prcticas de biolog­a

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  • 1. Materia BiologaDra. Ana Mara Ortuo TomsDpto. Biologa Vegetal ( p g g (Fisiologa Vegetal) g g)Facultad de BiologaUniversidad de Murcia

2. Objetivo: Visualizar los fenmenos osmticos de turgencia y plamolisis celular.Introduccin:La clula vegetal adulta encierra una voluminosa vacuolaseparada del medio que la rodea por una membrana llamadatonoplasto.tonoplasto Esta se comporta en primera aproximacin comomembrana semipermeable con respecto a numerosassustancias disueltas, como por ejemplo el cloruro sdico o lasacarosa.sacarosaLa pared celular rgida, limita la posibilidad de dilatacin de laclula y en consecuencia la absorcin de agua Ello constituye agua.por otra parte, un marco gracias al cual, los cambios de aguason perceptibles directamente. 3. Material: Hojas de cebolla. Colorante rojo neutro al 1 % en tampn fosfato 0,1 M pH=7,4. pH=7 4 Disolucin de NaCI al 6 %.Microscopio ptico. 4. Manipulacin:Sirvindose de pinzas y bistur, tomar un fragmento de epidermis, de la parte interna del casco de cebolla, de aproximadamente 0,5 cm de lado. Sumergirlo durante un minuto en la disolucin de rojo neutro al 1 % solubilizado en tampn fosfato 0,1 M pH=7,4. pH 7,4. Montar el fragmento de epidermis en el porta, tapndolo a continuacin con el cubre, eliminando el exceso de liquido succionando con papel de filtro y observar al microscopio. 5. Manipulacin: Reemplazar el colorante, en la preparacin, con disolucin de NaCl al 6%, colocando unas gotas de esta disolucin en el p porta-objetos, junto a un borde del cubre, pero sin j jp mancharlo y colocando un fragmento de papel de filtro en el lado opuesto, para aspirar por capilaridad el colorante. La disolucin de l L di l i d cloruro sdico ocupar el ldi l lugar d aquel, lde l lo que se reconoce porque el lquido de la preparacin se aclara. Repetir los lavados cuatro o cinco veces y observar inmediatamente la preparacin al microscopiomicroscopio. 6. Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolverel alumno con el desarrollo de la prctica: A qu se d b l gran extensin d l coloracin d l clulaA debe la i de la l i de la l l tras la tincin con rojo neutro? Qu papel dQ l desempean l dif las diferentes concentraciones d lt t i de las disoluciones de tampn fosfato y de cloruro sdico sobre la del jugo vacuolar? A qu atribuye los cambios que se observa en la vacuola en cada caso? 7. Objetivo: Observar granos de almidn de la patata y conocer lajg p tcnica de tincin con Lugol para el reconocimiento de la presencia de dicho polisacrido.Introduccin:El Lugol es una disolucin acuosa de yodo y yoduro potsicoque sirve para averiguar si, en una disolucin de azcares noreductores (reaccin de Fehling negativa)negativa), existe elpolisacrido almidn (prueba de lugol positiva).El almidn es un polisacrido mezcla de amilosa y amilopectinaamilopectina. 8. Cuando el almidn se pone en contacto con unas gotas de p gLugol toma un color azul-violeta caracterstico (la amilosa secolorea de azul oscuro a negro y la amilopectina se coloreaentre naranja y amarillo).Se trata de una reaccin no qumica, en la que se forma uncompuesto de inclusin del yodo en el interior de las hlicesde la amilosa Esta inclusin es reversible y est condicionadaamilosa.por la temperatura. 9. Material:PatataMicroscopio pticoReactivo Lugol (yodo-yoduro potsico 1%) (yodo yoduroSuspensin acuosa de almidnManipulacin:Coger un trozo de patata, aadirle una gota de agua en lasuperficie y hacer un raspado de tejido.Se obtiene una suspensin de granos de almidn queenturbia la gota de agua, dndole color blanquecino.Poner una gota de esta suspensin sobre el porta, colocarel cubre y observar al microscopio. 10. Manipulacin:pPoner ahora una gota de reactivo yodo-yoduro potsico(1%) sobre el porta, en contacto con el borde del cubre, ycon un papel de filtro en el borde opuesto, hacer quepenetre en l preparacin. t la iObservar de nuevo en el microscopio. + Lugol 11. Manipulacin: pEn caso de que no se disponga de microscopio: Se puede hacer reaccionar la suspensin obtenida tras el raspado de la patata con una gota de reactivo yodo-yodurop pgyy potsico (1%), para observar el cambio de coloracin.Se coloca en un tubo de ensayo 3 ml de una suspensinacuosa d almidn, se l aaden 3 gotas d l solucin dde l id le d de lal i deLugol, se observar la aparicin del color azul-violetacaracterstico.A continuacin se calienta suavemente, sin que llegue ahervir, se observar que pierde el color, posteriormente seenfra el tubo de ensayo con agua del grifo y despus deunos 2-3 min reaparecer el color azul. 12. Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolverqqqel alumno con el desarrollo de la prctica: Conocer la forma de los grados de almidn obtenidos a partir g p de este material vegetal. Relacionar el tamao de los granos y el nmero de capas que se observan en ellos. bll Conocer la posibilidad de utilizar el reactivo yodo-yoduro potsico (1%) para d t t t i detectar l presencia d almidn en un la i de l id medio. Fundamento de la reaccin de color y de los cambios con la temperatura. 13. Objetivo: Poner de manifiesto la presencia de azcaresjp reductores en un medio, mediante una reaccin d color dd di dii de l de tipo redox. Introduccin:Los monosacridos y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula.El reactivo de Fehling es utilizado con el fin de poner demanifiesto la capacidad reductora de un azcar. Consiste enuna mezcla de dos reactivos: el Fehling A (sulfato cprico),de g ( p),color azul, y el Fehling B (tartrato sdico-potsico), incoloro.Tras la reaccin con el glcido reductor, se forma xido deCobre (I) que tras ser calentado da un precipitado de color (I),rojo. De este modo, el cambio de color indica que se haproducido una reaccin de tipo redox y que por tanto, elglcido presente es reductor. 14. Material y Manipulacin: p1 partePoner en tubos de ensayo 3 ml de solucin acuosa degglucosa, fructosa, sacarosa y almidn.,, Aadir en cada tubo 1 ml de solucin de Fehling A (contiene CuSO4) y 1 ml de Fehling B (tartrato sdico-potsico, para alcalinizar el medio y permitir l reaccin).l li il dii i lai ) Calentar los tubos en un bao mara hasta que hiervan durante 10 minutos. dt i t La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo y ser negativa si queda azul o cambia a un tono azulazul- verdoso. 15. Material y Manipulacin:2 parteLa sacarosa es un disacrido que carece de poder reductor (porque en el enlace de los monosacridos que forman parte de su molcula participan los carbonos anomricos), por lo que la reaccin con el reactivo de Fehling es ), pqg negativa, tal y como ha quedado demostrado en la 1 parte.Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza y se desco po e e os o osac dos descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa, que sa o a , g ucosauctosa,s son reductores.La prueba de que se ha verificado la hidrlisis se realiza con el reactivo deFehling y, si el resultado es positivo, aparecer un precipitado rojo (tras elcalentamiento en bao mara a ebullicin durante 10 min).Si el resultado es negativo, la hidrlisis no se habr realizado correctamente, y si en el resultado final aparece una coloracin verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrlisis parcial de la sacarosa. 16. Material y Manipulacin:2 partePara llevar a cabo esta parte de la prctica:Tomar 3 ml de solucin de sacarosa y aadir 10 gotas de HCl diluido.Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos.Dejar enfriar.Neutralizar aadiendo 3 ml de solucin alcalina alcalina.Realizar la prueba de Fehling como se indica en la 1 parte. 17. Informacin que d b adquirir o cuestiones que d b resolverf debe d debelel alumno con el desarrollo de la prctica: Establecer a qu se deben las diferencias observadas entre los cuatro carbohidratos analizados (glucosa y fructosa dan positiva la reaccin de Fehling mientras que sacarosa y Fehling, almidn no dan positiva la reaccin). Analizar e interpretar los resultados obtenidos tras la hidrlisis de la sacarosa. 18. Objetivos: Romper o lisar con detergentes la pared celular, la membrana plasmtica y la membrana nuclear para dejar libre el ADN y hacer que precipite en alcohol, para poder visualizar las fibras del ADNADN. 19. QU ES EL ADN?ES EL ADNPrctica 4: Extraccin yADN es la abreviatura del AcidoDesoxirriboNucleico. Es la molcula de la vidapues constituye el material gentico de todosaislamiento de ADNlos organismos vivos y se encuentra en elinterior del ncleo de las clulas El ADN es el clulas.componente qumico primario de los cromosomasy el material que constituye los genes. ..Su funcin esencial es la de conservar lainformacin durante la divisin celular,transmitirla de generacin en generacin yhacer efectiva la informacin gentica quecontiene. Cedido amablementepor la Dra. Leonor RuizETAPAS Y FUNDAMENTO DE LA EXTRACCIN DE ADN DE PLANTASTAPAS QU HACEMOS? POR QU LO HACEMOS? CMO LO HACEMOS?Etapa Rompemos la pared celular yPara liberar el contenido celular y Mezclando el material las membranas plasmtica y nuclear,nuclear en el que se encuentra el vegetal con una solucin de nuclearADN extraccin y trituramosEtapa Separamos el ADN deLas protenas y restos celularesAadiendo al tampn de protenas y restos celulares interfieren en la extraccin de extraccin zumo de pia o deADN papaya que contienen unenzima, la papana, queelimina las protenasEtapa Precipitamos el ADNLa molcula de ADN es soluble enAadimos alcohol sobre laagua pero no en alcohol, por lo que fase acuosa que contiene elprecipitar en la interfase entre ADN disueltoambos APLICACIONESAgricultura y ganadera:Nos ayuda a conocer el genoma de los seresvivos para saber ms de ellos Gracias al estudioellos.del ADN podemos distinguir entre especies yvariedades, encontrar caractersticas deinters agronmico (produccin, sabor, color,resistencias a enfermedades,). Obtenernuevas variedades mejoradas. 20. Protocolo de Extraccin de ADN Equipos Productos Tubos pl