INFORME ESPECTROFOTOMETRA

PARTE I. Curvas de AbsorbanciaTras exponer las tres sustancias a todo el espectro de luz visible, estos fueron los datos obtenidos: Azul de Bromofenol

Tabla 1. Datos de absorbancia de longitudes de onda entre 400 y 700 nm para el Azul de Bromofenol.

Grfica 1. Curva de absorbancia vs. longitud de onda para el Azul de Bromofenol Naranja de Metilo

Tabla 2. Datos de absorbancia de longitudes de onda entre 400 y 700 nm para el Naranja de Metilo.

Grfica 2. Curva de absorbancia vs. longitud de onda para el Naranja de Metilo.

Solucin de Naranja de Metilo y Azul de Bromofenol

Tabla 3. Datos de absorbancia de longitudes de onda entre 400 y 700 nm para la mezcla de Naranja de Metilo y Azul de Bromofenol.

Grfica 3. Curva de absorbancia vs. longitud de onda para la mezcla de Naranja de Metilo y Azul de Bromofenol.Toda sustancia que absorbe luz visible aparece coloreada cuando trasmite o refleja la luz (la luz blanca contiene todos los colores del espectro visible).la sustancia absorbe ciertas longitudes de onda de la luz blanca, y nuestros ojos detectan las longitudes de onda que no se absorben. El color observado se llama el complementario del color absorbido.El azul de bromofenol absorbe la longitud de onda naranja (580-590 nm.) y aparece azul a la vista.El naranja de metilo absorbe la longitud de onda azul (460-470 nm.) y aparece naranja a la vista.

Tabla 4. Colores de Luz VisibleAnalizando los datos obtenidos a partir de la mezcla de colorantes se observa un fenmeno muy interesante, observamos que la grfica de absorbancia contra longitud de onda es en realidad una superposicin de las respectivas grficas del azul de bromofenol y el naranja de metilo. Como mencionamos anteriormente, el azul de bromofenol absorbe luz naranja, por lo que se ve azul, mientras que el naranja absorbe luz azul, por lo que se ve naranja, al mezclarlos, sera lgico que de algn modo se complementaran absorbiendo de esta manera un amplio rango de luz visible, explicando as el color marrn oscuro, observado durante la prctica.

PARTE II. Demostracin de la Ley de BeerTras completar el proceso anterior, hemos procedido a preparar 5 soluciones de cada colorante siguiendo el siguiente protocolo:

Tabla 5. Protocolo de preparacin de Cantidad de Colorante y Cantidad de Agua.

Calculando la concentracin molar de estas soluciones obtenemos que:

AZUL DE BROMOFENOLTubo No.1C1V1=C2V2

Tubo No.2C1V1=C2V2

Tubo No.3C1V1=C2V2

Tubo No.4C1V1=C2V2

Tubo No.5C1V1=C2V2

ANARANJADO DE METILOTubo No.1C1V1=C2V2

Tubo No.2C1V1=C2V2

Tubo No.3C1V1=C2V2

Tubo No.4C1V1=C2V2

Tubo No.5C1V1=C2V2

Tubo No.Azul de BromofenolAnaranjado de Metilo

1

2

3

4

5

Tabla 6. Concentraciones de Amaranjado de Metilo y Azul de Bromofenol para cada tubo.

Posteriormente, hemos sometido las soluciones de cada colorante a una luz cuya longitud de onda fuese la ms propensa a ser absorbida por el colorante (460 nm para el naranja de metilo y 580 nm para el azul de bromofenol) y hemos medido la absorbancia resultante con la ayuda del espectrofotmetro, estos fueron los datos obtenidos:

Azul de bromofenolConcentracin moles/Labsorbancia

0,00001490,950

0,00001190,778

0,000008950,549

0,000005970,392

0,000002980,192

Tabla 7. Valores de concentracin de Azul de Bromofenol de acuerdo a la Absorbancia.

Grfica 4. Curva de Absorbancia vs. Concentracin para el Azul de Bromofenol.

Grfica 5. Curva de Absorbancia vs. Concentracin para el Azul de Bromofenol con la regresin lineal de mnimos cuadrados realizada en Excel y la ecuacin de la recta.Naranjado de metiloConcentracin moles/LAbsorbancia

0,00003050,764

0,00002440,617

0,00001830,469

0,00001220,309

0,00000610,16

Tabla 8. Valores de concentracin de Anaranjado de Metilo de acuerdo a la Absorbancia.

Grfica 6. Curva de Absorbancia vs. Concentracin para el Anaranjado de Metilo.

Grfica 7. Curva de Absorbancia vs. Concentracin para el Azul de Bromofenol con la regresin lineal de mnimos cuadrados realizada en Excel y la ecuacin de la recta.Ambas curvas presentan un comportamiento exponencial caracterstico de la Ley de Beer. Se evidencia como a medida que aumenta la concentracin aumenta tambin la absorbancia. Para el caso del azul de bromofenol se obtiene un coeficiente de extincin molar de 63983 y para el anaranjado de metilo un coeficiente de 25255. Por su parte, tal y como lo establece la Ley de Beer la forma de la funcin puede escribirse de forma general como:Adicional a las soluciones utilizadas en el procedimiento anterior, se determin la absorbancia de una solucin de azul de bromofenol y de anaranjado de metilo, ambas con concentraciones desconocidas, para determinar su concentracin tan solo es necesario tomar como referencia una solucin para cada color de las utilizadas en el punto anterior y as poder determinar la absorbancia especfica. Recordemos que la ley de Beer-Lambert establece que:

Donde E es extincin o absorbancia, k es la absorbancia especfica, C es la concentracin del colorante, y l es la longitud del medio que la luz debe atravesar. De manera que:

Reemplazando los valores conocidos, obtenemos que:

De esta manera se obtuvieron las concentraciones para las soluciones incgnitas de azul de bromofenol y anaranjado de metilo.

LABORATORIO CROMATOGRAFIA DE CAPA FINAPARTE I. SOLUBILIDAD DE LA GLICINAEn este experimento, se agregaron cristales de glicina a diferentes compuestos. A continuacin se describen las observaciones realizadas:Solvente UtilizadoObservaciones

HCl 0,1MLos cristales de glicina en contacto con el cido clorhdrico se disuelven completamente dando como resultado una solucin.

EtanolLos cristales de glicina no se disuelven formando una segunda fase, pues los cristales se depositan en el fondo del tubo de ensayo y se forma una frase sobrenadante

CloroformoA simple vista los cristales de glicina no producen ninguna reaccin, pero observando detenidamente, se aprecia que los grnulos de glicina se hacen ms pequeos y ms finos, y por consiguiente se forma una segunda fase.

Agua destiladaLos cristales de glicina en contacto con el agua se disuelven pero no totalmente, aproximadamente un 25% quedando unos pocos grnulos en el tubo de ensayo.

Tabla 9. Observaciones para cada solvente utilizado.A partir de estos resultados podemos ordenar los solventes utilizados de mayor a menor capacidad de diluir los cristales de glicina de la siguiente manera:1. cido clorhdrico2. Agua destilada3. Cloroformo4. EtanolEsto nos permite afirmar que los cristales de glicina se comportan de manera diferente al hacer contacto con determinados solventes. PARTE II. REACCIN CON LA NINHIDRINA.Estos fueron los resultados observados:Aminocido utilizadopH aproximadoColoracin Adquirida

Glicina6Violeta

Tirosina6Incoloro, con precipitado blanco.

Prolina6Amarillo

Tabla 10. Coloracin Adquirida y pH aproximado para cada Aminocido utilizado.Gracias a los datos obtenidos se puede decir que los aminocidos que reaccionaron con la ninhidrina fueron la glicina y la prolinaLa ninhidrina descarboxila por oxidacin los a -a.a. a CO2 y un aldehdo, formndose un complejo de color azul-prpura (l : 570 nm). Los a.a. no a , prolina e hidroxiprolina, producen un color amarillo con ninhidrina. PARTE III. PRUEBA DE NITROPRUSIATO.Al momento de realizar este procedimiento, la cistena produjo una coloracin rojiza mientras que los dems aminocidos presentaron una coloracin naranja plidaEstos resultados se pueden explicar gracias a la presencia o ausencia del grupo tiol en los aminocidos utilizados, un tiol es un compuesto que contiene el grupo funcional formado por un tomo de azufre y un tomo de hidrgeno (-SH). La cistena al ser un tiol reacciona con el nitroprusiato de sodio. Como manifestacin de tal reaccin se presenta una coloracin roja, evidencindose la presencia de azufre e hidrgeno propio de dicho aminocido. En el caso de la glicina y la metionina se obtiene un color naranja plido lo que indica que la prueba no es positiva.PARTE IV. CROMATOGRAFA DE CAPA FINA.Tras colocar la placa de slica gel en la fase mvil y dejarse en reposo por varias horas, observamos que la fase mvil se desplaz verticalmente a travs de la placa de slica gel (debido al proceso de capilaridad, el mismo que usan las plantas para transportar agua). Despus de haberse secado el eluente de la placa, se roci con ninhidrina y se calent, al hacer esto se formaron manchas de colores en la placa correspondientes a los diferentes aminocidos que fueron arrastrados por el eluente, esta adquisicin de color se explica mediante la siguiente reaccin qumica.Como se observa en la siguiente fotografa, los aminocidos aparecen como manchas prpura sobre un fondo ligeramente amarillento. Sin embargo, la prolina (que no produce amonio libre al reaccionar con ninhidrina) genera una mancha de color amarillo obscuro.

Figura 1. Fotografa de placa para cromotografa de capa fina usada en el laboratorio.

A continuacin se expone de manera organizada los datos cuantitativos obtenidos a partir de la cromatografa:

Tabla 11. Datos cuantitativos de acuerdo a la cromatografa.* Xaa: distancia recorrida por el aminocido Xsolvente: distancia recorrida por el solvente

En la solucin denominada MIX se encuentran tres diferentes aminocidos correspondientes a la prolina, la metionina y la fenilalanina; esto lo pudimos comprobar comparando los tres diferentes recorridos con los dems aminocidos y observando que realizaban recorridos de longitudes similares a los de otros aminocidos, as es como constatamos que el aminocido 1 se desplazaba igual distancia que la prolina, lo que significaba que las7u dos eran las mismas sustancias, lo mismo pas con el aminocido 2 que se desplazaba igual distancia que la metionina y el aminocido 3 se desplazaba la misma distancia que la fenilalanina.Aminocido 1: prolinaAminocido 2: metioninaAminocido 3: fenilalaninaEn lo que respecta a los aminocidos puros, su comportamiento lo podemos explicar a partir de las caractersticas de su radical, pues como vemos en la tabla de resultados, los aminocidos con radicales sin cargas se movieron ms a travs de la placa de slica gel, esto es debido a que la fase mvil era de carcter apolar, por lo que estos aminocidos eran arrastrados por esta en su paso a travs de la placa; por otro lado, los aminocidos que menor desplazamiento mostraron eran predominantemente polares, por lo que no eran fcilmente disueltos por la fase mvil y como consecuencia de ello su desplazamiento fue menor.INFORME REACCIONES GENERALES DE LAS PROTEINASPara la realizacin de todos los experimentos que se expondrn posteriormente, se han utilizado 3 protenas (albmina, casena y gelatina), las cuales han sido sometidas a diferentes agentes externos para observar como varan algunas de sus propiedades y determinar de esta manera una o varias de sus caractersticas. A continuacin se describen los resultados obtenidos en cada experimento.PARTE I (PRUEBA DE BIURET)En este experimento, se han utilizado 2 mL de cada protena, a las que se le han aadido 5 gotas del sulfato de cobre y seguidamente 2 mL de NaOH. Tras mezclarse correctamente se observaron estos resultados:ALBMINACASENAGELATINA

1. Despus de aadir 5 gotas de sulfato de cobre 10 g/L a la protena albmina, adquiere una coloracin azul muy desvanecida siendo semejante al color blanco y se mantuvo con espuma antes y despus de la agitacin 2. Luego de agregarle los 2 ml de NaOH 10M y mezclar vigorosamente se detecta un color violeta no muy intenso. 3. Se concluye que no se renaturilaz.1. Despus de aadir 5 gotas de sulfato de cobre 10 g/L a la protena casena, se puede observar una coloracin violeta clara.2. Luego de agregar los 2 ml de NaOH 10M y mezclar vigorosamente se observa una coloracin violeta clara , pero ms oscura que la albmina.3. Se concluye que si se renaturaliz

1. Despus de aadir 5 gotas de sulfato de cobre 10 g/L a la protena gelatina, no se observa ningn tipo de coloracin, la sustancia sigue siendo transparente.2. Luego de agregar los 2 ml de NaOH 10M y mezclar vigorosamente se observa una coloracin violeta oscuro.3. Se concluye que no se desnaturaliz por completo.

Tabla 12. Resultados de prueba de Biuret para Albumina, Caseina y Gelatina.Las pruebas de biuret con la albumina, la casena y la gelatina arrojaron resultados positivos. Las tres protenas mencionadas antes son protenas globulares debido a que se encuentran enrollados adoptando forma esfrica por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos (Cuso4) del reactivo en el medio alcalino proporcionado por el hidrxido de sodio (NaOH) consiguiendo que su disposicin espacial sea diferente y consiga un color violeta. La intensidad del color es proporciona la concentracin de protenas. Al comparar los resultados se observa que las protenas adquirieron diferentes intensidades de violeta, de ms oscuro a ms claro: gelatina, casena y albmina. Esto se debe a que la prueba de Biuret reacciona con compuestos que tienen ms de 2 enlaces peptdicos, lo que significa que las protenas albmina, casena y gelatina cumplen con esta caracterstica, dejando en claro que la gelatina tiene ms enlaces peptdicos que las otras dos debido a que su coloracin fue de un violeta ms oscuro, seguido por la casena y con menos enlaces peptdicos la albmina. Las cadenas de protenas que hay en la albumina se encuentran enrolladas adoptando una forma esfrica. Se denominan protenas globulares. Se somete a Hidrxido de sodio al 10% que no participa en la reaccin pero es fundamental para que proporcione el medio alcalin necesario para la reaccin de biuret y se somete a una solucin de sulfato de cobre que reacciona con la protena presente en la en la solucin de albmina, haciendo que esta pierda su disposicin en el espacio y esta se torne de color violeta.

PARTE II (DESNATURALIZACIN DE PROTENAS POR CALOR Y pH)Estos fueron los resultados obtenidos:Albmina

HClNaOHAgua

Tras el cambio de pHLa solucin se torn levemente blancuzcaNo se observaron cambiosNo se observaron cambios

Tras el calentamientoSe observa claramente la formacin de dos fases. El pH fue de 2-3La solucin se torn blancuzca pero menos que las dems soluciones. El pH fue de 12-13La solucin se torn blancuzca pero menos que la solucin cida y menos que la solucin bsica. El pH fue de 8

Tras la neutralizacinNo se observaron cambios adicionalesNo se observaron cambios adicionalesNo se observaron cambios adicionales

Tabla 13. Resultados de Desnaturalizacin de protenas por calor y pH para Albumina.

Gelatina

HClNaOHAgua

Tras el cambio de pHNo se observaron cambiosNo se observaron cambiosNo se observaron cambios

Tras el calentamientoNo se observaron cambiosEl pH fue de 1No se observaron cambiosEl pH fue de 14No se observaron cambiosEl pH fue de 5

Tras la neutralizacinNo se observaron cambiosNo se observaron cambiosNo se observaron cambios

Tabla 14. Resultados de Desnaturalizacin de protenas por calor y pH para Gelatina.

Casena

HClNaOHAgua

Tras el cambio de pHLa solucin se torn blanca y empez a precipitarseNo se observaron cambiosNo se observaron cambios

Tras el calentamientoNo se observaron cambios adicionales.No se observaron cambiosNo se observaron cambios

El pH fue de 3El pH fue de 13El pH fue de 8

Tras la neutralizacinLa precipitacin finaliz y se formaron dos fases muy evidentesLa solucin se torn blancuzcaLa solucin se torn blancuzca

Tabla 15. Resultados de Desnaturalizacin de protenas por calor y pH para Caseina.Para empezar, debemos resaltar el hecho de que una de las protenas, la gelatina, no mostr signos de reaccin alguno, en el caso de la gelatina esto se explica porque la gelatina se obtiene mediante la desnaturalizacin del colgeno presente en el tejido conectivo de diferentes animales (piel, cartlago, ligamentos, tendones, etc) a travs de diferentes procesos como el calentamiento o la exposicin a pH extremos (el mecanismo ms comn en la industria), por ende, la protena que hemos utilizado en el experimento ya se encontraba desnaturalizada, es decir, haba perdido su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria, y como es lgico, una redesnaturalizacin no era posible. Sin embargo, otras protenas como la albmina y la casena si mostraron signos de reaccin, a continuacin se buscar explicar el comportamiento de estas protenas:La albmina es una protena que se encuentra principalmente en la clara de los huevos y es susceptible (es decir, se desnaturaliza) a diferentes factores, pero el ms comn es el calor, esto lo observamos cotidianamente cuando fremos un huevo, esto sucede gracias a que al calentarse, la albmina en la clara se coagula y se torna blanca o, en trminos comunes se cocina; en nuestro experimento hemos observado que todas las soluciones con albmina al calentarse tomaron una coloracin blanca (algunas ms que otras) y se empez a observar una precipitacin. La diferencia en las coloraciones se debe a que la albmina presenta un punto isoelctrico de 4,9, es decir, cuando el pH de la albmina se encuentra cerca de 4,9, la solubilidad de esta es mnima, por ello, en el tubo de pH ms cercano al pI (el que contena la albmina con HCl) se observ una precipitacin ms obvia, porque la protena se haba tornado insoluble y se haba precipitado los dems tubos al tener pH alejados del punto isoelctrico tan solo mostraban los efectos del calentamiento.La casena, por otro lado, es una protena muy comn en la leche bovina, y al contrario de la albmina, no se desnaturaliza por el calor, sino por cambios en su pH, esto tambin lo podemos observar en la cotidianidad, pues observamos que al hervir leche, ningn cambio se observa, mientras que si le agregamos suficiente jugo de limn como para acercar su pH a su punto isoelctrico (4,6), esta se precipita muy claramente; en nuestro experimento obtuvimos resultados muy similares, la solucin de casena a la que se le agreg HCl (con un pH de aprox. 2 3) se precipit formando dos fases muy bien definidas (una blanca y una transparente), mientras que las dems no mostraron cambios ni al modificar su pH ni al calentarse.

PARTE III (PRECIPITACIN POR METALES PESADOS)Para la realizacin de este experimento se han aadido a 4 tubos de ensayo 2mL de cada protena, posteriormente se le aadi sulfato de cobre a cada tubo y por ltimo se satur cada solucin con el metal. Estos fueron los resultados observados durante esta prctica:

AlbuminaCasenaGelatina

Se vuelve celeste lechoso con poco precipitado, al aadirle el exceso de reactivo la solucin sigue igual, cuando pasa el tiempo el precipitado se va al fondo del tubo de ensayo formando dos fases. Se presenta una desnaturalizacin irreversibleLa solucin se torna celeste lechoso un poco oscuro y no hay presencia de precipitado, al aadirle el exceso de sulfato de cobre se vuelve azul cielo con mucho precipitado, el precipitado se va al fondo del tubo de ensayo formando dos fases. Se presenta una desnaturalizacin irreversibleLa solucin se torna transparente sin presencia de precipitado, al aadir el sulfato de cobre la solucin se vuelve ms azul sin precipitado.No se present desnaturalizacin

Tabla 16. Resultados de Desnaturalizacin de protenas por calor y pH para Caseina.

Cuando una Protena tiene su estructura "Normal" u Original, se le llama nativa. Todos sus enlaces Intermoleculares, estn intactos (Puentes de Hidrgeno, puentes disulfuro, etc.). Cuando algn factor, rompe estos enlaces, y la Protena pierde su estructura Cuaternaria, a eso se le llama Desnaturalizacin.

En el caso de las sales de metales pesados, su adicin a soluciones de protenas dbilmente alcalinas, produce la precipitacin de la protena, debido a que las protenas en forma aninica se neutralizan por los iones de los metales pesados y precipitan.

PARTE IV (PRECIPITACIN POR REACTIVOS ACDICOS)Se aadieron a cuatro tubos de ensayo 1mL de las protenas utilizadas en los anteriores experimentos. Despus, se aadieron 10 gotas de cido pcrico a cada tubo. Como manifestacin de la adicin de cido pcrico a cada una de las protenas y al pptido, se da la formacin de un precipitado que evidencia la nivelacin de las cargas, teniendo en cuenta que el reactivo acdico posee una carga negativa y las protenas y el pptido se encuentran cargados positivamente.Despus de la adicin del cido pcrico y de la formacin del respectivo precipitado se procedi a aadir a cada tubo hidrxido de sodio (NaOH) 1M lo que ocasion la desaparicin completa del precipitado o del aspecto turbio y lechoso, evidencindose as la afinidad qumica del cido pcrico con el NaOH y la disociacin de las protenas y el pptido. A continuacin se exponen ms detalladamente los resultados obtenidos en el experimento:ALBUMINACASEINAGELATINA

CIDO PRICO CONCENTRADO(5 gotas)Se observa turbidez y precipitado. Al agitar se mantiene la turbidez y el precipitado.Se observa turbidez y precipitado.Al agitar se vuelve traslcido y no se ve precipitado.Se observa traslcido y no hay precipitado. Al agitar mantiene de esta manera.

CIDO PRICO CONCENTRADO(5 gotas)Se observa ms turbidez y ms precipitado. Al agitar se mantiene de esta manera.Se observa turbidez y precipitado. Al agitar se mantiene la turbidez y el precipitado.Se observa algo de turbidez y precipitado. Al agitar queda en una turbidez intermedia.

HIDRXIDO DE SODIOCon una gota de NaOH se trata de renaturalizar, pero para que se renaturalice se necesit agitar el tubo de ensayo. Qued traslcido aunque se observan unas pequeas partculas.Con una gota de NaOH se renaturaliza parcial mente y con agitarla un poco se renaturaliza por completo.Al entrar en contacto la gota de NaOH se renaturaliza de inmediato y se vuelve completamente traslcido.

Tabla 17. Resultados de precipitacin de protenas por reactivos cidos para la Albumina, Caseina y Gelatina.

Se puede apreciar cmo la protena que menos se desnaturaliz y que se renaturaliz inmediatamente al agregar la base fue la gelatina ya que es una protena primaria con tendencia a secundaria por lo tanto trata de desnaturalizarse pero no lo hace y por eso al agregar la base se renaturaliza de inmediato. La Albumina y la Cisteina s se desnaturalizaron con el cido pcrico, la que se desnaturaliz ms fcilmente fue la Albumina y luego la Cisteina.

CONCLUSIONESLa absorbancia es la capacidad que tienen algunos compuestos para absorber la radiacin electromagntica, se pudo observar en la prctica cmo, dependiendo de la concentracin y la longitud de onda del rayo de luz aplicado, puede alcanzar un punto mximo de absorcin.En la prctica donde se realiz la espectrofotometra se calcul las longitudes de onda de tres sustancias las cuales permitieron que a diferentes concentraciones se pudiera calcular la absorbancia de las mismas y as determinar su concentracin de manera numrica mediante la ley beer-lambert, con esto se pudo concluir que a mayor concentracin, mayor ser la absorbancia.Detectando las propiedades de algunos aminocidos, tales como solubilidad y capacidad para reaccionar al ser expuestos a un reactivo especfico, se puede entender la gran importancia de su estudio para comprender el papel que tienen en las reacciones qumicas, en la produccin de soluciones y para formar diferentes protenas. As, Las propiedades cualitativas y cuantitativas de los aminocidos muestran la capacidad que tienen de participar en una amplia variedad de reacciones qumicas, tales como: esterificacin, halogenacin, reduccin, alquilacin, acilacin, acetilacin, entre otras; por lo tanto es posible clasificarlos de acuerdo a las diferencias y semejanzas en cuanto a las propiedades fsicas identificadas.Identificamos una protena como una cadena de aminocidos cuya secuencia es especfica que comienza a plegarse sobre s misma utilizando de otros elementos como colaboradores para adoptar la conformacin espacial necesaria para realizar correctamente su funcin biolgica. Adems identificamos que la prdida de esta conformacin espacial hace que la protena no pueda cumplir con su funcin biolgica y se conoce como desnaturalizacin, y que existe la forma de renaturalizar estas protenas.

ReferenciasAminocidos. (s.f.). Obtenido de http://acemucsc.galeon.com/articulos/Bioquimica/aminoacidos.htmHarris, D. C. (s.f.). Anlisis Qumico Cuantitativo. La Cromatografa en Capa Fina. (s.f.). Obtenido de http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/ChrTLC.htmlPruebas Cualitativas para Aminocidos y Protenas. (s.f.). Obtenido de http://biokimik2011.blogspot.com/2011/09/objetivos-aplicar-pruebas-cualitativas.htmlWikipedia. (s.f.). Obtenido de http://es.wikipedia.org/wiki/TiolCaracterizacin Proteinashttp://www.monografias.com/trabajos98/caracterizacion-proteinas/caracterizacion-proteinas.shtml#ixzz3XZYZ74lmDesnaturalizacin de Proteinashttps://www.academia.edu/6880544/Desnaturalizacion_de_proteinas