revista asebir diciembre 2006

A S O C I A C I Ó N PA R A E L E S T U D I O D E L A B I O L O G Í A D E L A R E P R O D U C C I Ó NDiciembre 2006 Vol. 11•N° 2

ASEBIRREVISTA

ArtículosNuevas Perspectivas para el Embriólogo:

Papel en el Banco de Líneas

Celulares de Andalucía

Aumento de la Fragmentación del DNA

Espermático en los Fumadores tras

la Capacitación Mediante SWIM-UP

DebatesLa Ética en la Medicina Reproductiva

El Charlatán en la Ciencia y los Medios de

Comunicación

Ética y Técnicas de Reproducción Asistida

Ética Profesional del Embriólogo Clínico en

los Programas de Reproducción Asistida

Bioética y Reproducción Asistida Humana

Ética en el Laboratorio de Reproducción Asistida

Ética Moral en Repoducción Asistida

El Diagnóstico Genético Preimplantacional a

Debate

Formación ContinuadaPolaridad Durante el Desarrollo

Embrionario Inicial

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Boletín de Inscripción

ActualidadLa Ética en Nuestro Trabajo:

Reflexiones Bioéticas en Relacción al Diagnóstico

Genético Preimplantatorio

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Í N D I C E

SUMARIO

EDITORIAL 5M. Boada

ACTUALIDADLa ética en nuestro trabajo: reflexiones bioéticas en relación al diagnóstico genéticopreimplantatorio. 7Fernando Abellán

ARTÍCULOSNuevas perspectivas para el embriólogo: papel en el banco de líneas celulares de Andalucía (nodo central banco nacional de líneas celulares) 11J. L. Cortés, F. Cobo, C. Cabrera, A.H. Barnie, P. Catalina, A. Nieto, R. Montes, A. Barroso, A. Concha

Aumento de la fragmentación del DNA Espermático en los fumadores tras la capacitación mediante SWIM-UP 15T. Viloria, N. Garrido, J. L. Fernández, J. Remohí, A. Pellicer,L. Muriel, M. Meseguer

DEBATESIntroducción al debate 23La ética en la medicina reproductiva 23Ernesto Veiga El charlatán en la ciencia y los medios de comunicación 26Rafael Bernabeu, Jorge Ten.Ética y técnicas de reproducción asistida 27Cristina Camprubí, Joan Blanco.Ética profesional del embriólogo clínico en los programas de reproducción asistida 27Mª Carmen Gonzalvo, Ana Clavero, Antonio Garrido, María Sánchez,Sonia Calderón, Ana Sánchez, Ana Gallego, Marta Pérez, José Antonio Castilla.Bioética y reproducción asistida humana 28Carmen Ochoa.Ética en el laboratorio de reproducción asisitida 30Carolina Roméu Ética y moral en reproduccion asistida 31Miguel Ruiz El diagnóstico genético preimplantacional a debate 32Esther Velilla

FORMACIÓN CONTINUADAPolaridad durante el desarrollo embrionario inicial 35I.Santiago Álvarez-Miguel, E. Maria MIguel -Lasobras, F. Javier Martín - Romero, J.A. Domínguez - Arroyo, E. González Carrera

NOTICIASCarta e invitación al IV Congreso ASEBIR 46Fe de erratas 48AGENDA 48INFORMACIÓN A LOS AUTORES 50BOLETÍN DE INSCRIPCIÓN 51

IMAGEN DE PORTADA: Secuencia de divisiones que sistemáticamente se llevan a cabo para dar origen al embrión de 4células. Los esquemas se basan en modelos similares de Gilbert, 2003. Imágenes del InstitutoExtremeño de Reproducción Asistida (IERA) y Grupo de Investigación en Reproducción y DesarrolloEmbrionario (REDES). Universidad de Extremadura. Badajoz

EDITA.

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Biología de la Reproducción (ASEBIR)

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Vol. 11 • N° 2 • Diciembre 2006

ASEBIRA S O C I A C I Ó N P A R A E L E S T U D I O D E L A B I O L O G Í A D E L A R E P R O D U C C I Ó N

Pág.

Diciembre 2006 Vol. 11 • Nº2


4Diciembre 2006 Vol. 11 • Nº2



E D I T O R I A L

La nueva ley de Reproducción AsistidaMontse Boada

Jefe de la Sección de Biología del Institut Universitari Dexeus. Vocal de la Comisión Nacional de Reproducción Asistida como representante del Colegio Oficial de Biólogos

El pasado 11 de Mayo, el Congreso de los diputados aprobó finalmente la nueva ley de reproducción asistida (Ley 14/2006). El gran debate social quegeneran algunos aspectos éticamente controvertidos de las técnicas de reproducción asistida (TRAs) hizo que hasta consensuarse el nuevo texto de la leyfuera necesaria la elaboración de distintos borradores, la revisión de varios proyectos y el debate de múltiples enmiendas propuestas por los distintos partidospolíticos. A tenor de los cambios normativos acontecidos en los últimos años, era casi impensable esperar una ley como la que se ha publicado. Lapreocupación generada tras la promulgación de la Ley 45/2003 tanto en los profesionales que nos dedicamos a las TRAs como en el colectivo de usuariasque veían como disminuían sus probabilidades de éxito como consecuencia de las restricciones impuestas por dicha ley, parecía conducirnos a un callejónsin salida. Desde la Comisión Nacional de Reproducción Humana Asistida (CNRHA) se trabajó con rapidez y eficacia consiguiendo en un periodo record, lapublicación del Real Decreto 1720/2004 y su gran lista de excepciones que permitió solucionar una parte importante del problema. Sin embargo, seguíancoexistiendo dos leyes (Ley 35/1988 y Ley 45/2003) que requerían ser revisadas de acuerdo a las necesidades actuales y modificadas con el fin de resolverlos puntos controvertidos y algunos “vacíos legales” existentes.

La nueva ley elimina definitivamente la tan discutida limitación a fecundar únicamente tres ovocitos y modifica el período máximo de congelación deembriones dejándolo a criterio médico sin un límite fijo. También otorga a las parejas la facultad de decidir el futuro de sus embriones congelados dándolespor fin las mismas opciones a todas por igual, independientemente de la fecha en que se haya realizado la congelación. La posibilidad de destinar losembriones sobrantes (congelados o no) a proyectos de investigación permitirá que puedan desarrollarse líneas propias de investigación tanto para la mejorade las TRAs como en el ámbito de las células madre.

La Ley 14/2006 introduce nuevas opciones terapéuticas como la congelación de ovocitos y tejido ovárico con fines reproductivos y el Diagnostico GenéticoPreimplantacional (DGP) en combinación con determinación de antígenos de histocompatibilidad con fines terapéuticos para terceros. La utilización deovocitos congelados podrá ya realizarse fuera de las experiencias controladas reguladas por el Real Decreto 120/2003, aunque con autorización expresa delas autoridades sanitarias correspondientes. En el caso del DGP con HLA maching se requerirá la revisión caso a caso por la CNRHA y la autorización de lasautoridades competentes. Esta ley refuerza el papel asesor de la Comisión Nacional de Reproducción Asistida que probablemente deberá variar sucomposición y estatutos para poder adecuarse a sus nuevas atribuciones. Así mismo, introduce a las comisiones homólogas de las Comunidades Autónomascomo comisiones de soporte y referencia de la CNRHA permitiendo que colaboren con ésta en el ejercicio de sus funciones.

La nueva ley incorpora distintas sanciones administrativas para los casos de incumplimiento de la norma. Sigue prohibiendo la selección de sexo sinindicación terapéutica, la maternidad por sustitución y la clonación reproductiva. Por fin se establece un tratamiento diferencial entre la clonación reproductivay la clonación terapéutica o transferencia nuclear, dando paso así a que la futura ley de investigación biomédica autorice esta última. Se amplia el periodo deutilización post mortem del material reproductivo de seis a doce meses y se considera otorgado el consentimiento por parte del varón cuando el proceso detransferencia embrionaria se hubiera iniciado con anterioridad a su fallecimiento. En cuanto a las donaciones, se sigue manteniendo el carácter anónimo,altruista y gratuito, pero se reconoce por primera vez el derecho a la compensación económica por las molestias físicas, gastos de desplazamiento y laborales

de los donantes.

Uno de los retos importantes de la Ley 14/2006 es la puesta en marcha de un Registro de Actividad que recoja los resultados de los distintos centros dereproducción asistida así como del Registro de Donantes cuya creación ya se postulaba en la primera ley de TRA del año 1988 pero que en la actualidad,aun no se ha creado. La ley actual responsabiliza a los centros de comprobar la identidad de los donantes y de las consecuencias de sus posibles donacionesanteriores. Parece totalmente imposible que los centros puedan gestionar este nuevo imperativo legal sin que el Ministerio de Sanidad ponga a su alcance lasherramientas necesarias para ello por lo que la creación del Registro de Donantes se convierte en un proyecto totalmente necesario.

Algunos aspectos de la Ley han generado incertidumbre y controversia. La revisión del anexo en el que se detallan las técnicas autorizadas y en el que lamicroinyección espermática de espermatozoides testiculares ha quedado excluida como por arte de magia, es uno de los puntos principales que requierenuna urgente revisión. También es imprescindible desarrollar los requerimientos necesarios para proceder a la destrucción de embriones cuando este ha sidoel destino elegido por los progenitores, o precisar las posibilidades de utilización de los embriones congelados por parte del cónyuge en situaciones especialescomo por ejemplo tras el fallecimiento de la mujer o en el caso de parejas compuestas por dos mujeres.

La publicación de la nueva ley de reproducción asistida se ha valorado muy satisfactoriamente por toda la comunidad médico-científica relacionada conlas TRAs sin embargo, se espera que en el transcurso de unos meses se produzca el desarrollo normativo necesario para que puedan dilucidarse entre otros,algunos de los aspectos señalados que ya precisan ser revisados. Así mismo se espera que con el paso del tiempo, la nueva ley pueda irse adecuando a lasnecesidades que vayan surgiendo sin que los cambios políticos que puedan producirse en un futuro lleguen a modificar sustancialmente el espíritu de la

recién estrenada “Ley sobre Técnicas de Reproducción Humana Asistida”.


A C T U A L I D A D

Una reciente encuesta dirigida por elGenetics and Public Policy Center deEstados Unidos, y realizada en un nú-mero importante de clínicas de fertili-dad existentes en dicho país, revelaque entre el 4 y el 6 por ciento de todoslos ciclos de FIV incluyen yaDiagnóstico Genético Preimplantarorio(DGP). Al mismo tiempo, indica que el28 por ciento de las clínicas que reali-zan esta técnica la han proporcionadopara evitar enfermedades que se mani-fiestan en la edad adulta, como corea deHuntington, cáncer de mama heredita-rio o Alzheimer (Baruch et al., 2006).

La encuesta realiza asimismo unsondeo acerca de cómo piensan lasclínicas que evolucionará el DGP en elfuturo, encontrándose de acuerdo un77 por ciento en que los cambios en latecnología permitirán que se lleve a caboun análisis completo del genoma delembrión, como una actuación rutinariaque formará parte de la FIV.

Se constata de esta forma que elDGP está entrando en una nueva fasede expansión, en la que, a las habitua-les aplicaciones para detectar cromo-somopatías o enfermedades monogé-nicas, se le añaden otras utilidadescada vez más prometedoras en el cam-po de la detección de enfermedades deaparición tardía, multifactoriales y/o deexpresión fenotípica variable.

Lo anterior va a suponer que el pro-fesional sanitario adquirirá a medioplazo herramientas diagnósticas máspotentes, con las que va a poder ayu-dar a las parejas a evitar hijos con gra-ves enfermedades. Pero, al mismotiempo, hay que decir que las ventajasde tipo médico y científico que ellocomporta no le deben hacer olvidar larepercusión social de su trabajo y, eneste sentido, que técnicas como el DGPno son ajenas a una gran controversia

ética (Abellán, 2006).

En efecto, el DGP conlleva la utiliza-ción de las técnicas de reproducciónasistida y requiere la manipulación yselección de embriones por motivosgenéticos, así como el descarte de losque se consideren no aptos, con lo queen cierta medida estamos marcandoindirectamente unos estándares de co-rrección genética de los individuos.Hay que tener en cuenta además que,contrariamente a lo que trasciende al-gunas veces a los medios de comuni-cación, la técnica de DGP no permiteevitar hijos libres de enfermedades eli-minando la patología del embrión, sinoque a lo que faculta realmente es a se-parar los sanos de los que no lo son,descartando a estos últimos para latransferencia al útero materno. En de-finitiva, se seleccionan embriones queya son sanos de por sí y no se cura aninguno de los enfermos.

Aunque las consideraciones referi-das, y otras posturas muy críticas conla técnica de que estamos hablando,no tengan que suponer en modo algu-no un freno para el avance médico eneste campo, sí considero que debenhacernos reflexionar sobre el hecho deque nuestro trabajo tiene un contenidoético indudable, al que no debemosser insensibles si no queremos incurriren la denominada omnipotencia tecno-científica, que se olvida con frecuenciade la máxima bioética de que todo loque es científicamente posible no tie-ne por qué ser necesariamente ética-mente admisible. Veamos a continua-ción algunos casos clínicos reales deDGP que plantean dudas éticas.

El primero de ellos guarda relacióncon la patología conocida como polipo-sis adenomatosa familiar, que consisteen un trastorno hereditario caracteriza-do por el desarrollo de abundantes pó-lipos en el colon, que comienza al final

de la adolescencia o al principio de laedad adulta y que, si no se trata, pue-de terminar en cáncer de colon(Doyma, 1996). La formulación de estecaso fue del siguiente tenor: “Parejasin antecedentes de infertilidad queacude por DGP debido a riesgo genéti-co de poliposis adenomatosa familiar. Apriori, el 50 % de la descendencia here-dará el gen que les hará susceptibles depadecer numerosos tumores que debe-rán ser tratados quirúrgicamente parano desarrollar cáncer” (simposiumFIV-Extreme, 2004).

Un individuo que padezca esta en-fermedad, autosómica dominante, ten-drá que sufrir múltiples adenomas co-lorrectales a partir de la adolescencia ydurante toda su vida habrá de ser tra-tado periódicamente.

Si no se realiza profilaxis existe unaprobabilidad muy alta de que su dolen-cia degenere en cáncer de colon a laedad de cuarenta años.

Al estudiar este caso vemos, por tan-to, que se trata de un supuesto en elque el futuro hijo, si recibe el gen mu-tado, va a tener un riesgo alto de pade-cer problemas de salud a partir de laadolescencia, que le van a implicarmolestias importantes pues le obligaráa hacerse revisiones cada dos añoscomo mínimo y también a extirparsequirúrgicamente los adenomas con lafrecuencia necesaria.

Sin embargo, al mismo tiempo, pue-de decirse que si finalmente padece laenfermedad pero realiza los cuidadospertinentes, no necesariamente habráde padecer cáncer de colon y que,además, se ignora por completo eneste momento el avance de la cienciamédica en los próximos veinte años,que será cuando surja realmente el pro-blema. A partir de aquí ¿justifica esta si-tuación la realización de un DGP a los

LA ÉTICA EN NUESTRO TRABAJO: REFLEXIONES BIOÉTICAS ENRELACIÓN AL DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTATORIO

Fernando AbellánDerecho Sanitario Asesores. e-mail: [email protected]



A C T U A L I D A D

progenitores para seleccionar unos em-briones en los que esté descartada latransmisión de esta patología a sus futu-ros hijos? La Autoridad británica deFertilidad y Embriología Humana ha en-tendido que sí al permitir expresamenteel DGP en este caso concreto (HFEA).

Otro caso clínico interesante sería elde la Neurofibromatosis, patología de ex-presión fenotípica variable, expuesto así:“De entre las consultas recibidas solici-tando DGP de enfermedades monogé-nicas, algunas de ellas se deben a enfer-medades con expresión fenotípica varia-ble. Ni siquiera el contexto familiar pue-de predecir los síntomas de la futuradescendencia en caso de heredar el genalterado. Es el caso de una pareja queacude por antecedentes familiares deNeurofibromatosis de tipo 1 en la familiadel varón (padre afectado, dos herma-nos también afectados, uno fallecido porla enfermedad). La pareja tiene un hijosano de un primer embarazo y ha pasa-do recientemente por dos interrupcionesvoluntarias de embarazo consecutivas.Acuden a la clínica de reproducción so-licitando DGP ¿Debemos ofrecer DGPaún sabiendo que no podemos predecirlos futuros síntomas de los embrionesque hereden la mutación, pero sabien-do que algunos padecerán síntomasgraves y otros, un número importante,no verán reducida su calidad de vidasignificativamente?” (simposium FIV-Extreme, 2004).

La Neurofibromatosis es un trastor-no congénito caracterizado por nume-rosos fibromas en nervios y piel, man-chas de café con leche en la piel y, enalgunos casos, anomalías del desarro-llo de músculos, huesos y vísceras.

Como puede observarse, el pacienteafectado de Neurofibromatosis tiene laparticularidad de que, además de noser seguro el padecimiento de la enfer-medad por la descendencia, en el su-puesto de desarrollar su sintomatologíapodrá ser grave o no, dependiendotambién de factores multifactorialesque influirán a lo largo de su vida (laHFEA autoriza el DGP en el caso de laNeurofibromatosis tipo 2, pero no en lade tipo 1, como el analizado aquí).

Por último, citamos un caso clínicode una paciente con antecedentes fa-miliares de cáncer de mama, que de-sea utilizar el DGP para la detección deun oncogén predisponente a dicha en-fermedad y descartar a los embrionesque presenten dicha alteración. El casose describe así: “Tenemos una pacien-te cuya familia tiene antecedentes decáncer, ya que la mayoría de los miem-bros son portadores de un oncogén ymuchos de ellos han desarrollado la en-fermedad.

Dado que nuestra paciente quieresometerse a un tratamiento de fertili-dad, la consulta jurídica que hacemoses si se pueden someter los embrionesa un DGP para transferir aquel o aque-llos que no sean portadores del onco-gén. La duda surge porque la pacienteno tiene la enfermedad, sólo el gen. Encaso de poder realizar el DGP, ¿es nece-sario alguna autorización especial o úni-camente comunicárselo a la autoridadsanitaria a final de año?” (FundaciónSalud 2000 & Derecho SanitarioAsesores, septiembre, 2006).

Aquí hay que tener en cuenta que nohablamos de la posible transmisión deuna enfermedad hereditaria (el cáncercomo tal no se hereda), sino de latransmisión de una predisposición apadecerla, lo que hace más incierto to-davía si afectará o no el problema alfuturo hijo, ya que además se ignoraigualmente el estado de la cienciacuando el hijo se convierta en un adul-to.

De los casos relatados se deduce fá-cilmente que la utilización del DGPpara la prevención de enfermedadesgenéticas de aparición tardía o multi-factoriales es objeto de especial debatedesde el punto de vista bioético, ya quea la postre plantea el problema de de-terminar cuándo una vida es digna deser vivida y, en consecuencia, dóndeponer los límites a la selección genéti-ca de embriones. Lógicamente, en lamedida en que es más remota la posi-bilidad de que los hijos padezcan unaenfermedad grave pierde contunden-cia también la decisión proclive a la uti-

lización del DGP para llevar a cabo unaselección genética de los embriones.Lo cierto es que en los casos clínicosanalizados podríamos establecer unagraduación de situaciones en funciónde su gravedad, siendo más factible elconsenso favorable a la realización dela selección embrionaria en aquellosde aparición de la enfermedad másprobable y con consecuencias más le-sivas para la salud.

En principio, cabría pensar que elDGP debe emplearse en el diagnósticode enfermedades hereditarias graves,pero ¿qué es una enfermedad grave? o¿cómo definiríamos lo que es la salud?Aunque hay algunas propuestas doc-trinales para arrojar luz en esta mate-ria, lo cierto es que se trata de unacuestión compleja. Hay quienes pien-san que la decisión final sobre el DGPha de recaer en los progenitores, yaque quién mejor que ellos para cono-cer la trascendencia de cualquier pa-decimiento de origen familiar; otros con-sideran que ha de existir un control pú-blico estricto en esta materia, estable-ciéndose normativamente un listado ce-rrado de patologías autorizadas; no fal-tan tampoco quienes abogan por prote-ger a ultranza la identidad genética delos individuos.

Lo cierto es que la corriente que seva imponiendo hoy día en países comoFrancia o Reino Unido, y que ha que-dado introducida en España a raíz dela ley de reproducción asistida (Ley14/2006 de 26 de Mayo), sería aquellaque se apoya, no tanto en contemplarsituaciones genéricas sino casos con-cretos y en que, con independenciadel control último de la autoridad ad-ministrativa, intervengan comités éti-cos multidisciplinares que estudien laproblemática particular (personal, fa-miliar) que subyace respecto de cadasolicitud de DGP sobre patologías deltipo de las que nos estamos refirien-do. Sería una perspectiva eclécticarespecto de las anteriores citadasque pretende combinar un controlpúblico con el análisis bioético por-menorizado de cada situación.

8Fernando Abellán. La Ética en Nuestro Trabajo...


BIBLIOGRAFÍABaruch S, Kaufman D, Hudson KL. Genetictesting of embryos: practises and perspecti-ves of U.S. IVF clinics. Fertility and Sterility2006 [en prensa].

Abellán, F Aspectos bioéticos y legales del diag-nóstico genético preimplantatorio (DGP).Revista Iberoamericana de Infertilidad, 2006;Vol. 23, nº. 2:123-130.

Doyma. Diccionario Mosby de la Salud,1996.Simposium FIV-EXTREME «Foro dedebate científico, ético y legal a partir de casosclínicos. ¿Hasta dónde podemos llegar enTécnicas de Reproducción Asistida?», Reus,12-14 de Noviembre de 2004.

The Human Fertilisation and Embryology Authority(HFEA) www.hfea.gov.uk (Home>How weRegulate>Policy>Policy reviews).



A R T Í C U L O S

NUEVAS PERSPECTIVAS PARA EL EMBRIÓLOGO: PAPEL EN ELBANCO DE LÍNEAS CELULARES DE ANDALUCÍA (NODO CENTRALBANCO NACIONAL DE LÍNEAS CELULARES)

New perspectives for the embryologist: role in the Andalusian Stem Cell Bank (Spanish Central Node)

José Luis Cortés*, Fernando Cobo, Carmen Cabrera, Angela Helen Barnie, Purificación Catalina, Ana Nieto, Rosa Montes, AliciaBarroso, Ángel Concha

Banco de Líneas Celulares de Andalucía (Nodo Central Banco Nacional de Líneas Celulares).

* Banco de Líneas Celulares de Andalucía. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Avda Fuerzas Armadas 2, 18014 Granada. E-mail: [email protected]

RESUMEN: Un banco de líneas celulares troncales tiene como funciones la elaboración, el almacenamiento, laconservación y la gestión de líneas celulares de diverso tipo, de acuerdo con las normas y estándares que determinala legislación nacional e internacional. Dentro de los tipos de líneas celulares se encuentran las de origenembrionario, obtenidas a partir de la masa celular interna de blastocistos procedentes de preembriones sobrantes deciclos de FIV, donde la figura de un embriólogo que manipule los preembriones es necesaria. Para poder definiraspectos en cuanto al perfil de este tipo de profesional, debemos buscar las similitudes con los centros dereproducción asistida. Mediante este trabajo se pretenden describir las funciones de un embriólogo dedicado a laderivación de líneas celulares embrionarias humanas dentro del Banco de Líneas Celulares de Andalucía.

PALABRAS CLAVE: Banco de líneas celulares troncales, blastocisto, célula troncal embrionaria, embriólogo, FIV, masa celular interna.

SUMMARY: The functions of a stem cell bank are the elaboration, storage, conservation and management of all thecell line types, according to national and international regulations currently in force. One of these cell lines is theembryonic stem cell line, which is obtained from the inner cell mass of blastocysts of IVF spare embryos, where thefigure of an embryologist who manipulates the embryos is necessary. To be able to define some aspects about theprofile of this type of professional, we must look for the similarities with the Assisted Reproduction Centres. Adescription of the functions of the embryologist who derives human embryonic stem cell lines in the Andalusian StemCell Bank has been carried out.

KEY WORDS: Stem cell bank, blastocyst, embryonic stem cell, embryologist, IVF, inner cell mass.



A R T Í C U L O S

INTRODUCCIÓN

La creación de bancos de líneas celu-lares troncales públicos es un hechoreciente en Europa (aproximadamen-te 5 años), siendo España pionera eneste sentido, con la inauguración delBanco de Líneas Celulares deAndalucía (BLCA), en Granada, el 23de Enero de 2004. Tanto la derogadareforma de la Ley 35/1988 (Ley45/2003, de 21 de Noviembre), comola actual Ley 14/2006, de 26 de Mayo,sobre Técnicas de ReproducciónAsistida, así como la Directiva Europea(European Union, 2004), permiten a losbancos de líneas celulares españolesderivar líneas celulares embrionariashumanas (siglas inglesas hESCs hu-man embryonic stem cells) a partir depreembriones sobrantes de ciclos deFIV, siempre bajo el consentimiento in-formado de los progenitores.

Algo novedoso en la Ley es la elimi-nación de las diferencias en la consi-deración de los preembriones crio-conservados con anterioridad a la en-trada en vigor de la Ley 45/2003, y losque pudieran generarse posterior-mente, en cuanto a sus posibles des-tinos, siempre supeditados a la volun-tad de los progenitores. Es decir, cual-quier preembrión crioconservado, seacual fuere su tiempo de crioconserva-ción, podría ser utilizado para fines deinvestigación siempre y cuando losprogenitores firmen el consentimientoy estén asociados a un proyecto con-creto que deberán autorizar posterior-mente los Comités Éticos correspon-dientes.

PERFIL Y FUNCIONES DEL EMBRIÓLOGO

Aunque no es aún un título oficial,el embriólogo es aquel Licenciado enCiencias Biomédicas (Medicina,Veterinaria, Farmacia, Biología oQuímica) con experiencia en Biologíade la Reproducción. Según el R.D.413/1996, de 1 de Marzo, para que uncentro esté autorizado en la aplicaciónde las técnicas de reproducción asisti-da deberá estar dotado de una perso-na que cumpla los requisitos anterio-res. Hasta ahora, la figura del embrió-logo ha estado siempre relacionadacon las clínicas de reproducción asis-tida, pero con el descubrimiento del

poder regenerativo de las células tron-cales embrionarias, numerosos cen-tros de investigación han iniciado pro-yectos de derivación de hESCs, don-de la figura del embriólogo adquiereotra perspectiva.

Aún así, para poder definir aspectosreferentes a la figura del embriólogoen un centro de investigación debe-mos buscar las “homologías” con elpapel desempeñado en los centros dereproducción asistida.

ASEBIR ha publicado en el año2006, dentro del programa deCuadernos de Embriología Clínica, unasRecomendaciones sobre RecursosHumanos y Físicos para el Laboratoriode Reproducción Asistida Humana. Enestas recomendaciones, el embriólogosería el encargado de tomar las decisio-nes clínicas dentro del laboratorio deacuerdo con los protocolos estableci-dos, y realizaría la mayor parte de lalabor asistencial del laboratorio de an-drología y embriología.

Respecto a la formación del embrió-logo, éste deberá haber obtenido elgrado de Licenciado en CienciasBiomédicas, como hemos expuestoanteriormente, poseer conocimientosde fisiología humana, endocrinologíareproductiva, genética, técnicas de la-boratorio de andrología y embriología,y conocimientos de cultivo celular.Además deberá poseer una experien-cia de al menos 2 años y acreditar larealización de 100 ciclos de FIV conICSI y 200 preparaciones de semenpara inseminación artificial, supervi-sados por el coordinador del laborato-rio en cuestión, o por otro embriólogo

ya formado.

La ASMR 2004, en la guía para labo-ratorios de embriología y andrología,enumera los servicios que ofrecen enconcreto los laboratorios de embriolo-gía clínica:

- Preparación de los medios de cultivo y control de calidad- Identificación de ovocitos medianteexamen del líquido folicular- Evaluación de la madurez y calidadovocitaria- Preparación del esperma: recolec-ción y análisis del semen, lavado y ca-pacitación espermática- Inseminación de los ovocitos- Determinación de la fertilización y evaluación de la calidad del zigoto- Cultivo embrionario y evolución de la calidad embrionaria- Transferencia embrionaria- Crioconservación, almacenaje y descongelación de esperma, ovocitosy embriones- Micromanipulación de ovocitos humanos y/o embriones

Es obvio que en los centros de inves-tigación en los que se deriven hESCs, lafunción del embriólogo será diferente alas descritas anteriormente, pero pen-samos que la persona encargada de de-rivar estas líneas sí debe de haber ad-quirido anteriormente una amplia expe-riencia en este campo, lo que le otorga-rá propiedad a la hora de manipular lospreembriones destinados a generar unalínea celular.

De esta manera, las funciones del pro-fesional responsable del Área deEmbriología dentro del BLCA son(Figura 1):

12José Luis Cortés. Nuevas Perspectivas...


A R T Í C U L O S

- Descongelación de preembriones crioconservados. Como los preem-briones provienen de distintos cen-tros, es competencia de esta áreael conocimiento de todos los proto-colos de congelación/descongela-ción utilizados para optimizar losresultados en cuanto a la obtenciónde hESCs.

-Clasificación de preembrionescrioconservados descongelados, si-guiendo criterios morfológicos (Calderón et al., 2002):

o Ritmo de división de las blastómeraso Apariencia del citoplasma de las blastómeras

o Contacto entre las blastómeraso Aspecto de la zona pelúcidao Fragmentación de las blastómeraso Multinucleación de las blastómeraso Evaluación de la calidad blastocitaria

Aunque algunos autores no rela-cionan la calidad embrionaria y blas-tocitaria con la tasa de obtención delíneas celulares (Mitalipova et al.,2004), desde nuestro centro pensa-mos que esta clasificación sí es im-portante a la hora de elegir el méto-do de aislamiento de la masa celu-lar interna (MCI) y posterior deriva-ción de la línea celular (Ver abajo).

- Cultivo y evolución de los preem-briones hasta estadio de blastocis-to, donde se encuentra la MCI,compuesta por las células tronca-les, que darán lugar a las hESCs.Para evaluar la calidad blastocitariaatendemos al modelo propuestopor el Instituto Cornell (Veeck andZaninovic, 2004), donde se valorael grado de expansión del blastocis-to, así como el aspecto del trofoecto-dermo y la MCI, quedando estable-cidas tres categorías:

o Blastocistos de buena calidad con una MCI bastante distinguible y con tamaño adecuado.

o Blastocistos con una pequeña pero distinguible MCI.

o Blastocistos de mala calidad con una MCI poco definida.

- Derivación de hESCs. Existen va-


rios métodos que consisten en elaislamiento de la MCI y la elimina-ción de las células del trofoectoder-mo de los blastocistos. En nuestrocentro hemos experimentado dosmétodos para realizar el aislamientode la MCI dependiendo de la cali-dad blastocitaria. Por un lado, unmétodo mecánico, bien por micro-manipulación o por empleo del di-sector láser, cuando los blastocistosson de buena calidad con una MCIbastante distinguible y con tamañoadecuado.

El empleo del láser es un nuevométodo de aislamiento de la MCIprobado en modelo murino por va-rios grupos, dando buenas tasas dederivación de líneas celulares em-brionarias murinas (mESCs)(Tanaka et al., 2006; Cortés et al.,2006). Consiste en ir aplicando elláser a las células del trofoectoder-mo destruyéndolas, siendo sola-mente las células de la MCI las quese adhieren a la superficie de culti-vo elegida (Fibroblastos murinos yhumanos, MatrigelTM).

Para los blastocistos con una pe-queña o nada visible MCI, utiliza-mos el método de cultivo directo delblastocisto sobre la superficie decultivo elegida (Kim et al., 2005).Así, tanto las células del trofoecto-dermo, como las de la MCI se ad-hieren a dicha superficie. Pasadosunos días, los dos tipos celularessufren un crecimiento, y mecánica-mente se separa la MCI. Aparteexiste otro método de aislamientode la MCI mediante inmunocirugía(Solter and Knowles, 1975), peroque está en desuso debido a que losmedios utilizados contienen produc-tos de origen animal, con el riesgo decontaminación cruzada.

- Coordinador entre los centros de re-producción y el banco para la perfec-ta interlocución en la donación depreembriones para fines científicos.- Coordinador de la labor de obten-ción de los consentimientos infor-mados. La Guía para la Investigacióny Terapia con Células Troncales pro-puesta por la Indian Council of

Medical Research (ICMR-DBT,2006) expone que el profesionalque realice el tratamiento de fertili-dad y el investigador que derive lalínea celular o que trabaje con ellasno sean la misma persona. Ademásexplica que la decisión sobre el des-tino de los preembriones debe estarlibre de la influencia de los investi-gadores que podrían alentar a losprogenitores hacia su uso con finesde investigación.

En cambio, nosotros pensamosque el embriólogo del banco de cé-lulas troncales sí debe ser parte ac-tiva en el proceso de entrevista, ex-plicación y firma del consentimien-to informado por parte de la pareja,o la mujer en su caso, estando dis-ponible para realizar las entrevistascuando sea necesario, ya que esexperto en cuanto a cualquiera delos destinos propuestos por la Leyespañola (Ley 14/2006).

El BLCA es un centro multidiscipli-nario donde varias áreas interaccio-nan para una adecuada coordina-ción, con el objetivo de elaborar, al-macenar, conservar y gestionar to-dos los tipos de líneas celulares, deacuerdo a las actuales normativasnacionales e internacionales. Estasáreas o secciones son las siguientes(Figura 1): Área de calidad; área detrazabilidad; área de embriología;área de cultivo celular; área de cito-genética y biología molecular; áreade microbiología y área de investi-gación.

CONCLUSIÓN

En el BLCA pensamos que existeuna nueva figura de embriólogo in-vestigador especializado en la ma-nipulación de preembriones huma-nos destinados a generar nuevashESCs. Este embriólogo debe haberacreditado experiencia previa enembriología clínica, y debe de estaren contacto con las clínicas de re-producción para la perfecta coordi-nación en la donación de preem-briones con fines de investigación.Además, el área de embriología alque estará integrado el embriólogo


A R T Í C U L O S

formará parte del Banco de CélulasTroncales, con un stock propio delíneas celulares embrionarias, parasu distribución a centros de investi-gación que las puedan utilizar parainvestigación básica y futuras apli-caciones clínicas.

AGRADECIMIENTO

Al Dr. José Antonio Castilla por suasesoramiento en la elaboración deeste artículo.

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Figura 1. Funciones del Área deEmbriología dentro del organigrama delBanco de Líneas Celulares deAndalucía.

14José Luis Cortés. Nuevas Perspectivas...


A R T Í C U L O S

Resumen: los hábitos tóxicos y su relación con la infertilidad masculina, ha sido objeto de investigación en los últimos años ydentro de los hábitos tóxicos más comunes dentro de la población está fumar el cigarrillo. Por otro lado, la fragmentación delDNA espermático ha sido relacionada con la infertilidad y disminución de la calidad embrionaria en trabajos previos. Esteestudio se ha llevado a cabo con la finalidad de investigar la asociación entre el tabaco y la fragmentación del DNA espermáticoen muestras de semen fresco y capacitado en hombres infértiles que asisten para un tratamiento de reproducción.Un total de 99 pacientes proporcionaron una muestra de semen; se descartaron previamente otras causas de fragmentación delDNA mediante un cuestionario y se establecieron 3 grupos de acuerdo al consumo de tabaco: no fumadores, fumadoresmoderados (1-19 cigarrillos/día) y muy fumadores (≥20 cigarrillos /día). El análisis de la fragmentación se llevó a cabo mediantela prueba de la Dispersión de la Cromatina (SCD) antes y después del swim-up. No se observaron diferencias significativas encuanto a la fragmentación del DNA según el hábito de fumar en las muestras en fresco; sin embargo, hubo un incrementosignificativo de células espermáticas con el DNA fragmentado en los hombres fumadores respecto a los no fumadores en lasmuestras luego del swim-up. Por lo que podemos concluir que el análisis de la fragmentación del DNA espermático después delcapacitado es el que puede realmente detectar el efecto perjudicial producido por el tabaco sobre el espermatozoide. Este efectonocivo altera el proceso de selección del swim-up en los fumadores, sin embargo, las bases moleculares y celulares de estefenómeno no han sido elucidadas, por tanto es recomendable que los hombres que buscan descendencia eviten el consumo detabaco.

Palabras clave: Fragmentación del DNA / Prueba de Dispersión de la Cromatina (SCD) / fertilización in vitro / cigarrillo/ espermatozoide

Abstract: Toxic habits and its relation with male infertility has been a matter of investigation in the recent years and smoking isone of the commonest life-style toxic exposures to harmful substances. Sperm DNA fragmentation has been previously linked toinfertility and low embryo quality in several works. This cross-sectional study was carried out to investigate the associationbetween cigarette smoking and sperm DNA fragmentation in raw and capacitated sperm from infertile males undergoing assistedreproduction treatments (ART).A total number of 99 infertile males provided one semen sample, other causes of DNA fragmentation was discarded by a previousquestionnaire and three groups were established according to the cigarette consumption: non-smokers, light smokers(1-19cigarettes/day) and heavy smokers (≥20 cigarettes/day), then analyses of the sperm DNA fragmentation was carried out by theSperm Chromatin Dispersion (SCD) test before and after swim-up treatment. We could observed no differences in the sperm DNAfragmentation in the raw semen samples regardless the smoking habits; nevertheless there is a significant increase in theincidence of sperm cells with DNA strand breaks in male smokers compare to non smokers after the evaluation of post swim-upsamples. And we concluded that the analysis of sperm DNA fragmentation after capacitation can really detect the detrimentaleffect produced by tobacco. This deleterious effect alters the sperm swim-up selective process in smokers but molecular andcellular basis of this phenomenon remain to be elucidated, but based on these evidences, leaving smoking is advisable in malesattending to reach parenthood.

Key words: DNA fragmentation / sperm chromatin dispersion test (SCD) / In vitro Fertilization / cigarette smoking / sperm

AUMENTO DE LA FRAGMENTACIÓN DEL DNA ESPERMÁTICO ENLOS FUMADORES TRAS LA CAPACITACIÓN MEDIANTE SWIM-UP.

Sperm selection by swim-up in terms of DNA fragmentation as measured by the Sperm Chromatin

Dispersion test (SCD) is altered in heavy smokers.

Thamara Viloria, Nicolás Garrido , José Luis Fernández, José Remohí, Antonio Pellicer, Lourdes Muriel, Marcos Meseguer

IVI Valencia, Universidad de Valencia. Sección de Genética y Unidad de Investigación, Hospital "Teresa Herrera," ComplejoHospitalario Universitario Juan Canalejo, A Coruña, España. Departamento de Obstetricia y Ginecología Hospital Dr. Peset, Valencia,España.

Peticiones de reimpresión: Dr. Thamara Viloria, IVI Valencia - Universidad de Valencia, e-mail: [email protected].


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INTRODUCCIÓN

El término “Infertilidad” se definecomo la incapacidad de una pareja deconseguir un embarazo luego de rela-ciones sexuales regulares no protegi-das. Aproximadamente un 15% de lasparejas con deseo de gestación tienendificultad de concebir tras este perío-do. El factor masculino es por sí soloel causante de esa infertilidad en un20% de los casos y contribuye en otro30-40%, siendo las alteraciones en elsemen el origen de la misma(Rodríguez et al., 2005).

El sistema reproductivo es bastantecomplejo, sin embargo, los diseñosexperimentales de pruebas in vitro ein vivo nos pueden ser útiles para de-tectar algunas alteraciones. Por tanto,la reproducción asistida nos brinda unespacio ideal para estudiar algunosfactores que podrían estar afectandola calidad seminal y sus implicacionesa nivel reproductivo.

A lo largo de los años, muchos hansido los factores relacionados a la in-fertilidad masculina, como: infeccio-nes, varicocele (Pomerol, 2002), obs-trucciones y alteraciones en la pro-ducción espermática (Ballescá,2002), causas genéticas (Egozcue,2002) y muchas veces la causa esdesconocida y pueden afectar en ma-yor o menor medida a la calidad semi-nal. Sin embargo, su relación con loshábitos tóxicos ha sido motivo de in-vestigación en los últimos años, desus resultados se han descrito algunosagentes ambientales tóxicos que pue-den deteriorar la espermatogénesis,ejerciendo efectos nocivos a nivel pre-testicular, testicular o post-testicular(Oliva et al., 2001; Pflieger-Bruss et al.,2004). Uno de estos agentes es el con-sumo del tabaco; el cual está amplia-mente reconocido como un problemade salud pública y una de las mayorescausas de muertes prevenibles.Aproximadamente una tercera parte dela población mundial mayor de 15 añoses fumadora (World HealthOrganization, 1997). Así mismo, el taba-co afecta la salud reproductiva.El cigarrillo contiene algunos cientos

de compuestos (Dube and Green,

dios serios, objetivos y completos querevelen la acción que estos ejercen enel espermatozoide, principalmente enpoblación con deseos de gestación.

Con este fin, hemos aprovechado elconocimiento ganado en los trata-mientos de reproducción asistida(TRA) después de la introducción dediversos análisis como la prueba de laDispersión de la Cromatina (SCD) paraestudiar el efecto del tabaco sobre laintegridad del DNA de los espermato-zoides antes y después del swim-upen parejas que consultan por infertili-dad.

Este estudio introduce nuevos avan-ces respecto a las consecuencias deltabaco en la reproducción humana.

Fragmentación del DNA y tabaco:Se estima que un 25% de las cau-

sas de infertilidad son de origen idio-pático y la etiología de algunas de es-tas causas podría estar relacionadacon daño en el DNA de los esperma-tozoides.

La fragmentación de DNA en el es-permatozoide está siendo cada vezmás reconocida como una importantecausa de infertilidad, y aunque el ori-gen del daño a nivel del DNA no esclaro (Muratori et al., 2000; Sergerieet al., 2005), se han propuesto algu-nos mecanismos como: defectos en lacompactación de la cromatina duran-te la espermiogénesis, inducción de laapoptosis durante el proceso de es-permatogénesis e inducción de dañode DNA en espermatozoides diferen-ciados maduros por espermatozoidesinmaduros que producen niveles ele-vados de radicales libres (ROS)(Garrido et al., 2004).

Una causa potencial de la fragmen-tación de DNA es la exposición a toxi-nas ambientales; sin embargo, pocosdatos apoyan el concepto de un im-pacto negativo extenso de contami-nantes ambientales en los resultadosdel análisis del semen (Sun et al.,1997). Algunas de estas toxinas sepodían relacionar con el consumo detabaco.

1982). El tabaco consiste en su mayo-ría de carbohidratos y proteínas (aprox50%). Otro constituyente significanteson alcaloides (0,5-5%) con la nicoti-na como compuesto predominante(90-95% de los alcaloides totales), po-lifenoles (0,5-4,5%), fitoteroles (0,1-2,5%), ácidos carboxílicos (0,1-0,7%), hidrocarbonos aromáticos, al-dehídos, cetonas, aminas, pesticidas,etc (0,01-5%) y más de 30 compues-tos metálicos (Wynder and Hoffmann,1967; Internacional Agency forResearch on Cancer, 1986).

La nicotina, el principal alcaloide deltabaco, está presente en los cigarrillosen una cantidad que varía desde 0,8-1,8 mg/cigarrillo, dependiendo de lamarca y tamaño del mismo (Benowitzet al., 1983; Rosa et al., 1992). Tantocomo 1mg de nicotina puede ser ab-sorbido al fumar 1 solo cigarrillo. Estees un alcaloide muy tóxico que se ab-sorbe rápidamente por el tracto respi-ratorio, la mucosa bucal y la piel(Gandini et al., 1997).

La cotinina, su mayor metabolito, esun compuesto más estable que la ni-cotina, con un tiempo de vida mediade aproximadamente 20h (la vida me-dia de la nicotina es de unas 2h) y suconcentración no se ve influenciadapor otros factores como por ejemplo ladieta. En el hombre, la nicotina y/o co-tinina ha sido detectada en plasma se-minal de acuerdo al consumo de ciga-rrillos (Pacifi et al., 1993, 1995; Vineet al., 1993; Zenzes et al., 1999), loque indica el paso de estos metaboli-tos a través de la barrera hemato-tes-ticular.

Esto sugiere que ciertos componen-tes del tabaco interactúan, directa oindirectamente, afectando la funcióny viabilidad de los gametos; y el meca-nismo que envuelve este resultadoaún necesita ser elucidado.

El incipiente incremento del interéspúblico respecto al declive del poten-cial fértil masculino, y sobre todo, eldeseo de conocer el efecto que tienenlos componentes medioambientales yocupacionales, y los hábitos de la so-ciedad actual, hacen necesarios estu-

16Thamara Viloria et al. Aumento de la Fragmentacion del DNA...


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La relación entre el cigarrillo y lafragmentación del DNA del esperma-tozoide ha sido establecida por algu-nos autores (Sun et al., 1997;Muratori et al., 2000; Zenzes, 2000).No obstante, Sergerie et al. (2005)han reportado una no asociación enhombres sanos fumadores y no fuma-dores; y Belcheva et al. encontraronque el daño en el DNA de los esper-matozoides de los fumadores estabaincrementado con respecto al de losno fumadores, pero esta diferencia noresultaba estadísticamente significati-va.

Uno de los mecanismos sugeridospodría estar relacionado con la inter-ferencia nicotínica sobre la organiza-ción de la membrana espermática ypor lo tanto en la reacción acrosómica(Arabi, 2004) inducida por ZP3, unaproteína de la zona pelúcida que des-empeña un papel fundamental duran-te la fertilización, funcionando comoun receptor específico para el esper-matozoide (Hinsch et al., 2005).

El propósito en este estudio es in-vestigar la asociación entre el taba-quismo y la fragmentación de DNA delespermatozoide en parejas infértilessometidas a tratamientos de repro-ducción asistida, utilizando el SCD an-tes y después del procedimiento deswim-up como técnica de capacita-ción espermática en hombres fuma-dores y no fumadores.

MATERIALES Y MÉTODOS

Población: La población objeto deestudio son pacientes infértiles queasisten a tratamientos de reproduc-ción asistida en nuestro centro, delcual se seleccionaron aleatoriamentelas muestras de semen de los maridosde parejas que asisten al laboratoriode andrología del IVI para un trata-miento de infertilidad con previo con-sentimiento de los pacientes, ya queson pruebas que no se realizan de ru-tina en el laboratorios. Un total de 99hombres proporcionaron 99 muestrasde semen para ser analizadas. El ran-go de edad fue de 26 a 49 años, conuna media de 36.

Posteriormente, el sobrenadante (0,1-0,5ml) fue separado en otro tubo.Luego, para la determinación de lafragmentación del DNA se tomaronalícuotas (entre 10 y 100µl) con con-centraciones entre 5-10 millones despz/ml de cada muestra de semen an-tes y después del swim-up para serprocesadas como describe Fernándezet al. (2003).

Se establecieron 5 patrones de SCD:a) Células espermáticas de halo gran-de (CHG): su anchura es similar omás grande que el diámetro menordel nucleoide; b) Células espermáti-cas de halo mediano (CHM): su haloestá entre aquellos con halo grande yhalo muy pequeño. Células espermá-ticas sanas (CS): este subgrupo inclu-ye las HG y HM, es decir, aquellas sinfragmentación de DNA; c) Células es-permáticas de halo muy pequeño(CHP): su espesor es similar o máspequeño que la tercera parte (1/3) deldiámetro menor del nucleoide; d)Células espermáticas sin halo (CSH);e) Células espermáticas degradadas(CD): son similares al grupo “d”, peroademás están débilmente o irregular-mente teñidas. Las células espermáti-cas de halo pequeño, sin halo y degra-dadas contienen DNA fragmentado.Finalmente los nucleoides que no co-rresponden a células espermáticasfueron separados del recuento.

Análisis estadístico: Las compara-ciones de la fragmentación del DNAcon respecto a los 3 grupos estudia-dos antes y después del swim-up, serealizaron por la prueba de análisis devarianzas (ANOVA) cuando los datosseguían una distribución normal,mientras que cuando estas seguíanuna distribución anormal se utilizó laprueba de Kruskal-Wallis (prueba noparamétrica). El análisis estadísticofue llevado a cabo usando elStatistical Package for the SocialSciences (SPSS Inc., Chicago, IL,USA). La significancia estadística seha definido como P<0,05.

RESULTADOS

Los resultados de la fragmentacióndel DNA de espermatozoides en las

Se les realizó el test de SCD, sin co-nocer, si eran fumadores o no.Posteriormente a los análisis, se pro-cedió a hacer una encuesta a los pa-cientes acerca de sus hábitos tabáqui-cos en el momento en el cuál fue rea-lizado el ciclo y los 3 meses anterio-res. Se estipularon tres grupos segúnel consumo diario de cigarrillo en losvarones: no fumadores (n= 51), fuma-dores moderados: de 1-19 cigarrillospor día (n= 21) y varones muy fuma-dores: más de 19 cigarrillos por día(n= 27); y se analizaron los datos.

Aquellos pacientes que hubieranconsumido drogas o alcohol en los 3meses previos a la realización del es-tudio, fueron incluidos. También éstosfueron excluidos, si tenían historia re-ciente de fiebre o exposición a gona-dotoxinas como quimioterapia, radio-terapia, pesticidas o exposición ocu-pacional a metales pesados. Además,se investigó acerca de la presencia devaricocele, torsión testicular, etc., parano incluirlos en los mismos.

Fragmentación del DNA espermático.Prueba de Dispersión de la Cromatina(SCD)

El SCD (Halosperm® kit, INDAS la-boratories, España) es una pruebadesarrollada recientemente, descritapor Fernández et al., (2003), basadaen el hecho de que en los espermato-zoides con las cadenas de DNA intac-tas se produce una descompactaciónde los bucles de DNA, empaquetadosen la matriz nuclear, tras haber sidoexpuesto a un tratamiento ácido, se-guido a un tratamiento con agentesreductores y detergentes. Esta des-compactación produce un halo alre-dedor de la matriz nuclear que sepuede visualizar por microscopía decampo claro usando tinciones habi-tuales como el Diff-Quick. Por el con-trario, si una de las cadenas de DNAestá dañada, no se produce halo, ob-servándose núcleos condensados.

Para el análisis de las muestras serealizó el estudio macro y microscópi-co del semen según lo descrito ante-riormente. Todas las muestras fueronprocesadas por swim-up.



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muestras de los pacientes antes deser procesadas por swim-up de acuer-do al número de cigarrillos fumadospor los varones, no revelaron diferen-cias significativas entre los 3 gruposestudiados dependiendo de la canti-dad de cigarrillos por día. Hombres nofumadores, fumadores moderados ymuy fumadores, tuvieron similar pa-trón de distribución entre las diferentescategorías de acuerdo al tamaño delhalo luego de hacer el SCD, es decir,porcentajes de células con CHG, CHM,CS, CHP, CSH y CD (Figura 1a y 2a).

Las Figuras 1b y 2b, muestran los re-sultados de la fragmentación del DNAde espermatozoides en las muestrasluego de ser procesadas por swim-upde acuerdo al número de cigarrillos fu-mados.

Comparaciones entre esos gruposmuestran diferencias significativas enlas CHP. Los porcentajes de CHP en losfumadores moderados se incrementa-ron respecto a aquellos que no fumaban(15,0 IC 95% [6,4-46,0] y 12,2 IC 95%[0,0-32,7]) (Pab=0,020), al igual que enlos hombres muy fumadores compara-do con el grupo de los no fumadores(19,2 IC 95% [0,9-46,0] y 12,2 IC 95%[0,0-32,7]) (Pac=0,013), demostrándo-se así un daño en la calidad del DNAentre fumadores en general (modera-dos y muy fumadores) y no fumadores.Además, los porcentajes de CHG y CSse vieron disminuidos en los dos gruposde hombres fumadores comparadoscon aquellos que no fumaban, aunqueestas diferencias no llegaron a ser signi-

nificativamente luego del swim-upenlos fumadores moderados y muy fuma-dores (Phb=0,001 y Pic<0.001 respec-tivamente) en comparación con aque-llos hombres sin este hábito, lo que in-dica una positiva selección de esper-matozoides con DNA fragmentado lue-go de la capacitación en los hombresfumadores. Particularmente en loshombres muy fumadores este incre-mento fue de más del 100%.

Incluso, en los hombres no fumado-res se observó una gran disminución delas CSH y CD (Pjk=0,007 y Plm=0,006respectivamente), lo cual supone unareducción de espermatozoides conDNA fragmentado luego del swim-upen este grupo, sin embargo esta dis-minución no fue significativa.

Por tanto, estos hallazgos en las alí-cuotas post swim-up sugieren que eltabaco altera selectivamente la habili-dad del proceso de selección espermá-tica en los hombres fumadores.

ficativas.

De igual forma, en los porcentajes deCSH y CD se observó que los daños enel DNA de los espermatozoides de losfumadores moderados estaban incre-mentados, pero las diferencias no re-sultaron estadísticamente significativas.

Posteriores comparaciones múltiplesentre la fragmentación del DNA de lasmuestras de semen antes y despuésdel swim-up de acuerdo al número decigarrillos fumados (comparaciones en-tre figuras 1a con 1b y 2a con 2b res-pectivamente), mostraron que en loshombres muy fumadores hubo una dis-minución significativa (aproximada-mente del 50%: 72,8 IC 95% [23,8-67,3] y 47,3 IC 95% [9,4-97,4]) de lasCHG (Pde=0,020), luego del swim-up.

No se encontraron diferencias signifi-cativas en las CHM entre los grupos an-tes y después de la capacitación.También, en los hombres muy fumado-res se encontró una disminución muymarcada en las CS (que son el total delas células no fragmentadas) luego delswim-up (Pfg<0,001) (78,7 IC 95%[44,4-95,3] y 60,0 IC 95% [15,4-98,7]); adicionalmente, se observó unincremento de este tipo de células es-permáticas (CS) en el grupo de hom-bres muy fumadores luego del procesa-miento por swim-up, pero este no fuesignificativo.

Por otra parte, en el mismo gráfico sepuede observar, desde otro punto devista que, las CHP incrementaron sig-


Figura 1 Resultados de la fragmentación del DNA en muestras de semen antes y después del swim-up de acuerdo a la cantidad de cigarrillos fumados.


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DISCUSIÓN

Aunque muchos trabajos sugierenque existen agentes físicos y químicosen el ambiente, muchos de ellos hansido introducidos y propagados por laactividad humana, pudiendo afectarla fertilidad masculina (Oliva et al.,2001), sin embargo, el impacto delconsumo de tabaco en la fertilidadmasculina resulta un tema controver-tido (Vine et al., 1996).

Los resultados de este estudio sos-tienen que: (i) no hay diferencias enla fragmentación del DNA de los es-permatozoides en las muestras de se-men en fresco a pesar de los hábitos ta-báquicos; y (ii) hay un incremento sig-nificativo en la incidencia de células es-permáticas con las hebras de DNA ro-tas en los hombres fumadores luego deevaluar las muestras procesadas porswim-up.

Primero se realizó la prueba de SCDen las muestras de semen en fresco yel resultado de la fragmentación delDNA en los 3 grupos de hombres es-tudiados, de acuerdo al consumo decigarrillos por día, fue comparable.

Sergerie et al. (2005), describieron la noasociación entre tabaco y fragmenta-ción de DNA espermático en muestrasde semen en fresco de hombres sanos(no infértiles); y Saleh et al. (2002), es-tudiaron esta asociación en hombres in-fértiles y reportaron que las diferenciasentre fumadores y no fumadores no eraestadísticamente significativa.

No obstante, encontraron que lasmuestras de semen de los hombresinfértiles fumadores tenían altos nive-les de estrés oxidativo (OS) que en losno fumadores. Esto fortalece los re-sultados del presente trabajo y refuer-za la hipótesis que el efecto ejercido poralgunos factores perjudiciales, queafectan los gametos masculinos, podrí-an estar encubiertos en el eyaculado,siendo los mismos apreciables solo enla selección de espermatozoides porswim-up.

Se debe recalcar que las muestrasempleadas en cualquier TRA estánpreviamente procesada en el labora-torio con la finalidad de eliminar lascélulas no espermáticas y seleccionar

los mejores espermatozoides (mejormovilidad y morfología), imitando asílos procesos que ocurren en el tractoreproductor femenino en condicionesnaturales. Muratori et al., (2000) des-cribieron que hasta cierto punto lafragmentación del DNA estaba positi-vamente relacionada con una morfo-logía anormal en el espermatozoide yasociada con defectos en la cola;pero encontraron una correlación ne-gativa entre DNA roto y movilidadprogresiva.

Basándonos en trabajos previos,donde se encontró que las tasas defecundación y algunos indicadores decalidad embrionaria estaban relacio-nados con el alcance de la fragmenta-ción del DNA espermático post swim-up (Muriel et al., 2006); éstos en con-junto con los resultados del actual es-tudio, se puede concluir que la víapara determinar la fragmentación delDNA parece evidente que debería serevaluando las alícuotas tras el proce-samiento por swim-up.Con el fin de perfeccionar estos ha-

llazgos, se hicieron comparaciones

Figura 2 Representación del total de células sanas (no fragmentadas) en muestras de semen antes y después del swim-up de acuerdo a la cantidad decigarrillos fumados.



A R T Í C U L O S

múltiples entre los 3 grupos estudia-dos y los resultados antes y despuésdel swim-up; y diferencias significati-vas indican que los hombres fumado-res moderados y muy fumadores pre-sentan un número significativamentemayor de células espermáticas conDNA dañado luego del capacitadoque los no fumadores. Es más, loshombres no fumadores tuvieron unadisminución significativa de célulasespermáticas degradadas (CD) y engeneral menos espermatozoides conDNA deteriorado.

Estudios previos sobre fragmenta-ción del DNA espermático y consu-mo de tabaco, han sido realizadosen semen en fresco (Sergerie et al.,2000; Saleh et al., 2002) o semen ca-pacitado (Sun et al., 1997; Younglai etal., 2001; Belcheva et al., 2004) inde-pendientemente, pero no se ha es-tudiado un diseño como el de estetrabajo donde se han comparado lasmuestras antes y después del capa-citado e introduciendo un factor ex-terno.

Respecto al procesamiento en ellaboratorio, algunos estudios hananalizado la relevancia de la prepa-ración del semen en el porcentajede células con DNA fragmentado.

La técnica de swim-up para el ca-pacitado de espermatozoides móvi-les ha sido estudiada por Younglai etal. (2001), en hombres que asistena una clínica de infertilidad, con elfin de determinar si este procedi-miento puede ocasionar efectos per-judiciales en el DNA espermático; yencontraron que no existían diferen-cias significativas entre la fragmen-tación del DNA en la muestra frescay en la procesada por swim-up y porel método de swim-up directo (sincentrifugar); pero en el mismo, no seestudió ningún factor perjudicial exter-no como por ejemplo el consumo detabacoAl igual que en este estudio, Sun

et al. (1997) describieron un incre-mento en la fragmentación del DNA

espermático entre hombres infértiles(fumadores y no fumadores) luegodel procesamiento por swim-up quepudiera sugerir un posible vínculocon las toxinas ambientales. Otrosestudios llevados a cabo porBelcheva et al. (2004), en donantesnormozoospérmicos antes de la ca-pacitación por Percoll, concluyeronque la fragmentación del DNA en es-permatozoides de donantes sanos(no infértiles) fumadores permanecíadentro del rango normal. Sin embar-go, ellos observaron que el fumar ci-garrillos inducía un deterioro en lamembrana plasmática de las célulasespermáticas.

En conclusión, el análisis de lafragmentación del DNA en las mues-tras de eyaculado (en fresco) ocultael efecto perjudicial real del tabaco,ya que no se han encontrado dife-rencias con respecto al consumo detabaco, que apuntarían a la conclu-sión “errónea” que el mismo no in-fluye en la fragmentación del DNA.

Pero es luego del capacitado, don-de realmente se puede detectar elefecto perjudicial producido por eltabaco. Este efecto deletéreo estáafectando la selección espermáticapor la interferencia en el proceso delswim-up, demostrando que el taba-co, altera selectivamente la capaci-tación del semen por swim-up en loshombres fumadores. Las bases celu-lares y moleculares de este fenóme-no quedan aún por elucidar; pero sepueden plantear algunas posiblesopciones, como: a) que la fragmen-tación del DNA (como proceso conti-nuo) se produzca también luego deleyaculado, estando incrementado enlos pacientes fumadores y subse-cuentemente las células que estánalgo fragmentadas (halo mediano)terminen fragmentándose completa-mente tras la incubación durante 1hora aproximadamente en el procesode capacitado; b) además esta obser-vación luego del capacitado no signifi-ca que este proceso esté aumentandolos espermatozoides fragmentadas en

los fumadores, pero posiblemente siesté seleccionando mejor los esper-matozoides no fragmentados en losno fumadores.

La suma de ambos efectos se tradu-ce en esa diferencia significativa lue-go del swim-up. Basándonos en estasevidencias, es aconsejable que loshombres que son atendidos por infer-tilidad en TRA o que buscan descen-dencia eviten el consumo de tabaco.

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D E B A T E S

La Medicina Reproductiva es unaciencia biomédica, por lo que podemosentenderla como una ciencia médica afavor de la vida.

En la actualidad, cada vez aumentamás el número de niños nacidos gra-cias a la Reproducción asistida, lo cualha abierto un debate moral sobre estosactos. Por ello la bioética (bios -vida- +ética) ha de aplicarse también a estarama de la Medicina. Teniendo encuenta que la bioética es la ciencia queestudia la vida a partir de los principiosuniversales morales, debemos estable-cer criterios y límites entre lo lícito y lo ilí-cito en Reproducción Asistida.

Por Reproducción Asistida entende-mos todo proceso técnico científico en elque el uso de la ciencia y la tecnologíapermiten la reproducción de los seres vi-vos de forma artificial. De esta manera,el hombre interviene en procesos quedeberían ser naturales.

La intervención del hombre se ha des-arrollado en técnicas que implican la re-producción posterior intracorpórea (in-seminación artificial), en aquellas queimplican la reproducción asistida in vitroo extracorpórea y posterior transferenciadel embrión al útero de la mujer(Fecundación In Vitro / ICSI), y reciente-mente la clonación con fines reproducti-vos o terapéuticos. Fuera de la concep-ción de la Reproducción Asistida, dejaríaa la subrogación uterina.

En cualquiera de sus acepciones, laReproducción Asistida puede ser ho-móloga o heteróloga, en función de silos gametos son aportados por los

ciencias médicas en favor de la vida.

Desde un punto de vista no procrea-tivo, la unión de los gametos de formaartificial desvirtúa la naturaleza del actoconyugal en su totalidad.

Es por ello que la clonación terapéu-tica se desvincula de la propia natura-leza para la que fueron diseñados losgametos. Ahora bien, toda medidacientífica terapéutica, es decir, quepueda remediar algún malestar huma-no, debería ser aplicada siempre quesea posible. Esto mismo lo podríamosaplicar a la técnica de DiagnósticoGenético Preimplantacional en combi-nación con la determinación de los an-tígenos de histocompatibilidad de losembriones in vitro, empleada comoayuda para salvar la vida de un familiarenfermo.

El uso de células madre embrionariaspara la posible curación de enfermeda-des humanas, hace que debamos veral embrión como una realidad biológicacarente de dignidad humana ya que noes vida humana propiamente. Ahorabien, esto no quita que no debamos derespetar la visión proteccionista del em-brión que defienden varios países decentro-Europa, donde está prohibida laclonación de cualquier tipo.

No debemos tampoco olvidarnos delpotencial terapéutico de las células ma-dre no embrionarias.

miembros de la pareja o la mujer solterao con compañera del mismo sexo, obien, por donantes anónimos/as o cono-cidos/as. Para la preparación, puesta encontacto y análisis genético de los game-tos, zigotos y embriones, se utilizanmúltiples técnicas. Los actos desarro-llados por el equipo biomédico con elconsentimiento expreso de los usua-rios/as, para el desarrollo de las mis-mas, serán actos cuya moralidad debesalvaguardar los principios y funda-mentos de la persona.

La Reproducción Asistida desvirtúa lanaturaleza del acto conyugal, enten-diendo el mismo como el acto sexualpor un lado y el carácter procreativo porotro. El hecho de que este último se lo-gre eliminando el otro, no debe ser mo-ralmente ilícito. Ahora bien, en el casode la maternidad de sustitución, lasobligaciones del amor materno, la fide-lidad conyugal y de la maternidad res-ponsable, son “puenteadas” sin preo-cuparnos de si la dignidad y el derechodel hijo a ser concebido y traído almundo son ofendidos. Este tipo de ma-ternidad es privada de toda carga afec-tiva que se establece durante el emba-razo entre el vientre de la futura madrey el niño, pero que si se da en la madrede alquiler y a la cual posteriormente sele priva de la afectividad establecida.No podemos olvidar tampoco las impli-caciones económicas de la “profesión”de las madres de alquiler.

La ética y la moral no deben estar pele-adas con la ciencia y la técnica, en todocaso, reconocerse entre ellas como unamanera loable de mejorar las condicio-nes de las personas que optan por las

INTRODUCCIÓN A DEBATE

LA ÉTICA EN LA MEDICINA REPRODUCTIVAErnesto Veiga INRA (Instituto de Reproducción Asistida de Galicia), Santiago de Compostela

En esta ocasión queremos comenzar agradeciendo la alta participación de nuestros socios/as en este Debate tan apasionantesobre "La ética en los tratamientos de Reproducción Asistida". Esperamos que en los siguientes números todos os vayáis animando a colaborar.

Para el próximo número el tema planteado es: "¿Estamos realizando ciclos de ICSI y de DGP más allá de sus indicacionescontrastadas?" Os recordamos que esta sección de la revista está abierta a todos y que de todos depende que sea una herramientaactual e interesante. ¡Desde la vocalía de publicaciones os invitamos a participar!



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EL CHARLATÁN EN LA CIENCIA Y LOS MEDIOS DE COMUNICACIÓNRafael Bernabeu, Jorge TenInstituto Bernabeu, Alicante

No es la finalidad del auténtico cien-tífico ser motivo de atención de los me-dios de comunicación. Es su trabajopaciente y silencioso el que llama laatención de los medios cuando las apli-caciones del mismo resultan en unavance provechoso para la humanidad.

No obstante, hay ciertas áreas de laMedicina que despiertan gran interésen los medios de comunicación por lasrepercusiones que tienen en la socie-dad. Uno de esos campos “estrella” esla Medicina de la Reproducción. Hoy oí-mos por la calle palabras como embrio-nes, células madres y clonación, queeran patrimonio del especialista, y queahora suscitan en todos un enorme in-terés que justifica la difusión de estostemas por parte de los medios de co-municación.

Sin embargo, este interés da lugar aintoxicaciones informativas. En efecto,en estos últimos tiempos hemos asisti-do a comunicados de logros espectacu-lares: clonación de seres humanos, ob-tención de células reproductivas de for-ma casi automática a partir de otras cé-lulas del organismo, etc. En resumen,vanas palabrerías que no son más querotundas mentiras.

Por lo general, las sociedades cientí-ficas son reacias a manifiestos públicosy, por ello, recientemente se pudo asis-tir a un hecho inusual. La Royal Societyde Medicina de Inglaterra emitió en elaño 2004 un comunicado en el que semostraba rotundamente en contra detales maniobras informativas.Preocupados por la manipulación quedesde los medios de comunicación seestaba haciendo, pedía que se distin-guiera entre buena y mala tecnología ysolicitaba a los medios que no dierancobertura a pseudocientíficos que sólobuscaban captar el interés informativoy no dudaban en dar noticias rimbom-bantes, falsas y no comprobadas contal de obtener notoriedad. Sujetos quehablan de brillantes experimentos que

rectilíneo. Verdades aceptadas, se venpuestas en entredicho y a menudoabandonadas por evidencias contrariasde mayor peso. Y esos necesarios vai-venes en la ciencia son fructíferos, enellos se fundamenta el conocimientohumano. No hay axiomas, sino pruebasque consideradas objetivamente arro-jen luz sobre los problemas. Por eso, noes de extrañar que recientemente leyé-ramos que los autores de una promete-dora teoría sobre el tratamiento delSIDA, difundida hace aproximadamen-te 3 años, reconocieran después suerror. Este tipo de rectificaciones es sa-ludable y se reciben con satisfacciónpor el hombre de ciencia responsable.

Por ello, aún resulta más insultante laarrogancia necia de quien sin siquieratener resultados preliminares compro-bables, afirma haber logrado éxitos es-pectaculares. ¿Cuántos tratamientosmilagrosos sobre el cáncer, sobre elSIDA, sobre la esterilidad, se han llega-do a anunciar? Tales afirmaciones sonperversas, pues llevan al enfermo y asus familiares a manos de desaprensi-vos, fracturando la confianza de la so-ciedad en sus científicos y en quieneshonestamente se dedican al quehacermédico. Tristemente, una titulación uni-versitaria o una bata blanca, no garan-tiza la honestidad de quien la ostenta.

La Medicina Reproductiva, en cuan-to formidable generadora de expecta-ción y esperanzas, es campo abonadopara estas prácticas de charlatanería yruindad.Sería, pues, deseable que exis-tiera una fluida comunicación entremedios y ciencia, para que se divul-guen los avances biomédicos de mane-ra veraz. Sólo así, se dignificaría tantola prensa como la ciencia. La sociedad,destinataria final de ambas actividadestendría algo menos de lo que preocu-parse, lo que dado los tiempos que co-rren no es poco.

los han conducido a milagrosos resul-tados, a avances espectaculares, y quecuando se les piden pruebas de lo queafirman, resulta que nada los respalda,porque todo lo que afirman es una far-sa.

Así, ante el anuncio de una nuevaclonación en humanos, el presidentede la Royal Society, nos recuerda quela clonación en primates es mucho máscompleja que en otras especies y queen absoluto se tiene la certeza que seaviable en humanos.

Asimismo un grupo de investigado-res británicos, también ha enviado unacarta de apelación a los editores de me-dios de comunicación para que denmenos publicidad a experimentos deesta índole y que “cualquier declara-ción futura sea tratada con escepticis-mo hasta que se presenten evidenciasconvincentes” y se haya comprobado laverdad de la afirmación.

Duele ver como la idiotez del que seotorga un falso descubrimiento innova-dor, causa dolor y engaño en quienesnecesitan tratar la incapacidad para te-ner un hijo.

Duele tener que desesperanzarlos,sencillamente porque han creído en lasafirmaciones de quienes bajo la cober-tura informativa, buscan fines inconfe-sables: notoriedad, dinero,... alejadosdel buen quehacer médico. En ocasio-nes es difícil sacarlos del error a quehan sido conducidos, sin que se violen-ten.

Duele ver como estos enfermizos per-sonajillos, que apenas poseen un finobarniz de conocimientos, ensucian eldigno trabajo de tantos y tantos discre-tamente empeñados en la lucha por co-nocer, haciendo caer a la figura delhombre de ciencia a la altura de losfantoches que aparecen en programasbasura de TV.

El camino del saber científico no es

26Rafael Bernabeu, Jorge Ten. El Charlatán en la Ciencia y los....


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ÉTICA Y TÉCNICAS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDACristina Camprubí, Joan Blanco.Unitat de Biologia Cel·lular. Facultat de Biociències. Universitat Autònoma de Barcelona

ÉTICA PROFESIONAL DEL EMBRIÓLOGO CLÍNICO EN LOS PROGRAMAS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDAMª Carmen Gonzalvo, Ana Clavero, Antonio Garrido, María Sánchez, Sonia Calderón, Ana Sánchez, Ana Gallego, Marta Pérez, José Antonio Castilla.

U. Reproducción, HU Virgen de las Nieves, Granada.

En el diccionario de la Real AcademiaEspañola se define la ética como la partede la filosofía que trata de la moral y delas obligaciones del hombre. Moral pre-senta más acepciones, quizás la quemás nos interesa es la que sigue:Ciencia que trata del bien en general, yde las acciones humanas en orden a subondad o malicia.

La bondad y la malicia, el bien y elmal son palabras contundentes, subje-tivas al individuo, a la sociedad, al tiem-po; palabras mutantes. Las técnicas dereproducción asistida (TRAs) se enmar-can dentro de las acciones humanas.Partimos de la creencia de la bondad delas TRAs que fueron creadas para solu-

cionar problemas de infertilidad y actual-mente, útiles en la prevención y trata-miento de enfermedades de origen gené-tico, siendo conscientes que no es unacreencia compartida por algunos secto-res de la sociedad.

Esa inclinación a hacer el bien puedetener diferentes interpretaciones, entreotras implica garantizar la seguridad deprogenitores y descendencia. Para al-canzar este objetivo se deben cumplirdos premisas: la participación de profe-sionales cualificados y la investigación.

La investigación implica conocimientoy éste es la única herramienta que nospermite realizar un juicio objetivo. La Ley

enjuicia lo que está bien y lo que está maldentro de una coyuntura social. La Ley in-tenta reflejar la percepción del bien y elmal de una sociedad y por tanto reflejauna ética social limitando en algunas oca-siones la ética individual del paciente y ladel profesional.

Al final debemos plantearnos si cree-mos en una ética social o en una ética in-dividual. Nosotros creemos en la autorre-gulación considerando que lo aceptable oinaceptable forma parte de las creenciasy valores personales, a pesar que pue-de conllevar situaciones difícilmenteaceptables por el conjunto de la socie-dad.

Por Ética se entiende aquella “cienciaque estudia la bondad o maldad de losactos humanos” y por profesión "la activi-dad personal, puesta de una manera es-table y honrada al servicio de los demás yen beneficio propio, a impulsos de la pro-pia vocación y con la dignidad que co-rresponde a la persona humana".

El embriólogo clínico ocupa una posi-ción que le confiere deberes y derechosespeciales, que emanan de las definicio-nes anteriores. Así, y dado que dentrode la finalidad de su profesión se en-cuentra el bien común, la capacitaciónque se requiere para ejercer este traba-jo, está siempre orientada a un mejorrendimiento dentro de las actividadesespecializadas para el beneficio de la so-ciedad. Sin este horizonte y finalidad,nuestra profesión se convertiría en unmedio de lucro o de honor, o simple-mente, en el instrumento de la degrada-ción moral del propio sujeto.Un embriólogo debe tener una pre-

paración especial en triple sentido: ca-pacidad intelectual, capacidad moral ycapacidad física. La capacidad intelec-tual consiste en el conjunto de conoci-mientos que dentro de su profesión, lohacen apto para desarrollar trabajos es-pecializados. Estos conocimientos seadquieren básicamente durante la li-cenciatura y posterior especialización,pero se deben actualizar mediante unaadecuada formación continuada.Dentro de estos conocimientos habla-mos no solo de científicos y técnicos,sino también en materia de seguridadbiológica y laboral. Aunque la gestión yorganización de la salud y seguridad enel medio laboral recae fundamental-mente en el empresario, el éxito en laimplantación de cualquier acción eneste sentido precisa de la intervenciónde los trabajadores, en este caso delembriólogo. La capacidad moral es elvalor del profesional como persona, locual dota de dignidad, seriedad y no-bleza a su trabajo, digna del aprecio de

todo el que encuentra. Abarca no sólola honestidad en el trato, si no tambiénen el sentido de responsabilidad en elcumplimiento de lo pactado. Y por últi-mo, la capacidad física se refiere prin-cipalmente a la salud y a las cualidadescorpóreas, que siempre es necesariocultivar, como buenos instrumentos dela actividad humana.

Otras obligaciones profesionales serí-an: de información, obteniendo el con-sentimiento informado (CI) y emitiendoinformes y certificados; y de confiden-cialidad, acreditando una correcta ca-dena de custodia. En cuanto a la obli-gación de resultados que se consideraen otros niveles de la asistencia sanita-ria (cirugía estética) hay que aclararque cada día se contempla con másfrecuencia esta obligación de resultadosobre todo en aquellas actividades pro-fesionales en las que el deber de dili-gencia exigible es superior en razón de



D E B A T E S

la especialidad médica que se realiza,como puede ser el caso de técnicasdiagnósticas (por ejemplo: análisis desemen) de cuyo resultado e interpreta-ción posterior pueden derivarse impor-tantes repercusiones diagnósticas y te-rapéuticas.

Por otra parte, otra finalidad del ejer-cicio profesional es el beneficio propio.En muchos tratados de ética profesio-nal no se insiste en este beneficio por-que en general todo el mundo se de-canta por naturaleza a la consideraciónde su provecho personal. Pero en el caso del embriólogo clíni-

co no está de mas recordar el sacrificioque entraña nuestra profesión, debidoa los horarios en festivos y fines de se-mana, o la alta responsabilidad que seadquieren en la técnicas de reproduc-ción asistida. Nuestra profesión tam-bién gracias a esos mismos trabajos,deja, al final de cuentas, una de las sa-tisfacciones más profundas.

Por último, creemos que cualquierprofesional debe ser solidario, propi-ciando la asociación de los miembrosde su especialidad. La solidaridad esuno de los medios más eficaces paraincrementar la calidad del nivel intelec-

tual y moral de los asociados.

El embriólogo debe actuar según lamoral establecida, por lo que debe evi-tar defender causas injustas, usar susconocimientos como instrumento decrimen y del vicio, producir artículos odar servicios de mala calidad, propor-cionar informes falsos, etc.

Un embriólogo que actúe según locomentado anteriormente generaráconfianza y prestigio, que a su vez se-rán estímulos que lo impulsarán en elrecto ejercicio de su profesión.

BIOÉTICA Y REPRODUCCIÓN ASISTIDA HUMANACarmen Ochoa.Clínica Euskalduna, Bilbao

Resulta difícil hablar de ética, máxi-me cuando no hemos recibido en nues-tras formaciones universitarias ningunadocencia sobre como estructuramoslos juicios éticos.

En ocasiones, durante algunas con-versaciones, he escuchado que no esnecesario formarse en estos conceptos,dado que el sentido común y la honra-dez profesional son suficientes para re-solver de manera exitosa la gran mayo-ría de las dudas éticas que se nos pue-dan plantear en nuestro quehacer dia-rio. La verdad es que discrepo, cuandomenos parcialmente de esta idea, por-que entiendo que no es suficiente. Enprimer lugar, el sentido común no estan común entre los humanos, si nosreferimos a su frecuencia de aparición.Y en segundo lugar, la honradez profe-sional no es un concepto ni universal nihomogéneo para todas las personas, ypor supuesto tampoco para nosotros,profesionales de la ReproducciónHumana. No es universal, porque pordesgracia no todo el mundo es honra-do y no es homogéneo, porque, deter-minados comportamientos se van per-mitiendo con el paso del tiempo, enfunción de su frecuencia de uso.

Aunque, es cierto que, cuando alguientiene sentido común y honradez, tienemucho camino ganado.

Los acontecimientos científicos de losúltimos años nos obligan a tener queposicionarnos ante situaciones queademás de responder a fundamentosjurídicos, deben hacerlo a fundamen-tos éticos.

Es fácil pensar que aquello que nosatañe directamente a nosotros debe-mos resolverlo sólo nosotros. Pero esto,produce inevitablemente una respuestasesgada de dicha situación. Es fácilpensar que el límite ante la permisividado no de un procedimiento está dentro delos articulados de las normas legales.No existen normas éticas escritas amodo de leyes de obligado cumpli-miento: eso sería fácil de cumplir...ó deincumplir.

Necesitamos aprender cómo se es-tructura el razonamiento ético y cómodeliberar sobre lo que se debe y no sedebe hacer, argumentando, escuchan-do, incorporando otros puntos de vista.Necesitamos saber qué partes debenestar razonablemente implicadas.

Necesitamos saber qué y a quién pode-mos preguntar.

Hacemos juicios éticos cotidiana-mente y decidimos actuar según ellos:qué está bien, qué está mal, qué es lobueno para mi, qué es lo correcto eneste caso, qué dice la ley al respecto,cómo actúan mis colegas, etc. Sin em-bargo, nos resultaría muy difícil expo-ner en qué fundamentamos nuestrasdecisiones y qué método utilizamos parallegar a ellas. Esto es el trasunto de la ac-tual bioética: ¡de esto va!

Nuestra sociedad avanza científica ytecnológicamente a gran velocidad.Mientras no se nos generen nuevosproblemas nuestro hábito de tomar de-cisiones continuamente, junto a lasnormas jurídicas y a nuestra experien-cia acumulada son herramientas sufi-cientes. Pero cuando en este continuodevenir de conocimientos y técnicas segeneran nuevos problemas morales -¿qué debemos hacer? ¿qué es lo bue-no? ¿qué es lo correcto?- ¿no debería-mos estar mejor preparados para afron-tar nuestras responsabilidades? Cadavez será mas frecuente acudir a losComités de Ética y será más frecuente



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30Carmen Ochoa. Bioética y Reproducción..

participar en ellos, pero su existenciano supondrá una exención en nuestraresponsabilidad formativa, sino todo locontrario, nos exigirá un mayor grado deconocimientos sobre la ética en el com-portamiento humano.

En palabras de la Dra. MabelMarijuan, profesora de bioética de launiversidad del País Vasco (UPV), rela-cionando el Derecho con la bioética enla Reproducción Asistida, me comenta-ba que el derecho, en una sociedad de-mocrática, nace de la ética intersubjeti-va. De aquello que como ciudadanoshemos decidido convertir en ley, con laintención de dejar bajo el amparo delestado de derecho a todos. Surgiendoasí los derechos y deberes.

Transformándose en generalización so-cial lo que consideramos aceptable yen prohibición lo que consideramos in-aceptable.

En el caso de la ReproducciónAsistida este mismo razonamiento aveces se basa mas en “temores impre-cisos” que en pruebas ó razonamien-tos, de ahí la necesidad de que los pro-fesionales nos involucremos con la in-tención de disipar temores, argumen-tando beneficios para las personas sinocultar nunca los riesgos.

Cuando aparece una nueva posibili-dad técnica y hay candidatos a optarpor ella, debemos pensar, deliberar lasconsecuencias para toda la sociedad y

si esto genera posibilidades de vidasmás plenas o por el contrario generaránuevas esclavitudes. Cuando, dentrode las inevitables incertidumbres hu-manas, se pueda argumentar.

El paso siguiente será, sin duda, con-vertirlo en norma... hasta la próximavuelta de tuerca de la tecnología, en laque todo volvería a empezar.

Lo que nos obliga a los profesionalesde la Reproducción Asistida a aprenderde las conclusiones de la deliberaciónética, no sólo para hacer bien nuestrotrabajo, sino para mejorar la vida de losciudadanos, desde el lugar que nos ocu-pa.

La ética es la parte de la filosofíaque trata de la moral y de las obliga-ciones del hombre: sería la reflexiónsobre las razones que convierten enválidos los comportamientos. Cuandohablamos de Técnicas deReproducción Asistida (TRAs) la pala-bra ética alcanza su máximo nivel deambigüedad ya que una determinadatécnica o decisión puede resultarnosmoralmente aceptable dependiendode nuestro contexto social y cultural.

1. El primer problema ético se pre-senta en la propia materia prima delas TRAs: el embrión, o siendo cientí-ficamente correctos, el preembrión.Es bien conocida la postura de ciertossectores de la sociedad que defiendenel respeto a la vida humana desde elmomento de la fecundación, tratandoal embrión como persona y conce-diéndole los mismos derechos que acualquier otra. Sin embargo, la comu-nidad científica tiende a primar los he-chos biológicos que ven al embrióncomo un proceso de desarrollo conti-nuo sobre el que debe establecerseuna protección progresiva y que úni-camente tiene sentido dentro de un

proyecto reproductivo pero ¿resultaética esta postura de protección gra-dual del embrión? En un principio,creo que nos serviría de gran ayudaestablecer unas pautas sobre quéconsideramos: vida humana, ser hu-mano y persona humana para de estemodo, poder dotar al embrión de unosderechos adaptados a su estatus quecomo he comentado, irían aumentan-do de forma progresiva con respectosu propio desarrollo.

La vida humana comenzaría en elmismo momento en que se produce lafecundación, con el cigoto, el embriónpreimplantacional esta formado porun agregado de células vivas, célulashumanas que deberían gozar de unestatus de mayor significación que laque pueda tener la sangre o cualquierotro órgano o tejido humano aislado.

El ser humano aparecería cuando elaglomerado de células inicia la expre-sión de factores de diferenciación ce-lular (día 14 post-fecundación), des-encadenando la formación de la noto-corda que será el inicio del sistemanervioso del embrión, es a partir de

este momento cuando el preembriónpasa a denominarse embrión, convir-tiéndose en una pequeña persona enpotencia.

Con respecto a qué consideramospersona humana, se pueden estable-cer dos niveles: persona física, quecorrespondería al momento en el queel embrión comienza a adquirir formahumana (denominándose feto) y per-sona social, que aparecería tras el na-cimiento, cuando el bebé comienza ainteraccionar con la sociedad y vice-versa. De hecho, el artículo 30 delCódigo Civil español dice que para losefectos civiles, sólo se reputará naci-do (persona) el feto que tuviere figurahumana y viviere 24 horas enteramen-te desprendido del seno materno.

2. El segundo problema ético radicaen los fracasos de fecundación y/ oimplantación embrionaria.

Se nos podría plantear la duda so-bre la moralidad de generar vida hu-mana sabiendo que existe cierto por-centaje de extinción de la misma,aunque indudablemente podríamos

ÉTICA EN EL LABORATORIO DE REPRODUCCIÓN ASISTIDACarolina Roméu Reproducción Asistida Quirón Zaragoza.



D E B A T E S

alegar que lo que pretenden las TRAes justamente lo contrario, de lo quetrata es de apostar por la vida y los fra-casos tanto en fecundación como enla posterior implantación del embriónson resultados no deseados.

3. La tercera cuestión ética podríapresentarse en el momento de selec-cionar los embriones a transferir ¿porqué elegimos unos y no otros? ¿esta-mos discriminando ilógicamente pre-embriones que darían lugar a futurosbebes? En absoluto, la finalidad de laselección embrionaria se fundamentaen lograr transferir aquellos embrionesóptimos para su implantación y poste-rior desarrollo en el vientre materno,no es una selección indiscriminadasino dirigida a potenciar las probabili-dades de embarazo.

4. Y con respecto a los embrionessobrantes ¿qué hacemos con ellos?¿qué es lo más correcto? ¿qué es éti-co? Actualmente las opciones son va-rias: mantenerlos crioconservadospara el uso de la propios cónyuges,donarlos a otras parejas, derivarlos ainvestigación o simplemente des-echarlos. La decisión debe ser toma-da única y exclusivamente por la pa-reja que se somete al proceso repro-ductivo aunque, sin lugar a dudas, eli-minar los embriones sobrantes seríauna gran equivocación. Donarlos aotras parejas es una posible soluciónbasada en la propia finalidad de las

TRA, la procreación humana. Por otrolado, nos podrían achacar que la crio-conservación afecta a la dignidad delpreembrión al quedar este en un es-tado de sometimiento, frenando sudesarrollo vital. Sin embargo, dichaafirmación sería totalmente erróneapuesto que lo que se pretende con elalmacenaje no es detener su desarro-llo sino lograr el futuro embarazo de lapareja mediante el uso de dichos em-briones crioconservados. La donaciónde los embriones sobrantes para in-vestigación es un tema que ha gene-rado y genera mucha polémica, hastahace poco sólo se permitía la caracte-rización genética de los embrionescon finalidad terapéutica y/ o preven-tiva mediante diagnósticos pre-im-plantacionales (DGPs).

5. Otra duda ética muy de moda ac-tualmente es la investigación y experi-mentación con células madres em-brionarias, procedentes de la ICM delblastocisto, investigación que se pre-senta como una de las grandesapuestas del futuro; las células pluri-potentes del tejido preembrionariopueden utilizarse para producir líneascelulares cuya finalidad es la regene-ración de tejidos o, hipotéticamente,órganos para transplantes. ¿Es estaexperimentación lícita? ¿sería ético ge-nerar embriones cuya finalidad fuerala investigación? La reciente Ley deReproducción Asistida, Ley 14/2006,contempla la posibilidad de destinar

embriones sobrantes de un ciclo deTRA a investigación con células ma-dre, siempre y cuando se cuente conel consentimiento de la pareja y estaconozca el tipo de experimentación ala que se van a ser destinados sus em-briones. Por lo tanto, si la pareja estáde acuerdo y vamos a tener la oportu-nidad de utilizar un material altamen-te preciado que de lo contrario se limi-taría a permanecer de por vida en untanque de nitrógeno por qué no aden-trarnos en un campo apasionante quepuede aportar grandes beneficios a lahumanidad.

Un gran maestro me brindó un díala frase perfecta, escueta pero llenade contenido: Hay que creer en el fu-turo (2). En efecto, la Ciencia no esnociva, lo será el mal uso que haga-mos de ella, no debemos temerla eimpedir su avance sino someterla a undebate constante, a un control legisla-tivo y a una concienciación ciudadanaadecuada.

(1) Código Civil español, Del nacimiento y la extinción de la personalidad civil, Cap.1º, artículo 30

(2) Entrevista al Dr. Egozcue, Mayo 2004

ÉTICA Y MORAL EN REPRODUCCIÓN ASISTIDAMiguel Ruiz

CREA (Centro Médico de Reproducción Asistida), Valencia

Según el diccionario, la ética se de-fine como aquella parte de la filosofíaque se ocupa de la moral, de las obli-gaciones y de las normas que rigen laconducta humana, de lo que está bienhacer y de lo que no. Dentro de la éti-ca, la bioética surge como aquella dis-ciplina que se ocupa de la aplicaciónde la ética a los temas de la vida, delos problemas morales relacionados

con los avances en el campo de la bio-logía, de la genética, de la tecnología.

Las nuevas leyes de ReproducciónAsistida y de Investigación Biomédica,así como la creación del Comité deBioética de España, ofrecerán sinduda la posibilidad de avanzar en eltratamiento de muchas enfermeda-des, pero la autorización de la clona-

ción terapéutica, la utilización de em-briones humanos con fines no repro-ductivos y la selección genética deembriones con fines terapéuticos paraterceros, abren sin duda un debatemoral en nuestra sociedad.

Nosotros, que somos profesionalesde este campo de la medicina, somossimples clínicos y por tanto nuestra


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32Miguel Ruiz. Ética y Moral en Reproducción...

misión es hacer aquello que conside-remos más adecuado para intentardar solución a una enfermedad. Perosinceramente pienso que, aun no sien-do filósofos, teólogos, moralistas ni polí-ticos, no debemos cerrar los ojos e ig-norar este debate moral.

Deberíamos tener la certeza de quelos avances científicos vienen acom-pañados de un fundamento moral,aunque sólo sea por nuestra propiatranquilidad a la hora de aplicarlos. Enpocas ocasiones se valora el progresocomo el éxito de algo ético y moral. Lohabitual es valorarlo solo como un lo-gro tecnológico. En los últimos añoshemos progresado muchísimo desdeel punto de vista tecnológico, pero¿también desde el punto de vista mo-ral? Uno de los fundamentos de la éti-ca médica es el de primum non noce-re y la duda moral ante estos trata-mientos es si estamos sacrificando aun ser humano con el fin de salvar aotro.

Si este fuera el caso, desde luego elfin no justificaría los medios.¿Debemosconsiderar al preembrión como un serhumano? La única forma de respondera este dilema sería conocer exacta-mente el momento en que empiezaesa vida y quizá el momento en que el

embrión adquiere su alma.

¿En el momento en que se fecunda? ¿En el momento en que se divide? ¿En el momento en que se diferencia? ¿En el momento en que se implanta? ¿En el momento en que se forma el encéfalo?

Santo Tomás de Aquino afirmaba,en el 1.200, que no somos seres hu-manos hasta el octavo mes de emba-razo. En el siglo XVII, Thomas Willis,médico inglés profundamente católi-co, afirmo por primera vez que la ima-ginación, las emociones, la memoria,los sentimientos… lo que nos diferen-cia de los animales, no están ubicadosen el corazón, sino en el cerebro y es-tas afirmaciones parecen ser ahoraconfirmadas por la neurología graciasa la tecnología actual.

Algunos defienden que el preem-brión no tiene alma. Que el alma sóloexiste si existe el pensamiento y quela sede del pensamiento es el cerebro,y que el cerebro, comienza a desarro-llarse dos semanas después de la im-plantación en el útero materno y quepor tanto, antes, “el embrión está des-almado”.

Para nosotros, simples clínicos, co-nocer este hecho (en qué momentodebemos considerar al embrión ya unser un humano y no un simple grupode células) debería ser definitivo, por-que diferenciaría de forma tajante en-tre el hecho de llevar a cabo un trata-miento absolutamente ético o por elcontrario, poder tener la sensación deestar sacrificando a un ser humanocon el fin de salvar a otro.

Hasta que tengamos este conoci-miento, que solo alcanzaremos cuan-do se desarrolle y perfeccione el“Almímetro Embrionario” (un sistemade lentes especial que se acopla almicroscopio invertido y que emite unaseñal en el momento en que el pre-embrión adquiere el alma, si es queen algún momento la adquiere), metemo que tendremos que conformar-nos con seguir siendo simples clíni-cos, convencidos de que estamos ha-ciendo un bien para evitar una enfer-medad y de que cualquiera de nos-otros hubiera estado encantado dehaber sido creado para poder salvarla vida a nuestro hermano, e ignorar,no el debate moral, pero sí a quienesnos critican diciendo que nos cree-mos dioses.

EL DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL A DEBATE Esther VelillaCentro de Medicina Embrionaria, Madrid

Las técnicas de Diagnóstico GenéticoPreimplantacional (DGP) de recienteextensión y aplicación en los centros dereproducción asistida no carecen decontroversia. Aparecen palabras como‘producción’ y ‘selección’, ya que impli-can la ‘producción’ de un número ma-yor de embriones y la ‘selección’ deaquellos que estén exentos de una en-fermedad hereditaria o síndrome cro-mosómico. Hay una serie de preguntasque están en debate en muchos secto-res de la sociedad ¿Qué es un embrióny que derechos tiene? Para los que nosdedicamos a la reproducción asistida

parece fácil contestar a esta serie depreguntas, consideramos básicamenteque un embrión no tiene ente propio,no debe tratarse como ‘persona’ y portanto no tiene los derechos legales deésta.

Ahora bien para ciertos colectivos noes así, y el mero hecho de descartar unembrión preimplantacional por ser por-tador de alguna enfermedad heredita-ria o síndrome cromosómico se consi-dera equivalente a un aborto electivo.Está claro que los embriones que sedescartan en su mayoría no terminarán

su desarrollo fetal y los que nacen pre-sentan una vida media muy corta.

Existen tres actuaciones a debate: laselección de embriones histocompati-bles con un hijo enfermo, la selecciónde embriones no portadores de algunaenfermedad hereditaria de aparicióntardía y el sexado.

La selección de embriones histocom-patibles con un hijo enfermo, técnicaactualmente permitida con la nueva leyde reproducción asistida, implica laproducción de un número elevado de


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embriones ya que se requiere una do-ble selección: por una parte aquellosembriones libres de la enfermedad ge-nética de la cual son portadores losprogenitores y por otra parte aquellosque presenten los mismos antígenos dehistocompatibilidad del hijo enfermo.

En este caso estamos hablando deque un determinado número de em-briones libres de la enfermedad genéti-ca, o sea sanos, serán descartados porel simple hecho de no presentar los an-tígenos de histocompatibilidad del her-mano. Aquí pues se entra en la polémi-ca de la selección negativa de embrio-nes sanos. Por otro lado, los sectoresmás puristas critican que la creación deun ser vivo debe darse por la voluntadde los padres a tener un hijo y no porla necesidad de curar a uno ya existen-te. La mayoría de parejas en esta situa-ción así lo alegan pero esta voluntad deotro hijo ¿es una voluntad real o bien esvoluntad indirecta por la necesidad decurar al hijo enfermo?, ¿como se puedediscernir entre una y otra? A mi pareceres prácticamente imposible ya que lasituación real que viven estas parejasimpide poder racionalizar y separar es-tos dos conceptos.

¿Podemos dar la responsabilidad deuna vida a un niño? La práctica habitualen un centro de reproducción asistidaque se enfrenta a un posible caso deDGP es ofrecer un servicio de soportepsicológico el cual debe certificar laidoneidad de la pareja y ofrecer unbuen consejo genético en el cual se in-forme de las opciones alternativas queésta presenta, del estado actual de laley de reproducción asistida y de lasopciones reales de éxito. La realidad esbastante dura, las perspectivas de éxitoson bajas, 3 de cada 4 embriones se-rán sanos o 1 de cada 2 embriones se-rán libres de la enfermedad (en el me-jor y en el peor de los casos) y 3 de 16serán histocompatibles así que se esti-ma que se requieren 20 embrionespara tener 1-2 embriones para transfe-rir.

Esto sin tener en cuenta que nos en-contramos en la mayoría de ocasionescon que la mujer presenta una edadavanzada, reproductivamente hablan-do, con lo que nos disminuye la res-puesta ovárica y aumenta la posibilidadde generar embriones afectados de al-gún síndrome cromosómico compatibleo no con la vida. Según sea el caso seles debe informar también de la posibi-lidad de tener que realizar varios ciclosde FIV para acumular embriones parael DGP y de la posibilidad de presentaranomalías cromosómicas relacionadascon la edad materna.

El segundo paso es informarles de lanecesidad de la realización de un estu-dio de informatividad previo de la pare-ja, estudio que tiene una duración de 3a 6 meses dependiendo de la dificultadtécnica que presente la enfermedad aestudiar. El tercer paso es informar delestado actual de la legislación en esteaspecto donde se describe que ‘reque-rirá autorización expresa, caso a caso,de la autoridad sanitaria correspon-diente previo informe de la CNRHA (co-misión nacional de reproducción hu-mana asistida)’. Tras la aprobación de laLey 14/2006 de 26 de Mayo es estricta-mente necesario el pedir informe escritode la CNRHA para la realización de unDGP para determinados casos y al noser un órgano con una actividad diariahace la aplicación de la ley bastante in-viable.

Se debe emitir un informe a la conse-jería de sanidad de la comunidad autó-noma que pertenezca, la cual remite elinforme al ministerio de sanidad al cualpertenece la CNRHA, el cual convoca ala CNRHA para que se reúna, estudieel caso e emita un informe de aproba-ción o negación del caso. Una de laspreguntas más frecuentes que realizanlos pacientes es ¿Cuanto tiempo va atardar este proceso? y la respuestasiempre es la misma ’no se sabe, esbastante variable’ y es que la CNRHAno es en la actualidad un órgano conuna actividad diaria sino que se reúne2-3 veces al año (¿no debería adaptar-

se también a la ley?). Debemos teneren cuenta que en estos casos es unacarrera contrarreloj, estamos hablandode que el hijo enfermo presenta una es-peranza de vida corta de 1-2 añoscomo mucho.

En este tiempo se tiene que pedir in-forme a la CNRHA, que se reúna y loapruebe (3 meses en el mejor de los ca-sos), realizar el estudio de informatividadprevio (4 meses), iniciar el ciclo de DGP(2-3 meses si se requiere mas de un ci-clo de FIV) obtener embriones sanos ehistocompatibles, conseguir un embara-zo y los 9 meses de embarazo. El pano-rama es bastante desalentador, en mu-chos casos se apuesta al todo o nada yaque prácticamente sólo se puede reali-zar un intento.

En los casos de enfermedad heredi-taria de aparición tardía entramos otravez en la necesidad de pedir informe ala CNRHA y lo que esto implica. Ahorabien, ¿qué entendemos por ‘enferme-dad’? Fernando Abellán (2006) en laRevista Iberoamericana de Fertilidadcomenta el informe de Hastings Centerde Nueva York y cita ‘La salud se defi-ne como ausencia de males de consi-deración y, por tanto, la capacidad deuna persona de seguir sus metas vita-les y desenvolverse adecuadamente ensu contexto social y laboral habituales’.Si seguimos esta definición para la apli-cación del DGP podemos entrar en eu-genesia, ¿dónde poner el límite? Poruna parte, para lo que a una personarepresentaría una minusvalía menorpara otra le puede comprometer seria-mente su forma de vida, me refiero aque una minusvalía física en nuestrasociedad puede ser fácilmente solven-table y esa persona puede tras un pro-ceso de adaptación seguir con su en-torno familiar, social y profesional mien-tras que esa misma minusvalía en unasociedad menos avanzada puede impli-car un rechazo completo por parte dela sociedad, imposibilitarle la actividaddiaria y producirle la muerte.

Por otra parte, hablamos de enferme-



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34Esther Velilla. El Diagnostico Genético...

dades de expresión tardía, algunas em-piezan a desarrollarse en la vida adulta(algunas a partir de los 50 años), y deexpresión variable. Hasta hace poco vi-víamos una media de 60 años y enciertos lugares aún se mantiene, quie-re esto decir ¿qué no existe el derechoa vivir 50 años en plena salud? ¿Quiénnos dice que esa persona no morirá an-tes de expresar la enfermedad por otracausa? ¿Qué pasa con el derecho delos padres a no condenar a su hijo auna cierta dolencia? Si es de expresiónvariable, ¿quien nos dice que aún ma-nifestando la enfermedad no podrá te-ner una calidad de vida razonable?

Lo cierto es que en determinados ca-sos no podemos predecir el futuro deesa persona y por tanto es difícil ponerel límite. Hubo un caso de DGP por en-anismo aceptado judicialmente, alega-ron que su ‘dolencia’ les imposibilitabala actividad diaria y la aceptación en lasociedad ¿es esta una buena razónpara la realización de un DGP o bien esel principio de la selección a la carta?Con el DGP no sólo podríamos selec-

cionar niños no afectados sino que sepodría llegar a eliminar por completo laenfermedad de la historia familiar, ¿quehay de malo en ello?

Y finalmente, otra aplicación del DGPes la selección de sexo. La mayoría depaíses coinciden en la selección delsexo para aquellos casos de enferme-dades hereditarias ligadas al sexo perono es este tipo de selección a la que merefiero, es a la ‘selección por selección’,al querer someterse a técnicas de FIVcon DGP no por ser estériles y requerir-las sino por el mero hecho de querer te-ner un ‘niño’ o una ‘niña’.

En España la ley no lo permite mien-tras que en otros países si. Tenemosque tener en cuenta en que sociedadvivimos, en nuestra sociedad la selec-ción de sexo no implicaría un desequili-brio ya que tanto se requerirían niñoscomo niñas. Hay quien apuesta por laselección del sexo sólo en casos de ba-lance familiar, pero en todos los casosestaríamos descartando embriones sa-nos simplemente por el hecho de no ser

del sexo deseado ¿Podríamos vincular laaceptación del sexado a la condición in-amovible de donar los embriones delsexo no deseado a parejas estériles?

Esta a primera vista sería una buenacondición pero las parejas deben pre-sentar los requerimientos legales paraque un embrión sea donable lo que re-duce enormemente los casos.

Tenemos que tener presente que la le-gislación siempre va por detrás de losavances de la sociedad, y que estamosdelante de una metodología con grandesperspectivas. Debemos ser conservado-res en cuanto a su aplicación, dejar ma-durar la sociedad y que la CNRHA actúecomo ente regulador para discernir entrelo que se debe o no hacer.


F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A

POLARIDAD DURANTE EL DESARROLLO EMBRIONARIO INICIAL

Polarity diring early embryo development

Ignacio Santiago Álvarez-Miguel; Eva Maria Miguel-Lasobras ; Francisco Javier Martín-Romero; José Antonio Domínguez-Arroyo, Ernesto González-Carrera

Instituto Extremeño de Reproducción Asistida (IERA). Badajoz. Grupo de Investigación en Reproducción y Desarrollo (REDES). Departamento de BiologíaCelular. Universidad de Extremadura. Badajoz.

Correspondencia: Ignacio Santiago Álvarez Miguel: [email protected]

RESUMEN:La visión más aceptada del desarrollo embrionario inicial de los mamíferos es que las células que se originan sonequivalentes y que por lo tanto no hay diferencias entre unas zonas y otras del embrión antes de la implantación. Sin embargo, muchosorganismos establecen polaridad, es decir diferencias entre zonas distintas del embrión, desde etapas muy tempranas del desarrollo eincluso en el huevo antes de la fecundación. En este trabajo revisamos las evidencias que se han ido acumulando que abogan por unapolarización inicial de los embriones de mamíferos, analizando también las hipótesis que explican el origen de esta polaridad y elsignificado que puede tener sobre los procesos de fecundación in vitro.

PALABRAS CLAVE: Ejes embrionarios, blastocisto, segmentación, determinación celular, fecundación, genes maternales, reproducciónasistida.

ABSTRACT:T: The accepted view of the early mammalian embryo development is that all the cells are similar and no differencescan be found among regions of the embryo before implantation. Nevertheless, most of the animals are polarized from very earlystages of development, even in the egg before fertilization. In this review we pretend to show the evidences in favor of an initialpolarity in the mammalian embryo, dealing also with the hypothesis about its origin and the significance on in vitro fertilizationprocesses.

KEY WORDS: Embryonic axis, blastocyst, cleavage, cell differentiation, fertilization, maternal genes, assisted reproduction.

1. Polaridad y ejes embrionarios

Todos los organismos durante su des-arrollo establecen polaridad, es decircrean diferencias entre polos opuestosdel embrión. Los mecanismos de des-arrollo que conllevan la formación deun organismo van a necesitar de estospuntos de referencia para establecerdiferencias en el destino de las célulassegún la posición que ocupen con res-pecto a estos polos.

La polaridad es necesaria principal-mente para el establecimiento de lostres ejes corporales que definen la ana-tomía de la mayoría de los animales yque se corresponden con el eje antero-posterior (A-P), el dorso-ventral (D-V) yel eje de simetría bilateral de izquierda-derecha (I-D) (Figura 1).

Figura 1. Dibujo de un roedor donde se han representado los principales ejes espaciales queconforman la anatomía corporal.


1,2 2 2 1,2

1,2

1 2



Los mecanismos subyacentes a la for-mación de estos ejes han sido motivode estudio con profundidad en la ma-yoría de los grupos animales. Sin em-bargo existe una gran controversia conrespecto al momento del inicio de suformación en el embrión y por lo tantoen el comienzo de la polaridad embrio-naria. Un buen ejemplo es el caso de lalocalización de los órganos según el ejeizquierda-derecha. Indudablemente, laposición del corazón, hígado, intestino eincluso del cerebro se ajusta a este ejecon unos órganos situados en un ladoy otros en el contrario. No se conocía elmomento del inicio de esta disposiciónasimétrica hasta que estudios recientesen embriones de ratón y de gallina hancomprobado que la adquisición de dife-rencias entre la izquierda y derecha seproduce en las fases iniciales de la gas-trulación y gracias a una señalizacióncompleja (Stern and Wolpert, 2002;Wood, 2005).

En la mayoría de los invertebrados,los primeros síntomas de polaridad ypor lo tanto el establecimiento de los

ejes embrionarios ocurre antes de la fe-cundación (Roth, 2003). El caso másestudiado es, sin duda, el de la moscade la fruta Drosophila melanogaster. Enestos organismos la disposición de cier-tas proteínas e incluso de RNAm en elhuevo presenta ya una polarización de-bido a que estos materiales se deposi-tan por las células de soporte del ova-rio de manera desigual entre un polo yel opuesto del huevo durante su forma-ción.

Este es el caso del RNA mensajeroque codifica para la proteína denomi-nada bicoid, un factor de trascripciónque regula la expresión de otros genesy que se deposita en un gradiente en-tre un polo y el opuesto del huevo de lamosca (Gurdon, 1992). Las células queposteriormente se originan en la zonadel huevo con mayor concentración debicoid darán lugar a la zona anterior dela mosca (cabeza) y las que derivan delpolo opuesto con poca cantidad de bi-coid darán lugar a la región posteriordel organismo (cola). El papel del genbicoid en el establecimiento del eje A-P

queda comprobado por la existencia demutantes defectivos en este gen y quepor lo tanto producen huevos de mos-ca que no poseen bicoid. El resultadode esta mutación son embriones queno son capaces de formar cabezas yque dan lugar a larvas de moscas condos colas (de ahí el nombre de bicoid).

Este caso no es único, y el número demoléculas que provenientes de la ma-dre actúan en las primeras fases deldesarrollo son muy numerosas y reci-ben en conjunto el nombre de genes ofactores maternales.

Muchas de estas moléculas presen-tan ya un grado de polaridad en el hue-vo antes de la fecundación y enDrosophila explican la formación del ejeA-P y también del eje D-V, además deotros procesos de desarrollo como la or-ganización de la larva en segmentos cor-porales o la formación de las células dela línea germinal en el extremo posteriordel embrión (Leptin, 2004).Por lo tanto, la distribución asimétri-

Figura 2. Gen maternalbicoid en el desarrollo dela mosca Drosophila.Mediante técnicasinmunocitoquímicas se hapodido comprobar queesta proteína se concentraen un extremo o polo delhuevo (A) y que va a serheredada por las célulasque se forman en ese poloanterior (B). Lacuantificación de losniveles de proteína tantoen mocas silvestres comoen mutantes (C) pone demanifiesto que losembriones defectivos eneste gen y que producenlarvas con dos colas noforman estos gradientesde concentración debicoid entre los polosanterior y posterior.Modificado de Gilbert,2003.

36Ignacio Santiago Álvarez-Miguel et al. Polaridad Durante el Desarrollo ...



ca de ciertas moléculas entre polosopuestos del huevo se transformará endiferentes destinos celulares porque lascélulas adquieren determinantes distin-tos dependiendo del citoplasma quehereden durante las divisiones celula-res. Este mecanismo de desarrollo po-demos denominarlo mosaicismo y sig-nifica que desde el comienzo de la seg-mentación las células están predestina-das y no son por tanto equivalentes (elembrión es un mosaico de células concomposición citoplasmática distinta).Además de los invertebrados algunosvertebrados, como es el caso bien estu-diado de los anfibios, presentan tambiéneste tipo de genes maternales y estable-cen diferencias entre distintos polos delhuevo antes de la fecundación (Zhanget al., 1998).

Sin embargo, en los anfibios los de-terminantes maternales especifican uneje que en el desarrollo no se corres-ponde exactamente con el futuro ejeantero-posterior, sino más bien con elfuturo eje dorso-ventral y a este eje em-brionario inicial se le denomina eje ani-mal-vegetal, con diferencias claras entamaño y destino futuro de las célulasentre una zona y otra (formando blastó-meras animales y vegetales).En contrapartida se piensa que la ma-yoría de los vertebrados, incluidos to-dos los mamíferos, no dependen de es-tos efectores maternales y el desarrollode los ejes embrionarios depende deinteracciones celulares que se produ-cen durante el desarrollo mucho des-pués de la fecundación.

En estos casos se asume que tanto elhuevo (óvulo) como el embrión durantelas primeras divisiones embrionarias,no poseen ningún signo de polaridad.Posiblemente esta es la idea que se nosha enseñado a la mayoría de los profe-sionales que trabajamos en reproduc-ción durante nuestra formación acadé-mica. Este mecanismo de desarrollopuede denominarse regulativo (en con-trapartida al modelo de mosaico) yaque el destino de las células que se vanoriginando no esta fijado y puede modi-ficarse durante el desarrollo. Parece serpor tanto que durante la evolución losgrupos de animales que denominamossuperiores, han perdido la capacidadde establecer una polaridad en el hue-vo o en las fases iniciales del desarrollo

y que el proceso de establecimiento delos ejes se produce mediante mecanis-mos distintos a los que utilizan los de-nominados vertebrados inferiores y losinvertebrados. Según este modelo, lavisión aceptada del desarrollo inicial enmamíferos y por tanto en la especie hu-mana, es que las células conseguidasdurante las primeras etapas del des-arrollo embrionario son todas equiva-lentes y que los primeros signos de po-laridad no aparecen hasta la formacióndel blastocisto (o incluso más adelan-te). Además, los ejes embrionarios nose establecen hasta el proceso de gas-trulación en el epiplasto embrionarioderivado de la masa celular interna(MCI) y mediante interacciones celula-res complejas (Stern, 2006). Las evi-dencias más firmes que siguen sopor-tando este modelo regulativo se basanen la plasticidad o potencialidad queposeen las células de los mamíferosantes de la implantación (Zernicka-Goetz, 2006). Es conocido que las blas-tómeras producidas por las primerasdivisiones pueden ser reemplazadasentre si o incluso se pueden eliminarsin que aparentemente se altere el des-arrollo embrionario y por lo tanto sonequivalentes (sin polaridad).

Actualmente, la teoría regulativa esmantenida por muchos investigadores(Motosogi et al., 2005), pero se acumu-lan evidencias experimentales que su-gieren una diferencia (polaridad) entrelas distintas zonas del embrión en laetapa de blastocisto, mórula e inclusoa partir de la primera división mitóticadel cigoto. Si estas evidencias experi-mentales se van confirmando, implica-ría que las blastómeras poseen ya unadeterminación para producir unas cier-tas regiones del futuro embrión. Estanueva visión obligaría a reevaluar el im-pacto que algunas técnicas parejas a lafecundación in vitro (FIV), como es elcaso del diagnostico genético preim-plantacional (DGP), pueden suponersobre el desarrollo embrionario y el éxi-to de la reproducción asistida. A conti-nuación se revisarán las evidencias queponen de manifiesto la existencia depolaridad en las fases previas a la im-plantación en los embriones de mamí-feros, centrándonos en los roedorescomo modelo experimental más utiliza-do y haciendo referencia a los datos co-nocidos y confirmados en humanos.

Como secuencia lógica se utilizará unacronología retrospectiva desde la fasede blastocisto hasta el huevo (óvulo).Por último se comentarán los datosexistentes sobre los posibles mecanis-mos que establecen esta polaridad ini-cial y su significado embrionario.

2. Polaridad embrionaria antes de laimplantación

2a. Blastocisto

Como se ha mencionado anteriormen-te, los tres ejes principales del organis-mo se establecen después de la im-plantación embrionaria durante la gas-trulación. Indudablemente en la gastru-lación se inicia la formación de estruc-turas equiparables a las del organismodefinitivo (sistema nervioso, tubo diges-tivo, corazón, etc.) y por lo tanto los ejesembrionarios son identificables. No escuestión de tratar aquí la importanciade la gastrulación pues queda fuera delobjeto de este trabajo, pero si que hayque resaltar que cualquier polaridadprevia a este momento ha de ser culmi-nada por el embrión durante la gastru-lación (Ang and Constam, 2004). Dehecho esta fase se considera como elmomento en el que la estructura defi-nitiva del organismo se estable y por lotanto uno de los momentos más trans-cendentales del desarrollo embrionario(Stern, 2006). Sin embargo, durante lasegmentación celular y la formación dela blástula es decir, durante las etapaspre-implantatorias, se pueden distin-guir una serie de asimetrías (polaridad)que pueden finalmente corresponderseo no con los futuros ejes corporales(Rossant, 2004).

El blastocisto de mamíferos presentaclaramente un eje entre la zona dondese encuentra la masa celular interna(MCI) y la zona opuesta sin MCI. A es-tas zonas del blastocisto se les denomi-na polo embrionario (Em) y polo abem-brionario (Ab) respectivamente y es cla-ramente el primer eje de polaridad em-brionaria que puede distinguirse clara-mente en el embrión de mamíferos(Gardner, 1997; Motosugi et al., 2005).Este eje divide a las células del trofoec-todermo en dos grupos, las cercanas ala MCI (trofoectodermo polar) y las ale-jadas de la misma (trofoectodermo mu-ral) que tendrán destinos diferentes en el




organismo. Algunos autores han anali-zando con más detalle la disposición dela MCI y han descrito que presenta yauna cierta asimetría que la hace aseme-jarse a un balón de fútbol americano(oval y aplanado). Aunque no existenpruebas concluyentes se ha establecidouna correlación entre esta asimetría dela masa celular interna con la formacióndel futuro eje antero-posterior en el em-brión. Esto se debe a que el eje alarga-do de la MCI coincide aproximadamen-te con el eje del cilindro embrionarioque se forma después de la implanta-ción y que es a su vez un antecedente

del futuro eje antero-posterior (Weberet al., 1999).

Además, con respecto a la disposi-ción de las células de la MCI, puedenidentificarse células más cercanas a lacavidad o blastocele y otras en contac-to o cercanas al trofoectodermo. Denuevo existen evidencias que esta dis-posición se corresponde con el futuroeje D-V, siendo las células que limitanla cavidad del blastocisto las futuras cé-lulas endodérmicas (ventrales) del em-brión (Weber et al., 1999). Por lo tanto,aunque la formación del eje antero pos-

terior (y el resto de los ejes embriona-rios) se produce por complejas interac-ciones celulares y moleculares despuésde la implantación parece que puedenser delineados retrospectivamente a lafase de blastocisto (Figura 3).

Una cuestión importante que puedeplantearse con respecto a esta polari-dad es si estos ejes observables en elblastocisto se producen de forma alea-toria con respecto a las células de lamórula o si por el contrario están pre-dispuestos desde etapas previas del

Figura 3. Representacióne imagen real equivalentede los ejes de polaridadque pueden identificarseclaramente en unblastocisto. Se indicatambién su posiblecorrespondencia con losfuturos ejes espaciales delorganismo definitivo.Esquema modificado deGilbert 2003.

desarrollo. Como se verá mas adelanteel eje Em-Ab puede verse reflejado enla estructura embrionaria e inclusopuede trazarse retrospectivamente alcigoto y el óvulo por lo que la polaridadembrionaria ha de ser analizada desdeetapas previas a la formación del blasto-cisto.

2b. Polaridad durante la segmentación

Aunque existen trabajos recientesque abogan por un destino azaroso delas blastómeras iniciales con respectoal blastocisto (Alarcón and Marikawa,2003) y por lo tanto que el embrión enfase de mórula no presenta ningunapolaridad (Tarkowski and Wrobleswka,1967; Motosugi et al., 2005), las evi-dencias que se acumulan a favor deuna predisposición inicial desde las pri-meras divisiones celulares son tan nu-merosas que actualmente no podemosnegar que los embriones de mamíferosantes de la formación del blastocistopresentan una cierta polaridad.

Las primeras aportaciones a este con-cepto se deben a observaciones pura-mente morfológicas que claramente in-

dican una regularidad en el proceso deformación y distribución de las cuatroprimeras blastómeras producidas du-rante el desarrollo y que no puede serjustificada por mero azar.

Esta disposición ortogonal con trescélulas en un plano y otra desplazadaha de ser explicada a su vez por unadisposición ordenada y secuencial delos planos de división celular que seproducen después de la fecundación(Edwards and Hansis, 2005). Estaorientación particular de los planos dedivisión y la colocación de las blastó-meras ha sido muy estudiada en em-briones de ratón y humanos (Gardner,2002). Estos planos de división se pro-ducen y definen con respecto a la posi-ción del corpúsculo polar (CP) y poranalogía con otros grupos de animalesse define a este eje entre el polo del ci-goto que posee el corpúsculo y elopuesto como el eje animal-vegetal (A-V) del embrión. Podemos por tantoasignar planos de división meridionalessi corresponden a una división quecoincide con este eje embrionario oplanos ecuatoriales si se dispone ensentido perpendicular.

Sistemáticamente la primera divisiónse produce de forma meridional y pro-duce dos blastómeras simétricas yequivalentes en su contenido de cito-plasma animal y vegetal. La segundadivisión se produce con el mismo ejeen una de las blastómeras (general-mente la primera que se divide) crean-do de nuevo dos células equivalentes encuanto a su contenido citoplasmáticoanimal-vegetal, pero la otra blastómerarealiza una división ecuatorial creandodos células, una con contenido citoplas-mático exclusivamente animal (célulasuperior) y otra con contenido exclusiva-mente vegetal (Figura 4). Esta disposi-ción ordenada es constante y esta pro-vocada por la orquestación de los planosde división en las primeras divisiones mi-tóticas (Gardner, 2002).

Después de estas tres divisiones, lascélulas siguen produciéndose de formaordenada y van disponiéndose en ca-pas internas y externas pero con proce-dencias distintas. Se acepta que las cé-lulas que se quedan situadas en la pe-riferia darán lugar al trofoectodermo,mientras que las que quedan en el in-terior darán lugar a la MCI (Piotrowska-

38Ignacio Santiago Álvarez-Miguel et al. Polaridad durante el desarrollo ...



Nitsche and Zernicka-Goetz 2005).Esta teoría denominada dentro-fuera hasido utilizada como modelo para expli-car la diferenciación de las células ha-cia blastocisto dependiendo de su posi-ción azarosa en la mórula sin interven-ción de la procedencia (la herencia) decada célula (Chroscicka et al., 2004; yver esquema A en la figura 5).

Este mecanismo de desarrollo ha sidocuestionado por trabajos en los que sepone de manifiesto que las células es-tán determinadas a formar las zonasdel blastocisto más por su origen segúnlas primeras divisiones que por su dis-posición azarosa en la blástula (Plusaet al., 2005). Las evidencias de esta se-gunda teoría denominada gobierno pordivisión se basan en los estudios de li-naje celular.

Figura 4. Secuencia de

divisiones que

sistemáticamente se llevan a

cabo para dar origen al embrión

de 4 células. La primera división

se produce según el eje

meridional (animal-vegetal) y

origina dos células

equivalentes. La segunda

división en una de estas

blastómeras sigue el mismo

patrón, pero en la otra el plano

de división es perpendicular

(ecuatorial), denotando un

comportamiento distinto y por

tanto una asimetría entre las

dos primeras blastómeras que

se producen en el desarrollo.

En la parte inferior se muestran

fotografías de nuestro

laboratorio con embriones

equivalentes a los mostrados

en los dibujos. Los esquemas

se basan en modelos similares

de Gilbert, 2003.

Figura 5. Representaciones esquemáticas de las posibles teorías sobre el origen de las células del blastocisto con respecto al embrión de dos células.

A: Modelo regulativo en el que la disposición final de las células no depende de su origen y por lo tanto se localizan en el blastocisto de una manera

aleatoria. B: Modelo totalmente determinado en el que existe una correlación entre las primeras blastómeras y el tipo celular que se formará en el

blastocisto. En esta ocasión se ha representado que la célula con división meridional dará origen a la MCI y la otra al trofoectodermo, aunque la

situación podría ser la contraria. C: Situación que engloba la mayoría de los casos en los que se ha marcado experimentalmente las células para

seguir su linaje. Como puede apreciarse (aunque se produce variabilidad) existe una tendencia clara a una disposición prefijada de los descendientes

de las blastómeras iniciales en el blastocisto (descrita en el texto), aunque esta disposición no se corresponde exactamente con ninguno de los ejes

descritos para el blastocisto.




Estos estudios consisten en analizarla posición final que ocuparan los des-cendientes de cada una de las célulasdel embrión inicial en el futuro blasto-cisto e incluso en el embrión post-im-plantatorio. Por razones lógicas de ex-perimentación los resultados que sedescriben a continuación correspondencasi exclusivamente a embriones de ra-tón pero podemos asumir que debido ala similitud de la segmentación sonaplicables también al desarrollo en hu-manos.

Como se ha dicho, la forma experi-mental de comprobar que existe undestino predefinido para las blastóme-ras ha sido mediante el marcaje celularcon sustancias vitales que no interfie-ren en el desarrollo y que pueden serseguidas a lo largo del desarrollo. Sehan utilizado colorantes vitales, marcasde aceite en las blastómeras, e inclusolos restos de la cola del espermatozoi-de (Davies and Gardner, 2002), paraseguir a lo largo del tiempo el destinode estas células.

Los análisis de marcaje siempre pre-sentan objeciones técnicas por el abor-daje experimental que conlleva, con ungran intervencionismo sobre el embrión(manipulación, introducción de sustan-cias extrañas, métodos de observacióndel marcaje como la fluorescencia, etc)y por lo tanto resultan controvertidos.Quizá debido a esto hay que mencionarque existen publicaciones recientesque abogan por un destino azaroso delas blastómeras (Hiiragi and Solter,2004; Gardner, 2006) sin relación algu-na con el eje animal-vegetal del óvulo oel futuro eje embrionario-abembriona-rio del blastocisto. Sin embargo, la ma-yoría de las evidencias muestran queaunque no hay un destino fijo de las cé-lulas en las etapas iniciales del desarro-llo, existe una tendencia clara a que losdescendientes de ciertas blastómerasocupen regiones determinadas delblastocisto (y por ende del embrión).

Esto significaría que existe una predis-posición o polaridad desde las etapasmás iniciales del desarrollo y el modelode mosaicismo tiene cada vez mas evi-dencias en embriones de mamíferos(Edwards and Hansis, 2005).El destino más sugerido por su correla-

ción ideal con la estructura del blasto-cisto es que las dos células con conte-nido animal y vegetal (segunda divisiónmeridional) darán lugar mayoritaria-mente a la MCI, la célula que se originaen el polo animal (célula superior en lasegunda división ecuatorial) tiende aformar la mayoría del trofoectodermo yla que mantiene únicamente citoplas-ma de origen vegetal contribuirá a la lí-nea germinal (Piotrowska et al., 2001;Piotrowska-Nitsche et al., 2005; y veresquema B en la figura 5). Sin embar-go, a pesar de esta tendencia, estosmismos estudios de linaje ponen demanifiesto que existe una contribuciónparcial de cualquier blastómera tanto ala MCI como al trofoectodermo y por lotanto son interpretados por muchos au-tores como una evidencia del modelo dedesarrollo regulativo, sin una predisposi-ción de las células durante la segmenta-ción.

La controversia sobre el destino de lasblastómeras iniciales en embriones demamíferos ha sido parcialmente zanja-da por los numerosos y elegantes estu-dios de linaje celular realizados princi-palmente por el grupo de Zernika-Goetzen Londres (para revisiones recientesvease Zernicka-Goetz 2002 y 2004). Ensus trabajos se muestra que la disposi-ción de las blastómeras condiciona eldestino final de las células, pero que larelación entre el eje animal-vegetal conel eje embrionario-abembrionario delblastocisto es más sutil de lo que sepensaba (Zernicka-Goetz, 2006). Estosestudios han sido capaces de estable-cer que tan pronto como en el estadiode dos células cada blastómera tieneuna contribución fijada al futuro blasto-cisto (Piotrowska et al., 2001).

Así, la blastómera que se divide meri-dionalmente va a dar lugar a la mayoríade la MCI y el trofoectodermo polarmientras que la otra (ecuatorial) va a darlugar al trofoectodermo mural y parte delas células de la MCI, especialmentegran parte de las que limitan la cavidaddel blastocisto (Esquema C en la figura5). Este mapa de destino explica ade-más porque algunos autores encuentrancélulas descendientes de las 2 o 4 pri-meras blastómeras en ambas estructu-ras (MCI y trofoectodermo). Por lo tantolos estudios de linaje presentan una evi-dencia muy clara a favor del modelo de

mosaico, estando determinadas las cé-lulas por su posición a contribuir a dis-tintas regiones del blastocisto posible-mente desde la primera división embrio-naria (Gardner, 2001).

2c. Polaridad en el cigoto y óvulo

Si desde la primera división mitóticalas células tienen un destino prefijadohay que plantear que el cigoto ha de te-ner ya un grado importante de polari-dad que facilite este comportamientosistemático de las blastómeras y queposiblemente haya heredado a su vezde algún tipo de asimetría en el óvulo(Piotrowska et al., 2001). Tanto en elóvulo como en el cigoto, la posición delcorpúsculo(s) polar(s) ya denota unapolaridad y como se ha mencionadodefine el eje animal-vegetal (Gardnerand Davies, 2006). Este eje coincide enla orientación del primer plano de divi-sión (Cooke et al., 2003) y finalmentecon el destino de las células en el blas-tocisto (Ciemerych et al., 2000). Enconfirmación de esta relación entre eleje animal-vegetal y el eje embrionario-abembrionario del blastocisto, hay quemencionar que la polaridad descrita enel blastocisto y la simetría en la MCIpuede ser predicha con anticipaciónpor la disposición del corpúsculo polar,ya que en ratones se ha realizado unseguimiento experimental del mismo ysu localización en la mayoría de los ca-sos sirve como marca en uno de los ex-tremos del disco de la MCI (Gardner,1997; Ciemerych et al., 2000).

Como ya se ha mencionado en la in-troducción, se considera que los mamí-feros no dependen de componentes ci-toplasmáticos y por lo tanto que el óvu-lo y el cigoto son homogéneos. Sin em-bargo, es evidente que deben existir di-ferencias en la membrana plasmática(MP) del óvulo ya que en condicionesfisiológicas el espermatozoide no pue-de penetrar en las cercanías del cor-púsculo polar. Se ha comprobado quela zona de MP presenta zonas con unacomposición lipídica que impide losdesplazamientos y que se denominanislas de rigidez y que los espermatozoi-des serian incapaces de utilizar comopunto de entrada (Evans et al., 2000;Johnson, 2001).

Otra característica del óvulo y final-




mente del cigoto es que la disposiciónde la placa metafísica y la extrusión delos corpúsculos polares se realiza sis-temáticamente en las cercanías de es-tas islas de rigidez y esta circunstan-cia implica que han de existir corrien-tes corticales y entramados de micro-túbulos espacialmente dispuestospara que la localización del primer ysegundo corpúsculo sea la correcta(Gardner and Davies, 2006). Finalmenteotros componentes del óvulo como lasmitocondrias e incluso la actividad me-tabólica podrían también presentar dife-

rencias (Van Berklon, 2004)

Por lo tanto, aunque no es observa-ble en el interior del gameto y del ci-goto, ha de existir una polaridad es-tructural con respecto al futuro ejeanimal-vegetal. Por ultimo, llevando lasituación al extremo de que la locali-zación del corpúsculo polar viene de-terminada por los movimientos que elnúcleo realiza en la fase de vesículagerminal (Albertini and Barrett, 2004)y que posiblemente estén relaciona-

dos con la maduración ovocitaria y conlas interacciones entre el ovocito y lascélulas foliculares del ovario (Cecconiet al., 2004). La presencia de célulasque se mantienen más fuertementeunidas al polo vegetal después de ladecumulación podría implicar tambiénuna relación entre la polaridad ovoci-taria y el proceso de maduración en elovario (observaciones propias sin pu-blicar) (Figura 6).

3. Mecanismos que establecen la polaridad inicial

Con todo lo descrito anteriormente,puede decirse que existe una polari-dad embrionaria durante las primerasfases del desarrollo de los mamíferos yque esta polaridad puede tener algu-nos signos ya en el óvulo antes delproceso de fecundación. Esta polari-dad queda confirmada y definida des-pués de la primera división mitóticacuando se forman las dos primeras cé-lulas, ya que las mismas van a tenerdestinos diferentes (Plusa et al., 2005).Debe existir algún tipo de condiciona-miento que origine esta diferencia decomportamiento entre una célula y otray, por lo tanto, un mecanismo que inicie la polaridad.Las asimetrías que se han descrito

en el óvulo con respecto al CP posible-mente no justifiquen una asimetría enel comportamiento de las células hijaspues como se ha mencionado el pri-mer plano de división coincide con eleje animal-vegetal y por lo tanto, otrosmecanismos están siendo evaluadosactualmente (Gray et al., 2004).

Un mecanismo generalmente esta-blecido en otros animales para definirla polaridad es la presencia en gra-dientes de genes o factores materna-les en el huevo. Aunque el número degenes maternales que se descubrenen los mamíferos esta creciendo rápi-

Figura 6. A: Ilustración del polo animal-vegetal de un ovocito humano. B: Fotografías de un ovocito en metafase II que mantiene célulasfoliculares adheridas en su polo vegetal y de un ovocito en el momento de realizar ICSI. Esquema modificado de Gilbert, 2003




damente (Antczak and Van Blerkom,1997; Tong et al., 2002; Wallingfordand Habas, 2005), las evidencias deuna distribución desigual entre lasblastómeras hijas son muy vagas(Torres-Padilla et al., 2006).Solamente un trabajo muy reciente yque necesita ser confirmado implica alfactor maternal Cdx2 como responsa-ble de la polaridad inicial del embrión(Deb et al., 2006).

Este factor está presente en el ovo-cito y según los autores se reparte demanera desigual entre las dos blastó-meras que se generan a partir del ci-goto. En última instancia esta molé-cula por mecanismos no descritos enel trabajo, sería la responsable deque la segunda división celular nosea equivalente y se genere la asime-tría descrita previamente. La posibili-dad de que exista un gen maternal enmamíferos con un gradiente en elóvulo y que es trasladado a la pri-mera división mitótica supondríauna interesante conservación delos mecanismos de polaridad em-brionaria a lo largo de la evolu-ción e implicaría que las blastó-meras iniciales no son equivalen-tes en contenido citoplasmático.

La otra posibilidad que parece vatomando importancia como iniciode la polaridad es que sea unaconsecuencia directa del procesode fecundación. La hipótesis con-siste en que la polaridad embriona-ria se establece por el sitio de en-trada del espermatozoide en elóvulo (Piotrowska et al., 2002).Como base experimental a esta te-oría, se ha comprobado que el lu-gar de entrada del espermatozoidemarca, junto con el corpúsculo po-lar, la orientación del plano de lasprimeras divisiones (Bennett,1982; Piotrowska and Zernicka-Goetz, 2001). Además, la célulaque hereda el sitio de entrada delespermatozoide (SEP) distinguiblepor la presencia del llamado conode fertilización, tiene tendencia aser la primera que se divide en lasegunda división embrionaria(Gardner, 2001; Piotrowska and

Zernicka-Goetz, 2001). De hechoes conocido desde hace tiempoque la inyección de compuestos or-gánicos y otros materiales supues-tamente inertes en oocitos y cigo-tos de ratón afecta a la división ce-lular, generalmente acelerándola(Dyce et al., 1978). Por último,existen también evidencias que elSEP marca el borde entre la zonaembrionaria y abembrionaria delblastocisto (Zernika, 2002) y que lablastómera que mantiene los restosdel espermatozoide sistemática-mente termina formando parte dela MCI (Plusa et al., 2002).

Aunque la relación entre fecun-dación y polaridad es aún especu-lativa y esta en fase de comproba-ción experimental cabría mencio-nar que de nuevo sería un meca-nismo de desarrollo conservado alo largo de la evolución. De hecho,en organismos tan diversos comoel gusano C. elegans o los embrio-nes de anfibios, la polaridad inicialen el huevo es recolocada median-te mecanismos de desplazamientocitoplasmático con respecto alpunto de entrada del espermato-zoide (Gerhart, 1991).

4. Significado de la polaridad em-brionaria

Según todo lo expuesto anterior-mente existe una clara no-equiva-lencia al menos en el destino de lascélulas desde la primera divisiónmitótica.

Este hecho parece estar en contrade la gran capacidad regulativaque se ha descrito en los embrio-nes de mamíferos (McLaren, 1976;Papaioannou and Ebert, 1986).Son muchos los estudios ya clási-cos que indican que la eliminacióny/o sustitución de blastómeras enla etapas iniciales del desarrollotiene escasas consecuencias en eldesarrollo embrionario y que el em-brión es capaz de regular la perdi-da o sustitución de esta célula me-diante robustos mecanismos dedesarrollo que aun están por acla-rar (Johnson et al., 2006).

Sin embargo, experimentos recien-tes que reevalúan la capacidad re-gulativa del embrión y la equivalen-cia de las blastómeras ponen argu-mentos a favor de la existencia deuna polaridad embrionaria desdelas fases iniciales del desarrollo(Zernicka-Goetz, 2006). Quimerasrealizadas con células equivalentesen la localización dentro del em-brión tienen un alto grado de su-pervivencia e implantación embrio-naria, mientras que si se sustituyenblastómeras no correspondientes(por ejemplo una célula destinadaa formar trofoectodermo por unablastómera que dará la MCI, el re-sultado es que aunque el embrióncompleta la blastulación y un nú-mero pueden llegar a implantarse ynacer, la proporción de embrionesque fracasan es mayoritaria(Tarkowski et al., 2001; Zernicka-Goetz, 2002). Por motivos obvios, es-tos experimentos, al igual que los demarcaje que abogan a la polaridadembrionaria, no han podido ser corro-borados en humanos.

Hay que mencionar los experi-mentos clásicos realizados en an-fibios y otros grupos animalesque ponen de manifiesto la capa-cidad de compensar el desarrolloque tienen estos embriones a pe-sar de su clara polaridad previa alproceso de fecundación (Vincentand Gerhart, 1987; Bowerman yShelton, 1999). De igual manerapodría ser que los embriones demamíferos posean una alta capa-cidad regulativa y que las diferen-cias en polaridad establecidas en lasetapas iniciales pueden ser subsana-das si se interfiere el desarrollo me-diante manipulación.

Por lo tanto, el escenario que se pre-senta es que existe un patrón en granmedida constante de destino paralas blastómeras del embrión de ma-mífero y que se corresponde en eta-pas más avanzadas del desarrollo (eincluso en el organismo definitivo)con los ejes de polaridad (Zernicka-Goetz, 2002; Edwards and Hansis,




2005). Sin embargo durante el des-arrollo también existe una cierta plas-ticidad y el mosaicismo no es taninvariable como se ha descrito enotros organismos ya que las célu-las pueden reestablecer un ordencuando son alteradas de formanatural (gemelación por ejemplo)o artificial y por lo tanto se man-tienen pluripotentes (Zernicka-Goetz, 2006; Stern, 2006).

5. Implicación en reproducciónasistida e investigación

La polaridad embrionaria y ovo-citaria y los mecanismos que es-tablecen la misma han de ser te-nidos en cuenta a la hora de rea-lizar las técnicas de manipulaciónembrionaria en reproducciónasistida. Sin ser el tema de estetrabajo, no es difícil imaginar quede confirmarse esta nueva visiónpolarizada del ovocito y el em-brión en las fases iniciales deldesarrollo muchos procesos quese realizan en el laboratorio deembriología podrían ser más rele-vantes para el desarrollo de loque se pensaba en un principio.Entre estos procesos destacaría-mos el sitio de microinyección es-permática (ICSI) (Figura 6) y laextracción de blastómeras para larealización del diagnostico genéticopreimplantacional (DGP), ya que po-drían tener unas implicaciones clíni-cas mayores de lo que se había pen-sado hasta ahora dependiendo dela(s) célula(s) elegida(s) para ser ex-traídas del embrión.

Además, nuevos factores predicti-vos del éxito del proceso de FIV po-drían incorporarse al estudio del cigo-to y de los embriones, como porejemplo la morfología y viabilidad deciertas blastómeras según su posi-ción, la orientación y velocidad de lasdivisiones celulares según se ajustena los modelos descritos, o la defini-ción del eje embrionario-abembriona-rio en el blastocisto.Por último, as-pectos relacionados con la investiga-ción biomédica como la obtención de

células madre de embriones no via-bles tanto a partir de la MCI(Matalipova et al., 2003) como deembriones en fase de mórula(Strelchenko et al., 2004), la clona-ción terapéutica o la transferencia decitoplasma han de considerar igual-mente la posibilidad de que los ovo-citos y embriones de mamíferos pre-sentan una polaridad y que no todaslas regiones del citoplasma o no to-das las blastómeras de un embriónsean equivalentes.

6. Consideraciones finales

Existen evidencias cada vez más fir-mes de que el embrión desde su ini-cio tiene una polaridad que se reflejaen el patrón de formación de célulasen cada fase consecutiva del des-arrollo, de tal forma que blastómerasparticulares producen siempre losmismos tipos celulares.

Nosotros pensamos que este meca-nismo predeterminado se ha estable-cido entre otros posibles patrones dedesarrollo que resultaron ser menoseficaces aunque viables (situaciónque explica la plasticidad embriona-ria) y el embrión ha ido utilizando laspistas que han sido útiles para con-servar este patrón, como es la locali-zación del corpúsculo polar o el sitiode entrada del esperma.

Dicho de otro modo, es lógico pen-sar que un mecanismo de formaciónembrionaria si es efectivo se va ir re-pitiendo durante el desarrollo casicon precisión de relojería (y no de for-ma azarosa) y quedará prefijado me-diante pistas en las células que lo ori-ginan. Cualquier desviación de estemecanismo, sea natural o artificial,podría ser compensado de forma aundesconocida por el embrión, pero aunesta por conocerse las consecuenciasen la implantación y naturaleza de losembriones conseguidos.

Hay que aclarar que aunque enesta trabajo se ha enfatizado sobrelas evidencias de la hipótesis de ladeterminación y la polaridad inicial,

ambas hipótesis (mosaicismo y regu-lación) no han se ser completamenteexcluyentes y los nuevos datos quese van adquiriendo tienden hacia unareconciliación de ambas posibilida-des. Sí que hay que destacar que enrealidad los mamíferos y más concre-tamente los humanos, no somos tandiferentes a la hora de utilizar meca-nismos para el desarrollo y pareceque las mismas señales (genes ma-ternales, espermatozoide, planos dedivisión, etc.) van siendo reutilizadoscon variaciones a lo largo del desarro-llo en todos grupos animales.

Finalmente, las implicaciones deque muy posiblemente nuestro desti-no esta marcado desde el primer díade desarrollo están aun por determi-nar.

Agradecimientos

Agradecemos el apoyo prestado porlos miembros de IERA para la realiza-ción de este trabajo.

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46Carta e Invitación al IV Congreso Asebir

N O T I C I A S

CARTA E INVITACIÓN AL IV CONGRESO ASEBIR


N O T I C I A S

CARTA E INVITACIÓN DE CONGRESO



N O T I C I A S / A G E N D A

FE DE ERRATASEn el último número de la revista ASEBIR (Junio 2006, vol. 11), en la página 46 se hace balance del III congreso ASEBIRcelebrado en Zaragoza, y se cometió un error al informar sobre el trabajo ganador del Premio EMB.Pedimos encarecidamente disculpas a los autores implicados y a continuación publicamos la información correcta:“Durante el III Congreso ASEBIR se entregó el Premio EMB a la mejor comunicación científica al trabajo:

ESTUDIO ULTRAESTRUCTURAL DEL RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO RUGOSO DE OVOCITOS Y EMBRIONES HUMANOSMondéjar I., Jiménez-Movilla M., Castells MT., Fernández-Colom PJ., Romeu A., Avilés M. y Ballesta J.Departamento de Biología Celular. Facultad de Medicina, Universidad deMurcia. Unidad de Reproducción Asistida, Hospital Universitario La Fe,Valencia”

New Trends on the Diagnosis and Management of Early Pregnancy Failure

-ESHRE Campus-December 15 – 16, 2006

Poznan, Polandhttp://www.eshre.com/emc.asp?pageId=834

Follicle culture, in vitro maturation and cryopreservationfrom basic research to clinical application

-ESHRE campus-January 12 - 14, 2007.

Luebeck, Germanyhttp://www.eshre.com/emc.asp?pageId=812

ISAR 2007 - 12TH National Congress on Assisted Reproduction Technology and Advances in Infertility Management

February 8 - 11, 2007Bhargava Auditorium, Postgraduate Institute of Medical Education and

Research, Chandigarh, India www.isar2007.com, www.ivfchandigarh.com

Prevention of endometriosis-ESHRE Campus-

February 15 –17, 2007Bordeaux, France

http://www.eshre.com/emc.asp?pageId=833

4th Symposium on Diabetes and PregnancyMarch 29 – 31, 2007

Istanbul, Turkeyhttp://www.kenes.com/dip07

ASA 32nd Annual ConferenceApril 18 - 24, 2007

Hyatt Regency Tampa, Florida, USAwww.tamparegency.hyatt.com

Adenomyosis: a Reproductive Disorder-ESHRE Campus -April 19 – 20, 2007

Leuven, Belgiumhttp://www.eshre.com/emc.asp?pageId=839

IFFS CongressDurban, South Africa

April 30 - May 5, 2007www.iffs2007.org.za

Assisted Reproduction Technology – a Masters level short courseMay 14 – 17, 2007

University of Warwick, Coventry, UKOrganizer contact name: Dr Steve Hicks

Organizer e-mail: [email protected]://template.bio.warwick.ac.uk/shortcourses/ivf.pdf

48Noticias / Agenda


I N F O R M A C I Ó N P A R A L O S A U T O R E S

Información para los Autores Normas de PublicaciónNORMAS DE PUBLICACIÓN

La revista ASEBIR es una publicación del ámbi-to de la Biología de la Reproducción abierta a consi-derar cuantos trabajos afines a esta área de conoci-miento puedan adaptarse a uno de los siguientesapartados: Artículos Originales; Temas deActualización o Debates. Además, la revista ASEBIRda cabida a la actualidad en sus secciones deNoticias y Agenda.

La revista ASEBIR se publica semestralmentepor lo que es indispensable que los escritos para lassecciones de Debates, Noticias y Agenda sean en-viados antes del 30 de Abril para el primer númerodel año (Junio) y antes del 15 de Noviembre para elsegundo número del año (Diciembre).

Los originales deben enviarse a: Secretaría deASEBIR, C/ Fernández Caro 44, Oficina 2. 28027(Madrid). Se recomienda utilizar sobres que prote-jan adecuadamente el contenido informático.

Manuscritos: Todos los trabajos remitidos debe-rán ser inéditos y se presentarán en un manuscritooriginal y dos copias impresas, a doble espacio enhojas din A4, así como también en soporte informá-tico. Se acompañarán de una carta de presentaciónen la que se solicite su valoración y se indique lasección donde se desea su publicación. En esta car-ta debe constar claramente que el trabajo no ha sidopublicado previamente y que todos los autores es-tán de acuerdo en su contenido y ceden los dere-chos de su publicación a ASEBIR. Para la reproduc-ción de material ya editado es necesaria la autoriza-ción expresa de los propietarios del copyright.

Para artículos originales y temas de actualizaciónse sugiere una extensión no superior a las trece ho-jas din A4 a 30 líneas, con no más de seis figuras yseis tablas.

En la primera página de todos los trabajos se in-dicará, en el siguiente orden: título en castellano; tí-tulo en inglés; nombre y un apellido de cada uno delos autores y nombre completo del centro, con la di-rección para correspondencia, incluido correo elec-trónico. En la segunda página se incluirá un resumeny las palabras clave (ambos en castellano e inglés). Laestructura de los manuscritos preferentemente debe-rá organizarse en los apartados de Introducción,Material y Métodos, Resultados, Discusión,Agradecimientos, Bibliografía, Tablas y Gráficas. Las ta-blas se numerarán con números romanos y las figurascon números arábigos. Los pies de figura se imprimi-rán en hoja aparte y cada figura llevará escrito en eldorso su numeración.

Las citas bibliográficas deben ser directas, con-signándose en el texto el nombre del autor o de losdos autores y el año (ej.: Smith, 1993 o bién Smithand Michigan, 1997) y si son más de dos autoresconsignándose el primero seguido de "et al.," (ej.:Smith et al., 1998). Para agrupar varias citas se enca-denarán con ";" (Ej: Smith and Michigan, 1997; Smithet al., 1998).

Las referencias bibliográficas se presentaran enla sección de Bibliografía por orden alfabético si-guiendo las normas del International Committee ofMedical Journal Editors 5th edition (dichas normasse pueden consultar en JAMA 1997; 277:927-934).Los nombres de las revistas se abreviarán de acuer-do con el estilo usado en el Index Medicus (que sepuede consultar en la List of Journals Indexed quese incluye todos los años en el número de enero). Acontinuación se dan un ejemplo de formato de citasbibliográficas:

A) Artículo de revista con menos de 6 autores:Lewis SE, Moohan JM, Thompson W. Effects of

pentoxifylline on human sperm movility in normosper-mic individuals using computer-assisted analysis.Fertil Steril 1993;59:418-423.

B) Artículo de revista con más de 6 autores:Marrama P, Baraghini GF, Carani C, Celani MF,

Giovenco P, Grandi F, et al. Further studies on the ef-fect of pentoxifylline on sperm count and sperm movi-lity in patients with idiopathic oligo-asthenozoospermia.Andrologia 1985;17:612-616.

C) Libro completo:Colson JH, Armour WJ. Spermatogéne-sis. 2º ed.

Londres: Delmar Publishers; 1996.

D) Capítulo de libro:Siracusa G, Felici M, Salustri A. Meiotic maturation

of the mammalian oocyte. En: Ach RH, Balmaceda JP,Johnston I, editors. Gamete Physiology. 2º ed. New York: RavenPress; 1990. p. 129-144.

E) Comunicación a congreso:Bengston S, Solheim. Hatching assisted. XXII Meeting

of European Society of Human Reproduction andEmbriology; 1997 Jun20-23; Roma, Italia. p. 1561-2.

Para la sección de debate se aceptarán textos (deno más de dos hojas din A4 a 30 líneas, incluidas unmáximo de cinco citas bibliográficas y dos figuras silas hubiere), que reflejen la opinión de los diferentesfirmantes sobre el tema de discusión que se propon-drá en el número de la revista anterior.

Para las secciones de noticias y agenda se acep-tarán escritos que informen de congresos u otroseventos relacionados con la Biología de laReproducción o la actividad asociativa de ASEBIRsiempre que identifiquen de manera clara los organi-zadores de los mismos.

50Información para los Autores


B O L E T Í N D E I N S C R I P C I Ó N

DATOS PERSONALES

Don/Doña: ...................................................................................................................................................................................................................

con Domicilio en C/............................................................................................................................................... CP:................................................

Ciudad:.................................................................................. Teléfono: ...........................................Teléfono Móvil: ...................................................

E-mail:...........................................................................................................................................................................................................................

Formación Básica (Médico, Biólogo, Farmacéutico, etc.): ............................................................Grado Académico (Licenciado, Doctor, Especialista en..., etc.)...........................................

CENTRO DE TRABAJO

Domicilio profesional C/ ........................................................................................................................................ CP: ................................................

Centro de Trabajo:....................................................................................Departamento: .............................................................................................

Ciudad: ............................................................................... Teléfono: ...................................................... Fax: ............................................................

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DESEA PERTENECER COMO MIEMBRO NUMERARIO A LA ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN, ASEBIR

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Los recibos que le presente al cobro la ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN

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Boletín de Inscripción51

Diciembre 2006 Vol. 11 • Nº2


revista asebir diciembre 2006

Health & Medicine