tema 9j opticki, piezo i kalorimetrijski biosenzori.ppt
TRANSCRIPT
OptiOptički, piezo i čki, piezo i kalorimetrijski kalorimetrijski
biosenzoribiosenzori
OptiOptički, piezo i čki, piezo i kalorimetrijski kalorimetrijski
biosenzoribiosenzori
BH
Oblast biosenzora koji koriste optičku detekciju jako je razvijena poslednjih godina uglavnom zbog prednosti optičkih sistema
Osnova ovih sistema su enzimske reacije koje menjaju optičke osobine nekih supstanci i na taj način im omogućavaju da emituju svetlost pri osvetljvanju (ekscitaciji)
Načini optičke detekcije obuhvataju fluorescencu, fosforescencu, hemi/bioluminiscenciju
OPTIOPTIČČKI BIOSENZORIKI BIOSENZORI
Prednosti optičkih biosenzora obuhvataju:
– moguća je minimizacija upotrebnom optičkih vlakana
– moguća su in situ merenja
– moguća su in vivo merenja
– diodna merenja omogućavaju multi-analitičku detekciju
– signal ne ometaju elektromegnetne interferencije
Mane optičkih biosenzora su:
– ambijenata svetlost jako smeta
– optička vlakna su vrlo skupa
– indikator faza može biti spran tokom vremena
Optička vlakna su subklasa optičkih talasovoda koji rade na principu totalne unutrašnje refleksije
Svetlost koja je pala na međupovršinu između dve dielektrične sredine biće ili reflektovana ili reflektovana prema Snell’s Law –ovom zakonu
A
BB
Prevlaka
Jezgro
Totalna unutrašnja refleksija
Ako svetlost uđe u optičko vlakno (okruženo sredinom manjeg indeksa prelamanja) pod dovoljno malim uglom svetlost će se zadržati unutar vlakna
Zbog toga se optičko vlakno sastoji od jezgra visokog indeksa prelamanja, okruženog prevlakom nešto nižeg indeksa prelamanja, a celo vlakno je zaštićeno neoptičkim omotačem
OmotačPrevlaka
Jezgro
Prevlaka
Omotač
qmax
Ulazna svetlost, a samim tim i izlazna zavise od prečnika vlakana
Kako se za fleksibilna vlakna, zahteva veoma mali prečnik, ova veličina je ograničavajući faktor u proizvodnji vlakana
Zbog toga se vlakna prave od snopova koji imaju prednost efikasnog skupljanja svetlosti i fleksibilnost
Na tržištu se mogu naći, snopovi od 8, 16 i više vlakana.
Generalno biosenzori bazirani na optičkim vlaknima koriste fluorescenciju ili hemiluminiscenciju
Ovo se bazira na činjenici da je fluorescencija bitno osetljivija od apsorbance
Ovakvo baziran biosenzor je mnogo feksibilniji zbog činjenice da je poznato da veliki broj analita i faktora menjaju emisiju odgovarajućih fluorofora
U osnovi postoje dve različite konfiguracije koje se koriste na vrhu sonde optičkog vlakana
– konfiguracija distalne kivete
– konfiguracija vezanih talasovoda
Konfiguracija distalne kivet obuhvata detekciju imobilizovanog molekula u poriznoj transparentnoj sredini na vrhu vlakna
Fluorescencija se manja kada analit difunduje i kada je vezan
Ekscitacija dolazi izvan vlakan i emisija se kupluje u vlaknu
Sonda na optičkom vlaknu
Molekul koji se detektuje
Analit
Tip konfiguracije sa vezivajućim talasovodom obuhvata vezivanje detektorskih molekula, sa obeleženim fluorescentnim (npr. antitela), sa kovalentno pričvršćenim molekulima analita na površinu vlakna
Pošto je obeleživač blizu površine on se ekscituje prolaznim talasom koji se emitije iz vlakna, a rezultujuća fluorescencija se kupluje u vlakno
Slobodni analit se takmiči za vezivajuća mesta molekula za prepoznavanje, omogućujući im da difunduju dalje od površine što za rezultat ima smanjenje fluorescence
Slobodni antigen
Imobilisani analit
Obeleženi fluorescent koji prepoznaje molekul
PIEZOELEKTRIČNI PRETVATRAČ
Princip ovog tipa senzora se bazira na otkrivanju, postoji li linearan odnos između promene u frakvenciji oscilovanja piezoelektričnog (PZ) kristala i varijacije mase na njegovoj površini
Sauerbrey je 1959. god. otkrio da je promena mase obrnuto proporcionalna promeni frekvencije rezonirajućeg kristala (obično na MHz).
F = -2.3x106F2DM/A (Sauerbrey jednačina)
Promena u masi se odigrava kada analit specifično interaguje sa bispecifičnim agensom koji je imobilizovan na površini kristala
Kristal može biti prevučen antitelima, enzimima ili organskim materijalom
Mogu se meriti promene frakvancije manje od 1MHz čime se postiže nanogramska osetljivost
Tanak kvarcAu
Električni kontakt
SAW PRETVARAČI
Surface acoustic wave (SAW). Uređaji sa akustičnim talasima sa površine rade na principu prostiranja akustoelektričnih talasa bilo duž površine kristala bilo kroz kombinaciju celokupne zapremine i površine.
Oscilacija kristala u SAW uređajima je veća , bar za faktor 10 od oscilacije kristala koji se koriste u PZ uređajima
KALORIMETRIJSKI PRETVARAČI
Enzimom katalizovane reakcije pokazuju istu promenu entalpije kao spontane hemijske reakcije
Primećeno je znatno oslobađanje toplote (5-100 kJ/mol).
Zbog toga su kalorimetrijski pretvarači univerzalno primenjivi u enzimskim reakcijama
Konstruisani termički senzori baziraju se na:
– direktnim pričvršćivanjem imobilizovanog enzima ili ćelije na termistor.
-imobilizacija enzima je u koloni u koji je termistor umetnut
T = nH/cp
Enzim Substrat -kJ/mol)
Katalaze Vodonik peroksid 100.4Holesterol oksidaza Holesterol52.9Glukoza oksidaza Glukoza 80.0Heksokinaza Glukoza 27.6Laktik dehidrogenaza Piruruvat62.1- Laktamaza Penicilin G67.0Ureaza Urea6.6Urikaza Urinska kiselina 49.1
PisačVeza/Pojačivač
Enzimski reaktor
Termistor
Aluminijumski blok
Izmenjivač toplote
Struja pufera
Uzorak
Poliuretanska izolacija
Izmenjivač toploteSpoljašnja izolacija
Unutrašnji Al blok
Referentni termister
Indikatorski termister
MB reaktor1 ml
NANOSENZOR
Optički nano senzor koji služi za in-vivo analizu u jednoj ćeliji:
-vrh sonde ima prečnik od 40-50 nm
-kraj izolacije na optičkom vlaknu ima prečnik 200 nm
-specifično antitelo je imobilisano na vrhu
-nanometarska veličina obezbeđuje blisko polje ekscitacije
-koristi se za određivanje toksičnih hemikalija (npr. bezo()piren tetrola (BPT) i benzo( )pirena (BaP)
-linija na 325 nm iz HeCd lasera služi za ekcitaciju BPT i BaP
-invertni mikroskop služi za kontrolu postavljanja sonde u pojedinačnu ćeliju
Fluorescentna svetlost se fokusira objektivom mikroskopa i šalje na brojač fotona (fotomultiplikator PMT)
Vrh nanosenzora
Nanosenzor u ćeliji
-nanostruktura je dovoljno mala da bi se locirao unutar subćelijskih struktura (jezgro, mitohondrije)
-mala struktura nanosenzora omogućava da se smesti unutar tipične ćelije sisara a da ne načini nikakvu štetu
-nakon unošenja nnosenzora u pojedinačnu ćeliju ona može nastaviti svoje rutinske funkcije kao što je mitoza
-moguće je detektovati samo nekoliko molekula BPT u pojedinačnoj ćeliji
Shematski prikaz aparture za primenu nanosenzora
-nisko magnetno polje omogućava da se merenje
izvede unutar same ćelije sa neznatnom pozadinom (pozadinski šum)
-odlična osetljivost i reproduktivnost
-određuju se pikomolarne koncentracije u
jednoj ćeliji
-tipično inkubaciono vreme u ćeliji je pet minuta