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Troponine - Myoglobine
Bilan du Contrôle de qualitéPro Bio Qual
M. Manchon – R. Meley – JC Eynard – D. Grafmeyer
EPU 10 Avril 2006
Plan
Rappel de la structure et des formescirculantes
Hétérogéneité des méthodes dedosages
Résultats du Contrôle Pro Bio Qual
Les trois molécules deTroponine
Troponine C 18 kDa fixe le calcium,
identique dans tous les muscles
Troponine T 37 kDa - 298 AA, isoformes cardiaque etsquelettique
Troponine I 24 kDa – 210 AA,
fait partie du complexe régulateur,existe sous 3 isoformes dont l’isoformecardiaque
Myocyte Formes circulantes
dans le sang, après nécrose
myofibrille
cytosol
précoces tardives
T libre
I libre
T – C – I
C – I
Formes dégradées
légende
Formes circulantes
Juste après la nécrose cardiaque la troponine libred’origine cytosolique est retrouvée dans le sang
Au pic, formes complexées, C-I ou C-I-T Présence de formes dégradées - Rôle des
protéases lysosomiales - Les extrémités N et C dela Tn I sensibles à la protéolyse - Site de coupureen position 27
Phosphorylation et Oxydation des SH de la Tn I---------------------
Problème des isoformes foetales
Difficultés des immunodosages
Dosages Immunometriques (sandwich)en phase hétérogène
Expression épitopique Calibration Anticoagulants Centrifugation Sensibilité
Expression épitopique
Anticorps dirigés contre la partiecardiospécifique mais reconnaissentl’ensemble des formes circulantes defaçon hétérogène
Les zones N et C terminales sont plusfragiles : proteolyse, phosphorylation
Liaison avec la Tn C Liaison avec l’héparine
Différents anticorps utilisés
NH2 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 COOH
AxSym
Architect
Advia Centaur
Access
AIA II
Vitros ECI
AIO
Molécule de Troponine I
= Dégradation ou phosphorylation
= liaison I - C= partie la plus stable
Calibration Troponine I
Le calibrant n’est encore passtandardisé
Matériau de référence internationaldécidé par l’AACC : complexe ternaireTn I-T-C sous forme liquide titré par leNIST
Autres difficultés
Anticoagulants :- EDTA chélate le Ca et provoque la rupture des
complexes d’où forte proportion de Troponine libre- Héparine semble modifier l’interaction avec les
anticorps d’où résultats différents entre sérum etplasma
Une centrifugation insuffisante peut conduireà des faux positifs à cause de débrisd’hématies
Anticorps hétérophiles
Contrôle ponctuel Pro-Bio-Qual
4 enquêtes par an Tn I, Tn T, Myoglobine 3 niveaux de concentration Sérum humain surchargé en myoglobine
et en complexe ternaire I-T-C Existe depuis 2003, nombre croissant
d’inscrits
Popularité des méthodes
Troponine T
Elecsys Roche24 réponses en 2002,42 en 2006 Apparition du cardiac
reader
Troponine I
202 réponses en 2002,219 en 2006
Grand nombre detechniques
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
1 2 3 4
Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)
Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)
Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (bioMérieux)
Vitros ECi (Ortho Diagnostics)
Popularité des techniques troponine I
0
5
10
15
20
25
30
Acces
s (B
eckm
an)
Advia C
enta
ur (Bay
er D
iagnost
ics)
AIA (E
urogén
étics
)
Archite
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nostics
)
AxSym
(Abbott
Diagnost
ics)
Dimen
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ade B
ehrin
g)
Imm
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Stratu
s CS (D
ade B
ehrin
g)
Vidas
(bio
Mér
ieux)
Vitros E
Ci (Orth
o Diag
nostics
)
CV
%
2003
2004
2005
2006
Troponine I
Précision interlaboratoires (CV%)
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
16,0
18,0
20,0
Acces
( Bec
kman
)
Advia
Centa
ur (B
ayer
)
AIA (E
urog
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Abbot
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(Abb
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Dimen
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Vidas (
Biomér
ieux)
Vitros
Eci
(Orth
o)
CV
tr
mo
y %
contrôle seuilcontrôle positif contrôle très positif
Précision en fonction des sérums de contrôle (2005)
0
200
400
600
800
1000
0 4 8 12 16 20
Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)
Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)
Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (bioMérieux)
Vitros ECi (Ortho Diagnostics)
Différences inter techniques 2003 – 2004% de variation
0
200
400
600
800
1000
0 4 8 12 16 20
Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)
Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)
Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (bioMérieux)
Vitros ECi (Ortho Diagnostics)
Différences inter techniques 2005 – 2006% de variation
Cas de l’AxSym et de l’Architect
Hypothèse G. Lefèvre
24-40 40-49 87-92 24-40 40-49 87-92
- Si altération de la zone 24-40 AxSym plus bas que Architect- Si altération ou mauvaise reconnaissance de la zone 40- 49Perturbation des résultats sur les 2- Si altération de la zone 87-92 Pas de conséquence
AC Capture
AC Révélation
Essais à faire
Fabriquer des sérums de contrôle surchargésavec d’autres formes de Troponine : formeslibres, complexes binaires, formesphosphorylées, dégradées
Tester en parallèle différentes techniques surdes sérums de patients obtenus au coursd’une cinétique post infarctus du myocarde
Evaluer les techniques en terme de sensibilitéet de spécificité
Plan
Rappel de la Structure Méthodes de dosage Résultats du contrôle Pro Bio Qual
Popularité Précision Exactitude Essai d’intercalibration
Structure de la Myoglobine
Protéine héminique deforme sphéroïde et defaible poids moléculaire(17,8 kDa)
Il n’existe pas d’isoformecardiospécifique
Dosage de la Myoglobine
Le dosage de la myoglobine est réalisésur sérum ou plasma hépariné.
La myoglobine est une molécule stablequi se conserve bien dans le sérum.
Méthodes de dosage
Dade BehringRéactif N Latex BNNéphélémétrie
BeckmanBayerEurogeneticsAbbottDade BehringRocheBiositeBioMerieux
AccessAdvia CentaurAIAArchitect, AxsymDimension, Stratus CSElecsysTriageVidas
Immunodosagesavec marqueurs(79 % des techniques)
Dade BehringOlympusRoche
Intégra, TurbiquantAU TurbidimétrieTinaquant
Turbidimétrie(20 % des techniques)
FournisseurTechniquePrincipe
Popularité des méthodes
0%
20%
40%
60%
80%
100%
1 2 3 4
Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)
Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)
Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring)
Tinaquant (Roche Diagnostics) Vidas (bioMérieux)
2003 2004 2005 2006
Précision Interlaboratoire
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
Acces
s/Lxi
(Bec
kman
)
Advia
Centa
ur (Bay
er D
iagnost
ics)
AIA (E
urogén
étics
)
AxSym
(Abbott
Diagnost
ics)
Dimen
sion (D
ade B
ehrin
g)
Elecs
ys (R
oche
Diagnost
ics)
Inte
gra (R
oche D
iagnost
ics)
Stratu
s CS (D
ade
Behrin
g)
Tinaq
uant (
Roche D
iagnost
ics)
Vidas
(bio
Mér
ieux)
CV
%
2003
2004
2005
2006
70
80
90
100
110
120
130
0 100 200 300 400 500
Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)
Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)
Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring)
Tinaquant (Roche Diagnostics)
µg/l
%
Différences inter techniques
Essai d’intercalibration But : évaluer l’importance de l’étalonnage. Méthode :
- préparation d’une solution standard de myoglobinehumaine dans 4% d’albumine, soit une concentrationde 250 µg/L de myoglobine (Échantillon U1).- préparation d’un spécimen de concentration del’ordre de 60 µg/L (Échantillon U2).- analyse au cours d’une même série.
Résultats : l’échantillon U2 est recalculé en utilisantU1 comme standard.
Essai d'intercalibration
0 50 100 150 200 250
Access
Advia
AIA
Axsym
BN
Turbitimer
Dimension
Elecsys
Intégra
Opus
Stratus
Tinaquant
Vidas
An
alys
eur
Myoglobine µg/L
U2
U1
Grande dispersion des Résultats de U1 et U2
Essai de recalibration à partir de U1 pris comme étalon à
250 µg/L
Conclusions
Pas de standardisation Précision des techniques acceptable Grande variabilité inter technique
Suivi des patients avec la même technique Méthode de dépannage identique à la
technique de routine
Bibliographie Recommandations sur la prescription, le dosage et
l’interprétation des troponines cardiaques Travail duGroupe de travail mixte SFBC – CNBH « Troponines »
ABC 2005 63 (3) : 245-61 Les Troponines et la Myoglobine - Fiche
Immunoanalytique - O. Gaillard Cahiers de formation Les marqueurs cardiaques n°27
2002 Standardization of immunoassay for mesurement of
myoglobin in serum. M. Panteghini et coll. ClinChimica Acta 341 (2004) 65-72.