A 1979 Elscrit'rf North-IIollanLl Biomeclical Press(-ltrorrtiunt in Nutritiort and Metaholisml). Sltopcr,ttt antl J. Hubert, editors

J . ] :UTRON ACTIVAT ION ANALYSIS AS A STANDARD REFERENCE METHOD FOR CHROMIUM IN

B I O L O G I C A L M A T E R I A L S

R . G . V . H A N C O C K

S L 0 [ , J P 0 K E R e a c t o r F a c i l i t y , U n i v e r s i t y o f T o r o n t o , T o r o n t o , 0 n t a r i o , M 5 5 1 A 4

I NTRODUCT I ON

T h e r e s e e m s t o b e n o c o n c e n s u s a m o n g s t r e c e n t r e s e a r c h e r s a s t o w h i c h

p a p e r ( s ) h a v e d e f j n i t i v e l y e s t a b ' l i s h e d c h r o m i u m a s a n e s s e n t i a l t r a c e e l e m e n t .

H o w e v e r , m o s t t u r n t o w o r k p u b l i s h e d i n t h e i 9 6 0 s f o r c o n f i r m a t i o n o f

c h r o m ' i u m ' s i m p o r t a n c e a s t h e i r j n c e n t i v e t o p u r s u e t h ' i s e l u s i v e e l e m e n t l - 1 3 .

T h e s e a r c h c o n t i n u e s f o r s u ' i t a b l e a n a l y t i c a l t e c h n i q u e s t o m a k e r e l i a b l e

m e a s u r e m e n t s o f l o w c o n c e n t r a t i o n s o f c h r o m i u m . T h e s c i e n t i f i c c a p a b i l i t y t o

m a k e s u c h m e a s u r e m e n t s d e p e n d s b o t h o n t h e i n g e n u i t y o f r e s e a r c h e r s a n d o n

t h e q u a l i t y o f t h e a n a l y t i c a l t o o l s u s e d . A s n e w a n d m o r e p o w e r f u l e q u i p m e n t

b e c o m e s a v a j l a b l e , t h e b u r d e n o f q u a n t i f y i n g c h r o m i u m h a s b e e n s o m e w h a t

ame l i o ra ted .

P a p a d o p o u l o u " t u J . 1 4 , i n I 9 7 6 , l i s t e d s p e c t r o p h o t o m e t r y , X - r a y f l u o r -

e s c e n c e , n e u t r o n a c t j v a t i o n a n a l y s i s ( N A A ) a n d o t h e r s l i k e c o u l o m e t r i c t ' i t r i -

m e t r y , c a t a l y t i c d e t e r m ' i n a t i o n s , a n d a t o m i c a b s o r p t j o n s p e c t r o s c o p y a s t h e

i m p o r t a n t a n a l y t i c a l t e c h n i q u e s i n t h ' i s f i e l d . A m o r e r e c e n t p a p e r b y S h a p c o t t

e t a l . l r a l l u d e d t o t h e u s e o f s p a r k s 0 u r c e m a s s s p e c t r o m e t r y , e m i s s i o n s p e c t r o -

s c o p y , n e u t r o n a c t i v a t i o n a n a l y s i s , g a s I i q u i d c h r o m a t o g r u n f l , c h e m i l u m i n e s c e n c e

a n d a t o m i c a b s o r p t i o n s p e c t r o s c o p y . B y 1 9 7 8 , d e G o e i j e t a r . r o f o c u s e d o n

n e u t r o n a c t j v a t j o n a n a l y s i s a n d a t o m ' i c a b s o r p t i o n s p e c t r o s c o p y a s t h e t e c h -

n r q u e s w h i c h m e e t t h e r e q u i r e m e n t s o f s e n s i t i v i t y a n d a c c u r a c y .

B u t l o w c h r o m ' i u m c o n c e n t r a t i o n s ' i n

b i o l o g i c a l m a t e r i a l s a r e s t i l l d ' i f f j c u l t

t o d e t e c t . A t t h e 1 9 7 8 V j e n n a S y m p o s i u m o n N u c l e a r A c t i v a t j o n T e c h n i q u e s ' i n t h e

L i f e S c ' i e n c e s , a n u m b e r o f r e s e a r c h e r s i n v a r i o u s f i e l d s w e r e u n a b l e t o

measu re ch ron l i um a l ong w j t h o the r e l emen ts .

L a h o m a a a n d E k l u n d " , w o r k i n g w i t h h u m a n c a t a r a c t l e n s e s , r e p o r t e d t h a t

c h r o m ' i u m ( a l o n g w i t h s o m e o t h e r e l e m e n t s ) f e l l b e l o w t h e ' i r d e t e c t i o n l i m i t

o f 3 . 6 p p m f o r m o s t s a m p i e s . T h e y a l s o r e p o r t e d t h a t " v e r y l i t t l e i n f o r m a t i o n

j s t o b e f o u n d o n e l e m e n t s ( s u c h a s C r ) o c c u r r i n g i n N B S B o v ' i n e L i v e r " .

J L

J Z

1 aS a k u r a i e ! _ e r . ' " a n a l y z e d 1 9 e l e m e n t s ' i n h u m a n h a i r b u t d i d n o t i n c l u d e

c h r o m i u m .

Cha t topadhyay e t a r . 19 unu ' l y zed 23 e l emen ts i n cod musc l e and I ' i ve r samp l es .

A g a i n c h r o m i u m w a s n o t r e p o r t e d .

H o w e v e r , A l l e n e t r l 2 0 r e p o r t e d c h r o m i u m v a l u e s i n t u m o r a n d c o n t r o l a n i m a l

t i s s u e s . I n t h e i r e x p e r i m e n t a l p r o c e d u r e t h e y s t a t e d " A l o n g w i t h e a c h s e t o f

s a m p l e s a m e a s u r e d p o r t i o n o f t h e N B S S R M - 1 5 7 7 B o v i n e L i v e r w a s i n c l u d e d a s

t h e s t a n d a r d " . S ' i n c e n o o t h e r m e n t i o n o f s t a n d a r d s ' i s r n a d e h e r e , c o u l d i t b e

a s s u m e d t h a t t h e B o v " i n e L i v e r w a s e m p l o y e d a s a c h r o m i u m s t a n d a r d ?

T h e s e e x a m p l e s i l l u s t r a t e s o m e o f t h e c o m p l e x i t i e s o f f i n d i n g c h r o m i u m a t

l o w l e v e l s . T h e y a l s o j m p l y t h a t o n e m u s t p l a c e t h e a n a l y t i c a l e m p h a s i s o n t h e

c h r o m i u m ( a n d a c c e p t t h e m e a s u r e m e n t o f o t h e r e l e m e n t s a s a b o n u s ) r a t h e r

t h a n c o n d u c t a g e n e r a l s c a n t o m e a s u r e w h a t e l e m e n t s " s h o w u p " .

O n c e s u i t a b l e a n a l y t i c a l t e c h n i q u e s a r e e s t a b l i s h e d ( i n t e r m s o f s e n s i t i v i t y

a n d a c c u r a c y ) f o r t h e p a r t i c u l a r b i o l o g i c a l m a t e r i a l s t o b e s t u d i e d , o n e m u s t

t h e n c o n s ' i d e r t h e s u s c e p t i b i l i t y o f c h r o m i u m t o b e i n g a n a l y z e d . T h j s c o n s i d e r -

a t i o n i n c l u d e s :

1 . p o t e n t i a l o x i d a t i o n s t a t e p r o b l e m s ( C r I I I a n d C r V I ) w h e r e c h e m i c a l

d i s s o l u t . i o n o f t h e s a m p l e j s i n v o l v e d o r w h e r e c h e m j c a l s e p a r a t i o n t e c h n i q u e s

a r e e m p l o y e d .

2 . t h e f o r m a t i o n o f l a b j l e o r g a n o c o m p o u n d s o r c o m p ' l e x e s . S u c h f o r m a t j o n

i s i m p o r t a n t i n s a m p l e p r e p a r a t i o n a n d a n a i y s i s s i n c e c h r o m i u m m a y e s c a p e

d u r i n g a n a l y t i c a l a b u s e o f t h e s a m p l e .

3 . t h e f o r m a t ' i o n o f i n s o l u b l e j n o r g a n i c s p e c i e s , s u c h a s t h e a s s o c " i a t i o n

o f c h r o m i u m w i t h s i l j c a , t h e r e s u l t o f w h i c h i s a n i n c o m p l e t e c h r o m j u m a n a l y s i s .

4 . s a m p l e c o n t a m i n a t i o n b o t h j n s j d e a n d o u t s i d e t h e l a b o r a t o r y e n v j r o n -

n. tent .

I n n e u t r o n a c t j v a t i o n a n a l y s i s , s j n c e t h e t e c h n i q u e d e p e n d s o n n u c l e a r

r a t h e r t h a n e l e c t r o n ' i c p r o p e r t j e s , s t a b l e c h r o m j u m - 5 0 ' i s c o n v e r t e d j n t o

r a d ' i o a c t j v e s l C r i r r e s p e c t i v e o f i t s o x ' i d a t i o n s t a t e . T h e r e f o r e , i n s t r u m e n t a l

n e u t r o n a c t ' i v a t . i o n a n a l y s i s ( I N A A ) i s o x i d a t i o n s t a t e i n d e p e n d e n t . H o w e v e r ,

w h e n d e s t r u c t j v e n e u t r o n a c t j v a t ' i o n a n a l y s i s ( D N A A ) i s e m p l o y e d , w . i t h i t s

p o s t - i r r a d i a t j o n c h e m i s t r y , t h e e x i s t e n c e o f c h r o m i u m j n d i f f e r e n t o x i d a t ' i o n

s t a t e s m a y r e s u l t i n o n l y p a r t i a l c o l l e c t i o n o f t h e r a d ' i o a c t ' i v e c h r o m ' i u m .

O n e m u s t a l s o c o n s i d e r t h e e x i s t e n c e o f l a b j l e c h r o m i u m c o m p o u n d s i n

v a r j o u s b i o l o g i c a l t i s s u e s a s p r o p o s e d b y B e h n e e t a t f l A n u m b e r o f s t u d i e s15.21-25 ,- -

h a v e s h o w n t h a t p r e a n a i y s i s d r y i n g o r a s h i n g o f s a m p l e s u n d e r

u n f a v o r a b l e c o n d i t i o n s c a n l e a d t o m a j o r l o s s e s o f c h r o m i u m p r i o r t o t h e

3 3

a c t u a l a n a l y s i s .

I n N A A t h e b o m b a r d m e n t o f t h e s a n r p l e b y h i g h n e u t r o n ( a n d r ) f l u x e s

g e n e r a t e s h e a t w i t h i n t h e s a m p l e . I n h i g h f l u x i r r a d i a t i o n s i t e s , s a m p l e s

w o u l d c o n t m o n l y s i t a t > 8 0 0 C . F o r a s a m p l e s e a . l e d j n q u a r t z t h e v o . l a t j l e

c h r o m j u t r c o n t p o n e n t c o u l d w e l l b e r e m o v e d f r o m t h e s a m p l e a n d d e p o s i t e d o n t h e

w a l l s o f t h e c o n t a ' i n e r . I f t h i s o c c u r r e d , a s i m p l e s a r n p l e r e m o v a l , b y b r e a k -

i n g t h e v i a l a n d p o u r i n g o u t t h e s a m p l e c o n t e n t s i n t o a n u n j r r a d i a t e d c o n t a i n e r .

w o u l d p r o d u c e l o w c h r o m i u m v a l u e s b o t h i n I N A A a n d D N A A .

A f u r t h e r s o u r c e o f d ' i f f i c u l t r ' e s j s t h e p o s s i b l e e x i s t e n c e o f i n s o l u b l e

c h r o m i u m s p e c i e s a s r e p o r t e d b y d e G o e i j . t r r l b i n N B S B r e w e r s y e a s t . I n

t h i s c a s e r e s u l t s f r o m I N A A w e r e n o t a f f e c t e d , b u t r e s u l t s f r o m D N A A s h o w e d

ch rom i u i n I osses o f up t o 50 -60%

H a v i n g d i s c u s s e d a n u m b e r o f w a y s b y w h j c h c h r o m i u m m a y b e i n a d v e r t a n t l y

l o s t b e f o r e o r d u r i n g a n a l y s i s , a b r i e f m e n t i o n s h o u l d b e m a d e o f t h e t e c h n j q u e s

f o r o b t a i n i n g h i g h c h r o m i u m v a l u e s .

P r o b l e m s i n c a l i b r a t i o n a r i s i n g f r o m t h e a n a l y t i c a l t e c h n i q u e a r e n o r m a l l y

a v o i d a b l e b y c a r e f u l a n a l y t i c a l w o r k a n d n e e d n o t b e d i s c u s s e d i n d e t a ' i l .

A p r o b ' l e m w h ' i c h ' i s m u c h m o r e d j f f i c u l t t o a v o j d o r a s s e s s i s t h a t o f s a m p l e

c o n t a t n i n a t i o n 2 6 . S i n c e o n e i s d e a l i n g w i t h s u b m i c r o g r a m a m o u n t s o f c h r o m i u m ,

t h e r e j s a r e a l p o s s i b i l i t y o f e n v i r o n m e n t a l c o n t a m i n a t i o n b o t h p r i o r t o a n d

d u r i n g a n a i y s i s . I t ' i s h e r e t h a t N A A h a s a p o s s i b ' l e a d v a n t a g e o v e r o t r t e r

a n a l y t i c a l t e c h n i q u e s . 0 n c e t h e s a m p l e i s p a c k a g e d a n d j r r a d i a t e d t h e r e i s n o

f u r t h e r t h r e a t f r o m c o n t a m i n a t i o n , s i n c e N A A d e p e n d s o n t h e p r o d u c t ' i o n a n d

c o u n t i n g o f r a d i o a c t i v e s r C r , a n d p o s t i r r a d i a t i o n c o n t a m i n a t i o n w i t h i n a c t i v es 0 C r d o e s n o t a l t e r t h e s l C r c o n t e n t .

B a s e d o n t h e p r e c e d i n g a r g u r n e n t s , i t w o u l d a p p e a r t h a t I N A A w o u l d b e f a r

n l o r e r e l j a b l e t h a n D N A A a s a s t a n d a r d r e f e r e n c e r n e t h o d f o r a n a l y z i n g c h r o m i u m

a t l o w l e v e l s i n b ' i o l o g i c a l m a t e r i a l s . T h i s c o n c l u s i o n h o l d s t r u e w h e n t h e

c h r o n t i u n l c o n t e n t i s " h i g h " , b u t i s c o r r p r o m i s e d w h e n v e r y l o w c h r o m i u m l e v e l s

a r e s o u g h t b e c a u s e D N A A h a s a h i g h e r s e n s i t i v i t y t h a n I N A A .

W h e n a s a m p l e i s j r r a d ' i a t e d b y n e u t r o n s , a l l t h e e l e n r e n t s i n ' i t a r e a c t -

i v a t e d a c c o r d i n g t o t h e i r n u c l e a r p r o p e r t i e s . i n m a n y c a s e s t h i s r e s u l t s i n

n a j o r q u a n t ' i t ' i e s o f r a d i o a c t i v i t y b e i n g p r o d u c e d f r o m s o d i u m a n d p h o s p h o r u s .

S o d i u m p r o d u c e s t h e h i g h e n e r r y y - r a y e m i t t ' i n g i s o t o p e 2 u N a w i t h a h a l f - l j f e

o f i 5 h o u r s , w h i l e p h o s p h o r u s p r o d u c e s 3 2 P w h ' i c h i s a h i g h e n e r g y [ J e n r i t t e r

w i t h a h a l f - l i f e o f 1 4 . 3 d a y s . T h e 1 3 e n e r g y f r o m t h i s i s o t o p e p r o d u c e s a

b r e m s s t r a h l u n g c o n t i n u u m w h i c h a g a i n t e n d s t o h i d e t h e s n r a l l c h r o m i u m y - r a - y1 4 . 2

' l . 2 1p e a k '

' ' - ' . I n a n a t t e r n p t t o o v e r c o m e t h i s p r o b l e m , B e h n e e t a l . '

1 u s e d a n

3 4

a n t ' i - C o m p t o n s p e c t r o m e t e r c o n s j s t i n g o f a w e l l G e ( L i ) d e t e c t o r s u r r o u n d e d b y

two cy1 i nd r i ca l Na I (T l ) de tec to rs .

T h e p o s s j b i l i t j e s o f s p e c t r a l i n t e r f e r e n c e s h a v e b e e n c o n s ' i d e r e d b y m o s t

r e s e a r c h e r s . E x a m p l e s a r e p r e s e n t e d j n T a b l e 1 .

TABLE 1

SOURCES OF SPECTRAL INTERFERENCE

i so tope H a l f - L i f e y - r a y E n e r g y ( k e v )

1 e 2 1 ' ^

] 0 s R h

t z ztl l;,

t + z p 6

t t c r

l 9 3 n -\ J )

t u N a

3 2 P

7 4 . 4 d

3 5 . 3 h

1 5 5 d

1 1 . 1 d

2 7 . 8 d

3 1 . 5 h

1 5 h

1 4 . 3 d

3 1 6 . 5

3 1 9 . 1

3r9.2

3 1 9 . 4

3 2 0 . 0

3 2 I . 5

1369,2754

H i g h r e s o l u t j o n G e ( L i ) a n d G e d e t e c t o r s h a v e e s s e n t i a l l y r e m o v e d I r

( T , 2 7 4 . 4 d a y s , E r 3 1 6 . 5 k e V ) f r o m t h e l i s t . 1 4 7 N d m a y b e c o m e i m p o r t a n t

i f o n e i s s t u d y " i n g v e g e t a t i o n o r o t h e r s o i l a s s o c i a t e d s a m p l e s . t o s q 6

a n d t s s g r a r e p r o b a b l y t o o s h o r t - ' l i v e d t o c a u s e p r o b l e m s .

P o s s i b l e i n t e r f e r e n c e s a r j s i n g f r o m t h e m o d e o f p r o d u c t j o n o f s l C r c a n a l s o

b e i m p o r t a n t . T h e t h r e e p r o d u c t i o n m o d e s a r e l i s t e d i n T a b l e 2 a n d h a v e b e e n_ 2 4

s t u d i e d b y P a r r '

TABLE 2

P R O D U C T I O N M O D E S F O R 5 1 C T

t o c r ( n ,

s 4 F e ( n ,

t t M n ( n ,

v )

o )

p /

( t ^- ' L r

t i c r

t t c r

H e r e p o r t e d t h a t a s i g n i f i c a n t a n a l y t i c a l e r r o r c o u ' l d c o m e f r o m t h e ( n , s )

r e a c t j o n w i t h s q F e i n I i v e r a n d w h o l e b l o o d s a m p l e s .

I n D N A A a n u m b e r o f c h e m i c a l s e p a r a t i o n t e c h n i q u e s h a v e b e e n r e p o r t e d . T h e s e

i n c l u d e s e p a r a t i o n b y p r e c i p i t a t i o n 2 7 , s o l v e n t e x t r a c t i o n 2 8 ' 2 n , o j s t i l l a t i o n 3 0 , 3 1 ,

a n d j o n e x c h a n g u l 4 ' 3 2 ' 3 3 . C o m p a r a t i v e s t u d i e s o f d i f f e r e n t t e c h n i q u e s h a v e a l s o

been repo r ted34 '

J f

ANALYSIS OF STANDARD REFERENCE MATERIALS

R e s u l t s o f a c t u a l a n a l y s e s b e s t i l l u s t r a t e t h e u s e f u l n e s s o f N A A a s a r e f e r -

e n c e m e t h o d i n l o w l e v e l c h r o m i u m a n a l y s i s . T a b l e s 3 - 7 p r e s e n t v a r i o u s r e s u l t s

o f a n a ' l y z i n g s t a n d a r d r e f e r e n c e m a t e r i a l s .

T a b l e 3 s h o w s r e a s o n a b l e c o n s i s t e n c y f o r t h e a n a l y s i s o f N B S , S R M - 1 5 7 1 ,

0 r c h a r d L e a v e s f r o m t w o r e p o r t s 1 6 ' 3 5 w i t h a t h i r d r e p o r t e d r e s u l t b e i n g h i g h

b y a f a c t o r o f a p p r o x i m a t e l y t * o 3 7 . T h e l a c k o f p r e c i s ' i o n o f t h e S L O W p O K E

r e s u l t s d e m o n s t r a t e s t h e i n a b i l i t y o f a l o w f l u x r e a c t o r t o d e l i v e r a s u f f i c -

i e n t n e u t r o n d o s e t o a c t i v a t e t h e c h r o m i u m t o t h e d e s i r e d l e v e l . T h ' i s l a c k

o f n e u t r o n f l u x ' i n ' l o w f l u x r e a c t o r s i n d i c a t e s t h a t f o r c h r o m i u m l e v e l s b e l o w

a p p r o x ' i m a t e l y 2 - 5 u g o n e r e q u i r e s a h i g h f l u x r e a c t o r , w h ' i c h c a n r e a d i i y

de l i ve r more t han 100 t ' imes t he neu t ron dose .

IABLE 3

NAA OF NBS SRM-1571 ORCHARD LEAVES

Method C o n c e n t r a t i o n ( p p m ) Re fe rence

S tanda rd va l ue

I NAA

I NAA

D N A A - c l o s e d f l a s r <

DNAA-open f l ask

I NAA

SLOt^ lPOKE- I NAA

2 . 6 t 0 . 2

2 . 9

2 . 5 7 4 t 0 . 0 1 0

2 . 4 9 5 t 0 . 0 1 4

2 . 4 6 3 t 0 . 0 2 0

5 . 8 1 r 0 . 8 4

2 . 8 t 0 . 3

1 6

3 5

3 5

3 5

T a b l e 4 l j s t s r e s u l t s o f a n a l y z i n g N B S S R M - 1 5 6 9 B r e w e r s Y e a s t . I n t h i s

c a s e , d e G o e i S " i - 4 1 6 f o u n d a s i g n i f l c a n t j n s o l u b l e c h r o m i u m f r a c t i o n , w h e r e a s^ -M c C l e n d o n " " r e p o r t e d a v o l a t i l e f r a c t ' i o n w h i c h w a s l o s t o n o p e n - f l a s k d i s -

s o l u t i o n o f t h e s a m p l e .

R e s u l t s f o r N A A o f B o w e n ' s K a l e a r e d i s p l a y e d i n T a b l e 5 . H e r e a g a i n t h e r e

i s some cons i s tency be tween repo r ted va l ues 14 ' 16 ' 24 ' 36 ' 38 -40

a l t houqh these

d o n o t a g r e e v e r y w e l l w i t h t h e " o f f i c ' i a l " v a l u e o f B o w e n .

A f e w r e s u l t s f o r t h e a n a l y s i s o f c h r o m i u m j n N B S - 1 5 7 0 S p j n a c h a r e l i s t e d

i n T a b l e 6 . S t e l l a e t a - z : 4 f o u n d r e a s o n a b l e c o n s i s t e n c y b e t w e e n 6 d j f f e r e n t

m e t h o d s o f N A A w h e n t h e y s t u d i e d a f i n e f r a c t j o n o f t h e s p i n a c h ( 1 4 9 - 2 5 0 u m ) .

36

TABLE 4

NAA 0F NBS SRM- 1569 BREI^ /ERS YTAST

Me thod C o n c e n t r a t ' i o n ( p p m ) Refe re nce

S t a n d a r d v a l u e

D N A A - s o ' l u b l e f r a c t i o n

D N A A - i n s o l u b l e f r a c t i o n

To ta I

I NAA

D N A A - c l o s e d f l a s k

DNAA-open f l ask

2 . 1 2 t 0 . 0 5

f . i 2 t 0 . 0 8

1 . 0 1 t 0 . 0 5

2 . 1 3 t 0 . 1 3

2 . 0 8 2 t 0 . 0 1 3

2 . 0 7 4 t 0 . 0 I 2

1 . 5 5 8 r 0 . 0 1 5

1 6

1 6

1 6

? q

3 5

3 5

TABI .E 5

NAA 0F BO|^JEN 'S KALE

Me thod C o n c e n t r a t ' i o n ( p p m ) Re fe re nce

B o w e n ' s v a l u e

DNAA- I on Exchange

D N A A - C r 0 z C l zd i s t ' i l l a t ' i o n

4 ' l a b s .

I NAA

I NAA

0 . 3 3 1 0 . 0 9

0 . 3 2 t 0 . 0 3

0 . 4 6 1 0 . 0 4

0 . 2 9 - . 6 7

0 . 4 3

0 . 4 5

0 . 5 0

< 0 . 7

I 4

1 6

24

3 6

3B3B

3 9

40

T h e t w o o t h e r a n a l y s e s o f " r a w " s p i n a c h 3 7 ' 4 r ' d o

n o t a g r e e v e r y w e l l a n d

s h o w m u c h l o w e r c h r o m ' i u m v a l u e s t h a n w e r e f o u n d i n t h e f i n e f r a c t ' i o n m a t e r i a l .

c o ' l l e c t i v e l y , t h e s e r e s u l t s l e a d t o a q u e s t i o n i n g o f t h e h o m o g e n e i t y o f

c h r o m ' i u m i n t h e N B S S t a n d a r d s p i n a c h . A l l o f t h e p r o c e e d i n g e x a m p l e s o f

s t a n d a r d r e f e r e n c e m a t e r i a l h a d t h e a d v a n t a g e t h a t e a c h m a t e r i a l w a s c h a r a c t e r -

i z e d b y a n " o f f i c ' i a l " o r r e c o g n i z e d c h r o m i u m c o n c e n t r a t i o n p r i o r t o m a n y o f

t h e a n a i y s e s b e i n g r e p o r t e d .

T h e f i n a l e x a m p l e c o m e s f r o m t h e a n a l y s ' i s o f N B S S R M - 1 5 7 7 B o v i n e L ' i v e r .

Th ' is nrater ia l had no accepted chrom' ium concent ra t iep l the resu l ts .

s h o w n j n T a b l e Z r e v e a l a w j d e r e p o r t e d r a n g e o f v a l u e s 1 6 ' 2 4 , 3 4 , 3 5 , 3 6 , 4 8 ') A

P a r r ' - h a s f i g u r e s f r o m 1 1 d i f f e r e n t l a b o r a t o r i e s r a n g i n g f r o m < 0 . 0 0 5 p p m t o

3 1

TABLE 6

N A A O F N B S S R M - 1 5 7 C S P I N A C H

Me thod C o n c e n t r a t i o n ( p p m ) Re fe renc e

R e f e r e n c e v a l u e

I NAA

DNAA-TBA ex t rac t i on

D N A A - C r 0 z C l 2 d i s t i I l a t i o n

D N A A - I o n e x c h a n g e( K C N S e i u t i o n )

( B N H C I e 1 u t i o n )

DNAA-Perch rom i c ac ' i de x t r a c t ' i o n

DNAA

I NAA

4 . 6 r 0 . 3

2 4 . 8 t 2 . 8

2 3 . 9 t 0 . 9

2 4 . 5 t 1 . 2

2 I . 3 t 2 . 6

Z L B t 1 . 5

2 0 . 5 t 2 . 8

4 . 5 t 0 . 2

7 . 5 t 1 . 6

3434

3434

3434

34

3 4

34

4 I

3 7

TAELE 7

N A A O F N B S S R M - i 5 7 7 B O V I N E L I V E R

Me thod C o n c e n t r a t i o n ( p p m ) R e f e r e n c e

I NAA

DNAA-TBA ex t rac t ' i on

D N A A - C r 0 z C l 2 d i s t i I l a t i o n

DNAA- I on exchange -KCNSe l u t i o n

B N H C I e l u t ' i o n

D N A A P e r c h r o m i c a c i de x t r a c t i o n

V a r i o u s ( 1 1 l a b s )

I NAA

D N A A c l o s e d f l a s k

D N A A o p e n f l a s k

I NAA

SLOWPOKE INAA

DNAA

1 . 1 6 I 0 . 6

1 . 6 t 0 . 8

1 . 0 t 0 . 6

1 . 4 I 0 . 8

1 . 7 t 0 . 9

1 . 9 t 1 . 0

0 . i 3 t 0 . 0 3

0 . 0 0 5 - 1 . 6

0 . 2 r 0 t 0 . 0 3 0

0 . 2 I 0 t 0 . 0 0 2

0 . 1 6 0 t 0 . 0 0 5

0 . 5 - 0 . 3 5

< r . 4

0 . 1 1 5 t 0 . 0 4 2

3 4

34

34

34

3 4

3 4

1 1

24

3 5

3 5

3 5

3 6

4 B

J . 6 p p n r . N a d k a n i a n d

a n d e x p l t i i n t h a t " l t

M o r r i r o n 3 6 a c k n o w l e d g e

h a s n o w b e e n r e c o g n i z e d

t h e r a n g e a s 0 . 0 5 p p m t o 1 . 9 p p m

t h a t t h i s v a r i a t i o n i s d u e t o t h e

3B

p r e s e n c e o f v o l a t j l e c h r o m i u m c o m p o u n d s i n t h e B o v j n e L ' i v e r w h i c h m a y b e l o s t

b e f o r e o r d u r i n g a n a l y s i s " . T h i s l ' i n e o f r e a s o n i n g i s v i a b l e a s a c o m p l e t e

a r g u m e n t o n l y i f o n e a s s u m e s t h a t t h e c h r o m i u m c o n c e n t r a t i o n s a r o u n d 1 . 9 p p m

a r e c l o s e t o t h e t r u e v a l u e . H o w e v e r , j f o n e a s s u m e s t h a t t h e w o r k o f< h

M c C l e n d o n " - f o r e x a m p l e , ' i s t h e m o s t r e l j a b l e , t h e n o n e m u s t i n v o k e b o t h l a b ' i l e

c h r o m i u m s p e c i e s t o a c c o u n t f o r l o s s e s a n d p o s s i b l y s a m p l e c o n t a m i n a t j o n t o

a c c o u n t f o r i n c r e a s e s i n t h e c h r o m ' i u m v a l u e s .

A N A L Y S I S O F P H Y S I O L O G I C A L T I S S U E S

T h e r e c e n t ' l i t e r a t u r e s h o w s t h a t a n u m b e r o f r e s e a r c h g r o u p s a r e a c t i v e l y

i n v o l v e d i n t h e n e u t r o n a c t ' i v a t j o n a n a l y s i s o f t r a c e e l e m e n t s s u c h a s c h r o m i u m

i n p h y s i o l o g i c a l t ' i s s u e s a n d f o o d s t u f f s . I n m o s t o f t h e s e s t u d ' i e s , c o r r e l a t i o n s

a r e m a d e b e t w e e n c h a n g e s ' i n t r a c e e l e m e n t c o n c e n t r a t i o n a n d t h e d i s o r d e r o r

d i s e a s e b e i n g i n v e s t i g a t e d . T i s s u e s c h o s e n f o r s u c h r e s e a r c h i n c l u d e h e a r t ,

l i v e r , k i d n e y c o r t e x a n d m e d u l l a , l u n g , s p l e e n , h a i r , a n d b l o o d a n d j t s

c o m p o n e n t s .

V e r s i e c k a n d S p e e c k e z o f o u n d c o n s ' i d e r a b l e c o n t a m ' i n a t j o n p r o b l e m s j n b o t h

I ' i v e r a n d b l o o d s a m p l i n g . T h e y c o n c l u d e d t h a t " e x t r e m e c a r e m u s t b e t a k e n i n

s e l e c t i n g t h e ' i n s t r u m e n t s a n d m e t h o d s f o r c o l l e c t i n g b i o l o g i c a l s a m p l e s . I t

c a n a l s o b e a s s u m e d t h a t m a n y r e s u l t s h i t h e r t o p u b l i s h e d m u s t b e r e g a r d e d w i t h

due ca re and some o f t hem shou ld be re l uc tan t l y accep ted o r sub jec ted t o

f u r t h e r c o n s j d e r a t j o n " . A t t e n t i o n s h o u l d b e p a i d t o t h i s p o l j t e l y w o r d e d b u t

s t r o n g w a r n i n g t o a l l t r a c e e l e m e n t a n a l y s t s .

T h e a n a l y s i s o f c h r o m ' i u m i n n o r m a l l i v e r s a m p l e s ' i s

o f t e n p a r t o f a d j v e r s e

a s s o r t m e n t o f s t u d ' i e s . T h e s e i n c l u d e i n v e s t j g a t i o n s o f e n d e m i c n e p h r o p a t h y 4 z ,

c ' i r r h o t i c h u m a n l ' i v e r s 4 3 , c a r d i o v a s c u l a r d i r . u r . r 4 4 , a n d t r a c e e ' l e m e n t c o n -

c e n t r a t i o n c h a n g e s i n d u c e d b y c a n c e r t h e r a p y 4 5 .

S o m e r e s u l t s f o r n o r m a l l i v e r a r e l i s t e d i n T a b l e B . 0 f i n t e r e s t ' i s t h e

c o n t a m i n a t i o n e f f e c t o b s e r v e d b y V e r s i e k a n d S p e e k e 2 6 , w h o u s e d M e n g h i n i n e e d l e s

f o r t h e i r b i o p s i e s . I t i s u n f o r t u n a t e t h a t t h e y r e p o r t t h e r e s u l t s o f o n l y

t w o c o n s e c u t " i v e b i o p s j e s w i t h t w o n e e d l e s .

G i v e n t h a t o n e a s s u m e s t h a t t h e d r y w e i g h t o f ' l i v e r i s a p p r o x i m a t e l y 3 0 % o f

t h e w e t w e i g h t , i t i s p o s s i b l e t o c o m p a r e t h e c h r o m j u m d a t a w h i c h i s r e p o r t e d

o n e i t h e r a d r y o r w e t w e i g h t b a s i s . T h e v a l u e s o f P l a n t i n 4 4 ( 0 . 0 4 0 7 p p m - w e t

w e i g h t ) a n d A l l e n e t a t . O U ( 0 . 1 3 7 p p m - d r y w e i g h t ) a g r e e q u i t e w e l l , a s d o t h e

v a l u e s o f D o n e v e t a f . o o ( 0 . 4 7 p p m - w e t w e i g h t ) a n d V e r s i e k a n d S p e e c k e 2 6

( 0 . 4 8 p p m - w e t w e i g h t ) . T h e ? . 6 2 p p n - w e t w e j g h t v a l u e o f K o s t i c e r a 1 . 4 3 s i t s

a l o n e . F r o m t h e s e a n a l y s e s i t w o u l d a p p e a r t h a t a c o n t a m i n a t ' i o n p r o b l e m h a s

3 9

a f f e c t e d t h e t h r e e h i g h e r s e t s o f c h r o m i u m v a l u e s .

TABLE B

NAA OF NORMAL L IVER

C o n c e n t r a t i o n s i n p p m

T e c h n i q u e Mea Mea nn Re fe re nce

I N A A ( w e t w e i g h t )

M e n g h i n i n e e d l e I

I N A A ( w e t w e i g h t )

I N A A ( d r y w e i g h t )

DNAA (we t we igh t )

I N A A ( d r y w e i s h t )

8 . 5 f i r s t b i o p s y

1 . 9 s e c o n d b i o p s y

r r r r r ' s l ' D t o p s y

0 . 4 8 s e c o n d b i o p s y

0 . 4 7

2 . 6 2 t 0 . 9 9

0 . 0 4 0 7 t 0 . 0 5 1 5

0 . 1 3 7 t 0 . 0 4 1

2626

I I

4 2

4 3

4 4

4 ^

A n a p p r e c i a b l e a m o u n t o f n e u t r o n a c t i v a t i o n a n a l y s i s f o r c h r o m i u m h a s a l s o

b e e n d o n e w i t h b l o o d s a m p l e s . T i s s u e s a n a l y z e d j n c l u d e s e r u m 3 3 ' 4 0 ' 4 6 ' 4 7

p l usnu25 , r ed b l ood ce l I s 25 ' 33 , p ' l a te l u t r 48 , and who r e b ' r ood25 ' 26 ' 3 ! , 49 .

T a b l e 9 p r e s e n t s a n a s s o r t m e n t o f c h r o r n i u m a n a l y s e s f o r t h e s e m a t e r i a l s .

A s e x p e c t e d , t h e e a r l i e r r e s u l t s 3 l ' 3 3 ' 4 9 ( . v 4 0 - 5 0 p p b ) t e n d t o b e h i g h e r t h a n

m o r e r e c e n t r e s u l t s w h i c h i n d i c a t e c h r o m i u m l e v e l s o f 5 ^ - 1 5 p p b . A n e x c e p t i o n

to t h i s t endency showed up i n t he wo rk o f Max ' i a e t a f . z5 who repo r ted p lasma

a n d r e d b l o o d c e l l c h r o m i u m v a l u e s o f 4 - 2 B B p p b . c o n t a m ' i n a t i o n p r o b l e m s m u s t

b e c o n s ' i d e r e d j n t h e c a s e s w h e r e v e r y h i g h c h r o m i u m l e v e l s w e r e f o u n d i n

s u p p o s e d l y n o r m a l s u b j e c t s .

D a t a f r o m t h e s a m p l e c o n t a m i n a t ' i o n w o r k o f V e r s i e c k a n d S p e e c k e 2 6 s h o w s t h e

b a s i s f o r t h e i r r e c o m m e n d a t i o n t h a t t h e f i r s t 2 0 - 4 0 m ' l o f b l o o d s h o u l d n o t b e

i nc I uded f o r t r ace e l emen t ana I vs i s .

CONCLUS I ONS

F r o m t h e p r e c e d ' i n g e x a m p l e s a n d d i s c u s s j o n s a n u m b e r o f c o n c l u s i o n s m a v b e

0 r a w n .

i . T h e l o w c h r o m j u m c o n c e n t r a t j o n s o f m a n y b i o l o g i c a l m a t e r i a l s m a y o e

d e t e r m i n e d q u i t e r e l i a b l y b y N A A ( e i t h e r I N A A o r D N A A ) i f o n e h a s a c c e s st o a h i g h f l u x n u c l e a r r e a c t o r .

4 0

TABLE 9

NAA OF NORI4AL BLOOD

C o n c e n t r a t i o n s i n p p b

T e c h n i q u e M e a n ( s a m p l e s ) R a n g e Re fe rence

lefqll DNAA 38 - 33

I N A A 1 0 1 6 - 4 6

I N A A 9 . 3 t 5 . 6 ( r z 7 ) - 4 t

rNAA 20 40

P l a s m a D N A A ( a d u l t s ) 4 4 . 7 ( 3 ) I 4 - 7 t Z s

( c h j l d r e n ) 3 7 . 6 ( 2 9 ) 4 - z B 0

Red B l ood Ce l I s

D N A A ( a d u l t s ) 3 2 . 0 ( 3 ) 2 4 - 3 8 z s

65 .6 (32 ) r 4 -2BB

DNAA 35 33

P l a t e l e t s D N A A 7 . 7 t 4 . 3 ( B ) 4 8

Wh-o l e B l ood

D N A A ( a d u l t s ) 2 t . 9 ( B ) g - + o 2 5

4 6 3 1

5 3 4 9

I NAA

S e q u e n t i a l 2 0 m l 8 5 2 6

B l o o d s a m p l e s I z

q R

1 5

2 - T h e a n a l y t i c a l p r o b i e n i s o f s a m p l e p r e p a r a t i o n w j t h o u t c o n t a m ' i n a t i o n o r

l o s s e s o f l a b j l e o r i n s o l u b l e c h r o m i u m s p e c i e s m u s t b e g ' i v e n s p e c i a l a t t e n t i o n .

3 ' M o r e r e s u l t s m u s t b e r e p o r t e d o n t h e a n a l y s i s o f s t a n d a r d r e f e r e n c e m a t e r j a l s

s o t h a t a b e t t e r a s s e s s m e n t o f t h e i r u t i ' l i t y m a y b e m a d e . T h e s e r e p o r t s s h o u l d

i n c l u d e a l I r e l e v a n t e x p e r i m e n t a ' l d e t a i I s .

4 - R e a s o n a b l e c h r o m i u m d e t e r m i n a t i o n s a p p e a r t o b e a c h i e v e d o n l y w n e n o n e

a n a l y z e s s p e c i f i c a l l y f o r c h r o m i u m .

ACKNOt^ lLEDGEMENTS

P a r t i c i p a t i o n a t t h j s c o n f e r e n c e w a s s u p p o r t e d i n p a r t b y a n N S E R C o p e r a t i n gg r a n t t o t h e S L O W P 0 K E R e a c t o r F a c i l ' i t y . I t i s h o p e d t h a t t h e a u t h o r h a s n o t m i s -

rep resen ted t he wo rk o f t he va r i ousau tho rs f r om wh i ch he has d rawn ma te r i a l f o rt h i s p a p e r .

4 I

RE FE RENC ES

1 . S c h r o e d e r , H . A . ( 1 9 6 5 ) J . C h r o n . D i s . I B , 2 I 7 .

? . M e r t z , w . a n d G l i n s m a n n , l , J . H . ( 1 9 6 4 ) P r o c . 5 t h c o n g r . I n t . D i a b e t e sF e d e r a t i o n o f T o r o n t o .

3 . S c h r o e d e r , H . A . ( 1 9 6 4 ) A m . J . p h y s i o l . , Z O 7 , I .

4 . s a m s a h l , K . , B r u n e , D . a n d w e b s t e r , p . 0 . ( 1 9 6 5 ) I n t . J . A p p l . R a d i a t .I s o t o p e s , 1 6 , 2 7 3 - .

5 . W e s t e r , P . 0 . ( 1 9 6 5 ) A c t a M e d . S c a n d . , I l B , 6 .

6 . L e s t n e , R . A . , S t r e e t e n , D . M . P . a n d D o i s y , R . J . ( 1 9 6 8 ) M e t a b . C l i n . E s y s . ,T 7 , I I 4 .

7 . M e r t z , W . , ( 1 9 6 7 ) F e d . p r o c . , 2 6 , 1 8 6 .

B . M e r t z , W . ( 1 9 6 9 ) P h y s i o l . R e v . , 4 9 , 1 6 3 .

9. Schr",art7rK. and l{ertz, I.iI. (1959) Archs. Biocher. Biophys., 85, 2g2.

10. schwartz, K. and llertz, IaI. (1961) Fedr:). proc. Fedn. Am. socs. oq>. Biol.,20, Suppl . 10, 1 l l .

i 1 . M e r t z , W . a n d R o g i n s k i , E . E . ( 1 9 6 9 ) J . N u t r i t . , g l , S Z s

1 2 . S c h r o e d e r , H . A . , ( 1 9 6 9 ) J . N u t r i t . , 9 7 , 2 3 7 .

1 3 . M e r t z , w . , T o e p f e r , E . l , / . , R o g i n s k i , E . t . a n d p o ' l a n s k y , M . M . ( r 9 7 4 ) F e d . p r o c .3 3 , 2 2 i 5 .

1 4 . P a p a d o p o u i o u , c . , K a n i a s , G . a n d H a d z i s t e l i o s , I . ( 1 9 i 6 ) J . R a d j o a n a l . c h e m .3 1 , 3 8 9 - 3 9 6 .

1 5 . S h a p c o t t , D . , K h o u r y , K . , D e m u r s , p - p . , V o b e c k y , J . a n d V o b e c k y , J . ( i g i / )C I i n . t s i o c h e m . 1 0 , 1 7 B - I e j .

1 6 . d e G o e i j , J . J . M . , V o l k e s , K . J . , T j i o e , p . s . a n d K r o o n , J . J . ( 1 9 2 8 ) R a d i o c h e m .R a d i o a n a l . L e t t e r s , 3 5 , i 3 9 - 1 4 6 .

1 7 . L a h o m a a , E . - 1 . a n d E k l u n d , p . ( 1 9 7 9 ) I A E A - S M - 2 2 7 / I r t 3 3 3 _ 3 4 4 .

i B . S a k u r a j , S . , T s u n o d a , H . , T e r a i , M . , y u k a w a , M . , T o m u r a , K a n d S u z u k i -Y a s u m o t o , M . ( 1 9 7 9 ) I A E A - S M - Z Z 7 / 1 6 , p 5 7 3 - 5 8 1 .

1 9 . c h a t t o p a d h y a y , A . , E l l i s , K . M . a n d N ' i m a l a s ' i r i D e S i i v a , K . ( r g l g ) I A E A - s M -2 2 7 / I 7 3 , p . 6 6 7 - 6 8 3 .

2 0 . 4 1 l e n , R . 0 . , s t e i n n e s , E . a n d B a k e r , M . D . ( t g l g ) I A E A - s M - 2 2 7 / 5 7 , , p 4 4 7 - 4 6 6 .

2 1 . B e h n e : D . , B r l t t e r , p . , G e s s n e r , H . , H u b e , G . , M e r t z , W . a n d R o s i c k , U .( 1 9 7 6 ) 7 . A n a l . C h e m . 2 7 8 , 2 0 9 - Z t Z .

2 ? - . w o l f , t , J . R . a n d G r e e n , F . E . ( 1 9 7 6 ) p r o c . l t h I M R s y m p o s i u m o n A c c u r a c y i nT r a c e A n a l y s i s : S a m p l i n g , S a m p l e H a n d l i n g a n d A n a l y s i s ( G a t h e r s b u F g , M a r y -l a n c l , u . s . A . , 7 - 1 0 O c t o b e r 1 9 7 4 ) , N B S s p e c i a l p u b l i c a t j o n 4 4 2 , 1 , o o s .

2 3 . w o l f , l ^ / . M e r t z , w . a n d M a s i r o n i , R . ( r 9 7 4 ) J . A g r i c . F o o d c h e m . , 2 2 , 1 0 3 7 .

2 4 . P a r r , R . M . ( I 9 l l ) J . R a d j o a n a l . C h e m . , 3 9 , 4 Z I - 4 3 3 .

2 5 . M a x ' i d , v . ' M e l o n i , s . , R o l l i e r , ' M . A . , B r a n d o n e , A . , p a t w a r d h a n , v . N . ,w a s l i e n , c . I . , a n d E l s h a m i , s . , ( 1 9 7 9 ) I A E A - S M - r 5 7 / 6 7 p 5 2 7 - 5 5 0 .

2 6 . V e r s i e c k , J . M . J . a n d S p e e c k e , A . B . H . ( r 9 7 9 ) I A E A - s M - r 5 7 / 2 4 , p 3 9 - 4 9 .

4 2

2 7 . S m ' i t h , R . R . e t a t . ( 1 9 5 5 ) R e p t . A E C D - 3 8 8 9 .

2 8 . F a s o l o , G . 8 . , M a l v a n o , R . a n d M a s s a g l j a , A . , ( 1 9 6 3 ) A n a l . C h i m . A c t a . 2 9 , 5 6 9 .

2 9 . i l a d k a r n i , R . A . a n d H a l d a r , B . C . ( I 9 7 I ) R a d i o c h e m . R a d i o a n a l . L e t t e r s , 8 , 2 3 3 .

3 0 . P i l l a y , K . K . S . , T h o m a s , J r . , C . C . a n d H y c h e , C . M . , ( 1 9 7 4 ) J . R a d i o a n a l . C h e m . ,t n q , o 7L V . J J l .

3 1 . B o w e n , H . J . M . ( 1 9 6 4 ) A n a l y s t 8 9 , 6 5 8 .

3 2 . B i s h a y , T . Z . ( 1 9 7 2 ) A n a l . C h e m . , 4 4 , 1 0 8 7 .

3 3 . M e l o n i , S . , B r a n d o n e , A . a n d M a x j d , V . ( 1 9 6 9 ) I n t . J . A p p l . R a d n . a n d I s o t . ,

20 ,7 57 -7 60 .

3 4 . S t e l l a , R . , G e n o v a , N . D j C a s a , M . , G a l l o r i n i , M . a n d Q r v i n i , E . ( 1 9 7 6 ) J .

R a d j o a n a l . C h e m . , 3 4 , 5 9 - 6 3 .

3 5 . M c C l e n d o n , 1 . T . , ( 1 9 7 8 ) J . R a d ' i o a n a l . C h e m . , 4 2 , B 5 - 9 1 .

3 6 . N a d k a r n i , R . A . a n d M o r r i s o n , G . H . ( 1 9 7 3 ) A n a l . C h e m . , 4 5 , 7 9 5 7 - 1 9 6 0 .

3 7 . R e n a n , M . J . , D r e n n a n , 8 . D . , K e d d y , R . J . , a n d S e l l s c h o p , J . P . F . ( 1 9 7 9 )

IAEA-SM-227 / 6 , p 479 -495 .

3 8 . L i e v e n s , P . , C o r n e l i u s , R . a n d H o s t e , J . ( 1 9 7 5 ) A n a i . C h i m . A c t a , 8 0 , 9 7 .

3 9 . R i c c j , E . ( t g Z s ) A n a 1 . C h j m . A c t a , 7 9 , 1 0 9 .

4 0 . G i r a r d j , F . , P a u 1 y , J . , S a b b i o n i , E . , a n d V o s , G . ( t g l g ) I A E A - S M - 9 I / I 0 '

p 2 2 9 - 2 4 6 .

4 1 . G a l l o r i n i , M . , D i C a s a , M . , S t e l ' l a , R . , G e n o v d , N . a n d Q r v i n i , E . ( 1 9 7 6 ) J .

R a d ' i o a n a l . C h e m . , 3 2 , 1 7 .

4 2 . D o n e v , I . , R a d o n o v , S . , S t o e v , S . , M a r i c h k o v d , L . , D a m i a n o v a , A . , a n d G o t s e v ,

G . ( 1979 ) IAEA-SM-227 /86 p 293 -305 .

4 3 . K o s t ' i 6 , R . J . , D r a Y k o v i c , R . J . , D i o r d i e v i 6 , M . , K o s t j 6 , D . ' a n d D r a E k o v i 6 , R . S .(1979 ) IAEA-SM-227 /23 , p 273 -282 .

4 4 . P 1 a n t j n , L . - 0 . ( I 9 7 9 ) I A E A - S M - 2 2 7 / 9 5 p 3 2 I - 3 3 2 .

4 5 . A l l e n , R . 0 . , S t e i n n e s , E . , a n d B a k e r , M . D . ( I 9 7 9 ) I A E A - S M - 2 2 7 / 5 7 p 4 4 7 - 4 6 6 .

4 6 . B e h n e , D . a n d D j e l , F . ( 1 9 7 2 ) I A E A - S M - 1 5 7 / 1 1 p 4 0 7 - 4 1 4 . , ,

4 7 . K a s p e r e k , K . , S c h j c h a , H . , 5 ' i l l e r , V . , F e i n e n d e g e n , 1 . E . , a n d H o c k , A . ( I 9 7 2 )

IAEA-SM-757 /35 p 517 -526 .

4 8 . K i e m , J . , I y e n g a r , G . V . , B o r b e r g , H . , K a s p e r e k , K . , S i e g e r s , M . , F e i n e n d e g e n ,

L . E . , a n d G r o s s , R . ( 1 9 7 9 ) I A E A - S M - 2 2 7 / 5 3 p 1 4 3 - 1 6 4 .

4 9 . H a l l e r , l , J . A . , F i 1 b y , R . H . , a n d R a n c i t e l l j , L . A . ( 1 9 6 9 ) N u c l e a r A p p l j c a t j o n s ,

6 , 2 6 5 .