uji aktivitas antifungi fraksi etanol hasil refluks … fileuji aktivitas antifungi fraksi etanol...
TRANSCRIPT
UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI FRAKSI ETANOL
HASIL REFLUKS DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.)
DARI BEBERAPA DAERAH ZONA IKLIM PANAS (0-
700 MDPL) DI BALI TERHADAP FUNGI Candida
albicans ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE
DIFUSI DISK
Skripsi
NI PUTU CAHYANI PRATIWI A.
1208505090
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, Ida Sang
Hyang Widhi Wasa, karena berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan
skripsi yang berjudul “Uji Aktifitas Antifungi Fraksi Etanol Hasil Refluks
Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) dari Berbagai Daerah Penghasil Daun Sirih
Hijau di Bali terhadap Fungi Candida albicans ATCC 10231 dengan
Menggunakan Metode Difusi Disk”. Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk
memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
Penulisan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari dukungan dan bantuan
dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu
penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Tuhan Yang Maha Esa atas segala kekuatan yang diberikan sehingga
penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini.
2. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
3. Dr. rer. nat. I Made Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan
Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana.
4. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen
pembimbing I yang telah membantu dan membimbing dalam penyusunan
skripsi ini.
5. A.A. Gede Rai Yadnya Putra, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen
pembimbing II yang juga telah membantu dan membimbing dalam
penyusunan skripsi.
6. Kedua orang tua penulis, I Made Ardana dan Ni Made Darmayanti, yang
telah membantu proses pencarian sampel dan tak pernah henti memberikan
dukungan, doa, dan semangat.
7. Tim Penelitian P. betle yaitu Dewi, Utik, Dein, Suastini, Pebri, Budi,
Sulys yang telah menjadi teman diskusi dan berbagi suka-duka dalam
menyusun skripsi ini.
8. Teman Giri Kencana yaitu Eling, Gek In, Dwi, Coktik, dan Nila yang telah
menjadi teman suka-duka sejak awal kuliah dan tak pernah henti memberi
support dan doa.
9. Teman terdekat penulis, I Wayan Yoga Sumantara yang telah memberikan
dukungan, doa, dan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
10. Semua pihak yang tidak bisa penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih sangat jauh dari
sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun dari semua pihak demi karya yang lebih baik di masa yang akan
datang.
Denpasar, Mei 2016
Penulis
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ..................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ...........................................................................ii
KATA PENGANTAR.................................................................................. iii
DAFTAR ISI.................................................................................................iv
DAFTAR ISTILAH.......................................................................................ix
DAFTAR SINGKATAN ...............................................................................x
DAFTAR TABEL ........................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................xii
ABSTRAK .................................................................................................xiii
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang ........................................................................1
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................4
1.3 Tujuan Penelitian.....................................................................5
1.4 Manfaat Penelitian...................................................................5
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan Umum tentang Daun Sirih Hijau .............................6
2.1.1 Klasifikasi.........................................................................6
2.1.2 Deskripsi ..........................................................................7
2.1.3 Kandungan kimia .............................................................7
2.2 Karakteristik Fungi Candida albicans ....................................8
2.2.1 Klasifikasi ........................................................................8
2.2.2 Morfologi..........................................................................9
2.2.3 Media pertumbuhan .......................................................10
2.2.3.1 Media sabaroud dextrose agar (SDA) ..............10
2.2.3.2 Media sabaroud dextrose broth (SDB) .............11
2.3 Candidiasis ............................................................................11
2.4 Terapi Candidiasis.................................................................13
2.5 Aktivitas Daun Sirih Hijau sebagai Antifungi ......................15
2.6 Metode Ekstraksi dengan Refluks .........................................16
2.7 Metode Uji Aktivitas Antifungi dengan Difusi disk .............17
BAB III. METODE PENULISAN
3.1 Rancangan Penelitian ............................................................20
3.2 Lokasi Penelitian ...................................................................20
3.3 Obyek Penelitian ...................................................................21
3.3.1 Daerah penghasil sirih hijau di Bali ..............................21
3.3.2 Jamur C. albicans ATCC 10231 ...................................21
3.4 Bahan Penelitian ....................................................................21
3.4.1 Bahan fraksinasi ............................................................21
3.4.2 Bahan skrining fitokimia ...............................................21
3.4.3 Bahan uji antifungi ........................................................22
3.5 Alat Penelitian .......................................................................22
3.6 Variabel Penelitian ................................................................22
3.6.1 Variabel bebas ...............................................................22
3.6.2 Variabel terikat ..............................................................23
3.6.3 Variabel terkendali ........................................................23
3.7 Batasan Operasional Penilitian .............................................23
3.8 Prosedur Penilitian ................................................................24
3.8.1 Determinasi tanaman .....................................................24
3.8.2 Pengambilan dan preparasi sampel ...............................24
3.8.3 Penetapan susut pengeringan serbuk simplisia ............. 24
3.8.4 Pembuatan fraksi etanol daun sirih hijau ...................... 25
3.8.5 Penetapan susut pengeringan fraksi etanol ....................25
3.8.6 Skrining fitokimia fraksi etanol daun sirih hijau ...........26
a. Pembuatan larutan uji skrining fitokimia ................. 26
b. Pemeriksaan alkaloid ................................................26
c. Pemeriksaan flavonoid...............................................26
d. Pemeriksaan saponin..................................................27
e. Pemeriksaan tanin dan polifenol ...............................27
f. Pemeriksaan glikosida............................................... 27
g. Pemeriksaan steroid dan triterpenoid ........................28
3.8.7 Pembuatan kontrol positif flukonazol ...........................28
3.8.8 Peremajaan C. albicans .................................................28
3.8.9 Pembuatan suspensi C. albicans ....................................28
3.8.10 Pemilihan konsentrasi terbaik ..................................... 29
3.8.11 Uji aktivitas antifungi difusi disk ................................29
3.9 Analisis Data .........................................................................30
3.10 Skema Kerja ........................................................................32
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Determinasi Tanaman ...........................................................33
4.2 Pengambilan dan Preparasi Sampel ......................................34
4.3 Susut Pengeringan Serbuk Simplisa dan Ekstrak ..................35
4.4 Pembuatan Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ..........................37
4.5 Skrining Fitokimia ................................................................39
4.6 Pemilihan Konsentrasi Terbaik .............................................41
4.7 Uji Aktivitas Antifungi .........................................................42
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan ...........................................................................49
5.2 Saran ......................................................................................49
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................50
LAMPIRAN.................................................................................................58
DAFTAR ISTILAH
Patogenesis : Mekanisme penyebab penyakit
Resistent : Katagori dimana isolat/mikroba tidak dapat dihambat oleh
konsentrasi yang telah ditentukan.
Intermediate : Katagori dimana isolat/mikroba dapat dihambat dengan
konsentrasi tertentu secara minimal.
Suspectible : Katagori dimana isolat/mikroba dapat dihambat dengan
konsentrasi tertentu secara maksimal.
Hifa : Elemen terkecil jamur yang berbentuk benang-benang
filamen dan merupakan bentuk vegetatif/fase pertumbuhan
jamur
Miselium : Kumpulan hifa yang membentuk jalinan
Blastospora : Spora aseksual pada sel ragi yang berbentuk tunas/kuncup
Pseudomiselium : Sel-sel tunas khamir yang memanjang dan tidak melepaskan
diri dari sel sel induknya
Blastokonidia : Pembentukan konidia melalui proses pertunasan
Klamidokonidia : Spora aseksual bersel satu dan berdinding tebal biasanya
bulat yang dihasilkan dari ujung sel-sel hifa
Oportunistik : Kesempatan yang dimiliki oleh organisme yang biasanya
tidak menyebabkan penyakit pada orang dengan sistem
kekebalan tubuh yang normal, tetapi dapat menyerang
orang dengan sistem kekebalan tubuh yang buruk.
Pradifusi : Tahapan awal sebelum proses difusi
DAFTAR SINGKATAN
AIDS : Acquired Immuno Deficiency Syndrome
HIV : Human Immunodeficiency Virus
ATCC : American Type Culture Collection
SSP : Sistem Saraf Pusat
SDA : Sabaroud Dextrose Agar
SDB : Sabaroud Dextrose Broth
CFU : Colony Forming Unit
MIC : Minimum Inhibitory Concentration
LSD : Least Significant Differences
ABSTRAK
Candida albicans adalah jamur yang paling sering menyebabkan infeksioportunistik pada manusia. Kandungan kimia yang terdapat pada daun sirih hijau(Piper betle L.) dipengaruhi oleh tempat tumbuh dan iklim. Tujuan dari penelitianini untuk mengetahui aktivitas antifungi dari fraksi etanol hasil refluks daun sirihhijau dari beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700 MDPL) di Bali danuntuk mengetahui apakah terdapat perbedaan kandungan kimia pada setiap fraksitersebut.
Uji aktivitas antifungi dilakukan dengan metode difusi disk. Sampel yangdigunakan adalah delapan fraksi etanol hasil refluks daun sirih hijau (P. betle L.)dari beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700 MDPL) di Bali dengankonsentrasi 200 mg/mL dan kontrol positif flukonazol. Uji pendahuluan untukmengetahui perbedaan kandungan kimia dilakukan dengan uji skrining fitokimia.Analisis data dilakukan analisis deskriptif dengan mengklasifikasikan diameter zonahambat berdasarkan CLSI dan analisis ANOVA-One Way taraf kepercayaan 95%serta uji LSD.
Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan terdapat tiga daerah yang memilikiaktivitas yang berbeda signifikan (P<0,05) dan lima daerah lainnya tidakmenghasilkan aktivitas yang berbeda signifikan (P>0,05). Delapan fraksi etanoldari beberapa daerah tersebut menghasilkan diameter zona daya hambat denganukuran yang beragam namun menurut CLSI seluruh diameter zona hambattersebut termasuk dalam kategori intermediate. Berdasarkan hasil skriningfitokimia kandungan kimia yang terdapat pada delapan fraksi etanol dari beberapadaerah adalah flavonoid, tanin dan polifenol, glikosida, dan steroid. Sehingga,tempat tumbuh daun sirih hijau yang berbeda secara kualitatif tidakmempengaruhi keberadaan kandungan kimianya namun diduga kadarnya yangberbeda-beda menyebabkan aktivitas antifungi yang dihasilkan juga berbeda-beda.
Kata kunci : Candida albicans, Piper betle (L.), Antifungi, Refluks, Fraksi Etanol,Difusi Disk
ABSTRACT
Candida albicans is a fungus that most often cause opportunistic infections inhumans. The chemical constituents present in Piper betle L. leaves of the familyPiperaceae strongly influenced by the growing and climate. The purpose of thisstudy to know the antifungal activity of ethanol fraction results reflux P. betle L.leaves from some areas with a high climate zones (0-700 masl) in of Bali and tofind out if there are diferences in the chemical constituents of each fraction.
Antifungal activity test performed by disk diffusion method. The samples areeight ethanol fraction results of reflux from P. betle L. leaves collected from someareas with a high climate zones (0-700 masl) in Bali with a concentration of 200mg/mL and positive control used fluconazole 1024 µg/mL. A preliminary test totell the difference of the chemical content of a test screening was donewith phytochemicals. Data analysis was conducted by classifying the descriptiveanalysis of inhibition zone diameter by CLSI and One Way ANOVA analysis -level of 95 % as well as LSD.
Based on the research results indicate that there are three areas that havedifferent activity significantly (P < 0.05) and five other areas does not producesignificantly different (P > 0.05). According to the Clinical and LaboratoryStandards Institute eight ethanol fraction from some of the areas produce theinhibitor of diameter zone in the intermediate category. Based on the results ofphytochemical screening, chemical content contained in eight fractions of ethanolfrom some areas are flavonoids, tannins and polyphenols, glycosides, and steroids.
Thus, a betel leaf green grow qualitatively different does not affect the existenceof its chemical content but suspected the levels of different causes antifungalactivity generated also varies.
Keyword : Green betel leaf, Piper betle L., ethanol fraction, reflux, Candidaalbicans, Difusi disk