determinación de hpv en patología cervical: implicaciones diagnósticas y clínicas josé ramón...
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Determinación de HPV en patología cervical: implicaciones diagnósticas
y clínicas
José Ramón Ramírez García
Hospital Militar Central Gomez-Ulla
CANCER CERVICAL
INICIO DE RELACIONES
SEXUALES A EDAD TEMPRANA
PROMISCUIDAD SEXUAL
MARIDOS CON CANCER DE PENE
EL CANCER CERVICAL PUEDE SER CAUSADO POR UN AGENTE TRANSMISIBLE
HPV
VIRONES HPV EN LOS COILOCITOS
ME
DESCRIPCION DEL COILOCITO
(KOSS)
CAPSIDES DE HPV EN LSIL
INMUNOHISTO
DNA-HPV EN CANCER CERVICAL
PAT.MOLECULAR
PATOLOGIA
Aislado en 1933: Papovaviridae. Virus DNA Epidermotropo Capside icosahedríca.
Caracterizacion de HPV
Se han secuenciado 80 genomas: Infección mucocutánea. Epidermodisplasia verruciforme Transmisión sexual.
Caracterizacion de HPV
Transmisión sexual.•Tres grupos:
•Bajo riesgo o benignos: 6,11,30,34,40,42,43,44,53,55,57,60
Caracterizacion de HPV
Lesión escamosa intraepitelial: Bajo riesgo:
31,33,35,51,52. Alto riesgo:
16, 18,45,46
Caracterizacion de HPV
Caracterizacion de HPV
Principal sitio de infección:
epitelio escamoso.
células primitivas o de reserva.
Intervalo de la exposición hasta la lesión:
6-24 semanas.
HPV
LATENTE PRODUCTIVA
Infeccion viral sin producción de virus infeccioso
Virus en el núcleo
No alteraciones citopaticas
Produccion de virones
Células Superficiales
Alteraciones Citopáticas
ALTAMENTE ESPECIFICO 90%
POCO SENSIBLE PARA SU DETECCIÓN 60%
APARECEN 3 MESES DESPUES DE LA INFECCION GENITAL POR EL VIRUS
CRITERIOS DIAGNOSTICOS
• CELULA AFECTADA:– C. ESCAMOSA MADURA– C. ESCAMOSA INMADURA QUERATINIZADA– C. INDIFERENCIADA ZONA DE
TRANSFORMACION.
• FORMA CELULAR:– PERDIDA DE FORMA POLIGONAL
CRITERIOS DIAGNOSTICOS
• PERIFERIA DE CITOPLASMA– ENGROSADO EN ASA DE ALAMBRE
• TAMAÑO CELULAR:– ISO Y ANISOCITOSIS
– CITOPLASMA:– COILOCITOSIS
CRITERIOS DIAGNOSTICOS
• CAMBIOS ASOCIADOS:– DISQUERATOSIS– PARAQUERATOSIS– HIPERQUERATOSIS
Genes tempranos:
E1,E2,E4,E5,E6,E7.
E2: codifica dos productos protéicos:estimula,inhibe.
E4:proteínas para replicación y maduración.
E5,E6,E7: transformadoras de virus.
INICIO CAPA BASAL DEL EPITELIO
GENES TARDIOS:
L1,L2: Fase final codifican proteínas de la cápside.
Solo cuando la células escamosa se diferencia (célula intermedia y superficial).
Producción de partículas virales completas.
E6
p53
IMPOSIBILIDAD DE DETENER SU CRECIMIENTO
E7
RETINOBLASTOMA
MULTIPLICACION DESCONTROLADA
EPIDEMIOLOGIA
• Hibridación in situ:– Secuencias de nucleotidos: 10-30% epitelios
metaplásicos normales. (15-49 años).– PCR: 49%– LSIL: genoma viral: 29-75%.– HSIL: genoma viral: 90%.– Carcinoma invasivo: 99,8%– Adenocarcinoma invasivo: 90%.
EPIDEMIOLOGIA
• Prevalencia: mujeres menores de 25 años.
• HPV de alto riesgo:HPV16
OTROS
HPV31
HPV45
HPV18
EPIDEMIOLOGIA
• El 30% de las mujeres HPV-16 desarrollaron HSIL en dos años.
• HPV-16: carcinomas no queratinizantes.• HPV-18: carcinomas pobremente
diferenciados.
EPIDEMIOLOGIA
• LSIL:– DESAPARECE: 50%.– PERMANECE: 40%.– EVOLUCIONA:10%.
• HSIL– DESAPARECE: 20%– PERMANECE:40%– EVOLUCIONA:40%
EPIDEMIOLOGIA
• INFECCION POR HPV:– Factores genéticos.– Periodo de latencia largo.– La infección de HPV es un evento de una
larga cadena.
METODOS DE DETECCION
• SEROLOGIA:– No permite identificar tipos específicos de
HPV.– Métodos de detección de DNA viral muy
costosos y dificultad técnica.
METODOS DE DETECCION
• METODOS DE DETECCION TRADICIONAL:– MICROSCOPIA DE LUZ.– MICROSCOPIA ELECTRONICA.– INMUNOHISTOQUIMICA.
MICROSCOPIA DE LUZ
• No específica.• Método mas frecuente.• COILOCITOSIS• CAMBIOS EN TAMAÑO DE NUCLEO.• GRADO DE ATIPIA• No permite la determinación de
genotipo específico.
MICROSCOPIA ELECTRONICA
• Método costoso• Mucho tiempo.• Bajo rendimiento.• No permite la determinación de
genotipo específico.
INMUNOHISTOQUIMICA
• Facilmente reproductible.• No muy cara.• Realizada en parafina.• Alta sensibilidad en lesiones de LSIL.• Baja sensibilidad en lesiones HSIL y
carcinomas.
METODOS DE DETECCION
• DETECCION MOLECULAR SIN PRESERVACION TISULAR MORFOLOGICA:– Hibridacion por Southern blot:
• Muy específico• Difícil, mucho tiempo, influencia de factores externos.
• DETECCION MOLECULAR SIN PRESERVACION TISULAR MORFOLOGICA:– Hibridacion Dot/slot blot:
• Fácil y rápido, permite muchas muestras.
– Hibridación capture-test:• Específico, no problemas de contaminación.
– PCR:• Específico y muy sensible. Contaminación
cruzada-Falsos positivos.
METODOS DE DETECCION
• DETECCION HPV CON METODOS QUE PRESERVAN EL TEJIDO:– Hibridación in situ:
• Poco sensible. Solo detecta infecciones productivas. No puede detectar el tipo de DNA presente.
– FISH:• Poco sensible y especifico.
– PCR in situ
BIOMARCADORES
• PCNA: raro en epitelio normal.– Positividad en LSIL en
capas altas.– Falsos positivos en
metaplasias escamosas.
– 90% de los canceres.
BIOMARCADORES
• Ki67: PERMITE DIFERENCIAR LSIL – vs CAMBIOS
REACTIVOS.– ATROFIA– METAPLASIA
INMADURA
BIOMARCADORES
• TELOMERASA– De gran ayuda.– Costosa de realizar.
TELOMERASA
• Los telómeros son los extremos de los cromosomas y es una secuencia de nucleotidos que se repiten un número variable de veces:– TTAGGG
• Sirven para evitar la degradación celular, recombinaciones inadecuadas, y el envejecimiento celular.
TELOMERASA
• Una célula normal en las sucesivas divisiones sufre acortamiento de los telómeros a diferencia de las células cancerígenas y células hematopoyéticas primitivas donde un enzima la telomerasa restituye estos fragmentos. (Fenotipo inmortal)
TELOMERASA
CELULA NORMAL
TELOMERASA
CELULA NEOPLASICA
TELOMERASA
• 80% cáncer cervical presentan actividad telomerasa.
• Se detecta en estadios precoces de carcinoma y lesiones preneoplásicas.
MARCADOR POTENCIAL DE LA DETECCION PRECOZ DEL CARCINOMA
CERVICAL
BIOMARCADORES
• CICLINA E– LSIL vs cambios
reactivos.– HSIL vs Metaplasia
inmadura.– Atrofia VS HSIL
BIOMARCADORES
• P16:– Neoplasia vs HPV
infección.– Marcador para HPV
de alto riesgo.– Screening en
citología?– Poco util en HPV de
bajo riesgo.
INFORMACION A LA POBLACION: Salud Pública. Campañas de Sanidad
Conclusiones
Conclusiones IDENTIFICACION DE PACIENTES
DE RIESGO: Datos epidemiológicos. Campañas citológicas:
LESION INTRAEPITELIALES DE SEVERIDAD VARIABLE:
ASCUS LSIL HSIL-CARCINOMA
Conclusiones ASCUS:
Citología:Biomarcadores POSITIVOS:
LSIL-HSIL
Conclusiones
PACIENTE CON PROBABLE INFECCION HPV (detección visual). Colposcopia. Biopsia.
Conclusiones
PACIENTE CON PROBABLE INFECCION HPV: BIOPSIA: Diagnosticar Severidad de lesión.
LSILHSIL-CARCINOMA
Conclusiones
PACIENTE CON LESION INTRAEPITELIAL CERVICAL: Categorizar el tipo de HPV:
Alto riesgo o bajo riesgo. Utilizar biomarcadores de detección.
Conclusiones
TRATAMIENTO: LSIL: SEGUIMIENTO. HSIL-CARCINOMA: CONIZACION O HISTERECTOMIA.
SEGUIMIENTO: volver a empezar el ciclo.