Kelompok 9

• Nihayatul Milah (4411411032)

• Sri Handayani (4411411047)

MICROPLATE READER DENGAN METODE ELISA

Biology Non EducationSecond Group

Semarang State University

Tujuan

Reagen Bahan SOP

Pengenalan

Microplate reader adalah alat yang digunakan untuk menilai

reaktivitas dari antibodi monoklonal untuk antigen rekombinan

digunakan sebagai immunogens dengan metode ELISA (An

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).

Thermo Scientific, cat.# N600

Pengujian ELISA adalah reaksi invitro antara antigen dan antibodi sehingga terbentuk kompleks antigen - antibodi

Tujuan

Reagen Bahan SOP

Pengenalan

PURPOSE

- Karakterisasi antibodi monoklonal yang dimurnikan- Membuat antibodiuntuk suatu antigen

Tujuan

Reagen Bahan SOP

Pengenalan

REAGENTS

1. Antigen yg sesuai dengan antibodi.

2. Antibodi monoklonal murni yang sesuai antigen

3. Goat anti-mouse - horseradish peroxidase (GAM-HRP) antibodi berlabel

Tujuan

Reagen Bahan SOP

Pengenalan

Tujuan

Reagen Bahan SOP

Pengenalan

BAHAN

Carbonate Coating Buffer (pre-mixed powder)

Phosphate Buffered Saline (PBS), deionisasi dari 11.9 mM phosphate, 137mM NaCl, 2.7mM KCl, pH 7.4 dengan menambahkan air PBS – 0.05% Tween (PBST) penambahan 500uL Tween 20 hingga menjadi 1 liter PBS PBS – 0.05% Tween, 0.1% BSA (PBST-BSA) penambahan 1 gram BSA hingga menjadi 1 liter PBST (Sigma Cat. # A7030) 1-Step TMB Turbo Substrate, Pierce-Thermo catalog # 34022 0.18N Sulfuric acid; Thermo Scientific, cat.# N600. Polypropylene Tubes

SOP ( Standart Operating Procedure)

1. Siapkan garis pelat seperti pada diagram di bawah ini.

2. Siapkan pengenceran antigen ke dalam Buffer Coating Carbonate untuk memberikan konsentrasi akhir sekitar 10μg/ml (perlu 100μl/number sumur). 3. Aduk dengan Vortex

4. Tambahkan 100μl antigen dilusian (10μg/ml saham) untuk setiap titrasi (total

10 sumur per antibodi).

5. Tambahkan 100μl Buffer Coating Karbonat untuk

masing-masing sumur kontrol seperti yang ditunjukkan dalam

diagram di atas (Baris AC).

6. Memanaskan piring selama 1 jam pada suhu 37 ° C.

7. Lepaskan Solusi Coating Carbonate dengan

menuangkannya dan menekan pelan pada kertas

8. Segera, tambahkan 225μl dari PBST-BSA untuk semua sumur sebagai agen memblokir untuk

mencegah non-spesifik mengikat.

9. Menetaskan selama 30 menit pada suhu 37 ° C dengan

pengocokan ringan menggunakan sebuah Jitterbug

10. Lepaskan PBST-BSA dengan decanting dan menekan lembut pada

handuk kertas.

11. Bilas dan cuci sumur 3 kali dengan 250 PBST l. Untuk melakukan hal ini,

mengeluarkan PBST ke sumur dan kemudian dengan lembut dekantasikan /

tekan pelat pada handuk kertas. Ulangi 3x. Atau bilas dan cuci piring menggunakan

mesin cuci piring.

SEKIAN

TERIMA KASIH

• Tiwi : penjelasan grafik..? Dan fungsi pengulangan dengan waktu yang berbeda

• Benina: 4 warna pada filter ...?kenapa plate di panaskan

Muji: fungsi perbandingan anti gen...?

Nuraini: penembakan cahaya penempatannya berbeda..

Ita: prinsip kerja apakah sama dengan alat yang ada di leb?

• Rafita: mengapa hasilnya berbeda-beda?

• Tyas: kenapa ada 3 tangga pada alat, fungsi masing2 tangga..? Cara kerja alatnya...?

• Kamila: penjelasan tentang pengertian microplate reader...? Aplikasinya....?