HBA1C: SLABA TOČKA U

LABORATORIJSKOJ OBRADI

ŠEĆERNE BOLESTI?

Dr. sc. Nora Nikolac

Klinički zavod za kemiju, KBC Sestre milosrdnice

Slabe točke? 2

HbA1c

1.Jedinice

2. Analitička izvedba

3. Metode 4. Interferencije

5. Predanalitika

ADA kriteriji za HbA1c (2016)

Dijagnostički / terapijski cilj HbA1c

Dijagnostički kriterij za šećernu bolest ≥ 6,5% (48 mmol/mol)

Povećan rizik za šećernu bolest

(predijabetes)

5,7–6,4% (39–46 mmol/mol)

Terapijski cilj (stroži) < 6,5% (48 mmol/mol)

Terapijski cilj (optimalni) < 7,0% (53 mmol/mol)

Terapijski cilj (minimalni) < 8,0% (64 mmol/mol)

Terapijski cilj (djeca) < 7,5% (58 mmol/mol)

Terapijski cilj (trudnice) 6,0-6,5% (42–48 mmol/mol)

3

Prije standardizacije 4

Working Group

(IFCC-WG) on

HbA1c

Standardization

(1995)

Jedinice:

%

Analit:

Površina ispod krivulje

kromatografskog vrška IOC-HPLC

Metode:

> 50 metoda

Velika varijabilnost (do 30%)

IFCC referentni sustav: definicije 5

• mmol HbA1c po molu HbA0 (mmol/mol) Jedinice

• glukoza vezana na N-terminalni valin hemoglobinskog beta lanca (βN1-deoksifruktozil-hemoglobin)

Analit

• visokotlačna tekućinska kromatografija u sprezi s kapilarnom elektroforezom (HPLC-CE)

• visokotlačna tekućinska kromatografija u sprezi s masenom spektrometrijom (HPLC-MS)

Referentna metoda

1. Jedinice 6

MASTER jednadžba:

NGSP (%) = 0,09148 × IFCC (mmol/mol) + 2,152

2007: rezultate prikazivati u mmol/mol i %

Nakon prilagodbe, prikazivati samo u mmol/mol

2013: rezultate prikazivati u mmol/mol i %

Znanstveni časopisi: mmol/mol i %

7

44

88 93

109 114

8

6 10

11 12

0

20

40

60

80

100

120

140

CROQALM 2012 (1)

CROQALM 2013 (1)

CROQALM 2014 (1)

CROQALM 2015 (1)

CROQALM 2016 (1)

Broj laboratorija (% i mmol/mol) Broj laboratorija (%)

Broj laboratorija koji sudjeluje u Modulu 9 HbA1c s rezultatima iskazanim u %

i mmol/mol u zadnjih 5 godina

1003; 85%

183; 15%

Broj laboratorija (%)

Broj laboratorija (% i mmol/mol)

Glycated haemoglobin

RIQAS

Cycle 12 Sample 2 (2017)

Rezultati VKK

8

1. Opiranje promjenama

2. Tehnički problemi

3. Povećana analitička

varijabilnost?

Razlozi

Verifikacija CLSI EP5-A 9

Parametar % mmol/mol Razlika mmol/mol

prema %

Razina 1 (srednja vrijednost) 4,7 28,1

Ponovljivost (CV) 0,59% 0,70% +18,6%

Unutarlaboratorijska preciznost (CV) 1,57% 1,97% +25,4%

Razina 2 (srednja vrijednost) 9,3% 78,5

Ponovljivost (CV) 0,53% 0,53% 0

Unutarlaboratorijska preciznost (CV) 0,55% 0,73% +32,7%

Reagens: Enzymatic HbA1c (Abbott Architect c8000)

Kontrole: Lyphocheck Diabetes Level 1 i 2 (BIORAD)

Različiti kriteriji prihvatljivosti za nove jedinice!

10

Model 1: učinak analitičke izvedbe

testa na klinički ishod

Model 2: Biološka varijabilnost

Model 3: Trenutno najbolja analitička

izvedba

HbA1c

2. Analitička izvedba

11

Dobra kontrola

bolesti

7,0% 8,0%

HbA1c (%)

Promjena terapije

7,5%

Promjena

terapije nije

potrebna

7,5% ± 0,5%

TEA (%) =

(0,5/ 7,5) x 100% = 6,67%

TEA (mmol/mol) = 9,44%

Analitički ciljevi prema kliničkom ishodu

12

TE = bias + 2SD

Sustavna

pogreška

Nasumična

pogreška

= 6,67%

unutarlaboratorijski CV (UKK):

Usporedivost u RH 13

CROQALM ciklus Sve metode (N) CV (sve metode, rezultat

iskazan u %)

CROQALM 2012 (1) 52 5,3

CROQALM 2013 (1) 94 3,4

CROQALM 2014 (1) 103 4,8

CROQALM 2015 (1) 120 3,1

CROQALM 2016 (1) 126 3,4

Koeficijent varijacije HbA1c za sve metode (rezultat iskazan u %) u zadnjih 5 godina

Sigma metrika 14

> 2: rutinska upotreba

> 4: klinička ispitivanja

Sigma = (%TE - %biasVKK) / %CVUKK

2013: Task Force on Implementation of HbA1c

Standardization (Integrated Project) (TF-HbA1c)

15

Sigma metrika

Lyphocheck Diabetes Level 1

5,0% (31,6 mmol/mol)

Lyphocheck Diabetes Level 2

9,3% (78,2 mmol/mol)

TE 6,67%

Bias (VKK) 0,7%

CV (UKK) 3,28% 1,31%

1,83 4,61

Ne zadovoljava!

Procjena rizika

(klinički ishod)

Popravne radnje

Zadovoljava

kriterije

Visoka kvaliteta

metode

Strogi ciljevi nisu uvijek zadovoljeni!

16

Metode mjerenja HbA1c

Separacija

Ionsko izmjenjivačka

kromatografija

Kapilarna elektroforeza

Afinitetna kromatografija

Kemijska reakcija

Enzimska Imunokemijske

Prema: Weykamp C. HbA1c: a review of analytical and clinical aspects. Ann Lab Med 2013;33(6):393-400.

3. Metode mjerenja HbA1c

Prednosti i nedostatci 17

Metode temeljene

na separaciji

Metode temeljene na

kemijskoj reakciji

Brzina, protok uzoraka

Analitička oprema

Analitička varijabilnost

Varijante Hb

18

97

74

25

36

2

5

44

6

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

CROQALM RIQAS

Imunokemija HPLC Kapilarna elektroforeza POCT Afinitetna kromatografija Enzimska

Raspodjele po metodama iz posljednjeg ciklusa VKK.

Raspodjela metoda

4. Varijante hemoglobina 19

α β

β α

HbA

α β

β α

HbS

β6: Gln→Val

α β

β α

HbC

β6: Gln→Lys

α β

β α

HbD

β121: Glu→Gln

α β

β α

HbE

β26: Gln→Lys

Mala frekvencija u Hrvatskoj (< 1%)

Imaju N-β-Valin → Ista glikacija kao za HbA Zbog konformacijskih promjena interferiraju u

metodama

Separacijske metode bolje detektiraju varijante

20

α β

β α

HbA

α γ

γ α

HbF

Novorođenčad, trudnice

Leukemija, talasemije, nasljedni HbF

Nema β lanca, γ lanac ima N-term Gly Manja razina glikacije (oko 30%)

Fetalni hemoglobin

21

Verifikacija interferencije HbF

-25,0%

-20,0%

-15,0%

-10,0%

-5,0%

0,0%

0,0

%

10,6

%

21,3

%

30,3

%

39,5

%

47,5

%

54,9

%

Bia

s (%

)

HbF%

Enzimska metoda CE Kriterij prihvatljivosti

Tesija Kuna A, Dukic K, Nikolac N, Miler M, Vukasovic I, Simundic AM, Vrkic N. Comparison of enzymatic

assay for HbA1c measurement (Abbott Architect) with capillary electrophoresis (Sebia Minicap Flex Piercing

Analyser). (rad u postupku objavljivanja)

22

Nema potrebe za posebnom pripremom

Priprema bolesnika

5. Predanalitički zahtjevi

HbA1c >>> Glukoza

23

Glukoza:

HbA1c:

Spremnik

Nema razlike između

K2EDTA i K3EDTA!

5. Predanalitički zahtjevi

> > >

citrat heparin fluorid serum

HbA1c >>> Glukoza

24

Stabilnost

-10,00%

-8,00%

-6,00%

-4,00%

-2,00%

0,00%

2,00%

4,00%

6,00%

8,00%

10,00%

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Enzymatic method CMIA Capillary electrophoresis

Tesija Kuna A, Dukic K, Nikolac N, Miler M, Vukasovic I, Simundic AM, Vrkic N. Comparison of enzymatic assay for HbA1c

measurement (Abbott Architect) with capillary electrophoresis (Sebia Minicap Flex Piercing Analyser). (rad u postupku

objavljivanja)

5. Predanalitički zahtjevi

HbA1c >>>

Glukoza

25

Lipemija

-40,0%

-35,0%

-30,0%

-25,0%

-20,0%

-15,0%

-10,0%

-5,0%

0,0%

2,2

8

5,7

2

8,1

1

10

,3

19

,05

24

,06

33

,36

41

,48

42

,37

Bia

s (%

) Trigliceridi (mmol/L)

Enzimska metoda Kapilarna elektroforeza Kriterij prihvatljivosti

Tesija Kuna A, Dukic K, Nikolac N, Miler M, Vukasovic I, Simundic AM, Vrkic N. Comparison of enzymatic

assay for HbA1c measurement (Abbott Architect) with capillary electrophoresis (Sebia Minicap Flex Piercing

Analyser). (rad u postupku objavljivanja)

Slabe točke? 26

HbA1c

1.Jedinice

2. Analitička izvedba

3. Metode 4.

Interferencije

5. Predanalitika