diagnóstico molecular de las enfermedades lisosomales...

Diagnóstico molecular de las enfermedades lisosomales.

Importancia para el desarrollo del consejo genético.

Jesús Solera García

Instituto de Genética Médica y Molecular

Hospital Universitario La Paz

Dpto. de Bioquímica

Universidad Autónoma de Madrid

Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014

Journal of Genetic Counseling April 2006, Volume 15, Issue 2, pp 77-83

El asesoramiento genético es el proceso por el que se ayuda a las personas a entender y adaptarse a las implicaciones médicas, psicológicas y familiares de una determinada condición genética.

Elementos que forman parte de la práctica del asesoramiento genético: 1) Determinar el riesgo de ocurrencia o recurrencia de una determinada enfermedad.

2) Educar (dar información) acerca de la herencia, la historia natural, las pruebas genéticas

disponibles , el manejo médico, la prevención, el soporte social, y la investigación.

3) Dar asesoramiento y soporte psicológico para ayudar a adaptarse a su situación y a los aspectos familiares y sociales que conlleva.

Premisas para la realización del asesoramiento genético: 1. Verificar el diagnóstico 2. Analizar el patrón de herencia 3. Conocer la frecuencia de portadores en la población general


1) Riesgo Mendeliano: Evaluar el riesgo de heredar un rasgo que es transmitido con un patrón de herencia mendeliano.

2) Análisis Bayesiano: Ajustar el riesgo mendeliano teniendo en cuenta información de diferentes orígenes (edad de inicio, niveles enzimáticos, número de hijos sanos, estudios moleculares, etc…)

Evaluación de riesgos

La mayoría de las EDL tienen un patrón de herencia autosómico recesivo, a excepción de la E. de Fabry, la E. de Danon y la E. de Hunter, que tienen un patrón ligado al cromosoma X.


JAMA VOL 281 No. 3 249-254


Características del gen GBA

Molecular Location on chromosome 1: base pairs 155,234,447 to 155,244,861

Estructura

Localización

Tipo de mutación Número

Cambio 1 nucleótido 324

Procesamiento mRNA 21

Promotor 1

Pequeña deleción 30

Pequeña inserción 15

Pequeña Indel 4

Gran deleción 4

Gran inserción 1

Complejas 21

Mutaciones

www.hgmd.org


GeneReviews® - NCBI Bookshelf

Selección de mutaciones en el gen GBA

45%

23%

≈98% de los pacientes con EG en población española


Alelo N (normal)

Alelos M (mutado)

Alelo N (normal) NN NM

Alelos M (mutado) MN MM

Estimación de riesgos en E. de Gaucher

El paciente (4) está en un rango de edad en el que puede desarrollar la enfermedad, de haber recibido un genotipo MM.

1 2

3 4


Alelo N (normal)

Alelos M (mutado)



Hipótesis Portador No Portador

Probabilidad inicial 2

3

1

3

Estimación de riesgos en E. de Gaucher

El paciente (4) está en un rango de edad en el que tendría que haber desarrollado la enfermedad, de haber recibido un genotipo MM.

1 2

3 4


2

3

1

119

1

238

1

3

1

714

Riesgo estimado de tener un hijo afectado de E. de Gaucher. (Considerando sólo la segregación de alelos)


Estrategia de análisis molecular del gen GBA

1.- Análisis molecular completo del caso índice (3), y los padres (1 y 2). Análisis de las mutaciones identificadas en (4)

2.- Análisis molecular de las mutaciones más frecuentes de (3), los padres (1 y 2). Análisis de las mutaciones identificadas en (4)


Alelo N (normal)

Alelos M (mutado)



Hipótesis Portador No Portador

Probabilidad inicial 2

3

1

3

Probabilidad con resultado E. M. negativo

11 mutaciones frecuentes

1

50 1

Probabilidad conjunta 1

75

1

3

P. de cada opción 𝑃 =1

75

( 1

75+

1

3 )

= 1

26 𝑃 =

1

3

( 1

75+

1

3 )

=25

26

Estimación de riesgos en E. de Gaucher tras resultado negativo en estudio molecular aislado al paciente 4 Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014

1

26

1

52

1

12376

1

119

1

238

Riesgo estimado de tener un hijo afectado de E. de Gaucher. (Considerando resultado normal del estudio molecular)


exon Length Exon

Length Intron

1 70 185

2 80 2664

3 578 616

4 146 1662

5 166 77

6 97 393

7 120 79

8 119 89

9 132 1116

10 111 671

11 114 100

12 85 957

13 118 477

14 134 164

15 152 190

16 149 3601

17 142 490

18 150 443

19 165 295

20 153 466

21 609

Estructura

Localización

Características del gen GAA Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014




Promotor 1



Pequeña Indel 11

Gran deleción 14

Gran inserción 1

Complejas -

Mutaciones en el gen GAA

www.hgmd.org

Eur J Hum Genet. 1999 Sep;7(6):713-6.

Mutaciones frecuentes

Frecuencia estimada de GSD II basada en equilibrio de Hardy-Weinberg: Forma infantil : 1 en 138.000 Forma adulta: 1 en 57.000 Conjunta: 1 en 40.000

Mutación Frecuencia

de portadores

c. -32 -13T>G 1

154

c.525delT (p.Glu176fs*45) c.2481+102_2646+31del (p.Gly828_Asn882del)(del exón 18)

1

284

Extrapolado mutación severa 1

187

Frecuencia de portadores 1

85


Riesgo estimado de tener un hijo afectado de E. de Pompe (GSD II).

c. -32 -13T>G c.2481+102_2646+31del (p.Gly828_Asn882del) (delec. exón 18)

Riesgo de tener un niño afectado de…

Situación paciente 3

GSD II infantil

GSD II adulto

TOTAL

GSD II adulto

1

748

1

337

1

232

Riesgo de tener un niño afectado de…

Situación paciente 4

GSD II infantil

GSD II adulto

TOTAL

Portador c-32-13 T>G

0 1

748

1

748

Portador delec. exón 18

1

748

1

616

1

337

Genotipo F. poblacion

Port. Mut Severa

1

187

Port. .c -32 -13 T>G

1

154

Port. GSD II 1

85

c. -32 -13T>G

(delec. exón 18)

Genotipo F. poblacion

Port. Mut Severa

1

187

Port. .c -32 -13 T>G

1

154

Port. GSD II 1

85

Eur J Hum Genet. 1999 Sep;7(6):713-6.

1 2


American Journal of Medical Genetics 129A:136–143 (2004)


Detección de portadores de E. de Fabry La determinación de actividad enzimática de α-Gal no es un parámetro suficientemente fiable para establecer el diagnóstico de portadoras. El diagnóstico de portadores es posible mediante el estudio molecular.


exon Length Exon

Length Intron

1 304 3724

2 175 2001

3 178 874

4 92 1719

5 162 217

6 198 270

7 309




Promotor 3



Pequeña Indel 11

Gran deleción 32

Gran inserción 4

Complejas 6

Características del gen alfa-GLA Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014

1

2 1

339000

(J. Med Genet 38: 769-775 (2001)

Riesgo estimado de tener un hijo afectado de E. de Fabry

Riesgo 0 1

2


Panel de genes para estudio de pacientes con posible EDL mediante NGS Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2014

Conclusiones

Los estudios moleculares hacen posible el genotipado de los miembros de familias afectadas por enfermedades de depósito lisosomal (EDL).

Permiten establecer los riesgos de ocurrencia y/o recurrencia de las EDL con elevada exactitud.

Hacen posible la aplicación de abordajes diagnósticos especiales, como el diagnóstico prenatal en cualquiera de sus variedades

Cambian muy favorablemente las expectativas de los pacientes cuando estos tienen que afrontar los diferentes aspectos de las EDL.


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