TRAPIANTO TRAPIANTO APLOIDENTICOAPLOIDENTICO

RUOLO DEL LABORATORIO RUOLO DEL LABORATORIO DI PROCESSAZIONE DI PROCESSAZIONE

CELLULARECELLULARE

11Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

SELEZIONE CELLULARE SELEZIONE CELLULARE SEMPLICESEMPLICE

22Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

METODO DI SELEZIONE METODO DI SELEZIONE

SELEZIONE IMMUNOMAGNETICASELEZIONE IMMUNOMAGNETICA

33Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

PRINCIPI DI PRINCIPI DI FUNZIONAMENTOFUNZIONAMENTO

Particelle microscopiche (50 nm )costituite Particelle microscopiche (50 nm )costituite da destrano più componente ferrosa da destrano più componente ferrosa intensamente paramagnetica ( inerti non intensamente paramagnetica ( inerti non alterano le funzioni cellulari )alterano le funzioni cellulari )

Ogni particella è legata ad un anticorpo Ogni particella è legata ad un anticorpo specificospecifico

Apparecchio a colonna con un potente Apparecchio a colonna con un potente magnete permanentemagnete permanente

44Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

ESEMPIESEMPI

Particelle CliniMACS della ditta Mylteni Particelle CliniMACS della ditta Mylteni sono specifiche per diversi antigenisono specifiche per diversi antigeni

1.1. Cellule staminali e progenitriciCellule staminali e progenitrici

2.2. MonocitiMonociti

3.3. Natural Killers Natural Killers

4.4. Cellule BCellule B

5.5. Sottopopolazioni TSottopopolazioni T55Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

DUE TIPI DI REAZIONEDUE TIPI DI REAZIONE

1.1. Diretta ( sull’ ag cellulare )Diretta ( sull’ ag cellulare )

2.2. Indiretta ( contro la Biotina legata a un Ac Indiretta ( contro la Biotina legata a un Ac specifico contro un Ag selezionato ) specifico contro un Ag selezionato )

66Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

MODALITA’ DI SELEZIONEMODALITA’ DI SELEZIONE

77Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

MODALITA’ DI SELEZIONEMODALITA’ DI SELEZIONE

Per arricchimentoPer arricchimento

Per deplezionePer deplezione

88Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

MATERIALIMATERIALI

Flacone da 7,5 ml che contiene il reattivo Flacone da 7,5 ml che contiene il reattivo CLINIMACS specifico per l’ ag desiderato CLINIMACS specifico per l’ ag desiderato ( nel ns caso selezione per arricchimento ( nel ns caso selezione per arricchimento dei CD 34 )dei CD 34 )

Un flacone lega fino a 0.6X10 esp 9 CD 34 Un flacone lega fino a 0.6X10 esp 9 CD 34 selezionandoli da una raccolta di max selezionandoli da una raccolta di max 60X10 esp 9 cellule nucleate totali. Se uso 60X10 esp 9 cellule nucleate totali. Se uso 2 flaconi raddoppio la capacità.2 flaconi raddoppio la capacità.

99Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

MATERIALIMATERIALI

1010Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

PARTE SECONDAPARTE SECONDA

Perché trapiantare solo CD 34 ?Perché trapiantare solo CD 34 ?

1111Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

VANTAGGI E SVANTAGGI DELLA VANTAGGI E SVANTAGGI DELLA ELIMINAZIONE DEI LINFOCITI TELIMINAZIONE DEI LINFOCITI T

Vantaggio : no GVHDVantaggio : no GVHD

Svantaggi : no GVLSvantaggi : no GVL

più lento recupero risposta più lento recupero risposta

immune immune

1212Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

INFUSIONE DI LINFOCITI T INFUSIONE DI LINFOCITI T CONTROLLABILICONTROLLABILI

Linfociti T controllabili mediante la Linfociti T controllabili mediante la transduzione di un gene suicida transduzione di un gene suicida

1313Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

Terapia con linfociti T transfettatiTerapia con linfociti T transfettati

1414Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

COME E’ FATTO UN VETTORE COME E’ FATTO UN VETTORE CON GENE SUICIDACON GENE SUICIDA

1515Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11

COME FUNZIONACOME FUNZIONA

Attivabile mediante la somministrazione di Attivabile mediante la somministrazione di sostanze esogene ( ganciclovir )sostanze esogene ( ganciclovir )

Dopo somministrazione del farmaco, l'enzima Dopo somministrazione del farmaco, l'enzima tirosin-chinasi provoca una fosforilazione del tirosin-chinasi provoca una fosforilazione del ganciclovir, che si trasforma in ganciclovir-ganciclovir, che si trasforma in ganciclovir-trifosfato e si incorpora nel DNA nel corso della trifosfato e si incorpora nel DNA nel corso della replicazione. Il "falso" nucleotide causa replicazione. Il "falso" nucleotide causa successivamente la rottura del filamento del successivamente la rottura del filamento del DNA, bloccando di fatto il processo di DNA, bloccando di fatto il processo di replicazione e provocando la morte della cellula. replicazione e provocando la morte della cellula.

1616Gaiato 16-07-11Gaiato 16-07-11