FOSFORILASI OKSIDATIF

Energi bebas yang tersedia sebagai konsekuensi dari mentransfer 2 elektron dari NADH atau suksinat ke molekuler oksigen adalah -57 dan -36 kkal / mol. Fosforilasi oksidatif perangkap energi ini sebagai fosfat berenergi tinggi ATP. Agar fosforilasi oksidatif untuk melanjutkan, dua kondisi utama harus dipenuhi. Pertama, membran dalam mitokondria harus secara fisik utuh sehingga proton hanya dapat masuk kembali ke mitokondria dengan proses digabungkan untuk sintesis ATP. Kedua, konsentrasi tinggi proton harus dikembangkan di luar membran dalam.

Energi dari gradien proton dikenal sebagai potensi kemiosmotik, atau proton kekuatan motif (PMF). Potensi ini adalah jumlah perbedaan konsentrasi proton di membran dan perbedaan muatan listrik di membran. 2 elektron dari NADH menghasilkan gradien 6-proton. Jadi, oksidasi 1 mol NADH menyebabkan ketersediaan PMF dengan energi bebas dari sekitar -31,2 kkal (6 x -5,2 kkal). Gradien energi yang digunakan untuk mendorong sintesis ATP sebagai proton diangkut kembali ke gradien termodinamika mereka ke mitokondria.

Elektron kembali ke mitokondria melalui protein integral membran dikenal sebagai synthase ATP (atau Kompleks V). ATP synthase subunit kompleks beberapa yang mengikat ADP dan fosfat anorganik di situs katalitiknya dalam mitokondria, dan membutuhkan gradien proton untuk kegiatan ke arah depan. ATP synthase terdiri dari 3 fragmen: F0, yang terlokalisasi dalam membran: F1, yang menonjol dari bagian dalam membran dalam ke dalam matriks: dan oligomycin sensitivitas-berunding protein (OSCP), yang menghubungkan F0 untuk F1. Dalam mitokondria rusak, permeabel untuk proton, reaksi ATP synthase aktif dalam arah sebaliknya bertindak sebagai hydrolase ATP yang sangat efisien atau ATPase.

Jalur aliran elektron melalui perakitan transpor elektron, dan ikatan unik yang tepat dari PMF, telah ditentukan melalui penggunaan sejumlah antimetabolites penting. Beberapa agen inhibitor transpor elektron di situs tertentu di perakitan transpor elektron, sementara yang lain menstimulasi transpor elektron oleh pemakaian gradien proton. Untuk contoh, antimycin adalah inhibitor spesifik sitokrom b. Di hadapan antimycin A, cytokrom b dapat dikurangi tetapi tidak teroksidasi. Seperti yang diharapkan, di hadapan sitokrom c teroksidasi tetap di hadapan antimycin A, sama seperti sitokrom hilir a dan a3.

Kelas penting dari antimetabolites adalah agen pemisah dicontohkan oleh 2,4-dinitro-fenol (DNP). Agen pemisah bertindak sebagai agen lipofilik asam lemah, bergaul dengan proton di exterior mitokondria, melewati membran dengan proton terikat, dan memisahkan proton pada bagian dalam mitokondria. Agen ini menyebabkan tingkat pernafasan maksimum transpor elektron tetapi tidak membangkitkan ATP, karena translokasi proton tidak kembali ke pedalaman lewat ATP synthase.

Prinsip praktek

Dengan keberadaan substrat, bernafas mitokondria dan membentuk ATP dari ADP dan anorganik fosfat (Pi). Jika glukosa dan enzim heksokinase juga ada, Pi dimasukkan ke dalam ATP selama fosforilasi oksidatif adalah terperangkap senyawa stabil glukosa 6 fosfat.

Jika 'perangkap heksokinase' diabaikan, ATP dipecah oleh mitokondria ATP'ases dan rendah serapan nilai Pi dapat diperoleh.

Isi Pi medium sebelum dan sesudah percobaan diukur dan respirasi yang ditunjukkan oleh penghilangan warna dari metilen biru.

Potensi redoks bentuk teroksidasi dan penurunan metilen biru

(MB+2H==MBH2) yang dekat dengan pasangan ubiquinone (CoQ+2H =,'CoQ.2H)

Metilen biru sehingga dapat bersaing baik dengan ubiquinone untuk setara mengurangi, sehingga memungkinkan dua jalur aliran elektron dari glutamat. Selama respirasi aktif, jalur aerobik bersaing baik dengan cabang metilen biru, sehingga pewarna menjadi hanya sebagian decolorized sampai semua oksigen habis digunakan. Pada tahap ini, metilen biru berjalan sepenuhnya tanpa warna karena fungsi rantai pernafasan tidak bisa lagi. Jika agen pemisah seperti 2,4-dinitrophenol hadir, tingkat respirasi yang meningkat dan perubahan warna tersebut di atas terjadi lebih cepat. Sianida menghambat aliran elektron oleh penghambat sitokrom oksidase, rantai komponen terminal. Dengan adanya sianida, maka metilen biru dengan sangat cepat mengoksidasi tetapi warnanya tidak hilang sepenuhnya karena zat warna ini mudah mengoksidasi oleh molekul oksigen, yang masih ada.

Material 1. mitokondria hati tikus2. inkubasi menengah (campuran berikut ini disusun, disesuaikan

dengan alkali dengan pH 7,4 sampai membuat volume tetap untuk menunjukkan molaritas)

Komponen mMGlukosa 150KHZPO4 50EDTA 3ATP 3NAD 0,2Bovine serum albumin

2,5 mg / ml

Heksokinase Mentah

0,5 mg / ml

ATP ditambahkan sejak ini lebih murah dari ADP. ATP adalah dalam hal apapun segera dialihkan ke ADP di hadapan heksokinase. EDTA menghilangkan bekas apapun logam berat yang dapat hadir sebagai pencemar dalam larutan. NAD akan ditambahkan untuk melengkapi setiap kehilangan selama isolasi mitokondria. Bovine serum Albumin menghapus uncouplers dari fosforilasi oksidatif seperti asam lemak rantai panjang yang dapat terakumulasi dalam mitokondria terisolasi.

3. 2,4-Dinitophenol (5 mM)4. Metilen biru (25 mg/100ml)5. Kalium sianida (50mM)6. Sukrosa (M larutan yang mengandung 25 mM MgCl2)7. Trichlor asam asetat (10%)8. Water bath suhu 37°C9. Larutan untuk perkiraan fosfat10. Parafin cair (digas keluar dengan nitrogen)11. Nitrogen silinder12. Natrium hidrogen glutamat (0,2 M)

Metode Siapkan 5 tabung inkubasi. Nomor 1 dan 2 dibuat di tabung mendidih, dan 3, 4 dan 5 dalam tabung reaksi. Bahan-bahan harus ditambahkan dalam urutan yang diberikan dan dicampur secara merata setelah setiap penambahan.

Isi (ml) Fosfat Respirasi1 2 3 4 5

Inkubasi medium 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0Natrium hidrogen glutamate (0,2 M) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,22,4-Dinitrophenol (5mM) - 0,1 - 0,1 -Metilen biru 925mg/100ml - - 0,2 0,2 0,2Kalium sianida (50mM) - - 0,1 - -Air 0,3 0,2 - - 0,1Sukrosa (M dengan 25mM MgCl2) 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6Mitokondria suspensi (dicuci dua kali dalam sukrosa) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

I. Fosfat Estimasi - Menyeimbangkan campuran dalam tabung 1 dan 2 pada 37 ° C

dan pada waktu nol menambahkan mitokondria, campuran cermat dan segera menarik 0,2 ml sampel dan deproteinized dengan mencampurkan dengan 2,8 ml TCA 10%.

- Hapus protein diendapkan dengan sentrifugasi dan memperkirakan isi Pi dari aliquot dari supernatan

- Menandai tabung dan menempatkan pada water bath suhu 37°C- Hapus lebih lanjut aliquots setiap 5 menit dan menentukan Pi

dari media dan menginterpretasikan hasil.

II. Penyerapan oksigen- Tambahkan sekitar 2 ml parafin cair ke tabung 3, 4 dan 5- Memanaskan pada suhu 37 ° C tanpa agitasi dan amati

perubahan warna dengan waktu- Membaca perubahan tersebut, mengingat poin yang dibuat

dalam pendahuluan percobaan ini

KOMPONEN DIET

Ada 6 komponen utama dari diet: protein, lemak, karbohidrat, vitamin, mineral dan air. Komponen makanan berfungsi untuk membantu dalam hal berikut:

1. Pertumbuhan2. menghasilkan energi3. memelihara jaringan dan4. sintesis berbagai metabolit yang diperlukan (hormon & enzim)5. sistem kekebalan

Protein Ada dua jenis protein:

1. protein hewani2. protein nabati

Protein hewani memiliki nilai biologi tinggi karena mengandung semua asam amino esensial. protein nabati kurang efisien dalam memasok asam amino yang lengkap, terutama kedelai. Kandungan kalori pembakaran protein 4 kkal / gram.

Karbohidrat Karbohidrat adalah sumber energi pertama dan paling efisien bagi proses-proses vital. Sumber utama karbohidrat dalam makanan adalah

gula, pati, dan selulosa. Karbohidrat bentuk sumber energi utama utama di negara-negara berkembang. Kandungan kalori pembakaran karbohidrat adalah 4 kkal / gram.

Lemak Ada dua sumber lemak:

1. lemak hewani2. lemak nabati

lemak nabati mengandung asam lemak tak jenuh, di antaranya adalah asam lemak esensial. Lemak memiliki lebih dari dua kali nilai protein atau karbohidrat. Kandungan kalori pembakaran lemak 9 kkal / gram.

Vitamin 1. vitamin larut lemak adalah A, D, E dan K.2. larut air adalah vitamin B dan C

Banyak vitamin dihancurkan oleh memasak yang tidak benar. Beberapa vitamin larut air sebagian hilang dalam air memasak. Daging terlalu matang juga berkontribusi untuk vitamin rugi.

Mineral Mineral, sementara membentuk hanya sebagian kecil dari berat total tubuh, yang tetap sangat penting. Buah-buahan, sayuran dan sereal merupakan sumber utama elemen mineral dalam makanan.

Air Air adalah bukan makanan, tapi karena biasanya dikonsumsi dalam makanan itu dimasukkan sebagai salah satu komponennya. Lebih dari 50% dari berat badan adalah air. Ada dua jenis air dalam tubuh: air bebas dan dibatasi

PRAKTEK DIET

Tugas Anda harus ingat asupan makanan Anda selama 24 jam dan kemudian menghitung:

1. kuantitas asupan makanan dalam gram2. jenis asupan makanan3. protein, lipid, karbohidrat, kalori, vitamin dan mineral dalam

makanan Untuk menghitung asupan makanan Anda menggunakan "Analisis pangan." Ini berisi contoh-contoh dari makanan sehari-hari.

Silahkan menarik kesimpulan tentang diet Anda. Contoh: daftar bahan makanan yang dikonsumsi sehari-hari

Nama Jumlah siswa Hari

MAKANAN Pencernaan

Pengenalan Kebanyakan bahan makanan ditelan dalam bentuk yang tidak tersedia untuk organisme, karena mereka tidak dapat diserap dari saluran pencernaan sampai mereka telah dipecah menjadi molekul yang lebih kecil. Disintegrasi ini bahan makanan alami dalam bentuk assailable merupakan proses pencernaan. Bahan kimia perubahan insiden untuk pencernaan orang dilakukan dengan bantuan enzim hydrolase tentang saluran pencernaan yang

mengkatalisis hidrolisis protein asli asam amino, dari pati untuk monosakarida, dan triacylglycerols untuk monoacylglycerols, gliserol, dan asam lemak. Dalam kegiatan ini reaksi pencernaan, vitamin dan mineral dari bahan makanan juga dibuat lebih assailable. 1. Pencernaan di rongga mulut Air liur, disekresikan oleh kelenjar ludah, terdiri dari sekitar 995% air. Ini mengandung glikoprotein, musin, yang bertindak sebagai pelumas untuk pengunyahan dan untuk menelan. Menambahkan air untuk makanan kering menyediakan medium di mana molekul-molekul makanan dapat larut dan di mana hydrolases dapat memulai pencernaan. Mastikasi membagi makanan, meningkatkan kelarutan dan luas permukaan untuk melampirkan enzim. air liur juga merupakan kendaraan untuk ekskresi obat tertentu (egethanol dan morfin), ion anorganik seperti K +,, + Ca 'HCO3-, tiosianat (SCN), dan yodium, dan imunoglobulin (IgA). PH saliva biasanya sekitar 6,8, meskipun mungkin berbeda di kedua sisi netralitas. Air liur mengandung amilase (ptyaline), yang mampu membawa tentang hidrolisis pati dan glikogen untuk maltosa dan oligosakarida lain dengan menyerang (1 4) obligasi glikosidik. Amilase liur mudah dilemahkan pada pH 4,0 atau kurang, sehingga tindakan pencernaan makanan dalam mulut akan berhenti segera setelah lingkungan asam lambung telah menembus partikel makanan. Pada banyak binatang, sebuah amilase liur sepenuhnya absen. Sebuah lipase lingual disekresikan oleh permukaan dorsal lidah (kelenjar Ebner's), tapi penyelidikan menunjukkan bahwa enzim ini tidak signifikan seperti pada manusia dibandingkan dengan tikus atau mouse, di mana ia adalah satu-satunya enzim lipase preduodenal. 11. Pencernaan dalam perut pencernaan protein dimulai di perut. Sekresi lambung dikenal sebagai jus lambung. Ini adalah cairan, jelas kuning pucat HCI 0,2-0,5%, dengan pH sekitar 1 ,0. Jus lambung adalah air 97-99%. Sisanya terdiri dari musin dan garam anorganik, enzim-enzim pencernaan (pepsine dan rennin) dan sebuah lipase. Asam klorida denatures protein dan membunuh bakteri. The parietal (oxyntic) sel merupakan sumber HCI lambung. Proses kimia yang mirip dengan pergeseran klorida "" dijelaskan untuk sel darah merah. Ada juga kemiripan pada mekanisme tubular ginjal untuk sekresi W, di mana sumber H + juga pembentukan anhydrate-katalis karbonat H 2 Co 3 dari H20 dan sel CO-parietal faktor intrinsik juga mengeluarkan, sebuah glikoprotein yang memfasilitasi penyerapan vitamin B.2 dari ileum. Sebagai akibat dari kontak dengan HCI lambung, protein didenaturasi: yaitu struktur protein tersier yang hilang sebagai hasil dari penghancuran ikatan hidrogen. Hal ini memungkinkan rantai polipeptida terungkap, sehingga lebih mudah diakses dengan tindakan enzim proteolitik (protease). PH rendah juga memiliki pengaruh yang paling menghancurkan mikroorganisme memasuki saluran pencernaan. Pepsin memulai pencernaan protein. Pepsin diproduksi di ceps kepala sebagai zymogen tidak aktif, pepsinogen. Ini diaktifkan untuk pepsin oleh H +, yang memecah dari sebuah polipeptida pelindung untuk mengekspos pepsin aktif: dan oleh pepsin itu sendiri, yang dengan cepat mengaktifkan molekul lebih lanjut pepsinogen (autocatalysis). Pepsin adalah sebuah endopetidase. Rennin (chymosin, rennet). Rennin penting dalam proses pencernaan bayi karena bagian yang cepat mencegah susu dari lambung. Dengan adanya kalsium, rennin mengubah kasein susu di reversibel paracasein, yang kemudian bertindak oleh pepsin. Rennin dilaporkan absen dari perut orang dewasa. Hal ini digunakan untuk membuat keju (rennet). Lipase lambung disekresi oleh perut. Ini adalah enzim lipase

preduodenal utama. Bahasa dan lipase lambung memulai pencernaan lipid oleh hidrolisis triacyglycerols mengandung pendek, menengah, dan umumnya tak jenuh rantai panjang asam lemak, untuk membentuk terutama asam lemak bebas dan 1,2-diacylglycerols. Enzim-enzim ini hancur pada pH rendah tetapi aktif setelah makan karena tindakan dapar protein diet di lambung pH optimum adalah luas, 3,0-6,0. lipase Preduodenal tampak sangat penting selama periode neonatal ketika lipase pankreas mungkin rendah dalam kegiatan dan lemak susu harus dicerna. Susu mengandung lemak pendek dan menengah-rantai asam lemak. Oleh karena itu, lemak susu tampaknya menjadi substrat yang baik untuk enzim ini. Ini merilis hidrofilik pendek dan menengah-rantai asam lemak ini diserap melalui dinding lambung dan memasuki vena portal, sedangkan asam lemak rantai lagi-larut dalam tetesan lemak dan lulus ke duodenum. III. Pencernaan dalam usus isi perut itu, atau perut yg menghancurkan makanan, yang sebentar-sebentar diperkenalkan selama pencernaan ke duodenum melalui katup pilorus. Isi alkalin sekresi pankreas dan empedu menetralisir asam dari perut yg menghancurkan makanan dan perubahan pH bahan ini ke sisi basa. A. empedu diproduksi oleh hati. Toko kantong empedu empedu antara waktu makan. Selama pencernaan, kandung empedu kontrak dan persediaan empedu dengan cepat ke duodenum melalui duktus empedu umum. Campuran sekresi pankreas dengan empedu, karena mereka kosong ke saluran umum lama sebelum masuk ke dalam duodenum. Fungsi empedu adalah: (1). Emulsifikasi. Garam empedu memiliki kemampuan yang cukup besar dalam tegangan permukaan yang lebih rendah. Ini memungkinkan mereka untuk emulsi lemak dalam usus dan melarutkan asam lemak dan air sabun larut. Kehadiran empedu dalam usus adalah tambahan penting untuk mencapai pencernaan dan penyerapan lemak serta penyerapan vitamin larut lemak. (2). Netralisasi asam. empedu memiliki pH sedikit diatas 7, menetralkan asam di perut yg menghancurkan makanan dari perut dan mempersiapkan untuk pencernaan di usus. (3). Ekskresi. Empedu adalah kendaraan penting bagi ekskresi asam empedu dan kolesterol, tetapi juga menghilangkan banyak obat, toksin, pigmen empedu, dan berbagai zat anorganik seperti tembaga, seng, dan merkuri. B. sekresi pankreas. Banyak enzim yang ditemukan dalam sekresi pankreas, beberapa juga dikeluarkan sebagai zymogen. 1. Tripsin adalah khusus untuk ikatan peptida asam amino dasar, dan chymotrypsin adalah khusus untuk ikatan peptida yang mengandung asam amino bermuatan residu seperti asam amino aromatik. Elastase memiliki kekhususan lebih luas dalam menyerang obligasi samping kecil residu asam amino seperti glisin, alanin, dan serin. Ketiga enzim yang disekresikan sebagai zymogens. 2. Carboxypeptidase adalah sebuah exopeptidase. Ini menyerang ikatan peptida terminal karboksil, asam amino membebaskan tunggal. 3. Pankreas - amilase serangan pati dan glikogen? Untuk maltosa, maltotriose, dan campuran cabang (1a6) oligosakarida (batas-dekstrin), non-oligosakarida bercabang, dan glukosa beberapa. 4. lipase pankreas menyerang link ester utama triacylglycerols. 5. Cholesteryl ester hydrolase (esterase kolesterol) mengkatalisis hidrolisis ester cholesteryl, yang demikian diserap dari usus dalam bentuk bebas nonesterified. 6. Ribonuklease (RNase) dan deoxyribonuclease (DNase) bertanggung jawab atas asam nukleat pencernaan makanan. 7. Az fosfolipase Hidrolisis ikatan ester dalam posisi 2 dari glycerophospholipids asal-usul kedua empedu dan makanan untuk membentuk lysophospholipids. C. jus usus

Hal disekresi oleh kelenjar dari Brunner dan Lieberkuhn mengandung enzim pencernaan, antara lain: 1. Aminopeptidase, yang merupakan exopeptidase menyerang ikatan peptida samping terminal amino asam amino polipeptida dan oligopeptides. 2. Dipeptidase mengkatalisis dipeptides untuk dua asam amino bebas. 3. disaccharidases Tertentu dan oligosaccharidases, yaitu: Sucrase, Hidrolisis sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa. Laktase Hidrolisis laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Hidrolisis Maltase maltosa menjadi glukosa dan glukosa. Oligosaccharidases, menghidrolisis oligosakarida untuk 3-10 monosakarida. 4. Fosfatase, yang menghilangkan dari fosfat organik fosfat tertentu seperti heksosa fosfat, glycerophophate, dan nukleotida berasal dari makanan dan pencernaan asam nukleat oleh nucleases. 5. Polynucleotidases, yang memisahkan asam nukleat menjadi nukleotida. 6. Nucleosidases (phosphorilases nukleosida) mengkatalisis phosphorolysis dari nukleosida untuk memberikan dasar nitrogen bebas plus fosfat pentosa. 7. serangan fosfolipase fosfolipid untuk menghasilkan gliserol, asam lemak, asam fosfat dan basa seperti kolin. Pigmen empedu Asal pigmen empedu dari hemoglobin (Hb) dibahas di bawah ini. Katabolisme heme menghasilkan bilirubin. Dalam kondisi fisiologis pada manusia dewasa, 1-2 x JOA eritrosit dihancurkan per jam. Jadi dalam 1 hari, 70 kg ternyata manusia selama sekitar bg hemoglobin. Ketika hemoglobin dihancurkan di dalam tubuh, globin diturunkan kepada konstituen asam amino, yang digunakan kembali. Besi heme memasuki kolam besi, juga untuk digunakan kembali. Bagian porfirin besi-bebas dari heme juga rusak, terutama di sel retikuloendotelial hati, limpa, dan sumsum tulang. The katabolisme heme dilakukan di fraksi mikrosoma sel oleh sistem enzim kompleks disebut heme oxygenase. besi ini biasanya sudah teroksidasi menjadi bentuk feri, merupakan heroin. dengan reaksi kimia yang panjang, menghasilkan biliverdin IX-a. Pada burung dan amfibia, hijau biliverdin-IX adalah diekskresikan; pada mamalia, biliverdin IX-adalah dikurangi dengan reduktase biliverdin untuk menghasilkan bilirubin IX-pigmen kuning. Diperkirakan bahwa 1 g Hb menghasilkan 35 mg bilirubin. Pembentukan manusia sehari-hari pada orang dewasa sekitar 250-350 mg, terutama yang berasal dari Hb tetapi juga dari eritropoiesis tidak efektif dan dari berbagai protein heme lain seperti sitokrom P450. Bilirubin terbentuk di jaringan perifer diangkut ke hati oleh albumin plasma. Metabolisme bilirubin selanjutnya terjadi terutama di hati. Hal ini dapat dibagi menjadi tiga proses: (1). Uptake bilirubin oleh sel parenkim hati. (2) konjugasi bilirubin dalam retikulum endoplasma halus, dan (3). Sekresi bilirubin konjugasi dalam empedu. Dalam hati, bilirubin akan dihapus dari albumin dan diambil pada permukaan sinusoidal dari hepatosit oleh carrier. Dalam hati, bilirubin akan terkonjugasi dengan asam glukuronat membentuk bilirubin diglucuronide. Kemudian bilirubin terkonjugasi akan disekresi ke dalam empedu. Hal ini terjadi dengan mekanisme transpor aktif. Bilirubin terkonjugasi direduksi menjadi urobilinogen oleh bakteri usus. Sebagai bilirubin terkonjugasi mencapai ileum dan usus besar terminal, yang glucuronides dikeluarkan oleh enzim bakteri yang spesifik ((3-glucuronidase) dan pigmen tersebut kemudian dikurangi dengan flora fecal kepada sekelompok senyawa berwarna tetrapyrrolic disebut urobilinogen. Pada ileum terminal dan usus besar, sebagian kecil dari urobilinogen ini diserap kembali dan reexcreted melalui hati untuk membentuk siklus urobilinogen enterohepatic. Dalam kondisi normal, terutama ketika, pigmen empedu yang berlebihan terbentuk dari penyakit hati mengganggu siklus ini intrahepatic, urobilinogen

juga dapat dikeluarkan di urin. Biasanya, sebagian besar berwarna urobilinogens terbentuk dalam usus oleh flora feces dioksidasi sana untuk urobilins (senyawa berwarna) dan diekskresikan dalam tinja (mesobilirubinogen, stercobilinogen, dan stercobilin). Penggelapan warna tinja pada berdiri di udara disebabkan oleh oksidasi urobilinogen sisa untuk urobilin. Penyebab hiperbilirubinemia sakit kuning Ketika bilirubin dalam darah melebihi 1 mg / dL (17,1 umol / L), hiperbilirubinemia ada. Hiperbilirubinemia mungkin karena produksi bilirubin lebih dari hati normal dapat mengeluarkan, atau mungkin akibat dari kegagalan hati yang rusak untuk mengekskresikan bilirubin yang diproduksi dalam jumlah normal. Dengan tidak adanya kerusakan hati, obstruksi saluran ekskretoris ke hati - dengan mencegah ekskresi bilirubin - juga akan menyebabkan hiperbilirubinemia. Dalam semua situasi ini, bilirubin terakumulasi dalam darah, dan ketika mencapai suatu konsentrasi tertentu (sekitar 2-2,5 mg / dL), itu berdifusi ke dalam jaringan, yang kemudian menjadi kuning. Kondisi ini disebut sakit kuning atau ichterus.

EKSPERIMEN pada pencernaan Sebelum melakukan percobaan ini, setiap siswa diminta untuk belajar tentang pencernaan dari catatan kuliah, dan Harper's Biokimia Buku dan manual Percobaan. Percobaan pada koleksi Air liur air liur Merangsang sekresi air liur dengan membilasnya mulut Anda dengan 20 ml larutan 0,2% NaCl. Bilas mulut Anda dalam satu menit. Kemudian menangkap isi dari mulut Anda ke dalam sebuah gelas. air liur Difilter harus digunakan dalam setiap percobaan. Solusi amilum Siapkan larutan amilum direbus Saya% larutan amilum dalam air. Percobaan 1. Amilase liur - Ke dalam setiap dari tiga tabung tempat sekitar 5 ml air liur encer. - Letakkan tabung pertama di air mandi mendidih, lalu dingin - Untuk tabung kedua tambahkan 5 tetes HCI encer - Untuk masing-masing tiga tabung tambahkan 5 ml 1 amilum%, dan tempat mandi air pada 37 ° Celcius. - Secara berkala (setiap menit 1) mengambil setetes solusi dan bercampur dengan satu tetes yodium pada ubin putih. Percobaan 2. Uji Benedict - Setelah uji yodium telah negatif (hasil uji yodium adalah warna yang jelas), pelaksanaan pengujian Benediktus. - Ambil 5 setetes larutan dan tambahkan 2 ml reagen Benedict. - Rebus solusi selama 5 menit. - Apakah hasil dari setiap tabung? Jelaskan. Percobaan pada pencernaan lambung Percobaan 3. Pencernaan protein oleh pepsin - Ke dalam masing-masing dari tiga tempat tes tabung 1 ml pepsine - Ke dalam tabung pertama tambahkan 1 ml 0,4% HCI - Ke dalam tabung kedua tambahkan 1 ml air - Rebus dan sejuk tabung ketiga dan kemudian menambahkan 0,4% HCI - Untuk masing-masing tiga tabung tambahkan dua potong fibrin carmine. - Tempatkan ketiga tabung dalam air mandi Celcius 37 °. - Perhatikan bahwa partikel fibrin akan lebih kecil dan solusi akan merah ketika fibrin dicerna. - Apakah HCI digunakan untuk? Apa yang terjadi pada fibrin di tabung ketiga?

Percobaan pada pankreas dan empedu Pencernaan

Percobaan 4. Pencernaan protein oleh enzim pankreas - Untuk masing-masing tiga tabung tambahkan 3 lembar fibrin Kongo merah. - Tambahkan ke tabung pertama: aku ml jus pankreas dinetralkan dan 2 tetes larutan Na2CO3 2%: kedua tabung: 4 tetes cairan empedu; tabung ketiga: 1 ml air dan 2 tetes larutan Na2CO3 2%. - Tempatkan ketiga tabung dalam air mandi Celcius 37 °. - Perhatikan bahwa partikel fibrin akan lebih kecil dan solusi akan merah ketika fibrin dicerna. - Apakah pengaruh empedu dan apa yang terjadi pada tabung ketiga? Percobaan 5. Almylofitic pencernaan oleh jus pankreas - Dalam tabung reaksi, tempat 5 ml larutan amilum 1% kemudian tambahkan 1 ml jus pankreas dinetralkan, aduk rata. - Letakkan tabung ini dalam mandi-air 37 ° Celcius. - Ikuti proses pencernaan, dengan uji yodium sampai warna hilang. - Apakah produk akhir pencernaan amilolitik oleh jus pankreas? Percobaan 6. Lemak pencernaan oleh jus pankreas - Untuk masing-masing tempat tabung tiga 2 ml susu - Tambahkan ke tabung pertama 1 ml jus pankreas dinetralkan: yang tube2 kedua tetes empedu dan tabung ketiga 1 ml air. - Untuk masing-masing tiga tabung tambahkan 4 tetes merah fenol dan 2% larutan Na2CO3, sampai campuran warna merah muda berubah. - Letakkan tabung ini dalam air mandi 37 'Celcius dan amati. - Salah satu hasil dari pencernaan lipid adalah asam lemak yang mengubah warna fenol untuk kuning. - Apakah empedu digunakan untuk? Apa yang dimaksud dengan enzim dalam percobaan ini? Percobaan pada pigmen empedu Percobaan 7. Cmelin kita uji Ke dalam tabung reaksi, tempat 3 ml HNO 3 pekat dan hati-hati tambahkan 1 ml cairan empedu (melalui dinding tabung), untuk mendapatkan dua lapisan solusi. Antara dua lapisan cincin muncul warna yang berbeda. Yaitu hijau, biru, ungu, merah dan kuning. Mengapa?

URINE

Urin diproduksi oleh ginjal melalui proses berikut: 1. Filtrasi plasma darah oleh glomeruli2. Penyerapan kembali, selektif dari zat-zat yang dibutuhkan untuk

menjaga lingkungan interna oleh tubuli3. Sekresi bahan lain dari darah ke lumen tubuli yang ditambahkan

ke urin4. Pertukaran ion hidrogen dan pembentukan amonia `oleh sel

tubuli untuk menjaga keseimbangan asam basa dalam darah

Karakteristik urin normal: 1. Volume: 600 - 2500 ml / sehari pada orang dewasa, yang

bervariasi tergantung pada asupan air, suhu lingkungan, asupan makanan, dan kondisi fisik dan mental

2. Massa Berat: sekitar 1,003 -1,030, tergantung pada konsentrasi zat terlarut

3. Reaksi: asam dengan pH sekitar 6,0 (4,7-8,0). Dalam Asidosis, reaksi ini sangat asam dan di alkalosis, reaksi urin sangat basa. Bila urin dibiarkan di udara terbuka, reaksi tersebut akan berubah menjadi basa karena perubahan urea untuk amoniak

4. Warna: kuning pucat ke kuning, tergantung pada volume. zat warna dalam air kencing adalah urochrom, urobilin dan hematoporphirin. warna ini dapat disebabkan oleh adanya pigmen empedu, darah, asam homogentisat abnormal, dan beberapa obat-obatan, dll

Komposisi UrinZat yang biasanya dalam urin:

1. Urea: urea merupakan produk akhir katabolisme protein dalam tubuh mamalia. Dalam kondisi normal, sekitar 25 mg urea diekskresikan (80 - 90% dari semua nitrogen diekskresikan dalam urin). Ekskresi urea tergantung pada konsumsi protein. Ekskresi urea meningkat dalam beberapa kondisi seperti demam, diabetes mellitus, atau peningkatan aktivitas hormon adrenocorticoid. Semua kondisi ini meningkatkan katabolisme protein. Dalam hati, urea terbuat dari CO2 & NH3. Pada penyakit hati, mengurangi produksi urea, sehingga ekskresi berkurang juga. Dalam kondisi asidosis, produksi urea berkurang karena amoniak diekskresikan ke urin meningkat, yang menyebabkan penurunan ekskresi urin.

2. Amonia: Amonia dalam urin sangat kecil. Ini diproduksi dan dikeluarkan dari tubuli ginjal, bukan dari darah. Dalam kondisi asidosis, peningkatan produksi amoniak (kecuali dalam asidosis akibat kerusakan ginjal).

3. Kreatinin dan keratin. Kreatinin adalah dihasilkan dari katabolisme creatine. Dalam kondisi normal, ekskresi kreatinin adalah konstan. Koefisien kreatinin: mg ekskresi kreatinin dalam 24-hours/kg berat badan. Koefisien kreatinin normal pria = 20-26 mg / kg berat badan / hari, pada perempuan = 14-22 mg / kb berat badan / hari. Kreatif dapat ditemukan di otot, sehingga pada penyakit otot, katabolisme dan ekskresi meningkat creatine.

4. Asam uratt: hasil oksidasi urin dari nucleoproteins dalam sel tubuh. Kelarutan asam urat dalam air sangat kecil, tetapi larut dalam basa. Ekskresi asam urat meningkat dalam leukemia, penyakit hati dan asam urat. Dengan asam arsenophosphotungstic dan natrium sianida, akan memberikan warna biru dan reaksi ini adalah prinsip pengukuran asam urat colorimetric Folin. Asam Urat dengan enzim uricase akan berubah menjadi allantoin.

5. Asam amino. Pada manusia dewasa, sekitar 150-200 mg asam amino nitrogen bisa dikeluarkan dalam 24 jam melalui urin. Pada bayi dewasa, sekitar 3 mg nitrogen asam amino / berat badan pon adalah diekskresikan, dan ini terus menurun sampai 6 bulan. Pada bayi prematur, ekskresi meningkat hingga 10 kali lebih dari pada bayi dewasa.

6. Allantoin: dari oksidasi asam urat, dan kehadiran sangat kecil.7. Klorida, dalam urin diekskresikan sebagai NaCl. Hampir semua

klorida dalam urine berasal dari makanan, sehingga ekskresi tergantung pada asupan NaCI. Dalam kondisi normal, ekskresi NaCl adalah 9 -16 g / hari.

8. Sulfat, dalam urin berasal dari katabolisme asam amino yang mengandung sulfur: sistein dan methionin. Ini adalah sulfat sulfat anorganik, ester sulfat sulfat dan netral.

9. Fosfat, dalam urin berbatasan dengan K, Na, Mg dan Ca. Mg dan garam fosfat Ca akan presipitat dalam urin basa. Ekskresi fosfat tergantung pada asupan protein, kerusakan sel, kerusakan

tulang di osteomalacia dan hipertiroidisme. Pada hipertiroidisme meningkatkan ekskresi, dan hipotiroidisme penurunan ekskresi.

10. Oksalat, adanya oksalat dalam urin sangat kecil tetapi dalam keturunan penyakit metabolik, peningkatan ekskresi (hiperoksaluria).

11. Mineral, dalam urin Na, K, Ca, Mg dan ion hadir. Ekskresi K akan meningkatkan kerusakan sel, kelebihan asupan, dan alkalosis. Ekskresi Na tergantung pada asupan. Ekskresi Na dan ion K dikendalikan oleh aktivitas hormon korteks adrenal. Keberadaan Ca dan Mg dalam urin biasanya sangat kecil, dan akan dipengaruhi oleh cacat dalam metabolisme tulang.

12. Vitamin, hormon dan enzim. Ekskresi vitamin, hormon dan enzim dalam urin sangat kecil. Keberadaan senyawa ini dapat digunakan untuk mendiagnosis beberapa penyakit, seperti amilase dan meningkatkan disaccharidase di pankreas. hormon Choriogonadotropine hadir di dalam air seni wanita hamil.

Senyawa Abnormal yang ada dalam urine1. Protein. Dalam kondisi normal, kehadiran protein dalam urin

sangat kecil, tidak lebih dari 30-200 mg / hari diekskresikan. Peningkatan ekskresi (proteinuria) terjadi karena kebocoran ginjal misalnya glomerulonefritis. Kehadiran protein dapat diukur dengan reaksi Biuret.

2. Glukosa, dalam kondisi normal, glukosa dalam urin diukur kurang dari 1 mg / hari. Dengan reaksi Benediktus itu negatif. Abnormal konsentrasi biasanya menunjukkan masalah, seperti glukosuria pada diabetes mellitus.

3. Karbohidrat laina. Fruktosa (fructosuria), dan galaktosa (galactosuria) biasanya

menunjukkan penyakit genetik b. Laktosa (lactosuria) biasanya hadir dalam urin ibu menyusuic. Pentosa (pentosuria) hadir dalam urin ketika pentosa

dimakan melebihi4. Badan keton (asam acetoacetic, ISK roxyb asam beta-hyd

piroforik dan aseton). Pada urin normal, badan keton diekskresikan di tingkat 3 - 15 mg / hari. Ekskresi peningkatan kelaparan, gangguan metabolisme karbohidrat (misalnya diabetes mellitus), kehamilan, atau penggunaan anestesi eter atau asidosis. Kehadiran keton tubuh meminjamkan karakteristik bau urin. Kehadiran badan keton dapat dideteksi oleh reaksi Rothera.

5. Bilirubine & cholate garam. Bilirubine dan garam cholate dalam urin adalah hasil dari plug saluran empedu, ketika memasuki empedu darah dan ini dibuang melalui urine, yang menyebabkan urin menyerupai teh dalam warna. Dalam otot subkutan pigmen ini dapat mengumpulkan, disebut Ichterus. Kehadiran bilirubine dapat dideteksi dengan reaksi Gmelin & kehadiran garam cholate dapat dideteksi oleh reaksi Hay.

6. Darah. Pada beberapa penyakit, darah dapat ditemukan dalam urin. Kondisi ini dinamakan hematuria (misalnya peradangan ginjal). Ketika eritrosit adalah rusak, hemoglobin dilepaskan, dan adanya hemoglobin dalam urin disebut hemoglobinuria. Adanya darah di urin dapat makroskopik atau mikroskopik tergantung pada kuantitas. Keberadaan pigmen darah (hemoglobin) dapat dideteksi dengan reaksi Benzidine.

7. Porfirin. Coproporphyrin yang diekskresikan oleh orang dewasa dengan laju 60 - 200 mg / hari. Kenaikan ekskresi porfirin disebut porfiria.

8. Indican. Inclican (sulfat K-indoxyl) hadir di obstipantia dan abcess. Dalam kondisi ini, triptofan berubah untuk indol dan kemudian ke incidan dan diekskresikan melalui urin. Kehadiran

indican dapat dideteksi dengan reaksi Obermeyer (indican muncul nila dan larut dalam kloroform).

PERCOBAAN URIN 1. Reaksi Biuret

Isi tabung reaksi dengan Ureum, panas di atas api. Ureum akan mencair dan pelepasan ammoniaLanjutkan untuk memanaskan di atas api sampai Ureum telah mengeras lagi.Dinginkan dan kemudian campur dengan NaOH encer, tambahkan CuSO4 encer.Apa warnanya? Menulis rumus Biuret. Apa sama dengan rantai peptida?

2. Degradasi Urea oleh Enzim UreaseUrea dalam urin dapat dideteksi dengan reaksi urease sebagai reaksi slyke Van sesuai. Reaksi ini dapat digunakan untuk menghitung konsentrasi urea dalam urin.

Siapkan 2 tabung, isi satu tabung dengan 2 ml urin dan yang lainnya dengan air.Tambahkan 1 tetes fenol merah, dan kemudian menambahkan 2% asam asetat ke kedua tuba sampai warnanya menjadi kuning. Panas ± - 60 ° C (tabung dapat ditangani oleh tangan). Tambahkan bubuk kedelai, campuran lembut. Tunggu beberapa menit.Apa yang Anda lihat? Jelaskan bagaimana Ureum diturunkan oleh urease!

3. Reaksi Benedict untuk Asam UratIsi tabung reaksi dengan 2 ml urin, tambahkan beberapa tetes pereaksi Benedict untuk asam urat (arsetofosfowolframate), sejumlah kecil Na2CO3 anhidrat, dan campuran.Solusi akan muncul dalam warna biru. Catatan: Reaksi ini digunakan sebagai prinsip kolorimetri untuk menghitung secara kuantitatif uricacid 'Y u seorang makan sebuah ur

4. Muroxide Reaction (dengan asam urat padat)Pada sebuah piring porselen, tempat 3 tetes HNO3 pekat dan asam urat kecil padat. Panaskan dalam penangas air sampai kering.Perhatikan warna substansi kering.Tambahkan 2 ml larutan amonia. Apa yang terjadi?Catatan: Konsentrasi asam urat tidak terlalu banyak. Untuk muroxide menggunakan garam amonium praktis.Isi tabung reaksi dengan air kencing, tambahkan kelebihan NH40 dan NH40H, campuran secara menyeluruh. Amonium urat, akan terbentuk. Stand solusi ini, sehingga kelebihan NH4C1 akan terbentuk. Tuang suspensi yang berisi amonium urat ke tabung lain. Filter ini solusi melalui kertas filter, dan kemudian

perhatikan bagaimana pengendapan asam urat ini amonium bereaksi dibandingkan dengan reaksi muroxide

5. Reaksi Reduksi Silver (Schiff)Tambahkan sejumlah kecil asam urat untuk solusi Na2CO3.Ambil selembar kertas filter yang basah dengan AgNO3.Drop larutan asam urat pada kertas filter ini.Warna kertas filter akan berubah menjadi kuning, cokelat atau hitam sebagai akibat dari Ag. Reaksi ini mengganggu oleh ion klorida.

6. Reaksi Jaffe untuk KreatininTambahkan 1 ml konsentrat asam picric dan 0,5 ml NaOH 10% ke tabung reaksi. Bagilah solusi ini menjadi 2 tabung. Dalam satu tabung, tambahkan 3 ml urin dan di tambahkan air lainnya. Tabung yang berisi air kencing akan berubah menjadi warna merah muda sebagai hasil dari picrate kreatinin.Reaksi ini adalah reaksi prinsip kolorimetri untuk menentukan konsentrasi kreatinin

7. Reaksi Nitroprussid dari Weyl untuk KreatininTambahkan 5 ml urin & beberapa tetes Na-nitroprussid ke tabung reaksi.Kemudian tambahkan NaOH sehingga solusinya adalah basa.Warna cepat berubah dari merah menjadi kuning.Solusinya digunakan dalam Reaksi Nitroprussid-Asetat

8. Nitroprussid-Asetat Reaksi dari Salkowski untuk KreatininDari larutan kuning (no. 7 perlakuan), tambahkan larutan asam asetat kelebihan, dan kemudian panas tabung.Warna larutan akan berubah menjadi biru dan kemudian hijau.

9. Release NH3 dari Amonium GaramTambahkan 2 ml urin, 1 tetes phenolphtalein dan 2% larutan Na2CO3 ke tabung reaksi sampai warna larutan berubah menjadi merah muda.Panas ini tabung pada kompor.Ambil tongkat kaca yang berisi solusi phenolptalein.Tempat tongkat ini di bagian atas tabung. solusi Phenolptalein di tongkat kaca akan memberikan warna merah muda sebagai hasil dari pelepasan amonia dari degradasi garam amonium dalam urin.Bagaimana reaksi itu?

10. Klorida yang ada dalam Urin Tambahkan 3 ml urin ke sebuah tabung uji kemudian pengasaman dengan konsentrat HNO3, tambahkan 3 tetes larutan AgNO3. Solusi akan berubah menjadi warna merah atau akan diendapkan.Pengendapan akan hilang bila NH40H kelebihan ditambahkan ke solusi.

11. Fosfat yang ada dalam Urin Tambahkan 5 ml urin ke sebuah tabung reaksi, membuat solusi yang akan alkali dengan NH40H tetes demi tetes.Masukkan larutan MgSO4, dan panas di atas kompor. presipitasi Putih dari Ca-Mg-PO4 akan terjadi.Saring endapan melalui kertas saring. Cuci endapan dengan air, dan kemudian larut dengan 1 ml 2% asam asetat.Bagi dua larutan tersebut ke tabung reaksi.Ke dalam satu tabung terkonsentrasi menambahkan HNO3 setetes demi setetes dan tetes amonium molibdat dan kemudian panas itu. Kuning akan terjadi pengendapan. Ini adalah karakteristik bagi fosfat.

Tabung lainnya akan digunakan untuk reaksi berikut.12. Kalsium yang ada dalam Urin

Gunakan tabung reaksi dari reaksi 11 mengandung Ca-Mg-fosfat, tambahkan berkonsentrasi K-oksalat.Hal ini akan menghasilkan solusi keruh karena Ca-oksalat

13. Sulfat yang ada dalam UrinTambahkan 2 ml urin, mengoksidasi dengan beberapa tetes cairan asam asetat. Tambahkan ke solusi ini BaCI 2 solusi. Ketika urin mengandung sulfat, larutan akan keruh sebagai hasil dari BaSo4.

PENENTUAN NETRAL 17 - KETOSTEROID

Manusia urines mengandung steroid membawa oksigen ketonic di C17, beberapa diantaranya fenolik sementara yang lain netral. Yang terakhir ini biasanya disebut "17-ketosteroids.". Anggota utama dari kelompok ini adalah androsterone, etiocholanolone, dehydroisoandrosteron, dan isoandrosterone; (p.136); yang pertama dari tiga ini muncul dalam bagian dari testis, sementara semua mewakili produk ekskresi dari beberapa steroid dari korteks adrenal. Dengan demikian, pengukuran output 17-ketosteroid memberikan indeks biokimia aktivitas testis dan adrenocortical.

Ekskresi 17-ketosteroid normal laki-laki berumur antara 20 dan 40 tahun rata-rata sekitar 15 mg per hari; perempuan normal dalam kelompok usia yang sama mengeluarkan sekitar 10 mg sedangkan pada anak di bawah usia 8 tahun, kurang dari 1 mg dihilangkan, tapi dari usia ini di sana adalah meningkat secara bertahap dengan nilai-nilai orang dewasa. Demikian pula di usia tua berkurangnya signifikan diamati. Seperti gonadectomy pada pria mengurangi output rata-rata 15-10 mg, dan tanpa efek pada wanita, diasumsikan bahwa sekitar 10 mg berasal dari korteks adrenal dan 5 mg dari testis. Ovarium manusia bukanlah sumber netral 17-ketosteroid.

Gangguan pada testis, adrenal korteks, dan sangat dapat mengubah adenohypophysis 17 - ekskresi ketosteroid. Nilai eunuchoidism dari normal bahwa dari mengebiri bedah (10 mg)

dilaporkan, sedangkan dalam kasus-kasus langka masculinizing tumor dari sel interstitial testis output dapat mencapai 800 mg per diem. Pada penyakit Addison pada pria, ekskresi jatuh ke 1,2-6,4 mg, yang merupakan output testis, sedangkan pada wanita hampir tidak ada 17-ketosteroids diproduksi. Dalam kasus-kasus sindroma Cushing tidak terkait dengan karsinoma korteks adrenal, normal atau hanya sedikit lebih tinggi nilai-nilai 17-ketosteroid diamati (10 sampai 36 mg), tetapi ketika karsinoma korteks merumitkan kondisi ekskresi jauh lebih tinggi biasanya ditemui ( 40-288 mg). Demikian pula, dalam sindrom adrenogenital, hiperplasia korteks sederhana hanya mengarah ke output 17-ketosteroid cukup tinggi (sampai 100 mg kira-kira), sedangkan karsinoma umumnya menimbulkan kenaikan lebih ditandai (ca 100-250 mg). Dalam kedua kasus, karsinoma dapat dibedakan dari hiperplasia oleh ekskresi lebih tinggi, dan juga dengan proporsi peningkatan 3 (b)-hydroxy-17-ketosteroids (terutama dehydroisoandrosterone) ke 3 (a). Biasanya, dan di hiperplasia, b: rasio adalah 1:9, sedangkan pada karsinoma mungkin naik sekitar 1:1. Dalam panhypopituitarism, sebuah terlalu rendah umum dari semua hormon adenohypophyseal, ekskresi 17-ketosteroid rendah (0-3 mg).

Penentuan Zimmermann fotometrik digunakan untuk mengevaluasi fungsi androgenik. Sejak 17-ketosteroids adalah campuran kompleks dari senyawa yang mungkin berasal dari prekursor beberapa kelenjar, beberapa di antaranya tidak androgen, kegunaannya sebagai indeks fungsi androgen terbatas. Fraksinasi campuran menjadi komponen-komponen yang terpisah lebih menguntungkan.

Penentuan Netral 17-Ketosteroids dari Urin

Prinsip. 17 netral-ketosteroids urin diekskresikan sebagai konjugat sulfat dan glukuronat. Ini adalah hydrolazed direbus di asam kuat dan steroid bebas yang diekstraksi dengan pelarut organik. Ekstrak diobati dengan m-dinitrobenzene yang dalam kehadiran alkali memberikan warna merah mengandung senyawa kelompok metilen aktif (Zimmerman reaksi 66). Warna merah yang diperoleh dengan 17-ketosteroids tampaknya tidak akan banyak dipengaruhi oleh substitusi pada bagian lain dari cincin steroid. Namun, dalam prosedur pengembangan karakteristik warna merah diklorometana-larut dengan penyerapan maksimum pada 520 mm mensyaratkan bahwa inti cincin steroid memiliki gugus hidroksil. 3-J 1 -, dan 20-ketosteroids memberikan beberapa warna dengan basa-dinitrobenzene m tapi sangat jauh lebih sedikit daripada 17-ketosteroids, dan penyerapan maksimum yang tidak pada 520 mm.

Prosedur 67. Sebuah spesimen 24 jam urin dikumpulkan dan diukur. Untuk sebuah alikuot 5-ml, dalam tabung 40 ml lulus centrifuge kaca-stoppered tanah berbentuk kerucut, tambahkan 0,5 ml HCL pekat. (Jika urin disimpan didinginkan tidak perlu ditambahkan pengawet) Tempatkan tabung dalam penangas air mendidih selama 20 menit, meliputi bagian atas tabung dengan kelereng.. Hapus, dingin, dan ekstrak dengan 25 ml 1:1, campuran benzena-eter minyak bumi. Kocok 20 detik dan aspirasi dari urin. Cuci pelarut dengan menambahkan 1,7 ml KOH 5 persen dan gemetar. Lepaskan KOH dengan aspirasi, menggunakan pipet kapiler. The KOH harus benar-benar dihapus. Cuci dengan pelarut air dua kali dengan 2,5 ml, aspirating air dalam cara yang sama dengan KOH itu. Mentransfer alikuot 20 ml pelarut ke diameter 19 mm, 30-40-ml kapasitas tabung kerucut dan waktu yang diperlukan untuk kekeringan di bawah aliran udara di air mandi 40-45 ° C. Cuci menuruni ekstrak dari dinding tabung ke ujung dengan etanol. Tambah. 0,2 ml standar ke tabung

yang sama dan waktu yang diperlukan untuk kekeringan dalam air mandi. Untuk residu kering di kedua tabung menambahkan 0,1 ml alkohol-dinitrobenzene m. Mix sepenuhnya membubarkan residu. Tambahkan 0,1 ml alkohol n-.-Dinitrobenzene ke tabung yang serupa untuk reagen kosong. Untuk setiap tabung menambahkan 0,2 ml metoksida benzyltrimethyl-amonium. Aduk rata dan terus dalam gelap pada suhu 25 ° C selama 90 menit. Kemudian tambahkan 3 ml etanol 50 persen, dan setelah pencampuran, tambahkan 3 ml diklorometana. Sumbat dan campuran keras selama 10 detik. Biarkan dalam gelap sampai dua lapisan yang terpisah. Baca absorbancy dari lapisan bawah (berwarna) terhadap air kosong pada 520 mm dalam spektrofotometer dengan cuvet dibangkitkan oleh menyisipkan sepotong gabus di bagian bawah dari carrier cuvet.

Perhitungan Kepadatan dari 24 Total Unknown - jam Urin Volume X 0,02 X Kepadatan Standar 4 = Mg 17-Ketosteroids dikeluarkan per hari Rentang normal untuk pria dewasa adalah 10-24 mg per hari: betina 6-14 mg per hari. Reagen yang diperlukan: Petroleum Eter-Benzene Campuran. Memurnikan petroleum eter (b p. 35-65 ° C) dan benzena secara terpisah dengan melalui kolom silika gel sekitar 100-mesh. Untuk 1 volume eter petroleum dimurnikan tambahkan 1 volume benzena dimurnikan. Ini campuran pelarut terus selama berbulan-bulan bila disimpan dalam botol gelap. Diklorometana. Memurnikan diklorometana (Eastman, CF) dengan melewati tempat tidur sekitar gel silika 100-mesh dalam kolom 7 x 130 cm dan mengumpulkan di bagian terpisah 3 liter. Sepuluh sampai 15 liter dapat dimurnikan dengan 1 kilo gel silika. Efektivitas pemurnian ditentukan dengan mengukur panjang gelombang ini. Ini tetap stabil selama berbulan-bulan pada suhu kamar. Konsentrat Asam klorida. Reagen kelas. 50 Persen Kalium Hidroksida. Tempat 5 g KOH grade reagen dalam labu volumetrik 100 ml, larut dalam air suling dan membuat sampai volume. Etil Alkohol. Memurnikan alkohol dengan menambahkan 7 perak nitrat g dan 15 g kalium hidroksida, secara terpisah (masing-masing dilarutkan dalam 100 ml etil alkohol) sampai 4 liter etil alkohol absolut. Mix dan memungkinkan untuk berdiri semalam. Tuang yang supernate dan menyaring melalui kolom Vigreaux. Membuang 700 ml pertama dan terakhir bagian 100 ml. Efektivitas ditentukan oleh pemurnian menyiapkan 1 per larutan persen dari dimurnikan-dinitrobenzene m dalam alkohol murni. Reagen ini ketika bereaksi dengan 5 N KOH harus menunjukkan tidak ada perubahan warna merah muda FthylAlcohol 50 persen. Siapkan dengan cara pengenceran nilai bagus alkohol etil mutlak dengan air suling. / Per-Cent Dinitrobenzene m. Purify reagen m clinitrobenzene-kelas dengan melarutkan 20 g dalam 750 ml alkohol absolut, dihangatkan sampai 40 ° C. Tambah 100 rTil dari 2 N NaOH. Setelah berdiri 5 menit, solusi dingin dan tambahkan 2.500 ml air suling. Kumpulkan m endapan-dinitrobenzene pada corong Buchner, cuci beberapa kali dengan air suling, dan recrystallize 3 sampai 4 kali dari 100 ¬ 150 ml volume etil alkohol absolut. Bahan ini harus mengkristal dalam hampir jarum tidak berwarna, mp 90,5-91 'C. Larutkan 1 g direkristalisasi-dinitrobenzene m dalam 100 ml alkohol etil redistilled mutlak dan tetap dalam botol coklat. Buang jika solusi menjadi kuning. Benzy1trimethylammonium metoksida (40 Cent Per dalam Methanol. Mei diperoleh dari K dan K Laboratories, Plainview New York.. Dehydroisoandrosterone Standar. Larutkan 50 mg

dehydroisoandrosterone dalam alkohol etil redistilled dan membuat hingga 500 ml. Transfer 10 ml larutan ini ke labu volumetrik 100 ml dan membuat sampai dengan volume dengan alkohol. Pengenceran akhir ini setara dengan 100 dehydroisoandrosterone mcg per ml. Referensi Oser, BL., 1965. Hawk's Fisiologis Kimia 14 Ed, Edisi tmh. Tata. Mc Graw Hill Publ. Company Ltd Bombay-New Delhi. Murray, RK., Grnner DK., Mayes, PA., Dan Rodwell., VW., 2003. Harper's Illustrated Biochemistry, 26th.Ed. Edisi Internasional. Mc Graw Hill. Co Inc Lange Publikasi medis.