DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERÍA AGROPECUARIA

SANTO DOMINGO.

Asignatura: Microbiología.

Estudiantes: Alfonso Avila.

Dennis Macas.

Carlos Vera.

Cristina Carcelén

Nivel: Tercero “B”

Docente: Ing. Gustavo Núñez J. M.Sc

Práctica: N°2

Grupo: 1

Fecha: 09/11/2015

Tema: Esterilización.

Período

Octubre 2015 – Febrero 2016

I. INTRODUCCIÓN.

La eficacia de un proceso de esterilización depende de cómo se realice el proceso en sí y de múltiples factores relacionados con el objeto: estructura física, nivel de contaminación inicial, de limpieza, compatibilidad con el proceso de esterilización, tipo de envoltorio, etc. Todas las fases de un proceso de esterilización limpieza, preparación del equipo, esterilización, almacenaje y transporte deben validarse y controlarse.(Hidalgo, 2004)

La esterilización implica la destrucción de todos los microorganismos, incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones, la desinfección no mata necesariamente a los esporos.(Montufar, 2001)

Pueden alterar y condicionar el proceso de esterilización y derivar al fracaso del mismo. La presencia de proteínas protege a los microorganismos frente a la acción de los agentes esterilizantes, específicamente los químicos. Con el fin de eliminar la materia orgánica y reducir la carga microbiana y garantizar con ello la eficacia del proceso de esterilización, el material debe descontaminarse previamente mediante una limpieza exhaustiva. Algunos autores demuestran que después de una limpieza minuciosa de material de difícil acceso contaminado artificialmente fibroscopios, agujas espinales se logra una reducción microbiana de entre un 99.90% y un 99.99%. (Montufar, 2001)

II. OBJETIVOS:

2.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer las técnicas y principios de esterilización de materiales, instrumentos y otros insumos de laboratorio.

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Cumplir las recomendaciones de utilización de las técnicas de esterilización específicas para cada elemento. .

Operar adecuadamente los equipos destinados a la esterilización en laboratorio

III. REVISION DE LITERATURA.

3.1 Esterilización

La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los

microorganismos viables presentes en un determinado material.

La esterilización microbiológica Puede desarrollarse a través de diferentes métodos

químicos y físicos. Una alternativa frecuente es someter aquello que se quiere esterilizar

a altas temperaturas que causen la muerte de los microorganismos. (Silóniz., 2010)

3.2 CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Agentes físicos El calor se puede aplicar como

agente esterilizante de dos formas: el calor

húmedo el cual destruye a los microorganismos

por desnaturalización de las proteínas y el calor

seco que destruye a los microorganismos por

oxidación de sus componentes celulares. Así

tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden

utilizar para la esterilización de materiales

termolábiles, como por ejemplo materiales plásticos, y las radiaciones no ionizantes,

como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control (Silóniz., 2010)de áreas

cerradas.

Agentes mecánicos La filtración permite la remoción de todos los microorganismos

presentes en un líquido o un gas reteniéndolos sobre la superficie de un material.

(Silóniz., 2010)

Agentes químicos Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes

esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas

capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas,

membranas, etc.) (Silóniz., 2010)

3.3Medios de cultivos:

El agar sangre es un medio de aislamiento especialmente diseñado para facilitar el

crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positvas y todas las especies

encontradas en muestras de origen clínico. Contiene una mezcla de peptonas

particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes 

La presencia de sangre permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la

orientación hacia la identificación bacteriana. (Arroyo, 2013)

Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de

enterobacterias y bacilos Gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares

y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacteriasGram positivas y de algunas Gram

negativas exigentes. (Arroyo, 2013)

Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer

ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comité de la Organización Mundial de la

Salud sobre estandarización de pruebas de susceptibilidad. (Arroyo, 2013)

Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de

enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares

y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram

negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo

neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de

rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales

biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el

medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no

fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (Arroyo, 2013)

Agar glucosa de Sabouraud Este medio fue desarrollado para el cultivo de hongos

patógenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad

se recomienda sólo para el aislamiento primario de dermatófitos, con el agregado de

cicloheximida y cloranfenicol. (Arroyo,

2013)

Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa

es de la marca DIBICO, y es conocido como

PDA por sus siglas en ingles, tiene la

infusión de papa como fuente de almidones y

la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita

el crecimiento de las bacterias. Cuando se va a usar para el recuento de hongos y

levaduras, agregar al medio de cultivo una vez esterilizado y enfriado aproximadamente

a 45ºC, 14 ml de una solución estéril de ácido tartárico al 10% para obtener un pH

aproximado de 3.5. Sembrar el medio de cultivo por estría en la superficie o adicionar la

muestra para la técnica de vaciado en placa. Incubar hasta 7 días a temperatura

ambiente. (Arroyo, 2013)

IV. MATERIALES Y EQUIPOS.Equipos

Estufa de esterilización Cámara de flujo laminar Autoclave Cocineta eléctrica Parrilla de agitación.

Materiales

Probetas Vasos de precipitados Barrilla de ajitacion Caja petri Barrilla magnetica de agitación . Termometro Papel de encapuchado.

Reactivos e insumos

PDA. Alcohol. Leche fresca. Agua destilada.

V. PROCEDIMIENTO.

Como primer paso se conoce las técnicas correspondientes para proceder a una

esterilización adecuada por lo cual se realiza los pasos correspondientes:

1. Limpiar las cajas Petri de manera que no tenga ninguna suciedad.

2. Tener abierto el papel estraza.

3. Ubicar la caja Petri en el centro del papel estraza.

4. Realizar los dobles correspondientes.

5. Ubicar en la estufa esterizadora.

Como segundo proceso se procede a la elaboración del PDA para ser ubicado en la

autoclave para preparar el medio de cultivo y la pasterización de la leche.

La pasterización de la leche se la hizo con 10 litros para ello para que cumpla un

buen proceso debe de llegar a los 75°C, medidos con u termómetro de laboratorio,

luego se pasa por una fuente fría se adiciona las bacterias saprofitas Gram + que

ayudan a la elaboración de yogur, luego de 24 horas se aplica el saborizante

Para la elaboración del medio de cultivo se llena un vaso de precipitación con 240

ml de agua destilada a 80°C cuando ya está lista se aplica 9,36 gramos de PDA

manteniendo la temperatura caliente, para que se convierta en una mescla uniforme

se utilizó una varilla magnética para que la mescla sea sin desgate físico y sea

contante hasta terminar el proceso donde los grumos de PDA sean disueltos. Al

tener el medio de cultivo listo del vaso de precipitación se distribuyó de manera

homogénea al número grupos en laboratorio para que sean utilizados en las cajas

Petri.

VI. RESULTADOS.

Con la presente práctica se pudo realizar un correcto encapuchado de cajas Petri con

el papel estraza para que puedan ser ubicados en la estufa completando con el

proceso de esterilización.

Se realizó un medio de cultivo para microorganismos ente este caso con PDA, para

luego ser ubicados en la autoclave para que sea esterilizado.

Se hizo una buena pasterización de la leche con todos los requisitos posibles para un

buen proceso a 75° C.

VII. CONCLUSIONES.

Se conoció las técnicas de preparación, conservación, y uso de los

medios de cultivo para el crecimiento y desarrollo de microorganismos

existentes en el ambiente.

La técnica de esterilización de cajas Petri fue la más adecuada siguiendo

los pasos del docente del área.

Las técnicas de dispensación de medios de cultivos en cajas petri se

aprendió con éxito los procedimientos adecuados.

Se preparó medio de cultivo con PDA.

El procedimiento de pasterización fue el más correcto posible.

VIII. Recomendaciones.

Pesar bien los medios de cultivos para mezclar con el agua ya que el exceso o el

escás del medio no formara un medio de cultivo óptimo.

Esterilizar bien los envases de vidrio que contienen los medios de cultivos para evitar inconvenientes con la pureza del medio de cultivo

Tener a disposición los implementos adecuados de higiene tales como mascarillas, guantes etc.

Tener mucho cuidado al momento de manipular las herramientas o aparatos destinados a la esterilización

Al momento de ingresar a la cámara de flujo laminar saber cubrir bien las cajas con el medio de cultivo , ya que podremos contaminar fácilmente la muestra

IX. BIBLIOGRAFÍAArroyo, P. (2013). Medios de Cultivos. /asignatura.us.es/.

Hidalgo, T. (2004). Esterilizacion. Recuperado el 31 de 10 de 2015, de http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part6/6.pdf

Montufar, S. (2001). Medios de esterilización. Esterilización.

Silóniz., B. P.-U. (2010). Metodología de esterilización en el laboratorio microbiológico. Madrid.: Reduca.

X. ANEXOS

XI.

CUESTIONARIO.¿Cuál es la temperatura adecuada para la pasterización de la leche?

75° C

ARIAS 2015