laporan biotek alat sterilisasi tipus

8/18/2019 Laporan Biotek Alat sterilisasi Tipus

1/12

LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI FARMASI

Pengenalan Alat dan Penggunaanya serta Sterilisasi Alat, Bahan dan Media

isusun !leh"

Kel!#$!% &'(

() Leriana Allyu (***(+(+(++*) Arini Marga Mustin%a-eni (***(+(+(+*

.) I Kade% Arya Pradnyana (***(+(+(+/+

0) Na1ilatul Magh2ir!h (***(+(+((++

3) &handranadia Ra%h#ade-i Eda (***(+(+(((+

4) Tsa5it Bar%i (***(+(+(((

BAGIAN BIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI UNI6ERSITAS 7EMBER

*+(4

BAB () PENA8ULUAN


2/12

()( Latar Bela%ang

Bioteknologi adalah aplikasi terpadu dari berbagai cabang ilmu seperti biokimia,

mikrobiologi dan rekayasa untuk memanfaatkan mikroba kultur jaringan dankomponen-komponennya dalam skala industri. Bioteknologi selalu berkaitan dengan

reaksi-reaksi biologis yang dilakukan oleh jasad hidup sebagai suatu individu atau

komponen-komponennya yang dapat berupa organ, sel, jaringan atau bahkan molekul-

molekul tertentu misalnya DNA, RNA, protein atau enim. Dalam perkembangannya,

bioteknologi kini telah mencapai arah rekayasa yang jauh lebih terarah sehingga

hasilnya dapat lebih, atau bahkan sepenuhnya dikendalikan. !ebagai contoh sekarang

telah dimungkinkan untuk melakukan manipulasi genetik pada suatu jasad secara sangat

terarah sehingga hasil manipulasi tersebut dapat diramalkan secara lebih pasti. "eknik

manipulasi semacam ini mulai berkembang ketika para ilmuan berhasil melakukan

teknik manipulasi bahan genetik secara kultur jaringan #in vitro$.

!ebelum melakukan percobaan atau penelitian di bidang bioteknologi, terlebih

dahulu perlu dilakukan pengenalan alat dan cara sterilisasinya. Dengan mengenal alat,

kita dapat mengetahui fungsi masing-masing bagian dari alat tersebut serta cara

pengoprasian atau penggunaannya sehingga dapat memperlancar jalannya suatu

percobaan atau penelitian dan diharapkan dapat memperoleh hasil suatu percobaan yang

maksimal. !elain itu kita juga dapat meminimalisir resiko kesalahan kerja pada saat

melakukan percobaan yang berhubungan dengan mikrobiologi.

!elain pengetahuan pemahaman akan alat, kita juga dituntut terampil

menggunakan alat-alat tersebut. !ebelum digunakan, sebaiknya dilakukan sterilisasi

terlebih dahulu pada alat-alat laboratorium, bahan ataupun media. !terilisasi merupakan

kegiatan yang dilakukan untuk menghilangkan mikroba yang tidak di inginkan. %al ini

dilakukan agar semua alat, bahan, dan media yang akan digunakan pada percobaan steril

sehingga tidak mengganggu #mengontaminasi$ hasil percobaan.

()* Ru#usan Masalah

&. Alat-alat apakah yang sering digunakan untuk penelitian mikrobiologi dan

bioteknologi dan bagaimana prinsip kerja serta fungsi dari peralatan tersebut'

(. Bagaimana cara membuat media )B cair dan )B padat'

*. Bagaimana cara sterilisasi alat, bahan dan media yang diperlukan untuk

penelitian bioteknologi'


3/12

(). Tu9uan

&. +engetahui jenis peralatan dan prinsip kerja serta fungsi dari peralatan yang

rutin digunakan untuk penelitian mikrobiologi dan bioteknologi

(. +engetahui dan dapat membuat media yang diperlukan untuk praktikum

bioteknologi #)B cair dan )B padat$

*. Dapat menyiapkan dan melakukan sterilisasi alat, bahan dan media


4/12

BAB *) TIN7AUAN PUSTAKA

Ada banyak pilihan cara sterilisasi yang berbeda, dapat disterilkan melalui cara

sterilisasi akhir #"erminal !teriliation$ atau dengan cara aseptik #Aseptic rocessing$.

&. "erminal !teriliation #sterilisasi akhir$+etode sterilisasi akhir menurut DA "echical +onograph, dibagi menjadi dua

yaitu

a. verkill +ethod adalah metode sterilisasi menggunakan pemanas dengan uap

panas pada &(&/0 selama &1 menit yang mampu memberikan minimal reduksi

setingkat )og &( dari mikroorganisme-mikroorganisme yang memiliki nilai D

minimal & menit. 2ita bisa menggunakan metode overkill untuk bahan yang

tahan panas seperti at organik. 2riteria sterilisasi yang digunakan adalah

robabilitas !urvival tidak lebih besar dari & mikroorganisme dalam&34 unit.

b. Bioburden !teriliation adalah metode sterilisasi yang memerlukan monitoring

ketat dan terkontrolterhadap beban mikroba sekecil mungkin dibeberapa lokasi

jalur produksi sebelum menjalani proses sterilisasi lanjutan dengan tingkat

sterilisasi yang dipersyaratkan !A) &34.

erbedaan kedua metode adalah pada titik a5al #starting point$. Apabila

menggunakan pendekatan overkill maka pemanasan dengan uap &(&/0 selama &1

menit. !edangkan pendekatan bioburden terlihat dari pencapaian tingkat sterilisasi

yang diminta, yakni !A) &34.

(. Aseptic rocessing

Aseptic rocessing adalah metode pembuatan produk steril menggunakan

saringan dengan filter khusus untuk bahan obat steril atau bahan baku steril yang

diformulasikan dan diisi #)ukas, (334$.

+acam6macam sterilisasi yang dapat digunakan sebagai berikut

&. !teriliasi anas Dengan "ekanan #Autoclave$.

Autoclave yaitu alat serupa tangki minyak yang terdapat diisi dengan uap.

+edium yang disterilkan ditempatkan didalam autoclave ini selama &1 sampai (3menit, hal ini tergantung pada banyak sedikitnya yang diperlukan untuk sterilisasi.

+edium yang akan disterilkan itu lebih baik ditempatkan dalam beberapa botol

agak kecil dari pada dikumpul dalam satu botol yang besar.

ada saat melakukan sterilisasi, kita sebenarnya memaparkan uap jenuh pada

tekanan tertentu selama 5aktu dan suhu tertentu pada suatu objek, sehingga terjadi

pelepasan energi laten uap yang mengakibatkan pembunuhan mikroorganisme

secara inversibel akibat denaturasi atau koagulasi protein sel.

!terilisasi demikian merupakan metode yang paling efektif dan ideal karena


5/12

- 7ap merupakan pemba5a #carrier$ energi termal paling efektif dan semua

lapisan pelindung luar mikroorganisme dapat dilunakkan, sehingga

memungkinkan terjadi koagulasi.

- Bersifat nontoksik, mudah diperoleh, dan relatif mudah dikontrol.8aktor-faktor yang mempengaruhi sterilisasi uap adalah

a. 9aktu

Apabila mikroorganisme dalam jumlah besar dipaparkan terhadap uap

jenuh pada suhu yang konstan, maka semua mikroorganisme tidak akan

terbunuh pada saat bersamaan.

b. !uhu

eningkatan suhu akan menurunkan 5aktu proses sterilisasi secara

dramatis.

c. 2elembapan:fek penambahan daya bunuh pada sterilisasi uap disebabkan

kelembapan akan menurunkan suhu yang diperlukan agar terjadi

denaturasi dan koagulasi pritein.

(. !terilisasi anas 2ering #ven$

roses sterilisasi panas kering terjadi melalui mekanis konduksi panas. anas

akan diansorpasi oleh permukaan luat alat yang di sterilkan, lalu merambat kebagian

dalam permukaan sampai akhirnya suhu untuk sterilisai tercapai.

*. !terilisasi ;as atau :tilen ksida

!terilisasi gas merupakan pilihan lain yang digunakan untuk sterilisasi alat yang

sensitif terhadap panas.

>*$.

+enyaring mikroba atau filtrasi melalui prinsip


6/12

- 8ilter ayakan, didasarkan pada perbedaan ukurannya dengan pori. 7kuran

porinya sragan sebesar 3,(( dengan ketebalan ?3-&1> . 8ilter

ayakan tidak dapat membebaskan pirogen dan virus #3,3( $.

- 8ilter adsorpsi, dalam hal ini filternya terbuat dari selulosa, cisbes, gelas sinter,

keramik dan kieselguhr serta karbon aktif.

7kuran pori penyaring bakteri memang paling penting dalam menghilangkan

mikroba dari cairan. Namun ada faktor lain seperti muatan listrik penyaringan

#D5idjoseputro, (331$.

0ara lain dalam sterilisasi adalah dengan filtarsi. +enyaring mikroba atau

filtrasi melalui prinsip • 8ilter ayakan, didasari perbedaan ukurannya dengan pori ukuran porinya

seragam sebesar 3,((@m. 8ilter ayakan tidak dapat membebaskan pirogen dan

virus

• 8ilter adsorpasi, dalam hal ini filternya terbuat dari selulosa, gelas sinter,

keramik dan kieselgurh serta karbon aktif #D5idjoseputro.(331$.

!terilisasi dengan penyaringan tergantung pada penghilangan mikroba secara

fisik dengan adsorpasi pada media penyaringan atau dengan mekanisme

penyaringan, yang digunakan untuk sterilisasi larutan yang tidak tahan panas.

enyaringan yang tersedia meliputi

&. enyaringan berbentuk tabung reaksi yang disebut lilin penyaring yang

dibuat dari tanah infusoria yang dikempa #penyaring berkefeld dan mandler$

(. )ilin penyaring yang dibuat dari porselin yang tidak dilapisi #penyaring

pasteur chamberland, dulto dan sales $

*. iringan asbes yang dikempa dipasang ditempat khusus dalam peralatan

saringan #penyaring seit dan s5inney$


7/12

yang terkandung didalamnya tidak mengalami banyak perubahan #D5idjoseputro,

(331$.

Ada tiga cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu penggunaaa panas,

penggunaan bahan kimia, dan penyaringan #filtrasi$. Bila panas digunakan bersama-

sama uap air maka disebut sterilisasi panas lembab atau sterilisasi panas kering atau

radiasi. emilihan metode didasarkan pada sifat bahan yang akan disterilkan, karena

metode sterilisasi yang umum digunakan secara rutin dilaboratorium mikrobiologi ialah

yang menggunakan panas,maka didalam kegiatan ini metode yang akan dibahas lebi

terperinci #%adioetomo,&>>*$.

!terilisasi basah biasanya dilakukan didalam autoklaf #pada hakikatnya autoklaf

adalah presure cooker berukuran besar$ atau sterilisation uap yang mudah diangkat

#portable$ dengan menggunakan uap jenuh bertekanan pada suhu &(&/0 selama &1

menit. 2arena naiknya titik didih air menjadi &(&/0 itu disebabkan oleh tekanan &

atmosfer #atm$ pada ketinggian permukaan laut, maka daur sterilisasi tersebut seringkali

juga dinyatakan sebagai & atm selama &1 menit. Namun perlu diingat bah5a pernyataan

ini hanya berlaku pada tempat-tempat yang tingginya sama dengan permukaan laut.

ada tempat-tempat yang lebih tinggi, diperlukan tekanan yang lebih besar untuk

mencapai satu suhu &(&/0 #%adioetomo, &>>*$.

anas lembab sangat efeltif meskipun pada suhu yang tidak begitu tinggi, karena

ketika uap air berkondensasi pada bahan-bahan yang akan disterilkan dilepaskan

sebanyak 4?4 kalori pergram uap air pada suhu &(&/0. anas ini mendenaturasikan atau

mengkoagulasikan protein pada organisme hidup dan dengan demikian mematikannya.

+aka sterilisasi basah dapat mensterilkan bahan apa saja yang dapat ditembus oleh uap

air #minyak misalnya tidak dapat ditembus uap air$ dan tidak rusak bila dipanaskan

dengan suhu yang berkisar antara &&3/0 dan &(&/0 #%adioetomo, &>>*$.leh karena itu metode ini merupakan sterilisasi yang paling efektif dan ideal

karena

a. 7ap merupakan pemba5a #carrier$ energi termal paling efektif dan semua lapisan

pelindung luar mikroorganisme dapat dilunakkan, sehingga memungkinkan

terjadinya koagulasi.

b. Bersifat non toksik, mudah diperoleh, dan relatif mudah dikontrol #)ukas, (334$.

Dibandingkan dengan panas lembab, panas kering kurang efisien dan

membutuhkan suhu tinggi serta 5aktu yang lama untuk sterilisasi. %al ini disebabkan


8/12

karena tanpa kelembapan tidak ada panas laten. !ebagai contoh, albumim telur dengan

kelembapan baru menggumpal pada 14/0, sedangkan tanpa kelembapan baru

menggumpal pada suhu &43-&C1/0. 2arena bentuk kehidupan yang paling tahan panas

yaitu endospora bakteri, berprilaku seakan6akan tidak memiliki kelembapan, maka

panas kering #oven$ harus mencapai suhu &43/-&C1/0 untuk dapat mematikannya.

emansan seperti ini menjamin bah5a suhu pada benda-benda yang dipanaskan dalam

oven akan mencapai &43/ - &C1/0 selamanya sekurang-kurangnya &3 menit

#%adioetomo, &>>*$


9/12

BAB .) METOE

.)( Alat dan Bahan

a) Pengenalan Alat dan Penggunaannya&. Alat-alat gelas #:rlenmeyer, labu takar, ca5an petri, tabung reaksi, beaker

glass, spreader$

(. Alat-alat non gelas #pinset, jarum ose$

*. Alat-alat ukur #gelas ukur, pipet ukur bulb filler, mikropipet, timbangan

analitik$

. )aminar air 8lo5 #)A8$

5) Sterilisasi Alat, Bahan dan Media

Alat " "ip biru, tip kuning, tip putih, tabung reaksi, beker glass, :rlenmeyer,

mikropipet, kapas berlemak, kasa, autoklaf, aluminium foil

Bahan " 2omponen media )B cair #Na0l, "ryptone, Geast :Ftract$, aHuadest,

komponen media )B padat #Na0l, "ryptone, Geast :Ftract, Bacto Agar$

.)* Pr!sedur Ker9a

a) Pengenalan Alat dan Penggunaannya

5) Sterilisasi Alat, Bahan dan Media

Pe#5uatan Media LB :air

!etiap praktikan mencatat dan memperhatikan peralatan serta cara kerja dan

fungsinya masing-masing yang terdapat di laboratorium Bioteknologi

Ditimbang trypton 3,( g #&I$J Na0l 3,( g #&I$J :kstrak Geast 3,& g

#3,1I$, dimasukkan dalam erlenmeyer dan ditambahkan aHuadest (3 m)

dipanaskan ad larut

+edia cair dimasukkan kedalam tabung sebanyak 1 m) dan ditutup

dengan sumbat kapas dan aluminium foil

+edia disterilisasi dalam autoklaf suhu &(&o0 selama &1-(3 menit

+edia cair diinkubasi *Co0 selama &?-(< jam untuk melihat ada tidaknya

kontaminan #media menjadi keruh$


10/12

Pe#5uatan Media LB $adat

BAB 0) 8ASIL AN PEMBA8ASAN

ada praktikum kali ini dilakukan pengenalan alat dan penggunaannya sekaligus

sterilisasi alat, bahan dan media. "ujuan dari praktikum ini antara lain untuk mengetahui

jenis peralatan dan prinsip kerja serta fungsi dari peralatan yang rutin digunakan untuk

laboratorium mikribiologi dan bioteknologi. !elain itu diharapkan mahasis5a dapat

membuat media yang diperlukan untuk praktikum bioteknologi sekaligus dapat

menyiapkan alat dan melakukan sterilisasi alat, bahan dan media.

Beberapa peralatan yang rutin diperlukan untuk aktivitas praktikum maupun

penelitian bidang bioteknologi diantaranya yaitu autoklaf, laminar air flo5, incubator,

elektroforesis DNA, elektroforesis protein, thermal cycler, sentrifuga, 7E

transiluminator, shaker incubator, dan alat-alat gelas, dan lain-lain. +asing-masing dari

alat tersebut mempunyai fungsi tersendiri. ven, autoklaf dan incubator digunakan

sebagai alat sterilisasi. %ot plate, lampu spiritus, 5aterbath, micro5ave digunakan

sebagai pemanas. +esin 0R, 7E transiluminator, vorteF, sentrifuga, shaker incubator,

elektroforesis agarosa dan elektroforesis poliakrilinamid merupakan instrument-

instrumen yang digunakan dalam proses percobaan bioteknologi.

Ditimbang trypton 3,( g #&I$J Na0l 3,( g #&I$J :kstrak Geast 3,& g

#3,1I$, Bacto Agar 3,* #3,*I$ dimasukkan dalam erlenmeyer dan

ditambahkan aHuadest (3 m) dipanaskan ad larut dan ditutup dengan

sumbat kapas dan aluminium foil

+edia disterilisasi dalam autoklaf suhu &(&o0 selama &1-(3 menit

+edia didiamkan hingga memadat, selanjutnya diinkubasi *Co0 selama

&?-(< jam untuk melihat ada tidaknya kontaminan #media menjadi keruh$


11/12

Alat-alat lainnya yang biasa digunakan antara lain :rlenmeyer, labu takar, ca5an

petri, tabung reaksi, beaker glass, spreader, gelas ukur, pipet ukur, bulb filler, pinset,

jarum ose, mikropipet, p% meter dan timbangan analitik.

8ungsi dari masing-masing alat tersebut antara lain

BAB 3) PENUTUP

3)( Kesi#$ulan

3)* Saran


12/12

AFTAR PUSTAKA

laporan biotek alat sterilisasi tipus

Documents