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FACULTAD DE ESTOMATOLOGÍA
EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO DE UNA
SOLUCIÓN A BASE DE CAMELIA SINENSIS Y
MINTHOSTACHYS MOLLIS FRENTE A FLORA
SALIVAL MIXTA EN PACIENTES ORTODÓNTICOS
TESIS PRESENTADA POR
FERNÁNDEZ SÁENZ KARLA
Y
GARCÍA LECCA CARLA
PARA OPTAR EL TÍTULO DE CIRUJANO DENTISTA
LIMA-PERÚ
2009
2
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Nuestro Dios quien nos ha guiado en este largo camino y nos ha dado fuerza interna para vencer todos los obstáculos.
Nuestras familias por ser el motor y motivo en el transcurso de nuestra carrera universitaria, por brindarnos su apoyo y confianza para la realización de nuestros proyectos de vida.
A la memoria de Angelo Gonzales.
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A nuestra Universidad Inca Garcilaso de la Vega por abrirnos sus puertas para seguir y culminar la carrera de Estomatología.
A nuestro Decano Dr. Jorge Lazo Manrique al que debemos parte de este triunfo, por su colaboración brindada para la realización de la presente tesis. A nuestro amigo Ney Paredes por sus palabras de aliento e impulso a seguir delante a pesar de las adversidades, así como también por su tiempo y colaboración desinteresada para la realización del presente estudio. Al profesor César Fuertes y Guillermo Guerrero por su aporte de conocimientos y motivación guiándonos siempre por el camino de un trabajo riguroso. Al Dr. Julio Ruiz, por ofrecernos su ayuda y cooperación en el área de microbiología durante la ejecución de nuestra investigación. A nuestros asesores Dr. Tafur, Dr. Gabrieli, Dr. Guzmán, Dr. Torres, por sus enseñanzas tanto en el proyecto como en la tesis y por brindarnos la confianza necesaria desde el primer día en que comenzamos a trabajar juntos. A nuestros amigos y todas aquellas personas que de alguna u otra manera nos han apoyado en todas las circunstancias posibles y fueron participes en la elaboración del presente trabajo.
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TABLA DE CONTENIDO Pág.
I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………...1 II. MARCO TEÓRICO…………………………………………………………………3 2.1 ANTECEDENTES…………………………………………………………….......3 2.2 BASES TEÓRICAS…………………………………………………………......11 2.3 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA………………………………….........52 2.4 JUSTIFICACIÓN…………………………………………………………..........53 2.5 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN………………………………….…....53 2.6 HIPÓTESIS……………………………………………………………………....54 III. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………...…….55 3.1 TIPO DE ESTUDIO………………………………………………………..…….55 3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA………………………………………………….....55 3.3 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES……………………………….....57 3.4 MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………...……58 3.5 PROCEDIMIENTOS Y TÉCNICAS……………………………………...…….58 3.6 RECOLECCIÓN DE DATOS………………………………………………..…64 IV. RESULTADOS……………………………………………………………..…….65 V. DISCUSIÓN……………………………………………………………………….69 VI. CONCLUSIONES……………………………………………………...………...72 VII. RECOMENDACIONES………………………………………………………....73 VIII. RESUMEN……………………………………………………………………....74 IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………......86 X. ANEXOS…………………………………………………………………………...82
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I. INTRODUCCIÓN
Las plantas han estado íntimamente ligadas al hombre desde sus inicios,
siendo parte de su alimentación y también útiles para la cura de sus dolencias.
Diferentes civilizaciones, tanto occidentales como orientales, han venido
usándolas constantemente y de manera empírica en el campo de la salud por
lo cual su importancia y utilidad es irrefutable. Con el advenimiento de la
tecnología y estudios de investigación sobre ellas, se ha podido identificar sus
componentes y principios activos concediendo a la fitoterapia un espacio
importante dentro del arsenal terapéutico. De esta manera, se han venido
utilizando a niveles generales como antibacterianos, antiinflamatorios,
anticarcinógenos, cicatrizantes, anticonceptivos y analgésicos.
Así, en el capítulo II, se presentan las bases teóricas de la Camelia sinensis y
la Minthostachys mollis en lo que respecta a sus características de género,
aspectos botánicos, componentes principales, usos y aplicaciones. De igual
manera, se nombran los antecedentes relacionados que servirán de marco
referencial para la propuesta del presente estudio de demostrar la efectividad
antibacteriana de una solución a base de ambas plantas sobre flora salival
mixta en pacientes ortodónticos justificándose el presente trabajo en la
utilización de elementos naturales aplicados en higiene oral.
A continuación, en el capítulo III se detalla el tipo de estudio, los
procedimientos y técnicas de muestreo, la recolección de las muestras
salivales con su consecuente procesamiento en laboratorio y siembra en
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placas TSA, así como también la posterior colocación de discos embebidos en
las soluciones estudio para medir sus halos de inhibición a las 24 horas.
Seguidamente, en los capítulos IV, V, VI y VII se muestran mediante tablas los
resultados de las pruebas T con sus respectivos valores p para la
determinación de diferencias significativas o no entre las soluciones y controles
positivos. Posterior a ello, dichos resultados se analizan y contrastan con los
antecedentes ya mencionados resumiendo los hallazgos en las conclusiones.
Finalmente y producto de ello surgen las recomendaciones para posteriores
estudios.
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II. MARCO TEÓRICO
2.1 ANTECEDENTES
PAREDES N. (2009), determinó la efectividad antibacteriana in vitro de una
infusión a base de Camelia sinensis y Minthostachys mollis sobre flora salival
mixta, recolectando saliva no estimulada de 30 estudiantes universitarios.
Utilizó el método de difusión por discos para las soluciones de té verde, muña,
clorhexidina y agua destilada. De los resultados obtenidos, concluye que se ha
evidenciado la efectividad antibacteriana de una infusión a base de té verde y
muña sobre la flora salival mixta, sin embargo, se observó una efectividad
antibacteriana menor con respecto a la infusión a base de té verde (por
separado), y también menor con respecto a la clorhexidina. Así mismo, también
encontró que la media de efectividad del té verde era mayor numéricamente
que la clorhexidina pero que no había diferencias significativas entre ambas
soluciones. (1)
CHOI D. y cols. (2009) realizaron un estudio sobre los cambios microbiológicos
en la placa sublingual después de remover la aparatología ortodóntica.
Se tomaron muestras de placa subgingival de 30 pacientes ortodónticos en dos
tiempos; la primera, dos semanas antes del retiro de la aparatología y la
segunda, tres meses después del retiro de la aparatología. Luego se usó la
muestra para determinar la presencia de Actinobacillus actinomicetencomitans,
Teinnerella forsythia y Porphyromonas gingivalis. Se observó mayor presencia
de estos microorganismos durante el tratamiento ortodóntico los cuales a su
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vez se redujeron en los tres meses siguientes de la remoción de la
aparatología (2)
GASTEL J. y col (2008) realizaron un estudio de cambios longitudinales y
variables clínicas periodontales después de colocar aparatología ortodóntica.
Las muestras se obtuvieron de 24 pacientes de los cuales se tomó la
profundidad de bolsa periodontal, presencia de sangrado y fluido crevícular.
Dichos valores fueron evaluados en 18, 20, 24 y 36 semanas observándose
cambios significativos a las 36 semanas. Además de ello se pudo concluir que
el lugar de colocación de la aparatología ortodóntica tuvo un significante
impacto en las variables clínicas y microbiológicas. (3)
RISTIC M. y col. (2007) realizaron un estudio para determinar los efectos de la
aplicación de aparatología fija en la salud periodontal y composición
microbiológica de la placa subgingival dental de 32 adolecentes. Se concluyó
que el tratamiento con aparatología fija en adolescentes puede incrementar
transitoriamente los valores de todos los índices periodontales que estimulan el
crecimiento o desarrollo de bacterias periodontopatogénicas, pero sin efectos
de destrucción en tejidos periodontales. (4)
MURAIRA M. y col. (2007) Se realizo un estudio microbiológico cuantitativo y
cualitativo de la flora oral de 13 pacientes adultos activos, cuya edad vario
entre los 16 y 35 años ,los cuales utilizaron ligaduras elásticas y metálicas, y se
tomó muestra de 77 piezas dentales superiores e inferiores.Se encontró una
disminución de placa dentobacteriana en los pacientes que recibieron el
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tratamiento ortodóntico junto con instrucción de higiene oral y control de placa
dentobacteriana.
El estudio mostró que tanto en las ligaduras elásticas como en las metálicas
existía una prevalencia bacteriana, de S. mutans, S. mitis, y S. salivarius. Así
también se podría mencionar que la mayor proporción de crecimiento se dió en
las ligaduras elásticas. (5)
MOROMI H. y col. (2007), realizaron un estudio sobre el efecto antimicrobiano
in vivo de la infusión de Camelia sinensis sobre bacterias orales, del cual se
recolectó saliva no estimulada de 32 personas aparentemente sanas, antes,
después y luego de 30 minutos. Se concluyó que hay una efectiva reducción
del recuento de los Streptococcus mutans y que la efectividad antibacteriana
del té verde se mantenía hasta después de 30 minutos de haber realizado el
enjuagatorio. (6)
MOROMI H. y col. (2006), observaron el efecto de la infusión del té verde al
10% en la formación de placa bacteriana por Streptococcus mutans. Sus
resultados mostraron una notaria disminución y falta de adherencia en la
formación de placa en el alambre de nichrone de los cultivos con infusión de té
verde en relación al cultivo control. (7)
HIRASAWA L. y col. (2006), mostraron que los valores de pH de muestras de
placa de 15 voluntarios fueron significativamente mayores después de
tratamiento con epigalocatequina (una de las catequinas del té) que después
10
de tratamiento con agua. Estos resultados sugieren que EGCg es efectiva en
reducir la producción de ácido en placa dental y Streptococcus mutans. (8)
OLIMPIO y cols. (2006), realizaron un estudio aleatorio control sobre la
efectividad de una pasta a base de clorhexidina en 752 pacientes ortodónticos
en relación a la placa dental, gingivitis, sangrado, cálculo y desarrollo de
manchas extrínsecas sobre el esmalte, encontrando mejora y disminución de
los tres primeros índices, pero manteniendo los niveles de cálculo y un
aumento de manchas extrínsecas. (9)
CANO C. (2006) realizó un estudio con el fin de determinar la efectividad
antimicótica in vitro y elucidación estructural del aceite esencial de las hojas de
muña, mediante el método de Agar en difusión, en el cual se demostró la
actividad antimicótica frente a las cepas de Cándida albicans y por el método
de difusión en tubo, la inhibición del crecimiento fúngico de Trichophytum
tansurans, Trichophytun mentagohhytus, Microsporum canis. (10)
BARRETO L. y col. (2005), realizaron un estudio en sobre la acción
antimicrobiana in vitro de dentífricos conteniendo fitoterápicos sobre bacterias
orales recuperadas de la saliva y cepas patrón S. mutans, S. sanguis, S.
casei; la muestra salival se tomo de 10 pacientes, los resultados mostraron que
solamente las soluciones puras de los dentífricos presentaron capacidad
antimicrobiana contra las cepas. (11)
11
DIAZ K. y MOROMI H. (2005), determinaron la acción antimicrobiana del aceite
esencial de Minthostachys mollis (muña) enfrentando cepas estándares ATCC
de Streptococcus mutans, Lactobacillus sp. Fusobacterium nucleatum,
Actinobacillus actinomicentecomitans y Actinomyces sp. a: Amoxicilina, aceite
esencial de Minthostachys mollis y agua destilada para medir los halos de
acción antimicrobiana encontrándose que la Minthostachys mollis tiene efectos
antimicrobianos sobre las bacterias orales con una media de 16,75 mm de
diámetro del halo. (12)
FINE D. y cols. (2005), demostraron mediante un estudio clínico que los
aceites esenciales como el timol y el eucaliptol disminuyen la gingivitis. Y que el
efecto antibacterial de los aceites esenciales se manifiesta hasta 12 horas
después de realizados enjuagues bucales. (13)
FUNOSAS y Col (2005) realizaron un estudio sobre la efectividad del té verde
en el tratamiento de periodontitis crónica en el cual se extrajeron muestras de
placa subgingival de 50 pacientes de ambos sexos, con diagnóstico de
periodontitis crónica, se concluyó que el uso de extracto del te verde asociado
a la terapia periodontal mecánicamente ha sido sensiblemente eficaz, si bien
su uso asociado o no al raspaje y alisado radicular no mostró diferencias
significativas. (14)
SEKINO S y RAMBERT P. (2005) realizaron un estudio comparativo en
humanos, analizando el efecto de 2 enjuagues bucales diarios; una solución
que contenía aceites esenciales, otra con clorhexidina al 0.1% y otra con
12
solución salina. Demostraron que se formó significativamente más placa dental
cuando los pacientes se enjuagaban con aceites esenciales que cuando lo
hacían con clorhexidina. No hubo diferencias significativas en cuanto al
desarrollo de sangrado gingival entre la solución de aceites esenciales y la
solución con clorhexidina. Ambas redujeron el sangrado en relación a los
enjuagues bucales con solución salina. (15)
OKAMOTO y Col. (2004) demostraron que las Catequinas y sus derivados
presentes en el Té verde tienen el potencial de reducir el daño periodontal
ocasionado por la actividad potente de las proteínas Arg-gingipain (Rgp) y Lys
– gingipain (Kgp) de la P. gingivalis. (16)
HIRASAWA M. y TAKADA K.(2004) observaron múltiples efectos de la
catequina del té verde en actividad antifúngica de antimicóticos contra la
Cándida albicans. La actividad antifúngica fue determinada por dilución del
caldo y cálculo de unidades formadoras de colonias. En los resultados se
encontró que las epigalocatequinas son quienes realizan el efecto antifúngico
de la anfotericina B o fluconazol contra la susceptibilidad antimicótica y
resistencia a la C. albicans. concluyendo que el tratamiento con catequina
permite el uso de menos dosis de antimicóticos e induce múltiples efectos
antifúngicos lo cual podría ayudar a evitar los efectos secundarios de los
antimicóticos. (17)
ZHANG J y KASHKET S. (2003) realizaron un estudio sobre la inhibición de la
amilasa salival por medio del té verde y el té negro y sus efectos en la hidrólisis
13
intraoral, concluyendo que extractos del té verde inhiben amilasa salival
humana y reducirían el potencial cariogénico de almidón contenido en comidas
como en galletas y tortas reducirían la tendencia de este tipo de comidas a
pequeñas fuentes de liberación de carbohidrato fermentado. (18)
HERRERA y col. (2003), compararon la actividad antimicrobiana, tanto in vitro
como in vivo, de las diferentes formulaciones de colutorios con clorhexidina al
0,12%. Los resultados mostraron que la formulación de clorhexidina con
alcohol, tenía más actividad antimicrobiana que los que carecían de ella; con
excepción del colutorio que contenía clorhexidina y cloruro de cetilpiridinio, la
cual demostró su superioridad. (19)
FUERTES C. y col. (1999) realizaron un estudio sobre constituyentes de aceite
esencial de Ocinum micratum, el cual mostró actividad bacterial frente a
microorganismos (> sensibilidad frente a hongos). El método que se realizó fue
el de excavación placa cultivo frente a diferentes bacterias y hongos. (20)
ELDRIGE y col. (1998), demostraron que el enjuagatorio de clorhexidina al
0,12% sin alcohol usado por un periodo de 21 días en 19 voluntarios, es un
antimicrobiano eficaz en la reducción de Streptococcus mutans, además que
presentaron menos efectos adversos que el enjuagatorio de clorhexidina que
contienen alcohol, el mismo que está contraindicado en pacientes con
mucositis, inmunocomprometidos, sensibles al alcohol y con restauraciones de
resina. (21)
14
POBLETE E. (1998) demostró que el aceite esencial de muña tiene efecto
contra Phylohtora infestans, Fusarium solanaceum y Erwinea carotovora que
son patógenos de la papa. (22)
ROSS NM. Y cols. (1989), demostraron que los aceites esenciales son
antisépticos de amplio espectro de acción. Actúan sobre bacterias gram
positivas y gram negativas. Los aceites esenciales penetran el biofilm, lo que
los diferencian de otros productos de similares características que han
fracasado en mostrar tal capacidad. (23)
CONTRERAS G. (1983) estudió la actividad antimicrobiana del aceite esencial
de Minthostachys mollis, demostrando cualitativamente su efecto
antimicrobiano frente a Shiguella dysenteriae, Salmonella typhi y E.coli,
resultando Shiguella dysenteriae la más sensible al aceite esencial de Muña.
(24)
BALENSEIFEN y MADONIA (1970), encontraron en 12 pacientes entre los 12
y 16 años diferencias significativas con respecto al pH de la placa, contenido
de carbohidratos y contenido de Streptococcus y Lactobacillus después de la
colocación de arcos y bandas. (25)
15
2.2 BASES TEORICAS
2.2.1 Planta Medicinales
“Una planta medicinal es una cuyas partes o extractos se emplean como
drogas en el tratamiento de alguna afección. La parte de la planta empleada
medicinalmente se conoce con el nombre de droga vegetal, y puede
suministrarse bajo diferentes formas galénicas: cápsulas, comprimidos, crema,
decocción, elixir, infusión, aceites esenciales, jarabe, pomada, tintura,
ungüento, etc.”(26)
En varias plantas se han visto empíricamente y determinado
metodológicamente principios activos de naturaleza antimicrobiana diversa.
Las propiedades antimicrobianas encontradas en algunas plantas se explican
por las sustancias terpenoides presentes en la fracción de aceite esencial
extraída. (27)
2.2.1.1 Camelia sinensis, “Té verde”
”La Camelia sinensis, nombre científico del té verde, ha mostrado un amplio
rango de efectos fisiológicos. Esta planta proveniente del Asia ha sido objeto en
los últimos años de una serie de estudios sistemáticos principalmente por
investigadores japoneses en los cuales se evidenciaron las acciones
antimicrobianas útiles y variadas que poseen los extractos del té”. (1)
El té verde consiste en las hojas y brotes foliáceos preparados de Camelia
sinensis, arbusto de hojas alternas persistentes.
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El té ha mostrado un amplio rango de efectos fisiológicos y farmacológicos.
Dentro de acciones no microbiológicas se pueden mencionar: la disminución
del metabolismo de las catecolaminas , el efecto antiinflamatorio uniéndose a
la efectividad del acido ascórbico, el de actuar como antioxidante inhibiendo la
enzima conversora de angiotensina acción hipocolesterolemica , la inhibición
del crecimiento de células malignas implantadas y su potenciabilidad en la
prevención del cáncer por su acción inhibidora sobre la carcinogénesis , con
respecto a las acciones antimicrobianas uno de los datos más tempranos fue
dado por un cirujano dentro del ejercito que recomendaba el uso del té en el
agua de las cantimploras de los soldados como profiláctico de la fiebre tifoidea.
Investigadores encontraron que los extractos de té eran capaces de inhibir y
matar cepas de Staphiloccus aureus, S.epidermidis, Salmonella tiphi, Shigella
dysenteriae y Vibrio cholereae. (27)
El mismo grupo de investigaciones posteriores determinó que las
concentraciones contenidas en una taza de té eran capaces de inhibir el
Staphiloccus aureus meticilino – resistente. Los trabajos más importantes para
nuestra área fueron los realizados por Tsunoda et al que encontraron una
importante actividad inhibitoria sobre Streptoccus criogénicos que incluyen al
Streptoccus mutans. (7) (8) (28)
Estudios recientes sobre los efectos de los polifenoles de Té verde sobre
caries dental mostraron que los polifenoles disminuyen el riesgo de caries in
vitro e in vivo. (28)
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Características del Género Camelia
Familia de las teáceas (a veces en Cameliáceas), nombre común Té.
Es un arbusto a árbol mediano, muy ramificado, con hojas coráceas, elípticas,
flores con pétalos blancos recurvados hacia adentro, fruto en capsula corácea,
con 1 a 3 celdas y semilla en cada una.
La distribución del te verde es en la amazonía alta en zonas subtropicales.
Fue cultivado e introducido del Asia .En el Perú, los centros de cultivos son en
Tingo María y en el Cuzco. (29)(1)
Características botánicas del Género en estudio:
La camelia es la flor de un arbusto originario de Asia, concretamente de Japón
y China.
Pertenece a la familia de las teáceas y las distintas variedades componen el
género Camelia. Hay gran cantidad de camelias diferentes, algunas
espontáneas y otras obtenidas por hibridación.
Es un arbusto perennifolio, de hojas verde intenso y brillante y flores blancas,
rosas o rojas de entre tres y cinco centímetros de diámetro. Existen variedades
tempranas, de floración invernal y otras que florecen en primavera. Todas ellas
son acidófilas por lo que necesitan un sustrato con pH ácido. (1)(27)
Aspecto botánico de la especie en estudio:
Aunque originario de los bosques montañosos situados en los límites de India y
China, el té (Camelia sinensis L.), se cultiva hoy en los cinco continentes. A
partir de sus brotes y hojas se obtienen diversos tipos: té negro, verde, rojo y
blanco.
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El té presenta follaje perenne, flores blancas y fruto capsular. Florece en
primavera y fructifica en verano – otoño. En estado silvestre puede alcanzar
hasta 10 o 15 metros de altura, pero la planta bajo cultivo es podada para
limitar su porte, favoreciendo así la generación de nuevos brotes y hojas y
facilitando la cosecha. (29)
Se cultiva con éxito desde el nivel del mar hasta los 2.200 metros de altitud,
obteniéndose producciones de alta calidad en las zonas de alturas superiores a
los 1.200 metros. El clima óptimo para la especie es el subtropical húmedo,
isohídrico, con precipitaciones entre 1.800 y 2.200 mm anuales y suelos con pH
ácido (4,5 - 5,5) bien drenados. (28) (29).
Es un arbusto o pequeño árbol perenne que normalmente se recorta para que
no sobrepase los 2 m. cuando se cultiva por las hojas. Posee una fuerte raíz
principal. Las flores son blanco-amarillentas y miden entre 2 y 4 cm. de
diámetro, con 7 u 8 pétalos. Las semillas prensadas destilan un aceite.
De esta especie se elabora el té verde, semi-fermentado y té negro, que se
procesa para obtener diferentes grados de oxidación.(26)
Las hojas tienen entre 4 y 15 cm. de largas por 2 a 5 cm. de anchas. Contienen
alrededor de un 4% de cafeína. Las características y diferente composición
química de las hojas recolectadas, según la edad, producen diferentes tipos de
té. Las hojas más viejas son de color verde oscuro. Las tiernas, de color verde
pálido y con una corta pubescencia blanca en el envés son las preferidas.
La variedad más utilizada es la Assam (a veces llamada C. sinensis assamica o
C. assamica) y la planta de China (llamada C. sinensis sinensis), así como
varios cruces de estas dos. (1)(27)
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A partir de la misma materia prima: brotes y hojas de la especie Camelia
sinensis, se adquieren diversos tipos de té. Estos productos finales pueden ser
distintos según las variedades botánicas utilizadas, las formas de cultivo, la
época y tipo de cosecha, así como del método de industrialización utilizado.
Los productos se clasifican según el color del material de la infusión generada,
y según el grado de fermentación. (27)
Existen cuatro tipos principales de té con múltiples variedades que dan lugar a
más de 3000 clases de té en todo el mundo:
• Té Verde. Carece de fermentación. Se evita la acción enzimática de la
fermentación mediante un escaldado. Presenta altas cantidades de
antioxidantes, interviene con la nivelación de la insulina en sangre y con
la disminución de la grasa corporal. Reduce el nivel de triglicéridos y
colesterol. (27)
• Té Blanco. También carece de fermentación. Producido a partir de
yemas nuevas recolectadas antes de que abran. Se dejan marchitar
para que se evapore la humedad y se desecan. Su principal propiedad
es el alto contenido de antioxidantes. (27)
• Té Rojo. Fermentación incompleta. Con un grado de 50-60 % de
fermentación se denomina Oolong, mientras que con 8 - 25 % se
designa Pouchong. Luego del secado de hojas y yemas se aplica un
tratamiento térmico para inactivar las enzimas y detener la fermentación
en el momento adecuado y además quitarle humedad para evitar la
descomposición posterior de las hojas. (27)
o Presenta propiedades antioxidantes, efectos protectores del sistema
cardiovascular, y es utilizado en los tratamientos contra la obesidad.
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También se le atribuyen propiedades anticancerígenas. Es tradicional en
China, Japón y Taiwán, pero en Argentina prácticamente no se produce.
• Té Negro. Resultado de una fermentación (en realidad es un proceso de
oxidación) completa. Es el producto que muestra mayores propiedades
aromáticas. Su alto contenido en flavonoides protege al sistema
cardiovascular. Representa la mayoría de la producción nacional. (27)
Componentes principales de la especie Camelia sinensis
Las hojas del té verde contienen 3 principales componentes que actúan en
beneficio de la salud humana: bases xanticas (cafeína y teofilina), aceites
esenciales y especialmente componentes polifenólicos. (30)
La cafeína actúa principalmente sobre el sistema nervioso central, estimulando
la vigilia, facilitando asociación de ideas y reduciendo la sensación de fatiga.
Algunos de estos efectos ocasionados por la cafeína son influenciados por la
teofilina. La teofilina induce actividad psicoactiva, además posee un leve efecto
inotrópico y vasodilatador, y un efecto diurético mayor que la cafeína. Sin
embargo, sus efectos más interesantes pueden ser vistos a nivel respiratorio y
broncopulmonar. La teofilina causa una relajación no específica en el músculo
bronquial y la estimulación respiratoria también es observada.(27)
Los aceites esenciales son volátiles y se evaporan de la bebida después de
algo de tiempo, por ello no es muy conveniente sobre extender el tiempo de
filtración. Entre sus propiedades, la de facilitar la digestión debe ser resaltada.
El té verde es el tipo de té con el mayor porcentaje de aceites esenciales. Sin
embargo, ha recibido gran atención debido a su contenido en polifenoles, que
son fuertes antioxidantes y presentan importantes propiedades biológicas. (31)
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Numerosos estudios han demostrado también que el extracto acuoso de
epigalocatequinas (GTP) posee propiedades antimutagénicas, antidiabéticas
antibacterianas, antiinflamatorias e hipocolesterolémicas Efectos beneficiosos
sobre enfermedades orales como protección contra la caries, enfermedad
periodontal y pérdida de dientes (que ocasiona daños significativos a la salud
completa de la persona) también han sido descritos. (6)(7)(14)
Entre todas las epigalocatequinas (GTP), las catequinas y ácidos gálicos han
sido especialmente considerados como los verdaderos intervinientes en los
efectos beneficiosos en salud que se mencionan a continuación:
• Actividad antioxidante
• Potencial antimutagénico y anticarcinogénico.
• Efecto antihipertensivo y riesgo de enfermedad cardiovascular.
• Protección solar ultravioleta
• Suplemento de insulina
• Salud oral(28)
Con respecto a la salud oral, la caries dental es una enfermedad
infecciosa multifactorial en la cual la nutrición, la infección microbiológica
y la respuesta del hospedero juegan roles importantes. Últimos reportes
experimentales en animales y humanos sugieren que el consumo de té
verde (sin añadir azúcar) reduce la caries dental.(8)(28)
Aparte de sus contenidos en polifenoles, ambos el té verde y el negro
son una fuente natural de fluoruro y un vehículo efectivo para este a la
cavidad oral. De acuerdo a Simpson, después de la limpieza de la boca
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con té, aproximadamente el 34 % de el fluoruro es retenido y muestra
una fuerte habilidad de unión a interactuar con los tejidos orales y en la
superficie de los sus tegumentos. (28) Este contenido en fluoruro tendría
un impacto beneficioso sobre la caries y podría llevar a cabo un amplio
rango de actividades incluyendo prevención en pérdida de dientes y en
cáncer oral; Sin embargo, la información ha sugerido que el extracto de
epigalocatequinas sería el responsable para los efectos más notorios en
salud oral y también ha sido demostrado que GTP más que el fluoruro
contribuye al potencial anticariogénico por inhibición de crecimiento de
bacterias como la Escherichia coli, Streptococcus salivarius, y
Streptococcus mutans. Muchos estudios han indicado que el GTP inhibe
el crecimiento, producción de ácidos, metabolismo, y actividad de la
enzima glucosiltransferasa del S. mutans y la placa dental. En
consecuencia, el té verde ha sido considerado como comida funcional
para salud oral y es ampliamente usado en formulaciones de pastas
dentales.(1) (28)
23
Estudios in vivo en animales han demostrado que ratas específicas
libres de patógenos infectados con Streptococcus mutans y luego
alimentados con una dieta cariogénica conteniendo GTP han disminuido
significativamente sus niveles de caries. Bebidas de suplemento
conteniendo 0.1 % de GTP dentro con dieta cariogénica disminuyó
también significativamente lesiones cariosas en fisuras. Estudios
recientes de Okamoto et al. (18) sugieren que las catequinas presentes
en el té verde tienen potencial para reducir el daño periodontal resultante
de la potente actividad de la proteinasa de Porphyromonas gingivalis.
Así también, decocciones de té verde inhiben la -amilasa en saliva
humana, reduciendo la liberación de maltosa en un 70 % y
disminuyendo efectivamente el potencial cariogénico de almidón
contenido en comida. (28)
Usos o aplicaciones de la especie Camelia sinensis
El té constituye la segunda bebida más consumida en el mundo, sólo detrás del
agua. En China, se lleva utilizando desde hace casi 3.000 años, no sólo por sus
propiedades estimulantes, sino porque ayuda a prevenir y mejorar numerosas
dolencias.
Se ha comprobado que contiene altos niveles de unas sustancias llamadas
polifenoles, que poseen propiedades antioxidantes, anticancerígenas e incluso
antibióticas. (14)(16)
La capacidad del té verde para prevenir el cáncer está tan establecida, que los
estudios actuales están probando el té verde como posible terapia potencial
24
contra el cáncer. Los estudios experimentales llevados a cabo sugieren que los
componentes del té verde pueden ayudar a prevenir el cáncer de piel, cuando
se aplican directamente sobre la piel. Los polifenoles del té también pueden
ayudar a broncearse y a proteger la piel contra el daño provocado por el sol.
Los potentes efectos antioxidantes del té verde inhiben la oxidación del LDL-
colesterol en las arterias. La oxidación del LDL-colesterol desempeña un papel
importante para contrarrestar la formación de aterosclerosis; y gracias a sus
efectos antitrombóticos, puede ser eficaz en la prevención de algunas
enfermedades cardíacas.(27)
El té verde disminuye los niveles de azúcar en sangre, es decir, es
hipoglucemiante; y tiene ligeros efectos antibióticos, frente a ciertas bacterias
como los estafilococos y algunos virus
Por sus acciones estimulantes del sistema nervioso, puede emplearse para
aliviar tanto la fatiga física como la fatiga mental. Además puede contrarrestar
los síntomas de un ataque de asma, por su actividad broncodilatadora.
En caso de diarrea, el té puede frenarla porque sus taninos le confieren
actividad astringente, pero hay que tener precauciones porque en algunos
casos puede provocar algunas molestias digestivas. (29)
2.2.1.2 Minthostachys mollis, “Muña”
Minthostachys mollis, nombre científico de la “muña”, planta nativa que crece
en diversas zonas de la serranía peruana. (6)
La muña habita en los diferentes pisos ecológicos de nuestra serranía, crece
entre 2500 y 3500 msnm, donde existe en abundancia.
25
Es una planta hemicriptófila que durante el invierno frio y seco desaparecen
sus hojas para brotar nuevamente con las primeras lluvias de la primavera.
Conocida popularmente como muña, la cual es usada para el tratamiento de
dolencias de vías respiratorias y digestivas.
Otros nombres vulgares con los que se conoce a esta planta son:
‘Muña negra’, ‘polvo silvestres’, ‘coz’, ‘muña-muña’, ‘huycha, ‘arash muña’,
‘kon’, ‘orcco-muña’ (32)
Características del Género Minthostachys
La ‘Muña’, planta oriunda de los valles andinos del Perú y Bolivia, cuya
especies pertenecen a la familia de las Labiadas o Lamiaceas, genero
Minthostachys. (32)
Son arbustos aromáticos ampliamente extendidos en las zonas andinas
trepadores o de ramas amplias con flores pequeñas dispuestas de forma
variada. Las brácteas algunas veces son foliáceas. El cáliz es tubular con 13
inervaciones, con 5 dientes de forma deltoidea angosta y el cuello es velludo-
anillado. La corola es de forma tubular, a veces con 6 mm. de longitud con 2
lóbulos altos y 3 bajos. Presenta estambres pequeños a la mitad del tubo
corolar, en su mayoría un poco por debajo de la corola. (26)(32)
Se pueden encontrar entre 2500 a 3500 m.s.n.m., crecen en forma abundante y
silvestre en los valles de la sierra central peruana, en lugares aledaños a las
acequias, no presentando requerimientos tan intensos por el agua por lo que
pueden desarrollarse en las laderas de los cerros. Se distribuye mayormente
26
en el sur del Perú: Cuzco, Puno, Ayacucho, Apurímac entre 2700 a 3600
msnm. (26) (33)
Según Munguia Y. se puede encontrar muña a lo largo de la costa y la
cordillera andina de 500 a 3500 m.s.n.m. distribuida desde Colombia,
Venezuela, Brasil, Ecuador, Perú, Bolivia y Argentina. (34)
De este genero existen 12 especies, de las cuales, 6 han sido reconocidos en
el Perú, siendo una de las mas importantes Minthostachys mollis. (1), M.
Glabresans, M. Setosa, M. Spicata, M. Griseb y M. Salicifolia, todas
generalizadas con el nombre local de muña. (26)
Aspecto botánico de la especie en estudio
Perteneciente a la familia de las Lamiaceas o Lamiaceae, constituida por 300
especies distribuidas en 200 géneros de plantas herbáceas como la menta,
hierba buena, matitas como tomillo o arbustos como romero. Muchas de estas
especies producen aceites esenciales de manera tan preferente que pueden
considerarse plantas aromáticas por excelencia, usadas en la medicina
tradicional, industria farmacéutica y perfumería. (1)(26)(29)
Esta familia comprende plantas arbustivas, perennes, de olor característico y
llegan a tener aproximadamente entre los 0,9 a 1,5 metros de altura, siendo
bien tupido en hojas, las mismas que son opuestas y aserradas, en las cuales
se deposita la mayor cantidad de esencia Los tallos son semileñosos,
cuadrangulares, angulosos y muy pubescentes, con abundantes pelos
glandulosos y pelos tectores, además es muy ramificado. Las hojas son
simples, opuestas, decusadas, pecioladas, cordiformes, penninervias,
dentadas, asimétricas en la base, pubescentes en el haz y en el envés (pelos
27
glandulosos y tectores). Las inflorescencias son racimosas, constituidas por
racimos terminales y axilares en las cuales las flores se ubican en grupos de 3
o 4 en forma opuesta y verticiladas. Las flores son pentámeras, tubulosas,
homoclamídeas, zigomorfas, pedunculadas, bilabiadas y hermafroditas. El cáliz
es pentámero, gamopétala, bilabiada, de color azul o blanco, constituida por 5
pétalos concrescentes de los cuales 3 forman el labio inferior y 2 el labio
superior, externamente pubescente.(26)(29)
El androceo está constituido por 2 estambres concrescentes por sus filamentos
el labio inferior en su parte central e interna. En cada estambre sus conectivos
se han desarrollado llevando hacia la parte superior de la corola una teca fértil
de cada uno y hacia la parte interna las otras 2 tecas infértiles y concrescentes
formando el sistema de palanca que facilita la polinización entomógama.
El gineceo es completo de ovario súpero, sentado sobre un rodete nectarífero
que tiene una glándula nectárea desarrollada a un extremo, tetracarpelar,
tetralocular, tetraovular.
Estilo ginoblástico, desarrollado, pubescente y azulado en la parte superior,
divide al ovario en 4 mericarpos o folículos, cada uno de los cuales alberga un
óvulo anátropo de la placentación basal. Estigma bificado y azulado. El fruto del
folículo constituido por 4 mericarpos(26)(29)(32).
Componentes principales de la Minthostachys mollis
En cuanto a la composición de la muña, esta constituida por: aceite esencial,
glicósidos, mucílagos, saponinas, taninos, alcaloides y esteroles. Además
contiene carbohidratos. (32)(35)
28
Aceite esencial de Minthostachys mollis
Son pocas las plantas peruanas que han validado su uso tradicional, una de
estas es la Minthostachys Mollis, conocida popularmente como muña, la cual
es usada para tratamiento de dolencias de las vías respiratorias y digestivas.
La muña habita en los diferentes pisos ecológicos de nuestra serranía.
Diversos estudios han mostrado su efecto antibacteriano e insecticida, otros
han explorado que metabolitos están presentes en su aceite esencial.
La extracción del aceite esencial de “muña”, por destilación al vapor se
obtiene compuesto por mentol, mentola y un residuo (29).
La forma de destilación:
Se secan las hojas 8 días para el deshoje.
Destilado se realiza en un destilador por arrastre a vapor de agua durante una
hora y 30 minutos. Se puede adaptar una olla a presión donde a la salida del
dispositivo de seguridad se adapta una manguera delgada en forma de
alambique y con agua fría, recogiendo el líquido en un recipiente cerrado;
luego se separa el aceite del agua.(26)(29)
Usos o aplicaciones del Mynthostachys mollis
La muña es conocida por sus propiedades digestiva contra cólicos, flatulencias
(Carminativo), vómitos, diarreas, antitusígenas, antiasmático, expectorante,
antiespasmódico, antiséptico, analgésico, antiinflamatorio.
La muña en el ambiente serrano, es usada en la alimentación para preparar
platos típicos como la saralagua y chuñolagua como aromatizante en forma de
verdura. Por su alto contenido proteico y ser un excelente aromatizador es
29
imprescindible en la cocina andina donde la sopa serrana, un chupe de
tubérculos andinos (papas, ollucos y ocas principalmente) lo cual posee
múltiples propiedades medicinales, especialmente en las afecciones
gastrointestinales. (24)(29)
Es utilizado también en medicina folklórica por curar el flato (en infusión), curar
heridas y tumores, ulceras, sarna y rasca- rasca, el pie de atleta y adema por
limpiar la flema del pecho (expectorante) almacenados, como fumigante
orgánico vegetal contra los insecto de almacén (gorgojo de los Andes y
Norimoscherma) (26)
Es tradicional en la sierra que los campesinos la utilicen para conservar la
papa porque le atribuyen tener un fuerte efecto repelente sobre los gusanos de
tierra que devoran los tubérculos, tallos y hoja.
En el campo pecuario es utilizado por controlar los ectoparásitos y
endoparásitos de los animales domésticos, además por curar la sarna de los
camélidos y equinos. (26)(29)
Se utilizan sus hojas y flores como infusión o mate, para dolores estomacales,
y en la sopa como ingrediente aromático. Se le conoce también como
compañera de los viajeros pues en casos de soroche o mal de altura ayudan a
liberar los bronquios y disipa el mareo.
Tiene propiedades carminativas por lo que es aconsejable contra las
flatulencias que padecen especialmente los niños y bebés, aunque su uso es
recomendable para todas las edades.
Contribuye a eliminar los parásitos intestinales.
Ayuda a disminuir la aparición de problemas visuales (cataratas, miopía y
degeneración macular) y contribuye a mantener agudeza en la visión.
30
Estimula la prevención de todo tipo de problemas respiratorios y ayuda a
descongestionar las vías respiratorias.
Las hojas de muña también se emplean en la curación de fracturas, luxaciones
y tumores ocasionados por golpes. (24)
Se quema muña seca para matar la polilla y juntamente con eucalipto, para
desinfectar casas abandonadas. Recomendable para fumigar contra insectos
molestos como zancudos y moscas.
Se usa para la fabricación artesanal de pólvora para los juegos artificiales:
carbón de muña, azufre y alcohol de 40 grados. (27)
2.2.2 Efectividad Antibacteriana
Efectividad es la capacidad de lograr un efecto deseado o esperado. Por lo
tanto, efectividad antibacteriana es la capacidad de una sustancia de destruir
bacterias, impedir que crezcan y causen enfermedad. (35)
2.2.2.1 ECOLOGÍA ORAL
Generalidades
La ecología microbiana es el estudio de las relaciones entre los
microorganismos y su ambiente.
Desde el punto ecológico, la cavidad bucal es un sistema de crecimiento
abierto.
31
Para cualquier profesional de la salud, es necesario conocer estas
interrelaciones para poder aplicar de manera racional cualquier medida de
prevención y de control de enfermedades relacionadas con la presencia de
microorganismos en cualquier parte del cuerpo humano(36).
La terminología en la ecología es la siguiente:
Habitad: área específica capaz de sustentar una flora bacteriana.
Población: grupo de bacterias con características comunes definidas a nivel
taxonómico, por ejemplo, genero, especie, subespecie o análisis de su DNA.
Comunidad: más de una población de bacterias en su habitad especifico.
Nicho: función de una población bacteriana dentro de una comunidad.
Flora normal nativa (indigenous): la constituyen microorganismos siempre
presentes en un sitio particular, un alto número (más de 1%) en placa
supragingival o en el dorso de la lengua. Son compatibles con el huésped con
quien sostiene una relación estable sin comprometer su supervivencia.
Flora suplementaria: son aquellas bacterias que se encuentran casi siempre
presentes pero en baja proporción menos del 1% de la flora total, viable y
contable. Estos organismos pueden llegar a ser parte de la flora nativa , si
cambios en el medio ambiente les permite proliferar y convertirse en
microorganismos proporcionalmente dominantes(35).
Flora transeúnte: son los microorganismos que tienen la boca como puerta de
entrada para colonizar.(36)(37)
En términos generales se pueden definir en la cavidad oral hábitat locales
como la saliva, la lengua, las mucosas y las superficies dentales y
microambientales como el surco gingival, fosa oclusal, bolsa periodontal, sitios
32
estos donde se observa una yuxtaposición de los tejidos blandos y las
superficies duras del diente. (38)
Desarrollo de la flora bucal
Por lo general, la boca del feto a término es estéril, aunque al nacimiento puede
adquirir microorganismos transitorios a partir de la vagina. La boca del niño
recién nacido adquiere microorganismos con rapidez, de la madre y también
del ambiente (36).
La especie más común que se aísla de la boca de los recién nacidos, es el
Streptococus salivarius, y junto con el Staphylococcus albus, Neisseria y
Veillonella, forman el conglomerado inicial.
El lactante se pone en contacto con una variedad siempre creciente de
microorganismos, algunos de los cuales se establecerán como parte de la flora
común del individuo(39)
La erupción de los dientes temporales proporciona una superficie diferente para
la adherencia microbiana y esto se caracteriza con la aparición del
Streptococcus sanguis y Streptococcus mutans como habitantes regulares de
la cavidad bucal. Con el aumento en el número de dientes y los cambios en la
alimentación se modificarán las proporciones globales de los microorganismos.
Unos cuantos anaerobios llegan a establecer pero como el surco gingival no es
profundo, su número permanece pequeño. Habitualmente se encuentran
actinomicetos, Lactobacillus y Rothia. (39)
Quizás el incremento mayor en el número de microorganismos en la boca se
produce cuando hacen erupción los dientes permanentes. Estos tienen fisuras
profundas en su superficie lo que hace que sean difíciles de desalojar. Los
33
espacios interproximales son mucho mayores que en la dentición temporal
pues los dientes tienen un “cuello” más pronunciado en la unión
amelocementaria. El surco gingival es más profundo que en los dientes
temporales y permite un incremento mayor en los microorganismos anaerobios.
La especie Prevotella queda fijada en cantidad abundante, así como las
especies Leptotrichia y Fusobacterium y las espiroquetas
Se considera que la complejidad de la flora bucal del adulto es quizás su
característica principal. (36)
La placa superficial contiene pocos estreptococos, principalmente
Streptococcus mutans y S.sanguis. También se aíslan con regularidad
actinomicetos y otros filamentos gram positivos y gram negativos de posición
taxonómica incierta. Conforme los dientes se pierden, el número de sitios
disponible para la colonización bacteriana disminuye; se reduce la cantidad de
bacterias y varias especies disminuyen en cantidades desproporcionadas. Los
individuos edéntulos albergan pocas espiroquetas y prevotellas, pero aumenta
el número de levaduras. Normalmente las levaduras se ubican en el dorso de la
lengua y en el surco bucal superior. Las dentaduras postizas proporcionan un
medio protegido en el cual las levaduras pueden multiplicarse y cubrir el
paladar duro y la superficie acrílica de la prótesis dental. (39)
Factores que alteran el desarrollo de la flora bucal
Para que un microorganismo se establezca en la boca, debe: 1) introducirse,
2) ser retenido, 3) ser capaz de multiplicarse en las condiciones existentes en
la boca. (1)
34
Microbiología presente en estructuras orales
Labios
Predominan el Staphylococcus albus y los micrococos cutáneos con cantidades
abundantes de estreptococos típicos de la boca. Si las comisuras de la boca se
humedecen con la saliva, puede desarrollarse una queilitis angular de cuyo
raspado es posible cultivar Cándida albicans, Staphylococcus aureus y
Streptococcus pyogenes(38)
Mejilla
La bacteria predominante en la parte interior de la mejilla es el Streptococcus
miliar y le siguen en frecuencia Streptococcus sanguis y Streptococcus
salivarius. (39)
Paladar
El paladar duro presenta una flora estreptocócica semejante a la de la mejilla.
Los hemófilos se encuentran con regularidad y los lactobacillus son comunes.
Los escasos anaerobios encontrados sobre membranas expuestas es casi
seguro que no proliferen. Las levaduras y lactobacillus aumentarán en forma
muy importante en algunas personas que utilizan dentaduras postizas y la flora
puede alterarse mucho cuando el paladar es protegido de la acción de lengua
y la saliva por la base de una prótesis. El paladar blando albergará bacterias de
las vías respiratorias como Haemophilus, Corynebacterium, Neisseria y
Branhamella. Los portadores de Streptococcus B-hemolíticos con frecuencia
35
tendrán los microorganismos en la úvula y en los pliegues palatogloso y
palatofaríngeo(39).
Lengua
La superficie dorsal queratinizada de la lengua es un sitio ideal para la
retención de microorganismos. Aunque varía el número de Streptococcus
salivarius es el microorganismo predominante y representa el 20-50 % de la
flora cultivable total. Streptococcus mitis también es común y la especie
Haemophilus ha sido aislada con regularidad. El dorso de la lengua es
colonizado a menudo con cantidades pequeñas de Cándida albicans.(36)(39)
Surco gingival
La población bacteriana del surco gingival es quizás la más numerosa en toda
la boca, con 1010-1011 microorganismos por gramo de peso húmedo de detritus
gingivales.
El surco gingival tiene una relativa protección de las fuerzas que desalojan a
las bacterias; no obstante, el líquido crevicular en el surco proporciona un
medio rico en nutrientes que permite que proliferen algunos de los
microorganismos más delicados.
El número exacto y las proporciones de los diversos microorganismos
presentes en el surco gingival varían con las diferentes muestras y técnicas de
cultivo. (40)
36
Dientes
Todos los dientes tienen microorganismos adheridos, usualmente en depósitos
denominados placa dental. Las fuerzas para desalojar bacterias, tales como los
alimentos, la saliva y los tejidos blandos, tienden a remover esta placa de las
superficies lisas del esmalte, o bien, de áreas linguales palatinas y bucales.
Estos depósitos bacterianos se forman finalmente como sigue:
En las fisuras y fóselas oclusales.
En defectos del esmalte.
En los espacios interproximales.
Cerca del borde gingival.
La cuenta viable de la placa dental sólo representa una proporción de la cuenta
total. La variación en la composición de la placa es amplia, pero los
estreptococos bucales, los bacilos, filamentos gram positivos y algunos
anaerobios gram negativos siempre están presentes. (38)
Patógenos principales en la flora oral
En el grupo de patógenos mayores asociados a caries dental se encuentran los
Streptococcus mutans y sobrinus y los Lactobacillus casei, fermentunm,
plantarum y acidophilus. Tambien ha sido asociado a caries dental el
Streptococcus mitis, Actinomyces odontolitycus y algunas especies de los
Streptococcus mutans como los son el cricetus, rattus, ferus, macacae y
downie.
37
Los principales patógenos asociados con enfermedad periodontal son
Prevotellas, Porphyromonas melaninoenica e intermedia, Actinobacillus
actinomycetemcomitans , bacteroides, etc. (40) (1)
2.2.2.2 Biofilm dental
“Las bacterias que se encuentran en la saliva se pueden considerar como
bacterias planctónicas (bacterias que se encuentran suspendidas en una fase
líquida). Sin embargo, las bacterias que se encuentran en una superficie dura
(diente, reconstrucciones, prótesis e implantes) forman una película gelatinosa
adherente: la placa dental. La placa dental es el principal agente etiológico de
la caries y de las enfermedades periodontales”.(37)(41)
Resistencia frente antimicrobianos
Dentro de estas ventajas que presentan las bacterias cuando crecen en forma
de biofilm destaca la mayor resistencia frente a los distintos antimicrobianos, y
esta mayor resistencia puede deberse a:
-Los antimicrobianos llegan en menores concentraciones (concentraciones no
efectivas frente a las bacterias) a las zonas profundas del biofilm.
-Las bacterias, cuando son atacadas con dosis subletales, tienen capacidad
para desarrollar resistencia frente a los antimicrobianos (entrenamiento de
resistencia con dosis subletales).
-Las bacterias cuando crecen en forma sésil, activan genes que proporcionan
mayor resistencia frente a los antimicrobianos, en comparación a las formas
planctónicas.
38
-En zonas profundas del biofilm, que tienen un menor aporte de nutrientes, las
bacterias estarían en forma quiescente, que es un estado bacteriano no
susceptible a los antimicrobianos.
-Las bacterias estarían protegidas por la matriz de exopolisacáridos frente a los
antimicrobianos.
-Bacterias presentes en el biofilm son capaces de sintetizar productos
(enzimas, etc.) que inactivan antimicrobianos dirigidos contra bacterias de
distinta especie residentes en el biofilm (patogenicidad indirecta).
-La edad del biofilm puede ser un factor para una mayor resistencia frente a los
antimicrobianos. Se ha descrito que los biofilms instaurados durante un periodo
de tiempo más prolongado son más resistentes frente a los antimicrobianos
Esta mayor resistencia de las bacterias cuando crecen en biofilm se traduce en
que se deben multiplicar incluso por mil las concentraciones necesarias del
antimicrobiano para que sea efectivo. Esto explicaría, en parte, por qué a veces
no concuerdan los resultados clínicos con los resultados obtenidos in vitro
sobre células planctónicas. (41)(42)
Control mecánico del biofilm.
Se puede realizar una eliminación y desestructuración física del biofilm dental
mediante el cepillado manual, dispositivos de higiene interproximal, cepillos
eléctricos, etc.
El procedimiento de higiene oral más utilizado es el cepillado de los dientes
mediante cepillos manuales, tal como ocurre en el resto de los países
industrializados.
39
La eficacia del cepillado se traduce en la eliminación del biofilm dental. Existe
suficiente evidencia que demuestra la eficacia de los cepillos manuales para la
eliminación del biofilm dental y la prevención de la gingivitis(42(43).
Control químico del biofilm.
El control químico del biofilm puede realizarse mediante diversos productos que
poseen cierta acción sobre la placa dental o biofilm. Estos productos se
utilizarían como complemento de los sistemas mecánicos de control de placa
en aquellas personas que no son capaces de mantener unos niveles de placa
compatibles con salud mediante el uso exclusivo de la limpieza mecánica. El
uso de estos productos debe ser siempre un complemento al control mecánico
de la placa dental, ya que éste reduciría el grueso de la placa y alteraría la
estructura de la misma, dejándola más susceptible a la acción de los distintos
sistemas de control químico.
Estos productos se utilizan tanto en la prevención primaria de las
enfermedades periodontales, como en la prevención secundaria y terciaria.
El uso de antimicrobianos como ayuda para el control químico de la placa ha
sido evidenciado por distintos autores. (44)
40
Rol de la Actividad antimicrobiana
Los agentes antimicrobianos actúan sobre la formación del biofilm supra e infra
gingival, juegan un rol importante en la prevención de caries y enfermedades
periodontales. (43)(44)
2.2.2.3 Ecología Oral Con Aparatologia Ortodóntica
“Los aparatos de ortodoncia no solo tienden a retener placa bacteriana y
residuos de alimentos, lo que generan gingivitis, sino también son capaces de
modificar el ecosistema gingival”. (45)
El uso de la aparatologia ortodóntica se ha relacionado con cambios
periodontales importantes debido a la dificultad del paciente para una correcta
remoción de biopelícula ante presencia de bandas, brackets, alambres, etc.
La colocación de la aparatologia ortodóntica genera un cambio en el medio
ambiente local que permite la adhesión de microorganismos capaces de
generar alteraciones en los tejidos periodontales y desarrollar alteraciones a
nivel del esmalte dental.
Después de la colocación de bandas, la flora bacteriana inicial esta compuesta
casi exclusivamente de cocos, filamentos, fusiformes y bacilos. También se ha
detectado un incremento en los niveles de las diferentes especies de
Streptococcus teniendo en cuenta que generan un cambio local en el
ecosistema, favoreciendo el crecimiento de patógenos periodontales
oportunistas o bacterias asociadas a caries.
Hay un incremento generalizado en el conteo bacteriana en la saliva,
especialmente de Lactobacillus, después de la cementación de las bandas;
41
también un aumento de anaerobios y Prevotella Intermedia y una disminución
en anaerobios facultativos.
Las espiroquetas o bacilos móviles se encuentran en un bajo numero al inicio
de la ortodoncia , de 3 a 4 semanas después de la colocación de bandas es
posible observar un incremento en la cantidad de flora bacteriana, siendo mas
de tipo anaerobio y detectándose elevado porcentaje de Actinomices
Odontolitycus.
Se han asociado niveles incrementados de espiroquetas con tratamiento
ortodóntico y aparatología fija.
Los microorganismos contenidos en la biopelícula muestran una mayor
proporción de patógenos anaerobios y gram negativos, dentro de los
patógenos predominantes se encuentran: Streptococcus mutans, Prevotella
intermedius, A. actinomycetemcomitans, Porphyromona gingivalis, Actinomyces
Odontolitycus, Actinomyces viscosus, Actynomyces naeslundii, Actinomyces
israelli, Fusobacterium nucleaum, Capnocytophaga, Lactobacillus,
Streptococcus sanguis, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius,
Selenomonas y Cándida albicans.
Los cambios en la flora microbiana durante la ortodoncia consiste en el
incremento de la flora cultivable total y mas cambios en la flora anaerobia, con
un incremento en el porcentaje de Prevotella intemedius.
El acero inoxidable presenta una alta tensión superficial, condición que
favorece al incremento en la adherencia microbiana a brackets, ya que influyen
en los cambios ecológicos en el ambiente intraoral favoreciendo la
colonización elevada del Streptococcus mutans, generando un riesgo potencial
para la descalcificación del esmalte.
42
En la fecha mas reciente se halló A.a (Actinobacilius actinomycetemcomitans)
en por lo menos un sitio de85% de los niños que usaban aparatos de
ortodoncia, en comparación con solo el 15%de los controle positivos para A.
actinomycetemcomitans. (45) (46)
2.2.2.4 Saliva
La saliva del ser humano tiene aproximadamente 6000 millones (6X109) de
bacterias por mililitro, entre las cuales están streptococcus, peptostreptococos,
Veillonella, Corynebacterium, Neisseria, Nocardia, Fusobacterium, Prevotella,
Lactobacillus, Actinomyces, espiroquetas, levaduras, protozoarios y otros
La mayoría de los microorganismos detectados en la saliva son un reflejo de
los presentes sobre las diferentes superficies de la cavidad oral.
En consecuencia se piensa que las bacterias presentes en la saliva son un
reflejo fiel de las halladas en la boca, en este concepto se fundamenta el
recuento de microorganismos en la saliva.
La saliva también es fuente nutricional para muchos microorganismos que
como anaerobios metabolizan sus componentes, en consecuencia no requieren
adherirse a ninguna estructura. (47)
En la saliva se encuentran muchos de los sistemas enzimáticos requeridos
para el desdoblamiento de moléculas de gran tamaño que como el almidón no
pueden ser procesadas por los microorganismos. El sistema de los
bicarbonatos presentes en la saliva sirve en parte para la neutralización de los
ácidos producidos en la placa dentobacteriana.
43
Otras enzimas de la saliva como la estaterina impiden el deposito continuo de
sales minerales como calcio y fosfato, siempre presentes alrededor de los
diente. Las proteínas ricas en prolina (PRP), constituyen un grupo de proteínas
con múltiples variantes genéticas que también inhiben la precipitación
espontanea de sales de calcio y fosfato. Recientemente se ha reportado que
las PRP so capaces de participar en la adherencia de bacterias como el
Actinomyces viscosus sobre la superficie del diente.
Con propiedades antibacterianas se encuentran en salivas enzimas como la
lisosima, lalactoferrina, el sistema de la peroxidasa y de la mieloperoxidasa,
aglutininas, mucinas, fibronectina y las proteínas ricas en histidina y en prolina.
La saliva igualmente contiene inmunoglobulinas como IgA (secretoria), IgG,
IgM. (38)
pH:
El termino pH, se utiliza para expresar la concentración de iones hidrogeniones
de una solución, las concentraciones altas de hidrogeniones corresponden a
pH bajos y las concentraciones bajas a pH altos
El metabolismo de los microorganismos depende con frecuencia del pH y las
bacterias inhibidas por el bajo pH no pueden sobrevivir en las condiciones
ácidas de la placa dental o bajo la base de una dentadura postiza. Prevotella
melaninogenicus y la especie Veillonella no toleran un pH menor de 5,5
aproximadamente pero la especie Lactobacillus y Cándida albicans pueden
tolerar proporciones muy bajas de pH. (1)
44
2.2.2.5 Modificación Del Flujo Salival En Ortodoncia
La saliva es una secreción exócrina compleja, importante en el mantenimiento
de la homeostasis de la cavidad bucal. Es bien conocido que las funciones de
la saliva son, en relación con el flujo y la composición molecular (proteínas,
glucoproteínas y fosfoproteínas), proteger los tejidos bucales contra la
desecación y las agresiones del medio ambiente, modular los procesos de
desmineralización-remineralización, lubricar las superficies oclusales y
mantener el balance ecológico. Se considera que el papel que juega la saliva
contra la caries dental es principalmente por su velocidad y cantidad de flujo,
favoreciendo la limpieza de sustratos bacterianos y protegiendo las superficies
bucales gracias a su capacidad amortiguadora, a las sustancias que
incrementan el pH y a los agentes biológicos antimicrobianos presentes en su
composición.
En tal sentido, la experiencia clínica indica que en un gran número de pacientes
que reciben aparatología fija (ortodoncia) se les incrementa considerablemente
el numero de microorganismos productores de ácido, ya que esta aparatología,
dificulta la limpieza de los dientes creando nuevas áreas de retención para los
microorganismos, con lo cual la formación de placa es mayor y, por
consiguiente, la caries y la enfermedad periodontal. Caso contrario ocurre en
aquellos pacientes que utilizan aparatos removibles, en cuyo caso las
observaciones empíricas revelan una notoria mejoría de la salud oral.
Es por lo tanto, que la saliva constituye un factor de gran importancia frente a
45
las caries y la enfermedad periodontal, cuyo flujo continuo ejerce un efecto de
limpieza sobre las superficies bucales expuestas, desempeñando un papel
primordial en la eliminación de microorganismos. Por otra parte, tiene una alta
capacidad de amortiguación que ayuda a neutralizar los ácidos producidos en
la placa bacteriana.
Es por ello, que cualquier alteración sufrida en el flujo salival repercutirá
directamente potenciando la acción mecánica de arrastre, acción
amortiguadora o efecto tampón, capacidad remineralizante, entre otras,
contribuyendo de esta manera en el mantenimiento de la salud de los tejidos
bucales. Es en este sentido, la experiencia clínica nos demuestra que al
colocar cualquier aparato en boca, se observan cambios en el volumen salival.
Dentro de la cavidad bucal, existe una gran cantidad de microorganismos que
entran en contacto directo con la saliva. Los componentes salivales pueden
mediar un número de reacciones con las bacterias, tales como: efectos
bactericidas e inhibitorios, provisión de substratos de crecimiento, aumento o
inhibición en la adherencia a las superficies dentales.
En tal sentido, es esa interacción dientes, saliva y substrato los que interactúan
en la producción de la caries, es decir, que los factores del hospedador
implicados en la etiología de la caries son los dientes y la saliva. La anatomía
dentaria influye en la susceptibilidad de diferentes zonas dentarias a la caries,
en parte, debido a la anatomía de la superficie oclusal, que presenta zonas de
retención que favorecen la acumulación bacteriana e impiden la actuación de
los mecanismos de limpieza. Por otra parte, la disposición de los dientes en la
46
arcada y algunas formas de maloclusión, favorecen la acumulación de la placa
y dificultan la autolimpieza.
Tal como lo señala, Zachrisson y Alnaes (1973), los pacientes que tienen
problemas de maloclusión y son tratados con aparatología fija (Ortodoncia)
tienden a mantener grandes acúmulos de placa dentobacteriana. Así pues, la
placa es más cariógena puesto que existe un aumento en la cantidad de
bacterias productoras de ácidos, hecho que se confirma por los niveles más
bajos de pH a los observados antes de colocar las bandas, ya que aumenta de
manera tremenda los sitios que favorecen el deposito de alimentos y en estas
condiciones, hacen que sea más difícil mantener los dientes libres de placa por
medio de técnicas habituales de higiene bucal.
“Algunos autores como Negroni, (1999); Nolte, (1985); Liebana, (1997);
coinciden en señalar; que al aumentar el flujo salival varia el pH pasando a ser
menos ácido; por lo tanto, la saliva desempeña un papel primordial en el
mantenimiento de las condiciones normales de los tejidos orales”. Este
resultado indica que la acidez permanente en la placa es la que contribuye a
iniciar el proceso carioso. (47)
2.2.3 Ortodoncia e Higiene
La ortodoncia como ciencia no se puede aislar de la evolución sociocultural del
mundo. Esto ha provocado desarrollo y utilización de diferentes técnicas
ortodónticas, así como la introducción de aditamentos que proporcionan una
facilidad en el manejo ortodóntico; dentro de los aditamentos se encuentran la
47
utilización de ligaduras, estos producen un cambio o aumento de la microflora
oral, al igual que podrían influir en el higiene del paciente.
Es interesante conocer la microflora que se desarrolla, ya que podría aumentar
el número de microorganismos que constituyen a la microflora oral normal.
Un cambio en el ambiente oral ocasiona un desequilibrio en dicha relación y
origina un aumento cuantitativo y cualitativo de la flora microbiana, al
sobrepasar la población microbiana oral normal.
Los aditamentos utilizados durante el tratamiento ortodóntico favorecen a la
formación de placa microbiana, tanto la supragingival como la infragingival,
aumentan la acumulación de restos de comida y dificultan el aseo dental
diario, estos cambios se manifiestan clínicamente debido a diferentes factores
de patogenicidad de los agentes, con inflamación y sangrado gingival,
microbios presentes en placa y la posterior penetración de estos
microorganismos a las vías sanguíneas por los capilares rotos y pueden
ocasionar desde una bacteremia transitoria a una septicemia mortal. (5)
2.2.4 Clorhexidina
La clorhexidina es el antimicrobiano más estudiado y más eficaz para la
inhibición de la placa. La inhibición de la placa dental por la clorhexidina fue
investigada por primera vez por Schroeder (Schroeder, 1969) y luego por Löe y
Schiott.
48
La clorhexidina pertenece al grupo de antisépticos bisbiguanídicos, de molécula
simétrica, compuesta de dos anillos clorofenólicos y dos grupos de biguanida
conectados por un puente central de hexametileno.
Es una base fuerte y dicatiónica a niveles de pH > 3.5, con dos cargas más a
cada extremo. (9)
Espectro de acción
Actúa contra bacterias gram positivas y gram negativas, también frente a
hongos y levaduras y contra virus (virus de la inmunodeficiencia humana y virus
de la hepatitis B.
Mecanismos de acción y efectividad
La clorhexidina ha demostrado ser eficaz como agente antimicrobiano a
distintos niveles:
Acción antibacteriana
A bajas concentraciones produce un aumento de la permeabilidad de la
membrana plasmática, desarrollando un efecto bacteriostático.
A concentraciones más altas produce la precipitación del citoplasma y muerte
celular, produciendo un efecto bactericida.
El biofilm dental presenta una mayor resistencia frente a los distintos
antimicrobianos, por lo que éstos deben evidenciar su capacidad para actuar
sobre el biofilm. La clorhexidina ha demostrado en distintos estudios su
capacidad para penetrar y actuar sobre el biofilm, desarrollando un efecto
bactericida en el mismo o alterando su formación) (48).
49
Acción inhibidora de la placa
La molécula de clorhexidina se uniría por un catión a la superficie del diente,
dejando los otros libres para interactuar con las bacterias que intentan colonizar
la superficie del diente, interfiriendo así con la adhesión bacteriana También se
uniría a las glicoproteínas salivares, reduciendo la formación de la biopelícula
sobre el diente. La clorhexidina es capaz de alterar la actividad de enzimas
bacterianas productoras de glucanos (Glucosiltranferasa C). (26)
Acción de la clorhexidina en pacientes ortodónticos
En tratamientos ortodónticos hay una alteración en la cavidad oral. El
incremento de la placa alrededor de las bandas y brackets, la composición de
los cambios de la flora y la higienización se hace difícil para el paciente.
Es un resultado, la inflamación gingival y la descalcificación del esmalte.
La clorhexidina presenta propiedades antimicrobianas, presenta una especial
afinidad con las estructuras orales.
La clorhexidina inhibe la formación de la placa y reduce el numero de
bacterias en la cavidad oral, incluyendo el Streptococcus, El cual esta
asociado con el desarrollo de las lesiones cariosas. (23)
2.2.5 Vitis Orthodontic
Vitis Orthodontic colutorio es el enjuague bucal que cuida y previene a diario
los problemas más frecuentes de los portadores de ortodoncia. El colutorio
refuerza la acción de Vitis Orthodontic pasta dentífrica, alcanzando a los
50
lugares de difícil acceso, donde el cepillo con la pasta no llega, asegurando una
mayor permanencia de los principio activos en boca.
Su exclusiva formulación le otorga las siguientes propiedades:
1. CPC (0,05%): antiséptico de uso diario que mantiene el estado de salud
bucal, previniendo la formación de placa bacteriana y protegiendo frente a
infecciones gingivales. Previene el mal aliento y ayuda a mantener la boca y los
aparatos de ortodoncia libres de patógenos orales.
2. Flúor (Fluoruro Sódico (0,33%)): Previene la caries y remineraliza el esmalte
dental.
3. Alantoína: Protege frente al roce ocasionado por los aparatos de ortodoncia
por su efecto regenerador del epitelio gingival.
4. Aloe Vera: Cicatrizante; ayuda a reducir inflamaciones.
Indicaciones:
Gracias a su composición y características evita las frecuentes molestias
derivadas de la ortodoncia reforzando la acción del cepillo y la pasta.
Instrucciones de uso:
Realizar enjuagues con 15 ml de VITIS Orthodontic colutorio después de cada
cepillado durante 30 segundos. Es aconsejable no ingerir alimentos ni bebidas
hasta transcurrido un mínimo de media hora después de su uso.
51
Presentación:
- VITIS Orthodontic colutorio 500 ml, sabor manzana menta
2.2.6 Cromatografía
La cromatografía es una técnica que analiza y mide la composición de un
material. Se basa en la interacción selectiva de una mezcla de proteínas u
otras sustancias (en este caso pigmentos) con un material adsorbente (en este
caso el papel filtro). Esta interacción puede tomar muchas formas como estar
basada en carga positiva o negativa, en hidrofobicidad, afinidad o tamaño.
La cromatografía sirve para separar diferentes compuestos químicos de una
mezcla multicomponente que puede llegar a tener cientos de sustancias
diferentes.
Las técnicas cromatográficas se utilizan actualmente para la separación,
aislamiento, purificación e identificación de sustancias, tanto orgánicas como
inorgánicas.
Todos los métodos cromatográficos se basan en las diferentes afinidades de
los componentes de una muestra por las fases inmiscibles con las que están en
contacto. (21)
2.2.6.1 Cromatografía de gases
La cromatografía de gases es la técnica a elegir para la separación de
compuestos orgánicos e inorgánicos.
52
Tipos de cromatografía de gases
La cromatografía gas - liquido (GLC, de gas-liquid chomatograpy) lleva a cabo
la separación por medio del reparto de los componentes de una mezcla
química, entre una fase gaseosa que fluye (móvil) y una fase liquida
estacionaria sujeta a un soporte solido. La cromatografía gas- solido, utiliza un
absorbente sólido como fase estacionaria. La disponibilidad de detectores
versátiles y específicos, y la posibilidad de acoplar el cromatógrafo de gases a
un espectrómetro de masas o a un espectrofotómetro de infrarrojo, amplían
aun más la utilidad de la cromatografía de gases
Todas las técnicas cromatografías dependen de la distribución de los
componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada
también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa
en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser
un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. (30 (20)
Aplicaciones de la cromatografía de gases
La cromatografía de gases tiene aplicación, en las industrias se enfoca
principalmente a evaluar la pureza de productos o bien monitorear la secuencia
de la reacción.
2.2.6.2 Cromatografía en capa fina
La cromatografía en capa fina o película fina, o más comúnmente TLC (thin-
layer chromatography, en inglés), es una técnica cromatográfica utilizada, entre
53
otros posibles usos, para separar los componentes puros que forman parte de
una mezcla.
La elección del eluyente dependerá lógicamente del componente que se va a
separar y del material en que la separación se lleva a cabo.
Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:
1) Éter de petróleo. 2) Éter dietílico. 3) Ciclohexano. 4) Acetato de etilo. 5)
Tetracloruro de carbono.* 6) Piridina. 7) Benceno.*b acético
Técnicas cromatográficas
Las técnicas cromatográficas usadas para la detección o separación de
flavonoides de un extracto de planta son también muy variadas.
La cromatografía de papel es la técnica mas antigua y aun usada desde su
introducción en 1948 por bate Smith, se utilizan solventes como BAW (n –
buOH:HO Ac:H2O,4:1:5, fase superior),etc.
La detección de los flavonoides en ambas cromatografías, de papel y de capa
delgada, puede hacerse por el color que desarrollan el Vis o en el UV,
apareciendo como manchas fluorescentes azules, rosadas, naranjas, purpuras
y otras, las cuales se intensifican o cambian de color luego de su exposición a
vapores de amoniaco. Greissman y Markham reportan la relación que existe
entre los colores y la posible estructura del flavonoide.
En el campo de los flavonoides el HPLC ha sido bastante utilizado por ser una
técnica precisa y sensible la cual produce resultados en minutos comparada a
54
los procedimientos clásicos que requieren días o semanas y requieren
además grandes cantidades de material.
Su aplicación ha sido para comprobar la pureza de un compuesto para
determinaciones cuantitativas y para separaciones a pequeña escala. (30)
2.2.7 Espectrometría de Masa (GC-MS)
MS: mide la razón masa/radio (m/z) de los iones producidos por la muestra.
La mayoría de los iones que se generan están univalentemente cargados.
Técnicas Espectométricas
El método más usual para analizar la estructura de un flavonoides quizás a
absorción UV- Vis; esta técnica es usada tanto para identificar el tipo de
flavonoide como el modelo de oxigenación.
Esto último puede además ser mejor definido por el uso de reactivos de
desplazamiento el cual como su nombre lo indica provoca el desplazamiento de
los picos de absorción.
Los espectros de los flavonoides son determinados usualmente en solución
metanólica. El espectro típicamente consiste de dos máximos de absorción en
los rangos de 240 – 285 nm (banda II, III) Y 300- 550 nm (banda I, BI) (30) (20)
55
2.2.8 Prueba Shinoda
Es la reacción más utilizada para la detección de flavonoides en un extracto de
planta, que consiste: al extracto alcohólico incoloro o ligeramente amarillo se le
coloca un pequeño trozo de magnesio y unas pocas gotas de HCl, el
desarrollo inmediato de coloración es indicativo de la presencia de flavonas
(amarillo a rojo) flavanonoles (rojo a magenta), flavononas (rojo, magenta,
violeta, azul), isoflavonas (amarillo); isoflavanonas, chalconas y auronas no dan
coloración. (30)
2.2.9 Sinergismo: La sinergia es la integración de elementos que da como
resultado algo más grande que la simple suma de estos, es decir, cuando dos o
mas elementos se unen sinérgicamente crean un resultado que aprovecha y
maximiza las cualidades de cada uno de los elementos.(1)
2.2.10 Antagonismo:
Es la disminución o la anulación de la acción farmacológica de una droga por
acción de otra droga que actúa simultáneamente. (1)
56
2.3 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La medicina natural a partir de las plantas y sus propiedades, ha recibido
últimamente mucha atención por parte de los científicos, quienes van
descubriendo nuevos compuestos y propiedades de los mismos confirmando
así su utilidad para combatir agentes patógenos y tratar afecciones.
Así mismo en el campo odontológico son usados para prevenir y controlar la
placa dental. Dentro de estas sustancias naturales encontramos a Camelia
sinensis (te verde) y la Minthostachys mollis (muña) que poseen propiedades
terapéuticas sobre la caries dental y la enfermedad periodontal. La presente
investigación podría brindar una alternativa de elección en la inhibición de placa
dentobacteriana en pacientes ortodónticos ya que estos se encuentran más
propensos a la formación de la misma por el uso de aditamentos lo cual les
dificulta la higiene, causando así, daños a nivel de tejidos duros y blandos. Del
mismo modo podría usarse en la prevención y tratamiento de las patologías
más frecuentes de la cavidad bucal. Por ello se realiza el presente estudio a fin
de probar las propiedades antibacterianas de una solución a base de Camelia
sinensis y Minthostachys mollis frente a flora salival mixta y que dichas
soluciones en un futuro podrían ser usadas como un colutorio y así pasen a
formar parte de la higiene diaria. Así, se plantea la siguiente formulación del
problema:
¿Existe efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base de Camelia
sinensis al 15% y Minthostachys mollis al 30% frente a flora mixta salival en
pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año 2009?
57
2.4 JUSTIFICACIÓN
La importancia del presente estudio se basa en el uso de plantas naturales
aplicadas en higiene oral sobre pacientes ortodónticos a fin de comprobar su
efectividad antibacteriana, de acorde con los antecedentes de Camelia sinensis
y Minthostachys mollis sobre la flora bucal por lo cual se plantea la preparación
de una solución a base de ambas plantas para ver si actúan sinérgicamente o
se inhiben mutuamente.
Este trabajo de investigación lo que pretende buscar es llegar a recomendar
una solución a base de Camelia sinensis con Minthostachys mollis a pacientes
ortodónticos por presentar un nivel de efecto antibacteriano mayor a una
solución a base de las mismas plantas actuando por separado y con efectividad
antibacteriana mayor o similar a la clorhexidina y/o Vitis Orthodontics. De ser
así representaría una alternativa más en nuestro arsenal de higiene oral que
tendría un valor económico reducido y que por ser natural ocasionaría poco o
ningún daño a nuestro organismo.
2.5 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN
Objetivo General
Determinar la efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base
de Camelia sinensis al15% y Minthostachys mollis al 30% frente a flora
salival mixta en pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en
el año 2009.
58
Objetivos Específicos
Determinar la efectividad antibacteriana in vitro de una infusión a base de
Camelia sinensis al 15% frente a flora salival mixta en pacientes
ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año 2009.
Precisar la efectividad antibacteriana in vitro de una solución de aceite
esencial a base de Minthostachys mollis al 30% frente a flora salival
mixta en pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año
2009.
Establecer la efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base
de Camelia sinensis al 15% con Minthostachys mollis al 30% frente a
flora salival mixta en pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del
Niño en el año 2009.
2.6 HIPÓTESIS
Existe efectividad antibacteriana in Vitro de una solución a base de Camelia
sinensis al 15% y Minthostachys mollis al 30% sobre flora salival mixta en
pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año 2009.
59
III. MATERIALES Y METODOS
3.1 TIPO DE ESTUDIO
Según el control de variables: Experimental, prospectivo, transversal.
3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA
Población
Pacientes niños del Departamento de Odontología del Instituto de Salud del
Niño en el año 2009.
Pacientes niños de ambos géneros, que acudan al servicio de ortodoncia y
ortopedia maxilar del Instituto de Salud del Niño durante el mes de agosto,
que hayan iniciado el tratamiento con aparatología fija.
Muestra
El tamaño de la muestra se obtuvo aplicando la fórmula para este tipo de
estudio que fue de 23 pero para disminuir el margen de error se considero
tomar la muestra de 30 pacientes niños de 8 a 15 años del Servicio de
Ortodoncia y Ortopedia Maxilar del Instituto de Salud del Niño en el año 2009
elegidos aleatoriamente.
Para el cálculo del tamaño de la muestra, se consideró como variabilidad, una
desviación estándar de 2.57 mm. En el diámetro de halos de inhibición de la
clorhexidina, la precisión se obtuvo a través de los promedios de halos de
inhibición de la clorhexidina y la infusión a base de té verde con muña (14.85 y
12,7) según el trabajo de Paredes. Nivel de confianza del 95% y 80% de poder
de prueba.
60
Fórmula:
n = 2(Zα + Zβ)2 *S2
d2
Donde
S = 2.57mm
d =4.6225, Valor mínimo, de la diferencia que se desea detectar en la
efectividad antibacteriana sobre flora salival mixta.
Zα = 1.96, nivel de confianza del 95%
Zβ = 0.842, potencia de prueba del 80%
Haciendo las operaciones indicadas, se obtuvo un n = 23. Para efectos del
estudio, se consideró tomar n = 30 para cada grupo como tamaño mínimo.
Criterios de Inclusión
Pacientes niños de ambos géneros que acudan al Servicio de Ortodoncia y
Ortopedia Maxilar del Instituto de Salud del Niño durante el mes de Agosto que
ya hayan iniciado tratamiento con aparatología fija.
Criterios de Exclusión
Pacientes niños que presentan enfermedades sistémicas.
Pacientes niños que presentan aparatología removible
Pacientes fisurados.
61
3.3 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
Variables independientes:
• Infusión de Camelia sinensis al 15%.
• Solución de Aceite esencial de Minthostachys mollis al 30%.
• Solución a base de Camelia sinensis (15%) y Minthostachys mollis
(30%).
Variable dependiente
• Efectividad antibacteriana.
62
Variables dependientes
Variable Dimensión Indicador Escala Categoría
Efectividad
Antibacteriana de :
- Solución a base de
Camelia sinensis al
15%
- Solución de Aceite
esencial de
Minthostachys mollis
al 30%.
- Solución a base de
Camelia sinensis
(15%) y aceite
esencial de
Minthostachys mollis
(30%).
Inhibición en
el desarrollo
o crecimiento
de las
bacterias
debido a la
presencia de
los diferentes
tipos de
soluciones
Presencia del halo
de inhibición
formado
alrededor de los
discos
conteniendo los
diferentes tipos
de soluciones
Razón
Milímetros
63
3.4 MÉTODOS
3.4.1 PROCEDIMIENTOS Y TÉCNICAS
Preparación de las Soluciones
Se prepararon las siguientes soluciones:
a) 15 gr. de té verde, (envasados comercialmente) en 100 ml de agua
hervida expuesta por 3 minutos.
Se colocan los 15gr de té verde en un envase pírex y se le agregó 100 ml de
agua caliente por 3 minutos y se agitó fuertemente para mezclar el agua con
las hojas de té verde. Así se obtuvo la infusión de té verde, la cual posterior a
ello se coloco en un tubo de ensayo.
b) 3 ml de aceite esencial de muña en 10 ml de propilenglicol.
c) Solución a base de te verde al 15% con aceite esencial de muña al 30%
Extracción del aceite esencial
La extracción del aceite esencial se realizó en el laboratorio de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. (Ver anexo 10.1)
Para ello se recolectaron hojas verdes y talluelos de Minthostachys mollis, del
departamento de Junín, provincia Tarma, ubicada a 3080 m.s.n.m. la cual
cuenta con su respectiva certificación botánica. (Ver anexo 10.2)
64
Luego fueron conservados a temperatura de ambiente sin desecar, exponer al
sol o lavarlos hasta el momento de la extracción del aceite esencial.
Para la obtención del aceite esencial de la Minthostachys mollis se realizó la
destilación a vapor la cual se efectuó de la siguiente manera:
Se dejó secar unos 8 días para facilitar el deshoje y procesar un material más
concentrado.
Se procedió a licuar 3Kg. de hojas con 4 litros de agua, y esta mezcla fue
depositada en un balón de fondo plano, para luego ser sometidas al proceso de
hidrodestilación por arrastre en vapor de agua, durante 4 horas. Obteniendo
aproximadamente 5 ml de aceite esencial de muña por cada destilación
aproximadamente.
Luego la solución fue colocada en una pera de decantación, se dejo en reposo
hasta observarse la separación del agua y del aceite, procediendo luego a su
decantación.
El aceite obtenido fue sometido a desecación con sulfato de sodio anhidro,
luego filtrado, con ayuda de una bomba de vacío, el aceite se deposita en
frasco oscuro y se cierra herméticamente; luego se almacena en refrigeración
para su uso.
Las alícuotas de aceite fueron conservadas bajo refrigeración -20oC en frascos
Las ventajas de esta técnica son: su simplicidad, bajo costo y el hecho de
poder maniobrar grandes volúmenes de materia prima.
Son fundamentos de la técnica los siguientes conocimientos: los aceites
esenciales son arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en
65
la fuente de vapor, luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es condensada
mediante su paso por un refrigerante de vidrio, para luego separar el aceite del
agua.
Esta técnica resulta una de las más simples y económicas para obtener el
aceite esencial de este tipo de planta y en general para cualquier otro.
El aceite esencial obtenido tuvo las siguientes características organolépticas:
Color: Ligeramente verde amarillento.
Olor: Agradable, semejante a mentol.
Aspecto: Líquido fluido transparente.
Sabor: Picante
Fraccionamiento de los componentes del aceite esencial de
Minthostachys mollis por cromatografía de gases
Para realizar esta prueba, el aceite fue analizado en un cromatógrafo de gases
en el laboratorio de farmacia de la UNMSM. Esta prueba se basa en el tiempo
de retención de cada uno de lo componentes mediante un detector, a una
temperatura y presión determinados; luego mediante estándares se determino
la composición del aceite esencial. (Ver anexos) se observa que sus
principales componentes son:
• Timol al 1.44%
• Metileugenol 0.02%
• Eucaliptol 1.31%
• Cpto epoxido 1.23%
66
• Linalol 2.03%
• Trans- mentona 41.56%
• Pulegona 28.02%
(Ver anexos 10.3)
Fraccionamiento de los componentes de la solución a base de Camelia
sinensis
Para la determinación de la presencia de polifenoles en la infusión, se utilizo el
Método: conteo de absorbancia por UV-vis (espectrofotométrico) siendo los
resultados:
Fra 1: 0.2mg / 10ml -------------- 0.002% de compuesto Fra 2: 76mg / 10ml ------------- 0.76% de compuesto Fra 3: 78mg / 10ml ------------- 0.78% de compuesto Fra 4: 105mg /10ml ------------- 1.05% de compuesto Fra 5: 106mg / 10ml ------------ 1.06% de compuesto Donde: Fra 1: Amarilla = isoflavonas Fra 2: Amarilla= isoflavonas Fra 3: Amarillo a rojo = flavonas Fra 4: Rojo a Magenta = flavononas Fr5: Rojo a Magenta = flavononas
67
Así mismo a la solución a base de Camelia sinensis se le realizo una de las
técnicas cromatográficas como es la cromatografía de papel bajo el UV, por
ultimo se le hizo la Prueba Shinoda. (Ver anexo 10.4)
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL (Ver Anexo 10.5)
Recolección de las muestras de saliva
Las muestras de saliva fueron colectadas de 30 pacientes niños de 8 a 15 años
del Servicio de Ortodoncia y Ortopedia Maxilar del Instituto de Salud del Niño
en vasos estériles. (Permiso de Ejecución ISN, ver Anexo 10.6; Hoja de
consentimiento informado, ver Anexo 10.7)
Luego de ello, estas muestras fueron colocadas en placas estériles a razón de
alrededor de 20 ml y se procesaron dentro de un máximo de 60 minutos
subsiguientes.
Procesamiento de las muestras
Las muestras de saliva en la concentración a la escala Nº 0.5 de Mac Farland,
se sembraron mediante hisopo estéril en placas de TSA (Tripticasa Soya Agar)
Luego mediante la técnica de difusión en discos de papel filtro éstos fueron
embebidos en las soluciones problema:
A = Camelia sinensis al 15 %
B = Minthostachys mollis (aceite esencial) al 30 %
C = Camelia sinensis con Minthostachys mollis.
68
Complementariamente se utilizó un disco D con clorhexidina al 0,12 % con
cetilpiridinio libre de alcohol, y un disco E con Vitis Orthodontic para actuar
como control positivo y un disco F con agua hervida como control negativo.
Los discos fueron colocados con pinzas estériles en las placas y se procedió a
incubarlas por 24 horas en aerobiosis por 37ºC Concluido dicho tiempo se
procedió a tomar las medidas de los halos y registrarlas en la ficha de
recolección de datos.
Procesamiento estadístico.
Los datos se procesaron en el programa SPSS versión 15.0 , se utilizo la
prueba T de student.
3.4.2 Ficha de Recolección de Datos
Ficha de Trabajo de Investigación (Ver Anexo 10.8)
69
IV. RESULTADOS
Cuadro 1.1: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base de
Camelia sinensis al 15% a frente a flora salival mixta (Vs Clorhexidina).
En el cuadro 1.1 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p menor de 0,05 (p =
0,00), lo que indica que hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de té verde y la clorhexidina a favor de la clorhexidina.
Cuadro 1.2: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución al 15% a
base de Camelia sinensis frente a flora salival mixta (Vs Vitis Orthodontic)
En el cuadro 1.2 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p menor de 0,05 (p =
0,00), lo que indica que hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de té verde y Vitis Orthodontics. a favor de Vitis
Orthodontics.
70
Cuadro 2.1: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución al 30% a
base de aceite esencial de Minthostachys mollis frente a flora salival
mixta (Vs Clorhexidina)
En el cuadro 2.1 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p menor de 0,05 (p =
0,00), lo que indica que hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de muña y la clorhexidina a favor de la clorhexidina.
Cuadro 2.2: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución al 30% a
base de aceite esencial de Minthostachys mollis frente a flora salival
mixta (Vs Vitis Orthodontic)
En el cuadro 2.2 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p menor de 0,05 ( p =
0,00 ), lo que indica que hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de muña y Vitis Orthodontic a favor de Vitis
Orthodontics
71
Cuadro 3.1: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base de
Camelia sinensis y Minthostachys mollis frente a flora salival mixta
(Vs Clorhexidina)
En el cuadro 3.1 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p mayor de 0,05 (p =
0,931), lo que indica que no hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de té verde y muña y la clorhexidina lo cual indica que
ambos tienen similar efectividad antibacteriana.
Cuadro 3.2: Efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base de
Camelia sinensis y Minthostachys mollis frente a flora salival mixta.
(Vs Vitis Orthodontic)
En el cuadro 3.2 al aplicar la prueba T se obtuvo un valor p mayor de 0,05 (p =
0,202), lo que indica que no hubieron diferencias estadísticamente significativas
entre la solución a base de té verde y muña y Vitis Orthodontic lo cual indica
que ambos tienen similar efectividad antibacteriana.
72
Gráfico 1: Efectividad antibacteriana in Vitro de las soluciones en estudio
frente a flora salival mixta.
En el gráfico 1 se aprecian las medias de la efectividad antibacteriana de cada
una de las soluciones en estudio.
73
V. DISCUSIÓN
Los hallazgos del presente trabajo de investigación nos permiten evidenciar
una vez más las propiedades terapéuticas antibacterianas del té verde
coincidiendo con los estudios de Moromi y cols. (6)(7) quienes realizaron una
serie de investigaciones tanto in vitro como in vivo sobre flora salival mixta y
Streptococcus mutans obteniendo resultados similares.
Con respecto a Paredes(1), quien realizó un estudio similar in vitro con
infusiones de té verde y muña, se discrepa ligeramente debido a que obtuvo
halos de inhibición de té verde de mayor diámetro de medida y similares a la
clorhexidina ( media té verde = 15,2667; media de clorhexidina 14,8500 ) a los
encontrados en el presente trabajo lo cual podría deberse a la variación de la
muestra ya que en el presente trabajo se está aplicando sobre pacientes
ortodónticos lo que nos podría sugerir ya sea una mayor presencia de
microflora bacteriana, una variación de la misma y una mayor afinidad de
efectividad antibacteriana de la clorhexidina basándonos en los estudios de
Gastel y cols.(3) quienes hallaron que la aparatología ortodóntica tuvo un
significante impacto en las variables clínicas y microbiológicas, así como
también en los estudios de Ristic y cols.(4) quienes concluyeron que el
tratamiento con aparatología fija puede incrementar transitoriamente los valores
de todos los índices periodontales que estimulan el crecimiento o desarrollo de
bacterias periodontopatogénicas.
74
Con respecto al aceite esencial de muña en el presente trabajo se pudieron
observar halos de inhibición comprobándose su efectividad antibacteriana,
coincidiendo con los resultados de Díaz y cols. (12), Contreras G. (24), Inga B. y
Guerra M. (35)
Así mismo la efectividad antibacteriana del aceite esencial de muña por
separado comparada con la clorhexidina fue menor coincidiendo con Sekino y
cols. (15) quienes encontraron en su estudio que se formó, significativamente,
más placa dental cuando los pacientes se enjugaron con aceites esenciales (a
base de mentol y eucaliptol que cuando lo hicieran con clorhexidina.
Al mezclar ambas soluciones, se formaron halos de inhibición de mayor
diámetro que las que formaban las soluciones por separado de lo cual se
podría deducir que ambas soluciones presentan una especie de sinergismo al
actuar en conjunto por lo cual se podría recomendar su asociación y aplicación
como colutorio validando los presentes resultados con pruebas in vivo,
previamente siendo sometidos a un estudio de citoxicidad, obteniendo un
producto natural no perjudicial al ser humano. De esta manera también
podríamos comparar con los resultados de Fine y cols (13), quienes
comprobaron que los aceites esenciales en general se manifiestan hasta 12
horas después de realizados los enjuagues bucales.
Así mismo dicha solución, a base de té verde y muña, resultó ser similar en
cuanto a su efectividad antibacteriana con respecto a la clorhexidina al 0,12 %
con cloruro de cetilpiridinio sin alcohol que según Herrera y cols.(19),resultó ser
75
el que tenía mayor efectividad entre los colutorios, hecho que se puede
comprobar y validar también en el presente estudio ya que al usar además de
la clorhexidina otro control positivo como es el caso del Vitis Orthodontics este
último presentó halos de menor diámetro de inhibición bacteriana.
76
VI. CONCLUSIONES
1. Existe efectividad antibacteriana in vitro de una infusión a base de
Camelia sinensis al 15% frente a flora bacteriana salival mixta en
pacientes ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año 2009.
2. Existe efectividad antibacteriana in vitro de una solución de aceite
esencial a base de Minthostachys mollis al 30% frente a flora
bacteriana salival mixta en pacientes ortodónticos del Instituto de Salud
del Niño en el año 2009.
3. Existe efectividad antibacteriana in vitro de una solución a base de
Camelia sinensis al 15% y de aceite esencial a base de Minthostachys
mollis al 30% frente a flora bacteriana salival mixta en pacientes
ortodónticos del Instituto de Salud del Niño en el año 2009.
4. Las soluciones a base de Camelia sinensis y Minthostachys mollis, a
base de aceite esencial de Minthostachys mollis, y la infusión a base
de Camelia sinensis presentaron todas efectividad antibacteriana con
diferencia estadísticamente significativa entre ellas; siendo la primera
solución mencionada la que obtuvo mayor efectividad; la segunda, la de
mediana efectividad; y la última, la que presentaba menor efectividad
entre las tres soluciones.
77
VII. RECOMENDACIONES
1.- Estudios posteriores in vivo para comprobar su eficacia y aplicación futura
en el campo de la salud bucal.
2.- Se recomienda trabajar con una muestra mayor para que los resultados
sean de mayor significancia estadística.
3.- Estudios similares aplicados a otro tipo de muestra como pacientes con
enfermedad periodontal.
4.- Estudios de sinergismo entre infusiones y aceites esenciales de otros tipos
de plantas.
5.- Estudios de sinergismo de la infusión del té verde con clorhexidina o Vitis
Orthodontic y de la solución de aceite esencial de muña con clorhexidina o
Vitis Orthodontic.
6.- Se recomienda la acogida de la propuesta del presente estudio por parte de
alguna empresa farmacéutica para su posterior comercialización por ser un
producto natural frente a otras opciones del mercado, previo estudio sobre
citotoxicidad.
78
VIII. RESUMEN
Para determinar la actividad antibacteriana in vitro de una solución a base de
Camelia sinensis y Minthostachys mollis frente a flora bacteriana salival mixta,
se recolectó saliva no estimulada de 30 niños del servicio de Ortodoncia y
Ortopedia Maxilar del Instituto de Salud del Niño y se sembró en el medio Agar
Tripticasa Soya. Se utilizó el medio de difusión por discos para las soluciones
de té verde, muña, y té verde y muña, y los controles positivos
(Clorhexidina y Vitis Orthodontics) y negativo (agua hervida), las placas se
incubaron a 37ª C / 24 horas.
El análisis estadístico, demostró la efectividad antibacteriana de las soluciones
de Camelia sinensis, Minthostachys mollis y Camelia sinensis y Minthostachys
mollis en orden de menor a mayor efectividad antibacteriana siendo la última
solución de efectividad similar a la clorhexidina y Vitis Orthodontics.
Debido a los resultados del presente estudio que comprobaron la efectividad
similar a estos dos últimos productos de uso y actual demanda comercial, es
necesaria la continuación de estudios in vivo para comprobar dicho hallazgo y
promover su uso como enjuagatorio bucal, así como estudios de asociación de
soluciones entre otras plantas o de las mismas combinadas clorhexidina y Vitis
Orthodontics.
Palabras clave: Camelia sinensis, Minthostachys mollis, saliva, infusión, aceite
esencial.
ABSTRACT
In order to determine the antibacterial activity in vitro of a solution made from
Camellia sinensis and Minthostachys mollis on mixed salivary flora was
collected unstimulated saliva of 30 children of service of Orthodontics and
maxillary orthopedic of the “Instituto de salud del Niño” and planted in
Trypticase Soy Agar. Using the disk diffusion for the solutions of green tea,
muña, muña and green tea, and positive. (Chlorhexidine and Vitis Orthodontic)
and negative (boiled water) controls. The plates were incubated at 37 º C / 24
hours.
79
The stadistical analysis showed the antibacterial effectiveness of the solutions
of Camelia sinensis, Minthostachys mollis and Camelia sinensis and
Minthostachys mollis in order from minor to major antibacterial effectiveness,
being the last solution similar to chlorhexidine and Vitis Orthodontic
effectiveness.
Because of the results of this study that demostrated similar effectiveness to
these two current products of use and commercial demand, it is necessary to
perform studies in vivo to verify this finding and promote its use as
mouthwashes and association studies of solutions among other plants or the
same combined chlorhexidine and Vitis Orthodontic
Key words: Camelia sinensis, Minthostachys mollis, saliva, infusion, essential
oil
80
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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86
X. ANEXOS
10.1 Extracción Aceite Esencial Minthostachys mollis
Se procedió a pesar 3 kg. de hojas secas de Minthostachys mollis las cuales fueron depositadas posteriormente junto con 4 litros de agua en la máquina de
extracción de aceite esencial por método de arrastre de vapor de agua.
87
Se obtuvo una solución al cabo de unas horas, la cual fue puesta en un matraz,
Después se procedió a eliminar impurezas con el papel filtro.
88
La solución fue colocada en una pera de decantación, se dejo en reposo hasta observarse la separación del agua y del aceite, procediendo luego a su
decantación.
89
El aceite obtenido fue sometido a desecación con sulfato de sodio
anhidro, luego filtrado, con ayuda de una bomba de vacío, el aceite se deposita en frasco oscuro y se cierra herméticamente; luego se
almacena en refrigeración para su uso.
90
10.2 Certificación botánica
91
10.3 Cromatografía de Minthostachys mollis
Firma de Botánico Alexander Bermúdez Blas. CBP 6597
92
10.4 Técnicas cromatográficas de Camelia sinensis
Guillermo Guerrero Gonzales
93
10.4.1 Cromatografía en capa fina de Camelia sinensis
Se procedió a realizar la cromatografía de papel en capa fina de la Camelia sinensis con el fin de determinar la presencia de flavonoides.
Imagen de la capa fina de Camelia sinensis expuesta a los rayos UV apareciendo manchas fluorescentes azules, púrpuras y ligeramente amarillas
94
las cuales se intensificaron o cambiaron de color luego de su exposición a vapores de amoniaco
10.4.2 Prueba Shinoda de Camelia sinensis
Posterior a la exposición al UV, se evidenció 5 formas de manchas, las cuales se procedió a cortarlas en trozos pequeños, luego colocados en 5 frascos de
acuerdo al orden que se presentaron se le añadió una solución llamada metanol, seguidamente se le colocó pequeños trozos de magnesio.
95
Luego de colocar los trozos de magnesio, se procedió a añadirle unas pocas gotas de HCl.
Se observó turbidez en los tubos de ensayos, desapareciendo luego de unos minutos, posterior a ello se evidenció el desarrollo inmediato de coloración que
es indicativo de la presencia de flavonas.
96
10.5 Procedimiento experimental 10.5.1 Recolección de la muestra salival
Se procedió a la recolección de la muestra en vasos estériles a razón de alrededor de 20 ml y se procesaron dentro de un máximo de 60 minutos
subsiguientes.
10.5.2 Preparación de las soluciones
Posterior a ello se prepararon las soluciones
de Camelia sinensis al 15%.
97
También se preparó la solución de aceite esencial de Minthostachys mollis al 30% y de una tercera solución a base de ambas plantas.
98
10.5.3 Procesamiento de las muestras
Seguidamente se estandarizaron las muestras salivales a la escala de turbidez
McFarland 0,5.
99
Las muestras se sembraron en Placas TSA mediante hisopado directo, a las cuales se les colocó discos de papel Wattman tipo III previamente embebidas
en las soluciones estudio, y controles positivos (Clorhexidina y Vitis Orthodontic) y negativo (agua hervida).
10.5.4
Resultados
Resultados de los halos de inhibición a las 24 horas 37º C. Disco A: Camelia sinensis al 15%. Disco B: Minthostachys mollis al 30%. Disco C: Camelia
sinensis y Minthostachys mollis. Disco D: Clorhexidina. E: Vitis Orthodontic. F: Agua hervida.
100
10.6 Permiso otorgado por el INSN
101
10.7 Consentimiento Informado
INFORMACION DEL ESTUDIO Y FORMULARIO DE CONSENTIMIENTO
Título: Efectividad Antibacteriana in vitro de una solución a base de Camelia
sinensis y Minthostachys mollis Sobre Flora Salival Mixta.
Investigadoras: Karla Fiorella Fernández Sáenz
Carla Janet García Lecca
Institución: Facultad de Estomatología de la Universidad Inca Garcilaso de la
Vega
La información que se describe a continuación, describe la presente investigación
y el papel que usted desempeña como participante de la misma.
Objetivo de la Investigación
Determinar la efectividad antibacteriana in vitro de una solución al 10% a base
de Camelia sinensis y Minthostachys mollis frente a flora salival mixta.
Participación en el Estudio
Recolección de 20 a 40 ml. de muestra salival.
102
Procedimientos que se seguirán durante la investigación
Su niño será uno de los 30 pacientes del Servicio de Ortodoncia y Ortopedia
Maxilar del Instituto de Salud del Niño cuya muestra salival será colocada en
placa estéril a razón de alrededor de 20 ml y se procesarán dentro de un
máximo de 60 minutos subsiguientes.
Las muestras de saliva en la concentración a la escala Nº 0.5 de Mac Farland,
se sembrarán mediante hisopo estéril en placas de TSA (Tripticasa Soya Agar)
Luego mediante el método de difusión en discos de papel filtro estos serán
embebidos en las soluciones problema:
A = Camelia sinensis al 15 % (infusión)
B = Minthostachys mollis al 30 % (aceite esencial)
C = Camelia sinensis con Minthostachys mollis.
Complementariamente se utilizará un disco D con clorhexidina al 0,12 % con
cetilpiridinio libre de alcohol, un disco E con Vitis Orthodontics para actuar
como controles positivos y un disco F con agua hervida como control negativo.
Los discos serán colocados con pinzas estériles en las placas y se procederá a
incubarlas por 24 – 48 horas en aerobiosis por 37ºC.
Luego de ello se procederá a la medida del diámetro del halo de inhibición, en
milímetros, entre las soluciones problema y control positivo y negativo por
paciente y entre pacientes.
Confidencialidad:
La ficha de datos en la cual se identifica a su niño y el consentimiento
informado que firmó serán revisados por las investigadoras. Los resultados de
103
esta investigación podrán presentarse para su exposición, sin embargo, su
identidad no será divulgada en tales presentaciones.
Consentimiento:
He leído y conversado con las investigadoras sobre esta hoja de información y
formato de consentimiento y entiendo el contenido. Por tanto doy
consentimiento voluntario para que mi niño participe en la investigación.
________________________________________ Fecha: ______________
Nombres y Apellidos del Niño y Firma del Apoderado_________
10.8 Ficha de Recolección de datos
Nombre:______________________________________________ Edad: ____ años
Género: F___ M___ Fecha de Toma de Muestra: ____ de mayo del 2009
Presenta alguna enfermedad sistémica: _____________________________
Resultados:
Soluciones
Té verde
15%
Muña
30%
Té verde
15% +
Muña 30%
Clorhexidina
100%
Vitis
Orthodontics
100%
Agua
hervida
100%
Diámetro en mm.