tipis, tidak
berambut, pangkal daun runcing, ujung meruncing, tepi daun rata. Permukaan alas
berwarna hijau tua atau hijau kecokelatan, permukaan bawah berwarna hijau pucat.
Tangkai daun pendek. Buah berbentuk jorong, pangkal dan ujung tajam, kadang-
kadang pecah secara membujur. Permukaan luar kulit buah berwarna hijau tua
hingga hijau kecokelatan, permukaan dalam benwarna putih atau putih kelabu. Biji
agak keras, permukaan luar berwarna cokelat muda dengan tonjolan (Departemen
Kesehatan RI, 2017).
Serbuk simplisia yang telah diperoleh kemudian diidentifikasi di Laboratorium
Biologi Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Identifikasi serbuk simplisia dilakukan dengan cara pemerian dan dilakukan
pengamatan simplisia baik secara makroskopik maupun secara mikroskopik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
(Departemen Kesehatan RI, 2017). Hasil identifikasi serbuk simplisia daun
sambiloto yang diperoleh dari Chang (2020) menunjukkan bahwa serbuk simplisia
yang diperoleh benar merupakan daun sambiloto (Lampiran 1).
Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto
Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto pada penelitian ini
menggunakan metode destilasi toluen dan mengacu pada Farmakope Herbal
Indonesia (2017). Pada penentuan kadar air, serbuk simplisia daun sambiloto
ditimbang sebanyak 10 gram dan diperoleh volume air sebesar 0,6 mL, sehingga
diperoleh kadar air simplisia sebesar 6% (Lampiran 4). Dengan demikian, kadar air
serbuk simplisia daun sambiloto telah memenuhi persyaratan kadar air yang telah
ditetapkan (≤ 10%). Tujuan pemeriksaan kadar air adalah untuk memberi batasan
minimal besarnya kandungan air dalam bahan baik ekstrak maupun simplisia.
Makin tinggi kadar air makin mudah untuk ditumbuhi jamur dan kapang sehingga
dapat menurunkan aktivitas biologi simplisia dalam masa penyimpanan (Salim et
al., 2017).
Ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto
Metode yang digunakan untuk ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto adalah
maserasi. Maserasi merupakan salah satu metode ekstraksi dengan tanpa
pemanasan, dimana proses pengekstrakan simplisia dilakukan dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada
temperatur ruangan (kamar). Dilakukan pengadukan yang kontinyu agar zat aktif
dapat masuk ke dalam rongga sel dan mencegah adanya konsentrasi setempat pada
sekitar sel tersebut. Pada saat perendaman simplisia, cairan penyari akan menembus
dinding sel kemudian masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif
kemudian melarutkannya. Zat aktif yang telah larut dapat keluar karena adanya
proses difusi yang disebabkan perbedaan konsentrasi antara larutan yang ada di
dalam rongga sel dan di luar sel (Anggraini dan Fathrah, 2018). Keuntungan utama
dari metode ini ialah tidak dilakukan dengan pemanasan sehingga dapat mencegah
rusak atau hilangnya zat aktif yang ingin disari (Sa’adah dan Nurhasnawati, 2015).
Etanol dipertimbangkan sebagai cairan penyari karena merupakan pelarut
universal, memiliki polaritas yang tinggi, lebih efektif dan steril karena kapang dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas. Selain itu, etanol memiliki titik didih
sebesar 78 oC sehingga ketika dilakukan pemisahan senyawa dari pelarutnya
menggunakan vacuum rotary evaporator, senyawa yang terkandung dalam ekstrak
tidak terdegradasi karena suhu yang tinggi.
Pada proses ekstraksi, 10 gram serbuk simplisia dalam 100 mL etanol 96%
dimaserasi selama 3 x 24 jam dalam suhu ruang. Hasil maserat yang diperoleh
diuapkan dengan menggunakan vacuum rotary evaporator dengan suhu 60o C
selama 15 menit hingga memekat dan diuapkan lagi dengan menggunakan
waterbath hingga diperoleh ekstrak kental. Pada pembuatan ekstrak, dilakukan
replikasi sebanyak 3 kali dengan tujuan untuk memperoleh bobot tetap. Dari hasil
diperoleh % rendemen masing-masing sebesar 19,98%; 20,23%; dan 21,41%,
sehingga diperoleh bobot tetap sebesar 20,54%. Pemerian ekstrak untuk
menunjukkan identitas ekstrak daun sambiloto berupa ekstrak kental berwarna hijau
tua, berbau khas, dan rasa sangat pahit.
Uji kualitatif andrografolid
Uji kualitatif andrografolid dilakukan dengan menggunakan metode
kromatografi lapis tipis dan uji reaksi warna terpenoid. Uji kualitatif dilakukan
untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat dalam ekstrak daun sambiloto.
Kromatografi lapis tipis merupakan teknik analisis yang banyak digunakan untuk
memisahkan campuran senyawa kimia berdasarkan distribusinya di antara dua fase.
Fase diam merupakan bahan pelapis pada lempeng KLT yang biasanya terbuat dari
bubuk silika, alumunium oksida, atau selulosa, sedangkan fase gerak merupakan
pelarut tunggal atau campuran yang menyebabkan ekstrak mengalami pemisahan.
Fase gerak berinteraksi dengan fase diam melalui daya kapilaritas yang
memungkinkan terjadinya pemisahan beragam komponen berdasarkan kelarutan
dan retensinya dalam fase diam dan fase gerak. Setiap senyawa kimia akan bergerak
dengan laju tertentu dan tingkat pergerakannya dinyatakan sebagai faktor retardasi
(Lade et al., 2014).
Rf = 𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑠𝑒𝑛𝑦𝑎𝑤𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑙𝑖𝑡𝑖
𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Uji kualitatif dengan kromatografi lapis tipis menggunakan larutan pengem-
bang n-heksana : etil asetat (1:2) sebagai fase gerak dan silika gel 60 F254 sebagai
fase diam (Departemen Kesehatan RI, 2017). Larutan pembanding yang digunakan
adalah baku andrografolid dari Sigma Aldrich.
Sebelum penotolan, plat KLT akan diaktivasi terlebih dahulu untuk
menghilangkan kelembaban air atmosfer yang teradsorbsi dalam lempeng. Aktivasi
dilakukan dengan memanaskan lempeng sampai 105oC selama 30 menit diikuti
dengan pendinginan dalam suhu ruangan. Lempeng KLT yang sudah diaktivasi
kemudian ditotolkan sesuai penandaan dan dimasukkan hati-hati ke dalam chamber
berisi fase gerak yang sudah dijenuhkan. Uap eluen akan memenuhi ruangan dalam
chamber dan terjadi proses penjenuhan chamber kurang lebih selama 15 menit
(Wulandari, 2011). Bercak yang dihasilkan pada plat KLT dideteksi menggunakan
bantuan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366.
Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol daun sambiloto setelah dielusi (UV 254
nm dan 366 nm)
Keterangan gambar : A = baku andrografolid; B = Ekstrak etanol daun sambiloto
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
Tabel I. Perhitungan nilai Rf
Deteksi UV 254
Baku andrografolid Warna
bercak
Ekstrak etanol
daun sambiloto
Warna bercak
Nilai Rf
0,29 Ungu 0,30 Ungu
0,42 Ungu
0,61 Ungu
0,80 Hijau
Deteksi UV 366
Baku andrografolid Warna
bercak
Ekstrak etanol
daun sambiloto
Warna bercak
Nilai Rf
- - 0,12 Merah muda
0,22 Kebiruan
0,32 Merah muda
0,45 Kebiruan
0,61 Putih
0,72 Putih
0,80 Merah muda
0,88 Ungu
Profil KLT fraksi n-heksana: etil asetat (1:2, v/v) menunjukkan terdapat
beberapa bercak. Bercak pada ekstrak dengan nilai Rf 0,30 pada UV 254 sejajar
dan mendekati nilai Rf pembanding andrografolid yang merupakan senyawa golon-
gan terpenoid (Rf 0,29). Menurut acuan Farmakope Herbal Indonesia (2017), baku
andrografolid di bawah deteksi UV 254 memiliki nilai Rf sebesar 0,45, sedangkan
pada pengujian diperoleh nilai Rf baku andrografolid sebesar 0,29. Selain itu, hasil
KLT pada ekstrak etanol daun sambiloto menunjukkan beberapa bercak dengan
warna yang berbeda. Beberapa bercak yang dihasilkan pada ekstrak di bawah sinar
UV 254 memiliki warna yang sama dengan bercak pada baku andrografolid yakni
berwarna ungu dengan nilai Rf berturut-turut 0,30; 0.42; dan 0,61. Menurut Cai
(2014), jika dua spot berada pada jarak yang sama atau memiliki nilai Rf yang sama,
maka dapat disimpulkan bahwa kedua komponen tersebut adalah senyawa yang
sama. Pada penelitian yang dilakukan oleh Halim et al. (2004), bercak ungu pada
ekstrak sambiloto yang memberikan nilai Rf sebesar 0,28 merupakan senyawa
neoandrografolid (C26H40O8) yang bersifat paling polar dari andrografis lainnya,
sedangkan bercak ungu dengan nilai Rf 0,54 merupakan senyawa andrografolid
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
yang merupakan kandungan utama dari tanaman sambiloto. Salah satu unsur pen-
dukung bahwa ekstrak mengandung andrografolid dapat dilhat dari warna bercak
yang ditampilkan, yaitu berwarna ungu. Namun jika dilihat dari nilai Rf yang
berbeda dengan nilai Rf acuan, belum dapat dipastikan apakah ekstrak yang
digunakan mengandung senyawa target andrografolid.
Sementara itu, hasil elusi pada plat KLT di bawah sinar UV dengan pan-
jang gelombang 366 ditemukan adanya bercak pada ekstrak etanol daun sambiloto,
namun tidak ditemukan adanya bercak pada baku andrografolid. Hal ini dapat
disebabkan karena volume penotolan yang terlalu kecil dan masa penyimpanan
baku andrografolid yang lama. Selain itu, bercak ekstrak pada plat KLT menampil-
kan beberapa warna yang berbeda, menunjukkan bahwa ekstrak yang digunakan
pada penelitian juga mengandung senyawa lain selain senyawa target andrografolid.
Berdasarkan pengujian yang sudah dilakukan, hasil KLT di bawah sinar
UV 254 menunjukkan adanya senyawa yang berfluorosensi. Pada umumnya sen-
yawa aromatik terkonjugasi dan beberapa senyawa tak jenuh dapat menyerap sinar
UV. Senyawa-senyawa ini dapat dianalisis dengan KLT dengan fase diam yang
diimpregnasi indikator fluoresensi dan deteksi dapat dilakukan hanya dengan
pemeriksaan di bawah sinar UV 254 nm. Faktor-faktor yang menyebabkan nilai Rf
bervariasi meliputi dimensi dan jenis ruang, sifat dan ukuran lempeng, arah aliran
fase gerak, volume dan komposisi fase gerak, kondisi kesetimbangan, kelembaban,
dan metode persiapan sampel KLT sebelumnya (Wulandari, 2011).
Uji kualitatif kandungan kimia ekstrak etanol daun sambiloto juga
dilakukan dengan uji reaksi warna senyawa terpenoid. Identifikasi senyawa terpe-
noid dilakukan dengan menggunakan reagen warna Liebermann-Burchard, yakni
didasarkan pada kemampuan suatu senyawa untuk membentuk warna dengan asam
sulfat pekat dalam pelarut asam asetat anhidrat. Pereaksi Liebermann-Burchard
terdiri dari anhidrida asam asetat (p.a), dan asam sulfat (p.a) dengan perbandingan
3:1 (Malec & Pomilio 2003; Siadi, 2012). Identifikasi senyawa terpenoid dengan
reaksi warna dilakukan dengan cara melarutkan 100 mg ekstrak dan dilanjutkan
dengan penambahan reagen Liebermann-Burchard sebanyak 3 mL.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
Gambar 2. Uji reaksi warna senyawa terpenoid
Hasil yang diperoleh menunjukkan hasil positif yakni terbentuknya cincin
kecoklatan pada perbatasan larutan menunjukkan adanya kandungan terpenoid.
Senyawa terpenoid dilaporkan memiliki berbagai aktivitas biologis seperti anti in-
flamasi, antifungi, antioksidan, antibakteri dan antikanker (Warditiani et al. 2014).
Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase
Enzim alfa-glukosidase merupakan enzim di saluran pencernaan yang
mempunyai peran dalam penyerapan karbohidrat (PERKENI, 2015). Aktivitas
enzim alfa-glukosidase seperti maltase dan sukrase dalam menghidrolisis
oligosakarida menjadi glukosa, fruktosa dan monosakarida lain pada dinding usus
halus dapat dihambat oleh senyawa obat inhibitor alfa-glukosidase. Penghambatan
aktivitas enzim ini efektif dalam mengurangi pencernaan karbohidrat dan proses
absorbsinya dalam usus halus sehingga dapat menurunkan kadar gula darah post
prandial penderita diabetes melitus (DepKes RI, 2008).
Aktivitas enzim alfa-glukosidase ditentukan dengan mengukur hasil gula
pereduksi menggunakan 3’,5-dinitrosalicylic acid (DNS). Maltosa merupakan gula
pereduksi yang terdiri dari dua molekul glukosa dan dalam penelitian digunakan
sebagai substrat. Pemberian reagen DNS dalam larutan uji bertujuan untuk
menghentikan reaksi hidrolisis dan dilakukan pemanasan agar terjadi reaksi antara
reagen DNS dan maltosa sebagai gula pereduksi (Aliyah et al., 2017). Semakin
tinggi nilai absorbansi yang dihasilkan, semakin banyak pula gula pereduksi
(glukosa) yang terkandung dalam sampel (Ariandi, 2016).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
Reaksi dengan DNS yang terjadi merupakan reaksi redoks dimana bila ter-
dapat gula reduksi pada sampel, maka larutan DNS yang awalnya berwarna kuning
akan bereaksi dengan gula reduksi dan dengan pemanasan akan menimbulkan
warna jingga kemerahan (Sastrohamidjojo, 2005).
Gambar 3. Reaksi DNS dengan gula pereduksi
(NCBE 2018)
Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ekstrak etanol daun sambiloto
diawali dengan melakukan optimasi panjang gelombang maksimal dan penentuan
Operating Time (OT) atau waktu inkubasi. Pada penentuan optimasi panjang
gelombang maksimal, digunakan ekstrak dari seri konsentrasi terkecil yaitu 0,52
mg/mL. Serapan dibaca dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan
rentang panjang gelombang 400-800 nm dan diperoleh panjang gelombang
maksimal sebesar 536 nm. Penentuan panjang gelombang maksimal dilakukan
dengan tujuan untuk melihat panjang gelombang yang dapat menghasilkan serapan
paling maksimal. Sementara itu, penentuan waktu inkubasi dilakukan dengan
metode yang sama seperti penentuan panjang gelombang maksimal, yakni dengan
menggunakan esktrak dengan seri konsentrasi terkecil, kemudian dilakukan
inkubasi pada beberapa seri waktu, yaitu 5, 10, 15, 20, dan 30 menit. Pengukuran
serapan akan mengacu pada panjang gelombang maksimal yang sudah diperoleh
sebelumnya. Diperoleh pengukuran waktu inkubasi yakni 15 menit. Penentuan
waktu inkubasi dilakukan dengan tujuan untuk memperoleh waktu yang optimal
bagi larutan uji untuk bereaksi.
Pengujian penghambatan enzim alfa-glukosidase daun sambiloto
dilanjutkan dengan beberapa pengujian. Uji penghambatan larutan blanko dan uji
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
penghambatan larutan kontrol blanko dilakukan dengan tujuan faktor koreksi
pelarut yang digunakan yaitu untuk melihat apakah terjadi aktivitas penghambatan
tanpa melakukan penambahan sampel ekstrak dan enzim. Uji penghambatan larutan
blanko dilakukan tanpa menggunakan sampel ekstrak sedangkan uji penghambatan
larutan kontrol blanko tidak menggunakan sampel ekstrak dan enzim.
Pengujian kontrol positif menggunakan acarbose sebagai pembanding.
Acarbose memiliki mekanisme kerja menghambat kerja alfa-glukosidase yang
mengakibatkan tidak semua oligosakarida atau polisakarida dapat terpecah menjadi
monosakarida sehingga dapat mencegah dan menunda perkembangan diabetes
melitus tipe II (Van De Laar et al., 2005). Efek samping dari penggunaan obat
acarbose yang paling umum terjadi adalah perut kembung, perut tidak nyaman, dan
diare (DiPiro J.T., Wells B.G., 2015). Acarbose teruji klinis dapat menghambat
aktivitas enzim alfa-glukosidase dan merupakan obat oral yang telah umum
digunakan di Indonesia dalam pengobatan diabetes melitus tipe II (noninsulin
dependance). Acarbose juga banyak digunakan sebagai pembanding dalam
berbagai literatur (Sukmawati et al 2016, Elmaniar and Muhtadi 2017, Yuniarto dan
Selifiana 2018, Riyanti et al. 2019). Pengujian larutan pembanding acarbose dibuat
dalam seri larutan konsentrasi 0,52; 1,04; 5; 3,13; dan 4,16 mg/mL. Dari pengujian
diperoleh persen penghambatan larutan pembanding acarbose 3 replikasi. Persen
penghambatan selanjutnya digunakan untuk perhitungan nilai IC50.
0
20
40
60
80
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
y = 12.49x + 23.286
r = 0.8935
IC50 = 2,139
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Gambar 4. Kurva hubungan konsentrasi acarbose dengan persen inhibisi
enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3
Dari pengujian larutan pembanding acarbose tiga replikasi diperoleh
persamaan regresi linear y = 12.49x + 23.286 dengan nilai r = 0.8935 untuk
replikasi 1; persamaan regresi linear y = 21.285x + 4.3237 dengan nilai r = 0.9928
untuk replikasi 2; dan persamaan regresi y = 21.228x + 1.6671 dengan nilai r =
0.9793 untuk replikasi 3. Perolehan nilai IC50 pada masing-masing replikasi sebesar
2,139; 2,146; dan 2,277 mg/mL sehingga diperoleh nilai rerata IC50 sebesar 2,187
± 0,077 mg/mL.
Uji aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan menggunakan
bahan uji ekstrak etanol daun sambiloto diawali dengan pembuatan larutan stok
sampel ekstrak kemudian dilakukan uji aktivitas penghambatan dari seri
konsentrasi yang telah dibuat. Persen penghambatan yang diperoleh digunakan
untuk perhitungan nilai IC50 menggunakan regresi linear.
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
y = 21.285x + 4.3237
r = 0.9928
IC50 = 2,146
y = 21.228x + 1.6671
r = 0.9793
IC50 = 2,277
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
Gambar 5. Kurva hubungan konsentrasi ekstrak etanol daun sambiloto
dengan persen inhibisi enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2,
replikasi 3
Dari pengujian penghambatan ekstrak etanol daun sambiloto dengan tiga
kali replikasi diperoleh persamaan regresi linear y = 11.649x + 22.864 dengan nilai
r = 0.9489 untuk replikasi 1; persamaan regresi linear y = 15.557x + 13.959 dengan
nilai r = 0.9358 untuk replikasi 2; dan persamaan regresi linear y = 13.736x +
19.286 dengan nilai r = 0.8977 untuk replikasi 3. Perolehan nilai IC50 pada masing-
masing replikasi sebesar 2,329; 2,316; dan 2,236 mg/mL sehingga diperoleh nilai
rerata IC50 sebesar 2,293 ± 0,050 mg/mL.
0
20
40
60
80
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
0
20
40
60
80
100
0 2 4 6
% in
hib
isi
Konsentrasi (mg/mL)
y = 11.649x + 22.864
r = 0.9489
IC50 = 2,329
y = 15.557x + 13.959
r = 0.9358
IC50 = 2,316
y = 13.736x + 19.286
r = 0.8977
IC50 = 2,293
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Gambar 6. Struktur Andrografolid
(Pubchem, 2021)
Tanaman sambiloto memiliki kandungan utama andrografolid (C20H30O5)
yang masing-masing mengandung sekitar 4%, 0,8 – 1,2 %, dan 0,5 6% di seluruh
tanaman kering, ekstrak batang dan daun. Selain itu, diterpenoid utama yang lain
adalah deoxyandrographolide, neoandrographolide, 14-deoxy-11,12-
didehydroandrographide dan isoandrographolide. Andrografolid merupakan
komponen mayor dari tananaman sambiloto yang telah dilaporkan memiliki
beragam efek farmakologi (Chao and Lin, 2010) dan paling aktif dibandingkan
yang lainnya (Rais et al, 2013).
Gambar 7. Perbandingan % penghambatan acarbose dan ekstrak etanol
daun sambiloto
0
20
40
60
80
100
0.52 1.04 2.08 3.13 4.16
% in
hib
isi
konsentrasi (mg/mL)
Rata-rata % penghambatan
Akarbose Ekstrak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
Tabel II. Perbandingan IC50 acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto
Replikasi
Nilai IC50 (mg/mL)
Acarbose Ekstrak Etanol
Daun Sambiloto
I 2,139 2,329
II 2,146 2,316
III 2,277 2,236
Rata-rata 2,187 ± 0,077 2,293 ± 0,050
Perbandingan hubungan konsentrasi dan persen inhibisi penghambatan
antara acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto dapat dilihat pada Gambar 7,
sedangkan perbandingan perolehan IC50 antar dua kelompok uji tersebut (acarbose
dan ekstrak) dapat dilihat pada Tabel II. Perhitungan persen penghambatan
diperoleh dari data absorbansi sampel, dimana hasil pengukuran absorbansi dari
konsentrasi tinggi ke konsentrasi rendah semakin menurun. Maka dapat dikatakan
bahwa semakin tinggi konsentrasi suatu senyawa maka semakin rendah nilai
absorbansinya (konsentrasi berbanding terbalik dengan nilai absorbansi). Selain itu,
data kedua kelompok uji di atas menunjukkan konsentrasi yang makin tinggi
menyebabkan persen penghambatannya juga semakin tinggi, maka dapat dikatakan
bahwa semakin tinggi suatu konsentrasi maka semakin tinggi aktivitasnya dalam
menghambat enzim alfa-glukosidase. Menurut Swinney (2011), IC50 adalah
konsentrasi suatu senyawa yang menyebabkan penghambatan sebesar 50%.
Dengan demikian dapat dikatakan bahwa IC50 merupakan konsentrasi ekstrak yang
dapat menghambat 50% enzim alfa-glukosidase. Semakin kecil nilai IC50 maka
semakin tinggi efektivitasnya dalam menghambat enzim alfa-glukosidase.
Jika dibandingkan dengan penelitian yang sama dan telah dilakukan
sebelumnya, perolehan nilai IC50 pada pembanding acarbose sebesar 6.2 ± 0.33
mg/mL (Subramanian et al., 2008). Pada penelitian tersebut, acarbose yang
digunakan berasal dari Bayer Pharmaceuticals, Leverkusen, Jerman. Sedangkan
pada penelitian yang dilakukan oleh (Rais et al., 2013), perolehan nilai IC50
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
pembanding acarbose sebesar 1,47 mg/mL tanpa menyebutkan secara jelas sumber
acarbose. Adanya perbedaan perolehan nilai IC50 acarbose dalam penelitian ini
dapat disebabkan karena acarbose yang digunakan bukan merupakan acarbose
murni (produksi pabrik PT. Dexa Medica). Selain terdapat kandungan zat aktif
acarbose, tablet acarbose sendiri memiliki bahan tambahan seperti bahan pengikat,
penghancur, pengisi, dan pelicin dimana zat tambahan atau eksipien ini berfungsi
untuk meningkatkan stabilitas dan bioavaibilitas obat serta efektivitas produk. Oleh
karena itu, ketika dilakukan pengujian aktivitas penghambatan dengan
menggunakan tablet acarbose kemungkinan dapat mengganggu hasil penelitian.
Sementara itu, penelitian yang sama mengenai potensi tanaman sambiloto
sebagai inhibitor enzim alfa-glukosidase juga menghasilkan beberapa variasi nilai
IC50. Penelitian yang dilakukan oleh Subramanian et al. (2008), IC50 yang diperoleh
dari hasil uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ekstrak etanol daun sambiloto
sebesar 17.2 ± 0.15 mg/mL dan perolehan IC50 andrografolid menunjukkan nilai
11,0 ± 0,28 mg/ml. Sementara itu, Rais et al. (2013) juga meneliti aktivitas
penghambatan enzim alfa-glukosidase terhadap isolat andrografolid dari tanaman
sambiloto dan memperoleh IC50 sebesar 38,86 mg/mL. Perbedaan dalam perolehan
hasil IC50 juga dapat disebabkan karena sumber bahan dan metode yang digunakan
berbeda. Kedua penelitian di atas sama-sama menggunakan Microplate reader
sebagai instrumen uji sedangkan substrat yang digunakan adalah paranitrophenyl-
α-d-glucopyranoside (p-NPG), dimana substrat ini secara umum lebih banyak
digunakan dalam berbagai pengujian penghambatan enzim alfa-glukosidase.
Data yang diperoleh dari persen penghambatan acarbose dan ekstrak etanol
daun sambiloto memberikan hasil IC50 yang tidak jauh berbeda. Dari perbandingan
kedua data ini selanjutnya diuji secara statistik. Uji normalitas dilakukan untuk
mengetahui apakah data penelitian yang diperoleh terdistribusi normal atau tidak.
Dari hasil uji normalitas dengan metode Shapiro-wilk diperoleh nilai P > 0.05
sehingga dapat disimpulkan data terdistribusi normal (Lampiran 8). Uji statistik
dilanjutkan dengan Uji T tidak berpasangan (Independent sample T-test) untuk
membandingkan dua kelompok sampel tidak berpasangan. Diperoleh nilai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
signifikansi > 0,05 menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara dua
kelompok uji (Lampiran 9).
Di luar dari pengujian aktivitas penghambatan alfa-glukosidase tanaman
sambiloto, beberapa pengujian mengenai potensi tanaman sambiloto dalam
aktivitasnya sebagai antidiabetik telah banyak diteliti. Pada penelitian yang telah
dilakukan oleh Hossain et al. (2007), ekstrak air dan ekstrak etanol herba sambiloto
terbukti mampu menunjukkan efek penurunan gula darah yang signifikan pada
tikus diabetes terinduksi glukosa dan aloksan. Yu et al. (2008) juga meneliti
kandungan andrografolid dalam herba sambiloto yang meningkatkan penggunaan
glukosa otot pada tikus diabetes melalui stimulasi transporter GLUT-4 sehingga
dapat menurunkan kadar glukosa dalam plasma pada tikus. Selain itu, penelitian
yang sama dilakukan oleh Paramitha dan Rahamanisa (2016) dimana pemberian
ekstrak etanol herba sambiloto dengan dosis berturut-turut 2,1 g/kg BB dan 3,2 g/kg
BB terhadap mencit wistar yang telah diinduksi aloksan dengan dosis berturut-turut
64 mg/kg BB dan 70 mg/kg BB dapat menurunkan kadar glukosa darah. Sedangkan
dari penelitian yang dilakukan oleh Sukmawati et al. (2016), kombinasi ekstrak
etanol daun sambiloto 234 mg/kgBB dengan acarbose 2,05 mg/kgBB efektif dalam
menurunkan kadar glukosa darah tikus terinduksi aloksan. Andrografolid dalam
ekstrak etanol herba sambiloto berperan dalam perbaikan sel-sel β-insulin
Langerhans dan meningkatkan sekresi insulin (Hossain et al., 2007).
Dari hasil uji statistik yang sudah diperoleh, tidak bisa dipastikan kelompok
uji mana yang memiliki potensi penghambatan enzim alfa-glukosidase lebih baik,
namun dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun sambiloto menunjukkan
aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase yang tidak jauh berbeda dengan
acarbose (Nilai IC50 acarbose : ekstrak etanol daun sambiloto = 2,187 ± 0,077
mg/mL : 2,293 ± 0,050 mg/mL). Selain itu, pengujian aktivitas penghambatan
enzim alfa-glukosidase terhadap tanaman sambiloto secara in vitro sampai saat ini
masih tergolong sedikit, sementara pengujian secara in vitro sendiri memiliki peran
penting dalam tahap skrining awal untuk melihat aktivitas farmokologi dalam suatu
tumbuhan. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian-penelitian lebih lanjut
mengenai potensi tanaman sambiloto dalam menghambat enzim alfa-glukosidase.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Ekstrak etanol daun sambiloto memiliki potensi yang baik untuk dapat
dikembangkan dan dipertimbangkan lebih lanjut sebagai alternatif pengobatan
diabetes melitus tipe 2.
KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan
ekstrak etanol daun sambiloto memiliki aktivitas penghambatan enzim alfa-
glukosidase dengan nilai IC50 2,293 ± 0,050 mg/mL dengan acarbose sebagai
kontrol positif memiliki nilai IC50 sebesar 2,187 ± 0,077 mg/mL. Hasil uji statistik
menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara nilai IC50 acarbose dengan
ekstrak etanol daun sambiloto (P > 0,05).
SARAN
Penulis menyarankan untuk melakukan penelitian lebih lanjut mengenai
pengujian kadar andrografolid dalan ekstrak etanol daun sambiloto dan pengujian
kontrol positif dengan menggunakan acarbose murni.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
DAFTAR PUSTAKA
Aliyah, A., Alamsyah, G., Ramadhani, R., and Hermansyah, H., 2017. Production
of α-Amylase and β-Glucosidase from Aspergillus Niger by Solid State
Fermentation Method on Biomass Waste Substrates from Rice Husk, Bagasse
and Corn Cob. Energy Procedia, 136, 418–423.
Anggraini, D. and Fathrah, L., 2018. Activity Test of Suji Leaf Extract (Dracaena
angustifolia Roxb.) on In Vitro Cholesterol Lowering. Jurnal Kimia Sains dan
Aplikasi, 21 (2), 54–58.
Ariandi, 2016. Pengenalan Enzim Amilase (Alpha-Amlylase) dan Reaksi
Enzimatisnya Menghidrolisis Amilosa Pati Menjadi Glukosa. Jurnal
Dinamika, 07 (1), 74–82.
Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat
Indonesia. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010. Monografi Ekstrak
Tumbuhan Obat Indonesia. Volume 1. Jakarta: Direktorat Standarisasi Obat
Tradisional, Kosmetik, dan Produk Komplemen, Badan Pengawas Obat dan
Makanan RI.
BPOM, 2014. Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik
Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.
Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
Cai, L., 2014. Thin Layer Chromatography. Current Protocols in Essential
Laboratory Techniques, 2014, 6.3.1-6.3.18.
Chang, M.J.V., 2020. Uji Aktivitas penghambatan Enzim Alfa-Amilase oleh
Ekstrak Air Daun Sambiloto (Andrographis paniculata Nees.) Secara In Vitro.
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Chao, W.W. and Lin, B.F., 2010. Isolation and identification of Bioactive
Compounds in Andrographis paniculata (Chuanxinlian). Chinese Medicine, 5,
1–15.
Departemen Kesehatan RI, 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan RI, 2008. Pedoman Pengendalian Diabetes Melitus dan
Penyakit Metabolik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan RI, 2017. Farmakope Herbal Indonesia Edisi II.
Departemen Kesehatan RI.
DiPiro J.T., Wells B.G., S.T.L. and D.C. V., 2015. Pharmacotherapy Handbook,
Ninth Edition. McGraw-Hill Education Companies, Inggris.
Elmaniar, R. and Muhtadi, 2017. Aktivitas Penghambatan Enzim α- Glukosidase
oleh Ekstrak Etanol Ubi Jalar Ungu (Ipomoea batatas L .). The 5th Urecol
Proceeding, (18 February), 825–831.
Halim, V.S., Soegihardjo, C.J., and Rizal, D.M., 2004. Pengaruh ekstrak etanol
herba sambiloto ( Andrographis paniculata ( Burm . f .) Nees ) terhadap
spermatogenesis mencit jantan dewasa dan uji kualitatif kromatografi lapis
tipis. Majalah Farmasi Indonesia, 15 (3), 136–143.
Hossain, M.A., Roy, B.K., Ahmed, K., Sarwaruddin Chowdhury, A.M., and Rashid,
M.A., 2007. Antidiabetic activity of Andrographis paniculata. Dhaka
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
University Journal of Pharmaceutical Sciences, 6 (1), 15–20.
Ilmiati Illing, W.S. dan E., 2017. Uji Fitokimia Ekstrak Buah Dengen. Jurnal
Dinamika, 8 (1), 66–84.
International Diabetes Federation, 2017. IDF Diabetes Atlas, 8th edition.
International Diabetes Federation.
Kusyanti, H. dan, 2016. Jenis Tumbuhan Sebagai Obat Penyakit Diabetes Mellitus
Pada Masyarakat Rundeng Kota Subulussalam. Prosiding Seminar Nasional
Biotik 2016, Prosiding Seminar Nasional Biotik.
Van De Laar, Floris A., Peter L. Lucassen Akkermans, Reinier P. Lisdonk, Eloy H.
Van De Rutten, Guy E. Weel, C. Van, 2005. Alfa-Glucosidase Inhibitors for
Patients With Type 2 Diabetes. Diabetes care, 28 (1), 154–163.
Lade, B.D., Patil, A.S., Paikrao, H.M., Kale, A.S., and Hire, K.K., 2014. A
Comprehensive Working, Principles and Applications of Thin Layer
Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical, Biological and
Chemical Sciences, 5 (4), 486–503.
NCBE, 2018. DNSA Reagen Base. National Centre for Biotechnology Education.
http://www.ncbe.reading.ac.uk/MATERIALS/Enzymes/dnsareagent.html,
diakses tanggal 16 November 2020.
Nyemb, J.N., Tchinda, A.T., Talla, E., Nanga, E.B., Ngoudjou, D.T., Henoumont,
C., Laurent, S., Iqbal, J., and Mbafor, J.T., 2018. Vitellaroside, A New
Cerebroside from Vitellaria paradoxa (Sapotaceae) and its Bioactivities.
Advances in Recycling & Waste Management, 06 (01).
Paramitha, M.D. and Rahamanisa, S., 2016. Ekstrak Etanol Herba Sambiloto
(Andrographis paniculata) Sebagai Antidiabetik Terhadap Mencit Wistar
Terinduksi Aloksan. Majority, 5 (5), 75–79.
Perkumpulan Endokrinologi Indonesia, 2015. Konsensus Pengelolaan Dan
Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 Di Indonesia. Jakarta: Perkumpilan
Endokrinologi Indonesia.
Pubchem, 2021. Andrographolide Compound [online].
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Andrographolide, diakses
tanggal 6 Januari 2021.
Pujirahayu, N., Bhattacharjya, D.K., Suzuki, T., and Katayama, T., 2019. α-
Glucosidase Inhibitory Activity of Cycloartane-type Triterpenes Isolated from
Indonesian Stingless Bee Propolis and Their Structure-activity Relationship.
Pharmaceuticals, 12 (3).
Rais et al, 2013. Determination of Andrographolide Isolate Activity To Α-Amylase
and Α-Glucosidase Using Apostolidis and Mayur Method. Traditiona, Vol.
18(3), p 162–166.
Riyanti, S., Ratnawati, J., and Aprilianti, S., 2019. Potensi buah okra (Abelmoschus
esculentus (L.) Moench) Sebagai Inhibitor Alfa-glukosidase. Kartika : Jurnal
Ilmiah Farmasi, 6 (1), 6.
Sa’adah, H. and Nurhasnawati, H., 2015. Perbandingan Pelarut Etanol dan Air pada
Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine americana Merr)
Menggunakan Metode Maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1 (2), 149–153.
Salim, M., Sulistyaningrum, N., Isnawati, A., Sitorus, H., Yahya, Y., and Ni’mah,
T., 2017. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Kulit Buah Duku (Lansium
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
domesticum Corr) dari Provinsi Sumatera Selatan dan Jambi. Jurnal
Kefarmasian Indonesia, 6 (2), 117–128.
Sastrohamidjojo, H., 2005. Kimia Organik, Sterokimia, Lemak, dan Protein.
Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Siadi, K., 2012. Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropha Curcas) Sebagai
Biopestisida Yang Efektif Dengan Penambahan Larutan Nacl. Jurnal MIPA,
35 (1).
Subramanian, R., Asmawi, M.Z., and Sadikun, A., 2008. In vitro α-glucosidase and
α-amylase Enzyme Inhibitory Effects of Andrographis paniculata Extract and
Andrographolide. Acta Biochimica Polonica, 55 (2), 391–398.
Sukmawati et al, 2016. Uji Efek Hipoglikemik Kombinasi Ekstrak Etanol Daun
Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) Dengan Acarbose Pada Tikus
Putih (Rattus norvegicus) Terinduksi Aloksan. Journal of Chemical
Information and Modeling, As-Syifaa (ISSN : 2085-4714), Hal. 75-82.
Swinney, D.C., 2011. Molecular Mechanism of Action (MMoA) in Drug Discovery.
1st ed. Annual Reports in Medicinal Chemistry. Elsevier Inc.
Warditiani, N.K., Larasanty, L.P.., Widjaja, I.N.K.., Juniari, N.P.M., Nugroho, A.E.,
and Pramono, S., 2014. Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak Terpurifikasi
Herba Sambiloto. Jurnal Farmasi Udayana, 1–9.
Wulandari, L., 2011. Kromatografi Lapis Tipis. PT. Taman Kampus Presindo,
Jember. Penerbit Taman Kampus Presindo.
Yin, Z., Zhang, W., Feng, F., Zhang, Y., and Kang, W., 2014. α-Glucosidase
inhibitors isolated from medicinal plants. Food Science and Human Wellness,
3 (3–4), 136–174.
Yu, B.C., Chang, C.K., Su, C.F., and Cheng, J.T., 2008. Mediation of β-endorphin
in Andrographolide-induced Plasma Glucose-lowering Action in Type I
Diabetes-like Animals. Naunyn-Schmiedeberg’s Archives of Pharmacology,
377 (4–6), 529–540.
Yuniarto, A. and Selifiana, N., 2018. Aktivitas Inhibisi Enzim Alfa-glukosidase
dari Ekstrak Rimpang Bangle (Zingiber cassumunar Roxb.) secara In vitro.
Media Pharmaceutica Indonesiana (MPI), 2 (1), 22.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
BIOGRAFI PENULIS
Penulis dengan nama lengkap Katarina Agnes F. B.
Langkeru, lahir di Dili pada tanggal 24 Januari 1998.
Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara dari
pasangan Bapak Alexander Kapitan Langkeru dan Ibu
Anastasia Benedikta Lazar. Penulis menempuh
pendidikan formal di TKK Sta.Theresia KKY Penfui
(2002-2003), SDK St. Arnoldus Janssen Penfui (2003-
2009), SMPK Sta. Theresia Kupang (2009-2012), dan
SMAN 3 Kupang (2012-2015). Pada tahun 2016 penulis
melanjutkan pendidikan ke jenjang perguruan tinggi di
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta. Penulis pernah mengikuti kegiatan
kepanitian JMKI Osteoporosis Day sebagai anggota
divisi perlengkapan (2016), menjadi volunteer dalam
kegiatan Mental Health Issues Campaign (2018), meraih juara 3 dalam lomba lukis
Mental Health Day Competition (2019) dan masuk dalam karya terpilih lomba
fotografi Awareness Psychotrait (2020) yang diadakan oleh Psychofest Fakultas
Psikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI