TÉCNICAS HISTOLOGICAS

INTRODUCCIÓN:

Histología, estudio microscópico de los tejidos —grupos de células similares interrelacionadas que cooperan para llevar a cabo una función biológica determinada— de animales y plantas.

El progreso de la histología ha sido lento hasta el siglo XIX, en el que el microscopio empezó a adquirir una forma parecida a la actual y el microtomo, un instrumento que permite realizar finos cortes de tejidos, fue inventado por el fisiólogo checo Jan Evangelista Purkinje.

En el cuerpo de un animal se distinguen cinco grupos principales de tejidos: el epitelio, que se encuentra en todas las superficies de revestimiento corporales y en las áreas de secreción, el tejido conjuntivo, que incluye los huesos, los cartílagos y otras estructuras de soporte; el tejido muscular, el tejido nervioso.

La técnica histológica es una serie secuencial de pasos a través de los

cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes

coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Sinopsis GeneralPaso Objetivos Medios usuales

Obtención Proveer el material para su uso en el microscopio

Biopsia

Resección

quirúrgica

Autopsia

Fijación

Preservar el material

Eliminar los microorganismos

Formol al 10%

Bouin

Glutaraldehido Inclusión Embeber el material en un medio

fácil de cortar en láminas muy

delgadas

Parafina

- Acrílicos

- Resinas EpoxiCorte Lograr láminas muy delgadas que

sean atravesadas por la luz

Micrótomo rotatorio

-M. de deslizamiento

- Ultra micrótomo

Coloración Visualizar los tejidos

- Identificar moléculas en ellos

(Histoquímica)

Hematoxilina - eosina

- Tricrómicos

- HistoquímicaMontaje Preservar el corte,

manteniéndolo

aislado del aire y deshidratado

Bálsamo del Canadá

- Medios plásticos

Proceso

OBTENCIÓN:

Consiste en la provisión del material que se desea estudiar por medio del microscopio. El método seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material. En todos los casos el instrumental con el cual se seccionan los tejidos debe estar muy afilado para evitar aplastar sus elementos, así como se debe evitar cualquier otro tipo de maltrato en su manipulación. Los principales métodos empleados son: la biopsia, la resección quirúrgica y la autopsia.

Cualquiera sea el procedimiento empleado para la obtención, el material que resulta del mismo debe ser inmediatamente fijado o congelado para evitar los procesos de autodestrucción de las células conocidos como autolisis.

Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.

Biopsia: (del griego bios= vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado, por punción y absorción, por raspado, por trepanación.

biopsia inscisional: se realiza seccionando con instrumentos cortantes como el bisturí.

biopsia por punch: el punch es un instrumento filoso con forma de sacabocados que se utiliza para tomar biopsias de piel.

biopsia por punción: se realiza con agujas de biopsia y recientemente también con agujas del tipo intramuscular (micro biopsia).

biopsia endoscópica: se hace a través de endoscopios, que son instrumentos flexibles que permiten la observación de algunas cavidades internas del organismo.

Recomendaciones: -para la identificación de la muestra se usa una cartulina resistente donde se escribe con lápiz las indicaciones (órgano, porción, etc) para evitar la confusión de muestras.-Los trozos de órganos tubulares se seccionan directamente con tijeras, los macizos han de ser “desprendidos” con las tijeras. Extraidos los órganos deben seccionarse en fragmentos con una hoja de afeitar o de bisturí (se utilizan a manera de serrucho sin presionar).

FIJACIÓN:

Tiene como finalidad la conservación la morfología y composición química de las células y del tejido, dura alrededor de 12 hrs. Dependiendo del fijador y del tamaño de pieza (espécimen).

Consiste en producir la muerte de las células, de manera tal que las estructuras que poseían éstas en el estado viviente se conserven con un mínimo de modificaciones, a lo largo del tiempo y de los subsiguientes pasos de la técnica.

Los fijadores deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeños de tejidos (como regla general menos de 1 cm cúbico), para que la difusión del fijador desde las superficies hasta la parte central del bloque tisular se haga en un tiempo reducido.

Una buena fijación debe:

inmovilizar la célula conservar exactamente todas las partes constitutivas No hacer aparecer artificialmente otros detalles en la estructura.

(Tal fijación es por ahora imposible de realizar) Por eso debemos buscar una serie de cualidades en el fijador a utilizar que nos acerquen lo más posible al fijador “ideal”

Propiedades de los fijadores:

o Facilitan la coloración posterioro Inhiben el crecimiento bacteriano y por lo tanto la putrefaccióno Retraen los tejidoso Poseen olor desagradable e irritan la piel y las mucosaso Producen alteraciones importantes a nivel molecularo Producen alteraciones importantes a nivel ultraestructural

La elección del fijador adecuado está dictada por el propósito perseguido y deben tenerse en cuenta las propiedades

FIJADORES

Físicos - Calor

- Desecación

- MicroondasQuímicos Alcoholes - Metanol

simples

- Etanol

Aldehídos - Formaldehído: Es uno de los mejores fijadores para el sistema nervioso y para las mitocondrias.

- Glutaraldehido

Ácidos - Acético: Aumenta el contraste entre núcleo y citoplasma.

- Pícrico: Muy penetrante (no se emplea solo) Se fija con intensidad al citoplasma, facilita todas las coloraciones. Contrae pero endurece poco.

- Osmico: Fija sin precipitar, además impide la precipitación por el alcohol durante la deshidratación. Marta rápidamente a la célula y fija bien el citoplasma, pero no muy bien el núcleo. Buen fijador de sustancias grasas y de la mielina. Es poco penetrante y difusible.

Sales Bicromato de potasio: fija bien el citoplasma, pero destruye los núcleos.

Bicloruro de mercurio

Mezclas de químicos

►Carnoy Alcohol etílico +

Ácido acético

►Bouin: Es uno de los mejores fijadores para el estudio del glucógeno, penetra rápidamente en los tejidos, es un buen fijador general. Es muy adecuado para las coloraciones.

Ácido pícrico +

Formol +

Acido acético

►Zenker Bicromato de potasio +

Bicloruro de mercurio +

Ácido acético►Masson y mayory: Produce poco encogimiento. Produce lisis de glóbulos rojos y disminución de hierro, los tejidos no deben permanecer en el mas de 24 hrs porque se vuelven duros y quebradizos. Deshidratación con alcohol 80° directamente.

►FaGlu Formaldehido +

Glutaraldehído

Equilibrio físico:

Cuando una pieza es sumergida en un fijador, pueden suceder 3 cosas:La pieza cae al fondo, en este caso el fijador es hipotónico, y la fijación tiene bastantes probabilidades de ser incompleta o irregular.La pieza permanece flotando en la superficie, el fijador es hipertónico, muy denso y las células se contraen.La pieza se sumerge, pero queda por encima del fondo del recipiente, hay equilibrio físico y la fijación será buena si los ingredientes del fijador fueron bien elegidos.

DESHIDRATACIÓNLos tejidos contienen grandes cantidades de agua, tanto intracelular como extracelular, que debes ser eliminada y remplazada por parafina.

Detención de la fijación:Una vez transcurrido el tiempo de la fijación deseado es preciso detenerlo rápidamenteEl fijador que rodea a la pieza puede ser eliminado por:a) aguab) alcohol

a) Es imprescindible hacerlo después de la fijación con ácido , bicromato de potasio y ácido ósmico.

Se hace en agua corriente de 2-24 horas.

b) Piezas que han estado en alcohol, ácido pícrico o formol, se llevan directamente al alcohol 70% o 80% llevándose así acabo el lavado y el inicio de la deshidratación.

La deshidratación se realiza por medio de un reactivo anhídrido pero ávido de agua, puede utilizarse la acetona o el alcohol etílico

La deshidratación se hace de forma progresiva con sucesivos baños de alcohol, cada vez menos hidratados 70°-80°-90°-96°-100°

Tiempos de permanencia en cada líquido:

Alcohol 70 las piezas pueden permanecer varios díasAlcohol 96 2 baños en un lapso de 24 h.Alcohol 100 3 baños de 1 h c/u

Como han de introducirse las piezas:

Las piezas se han de envolver en gasas a manera de bolsitas, colocarlas en cartulina, etc. Par la deshidratación deberán emplearse frascos anchos y de cierre hermético. Los recipientes deben ser agitados periódicamente para que la mezcla de alcohol y agua sea la más perfecta posible. En cada etapa la cantidad de deshidratante debe ser superior a 10 veces, el volumen del tejido a deshidratar.

ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN

Se realiza en beazol, xiloltuluol, solventes del alcohol y de la parafina, tiene como finalidad embeber la pieza con una sustancia miscible con la parafina, hace que el tejido se transparente, dura de 1-6 hrs.

INCLUSIÓN CON PARAFINA FUNDIDA

La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de la célula. Embebiendo el tejido y haciéndolo más fácil la obtención de cortes microscópicos, dura de 30 min- 6 hrs.

La parafina es a temperatura ambiente solida. Una temperatura mayor de 65° llega a disolverla, produciéndose vapores de olor desagradable, inflamables y también tóxicos. Se emplean 4 vasijas con parafina disuelta, En cada vasija ha de haber un volumen suficiente como para cubrir por completo las piezas que se han de colocar.

El recipiente numero 1 debe tener parafina ya fundida a la que se mezclara una pequeña cantidad de solvente, el 2 y 3 deben contener parafina pura, que poco a poco

irá adquiriendo algo de solvente cuando las piezas vallan pasando por ellas. El 4 debe tener parafina completamente pura.

Tiempo de cada baño: Depende un poco del tamaño de la pieza. En cada recipiente pueden estar de 2 a 3 horas.

Lo que se ha hecho hasta ahora se conoce con el nombre de impregnación

La inclusión consiste en encerar cada pieza dentro de un bloque de parafina pura.

(Pueden ser elaborados con cartulina o comprarse de metal, cada pieza debe tener su propio molde, por lo que habrá de considerarse el costo-beneficio)

CONFECCIÓN DEL BLOQUE

La pieza se coloca en un molde rectangular que contiene parafina fundida. Como finalidad es la obtención del bloque de parafina a forma rectangular para ser cortado en el micrótomo.

La forma de los bloques debe ser perfectamente de pirámide truncada. Las caras opuestas han de resultar opuestas entre sí, lo mismo que las aristas

SECCIÓN CON EL MICROTOMO

Las secciones finas y parejas se obtienen con el micrótomo. Este aparato consiste básicamente en una base pesada que soporta una superficie por las que se desliza una cuchilla.

Microtomo de deslizamiento (es el más usado):

1) Pegar el bloque a un taco de madera: con la ayuda de una espátula derretir parafina para pegar el bloque

2) Colocar el taco de madera entre las ramas del micrótomo3) Apretar con el tornillo de presión hasta que esté muy firme4) Deslizar el filo de la cuchilla del micrótomo hasta que esté ubicada sobre

el bloque5) Elegir el espesor del corte mediante el tornillo micrométrico6) Deslizar la cuchilla7) Recoger con un pincel húmedo el corte y depositarlo en agua contenida

en una bandeja o cubeta

MONTAJE Y TINCIÓN

Los cortes se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña cantidad de Albúmina, la cual actúa como adhesivo. La parafina se elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se rehidrata haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol etílico hasta llegar a una solución 100% de agua.

Colorantes

Hematoxilina-eosina

La hematoxilina es un colorante catiónico mientras que la eosina es un colorante aniónico perteneciente a los xantenos. Se teñirán los núcleos de azul, citoplasmas en rosa, músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glóbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso.

Técnica:

1º-Desparafinado.

Estufa durante 30 min. a 60º

Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación.

Alcohol absoluto-5min.

Alcohol 96º-5min.

Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º- Hematoxilina-5min.

5º- Lavar en H2O-2min.

6º-Eosina alcoholica-1min.

7º-Deshidratar.

Alcohol de 70º

Alcohol de 96º.

Alcohol absoluto.

Xilol.

8º- Montaje.

Giemsa

La técnica radica en la disociación controlada de las sales de eosinato que ocurre al insolubilizar la mezcla del giemsa por disolución en H2O destilada; la eosina así liberada colorea el componente extracelular y determinadas estructuras aliadófilas; y los derivados de azur, las estructuras de carácter basófilo. La cromatina nuclear adopta una tinción azul violeta.

Técnica:

1-. Desparafinar.

Estufa durante 30 min. a 60ºC

Sumergimos en xiloldurnate 10 o 15 min.

2º- Hidratación.

Alcohol absoluto-5min.

Alcohol 96º-5min.

Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º- Solución Giemsa al 20 %- 45 min.

5º -Lavar con agua corriente – 5-10min.

6º- Alcohol 70º - 2-3 pases rápidos

7º- Alcohol de 96º- 2-3 pases rápidos

8º- Alcohol isopropílico - 3 min

9º - Alcohol isopropílico. - 3 min.

10º-Xilol

11º- Montar.

Tricromico de Masson

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Se observan tres colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos de rojizo, núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.

Técnica:1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada.4º- Hematoxilina de Weigert – 5 min.5º- Lavar con agua corriente – 10 min.

6º- Fucsina de Ponceau – 5 min.7º- Ácido fosfomolíbdico – 5 min.8º- Ácido fosfomolíbdico – 5 min.9º- Verde luz – 5-7 min.10º-Deshidratar. Alcohol de 70º Alcohol de 96º.Xilol.11º- Montaje.

Tinción para reticulina( GOMORI MODIFICADO )Un método de impregnación con plata que tiñe de negro las fibras de reticulina. Es una tinción muy útil para evidenciar lesiones de la pituitaria y malformaciones vasculares.

Técnica

RESULTADOS:

Tejido conjuntivo: verde

Tejido muscular: pardo

Tejido epitelial: rojizo.

1º-Desparafinado.Estufa durante 30 min. a 60º.Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada.4º- Permanganato potásico al 1%-- 1 min.5º- Lavar con agua destilada – 1-2 pases6º-Metabisulfito potásico al 2% - 1 min.7º- Lavar con agua destilada – 1-2 pases8º - Alumbre férrico al 2% -- 2 min.9º- Lavar con agua destilada - 1-2 pases.10º- Reactivo de Wilder …. 2 min.

11º-Lavar con agua destilada – 1-2 pases.12º- Formol al 10 %-- 5 min.13º- Lavar con agua destilada – 1-2 pases.14º- Cloruro de oro al 0.2%-- 2 min.15º Lavar con agua destilada … 1-2 pases.16ºMetabisulfito potásico al 2%--- 2 min.17º- Tiosulfato sódico al 2%-- 1 min.18º- Lavar con agua corriente – 5 min.19º-Deshidratar.Alcohol de 70ºAlcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.20º- Montaje.

PAS

Se usa como técnica de rutina para observar las membranas basales que separan el tejido epitelial del corión. Tiñe los núcleos de color azul, el glucógeno de color púrpura y el material PAS + (polisacáridos simples, mucopolisacáridos neutros, mucoproteínas, glucoproteínas y glucolípidos) rojo rosa.

SOLUCIONES:1 .- Ácido periódico al 0.5 %2.- Hematoxilina de Mayer3.- Ácido sulfuroso :Metabisulfito sódico al 10 % ----------------- 6 ml.Ácido hidroclórico 1N al 10 % ---------------- 5 mlAgua destilada ----------------------------------- 100 ml4.- Reactivo de Shiff Fucsina básica ----------------------------------- 1 gr.Metabisulfito sódico anhidro ---------------- 1 gr.

Agua destilada ----------------------------------- 200 mlÁcido hidroclórico 1 N ------------------------- 20 mlHervir el agua destilada, añadir la fucsina básica, agitar y enfriar a 50ºC.

Filtrar y añadir ácido hidroclórico, enfriar a 25ºCAñadir metabisulfito sódico.

*Ésta solución está lista para usarse cuando se torna casi incolora, lo cual puede llevar hasta 2 días, en un lugar oscuro.

TÉCNICA:

1.- Desparafinar e hidratar. 2.- Ácido periódico al 5 % ------------------------ 5 min.

3.- Lavar en agua corriente ---------------------- 5 min.

4.- Reactivo de Shiff ---------------------------- 15 min.

5.- Bisulfito sódico al 2 % ---------------------- 5 min.

6.- Lavar en agua corriente --------------------- 5 min.

7.- Hematoxilina de Mayer ---------------------- 10 min.

8.- Lavar con agua corriente ------------------- 5 min.

9.- Deshidratar.

10.- Aclarar con xilol

11.- Montar.

Elástica de Van Gieson

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. El colágeno parece que capta un colorante ácido. Tiñe el colágeno de rojo, núcleos y fibras elásticas de negro y citoplasma de amarillo.

SOLUCIONES:1.- Hematoxilina de Verhoeff:- Hematoxilina alcohólica:Hematoxilina ------------------------------------10 gr.Alcohol96º -------------------------------------100 ml- Cloruro férrico al 10 %:Cloruro férrico ----------------------------------10 gr.Agua destilada ----------------------------------100 ml- Yoduro potásico al 10 %:Yoduro potásico --------------------------------10 gr.Agua destilada ----------------------------------100 ml-Alcohol 50º

2.- Solución de Picrofucsina:- Fucsina ácida al 1 % ----------------------------1.3 ml- Ácido pícrico a saturación ---------------------- 9.7 ml 

TÉCNICA:1.- Desparafinar e hidratar 6.- Picrofucsina -------------------1 pase2.- Hematoxilina de Verhoeff ---------30 min. 7.- Deshidratar3.- Lavar ------------------------------------1 pase 8.- Aclara con xilol4.- Cloruro férrico al 1 % ---------------1 pase 9.- Montar5.- Lavado en agua corriente ---------1 pase  

Azul Alcianse ha comprobado que usando el azul alcián en condiciones de pH en torno a 2,4 -2,6 se colorean los mucopolisacáridos ácidos sulfatados y los carboxílicos.

1-. Desparafinar.Estufa durante 30 min. a 60ºCSumergimos en xiloldurnate 10 o 15 min.

2º- Hidratación.Alcohol absoluto-5min.

Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4-. Hematoxilina de Harris – 10 min.

5º- Lavar con agua corriente – 10 min.

6º - Azul alcian al 2% - 10 min.

7º-Deshidratar.

Alcohol de 70º Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.

8º- Montaje.

Grocott

Para la tinción de hongos (candida, aspergillus…).

Técnica:

1º-Desparafinado.Estufa durante 30 min. a 60º.Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación.Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada4º- Solución de ácido crómico al 4% - 1 hora5º- Lavar en agua corriente – 5 min.6º Bisulfito sódico al 1% - 1 min.7º- Lavar agua corriente – 5 min.8º- Lavar con agua destilada – 3-4 pases9º- Solución argéntica de trabajo:

En estufa 60º--------------------------------- 1 horaEn microondas (descongelación) -------- 1-2 min.10º- Lavar con agua destilada – 6 pases.11º- Cloruro de oro al 0.2 % - 2-5 min.12º Lavar con agua destilada – 5 min.13º- Tiosulfato sódico al 2% - 2-5 min.14º- Lavar con agua corriente15º- Solución verde luz al 1% - 30-40 seg.16º-Deshidratar. Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.17º- Montaje.

NOTA:

NO EMPLEAR PINZAS METÁLICAS:

Cuando empieza a coger color (siempre en la oscuridad) se sacan de la estufa para controlarlos. Se enjuagan con agua destilada y se examina la tinción. Si es demasiado clara, se vuelve a aclarar con agua destilada y se coloca de nuevo en la solución de plata. Si es demasiado fuerte se trata con el diferenciador.

Diferenciador:

Ácido sulfúrico al 0.5 %Sulfato férrico al 0.2 %En un litro de agua destilada se añaden 2 gr. de sulfato férrico y a ésta solución se añaden 5 ml. de ácido sulfúrico.

RESULTADOS: Las paredes de los hongos se delinean en negro.

Hierro coloidal

1º-Desparafinado.Estufa durante 30 min. a 60º.Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación.Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º- Solución acética – 3 min.

5º - Solución de trabajo de Hierro coloidal – 1 hora.

6º- Solución acética – 4 lavados ( 3 min./lavado )

7º- Mezcla ferrocianuro-clorhídrico – 20 min.

8º- Lavar con agua corriente -5 min.

9º- Lavar en agua destilada – 3-4 pases.

10º- Si se desea se puede contrastar con:Van Gieson – 10 min.Rojo neutro – 10 min.

11º-Deshidratar.Alcohol de 70ºAlcohol de 96º.Alcohol absoluto.Xilol.

12º- Montaje.

Mucicarmin de Mayer

Las mucinas o mucoproteínas son proteínas con H.C. en una proporción superior al 4 %. La técnica del mucicarmín de Mayer sirve para identificar globalmente las mucinas, pero no reconoce su naturaleza bioquímica.

FUNDAMENTO: Las mucinas o mucoproteínas son proteínas con H.C. en una proporción superior al 4 %.

TÉCNICA:1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º- Teñir con Hematoxilina de Weigert – 10 min.

5º - Lavar con agua corriente – 3 min.

6º - Solución diluida de mucicarmín( 1:4 ) – 30 min.

7º - Lavar con agua corriente – 10 min.

8º-Deshidratar. Alcohol de 70º Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.

9º- Montaje.

Orceina

(Fibras elásticas, virus, hepatitis, cobre)

1º-Desparafinado.

Estufa durante 30 min. a 60º.

Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación.

Alcohol absoluto-5min.

Alcohol 96º-5min.

Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada

4º- Permanganato potásico ---- 10 min.

5º - Ácido oxálico al 2 % - 1 pase

6º- Lavar en agua corriente

7º- Solución de Orceína -- 1:30 h. en estufa.

8º - Lavar en agua corriente y dejar secar.

9º - Alcohol clorhídrico al 1% ---- 1 pase

10º- Deshidratar a partir de alcohol absoluto.

11º-Xilol

12º- Montar

Perls

Para la identificación de hierro

1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación.Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º - Reactivo de perls – 30 min.

5º - Lavar con agua corriente – 5 min.

6º - Hematoxilina de Mayer - 10 min.

7º- Lavar en agua corriente hasta que vire.

8º- Eosina – 1 pase

9º-Deshidratar. Alcohol de 70º Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.

10º- Montaje.

Rojo congo

Medio con pH altamente básico. Estos tratamientos modifican las característicastintoriales y antigénicas del tejido y el proceso de diferenciación puede afectar a la tinción selectiva de los acúmulos de amiloide más Pequeños.

Técnica:

1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada.4º- Hematoxilina de Carazzi o de Weigert – 10 min.5º- Lavar en agua corriente .. 10 min.6º- Solución Rojo Congo .. 10 min.

( en el momento del uso se cogen 8 ml de rojo congo y se mezclan con 2 ml de glicerina. Filtrar)7º- Lavar en agua corriente … 5 min.8º- Yoduro potásico -- 3-4 min.9º- lavar con agua corriente … pases10º-Deshidratar. Alcohol de 70º Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.11º- Montaje.

Plata metenamina o HexaminaDe Gomori es un método de tinción especial más empleado para hongos. La reacción tintorial está basada en que, en presencia de ácido peryódico, los polisacáridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehídos; éstos, a su vez, reducen el complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina) produciendo una coloración de café a negra, debido al depósito de plata reducida en los lugares de localización de los aldehídos. También se utiliza para la identificación de la melanina.

Técnica:1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada.4º- Ácido per yódico al 0.5 % --- 15 min.5º- Solución de Ag-Metenamina:En estufa……….. 60 min.(Controlar la tinción hasta que alcance un color tabaco y comprobar al microscopio que se han teñido los glormérulos)En microondas……….. 1-2 min. (Descongelación)

6º-Lavar en agua corriente7º- Cloruro de oro al 0.2 % -- 2 min.8º- Lavar en agua destilada.9º-Tiosulfato sódico o hiposulfito sódico – 5 min.10º- Lavar en agua destilada.11º- Hematoxilina de Mayer—10 min.12º- Lavar en agua corriente13º- Eosina --- 3 min.14º-Deshidratar. Alcohol de 70º Alcohol de 96º. Alcohol absoluto.Xilol.15º- Montaje.

Sudan III

Presencia de triglicéridos

Técnica:

1º-Desparafinado. Estufa durante 30 min. a 60º. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.2º- Hidratación. Alcohol absoluto-5min.

Alcohol 96º-5min.Alcohol 70º-5min.3º- Lavar en H2O destilada.4º Sudan III + 40 gotas de rojo escarlata---- 1 – 24 horas.

5º- Lavar con agua corriente 6º- Hematoxilina o carmín (para el contraste)-- 5-10 min.

7º- Lavar en agua corriente – 5 min.8º- Montaje en glicerina levulosa, gelatina, etc.

Violeta de CresiloSe usa especialmente para la tinción nuclear y visualización de los cuerpos de Nissl. El violeta de cresilo se usa como tinciónestándar para identificación de Helicobacter y de cromatina del sexo (Xcromatina).

Técnica:

1º-Desparafinado.

Estufa durante 30 min. a 60º.

Sumergimos en xilol durante 10-15min.

2º-Deshidratación.

Alcohol absoluto durante 5min.

Alcohol 96º 5 min.

Alcohol 70º 5min.

3º- Lavar en H2O destilada.

4º- Violeta de cresilo 0.1% entre 20-30min.

5º- Lavar en agua corriente.

6º- Montar en medio acuoso.

RESULTADO

Las grasas neutras se tiñen.

Azul de toluidina

Colorante que tiñe estructura basófilas, tales como la cromatina. Se puede

comportar como colorante ortocromático (tiñe de color azul) o metacromático (tiñe

de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza química de la

sustancia teñida. Como colorante ortocromático, se usa frecuentemente para teñir

tejido nervioso, donde tiñe la heterocromatina y los gránulos de Nissl (acúmulos de

cisternas de retículo endoplásmico rugoso de los somas neuronales, así como las

fibras nerviosas amielínicas y células de glía. También se utiliza para la tinción de

cortes semifinos. El azul de toluidina tiñe metacromáticamente las estructuras

ricas en proteoglucanos sulfatados, como el heparán sulfato, presente - por

ejemplo - en el cartílago joven (condroblastos y matriz inmadura) y en los gránulos

de las células cebadas.

GLOSARIO

Aldehído: Cada uno de los compuestos orgánicos ternarios que se forman como primeros productos de la oxidación de ciertos alcoholes. Líquido incoloro, muy volátil, de olor desagradable, que se oxida fácilmente en contacto con el oxígeno del aire y se transforma en ácido acético.

Embeber. Dicho de un cuerpo sólido: Absorber a otro líquido. Empapar, llenar de un líquido. Contener, encerrar dentro de sí a otra.

Hipertónico: Dicho de una disolución: Que tiene mayor presión osmótica que otra con la que se compara

Hipotónico: Dicho de una disolución: Que tiene menor presión osmótica que otra con la que se compara.

Microtomo: utensilio de laboratorio utilizado para realizar cortes muy finos de muestras que van a ser preparadas para su observación al microscopio.

Polisacárido: Hidrato de carbono formado por una larga cadena de monosacáridos; p. ej., el almidón, la celulosa y el glucógeno.

Resección: Extirpación total o parcial de un órgano.

REFERENCIAS:

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Ramirez Sabás Miriam

Sanchez Perez Aline

Millán Navarrete Mariana